JPS6337623B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6337623B2 JPS6337623B2 JP55149731A JP14973180A JPS6337623B2 JP S6337623 B2 JPS6337623 B2 JP S6337623B2 JP 55149731 A JP55149731 A JP 55149731A JP 14973180 A JP14973180 A JP 14973180A JP S6337623 B2 JPS6337623 B2 JP S6337623B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- cells
- serum
- culture
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は哺乳動物リンパ球由来の細胞を培養す
る無血清あるいは低血清濃度の培地に関するもの
である。
る無血清あるいは低血清濃度の培地に関するもの
である。
哺乳動物リンパ球由来の細胞にはインターフエ
ロン、抗体、酵素、リンフオカインなどの有用物
質を産生するものが知られており、その細胞を培
養することによつてこれらの有用物質を取得する
ことが実施され、あるいは検討されている。
ロン、抗体、酵素、リンフオカインなどの有用物
質を産生するものが知られており、その細胞を培
養することによつてこれらの有用物質を取得する
ことが実施され、あるいは検討されている。
リンパ球系細胞の無血清培地による培養として
は、例えば、ヒト白血球やヒトリンパ芽球様細胞
からウイルスによつてインターフエロンを誘導す
る場合とか、ヒト又はマウスリンパ球をレクチン
やリポポリサツカライドによつて芽球化する場合
などが知られている。しかしながら、これらにお
ける培養時間はいずれも短期間であつて細胞増殖
をほとんど伴わないものである。そして、従来動
物細胞を培養して増殖させるためには培地に血清
を添加することが必須であるとされていた。血清
としては一般に牛胎児血清とか仔牛血清などが使
用されており、添加量は通例10％程度である。と
ころが、培地に大量の血清を使用する結果、細胞
を大量に培養する場合に要する費用の大半を血清
が占め、その結果、例えば、ヒト細胞を培養して
インターフエロンを生産する場合とか、ワクチン
用のウイルスを生産する場合に製品が高価なもの
になつてしまうという問題点があつた。その上、
血清にはマイコプラズマとかウイルスによる汚染
があつたり、原因のわからないロツト差があるの
で、使用する血清を事前に検定しなければならな
いという繁雑さがあり、また、血清が蛋白質など
多種多様な成分を含んでいるために、培養物から
インターフエロンなどの生成物を分離する場合に
分離精製が容易でないことも問題であつた。
は、例えば、ヒト白血球やヒトリンパ芽球様細胞
からウイルスによつてインターフエロンを誘導す
る場合とか、ヒト又はマウスリンパ球をレクチン
やリポポリサツカライドによつて芽球化する場合
などが知られている。しかしながら、これらにお
ける培養時間はいずれも短期間であつて細胞増殖
をほとんど伴わないものである。そして、従来動
物細胞を培養して増殖させるためには培地に血清
を添加することが必須であるとされていた。血清
としては一般に牛胎児血清とか仔牛血清などが使
用されており、添加量は通例10％程度である。と
ころが、培地に大量の血清を使用する結果、細胞
を大量に培養する場合に要する費用の大半を血清
が占め、その結果、例えば、ヒト細胞を培養して
インターフエロンを生産する場合とか、ワクチン
用のウイルスを生産する場合に製品が高価なもの
になつてしまうという問題点があつた。その上、
血清にはマイコプラズマとかウイルスによる汚染
があつたり、原因のわからないロツト差があるの
で、使用する血清を事前に検定しなければならな
いという繁雑さがあり、また、血清が蛋白質など
多種多様な成分を含んでいるために、培養物から
