JPS6335596A - ペプチドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物（以下、ＮＣ
Ａと略記する。なお、本発明においては、Ｎ−カルボキ
シアミノ酸無水物、従って、　ＮＣＡは広義に用い、Ｌ
−β−メチルアスノクルテート、　Ｌ−γ−メチルグル
タメートのようなペプチド結合に関与しない官能基を保
護したアミノ酸の酸無水物をも含めるものとする。）を
用いて、ペプチド（本発明においては、ペプチドは広義
に用い、ペプチド結合に関与しなかつ九官能基が保護さ
れているペプチドをも含めるものとする。）を製造する
方法に関するものである。

ペプチドを得る方法としては、（１１アミノ基を保護し
カルボキシル基を活性化したアミノ酸あるいは４ｆチド
とカルボキシル基を保護したアミノ酸あるいはペプチド
とを縮合させるか、（２）アミン基を保護したアミノ酸
、あるいは４グテドとカルボキシル基を保護したアミノ
酸、あるいはペプチドとをＤＣＣのような縮合剤を用い
て縮合させるかした後。

アミン基、カルボキシル基の各々の保護基を脱離する方
法が、一般的には知られている。しかし、これらの方法
は、操作が煩雑である点や保護基が高価であるなどの点
で、工業的製法としては満足できるものではない。

ところが、ＮＣＡを用いてペプチドを台底する方法は、
　（１）　ＮＣＡ自体が、アミノ基の保護とカルボキシ
ル基の活性化を同時に行なっているので、従来のような
煩雑な操作を必要としない、（２）生成物のＮ−力ルざ
キシ−ペプチドが不安定で、反応液を塩酸、硫酸などの
鉱酸で酸性にするだけで容易に脱炭酸し、遊離のペプチ
ドが得られるので、単離することなく次工程（例えば、
分子内エステル交換反応、ペプチド鎖の延長反応）に進
め得る、（３）ＮＣＡは、安価なホスゲンとアミノ酸の
反応で容易に合成できる、等の利点から、工業的なペプ
チドの製造性としては非常に優れた方法といえる。

また、ＮＣＡを用いるペプチド農法は、ＮＣＡとしてＬ
−β−メチルアスノ！ルテートのＮＣＡ　（以後、β−
ＭＡ、ＮＣＡと略記する。）を、アミノ酸としてＬ−７
エニルアラニン（以後、Ｌ　−Ｐｈｅと略記する。）を
用いることにより、甘味剤としてＭ用であるし一α−ア
スパルチルーＬ−フェニルアラニンメチルエステル（以
後、α−ＡＰＭと略記する。）の重要な合成中間体であ
るＬ−α−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン−β−
メチルエステル（以後、α−Ａ（Ｍ）Ｐと略記する。）
の合成にも応用できる。

このα−Ａ（Ｍ）Ｐは、特定の割合のメタノール／塩酸
混合溶媒中に放置すれば、容易に分子内エステル交換反
応が進行し、難溶性のα−ＡＰＭ塩酸塩が反応液から晶
析してくる。得られた塩酸塩は、必要に応じて、従来知
られている方法で中和することによシ、容易にα−ＡＰ
Ｍに変換できる（特開昭５９−２２５１５２　）。

この中間体α−Ａ（Ｍ）Ｐを経てα−ＡＰＭを合成する
方法は、先に述べ九利点の他に、従来の方法に比して次
の利点を肩する。（１）この中間体を合成する際には、
Ｌ−アスノ４ギン酸のβ−ペプチドの副生を理論的に伴
わず、従って、α−ＡＰＭ　ｆｆ造工程が大幅に単純化
され、収率も向上する。（２）従来の方法のように、　
、　Ｌ−Ｐｈａのメチルエステル化が不要であるため、
高価なＬ”Ｐｈｅからの収率を高めることができる。（
３）ラセミ化の心配がない。従って、ＮＣＡを用すてα
−ＡＰＭを合成する方法は、工業的に非常に有利である
といえる。

