JPS6357572A - 化学発光性アクリジン誘導体 - Google Patents
化学発光性アクリジン誘導体Info
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- JPS6357572A JPS6357572A JP62206622A JP20662287A JPS6357572A JP S6357572 A JPS6357572 A JP S6357572A JP 62206622 A JP62206622 A JP 62206622A JP 20662287 A JP20662287 A JP 20662287A JP S6357572 A JPS6357572 A JP S6357572A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D219/00—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems
- C07D219/04—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
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- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は化学発光性アクリジン誘導体、それらの製造方
法およびそれらの発光イムノアッセイへの使用に関する
。
法およびそれらの発光イムノアッセイへの使用に関する
。
発光性化合物はすでに、広範にわたる様々な用途を有し
ている。それらはバイオアッセイ、酵素イムノアッセイ
および発光イムノアッセイにおけるインジケータとして
用いられるＣ ｗ、ｐ。
ている。それらはバイオアッセイ、酵素イムノアッセイ
および発光イムノアッセイにおけるインジケータとして
用いられるＣ ｗ、ｐ。
Ｃｏ１１ｉｎｓ著ｒＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕ
ｎｏａｓｓａｙｓ Ｊ、 Ｊ ｏｈｎＷｉｌｅｙ ＆
５ｏｎｓ Ｌｔｄ発行（１）８５）参照〕ほか、核酸ハ
イブリダイゼーションアッセイにも用いられる（Ｊ 、
Ａ、Ｍａｔｔｈｅｗｓ他著ｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂ
ｉｏ−ｃｈｅｍ１ｓｔｒｙＪ＋１５１．２０５〜２０９
（１）８５）参照〕。
ｎｏａｓｓａｙｓ Ｊ、 Ｊ ｏｈｎＷｉｌｅｙ ＆
５ｏｎｓ Ｌｔｄ発行（１）８５）参照〕ほか、核酸ハ
イブリダイゼーションアッセイにも用いられる（Ｊ 、
Ａ、Ｍａｔｔｈｅｗｓ他著ｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂ
ｉｏ−ｃｈｅｍ１ｓｔｒｙＪ＋１５１．２０５〜２０９
（１）８５）参照〕。
化学発光性化合物は更に、「フロー・インショクジョン
分析」、液体クロマトグラフィのカラム後検出器、フロ
ー研究におよび人工光源に用いられている。
分析」、液体クロマトグラフィのカラム後検出器、フロ
ー研究におよび人工光源に用いられている。
化学発光イムノアッセイにおいては、特に２ね類の荷造
タイプ化学発光マーキング物質が比較的重要性の高いも
のとなっている。一方において、これらＦｉＨ，Ｒ，５
ｃｈｒｏｅｄｅｒ他著「Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙＪ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎ
ｃ、発行、Ｖｏｌ、ＬＶＩＩ （１）７８）４２４以Ｒ
１およＵ英国特許第２．ＣＩ Ｏ８，２４７号および第
２，０４２，９２０号、西独特許第２．６１Ｂ、４１）
号および第２，６１８，５１１号、および欧州特許出願
Ｍｉ＋ｓ、ｏ７１号に記載されているルミノールおよび
イソルミノール誘導体である。発光インジケータとして
のインルミノール化合物の実録の使用についての総括は
Ｗ、Ｇ、Ｗｏｏｄ著、ｒＪ、Ｃ１１ｎ、ｅｈｅｍ、Ｃ１
１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ ２２（１）８４） ＊９
０５〜９１８にみることができる。
タイプ化学発光マーキング物質が比較的重要性の高いも
のとなっている。一方において、これらＦｉＨ，Ｒ，５
ｃｈｒｏｅｄｅｒ他著「Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙＪ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎ
ｃ、発行、Ｖｏｌ、ＬＶＩＩ （１）７８）４２４以Ｒ
１およＵ英国特許第２．ＣＩ Ｏ８，２４７号および第
２，０４２，９２０号、西独特許第２．６１Ｂ、４１）
号および第２，６１８，５１１号、および欧州特許出願
Ｍｉ＋ｓ、ｏ７１号に記載されているルミノールおよび
イソルミノール誘導体である。発光インジケータとして
のインルミノール化合物の実録の使用についての総括は
Ｗ、Ｇ、Ｗｏｏｄ著、ｒＪ、Ｃ１１ｎ、ｅｈｅｍ、Ｃ１
１ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ ２２（１）８４） ＊９
０５〜９１８にみることができる。
他方において、アクリジニウムエステル化合物も化学発
光マーキング物質として用いられている。かかるアクリ
ジニウムエステルは米国特許第５，３５２，７９１号、
英国特許第１．３１６，３６３号および第１．４６１．
８７７号および欧州特許出願第８２．６！ｌ＋Ｓ号によ
り知られている。イムノアッセイにおいてアクリジニウ
ムエステルをマーキング物質として用いることはＷｅｅ
ｋｓ他著ｒｃｌｉｎ。
光マーキング物質として用いられている。かかるアクリ
ジニウムエステルは米国特許第５，３５２，７９１号、
英国特許第１．３１６，３６３号および第１．４６１．
８７７号および欧州特許出願第８２．６！ｌ＋Ｓ号によ
り知られている。イムノアッセイにおいてアクリジニウ
ムエステルをマーキング物質として用いることはＷｅｅ
ｋｓ他著ｒｃｌｉｎ。
Ｃｈｅｍ、 Ｊ ２９／８ （１）８５）、１４７４〜
１４７９に記載されている。発光イムノアッセイにおい
てフエｆ ｙ スリジニウムエステルをマーキング物質
として用いることはすでに欧州特許出願第１７ＬＪ、４
１５号によシ知られている〇 アクリジニウムエステルの化学発光はアルカリ性ｎ２ｏ
２溶液の添加により開始することができる。化学発光の
メカニズムについての説明はＦ。
１４７９に記載されている。発光イムノアッセイにおい
てフエｆ ｙ スリジニウムエステルをマーキング物質
として用いることはすでに欧州特許出願第１７ＬＪ、４
１５号によシ知られている〇 アクリジニウムエステルの化学発光はアルカリ性ｎ２ｏ
２溶液の添加により開始することができる。化学発光の
メカニズムについての説明はＦ。
ＭｃＣａｐｒａ著ｒＡｃｃ、ｃｈｅｍ、Ｒｅｓ、 Ｊ
９．２０１ （１）７６）において行なわれている。す
なわち、離脱基の性質が光量子収率および加水分解安定
性のいずれに対しても明らかに決定的である◇ ルミノールおよびインルミノール化合物に比べ、すでに
今日まで知られているアクリジニウムエステルは光量子
収率が高くしかもその収率がインジケータに結合した夕
／バクによって悪化することがない点で有利であるＩ：
Ｗｅｅｋｓ他著ｒｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、 Ｊ ２９／８
（１）８３）、１４７４〜１４７９参照〕。
９．２０１ （１）７６）において行なわれている。す
なわち、離脱基の性質が光量子収率および加水分解安定