インターフエロンなどの生成物を分離する場合に
分離精製が容易でないことも問題であつた。
本発明者らは前述のような有用物質を産生する
哺乳動物リンパ球由来細胞の培地として、低血清
濃度、さらには無血清の培地であつて細胞増殖お
よび継代培養が可能なものを開発すべく鋭意検討
の結果、特定の栄養培地に哺乳動物血清アルブミ
ンを添加せしめれば血清濃度を低下させ、さらに
は血清を添加せずとも哺乳動物リンパ球由来の細
胞を培養して増殖させ、継代培養しうることを見
出し、このことによつて前記の問題点を解決しう
ることを見出して、これに基づいて本発明を完成
したものである。
哺乳動物リンパ球由来細胞の培地として、低血清
濃度、さらには無血清の培地であつて細胞増殖お
よび継代培養が可能なものを開発すべく鋭意検討
の結果、特定の栄養培地に哺乳動物血清アルブミ
ンを添加せしめれば血清濃度を低下させ、さらに
は血清を添加せずとも哺乳動物リンパ球由来の細
胞を培養して増殖させ、継代培養しうることを見
出し、このことによつて前記の問題点を解決しう
ることを見出して、これに基づいて本発明を完成
したものである。
すなわち、本発明は、他の血清成分から分離さ
れた哺乳動物血清アルブミンを含有することを特
徴とする哺乳動物リンパ球由来細胞用培地に関す
るものである。
れた哺乳動物血清アルブミンを含有することを特
徴とする哺乳動物リンパ球由来細胞用培地に関す
るものである。
哺乳動物血清アルブミンは、例えば、ヒト血清
アルブミン、牛胎児血清アルブミン、仔牛血清ア
ルブミン、馬血清アルブミンの如きものである。
これらの分離方法としては、エタノール分画法、
硫安分画法、ゲル過法等の血清アルブミンを分
離する公知の方法によつて行なえばよい。結晶ア
ルブミンやコーン（Cohn）のフラクシヨンＶな
どの市販品をそのまま用いることができる。添加
量としては無血清培地の場合には0.1〜１重量％
程度が適当である。血清を含む培地の場合には血
清中に既に血清アルブミンが含まれているから、
これよりももつと少なくてもよいことはいうまで
もない。
アルブミン、牛胎児血清アルブミン、仔牛血清ア
ルブミン、馬血清アルブミンの如きものである。
これらの分離方法としては、エタノール分画法、
硫安分画法、ゲル過法等の血清アルブミンを分
離する公知の方法によつて行なえばよい。結晶ア
ルブミンやコーン（Cohn）のフラクシヨンＶな
どの市販品をそのまま用いることができる。添加
量としては無血清培地の場合には0.1〜１重量％
程度が適当である。血清を含む培地の場合には血
清中に既に血清アルブミンが含まれているから、
これよりももつと少なくてもよいことはいうまで
もない。
他の培地成分としては、インシユリンとかヒト
トランスフエリンの如き細胞増殖因子およびヒポ
キサンチン、チミジン、デオキシアデノシン、デ
オキシシチジンの如き核酸前駆体を含み、更に、
グルコースの如き糖源、アミノ酸、ビタミン類、
無機塩および通常の細胞増殖用の培地に含まれる
その他の栄養源を含む。
トランスフエリンの如き細胞増殖因子およびヒポ
キサンチン、チミジン、デオキシアデノシン、デ
オキシシチジンの如き核酸前駆体を含み、更に、
グルコースの如き糖源、アミノ酸、ビタミン類、
無機塩および通常の細胞増殖用の培地に含まれる
その他の栄養源を含む。
細胞増殖因子および核酸前駆体の濃度としては
いずれも１〜５mg／程度が適当である。細胞増
殖因子および核酸前駆体はいずれも培養する細胞
の種類に応じて１種又は２種以上を適宜組合せて
用いる。
いずれも１〜５mg／程度が適当である。細胞増
殖因子および核酸前駆体はいずれも培養する細胞
の種類に応じて１種又は２種以上を適宜組合せて
用いる。
本発明の培地においては上記の血清アルブミ
ン、細胞増殖因子および核酸前駆体のほか、通常
の細胞増殖用培地に含まれる栄養源、すなわち、
糖源、アミノ酸、ビタミン類、および無機塩を含
むことが必要である。
ン、細胞増殖因子および核酸前駆体のほか、通常
の細胞増殖用培地に含まれる栄養源、すなわち、
糖源、アミノ酸、ビタミン類、および無機塩を含
むことが必要である。