ＮＣＡを用いるペプチド製法としては、過去に人里らの
方法（有機合成化学協会誌２９巻７５１頁（１９７１）
）やメルク社の方法（Ｒ，Ｇ、Ｄｅｎｋｅｗａｌｔｅｒ
ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｒｎ、Ｓｏｃ、、８
８．３１６３（１９６６）　）があるが、ＮＣＡを用い
るペプチド合成における重要な課題は、副反応である重
合をいかに抑えるかにかかっている。先の大要らの方法
では、かかる目的のために溶媒にアセトニトリルを使用
し、炭酸ナトリウムで−を１０．８に調整している。ま
た、メルク社の方法では１反応時に高速攪拌をしながら
、Ｐ）１を１０．０〜１０．５に制御している。しかし
これらの方法は、前者は毒性の高いアセトニトリルを使
用する点で、又、後者は収率を確保する為には高速攪拌
を必要とする等、工業的製法としては満を 足のいくものではなかった。又、特〆昭５９−２２５１
５３の方法も知られているが、具体的にあけられている
溶媒が本発明のものと異なり、安全性、収率等の点で必
ずしも満足のできる方法では々い。

そこで本発明者は、かかる欠点を有しないＮＣＡを用い
るイデチド製法を得るべく鋭意検討した結果、驚くべき
ことに、ＮＣＡとアミノ酸あるいはペプチドとをリン酸
トリエチル（以下、ＴＥＰと略記する。）等の特定の水
溶性有機溶媒の一以上と水との混合水性溶媒中、弱アル
カリ性下で反応させることにより、高収率でペプチドが
得られることを見いだし、本発明を完成するに至った。

本発明の大要を次に述べる。

本発明は、弱アルカリ性に保ったアミノ酸あるいはペプ
チドの水性溶媒溶液と、アミノ酸と、例エバ、ホスゲン
或いはホスダンダイマーとの反応で得られたＮＣＡの水
溶性有機溶媒溶液とを混合することによって得られたＮ
−カルデキシーベプチド溶液を、塩酸或いは硫酸などの
鉱酸によって酸性にすることで、目的とするペプチドを
得る方法である。

本反応によれば、（１）　ＮＣＡは水溶性１機溶媒の溶
液であること、アミノ酸あるいはペプチドの溶液中に水
溶性有機溶媒を含んでいることから、ＮＣＡの安定性が
増すこと、（２）反応液が均一であることから、高速攪
拌をせずとも、加えられたＮＣＡはすみやかにアミノ酸
あるいはペプチドと反応すること、（３）反応を弱アル
カリ性で行なう、などの理由で重合が抑制され、高収率
で目的とするペプチド令を得ることができる。

本発明で言う混合水性溶媒とは、特定の水溶性有機溶媒
の一以上と水との混合溶媒をいい、その特定の水溶性有
機溶媒とは、リン酸トリエチル、リン酸トリメチル（以
後、ＴＭＰと略記する。）、Ｎ−メチルピロリドン（以
後、層と略記する。）、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド
（以後、　ＤＭＦと略記する。）の単独あるいは数種Ω
混合物をいう。その中で、反応収率、経済性の面から好
適にはＴＥＰが用いられる。

近年、モンサンド社は水浴性有機溶媒として、テトラヒ
ドロフラン（以後、ＴＨＦと略記する。）を使用したα
−Ａ（Ｍ）Ｐの合成例を報告しているが（Ｊａｃｏｂ　
Ｓ、　Ｔｏｕ　ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈ＠ｍ、、
１９８５＊　５０＋４９８２　）％ＴＨＦやジオキサン
などのエーテル類は、反応収率が低いことや過酸化物を
生成しやすいなどの欠点を有する。