性のいずれに対しても明らかに決定的である◇ ルミノールおよびインルミノール化合物に比べ、すでに
今日まで知られているアクリジニウムエステルは光量子
収率が高くしかもその収率がインジケータに結合した夕
／バクによって悪化することがない点で有利であるＩ：
Ｗｅｅｋｓ他著ｒｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、 Ｊ ２９／８
（１）８３）、１４７４〜１４７９参照〕。
欧州特許出ＩＡＭ ８２，６３６号に：り知られるアク
リジニウムフェニルエステルは、化学発光を緩和々酸化
剤で刺激した場合、検出感度が高い点で優れているが、
実用化の妨げとなる欠点を有している。特に、フェニル
エステル結合は水性系において、室温においてさえ、極
めて不安定である。更に、そこに述べられた酸化条件下
では、発光はわずか約１０秒後に大部分、すなわち９５
％以上も消失する。これに比較して。
リジニウムフェニルエステルは、化学発光を緩和々酸化
剤で刺激した場合、検出感度が高い点で優れているが、
実用化の妨げとなる欠点を有している。特に、フェニル
エステル結合は水性系において、室温においてさえ、極
めて不安定である。更に、そこに述べられた酸化条件下
では、発光はわずか約１０秒後に大部分、すなわち９５
％以上も消失する。これに比較して。
他の非アイソトープアッセイ法は測定時間がはるかに短
く、それ故にサンプルの処理量の増加を可能にする。
く、それ故にサンプルの処理量の増加を可能にする。
従って、本発明の目的は高い光量子収率と共により速い
反応速度を有し、それによ多発光イムノアッセイ測定時
間を短縮できる新しいアクリジニウム誘導体を提供する
ことにある。
反応速度を有し、それによ多発光イムノアッセイ測定時
間を短縮できる新しいアクリジニウム誘導体を提供する
ことにある。
今般、これらの目的が式Ｉ
〔式中 Ｒ１は水素、１〜１０個の炭素す子を有するア
ルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベン
ジルもしくはアリール基であり、Ｒ２およびＲ５は水素
、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしく
は未置換アミノ基、カルボキシル、アルコキシ、シアン
もしくはニトロ基またはハロゲンであシ Ｈ４はスルホ
ンアミド基がその窒素原子を介してカルボニル基に直接
結合している基であるか、または式…−Ｓ −Ｘ −Ｒ
５（１） 〔式中、Ｘは分枝状もしくは非分枝状脂肪族基または芳
香族基（それはまたへテロ原子を有することもできる）
でＳＤ、そしてＲ５は緩和な条件下に生物学的に重要な
物質中の７ミノ、カルボキシルもしく４チオール基また
はその他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルまたはチオアリール基であ
り、そしてＡｅは化学発光を妨げない陰イオンである〕
で示される化学発光性アクリジニウム誘導体によυ達成
されることが児出された〇生物学的に重要な物質とは、
抗ぶと理解すべきである。この用語はホルモン、ステロ
イド、医薬、医薬代謝物、毒素、アルカロイドそして抗
体なども包含する。
ルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベン
ジルもしくはアリール基であり、Ｒ２およびＲ５は水素
、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換もしく
は未置換アミノ基、カルボキシル、アルコキシ、シアン
もしくはニトロ基またはハロゲンであシ Ｈ４はスルホ
ンアミド基がその窒素原子を介してカルボニル基に直接
結合している基であるか、または式…−Ｓ −Ｘ −Ｒ
５（１） 〔式中、Ｘは分枝状もしくは非分枝状脂肪族基または芳
香族基（それはまたへテロ原子を有することもできる）
でＳＤ、そしてＲ５は緩和な条件下に生物学的に重要な
物質中の７ミノ、カルボキシルもしく４チオール基また
はその他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルまたはチオアリール基であ
り、そしてＡｅは化学発光を妨げない陰イオンである〕
で示される化学発光性アクリジニウム誘導体によυ達成
されることが児出された〇生物学的に重要な物質とは、
抗ぶと理解すべきである。この用語はホルモン、ステロ
イド、医薬、医薬代謝物、毒素、アルカロイドそして抗
体なども包含する。
化学発光を妨げ々い隘イオンはテトラフルオボレート、
バークロレート、ハライド、アルキルサルフェート、ハ
／ロスルホネート、アルキルスルホネートまたはアリー
ルスルホネート陰イオンでおってよい。化学発光を消失
しまたは弱めなければその他の任意の陰イオンを用いる
こともできる。
バークロレート、ハライド、アルキルサルフェート、ハ
／ロスルホネート、アルキルスルホネートまたはアリー
ルスルホネート陰イオンでおってよい。化学発光を消失
しまたは弱めなければその他の任意の陰イオンを用いる
こともできる。
アリールとは芳香族炭化水素、特にフェニルおよびナフ
チルでおると理解すべきである。ヘテロ原子を有する芳
香族基とは窒素原子またに酸累原子を有する芳香族炭化
水素、特にΦノリン、インドール、ピロールおよびピリ
ジンなどであると理解すべきである。ハロゲンとは弗累
、塩紫、臭梁お：び沃ぷである。
チルでおると理解すべきである。ヘテロ原子を有する芳
香族基とは窒素原子またに酸累原子を有する芳香族炭化
水素、特にΦノリン、インドール、ピロールおよびピリ
ジンなどであると理解すべきである。ハロゲンとは弗累
、塩紫、臭梁お：び沃ぷである。
置換アミノ基は好ましくは０１〜Ｃ４アルキルまたｔｉ
ｃ、〜ｃ４ジアルキルアミンであり、またそれらアルキ
ル基の方も例えばヒドロキシルによシモノ置換されてい
ても：い。置換アミンはモルホリン基であっても：い。
ｃ、〜ｃ４ジアルキルアミンであり、またそれらアルキ
ル基の方も例えばヒドロキシルによシモノ置換されてい
ても：い。置換アミンはモルホリン基であっても：い。
Ｒ２およびＲ５について記載されたアルコキシ基はアル
キル部分）Ｃ１〜４イ１の炭素原子を有するものが好ま
しい。
キル部分）Ｃ１〜４イ１の炭素原子を有するものが好ま
しい。
Ｘについて記載され九分校状または非分枝状脂肪族基は
好ましくは、 ｃ１〜Ｃ５−アルキレン基である。
好ましくは、 ｃ１〜Ｃ５−アルキレン基である。
一般的には、Ｘかメチレン、エチレン、プロピレンまｆ
：、はオノビトー、メタ−もしくはパラ−７二二レン基
で◎るアクリジニウム誘導体が選択される。こｎらの基
はアクリジニウム誘導体の水溶性を向上させろべく、ヘ
テー原子を有する親水性置換分Ｘ＞＝ｔ、ていてもよい
。
：、はオノビトー、メタ−もしくはパラ−７二二レン基
で◎るアクリジニウム誘導体が選択される。こｎらの基
はアクリジニウム誘導体の水溶性を向上させろべく、ヘ
テー原子を有する親水性置換分Ｘ＞＝ｔ、ていてもよい
。
本発明によるアクリジニウム誘導体を使用する際特に重
要なのは置換分Ｒ５である。この基を適切に選択−しる
ことによυ、検出される生物学的物質の官能基に対し緩
和な条件下に選択的に結合され得るような高い反応性を
そのアクリジン誘導体に与えることができる。適幽な反
応性基の例を以下に列挙する。
要なのは置換分Ｒ５である。この基を適切に選択−しる
ことによυ、検出される生物学的物質の官能基に対し緩
和な条件下に選択的に結合され得るような高い反応性を
そのアクリジン誘導体に与えることができる。適幽な反
応性基の例を以下に列挙する。
ａ） −５ｏ２−ｃＩｒ＝ｃａ２
ｆ） −Ｎ＝Ｃ！冨Ｓ
ｇ）合Ｎ５
（Ｊ Ｃ１
０１：２
ｎ） −Ｃ−０−ＯＦ５
多くの場合、本発明のアクリジニウム誘導体の中でＲ５
が弐■ で示される基であるものが適していることが判っている
。