糖源としては通常グルコースが用いられ、濃度
としては0.5〜10ｇ／程度がよい。そのほか、
ピルビン酸などを適宜加える。アミノ酸は蛋白質
構成成分アミノ酸であつて、例えば、アラニン、
アルギニン、グルタミン、スチレン、スレオニ
ン、リジン、バリン、フエニルアラニンの如きも
のである。通常の培地においては、必須アミノ酸
を中心として添加しているが本発明の培地におい
ては必須アミノ酸のみでなく非必須アミノ酸も巾
広く添加するのがよい。全アミノ酸の濃度として
は0.5〜５ｇ／程度がよい。アミノ酸の組成と
しては、通常の細胞増殖培地を参考にしてこれに
新たなアミノ酸を補充していくのがよい。ビタミ
ン類にはアルコルビン酸、リボフラビン、チアミ
ン塩酸塩、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸
アミド、ピリドキサール塩酸塩、ｉ―イノシトー
ル、葉酸、VB12、ビオチンなど、そして無機塩
としては塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、亜セレン酸ナト
リウムなどを例として挙げることができる。これ
らビタミン類と無機塩は通常の細胞増殖用培地を
参考にしてこれに適宜添加していくのがよい。そ
の他、重酒石酸コリン、グルタチオン、プトレシ
ン二塩酸塩などの代謝中間体や、重曹、β―グリ
セロリン酸二ナトリウム、Ｎ―２―ヒドロキシエ
チルピペラジン―Ｎ―２―エタンスルホン酸など
のバツフアーを適宜添加する。
としては0.5〜10ｇ／程度がよい。そのほか、
ピルビン酸などを適宜加える。アミノ酸は蛋白質
構成成分アミノ酸であつて、例えば、アラニン、
アルギニン、グルタミン、スチレン、スレオニ
ン、リジン、バリン、フエニルアラニンの如きも
のである。通常の培地においては、必須アミノ酸
を中心として添加しているが本発明の培地におい
ては必須アミノ酸のみでなく非必須アミノ酸も巾
広く添加するのがよい。全アミノ酸の濃度として
は0.5〜５ｇ／程度がよい。アミノ酸の組成と
しては、通常の細胞増殖培地を参考にしてこれに
新たなアミノ酸を補充していくのがよい。ビタミ
ン類にはアルコルビン酸、リボフラビン、チアミ
ン塩酸塩、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸
アミド、ピリドキサール塩酸塩、ｉ―イノシトー
ル、葉酸、VB12、ビオチンなど、そして無機塩
としては塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カ
ルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸二水素ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、亜セレン酸ナト
リウムなどを例として挙げることができる。これ
らビタミン類と無機塩は通常の細胞増殖用培地を
参考にしてこれに適宜添加していくのがよい。そ
の他、重酒石酸コリン、グルタチオン、プトレシ
ン二塩酸塩などの代謝中間体や、重曹、β―グリ
セロリン酸二ナトリウム、Ｎ―２―ヒドロキシエ
チルピペラジン―Ｎ―２―エタンスルホン酸など
のバツフアーを適宜添加する。
本発明の培地は哺乳動物の血清を添加しなくて
もよいが、例えば高細胞濃度で培養する場合には
血清を添加するのがよい。その場合、血清をあま
り多量に添加する必要はなく培地の５容量％以
下、通常２容量％以下で充分である。
もよいが、例えば高細胞濃度で培養する場合には
血清を添加するのがよい。その場合、血清をあま
り多量に添加する必要はなく培地の５容量％以
下、通常２容量％以下で充分である。
本発明の培地組成は前述の如く、通常の細胞増
殖用培地を基礎培地として、これに血清アルブミ
ン、細胞増殖因子、核酸前駆体、更に必要によつ
て糖源、アミノ酸、ビタミン類、無機塩、その他
を適宜補充していつて決定するのがよい。このよ
うな基礎培地としては、Dalbeco―modified
MEM培地が好適であるが、他にRPMI―1640培