本発明の縮合反応は、弱アルカリ性条件下で行なう。低
声領域では、生成したＮ−カルゴキシーイデチドが容易
に脱炭酸し、生じたペプチドが開始剤となって重合反応
が促進され、所望の縮合体の生成が抑制されるか、アミ
ノ酸あるいはペプチドのアミノ基の反応性が低下し縮合
反応が起こらない。また、高…領域では、ＮＣＡのイミ
ノプロトンの引き抜きがおこり、重合反応が促進され、
所望の縮合体の生成が抑制される。従って、本縮合反応
は、−が９．５〜１１．０の間で実施されるのがよい。

また、本反応は反応の進行に伴いＮ−カルボキシーペグ
テドが生成してくるので、反応液の声は低下してくる。

従って、反応中塩基を加えることによシ、反応液の…を
目的とする範囲に調整する事も好適に行なわれる。その
際に使用される塩基は、反応を阻害しない限）制限はな
いが、具体的には、無機塩基として、ＮａＯＨ、ＫＯＨ
などのアルカリ金属水酸化物、Ｎａ２Ｃｏ３．　Ｋ２Ｃ
Ｏ３などのアルカリ金属炭酸塩、　ＮａＨＣＯ３＊　Ｋ
ＨＣＯ３などのアルカリ金属重炭酸塩、（ＮＨ４）２Ｃ
０３，ＮＨ４ＨＣＯ３、アンモニア水が、有機塩基とし
て、トリエチルアミン、トリメチルアミンなどのＭ機ア
ミン類が使用される。

本発明の反応原料に関して云えば、ＮＣＡとしてハ、例
えば、アラニン、ノ１リン、フェニルアラニン等の中性
アミノ酸、β−メチルーアスノ４ラギン酸、ｒ−メチル
−グルタミン酸等の側鎖カルボキシ保護酸性アミノ酸、
ε−カルボベンゾキシ−リジン等の側鎖アミノ保護塩基
性アミノ酸のＮＣＡがあげられ、アミノ酸としては例え
ば、フェニルアラニン、β−アラニン等の中性アミノ酸
、アスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸、β
−メチル−アスパラギン酸、α−ベンジル−グルタミン
酸等のカルボキシ保護酸性アミノ酸、ｅ−カルボベンゾ
キシ−リジン等の側鎖アミン保護塩基性アミノ酸があげ
られ、ペプチドとしては、例えハ、ゾロリループａリン
、α−アスノ４ルチルーフェニルアラニン、α−アスノ
４ルチルーフェニルアラニンメチルエステル等のペプチ
ド及びペプチド誘導体があげられるが、これらに限定さ
れるものではない。

反応原料の使用１は、特に制限はないが、ＮＣＡに対し
てアミノ酸あるいはペプチドを０．５〜５．０（モル比
）使用するのがよく、アミノ酸あるいはペプチドからの
収率の面から、さらに好適には０．７〜３．０の範囲で
使用する。

反応温度は、特に制限はないが、−３０℃〜４０℃の間
で、さらに好適には、−２０℃〜２０℃の間で反応させ
る。

原料のアミノ酸あるいはペプチドのａ度は、特に制限は
なく、使用する物質によって異なるが、水性浴媒中の水
に対して０．０５〜５．０Ｍの範囲で使用するのが好適
である。

また、ＮＣＡの濃度は、特に制限はなく使用するＮＣＡ
によって異なるが、０．０５〜５．０Ｍの範囲で使用さ
れる。

混合水性溶媒中の水浴性Ｍ機２媒の量は、特に制限はな
いが、操作性や経済性の点から、通常は水性溶媒中の水
に対して、体積比で０．０５〜５．０使用するが、さら
に好適には０．１〜３．０使用する。

反応時間には特に制限はないが、ＮＣＡとアミノ酸ある
いは被プデドとの反応速度は大きく、長時間行なう必要
はなく通常は原料の混合が完了して２時間以内に反応は
終了する。