が弐■ で示される基であるものが適していることが判っている
。
そのほか、Ｒ１がメチル基であるアクリジニウム化合物
も好ましい。それ故、弐■ （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）Ｋ相当する
本発明のアクリジニウム化合物が特によく用いられる。
も好ましい。それ故、弐■ （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）Ｋ相当する
本発明のアクリジニウム化合物が特によく用いられる。
本発明のアクリジニウム誘導体中の基Ｐ２４がスルホン
アミｒ基である場合には、それは、式Ｖまたは弐■ 〔式中、ＸおよびＲ５は前記の意味を有し、そして式Ｖ
のＲ６は１〜１０個の炭素原子を有するアルキルもしく
はアルクニル基、好ましくはＣｊ−０４−アルキルによ
り七ノーもしくはジ置換されたアミン基、またはモルホ
リノ、ベンジルもしくはアリール基（これらはヒＰロキ
シル、アミン、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ
またはアリールオキシにより置換されていてもよい）で
あり、そして弐■のＲ６はそのほかに水素を表わすこと
もできる〕 で示されるのが好ましい。
アミｒ基である場合には、それは、式Ｖまたは弐■ 〔式中、ＸおよびＲ５は前記の意味を有し、そして式Ｖ
のＲ６は１〜１０個の炭素原子を有するアルキルもしく
はアルクニル基、好ましくはＣｊ−０４−アルキルによ
り七ノーもしくはジ置換されたアミン基、またはモルホ
リノ、ベンジルもしくはアリール基（これらはヒＰロキ
シル、アミン、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ
またはアリールオキシにより置換されていてもよい）で
あり、そして弐■のＲ６はそのほかに水素を表わすこと
もできる〕 で示されるのが好ましい。
本発明のこのアクリジニウム誘導体の典型的代表例は式
■ （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）で示される
。
■ （式中、ＡおよびＸは前記の意味を有する）で示される
。
本発明は２つの新しいアクリジニウム化合物群を提供す
るが、その一方の群はチオエステル基によシ区別され、
他方はスルホンアミド構造により区別される。従来より
知られているアクリジニウムフェニルエステル化合物よ
リモ、アクリジニウムアシルスルホンアミＰ誘導体ハ高
い安定性を有し、そしてチオールエステルは速い反応速
度を有する。さらにこれらの化合物群は共によシ高い光
収率を与える点で優れている・欧州特許出願第８２，６
５６号により知られるアクリジニウムフェニルエステル
と比較しり場合、チオールエステル含有離脱基を有する
本発明のアクリジニウム化合物の著しい長所は発光の反
応速度が相当に速い点である。従って、実施例１に従っ
て製造された本発明のアクリジニウムチオエステル（化
合物６）は同じ酸化条件下に１秒の測定時間で１０倍高
い光収率を有した。
るが、その一方の群はチオエステル基によシ区別され、
他方はスルホンアミド構造により区別される。従来より
知られているアクリジニウムフェニルエステル化合物よ
リモ、アクリジニウムアシルスルホンアミＰ誘導体ハ高
い安定性を有し、そしてチオールエステルは速い反応速
度を有する。さらにこれらの化合物群は共によシ高い光
収率を与える点で優れている・欧州特許出願第８２，６
５６号により知られるアクリジニウムフェニルエステル
と比較しり場合、チオールエステル含有離脱基を有する
本発明のアクリジニウム化合物の著しい長所は発光の反
応速度が相当に速い点である。従って、実施例１に従っ
て製造された本発明のアクリジニウムチオエステル（化
合物６）は同じ酸化条件下に１秒の測定時間で１０倍高
い光収率を有した。
この高い光収率および同時に短い測定時間はルミノメー
タにおいて一段と高いサンプル処理量を可能にすｂｏ 従って、第１図は実施例１により製造されたアクリジニ
ウムチオエステル（化合物６）の抗体接合体の発光速度
を示し、そして第２図は４−（２−スクシンイミジル−
万キシカルボニルエチル）フェニル−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボキシレートメトサルフェート（欧
州特許出願第８２，６５６号明細書、第１０頁）の抗体
接合体を示す。個々のトレーサ溶液１００μｌを３５０
μｌの０．０５ Ｍ ＫＣ！ＡａＯＨ緩衝液（ＰＨ１３
）＋０．１チのＨ２Ｏ２を添加することによシ刺激して
化学発光させ、そして１０秒間にわたり記録する。
タにおいて一段と高いサンプル処理量を可能にすｂｏ 従って、第１図は実施例１により製造されたアクリジニ
ウムチオエステル（化合物６）の抗体接合体の発光速度
を示し、そして第２図は４−（２−スクシンイミジル−
万キシカルボニルエチル）フェニル−１０−メチルアク
リジニウム９−カルボキシレートメトサルフェート（欧
州特許出願第８２，６５６号明細書、第１０頁）の抗体
接合体を示す。個々のトレーサ溶液１００μｌを３５０
μｌの０．０５ Ｍ ＫＣ！ＡａＯＨ緩衝液（ＰＨ１３
）＋０．１チのＨ２Ｏ２を添加することによシ刺激して
化学発光させ、そして１０秒間にわたり記録する。
第１図において、０．６６秒後にすでに最大発光に達し
、０．８８秒後にはすでに再び半減している。
、０．８８秒後にはすでに再び半減している。
これに対し、第２図においては、１．７７秒後にやつと
最大発光）て達しそして２．８８秒後になってやっと再
び半減している。
最大発光）て達しそして２．８８秒後になってやっと再
び半減している。
アクリジニウム９−カルボン酸アミドはアクリジニウム
９−カルボン酸エステルとは対照的に化学発光を全く示
さない（Ｆ、ＭｃＣａｐｒａ、 Ｗ。
９−カルボン酸エステルとは対照的に化学発光を全く示
さない（Ｆ、ＭｃＣａｐｒａ、 Ｗ。
ＣａｒｒｕｔｈｅｒｓおよびＪ 、に、 ５ｕｔｈｅｒ
ｌａｎｄ著ｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｃｈｅｎ、 Ｊ Ｖｏｌ、 ８ 、２３ｊ−２７７（
１）７３）Ｂｕｔｔｅｒｖｏｒｔｈ社発行参照〕ことか
ら、そのアミ）１１窒素がスルホニルにより置換された
アクリジニウム９−カルボン酸アミドが優れた化学発光
を呈することは全く予想外のことである。
ｌａｎｄ著ｒ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｃｈｅｎ、 Ｊ Ｖｏｌ、 ８ 、２３ｊ−２７７（
１）７３）Ｂｕｔｔｅｒｖｏｒｔｈ社発行参照〕ことか
ら、そのアミ）１１窒素がスルホニルにより置換された
アクリジニウム９−カルボン酸アミドが優れた化学発光
を呈することは全く予想外のことである。
本発明によるアクリジニウム９−カルボン酸チオエステ
ルは次の方法によシ製造できるニアクリジンまたはその
縮合フェニル環にＲ２および／またはＲ３を有する誘導
体を、ＬｅｈｍｓｔｅｄｔおよびＨｕｎｄｅｒ ｔｒｒ
Ａｒｋによる、Ｂｅｒ、 ６３．１２２９（１）３０）
に記載の方法によりエタノール／氷酢酸およびシアン化
カリウム中で９−シアノアクリジンに変換する。再結晶
後、この生成物をＬｅｈｍｓ ｔｅｄｔｒおよびＷｉｒ
ｔｈによる、Ｂｅｒ、 ６１ 、２０４４（１）２Ｂ）
に記載の方法に従って硫酸および亜硝酸ナトリウムと反
応させることによシアクリジン−９−カルボン酸または
Ｒ２ハ３−置換アクリジン−９−カルボン酸が得られる
。アクリジン−９−カルボン酸またはＲ２／′Ｒ５−置
換アクリジン−９−カルボン酸をチオニルクロライドと
反応させること（式中、Ｙは塩素を表わす） で示される化合物が得られる。ハロゲンに代えて、オキ
シカルボニル−Ｃ１−０５−７ｈキル、オキシカルボニ
