JPS635386B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

発明の技術分野 本発明は、非置換および置換イソフタル酸ピコ
リルアミドからなる化合物群に属する新規有機物
質に関するものである。この物質は、薬学的活性
を有し血小板の凝集を防ぐ作用を有する（試験管
内試験および生体内試験の両者において効果を奏
する）。したがつてこの物質は、血小板の反応性
の変化によつて起こる血栓塞栓性疾患の治療剤と
して有効である。本発明はまた、この物質の製造
方法にも関する。 本発明に係る前記物質は４−メトキシ−イソフ
タル酸ピコリルアミドであつて、その正式の化学
名は３−カルバモイル−（3′−ピコリル）−４−メ
トキシ−１−ベンズアミドであり、別名はＮ−
N′−（3′−ピコリル）−４−メトキシ−イソフタル
アミドであり、化学式はC₁₅H₁₅N₃O₃であつて分
子量は285.3である。 本化合物の構造式は次の通りである。 記載の簡略化のために、以下では本化合物を略
称“G619”で示す。 従来の技術 米国特許第3973026号、イタリヤ特許第1016005
号、米国特許第4294833号、独国特許第3113150号
等に開示されているように、非置換または置換イ
ソフタル酸ピコリルアミド類の有機化合物が凝固
阻止作用、ならびにフイブリノリチツク系物質お
よび血小板の凝集阻止作用を有することは周知で
ある。これらの公知化合物のうちで、結晶の形の
Ｎ−N′−ビス−（３−ピコリル）−４−メトキシ
−イソフタルアミド・モノハイドレートは特に高
い活性を有する（独国特許第3113150号）。以下で
はこの化合物を“ピコタミド・モノハイドレー
ト”なる略称で示す。 意外にも本発明の化合物は類似の公知化合物よ
りもはるかに高くかつ速効性の薬学的活性を有
し、特に、血小板凝集阻止効果が非常にすぐれて
いることが今や発見された。前記の一群の公知化
合物、特に無水ピコタミドおよびピコタミド・モ
ノハイドレートに関する従来の知識からみて、１
−位置のアミド窒素原子上の３−ピコリン基の除
去によつて薬学的活性およびバイオデイスポーザ
ビリチイ（biodisposability）が一層良くなるこ
と、およびこの活性増大は副作用を全く伴わない
ものであることは、全く予想外のことであつた。
かように、本発明の化合物は従来の知識からは全
く予想外の特性を有するものである。 発明の目的および構成 本発明の目的は、高い薬学的活性および効果を
有する新規な４−メトキシ−イソフタル酸ピコリ
ルアミドを提供することである。この薬剤は、動
物およびヒトの器官に吸収された後に前記の効果
を確実に奏することが見出された。 本発明の別の目的は、前記の新規物質の製造方
法を提供することである。 本発明のさらに別の目的は、前記の新規物質を
種々の活性製剤の形で、血栓塞栓性疾患の予防や
治療のための薬剤として使用することである。 発明の詳細な記述 既述の化学式を有する本発明の化合物の製造方
法について説明する。４−メトキシ−イソフタル
酸モノ低級アルキルエステルと３−ピコリルアミ
ンとを反応させて、対応するモノ−ピコリルアミ
ドを生成させる。次いで、中間体として生じた前
記の混合無水物（mixed anhydride）を無水溶媒
中でプロトン受体の存在下にアンモニアガス流の
もとでクロロギ酸エチルと反応させることによつ
て、本発明の化合物が得られるのである。この反
応は次の反応式によつて表わされる。 本発明の化合物の製造方法を具体的に例示する
ために、次に製造例を示す。しかしながら、本発
明の範囲は決してこれらの製造例に記載の範囲内
のみに限定されるものではない。当業者には明ら
かなように本発明は種々の態様で実施でき、これ
らの態様は全部本発明の範囲内に入るものであ
る。 製造例 (a) 工程１：モノ（３−ピコリルアミド）（）
の合成 ４−メトキシ−イソフタル酸モノメチルエステ
ル4.7mlと３−ピコリルアミン47mlとの混合物を
55−65℃、好ましくは60℃の温度において24時間
保つた。この時間の終期にこれを冷却し、反応器
を寒剤中に置いて、その次の酸性化操作の実施の
ときに温度が約０℃に保たれるようにした。 酸性化操作は次の如く行い、すなわち、氷酢酸
または5N−HClによつてPHを3.5−5.5にし、化合