本反応によって得られるのは、Ｎ−カルボキシ−ペプチ
ドのアルカリ性溶液（反応液）であるが、この反応液を
、例えば、塩酸あるいは硫酸のような鉱酸によって酸性
にすることにより、Ｎ−カルゲキシーベプチドは容易に
脱炭酸して、目的とするペプチドの溶液が得られる。従
りて、更にペプチド鎖を伸ばす必要があれば、得られた
ペプチドを単離することなく、再び溶液をアルカリ性に
調整して、同様の操作を繰り返せば達成できる。目的と
するペプチドを単離する場合には、晶析、クロマトグラ
フィー等の操作によればよい。

また、ＮＣＡがβ−ＭＡ、ＮＣＡで、アミノ酸がＬ−Ｐ
ｈｅである場合は、Ｎ−カルボキシ−α−Ａ（Ｍ）Ｐの
アルカリ性溶液が得られるが、これを先に述べたように
鉱酸で酸性にした後、その溶液から水溶性有機溶媒をト
ルエンなどの水に不混和な溶媒で抽出するなどの方法で
除いた後に、塩酸とメタノールを特定の割合で加え放置
すれば、分子内エステル交換反応が進行し、難溶性のα
−ＡＰＭ塩酸塩が晶析してくる。この塩酸塩は、従来知
られている方法で中和することによシ、α−ＡＰＭに変
換される。

以下、実施例に於いて詳細を説明するが、本発明の実施
の態様は、これに限定されないことは勿論である。

実施例Ｉ Ｌ−Ｐｈａ　３３．０５　、！ｉ’　（０，２０ｍｏｔ
）を純水に懸濁して、Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を加えて
−を９．８に調整しつつＬ−Ｐｈ・を溶解させた後、全
体の容量を５００ｄにしてＬ−Ｐｈｅの水溶液を調型し
た。その水浴液２０　ｄ　（Ｌ−Ｐｈｅ　８　ｍｍｏＬ
　）とＴＥＰ１８ｄを混合して一５℃に冷却した。得ら
れたＬ−Ｐｈａの水性溶媒溶液に、あらかじめβ−凧、
ＮＣＡ　１．２６　ｇ（７，２８ｍｍｏＡ）を６ｄのＴ
ＩＰ　Ｉｃ溶解させ、０℃に冷却した溶液を３０分かけ
て添加した。その際、Ｌ−Ｐｈａの水性溶媒溶液は一５
℃に保ち、更に−を９．６〜９．８に保つように、必要
に応じて５　Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶
液添加終了後、同温、同ｐＦ（Ｋて１．５時間攪拌した
後、反応液を室温まで昇温した。

次いで反応液の−を６ＮＨＣ１水溶液にて４．５に調整
した後、生成したα−Ａ（Ｍ）Ｐを高速液体クロマトグ
ラフィー（以後、ＨＰＬＣと略記する）にて定量した。

その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐはβ−ＭＡ　、ＮＣＡに対し
て９０．５俤生成していた。

実施例２ 実施例１で調型したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０ａ＋ｌを用い
、β−凧、ＮＣＡを１．２６　ＩＩの代シＩｃ　１．０
６　、Ｆ　（６，１２ｍｍｏｔ）使用した以外は実施例
ＩＶｃおけると全く同様の操作を行なった結果、α−Ａ
（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ、ＮＣＡに対して９５．６１生放
していた。

実施例３ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈ・水溶液２０ｆｆ！７を用
い、β−ＭＡ　、ＮＣＡを１．２６．！ｉ’（７）代シ
に１．５４　ｇ（８，９０ｍｍｏｔ）使用した以外は実
施例１におけると全く同様の操作を行なった結果、α−
Ａ（Ｍ）Ｐは、Ｌ−Ｐｈｅに対して７８．３％生成して
いた。

実施例４ 実施例１で！！１ｍ！したＬ−Ｐｈ＊水溶液２０ｒｌＬ
ｌを用い一以外は実施例１と同条件下、同操作で、反応
時の−はそれぞれ、９．５〜９．７．９．８〜ｉｏ、ｏ
、および１０．０〜１０．２に調整しながら反応を行な
った。生成したα−Ａ（Ｍ）ＰをＨＰＬＣにて定量した
ところβ−凧、ＮＣＡに対して、それぞれ８８．４％、
８８．８係、および８７．３　優生成していた。