ルアリールまたはイミダゾリＰ基を化合物■のＹとして
導入することもできる。
ルは次の方法によシ製造できるニアクリジンまたはその
縮合フェニル環にＲ２および／またはＲ３を有する誘導
体を、ＬｅｈｍｓｔｅｄｔおよびＨｕｎｄｅｒ ｔｒｒ
Ａｒｋによる、Ｂｅｒ、 ６３．１２２９（１）３０）
に記載の方法によりエタノール／氷酢酸およびシアン化
カリウム中で９−シアノアクリジンに変換する。再結晶
後、この生成物をＬｅｈｍｓ ｔｅｄｔｒおよびＷｉｒ
ｔｈによる、Ｂｅｒ、 ６１ 、２０４４（１）２Ｂ）
に記載の方法に従って硫酸および亜硝酸ナトリウムと反
応させることによシアクリジン−９−カルボン酸または
Ｒ２ハ３−置換アクリジン−９−カルボン酸が得られる
。アクリジン−９−カルボン酸またはＲ２／′Ｒ５−置
換アクリジン−９−カルボン酸をチオニルクロライドと
反応させること（式中、Ｙは塩素を表わす） で示される化合物が得られる。ハロゲンに代えて、オキ
シカルボニル−Ｃ１−０５−７ｈキル、オキシカルボニ
ルアリールまたはイミダゾリＰ基を化合物■のＹとして
導入することもできる。
Ｒ２，／′Ｒ５−［換アクリジン訪導体は文献に知られ
る方法により簡単に合成できる。このような合成法は例
えばｒ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｌｖｅ Ｈｅｔｅｒｏｃ
ｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ、Ａ、Ｋａｔｒｉｔ
、ｚｋｙ ｌ Ｃ０Ｗ−Ｒｅｅｓ １１４、Ｖｏｌ −
２＋３９５以降、ｐｅｒｇａＩ］ｌｏｎ Ｐｒｅｓｓ
Ｌｔｄ−発行、（１）８４）またはｒ Ｈｅｔｅｒｏｃ
ｙｃｌ土ｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ Ｊ Ｖｏｌ、 ９
、 ＠Ａｃｒｉｄｉｎｅｓａｎｄ Ｃｏｎｄ、’第２版
、Ｒ，Ｍ、 Ａｃｈｅｓｏｎ著１．Ｔｏｈｎ Ｗｉｌｅ
ｙ＆ ５ｏｎｓ ＬＪｄ、発行、（１）７５）に記載さ
れている。
る方法により簡単に合成できる。このような合成法は例
えばｒ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｌｖｅ Ｈｅｔｅｒｏｃ
ｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ、Ａ、Ｋａｔｒｉｔ
、ｚｋｙ ｌ Ｃ０Ｗ−Ｒｅｅｓ １１４、Ｖｏｌ −
２＋３９５以降、ｐｅｒｇａＩ］ｌｏｎ Ｐｒｅｓｓ
Ｌｔｄ−発行、（１）８４）またはｒ Ｈｅｔｅｒｏｃ
ｙｃｌ土ｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ Ｊ Ｖｏｌ、 ９
、 ＠Ａｃｒｉｄｉｎｅｓａｎｄ Ｃｏｎｄ、’第２版
、Ｒ，Ｍ、 Ａｃｈｅｓｏｎ著１．Ｔｏｈｎ Ｗｉｌｅ
ｙ＆ ５ｏｎｓ ＬＪｄ、発行、（１）７５）に記載さ
れている。
前記酸クロライＰ（■）を次いで式■
ｐｓ −ｘ −Ｃ０ＯＨ（ＤＯ
で示されるチオールカルボン酸、例えば２−メルカプト
安息香酸とアルカリ性条件下に反応させＳとチオールエ
ステルカルボン酸が得られ、これを次いで基Ｒ５の製造
に適した化合物、例えばＮ−ヒＰロキシスクシンイミＦ
ｌでエステル化する。そのアクリジン化合物を次に、文
献に知られる方法により１０位においてアルキル化する
。特に、トリメチルオキソニウムテトラフルオボレート
がメチル化に適しているが、ジメチルサルフニート、メ
チルフルオロスルホネート、メチルトルエンスルホネー
トまたはメチルトリフルオロメタンスルホネートを用い
ても化学発光性アクリジニウム化合物が良好な収率で得
られる。
安息香酸とアルカリ性条件下に反応させＳとチオールエ
ステルカルボン酸が得られ、これを次いで基Ｒ５の製造
に適した化合物、例えばＮ−ヒＰロキシスクシンイミＦ
ｌでエステル化する。そのアクリジン化合物を次に、文
献に知られる方法により１０位においてアルキル化する
。特に、トリメチルオキソニウムテトラフルオボレート
がメチル化に適しているが、ジメチルサルフニート、メ
チルフルオロスルホネート、メチルトルエンスルホネー
トまたはメチルトリフルオロメタンスルホネートを用い
ても化学発光性アクリジニウム化合物が良好な収率で得
られる。
本発明によるアクリジニウムスルホンアミｒ誘導体の製
造にはアクリジン−９−カルボン酸クロライド（■）も
同様に出発物質として用いられる。次いでこの化合物を
第１または第２スルホンアミド、好ましくは式Ｘ または式Ｘ １（Ｍ） Ｒ６−ｕ−ｓｏ２−ｘ−ｃｏｏｚ （式中、ＸおよびＲ６は前記の意味を有し、そしてＺは
カルボキシル基を保護し、後で除去される基である） で示される保護されたスルホンアミドカルボン酸と反応
させる。例えばＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジ
ルエステルをこの反応の保護基として用いることができ
る。保護基を除去した後に形成される酸は次いで、適当
な化合物、例えばＮ−ヒ１−′ロキシスクシンイミドを
用いて基Ｒ５に変換される。この生成物の１０位の窒素
を文献に知られる方法によりアルキル化することによっ
て化学発光性アクリジニウム化合物が得られる。
造にはアクリジン−９−カルボン酸クロライド（■）も
同様に出発物質として用いられる。次いでこの化合物を
第１または第２スルホンアミド、好ましくは式Ｘ または式Ｘ １（Ｍ） Ｒ６−ｕ−ｓｏ２−ｘ−ｃｏｏｚ （式中、ＸおよびＲ６は前記の意味を有し、そしてＺは
カルボキシル基を保護し、後で除去される基である） で示される保護されたスルホンアミドカルボン酸と反応
させる。例えばＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジ
ルエステルをこの反応の保護基として用いることができ
る。保護基を除去した後に形成される酸は次いで、適当
な化合物、例えばＮ−ヒ１−′ロキシスクシンイミドを
用いて基Ｒ５に変換される。この生成物の１０位の窒素
を文献に知られる方法によりアルキル化することによっ
て化学発光性アクリジニウム化合物が得られる。
得られたアクリジニウム化合物は、次いで、生物学的に
重要女物質、例えば抗原、抗体、ホルモン、医薬、医薬
代謝物、毒素またはアルカロイｒと反応させて発光性化
合物とすることができる。アクリジニウム誘導体は、そ
れによって直接に、または架橋分子例えばポリリジン、
ポリグルタミン酸またはポリビニルアミンを介して、生
物学的に重要な物質に結合されて安定な免疫学的に活性
な接合体を形成する。この接合体もまたトレーサと呼ば
れ、後述の発光イムノアッセイに用いられる。拮抗法ま
たはサンｒイツチ法による液体サンプル中の抗原物質を
測定するための本発明の発光イムノアッセイには固相に
固定された少くとも一つの免疫学的に活性な成分と前記
発光性トレーサが必要である。
重要女物質、例えば抗原、抗体、ホルモン、医薬、医薬
代謝物、毒素またはアルカロイｒと反応させて発光性化
合物とすることができる。アクリジニウム誘導体は、そ
れによって直接に、または架橋分子例えばポリリジン、
ポリグルタミン酸またはポリビニルアミンを介して、生
物学的に重要な物質に結合されて安定な免疫学的に活性
な接合体を形成する。この接合体もまたトレーサと呼ば
れ、後述の発光イムノアッセイに用いられる。拮抗法ま
たはサンｒイツチ法による液体サンプル中の抗原物質を
測定するための本発明の発光イムノアッセイには固相に
固定された少くとも一つの免疫学的に活性な成分と前記
発光性トレーサが必要である。
発光イムノアッセイは現在、様々な方法で行うことがで
きる。
きる。
一つの可能性は、抗原と特異的に反応する固定された抗
体を、検査対象液のサンプルおよび抗原と化学発光アク
リジニウム誘導体との接合体（抗原トレーサ）と共にイ
ンキュベートし、サンプルと非結合トレーサを分離し、