物（）を全部沈殿させた。この沈殿を吸引ロ過
によつて回収し、蒸留水で充分に洗浄し、有機溶
媒から結晶化させた。これをそのまま次の工程に
使用した。 (b) 工程２：３−カルバモイル−（3′−ピコリル）
−４−メトキシ−１−ベンズアミド（）の合
成 前記の方法によつて得られた化合物（）のク
ロロホルム中懸濁液2.6mlと、トリエチルアミン
5.6ml（プロトン受体として使用）との混合物に、
かくはん下に０℃においてクロロギ酸エチル5.6
mlを徐々に添加した。０℃において半時間放置し
た後に、反応混合物中にアンモニアガスを飽和さ
せ、次いで室温において３時間放置した。この時
間の後に、生じた白色沈殿の形の所望生成物［化
合物（）］を吸引ロ過によつて回収し、水で洗
浄し、適当な溶媒から結晶化させた。得られた生
成物の融点は190〜191℃であつた（コフラーベン
チで測定）。 G619の分子の構造のＸ線分析によつて調べた。
使用した装置は、エンラフーノニウス−CAD−
４型自動式回折計（４サークル；グラフアイトモ
ノクロメーター付）であつた。測定データーを、
ゴウルド−SEL−32／27型コンピユーターおよび
ビデオ・ターミナル・テクトロニクス−4125型機
器を用いて処理した。 この分析の結果から推定された分子構造を第１
図に示す。 第２図は、この結晶の結晶軸ｙに垂直な面への
分子の投影図である。 この分子の特性について説明する。分子内の酸
素O20と窒素N12との間に水素結合がみとめられ
る（結合の長さは2.63Å）。さらに、２つの分子
の間の水素結合が認められ、その１つはアミド窒
素N9と別の分子の中の酸素O8との間の水素結合
であり（結合の長さは2.94Å）、他の１つは前記
のアミド窒素N9とさらに別の分子の中の酸素
O11との間の水素結合である（結合の長さは2.95
Å）。これらの分子間水素結合は、第２図中に破
線で示されている。 G619の分子中の各原子の座標値、原子間距離、
結合角の値は、後記の表に示されている（第１
表、第２表および第３表）。

【表】

【表】 薬理学的試験 本発明の化合物の急性毒性、バイオーデイスポ
ニビリチイ（bio−disponibility）および血小板
機能干渉作用を調べるために、試験管内試験およ
び生体内試験を行つた。この試験では比較試料と
して、同じ化合物群に属し薬理学的性質も知られ
ている公知化合物であるピコタミド（独国特許第
3113150号参照）を用いた。 試験例 １ 血小板凝集阻止作用（試験管内試験） ウサギの臓器を用いて試験を行つた。試験化合
物を添加し37℃において10分間の“培養”
（incubation）期間の経過後に、凝集剤としてア
デノシン二燐酸（ADP）およびアラキドン酸
（AANa）を添加することによつて、“血小板に
富む血清”（PRP）中の血小板凝集を誘起させ
た。この試験で得られた凝集曲線において、その
最大振幅（AM）が50％減少するときの該化合物
の濃度値（IC₅₀）を以て該化合物の活性を数量的
に表わした。なお、対照血清試験は凝衝液のみを
用いて前記の如く処理し、その凝集曲線を基準曲
線として利用した。 ADPおよびAANaを用いて行つた試験の結果
を以下に示す。 ADPの存在下の血小板凝集度 D619 IC₅₀＝1.25×10^-4M ピコタミド・モノハイドレート
IC₅₀＝9.3×10^-4M AANaの存在下の血小板凝集度 G619 IC₅₀＝2.69×10^-5M ピコタミド・モノハイドレート
IC₅₀＝7.9×10^-5M 上記の結果から明らかなように、化合物G619
の血小板凝集阻止活性は、ピコタミド・モノハイ
ドレートの該活性よりも３−７倍高く、しかして
この活性は、使用された凝集剤の種類に左右され
て種々変化する。 試験例 ２ 血小板凝集阻止活性（生体内試験） ニユージーランドウサギを絶食状態で適量の水
のみで12時間保つた後に、G619およびピコタミ
ド・モノハイドレートを、アカシアゴム懸濁液中
に入れた製剤の形で投与した。対照試験動物（ウ
サギ）には、アカシアゴムの懸濁液のみを投与し
た。投与してから30分後に、試験動物をペントタ
ールナトリウム（30mg／Kg；静注）で麻酔し、頚
動脈から血液を採取し、クエン酸ナトリウム
（3.8％）で凝固を防止し、遠心分離操作を
1400rpmにおいて15分間行つて、血小板に富む血