地、Eagle MEM培地、Ham Ｆ―12倍地など既
知の細胞増殖用培地のいかなるものであつてもよ
い。
殖用培地を基礎培地として、これに血清アルブミ
ン、細胞増殖因子、核酸前駆体、更に必要によつ
て糖源、アミノ酸、ビタミン類、無機塩、その他
を適宜補充していつて決定するのがよい。このよ
うな基礎培地としては、Dalbeco―modified
MEM培地が好適であるが、他にRPMI―1640培
地、Eagle MEM培地、Ham Ｆ―12倍地など既
知の細胞増殖用培地のいかなるものであつてもよ
い。
培地に作成方法としては、例えば、血清アルブ
ミンを除くすべての成分を所定の濃度になるよう
に水に溶解してから、これに血清アルブミンを添
加して溶解しつつ1NNaOHを用いてPHを7.2〜7.4
に調整し、得られた溶液をメンブレンフイルター
で加圧下に過して滅菌すればよい。
ミンを除くすべての成分を所定の濃度になるよう
に水に溶解してから、これに血清アルブミンを添
加して溶解しつつ1NNaOHを用いてPHを7.2〜7.4
に調整し、得られた溶液をメンブレンフイルター
で加圧下に過して滅菌すればよい。
本発明の培地で培養する哺乳動物リンパ球由来
細胞の例として、Epstein―Barr Virus（EBV）
でトランスフオームしたヒトリンパ芽球様細胞
UNCL，同C5180Y、ヒトバーキツトリンパ腫由
来のナマルバ細胞、例えばSPI細胞の如きマウス
リンパ球由来のハイブリドーマなどを挙げること
ができる。これらの細胞はヒトインターフエロン
やヒト又はマウスの抗体を培養液中に産生する。
細胞の例として、Epstein―Barr Virus（EBV）
でトランスフオームしたヒトリンパ芽球様細胞
UNCL，同C5180Y、ヒトバーキツトリンパ腫由
来のナマルバ細胞、例えばSPI細胞の如きマウス
リンパ球由来のハイブリドーマなどを挙げること
ができる。これらの細胞はヒトインターフエロン
やヒト又はマウスの抗体を培養液中に産生する。
この培地を用いてリンパ球由来の細胞を培養す
る方法は一般に血清を添加した培地を用いて培養
する場合と同様に行なえばよいが、例えば培養タ
ンクに本発明の培地を入れて細胞を１〜10×155
セル／ml程度加え、CO2を４〜５容量％含む空気
を通気しつつ、35〜37℃で培養すればよい。培養
後、増殖した細胞の分離は常法によつて行なえば
よい。
る方法は一般に血清を添加した培地を用いて培養
する場合と同様に行なえばよいが、例えば培養タ
ンクに本発明の培地を入れて細胞を１〜10×155
セル／ml程度加え、CO2を４〜５容量％含む空気
を通気しつつ、35〜37℃で培養すればよい。培養
後、増殖した細胞の分離は常法によつて行なえば
よい。
本発明の培地は細胞増殖用のみならず細胞を培
養してインターフエロン、抗体などの目的物質を
産生させる場合にも適用できることはいうまでも
ない。
養してインターフエロン、抗体などの目的物質を
産生させる場合にも適用できることはいうまでも
ない。
本発明の培地を用いれば血清を大量に添加した
従来の培地にほぼ匹敵する細胞増殖を得ることが
できる。そして、血清の有無を問わず、従来の血
清培地と同様にリンパ球由来細胞を長期間にわた
つて継代培養できるので従来培地とくらべ、極め
て安価に増殖細胞およびその産生する目的物を取
得することができる。また、血清を全く添加しな
いかあるいは添加量が少ないことから目的物質の
分離精製が容易である。特に、ヒト血清アルブミ
ンを用いた培地にヒトリンパ球細胞を培養した場
合には、培養液中の蛋白成分がすべてヒト由来で
あることから培養液中に産生した目的物質を完全
に精製しなくともヒトに投与可能であるという利
点を有する。
従来の培地にほぼ匹敵する細胞増殖を得ることが
できる。そして、血清の有無を問わず、従来の血
清培地と同様にリンパ球由来細胞を長期間にわた
つて継代培養できるので従来培地とくらべ、極め
て安価に増殖細胞およびその産生する目的物を取
得することができる。また、血清を全く添加しな
いかあるいは添加量が少ないことから目的物質の