結合トレーサを酸化剤と混合して発光させ、次いで測定
された発光強度から抗原の存在量を測定することである
。
体を、検査対象液のサンプルおよび抗原と化学発光アク
リジニウム誘導体との接合体（抗原トレーサ）と共にイ
ンキュベートし、サンプルと非結合トレーサを分離し、
結合トレーサを酸化剤と混合して発光させ、次いで測定
された発光強度から抗原の存在量を測定することである
。
もう一つの可能性は、抗原と特異的に反応する固定され
た抗体を、検査対象液のサンプル、特異的に反♂する第
２抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体との接合体と
共にインキュベートし、そのサンプルと非結合の標識接
合体を分離し、結合した標識接合体を酸化剤と混合して
発光させ、そして測定された発光強度から抗原の存在量
を測定することよシなる。
た抗体を、検査対象液のサンプル、特異的に反♂する第
２抗体と化学発光性アクリジニウム誘導体との接合体と
共にインキュベートし、そのサンプルと非結合の標識接
合体を分離し、結合した標識接合体を酸化剤と混合して
発光させ、そして測定された発光強度から抗原の存在量
を測定することよシなる。
前述の発光イムノアッセイは標識接合体を添加する前に
、検査対象液を固定された抗体から分離することにより
行うこともできる。
、検査対象液を固定された抗体から分離することにより
行うこともできる。
本発明により行うことができるその他の発光イムノアッ
セイにおいては、抗体ではなく抗原の方を固定する。す
なわち、抗体と特異的に反応する固定された抗原を検査
対象液のサンプルおよび抗体と化学発光性アクリジニウ
ム誘導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、次
いでサンプルと非結合の標識接合体を分離し、そして結
合した標識接合体を次いで酸化剤と混合することができ
る。次いで発光が生じ、その強度から抗原の存在量を測
定することができる。
セイにおいては、抗体ではなく抗原の方を固定する。す
なわち、抗体と特異的に反応する固定された抗原を検査
対象液のサンプルおよび抗体と化学発光性アクリジニウ
ム誘導体との接合体の溶液と共にインキュベートし、次
いでサンプルと非結合の標識接合体を分離し、そして結
合した標識接合体を次いで酸化剤と混合することができ
る。次いで発光が生じ、その強度から抗原の存在量を測
定することができる。
もう一つの変法は抗体と特異的に反応する固定された抗
原を、抗体と化学発光性アクリジニウム化合物との接合
体の溶液と共にインキュベートシ、未反応の標識接合体
を分離し、検査対象液のサンプルを添加し、次いでサン
プルを再び分離し、結合した標識接合体を酸化剤と混合
して発光させ、次いでこの発光から抗原の存在量を測定
することよ１）々る。
原を、抗体と化学発光性アクリジニウム化合物との接合
体の溶液と共にインキュベートシ、未反応の標識接合体
を分離し、検査対象液のサンプルを添加し、次いでサン
プルを再び分離し、結合した標識接合体を酸化剤と混合
して発光させ、次いでこの発光から抗原の存在量を測定
することよ１）々る。
最後に、抗体と特異的に反応する固定された抗原を抗体
と化学発光性アクリジニウム誘導体との接合体の溶液と
共にインキュベートし、検査対象液のサンプルを添加し
、サンプルと非結合接合体を分離し、結合した標識接合
体を酸化剤と混合し、そして次に測定された発光から抗
原の存在量を測定する方法によって発光イムノアッセイ
を行うこともできｂ０ 本発明によるアクリジニウム化合物の製造例を実施例１
〜３に示す。
と化学発光性アクリジニウム誘導体との接合体の溶液と
共にインキュベートし、検査対象液のサンプルを添加し
、サンプルと非結合接合体を分離し、結合した標識接合
体を酸化剤と混合し、そして次に測定された発光から抗
原の存在量を測定する方法によって発光イムノアッセイ
を行うこともできｂ０ 本発明によるアクリジニウム化合物の製造例を実施例１
〜３に示す。
実施例 １
９−シアノアクリジン（１）
６．３４の氷酢酸をエタノール４５ｍＪ中のアクリジン
（１０？）に添加し、５．２５ｆのシアン化カリウムの
水８ ｍｅ中の溶液を満月し、反応混合物を２時間還流
加熱しそして冷却し、そして揮発性成分を真空留去する
。残留物を３０ｄの２ＮＮａＯＨと共に攪拌し、吸引濾
過し、２ＮＮａＯＨおよび水で２回洗浄し、そして湿っ
た状態で大気中にしばらく放置する。ｆｆｌ製生成物を
メチレンクロライＰ中Ｋｆｆｌ拌混合し、非溶解物質を
吸引濾過し、メチレンクロライＰで洗浄し、合一した有
機相を濃縮し、そして粗製９−シアノアクリジンをｎ−
ブチルアセテートから再結晶する。
（１０？）に添加し、５．２５ｆのシアン化カリウムの
水８ ｍｅ中の溶液を満月し、反応混合物を２時間還流
加熱しそして冷却し、そして揮発性成分を真空留去する
。残留物を３０ｄの２ＮＮａＯＨと共に攪拌し、吸引濾
過し、２ＮＮａＯＨおよび水で２回洗浄し、そして湿っ
た状態で大気中にしばらく放置する。ｆｆｌ製生成物を
メチレンクロライＰ中Ｋｆｆｌ拌混合し、非溶解物質を
吸引濾過し、メチレンクロライＰで洗浄し、合一した有
機相を濃縮し、そして粗製９−シアノアクリジンをｎ−
ブチルアセテートから再結晶する。
収率：５０チ、融点： １８３−５℃
ＩＲ： ２２３０σ−１
アクリジン−９−カルボン酸（２）
９−シアノアクリジン（５２）を４０ゴの濃Ｅ（２８０
４に少量ずつ徐々に添加し、そしてその混合物を９０〜
９５℃で２時間加熱し、また８、５ｆのＮａＮＯ２を添
加後にこの温度で更に２時間攪拌する。その熱溶液を素
早く攪拌しながら６２０ ｙｔｌの氷水に注ぎ、そして
沈殿を吸引濾過し、できるだけ少量の’ｌ Ｎ ＮａＯ
Ｈに溶解する。溶液を濾過し、涙液を５０チ強度Ｈ２Ｓ
Ｏ４で酸性化し、そして析出したアクリジン−９−カル
ボン酸を吸引濾過しそして真空乾燥する。
４に少量ずつ徐々に添加し、そしてその混合物を９０〜
９５℃で２時間加熱し、また８、５ｆのＮａＮＯ２を添
加後にこの温度で更に２時間攪拌する。その熱溶液を素
早く攪拌しながら６２０ ｙｔｌの氷水に注ぎ、そして
沈殿を吸引濾過し、できるだけ少量の’ｌ Ｎ ＮａＯ
Ｈに溶解する。溶液を濾過し、涙液を５０チ強度Ｈ２Ｓ
Ｏ４で酸性化し、そして析出したアクリジン−９−カル
ボン酸を吸引濾過しそして真空乾燥する。
収率：９５チ、融点： ２８８−９℃
ＩＲ： ３４４０（ｂｒ） 、 ５２００（ｂｒ） 、
２６００−２５００（ｂｒ）。
２６００−２５００（ｂｒ）。
ｊ９８０ ； １６５０ ； １６０５ ； １４２０
ｃｍ−’アクリジンー９−カルボン酸クロライＰ塩酸
塩（３）アクリジン−９−カルボン酸（５ｆ）を５０−
の用時蒸留した５ＯＣ４２に少量ずつ添加し、そしてそ
の混合物を５時間還流加熱する。その時点で透明となっ
ている溶液を沈殿形成が始まるまで蒸留により濃縮し、
そしてシクロヘキサンの添加および冷却によシ沈殿を完
了させる。沈殿を吸引濾過しそして真空乾燥してアクリ
ジン−９−カルボン酸りロライＰ塩酸塩を得る。
ｃｍ−’アクリジンー９−カルボン酸クロライＰ塩酸
塩（３）アクリジン−９−カルボン酸（５ｆ）を５０−
の用時蒸留した５ＯＣ４２に少量ずつ添加し、そしてそ
の混合物を５時間還流加熱する。その時点で透明となっ
ている溶液を沈殿形成が始まるまで蒸留により濃縮し、
そしてシクロヘキサンの添加および冷却によシ沈殿を完
了させる。沈殿を吸引濾過しそして真空乾燥してアクリ
ジン−９−カルボン酸りロライＰ塩酸塩を得る。
収率：９０チ、融点：２２３℃
元素分析（Ｃ１４Ｈ９Ｃ八〇Ｘ ＨＣｌとして計算）計
算値 Ｃ６０，５Ｈ２，８Ｎ５．ＯＣ４２５，５実測値
Ｃ５９，４８３，３Ｎ ５． Ｄ Ｃ１２５，２（
フェニル−２７−カルボン酸）アクリジン−９−チオカ
ルポキシレート（４） アクリジン−９−カルボン酸りロライＰ塩酸塩（３０ｆ