実施例５ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈ＠水溶液２０１ｄとＴＥＰ
１８ｄを混合して０℃に冷却した。得られたＬ−Ｐｈｅ
の水性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣＡ１、ｚ
６ｇ（７，２８ｍｍｏｔ）を６ｄのＴＥＰに溶解させ、
０℃に冷却した溶液を２０分かけて添加した。その際、
Ｌ−Ｐｈｓの水性溶媒溶液は０℃に保ち、更に−を９．
６〜９．８に保つように、必要に応じて５ＮＮａＯＨ水
溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加終了後、同温、同一に
て２．０時間攪拌した後、反応液を室温まで昇温した。

次いで反応液のＰＨｔｌ−６ＮＨＣ４水溶液にて４．５
に調整した後、生成したα−Ａ（Ｍ）ＰをＨＰＬＣにて
定量した。その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ、Ｎ
ＣＡに対して８７．２１生成していた。

実施例６ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０ｒｎｌとＴＥ
Ｐｌｏｍ、ｇを混合して一５℃に冷却した。得られたＬ
−Ｐｈｅの水性溶媒溶液Ｋ、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣ
Ａ１、２６　、！ｉ＋　（７，２８ｍｍｏｌ　）を６ｄ
のＴＥＰに溶解させ、−５℃に冷却した溶液を３０分か
けて添加した。

その際、Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液は一５℃に保ち、更
に−を９．６〜９．８に保つように、必要に応じて５Ｎ
ＮａＯＨ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加終了後、同
温、同一にて１．０時間攪拌し九後、反応液を室温まで
昇温した。次いで反応液のｐＨを６ＮＨＣｔ水溶液にて
４．５に調整した後、生成したα−Ａ（Ｍ）ＰをＨＰＬ
Ｃにて定量した。その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−Ｍ
Ａ　、ＮＣＡに対して８９．７１生成していた。

実施例７ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈ・水溶液２０Ｒ１とＴＥＰ
４ｄを混合して０℃に冷却した。得られたＬ−Ｐｈ・の
水性溶媒浴液に、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣＡ　１．２
６９　（７，２８ｍｍｏＬ）を６−のＴＥＰに溶解させ
、０℃に冷却した溶液を４０分かけて添加した。その際
、Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液は０℃に保ち、更に−を９
．６〜９．８に保つように、必要に応じて５Ｎ　ＮａＯ
Ｈ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加終了後、同温、同
一にて１．５時間攪拌した後、反応液を室温まで昇温し
た。次いで反応液の−を６　Ｎ　ＨＣ１水溶液にて４．
５に調整し九後、生成したα−Ａ（Ｍ）ＰをＨＰＬＣに
て定量した。その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ　
、ＮＣＡに対して８６．８％生成していた。

実施例８ Ｌ−Ｐｈｅ　０．６６１　（４，００ｍｍｏｔ　）を水
１０ｄに懸濁し、Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を加えて声を
９．８に調整しＬ−Ｐｈ・を溶解させた後、全体の容量
を２０−にした。その溶液にＴＥＰ　１８　＋１１１７
を加えて一１０℃に冷却した。得られたＬ−Ｐｈｅの水
性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣＡ　０．６３
　ｇ（３，６４ｍｍｏｔ）を３　ｒｎｌのＴＥＰに溶解
させ、−１０℃に冷却した溶液を３０分かけて添加した
。その際、Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液は一１０℃に保ち
、更に−を９．６〜９．８に保つように、必要に応じて
５ＮＮａＯＨ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加終了後
、同温、同一にて１．５時間攪拌し念後、反応液を室温
まで昇温した。次いで反応液の−を６　Ｎ　ＨＣ１水溶
液にて４．５に調整した後、生成したα−Ａ（Ｍ）Ｐを
ＨＰＬＣにて定量した。