分離精製が容易である。特に、ヒト血清アルブミ
ンを用いた培地にヒトリンパ球細胞を培養した場
合には、培養液中の蛋白成分がすべてヒト由来で
あることから培養液中に産生した目的物質を完全
に精製しなくともヒトに投与可能であるという利
点を有する。
UNCL細胞製造例 １
新生児より切りはなされた臍帯より約20mlの血
液を無菌的にヘパリン採血し、すみやかにフイコ
ール・アイソパツクを用いる比重遠心法でリンパ
球区分を分画した。このリンパ球区分に３倍量の
Eagle MEM（Minimum Essential Medium）培
地（日水製薬(株)製）を加えて遠心分離し、上清液
を棄却する洗浄を３回繰返した後、10v／ｖ％の
ウシ胎児血清を含むRPMI―1640培地（日水製薬
(株)製）に洗浄したリンパ球細胞を有核細胞密度と
して３×106個／mlになるように添加して浮遊さ
せた。このリンパ球液にＢ―95―８細胞で増殖さ
せたEBVを５×105TD50／mlになるように加え、
37℃で２時間培養した後遠心分離によつて細胞を
集め、EagIe MEM培地を添加して遠心分離し上
清液を棄却する洗浄を３回繰返した。洗浄した細
胞を10v／ｖ％のウシ胎児血清を含むRPMI―
1640培地に３×106個／mlになるように植込み、
36〜37℃、5v／ｖ％CO2の条件で培養を行つた。
培養は1.5カ月間続け、その間５日毎に、ｖ／ｖ
％ウシ胎児血清を含むRPMI―1640培地を等量ず
つ加えるか、あるいはこの培地と半量の培地交換
を行うののいずれかを行つた。
液を無菌的にヘパリン採血し、すみやかにフイコ
ール・アイソパツクを用いる比重遠心法でリンパ
球区分を分画した。このリンパ球区分に３倍量の
Eagle MEM（Minimum Essential Medium）培
地（日水製薬(株)製）を加えて遠心分離し、上清液
を棄却する洗浄を３回繰返した後、10v／ｖ％の
ウシ胎児血清を含むRPMI―1640培地（日水製薬
(株)製）に洗浄したリンパ球細胞を有核細胞密度と
して３×106個／mlになるように添加して浮遊さ
せた。このリンパ球液にＢ―95―８細胞で増殖さ
せたEBVを５×105TD50／mlになるように加え、
37℃で２時間培養した後遠心分離によつて細胞を
集め、EagIe MEM培地を添加して遠心分離し上
清液を棄却する洗浄を３回繰返した。洗浄した細
胞を10v／ｖ％のウシ胎児血清を含むRPMI―
1640培地に３×106個／mlになるように植込み、
36〜37℃、5v／ｖ％CO2の条件で培養を行つた。
培養は1.5カ月間続け、その間５日毎に、ｖ／ｖ
％ウシ胎児血清を含むRPMI―1640培地を等量ず
つ加えるか、あるいはこの培地と半量の培地交換
を行うののいずれかを行つた。
臍帯血３例について、このような処理を行い、
各細胞のトランスフオーム後についてIFの自発
的産生量を測定した結果を下表に示す。尚、この
産生量は、各々の細胞を10v／ｖ％のウシ胎児血
清を含むRPMI―1640培地に５×105個／mlにな
るように植込み、5v／ｖ％CO237℃の条件下で５
日間培養した後、培養上清液の活性を測定して得
られたものである。 IF活性×103U／ml UNCL―１ 2.5 臍帯血 〃 ―２ 6.1 リンパ球 〃 ―３ 4.5 実施例 １ 塩化ナトリウム 6400.0mg／ 塩化カリウム 400.0 〃 塩化カルシウム（無水） 200.0 〃 硫酸マグネシウム（無水） 97.7 〃 リン酸二水素ナトリウム（２水和物）
125.0 〃 硝酸第二鉄（９水和物） 0.1 〃 ブドウ糖 1000.0 〃 ピルビン酸ナトリウム 110.0 〃 Ｌ―アルギニン塩酸塩 84.0 〃 Ｌ―シスチン二塩酸塩 62.6 〃 グリシン 30.0 〃 Ｌ―グルタミン 584.0 〃 Ｌ―ヒスチジン塩酸塩（１水和物） 42.0 〃 Ｌ―イソロイシン 104.8 〃 Ｌ―ロイシン 104.8 〃 Ｌ―リジン塩酸塩 146.2 〃 Ｌ―メチオニン 30.0 〃 Ｌ―フエニルアラニン 66.0 〃 Ｌ―セリン 42.0 〃 Ｌ―スレオニン 95.2 〃 Ｌ―トリプトフアン 16.0 〃 Ｌ―チロシン二ナトリウム 89.5 〃 Ｌ―バリン 93.6 〃 重酒石酸コリン 7.2 〃 葉 酸 4.0 〃 ニコチン酸アミド 4.0 〃 パントテン酸カルシウム 4.0 〃 ピリドキサール塩酸塩 4.0 〃 リボフラビン 0.4 〃 チアミン塩酸塩 4.0 〃 ｉ―イノシトール 7.2 〃 フエノールレツド 5.0 〃 上記の如き組成を有するダルベツコ変法イーグ