）を７２０ｍ１のメチレンクロライｒに懸濁し、チオサ
リチル酸（１７，７ｆ ）および５０ｍ１のトリエチル
アミンを添加し、そして透明となっている溶液を次いで
室温で１０分間攪拌する。
算値 Ｃ６０，５Ｈ２，８Ｎ５．ＯＣ４２５，５実測値
Ｃ５９，４８３，３Ｎ ５． Ｄ Ｃ１２５，２（
フェニル−２７−カルボン酸）アクリジン−９−チオカ
ルポキシレート（４） アクリジン−９−カルボン酸りロライＰ塩酸塩（３０ｆ
）を７２０ｍ１のメチレンクロライｒに懸濁し、チオサ
リチル酸（１７，７ｆ ）および５０ｍ１のトリエチル
アミンを添加し、そして透明となっている溶液を次いで
室温で１０分間攪拌する。
溶媒を除去後、Ｓ５ｆの炭酸ナトリウムおよび１４００
ｄの水を残留物に添加し、得られる溶液を沈殿が現れる
まで濃縮し、そしてこれを吸引濾過する。ろ液をＮａＣ
１で飽和し、そしてそれにより分離する沈殿を同様に吸
引濾過する。合一した沈殿の水性溶液を８０℃で氷酢酸
を用いて酸性化し、そして析出した生成物を吸引濾過し
そして真空乾燥する。
ｄの水を残留物に添加し、得られる溶液を沈殿が現れる
まで濃縮し、そしてこれを吸引濾過する。ろ液をＮａＣ
１で飽和し、そしてそれにより分離する沈殿を同様に吸
引濾過する。合一した沈殿の水性溶液を８０℃で氷酢酸
を用いて酸性化し、そして析出した生成物を吸引濾過し
そして真空乾燥する。
収率：８０チ、融点： ２６１−５℃
ＮＭＲ（ＤＭ３０ 、１００ ＭＨｚ） ：δ＝７．６
−８．４ ｐｐｍ 、 ：７ンプレツクスマルチプレツ
ト ＩＲ： １６８０＋１−’ （ｓ） 、 １７２０ （
ｒｒＵ） １２６０ （ｓ）２’−（スクシンイミＰイ
ルオキシカルボニル）フェニルアクリジン−９−チオカ
ルボキシレート（５） ３２？のＮ−ヒドロキシスクシンイミドヲ１゜２のチオ
ールエステルカルボン酸の乾燥テトラヒＰロフラン１）
ｏ−中の！ｇ渇液（０℃）に添加し、次いで６．９ｆの
ジシクロへキシルヵルボジイミ）’ （ＤＣＣ）を−２
０℃で添加し、次にその混合物を一２０℃で２時間催拌
した後室温で一夜攪拌する。０．２８ｍｊの氷酢酸を添
加後、その混合物を１時間攪拌し、次いで酢酸エチル（
２５ｄ）を添加し、そして沈殿を濾過する。Ｐ液を濃縮
しそしてクロロ４ンゼンから再結晶すると淡黄色（７）
２’−（スクシンイミドイルオキシカルボニル）フェニ
ルアクリジン−９−チオカルボキシレートが得られる。
−８．４ ｐｐｍ 、 ：７ンプレツクスマルチプレツ
ト ＩＲ： １６８０＋１−’ （ｓ） 、 １７２０ （
ｒｒＵ） １２６０ （ｓ）２’−（スクシンイミＰイ
ルオキシカルボニル）フェニルアクリジン−９−チオカ
ルボキシレート（５） ３２？のＮ−ヒドロキシスクシンイミドヲ１゜２のチオ
ールエステルカルボン酸の乾燥テトラヒＰロフラン１）
ｏ−中の！ｇ渇液（０℃）に添加し、次いで６．９ｆの
ジシクロへキシルヵルボジイミ）’ （ＤＣＣ）を−２
０℃で添加し、次にその混合物を一２０℃で２時間催拌
した後室温で一夜攪拌する。０．２８ｍｊの氷酢酸を添
加後、その混合物を１時間攪拌し、次いで酢酸エチル（
２５ｄ）を添加し、そして沈殿を濾過する。Ｐ液を濃縮
しそしてクロロ４ンゼンから再結晶すると淡黄色（７）
２’−（スクシンイミドイルオキシカルボニル）フェニ
ルアクリジン−９−チオカルボキシレートが得られる。
収率：８０％、融点： １）８−２００’ＣＩＲ： １
８１０ｍ 、 １７８０ 、１７４５ 、１２２５
、 ｆ２０５ＮＭＲ（ＤＭＳｏ 、 １００ ＭＨｚ）
：δ＝２．９５ ｐｐｍ （ｓ、４Ｈ）、７、７−８
．４ ｐｐｍ （ｍ、１２Ｈ）２’−（スクシンイミド
イルオキシカルボニル）フェニル−１０−メチルアクリ
ジニウム−９−チオカルボキシレートテトラフルオボレ
ー）（６）３りのＮ−ヒＰロキシスクシンイミＰ−エス
テル（５）を４０ｍ１の１，２−ジクロロエタン中７８
１のトリメチルオキソニウムテトラフルオポレートと共
に８０℃で８時間加熱し、そしてその混合物を次いで室
温で一夜攪拌する。沈殿を濾過し、そして１，２−ジク
ロロエタンと共に沸騰させることによシ抽出する。合一
した有機相を濃縮しそして残留物をアセトン−ジイソプ
ロピルエーテルから再結晶する。
８１０ｍ 、 １７８０ 、１７４５ 、１２２５
、 ｆ２０５ＮＭＲ（ＤＭＳｏ 、 １００ ＭＨｚ）
：δ＝２．９５ ｐｐｍ （ｓ、４Ｈ）、７、７−８
．４ ｐｐｍ （ｍ、１２Ｈ）２’−（スクシンイミド
イルオキシカルボニル）フェニル−１０−メチルアクリ
ジニウム−９−チオカルボキシレートテトラフルオボレ
ー）（６）３りのＮ−ヒＰロキシスクシンイミＰ−エス
テル（５）を４０ｍ１の１，２−ジクロロエタン中７８
１のトリメチルオキソニウムテトラフルオポレートと共
に８０℃で８時間加熱し、そしてその混合物を次いで室
温で一夜攪拌する。沈殿を濾過し、そして１，２−ジク
ロロエタンと共に沸騰させることによシ抽出する。合一
した有機相を濃縮しそして残留物をアセトン−ジイソプ
ロピルエーテルから再結晶する。
収率：４０％、融点：２４５℃
工Ｒ： ３４４０ｃ！ｎ（ｂｒ） 、 １８００ 、１
７８０ 、１７４０（ｓ） 。
７８０ 、１７４０（ｓ） 。
１６７０ 、１０６５（ｓ）
ｌｆｌａ （ＤＭＳＯ、ｉｏＯＭＨｚ） ：δ＝５．０
ｐｐｍ （Ｓ、４Ｈ） 、４．９５ｐｐｍ（ｓ、やや
拡散、３Ｈ）、７．９−８．６（ｍ、 １０Ｈ）、９９
ｐｐｍ （ｄ、 ２Ｈ） 実施例 ２ 酔クロライド（３）およびチオグリコール貨から出発す
るスクシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−
メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラ
フルオボレートの製造を（６）の合成と同様にして行う
。生成物（ハ〜（９）の個々の合成工程の収率および分
光法による特性を下記に示す： カルボキシメチルアクリジン−９−チオカルボキシレー
ト（ハ 収率：６０％ 融点：２１８°Ｃ（分解）工Ｒ：３４４
０１−１（ｂｒ）、２４００（ｂｒ）、１）５０（ｂｒ
）、１７１０（ｍ）、１６６０（ｓ）、１０７０（ｍ）
ＮＭＲ１０７０（、１００ＭＨｚ） ：δ−４，２５ｐ
ｐｍ（ｓ、 ２Ｈ） ニア、６−８．４（ｍ、８Ｈ） スクシンイミドイルオキシカルボニルメチルアクリジン
−９−チオカルボキシレート（８）収率：８０％ 工Ｒ：３４４０ｃｍ−１（ｂｒ）、２９３０．１８２０
．１７８５．１７４０（ｓ）、１２０５．１１６５ ＨＭＲ（ＤＭＳｏ、１００ＭＨｚ）：δ−２，９５ｐｐ
ｍ （Ｓ ｓ ４ Ｈ）％４．７７ ｐｐｍ （ｓ ｌ
２ Ｈ）、’６−８−８−６ｐｐ ｍ ｐ ８Ｈ）ス
クシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−メチ
ルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラフル
オボレート（９） 収率：４０％ 融点＝２５０°Ｃ ｒＲ： ３４４０ｚ−１（ｂｒ）、１８１０．１７８０
．１７３５（ｓ）、１５３Ｂ、１３５０．１０６Ｏ ＮＭＲ（ＤＭ８０ 、１００ ＭＨｚ ） ：δ−２，
９ｐｐｍ（ｓ ｔ ４Ｈ）、４、ｓ（ｓ、２Ｈ）、４．
９ｐｐｍｓ （Ｓ、３Ｈ）、７．７−９．０（ｍ、８
Ｈ）実施例 ６ Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（ベンジルオ・キシカル
ボニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
０） １３０１の４−（ジメチルアミノ）−ピリジンおよび６
ゴのトリエチルアミンを１１ Ｍのテトラヒドロフジン
中の五３９のＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジル
エステルに添加し、３１のアクリジン−９−カルボン酸
クロライド塩酸塩を１０分後に添加し、そして生じた懸
濁液を６時間還流加熱する。沈殿管吸引−過し、溶媒を
除去しそして残留物をメチレンクロライドにとシそして
２Ｎ ＮａＯＨで短時間攪拌する。ＭｇＳＯ４で乾燥後
、有機相を濃縮しそして得られる残留物をトルエン／ヘ
プタンから再結晶する。
ｐｐｍ （Ｓ、４Ｈ） 、４．９５ｐｐｍ（ｓ、やや
拡散、３Ｈ）、７．９−８．６（ｍ、 １０Ｈ）、９９
ｐｐｍ （ｄ、 ２Ｈ） 実施例 ２ 酔クロライド（３）およびチオグリコール貨から出発す
るスクシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−
メチルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラ
フルオボレートの製造を（６）の合成と同様にして行う
。生成物（ハ〜（９）の個々の合成工程の収率および分
光法による特性を下記に示す： カルボキシメチルアクリジン−９−チオカルボキシレー
ト（ハ 収率：６０％ 融点：２１８°Ｃ（分解）工Ｒ：３４４
０１−１（ｂｒ）、２４００（ｂｒ）、１）５０（ｂｒ
）、１７１０（ｍ）、１６６０（ｓ）、１０７０（ｍ）
ＮＭＲ１０７０（、１００ＭＨｚ） ：δ−４，２５ｐ
ｐｍ（ｓ、 ２Ｈ） ニア、６−８．４（ｍ、８Ｈ） スクシンイミドイルオキシカルボニルメチルアクリジン
−９−チオカルボキシレート（８）収率：８０％ 工Ｒ：３４４０ｃｍ−１（ｂｒ）、２９３０．１８２０
．１７８５．１７４０（ｓ）、１２０５．１１６５ ＨＭＲ（ＤＭＳｏ、１００ＭＨｚ）：δ−２，９５ｐｐ
ｍ （Ｓ ｓ ４ Ｈ）％４．７７ ｐｐｍ （ｓ ｌ
２ Ｈ）、’６−８−８−６ｐｐ ｍ ｐ ８Ｈ）ス
クシンイミドイルオキシカルボニルメチル−１０−メチ
ルアクリジニウム９−チオカルボキシレートテトラフル
オボレート（９） 収率：４０％ 融点＝２５０°Ｃ ｒＲ： ３４４０ｚ−１（ｂｒ）、１８１０．１７８０
．１７３５（ｓ）、１５３Ｂ、１３５０．１０６Ｏ ＮＭＲ（ＤＭ８０ 、１００ ＭＨｚ ） ：δ−２，
９ｐｐｍ（ｓ ｔ ４Ｈ）、４、ｓ（ｓ、２Ｈ）、４．
９ｐｐｍｓ （Ｓ、３Ｈ）、７．７−９．０（ｍ、８
Ｈ）実施例 ６ Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（ベンジルオ・キシカル
ボニルメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１
０） １３０１の４−（ジメチルアミノ）−ピリジンおよび６
ゴのトリエチルアミンを１１ Ｍのテトラヒドロフジン
中の五３９のＮ−ベンゼンスルホニルグリシンベンジル
エステルに添加し、３１のアクリジン−９−カルボン酸
クロライド塩酸塩を１０分後に添加し、そして生じた懸
濁液を６時間還流加熱する。沈殿管吸引−過し、溶媒を
除去しそして残留物をメチレンクロライドにとシそして
２Ｎ ＮａＯＨで短時間攪拌する。ＭｇＳＯ４で乾燥後
、有機相を濃縮しそして得られる残留物をトルエン／ヘ
プタンから再結晶する。
収率ニア０％ 融点；５８℃
工Ｒ： ５４４０ＣＩ１１−１ （ｂｒ ）、１７５５
．１６８［］、１３５７．１１６５ＨＭＲ（ＤＭＳｏ
、 １００ＭＨｚ ’）、δ−５，２ｐｐｍ（ｓ ｊ
２Ｈ）、５．３ｐｐｍ（ｓ、２Ｈ）、７．０−８．４ｐ
ｐｍ（ｍ、１８Ｈ）Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（カ
ルボキシメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（
１１）６０−の氷酢酸中の１ＪのＮ−ベンゼンスルホニ
ル−Ｎ（ベンジルオキシカルボニルメチル）アクリジン
−９−カルボン酸アミドを室温および常圧で２−の濃Ｈ
ＣＩおよびＰｄ／Ｃ（１０％）を添加して水素添加する
。反応が終了したら、触媒を吸引−過し、そしてｐ液を
濃縮するとカルボン酸が黄色固形物として得られる。
．１６８［］、１３５７．１１６５ＨＭＲ（ＤＭＳｏ
、 １００ＭＨｚ ’）、δ−５，２ｐｐｍ（ｓ ｊ
２Ｈ）、５．３ｐｐｍ（ｓ、２Ｈ）、７．０−８．４ｐ
ｐｍ（ｍ、１８Ｈ）Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（カ
ルボキシメチル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（
１１）６０−の氷酢酸中の１ＪのＮ−ベンゼンスルホニ
ル−Ｎ（ベンジルオキシカルボニルメチル）アクリジン
−９−カルボン酸アミドを室温および常圧で２−の濃Ｈ
ＣＩおよびＰｄ／Ｃ（１０％）を添加して水素添加する
。反応が終了したら、触媒を吸引−過し、そしてｐ液を
濃縮するとカルボン酸が黄色固形物として得られる。
ＮＭＲ（ＤＭＳ０ 、１００ＭＨ２） ：δ−ｓ、ｏｐ
ｐｍ （ｓ ＃ ２Ｈ）Ｎ ７．１−８．５ｐｐｍ（ｍ
、 １３Ｈ） 化合物（１１）ｅ（５）の製造と同様にしてＮ−ヒドロ
キシスクシンイミドと反応させてＮ−ベンゼンスルホニ
ル−Ｎ−（スクシンイミドイルオキシカルボニルメチル
）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１２）とする。
ｐｍ （ｓ ＃ ２Ｈ）Ｎ ７．１−８．５ｐｐｍ（ｍ
、 １３Ｈ） 化合物（１１）ｅ（５）の製造と同様にしてＮ−ヒドロ
キシスクシンイミドと反応させてＮ−ベンゼンスルホニ
ル−Ｎ−（スクシンイミドイルオキシカルボニルメチル
）アクリジン−９−カルボン酸アミド（１２）とする。
（１２）ｔ−（６）についての記載と同様にしてトリメ
チルオキソニウムテトラフルオボレートで４級化すると
、Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミドイル
オキ７カルボニルメチル）−１０−メチルアクリジニウ
ム９−カルボン酸アミドテトラフルオボレー） （１３
）が得られる。
チルオキソニウムテトラフルオボレートで４級化すると
、Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミドイル
オキ７カルボニルメチル）−１０−メチルアクリジニウ
ム９−カルボン酸アミドテトラフルオボレー） （１３
）が得られる。
実施例 ４
Ｎ−７二二ルーＮ（４−ベンジルオキシカルボニルベン
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（
１４） ３６０８９の４−（ジメチルアミ／）ピリジンおよび１
６．６ｔｒｔｌのトリエチルアミンを３００−のメチレ
ンクロライド中の１１）のベンジル４−（Ｎ−フェニル
スルファミド）ｋンゾエートに添加し、１０分後に８．
３４．９のアクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸
塩（６）を添加しそしてその混合物を１６時間還流加熱
する。冷却溶液を２Ｎ ＮａＯＨと共に短時間攪拌し、
そして有機相を分離し、水洗し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し
セして′ａ給するっ残留物をトルエン／ヘプタンから再
結晶する。
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド（
１４） ３６０８９の４−（ジメチルアミ／）ピリジンおよび１
６．６ｔｒｔｌのトリエチルアミンを３００−のメチレ
ンクロライド中の１１）のベンジル４−（Ｎ−フェニル
スルファミド）ｋンゾエートに添加し、１０分後に８．
３４．９のアクリジン−９−カルボン酸クロライド塩酸
塩（６）を添加しそしてその混合物を１６時間還流加熱
する。冷却溶液を２Ｎ ＮａＯＨと共に短時間攪拌し、