清（PRP）を分離した。このPRPにアラキドン
酸を添加して血小板凝集を促進し、ボーンに凝集
度測定装置を用いて凝集曲線を描いた。薬剤を投
与した動物の血清の凝集曲線を、対照動物の血清
の凝集曲線と比較して、最大振幅（AM）が50％
減少するとの投与量（ID₅₀）を以て、活性を数量
的に表示した。下記の結果が得られた。 G619 ID₅₀＝25mg／Kg ピコタミド・モノハイドレート ID₅₀＝78mg／Kg この結果から明らかなように、G619の活性は
ピコタミドの活性よりも約３倍高い。 試験例 ３ ラツトへの経口投与による薬剤の吸収 アカシアゴムの懸濁液の形で薬剤をラツトに
100mg／Kg経口投与（単剤投与）した後に、経口
投与剤吸収試験を行つた。既述の２種の薬剤の血
中濃度を、血清試料に高圧液相クロマトグラフ分
析を行うことによつて測定し、その値をγ／mlと
して記録した。この測定は８回行い、その平均値
を次表に記載した。

【表】 イドレート
上表から明らかなように、G619の吸収量はピ
コタミド・モノハイドレートの該量よりも８倍
（1/2時間）ないし19倍（２時間）多い。 試験例 ４ 急性毒性（DL₅₀） 本発明の化合物の急性毒性試験を行つた。この
試験では、２種の動物を用いて２種の投与方法に
よつて薬剤を投与した。すなわち動物に薬剤を単
剤投与の形で経口投与し（os）、また静脈内に注
射し（i.v.）、この投与後に７日間にわたつて動物
を観察し、動物の症状および死亡率を記録した。
この試験の結果を後記の表に示す。この表には、
試験動物の50％が死亡したときの投与量（DL₅₀）
が記載されているが、この値は、統計学的方法に
よつて算出されたものである。

【表】 この表から明らかなように、主として抑うつ症
状として現れる毒性は、既述の薬理学的活性に比
較して非常に低い。 試験例 ５ ヒトの血液における薬剤の血小板凝集阻止活性
（試験管内の試験）、および凝集阻止機構の研究 ヒトの血小板に富む血清（PRP）に対する
G619の血小板凝集阻止活性と、ピコタミドの該
活性とを比較する試験を行つた。この試験では、
血清に試験化合物を添加して37℃において10分間
“培養”した後に、ADP、コラーゲン、AANaま
たはU46619を添加して血小板の凝集を図つた。
この試験の結果は、対照血清試料（緩衝剤のみを
加えて“培養”したもの）における凝集曲線の最
大振幅を50％減少するときの薬剤濃度（IC₅₀）で
記録した。試験結果を次表に示す。凝 集 剤 G619 ピコタミド ADP 5.6×10^-5 8.2×10^-4 コラーゲン 1.1×10^-5 ＞1.0×10^-4 AANa 4.2×10^-6 8.9×10^-5 U46619 9.2×10^-6 ＞2.5×10^-4 G619の作用機構を調べるために次の実験を行
つた。ヒトのPRPにコラーゲン1μｇ／mlを加え
て刺激した後に、マロンジアルデヒド（MDA）
およびトロンボキサン（Ｔ×B₂）の生成量を測
定した。この試験において得られたIC₅₀の値を次
表に示す。 MDA G619 ピコタミド （mH：10⁹血小板） １×10^-4 ５×10^-4 TxB2（μｇ／ml） 4.6×10^-6 １×10^-5 さらに、ヒトのPRPにコラーゲン1μｇ／mlを
加えて刺激した後に、６−ケト−PGF1aの生成
量を測定した。10^-6Mの濃度から出発した場合に
おいて、６−ケト−PGF1aの生成量の100−150
％の増加が認められたが、これは、ピコタミド自
体が殆ど効果を奏しないことを示唆するものであ
る。 本例の試験結果から明らかなように、血小板凝
集剤を加えたヒトのPRPに対して、G619はピコ
タミドよりも約10倍も高い血小板凝集阻止活性を
有する。 試験例 ６ ヒト（自発的試験協力者）の血小板凝集活性 男女両方の年齢31−53才の健康な自発的試験協
力者に対して、血液凝集阻止活性の測定試験を行
つた。薬剤500mgを唯１回経口投与し、投与前お
よび投与後（１−２−４−６時間後）に血液を採
取した。試験例２に記載の方法に従つて、ADP
を凝集剤として２×10^-6Mの濃度で用いて血小板
の凝集を図つた。 下記に表に記載された血小板の凝集阻止活性の
値は、薬剤投与時の血液試料の凝集曲線から“阻
止効果の百分率値”（対照試料基準）として算出