ル培地（Dalbeco′s modified MEM）に下記の
如き成分を添加して溶解した。
各細胞のトランスフオーム後についてIFの自発
的産生量を測定した結果を下表に示す。尚、この
産生量は、各々の細胞を10v／ｖ％のウシ胎児血
清を含むRPMI―1640培地に５×105個／mlにな
るように植込み、5v／ｖ％CO237℃の条件下で５
日間培養した後、培養上清液の活性を測定して得
られたものである。 IF活性×103U／ml UNCL―１ 2.5 臍帯血 〃 ―２ 6.1 リンパ球 〃 ―３ 4.5 実施例 １ 塩化ナトリウム 6400.0mg／ 塩化カリウム 400.0 〃 塩化カルシウム（無水） 200.0 〃 硫酸マグネシウム（無水） 97.7 〃 リン酸二水素ナトリウム（２水和物）
125.0 〃 硝酸第二鉄（９水和物） 0.1 〃 ブドウ糖 1000.0 〃 ピルビン酸ナトリウム 110.0 〃 Ｌ―アルギニン塩酸塩 84.0 〃 Ｌ―シスチン二塩酸塩 62.6 〃 グリシン 30.0 〃 Ｌ―グルタミン 584.0 〃 Ｌ―ヒスチジン塩酸塩（１水和物） 42.0 〃 Ｌ―イソロイシン 104.8 〃 Ｌ―ロイシン 104.8 〃 Ｌ―リジン塩酸塩 146.2 〃 Ｌ―メチオニン 30.0 〃 Ｌ―フエニルアラニン 66.0 〃 Ｌ―セリン 42.0 〃 Ｌ―スレオニン 95.2 〃 Ｌ―トリプトフアン 16.0 〃 Ｌ―チロシン二ナトリウム 89.5 〃 Ｌ―バリン 93.6 〃 重酒石酸コリン 7.2 〃 葉 酸 4.0 〃 ニコチン酸アミド 4.0 〃 パントテン酸カルシウム 4.0 〃 ピリドキサール塩酸塩 4.0 〃 リボフラビン 0.4 〃 チアミン塩酸塩 4.0 〃 ｉ―イノシトール 7.2 〃 フエノールレツド 5.0 〃 上記の如き組成を有するダルベツコ変法イーグ
ル培地（Dalbeco′s modified MEM）に下記の
如き成分を添加して溶解した。
インシユリン 10mg／
ヒトトランスフエリン ５ 〃
ヒポキサンチン ４ 〃
チミジン 0.7 〃
デオキシシチジン 0.03 〃
デオキシアデノシン 1.0 〃
６，８―ジヒドロキシプリン 0.3 〃
グリコース 1000 〃
Ｌ―アラニン 20 〃
Ｌ―アスパラギン（１水和物） 56 〃
Ｌ―アスパラギン酸 20 〃
Ｌ―システイン塩酸塩（１水和物） 40 〃
Ｌ―グルタミン酸 20 〃
Ｌ―プロリン 20 〃
アスコルビン酸 10 〃
ビオチン 0.2 〃
ホリニン酸 0.01 〃
VB12 0.1 〃
FeSO4・7H2O 0.8 〃
ZnSO4・7H2O 0.02 〃
Na2SeO3 0.004 〃
CaCl2 100 〃
グルタチオン 1.0 〃
プトレシン二塩酸塩 0.1 〃
β―グリセロリン酸二ナトリウム 1500 〃
重 曹 1300 〃
このようにして得られたRITC 55―９培地に
第１図に記載量の牛血清アルブミン（BSA）を
添加して1NNaOHにてPH7.3に調整し、得られた
溶液をメンブレンフイルターで過した。各種
BSA濃度の培地のUNCL―３細胞を５×105セ
ル／ml添加して５日間培養した。培養液の細胞濃
度とインターフエロンの産生量を測定した結果を
第１図に示す。
第１図に記載量の牛血清アルブミン（BSA）を
添加して1NNaOHにてPH7.3に調整し、得られた
溶液をメンブレンフイルターで過した。各種
BSA濃度の培地のUNCL―３細胞を５×105セ
ル／ml添加して５日間培養した。培養液の細胞濃
度とインターフエロンの産生量を測定した結果を
第１図に示す。