その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ　、ＮＣＡに対
して８５．２優生成していた。

実施例９ 実施例工で調興したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０１ｄとＴＥＰ
１１３ａｌを混合して一５℃に冷却した。得られたＬ−
Ｐｈｅの水性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣＡ
１．２６　ｇ＜　７．２８薗ｏＬ　）を１４ａｔのＴｇ
Ｐに溶解させ、−５℃に冷却した溶液を３０分かけて添
加した。その際、Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液は一５℃に
保ち、更Ｋｐ）ｌを９，６〜９．８に保つように、必要
に応じて５ＮＮａＯＨ水溶液を添加した。　ＮＣＡ溶液
添加終了後、同温、同一にて１．５時間攪拌した後、反
応液を室温まで昇温した。次いで反応液の−を、６　Ｎ
　ＨＣ６水ｆｌＪｔＬにて４．５に調整した後、生成し
たα−Ａ（Ｍ）Ｐ　ｔ−ＨＰＬＣにて定量した。その結
果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ、ＮＣＡに対して８９
．５１生成していた。

実施例１０ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈ・水溶液２０ゴを用い、Ｔ
ＥＰＯ代りにＴＭＰを使用し、攪拌時間を１．５時間の
代りに２．０時間とした以外は実施例１におけると全く
同様の操作を行なりた結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは。

β−ＭＡ、ＮＣＡに対して８０．５％生成してい念。

実施例１１ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０ｒＩＬｌとＮ
ＭＰ１８１１Ｌｌを混合して一５℃に冷却し次。得られ
たＬ−Ｐｈ・の水性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、
ＮＣＡ１．２６ｊｊ　（７，２８ｍｍｏｌ　）を１５ｍ
１の狸に溶解させ、０℃に冷却した溶液を３０分かけて
添加した。その際、　Ｌ−Ｐｈ・の水性溶媒溶液は一５
℃に保ち、更にｐＨ′５ｒ、９．６〜９．８に保つよう
に、必要に応じて５　Ｎ　ＮａＯＲ水溶液を添加した。

ＮＣＡ溶液添加終了後、同温、同一にて１．５時間攪拌
した後、反応液を室温まで昇温した。次いで反応液の−
を６ＮＨＣＬ水溶液にて４．５に調整した後、生成した
α−Ａ（Ｍ）ＰをＨＰＬＣにて定ｌした。その結果、α
−Ａ（Ｍ）Ｐは、β−ＭＡ、ＮＣＡに対して７７．４％
生成していた。

実施例１２ 実施例１でｖ！４ｇしたＬ−Ｐｈｅ水溶液２０１！Ｌｌ
とＴＥＰ１８プを混合して一５℃に冷却した。得られた
Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、Ｎ
ＣＡ１．２６　ｇ　（７，２８ｍｍｏｌ　）を１５ｄの
層に溶解させ、０℃に冷却した溶液を３０分かけて添加
した。その際、Ｌ−Ｐｈ＠の水性溶媒溶液は一５℃に保
ち、更に−を９．６〜９，８に保つように、必要に応じ
て５　Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加
終了後、同温、同一にて１．５時間攪拌し素抜、反応液
を室温まで昇温した。次いで反応液の−を６ＮＵＣｔ水
溶液にて４．５に調整した後、生成したα−Ａ（Ｍ）Ｐ
をＩ（ＰＬＣにて定量した。その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐ
は、β−ＭＡ、ＮＣＡに対して８４．５％生成していた
。

実施例１３ 実施例１で調製し次Ｌ−Ｐｈｅ水溶液２０−を用い、Ｔ
ＥＰの代シにＤＭＦを使用した以外は実施例１における
と全く同様の操作を行なつ次結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは、
β−ＭＡ、ＮＣＡに対して８１．３　％生成していた。