された値であつた。

【表】 ドレート
この試験結果から明らかなように、G619はか
なり速効性の高い血小板凝集阻止活性を有し、投
与から約２時間後に活性が最高値53.8％になる。
一方、ピコタミド・モノハイドレートは４時間後
にようやく活性が最高値になるが、その値は41.1
％にすぎない。 発明の効果 前記の試験例の記載から明らかなように、本発
明の化合物G619は公知化合物ピコタミド・モノ
ハイドレートよりも活性がはるかに高く、活性値
に実質的な差異が認められる。さらに、試験例
３，４および５に示されているように、本発明の
化合物は、試験管内および生体内試験の両者にお
いて高い薬理学的活性を示し、しかも毒性が低
く、かつバイオデイスポニビリチイも良好であ
る。さらに、本発明の化合物G619と前記の公知
化合物との効果の実質的な差異は、決して“１−
位置の窒素原子上の３−ピコリン基の欠落”とい
う化学的知見に基づいて容易に推考し得たことで
はない。 本発明の化合物G619は高活性であり、低毒性
であり、耐容性およびビオデイスポニビリチイも
良好であるので、これはヒトの種々の血栓塞栓性
疾患、特に脳血管性疾患、心筋梗塞、動脈および
静脈の血栓症、肺動脈の塞栓症、動脈硬化、心臓
外科および一般外科の諸疾患の予防および治療用
薬剤として有用である。 前記の用途に使用するために、この活性薬剤
は、これをたとえば10−500mg含有する種々の種
類の製剤にすることができるが、その好ましい具
体例を以下に示す。 (a) 経口投与用：活性化合物を10−500mg含有す
るカプセル剤、錠剤、丸剤；１日当たりの投与
量50−2000mg／日； (b) 非経口投与用：活性化合物を10−50mg含有す
る滅菌された静脈または筋肉内注射し得るバイ
アル入り液剤；１日当たりの投与量10−150
mg／日； (c) 直腸投与用：活性化合物を10−500mg含有す
る坐薬；１日当たりの投与量50−2000mg／日。 容易に理解されるように、これらの薬用製剤は
活性薬剤の他に、薬学分野で周知の種々の薬用製
剤担体や助材を含有し得る。さらにまた、本発明
の化合物G619の製剤の形態およびその投与態様
は、治療環境および医師の経験に基づいて種々変
えることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の化合物の分子構造の説明図
である。第２図は、本発明の化合物の結晶軸ｙに
垂直な面への、結晶内の分子の投影図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次式 を有する３−カルバモイル−（3′−ピコリル）−４
   −メトキシ−１−ベンズアミド。 ２ ４−メトキシ−イソフタル酸モノ低級アルキ
   ルエステルと３−ピコリルアミンとを55−65℃の
   温度において反応させ：その反応生成物を０℃程
   度の低温においてPH3.5−5.5へと酸性化し、沈殿
   した４−メトキシ−イソフタル酸モノピコリルア
   ミドを回収し；このモノピコリルアミドとクロロ
   ギ酸エチルとを無水溶媒中で０℃程度の低温にお
   いてプロトン受体の存在下に反応させ；アンモニ
   アガスを飽和させ；沈殿した３−カルバモイル−
   （3′−ピコリル）−４−メトキシ−１−ベンズアミ
   ドを回収することを特徴とする、３−カルバモイ
   ル−（3′−ピコリル）−４−メトキシ−１−ベンズ
   アミドの製造方法。 ３ モノ低級アルキルエステルがモノメチルエス
   テルであり、３−ピコリルアミンとの反応の温度
   が60℃であることを特徴とする特許請求の範囲第
   ２項に記載の方法。 ４ 無水溶媒がクロロホルムであり、プロトン受
   体がトリエチルアミンであることを特徴とする特
   許請求の範囲第２項に記載の方法。 ５ ３−カルバモイル−（3′−ピコリル）−４−メ
   トキシ−１−ベンズアミドからなるほ乳動物にお
   ける血小板凝集による血栓塞栓性疾患の予防およ
   び治療用の活性薬剤。 ６ 血小板凝集による血栓塞栓性疾患の予防およ
   び治療のために有効量の３−カルバモイル−
   （3′−ピコリル）−４−メトキシ−１−ベンズアミ
   ドと、薬学的に適合した担体とを含有することを
   特徴とする薬用組成物。