尚、インターフエロンの活性は、ヒト羊膜由来
のFL細胞とVSV（Vesicular Stomatitis Virus）
を用いる細胞変性抑制法（飯塚雅彦ら、最近医
学、29巻、660頁（1974））で測定した。
のFL細胞とVSV（Vesicular Stomatitis Virus）
を用いる細胞変性抑制法（飯塚雅彦ら、最近医
学、29巻、660頁（1974））で測定した。
一方、RPMI―1640培地に牛胎児血清（FBS）
を10容量％添加した培地にUNCL―３細胞を同
様にして添加して培養した結果を第１図右側に示
す。
を10容量％添加した培地にUNCL―３細胞を同
様にして添加して培養した結果を第１図右側に示
す。
BSA ５mg／mlを含むRITC 55―９培地に
UNCL―３細胞を５×105セル／ml加えて５日毎
に継代して３カ月間培養したが、その増殖能およ
びインターフエロン産生能について有意な低下は
みられなかつた。
UNCL―３細胞を５×105セル／ml加えて５日毎
に継代して３カ月間培養したが、その増殖能およ
びインターフエロン産生能について有意な低下は
みられなかつた。
実施例 ２
RITC 55―９培地に実施例１と同様にしてヒ
ト血清アルブミン0.5重量％を添加した培地と
RPMI―1640培地にFBSを10容量％添加した培地
に、実施例１と同様にしてUNCL―３細胞を添
加して培養し、培養液の細胞濃度とインターフエ
ロンの産生量を経時的に測定した結果を第２図に
示す。
ト血清アルブミン0.5重量％を添加した培地と
RPMI―1640培地にFBSを10容量％添加した培地
に、実施例１と同様にしてUNCL―３細胞を添
加して培養し、培養液の細胞濃度とインターフエ
ロンの産生量を経時的に測定した結果を第２図に
示す。
実施例 ３
RITC 55―９培地に実施例１と同様にして
BSA0.5重量％を添加した培地とRPMI―1640培
地にFBSを10容量％添加した培地に、実施例１
と同様にしてヒトバーキツトリンパ腫由来のナマ
ルバ細胞を添加して培養し、培養液の細胞濃度の
経時変化を測定した結果を第３図に示す。
BSA0.5重量％を添加した培地とRPMI―1640培
地にFBSを10容量％添加した培地に、実施例１
と同様にしてヒトバーキツトリンパ腫由来のナマ
ルバ細胞を添加して培養し、培養液の細胞濃度の
経時変化を測定した結果を第３図に示す。
また、このBSAを添加したRITC 55―９培地
を用いてこの細胞を３×105セル／mlで４日毎に
継代して２カ月培養したが、センダイウイルスの
誘導によるインターフエロンの産生量は血清添加
培地を用いた場合の80％であつた。
を用いてこの細胞を３×105セル／mlで４日毎に
継代して２カ月培養したが、センダイウイルスの
誘導によるインターフエロンの産生量は血清添加
培地を用いた場合の80％であつた。
実施例 ４
EBVでトランスフオームしたヒトリンパ球
C5180Y細胞（抗ヒツジ赤血球抗体産生株）を
BSA0.5重量％添加したRITC 55―９培地とFBS
10容量％添加したRPMI―1640培地について実施
例１と同様にして培養し、培養液の細胞濃度を経
時的に測定した結果を第４図に示す。
C5180Y細胞（抗ヒツジ赤血球抗体産生株）を
BSA0.5重量％添加したRITC 55―９培地とFBS
10容量％添加したRPMI―1640培地について実施
例１と同様にして培養し、培養液の細胞濃度を経
時的に測定した結果を第４図に示す。
第１図はUNCL細胞について培養液の細胞濃
度およびインターフエロン活性に対するBSA濃
度の影響を測定した結果を示すものである。第２
〜４図は本発明の培地と従来の血清培地につい
て、培養液の細胞濃度（第２図はインターフエロ
ン活性も）測定した結果を示すものである。 尚、いずれの図において白丸は本発明培地の細
胞濃度、白四角はインターフエロン活性をあらわ
し、黒丸は従来の血清培地の細胞濃度、そして黒
四角はインターフエロン活性をあらわしている。
度およびインターフエロン活性に対するBSA濃
度の影響を測定した結果を示すものである。第２