実施例１４ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０づを用い、β
−ＭＡ、ＮＣＡ　１．２６　＃　（７）代シにＬ−ｒ−
メチルグルタメートのＮＣＡ　１．３６　Ｉｉ（７，２
７ｍ　ｍｏｌ　）を使用し穴以外は実施例１におけると
全く同様の操作を行なりｆｃ結’Ｊ、　Ｌ−α−グルタ
ミル−Ｌ−７エニルアラニンーγ−メチルエステルは、
Ｌ−γ−メチルグルタメートのＮＣＡに対して９１．５
％生成していた０実施例１５ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０−を用い。

β−凧、ＮＣＡ　１．２６　ＮＯ代シにＬ−バリンのＮ
ＣＡ　１．０４１ｉ（７，２７ｍｍｏｌ）を使用した以
外は実施例１におけると全く同様の操作を行なった結果
、Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンは、Ｌ−バリンの
ＮＣＡに対して９０．７チ生成していた。

実施例１６ Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン１．７１　Ｆ　（８，０５
ｍｍｏｌ）を水１０祷に懸濁し、Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ水溶
液を加えて−を９．８に調整してＬ−プロリル−Ｌ−プ
ロリンを溶解させ素抜、全体の容量を２０１ｎｌにした
。その溶液にＴＥＰ　１８　ｍを加えて一５℃に冷却し
た。得られた水性溶媒溶液に、あらかじめＬ−アラニン
のＮＣＡｏ、８５ｆ！（７，３８ｍｍｏｌ　）を６ｄの
ＩＰに溶解させ、０℃に冷却した溶液を３０分かけて添
加した。その際、Ｌ−ゾロリルーＬ−プロリンの水性溶
媒溶液は一５℃に保ち、更にＦＪ（を９．６〜９．８に
保つように、必要に応じて５Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を添加
した。ＮＣＡ溶液添加終了後、同温。

同一にて１．５時間攪拌した後、反応液を室温まで昇温
した。次いで反応液のｐＨを、６　Ｎ　ＨＣ１水溶液に
て４，５に調整した後、生成したＬ−アラニル−Ｌ−プ
ロリル−Ｌ−プロリンをＨＰＬＣにて定量した。その結
果、Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリンは、Ｌ
−アラニンのＮＣＡに対して８９．７−生成していた。

比較例１ 実施例１で調製したＬ−Ｐｈｅ水溶液２０−とＴＨＦ１
８ｍｌｆ混合して０℃に冷却した。得られたＩ、−Ｐｈ
ｓの水性溶媒溶液に、あらかじめβ−ＭＡ、ＮＣＡ１．
２６＃　（７，２８ｍｍｏｌ　）ｔ６ｍｌのＴＨＦに溶
解させ、０℃に冷却した溶液を３０分かげて添加した。

その際、Ｌ−Ｐｈｅの水性溶媒溶液は一５℃に保ち、更
に−を９．６〜９．８に保つように、必要に応じて５　
Ｎ　ＮａＯＨ水溶液を添加した。ＮＣＡ溶液添加終了後
、同温、同一にて１．５時間攪拌した後、反応液を室温
まで昇温した。次いで反応液のＰＨを６　Ｎ　ＨＣ２水
溶液にて４．５に調整した後、生成したα−Ａ（Ｍ）Ｐ
をＨＰＬＣにて定量し次。その結果、α−Ａ（Ｍ）Ｐは
、β−ＭＡ、ＮＣＡに対して７４．８％生成していた。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物とアミノ酸あるい
   はペプチドとを、リン酸トリエチル、リン酸トリメチル
   、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルホルムアミドの一以
   上と水との混合水性溶媒中、弱アルカリ性下で反応させ
   、生成したＮ−カルボキシペプチドを脱炭酸することを
   特徴とするペプチドの製造法。
2. （２）Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物がＬ−β−メチル
   アスパルテートのＮ−カルボキシアミノ酸無水物であり
   、アミノ酸がＬ−フェニルアラニンである特許請求の範
   囲第１項の方法。