〜４図は本発明の培地と従来の血清培地につい
て、培養液の細胞濃度（第２図はインターフエロ
ン活性も）測定した結果を示すものである。 尚、いずれの図において白丸は本発明培地の細
胞濃度、白四角はインターフエロン活性をあらわ
し、黒丸は従来の血清培地の細胞濃度、そして黒
四角はインターフエロン活性をあらわしている。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 血清から分離された哺乳動物血清アルブミン
を含有することを特徴とする哺乳動物リンパ球由
来細胞用培地。 ２ 哺乳動物血清濃度が５％未満である特許請求
の範囲第１項記載の培地。 ３ 哺乳動物がヒト、牛又は馬である特許請求の
範囲第２項記載の培地。 ４ 哺乳動物リンパ球由来細胞がインターフエロ
ン産生細胞である特許請求の範囲第１項又は第３
項記載の培地。 ５ 哺乳動物血清を実質的に含まない特許請求の
範囲第４項記載の培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14973180A JPS5774085A (en) | 1980-10-25 | 1980-10-25 | Culture medium for cells originating from lymphocytes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14973180A JPS5774085A (en) | 1980-10-25 | 1980-10-25 | Culture medium for cells originating from lymphocytes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5774085A JPS5774085A (en) | 1982-05-10 |
| JPS6337623B2 true JPS6337623B2 (ja) | 1988-07-26 |
Family
ID=15481575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14973180A Granted JPS5774085A (en) | 1980-10-25 | 1980-10-25 | Culture medium for cells originating from lymphocytes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5774085A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ206699A (en) * | 1982-12-30 | 1989-08-29 | Bio Response Inc | Process for the production of serum independent cell lines |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS603473B2 (ja) * | 1977-02-24 | 1985-01-28 | 績 山根 | 組織培養用培養液 |
| US4198479A (en) * | 1979-03-30 | 1980-04-15 | Merck & Co., Inc. | Replacement of animal serum proteins by human albumin for growth and interferon production by Namalva cells |
-
1980
- 1980-10-25 JP JP14973180A patent/JPS5774085A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5774085A (en) | 1982-05-10 |
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