そして有機相を分離し、水洗し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し
セして′ａ給するっ残留物をトルエン／ヘプタンから再
結晶する。
収率ニア０％ 融点： １６１−１６５°ＣＮＭＲ（Ｄ
ＭＳ ０ 、１００ＭＨｚ ） ：δ−５，５ｐｐｍ
（ｓ ＃ ２Ｈ）、δ卿６−８−８−６ ｐｐｍ （ｍ
ｐ ２２ Ｈ）Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−カルボキシ
ベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酢アミ
ド臭化水素酸塩（１５） ８．５１のＮ−７二二ルーＮ−（４−ベンジルオキシカ
ルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジン−９−カル
ボン酸アミド（１４） ’ｅ氷酢酸中の６′５％強度Ｈ
Ｂｒ ５０ ｍｌ中で６０’Ｃに２時間加熱し、そして
冷却後６０ゴのジイソプロピルエーテルを添加し、そし
て沈殿を吸引ｐ過しそして真空乾燥する０ 収率：９５％ 融点＝２５５°Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳ Ｏｐ １００ＭＩＨｚ戸δ−６．８−
９ ｐｐｍ（ｍ）Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイ
ミトイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−アク
リジン−９−カルボン酬アミド（１６）２．８ゴのトリ
エチルアミン’に２５０ｍのテトラヒドロフラン中の５
．６３．９のＮ−フェニル−Ｎ−（４−カルボキシベン
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド臭
化水素酸塩（１５）に添加し、その混合物を一１５℃に
冷却し、そしてＱ、９６ｒｄのエチルクロロホルメート
を添加する。その混合物を次いで２０分間攪拌し、１．
１５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを添加し、そし
て混合物’に一１５’Ｃで３時間攪拌し、室温まで放置
して暖め、次いで一夜攪拌する。
ＭＳ ０ 、１００ＭＨｚ ） ：δ−５，５ｐｐｍ
（ｓ ＃ ２Ｈ）、δ卿６−８−８−６ ｐｐｍ （ｍ
ｐ ２２ Ｈ）Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−カルボキシ
ベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酢アミ
ド臭化水素酸塩（１５） ８．５１のＮ−７二二ルーＮ−（４−ベンジルオキシカ
ルボニルベンゼンスルホニル）−アクリジン−９−カル
ボン酸アミド（１４） ’ｅ氷酢酸中の６′５％強度Ｈ
Ｂｒ ５０ ｍｌ中で６０’Ｃに２時間加熱し、そして
冷却後６０ゴのジイソプロピルエーテルを添加し、そし
て沈殿を吸引ｐ過しそして真空乾燥する０ 収率：９５％ 融点＝２５５°Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳ Ｏｐ １００ＭＩＨｚ戸δ−６．８−
９ ｐｐｍ（ｍ）Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイ
ミトイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−アク
リジン−９−カルボン酬アミド（１６）２．８ゴのトリ
エチルアミン’に２５０ｍのテトラヒドロフラン中の５
．６３．９のＮ−フェニル−Ｎ−（４−カルボキシベン
ゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミド臭
化水素酸塩（１５）に添加し、その混合物を一１５℃に
冷却し、そしてＱ、９６ｒｄのエチルクロロホルメート
を添加する。その混合物を次いで２０分間攪拌し、１．
１５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを添加し、そし
て混合物’に一１５’Ｃで３時間攪拌し、室温まで放置
して暖め、次いで一夜攪拌する。
沈殿全吸引濾過し、ｐ液を濃縮し、残留物をメチレンク
ロライドにとシ、そして得られた溶液を水、ＮａＨＣＯ
３溶液および水で洗浄し、モしてＮａ２ＳＯ４で乾燥す
る。有機相を濃縮し、そして残留物をトルエンから再結
晶する。
ロライドにとシ、そして得られた溶液を水、ＮａＨＣＯ
３溶液および水で洗浄し、モしてＮａ２ＳＯ４で乾燥す
る。有機相を濃縮し、そして残留物をトルエンから再結
晶する。
収率：５０％ 融点：２２６°Ｃ（分解）ＮＭＲ（ＤＭ
Ｓｏ、１００ＭＨｚ）：δ−６，３５ｐｐｍ（ｓ、４Ｈ
）〜δ−６，８−８，７ｐｐｍ（ｍ、１７Ｈ） Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオキシカ
ルボニル（ンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジ
ニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート（
１７） １．１６．９のＮ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミ
ドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジ
ン−９−カルボン酸アミド（１６）ｆ ６０ ｒｎｌの
１，２−ジクロロエタン中で０．６コのメチルフルオロ
スルホネートト共に室温で２４時間攪拌し、そして分離
した沈殿を吸引−過しそして真空乾燥する。
Ｓｏ、１００ＭＨｚ）：δ−６，３５ｐｐｍ（ｓ、４Ｈ
）〜δ−６，８−８，７ｐｐｍ（ｍ、１７Ｈ） Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオキシカ
ルボニル（ンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジ
ニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート（
１７） １．１６．９のＮ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミ
ドイルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジ
ン−９−カルボン酸アミド（１６）ｆ ６０ ｒｎｌの
１，２−ジクロロエタン中で０．６コのメチルフルオロ
スルホネートト共に室温で２４時間攪拌し、そして分離
した沈殿を吸引−過しそして真空乾燥する。
収率：６５％
工Ｒ：３４２０ｃｍ−１（ｂｒ）、３１００（ｂｒ）、
１８０５（ｗ）、１７７０（ｍ）、１７４５（ｓ）、１
７００（ｍ）、１３８５（ｍ）、１２８０（ｍ）、１２
５５（ａ）、１２３０（ｓ）、１２０５（ｓ）ＮＭＲ（
ＤＭＳ Ｏ、’Ｉ ＯＯＭＨｚ ） ：δ−２，９５ｐ
ｐｍ （１３ｐ ４ Ｈ）、δ−４，７５ｐｐｍ（ｓ、
ｂｒ 、３１）、δ項八０−９．０ｐｐｍ（ｍ、１７Ｈ
）−ｒ ススー！’クト＃ ： ｍ／ｚ−５９４：Ｍ”
（陽イオン）実施例 ５ ベンジル４− （Ｎ −（４’−メトキシフェニル）ス
ルファミドシーベンゾエートおよびアクリジン−９−カ
ルボン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４
−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイル
オキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチル
アクリジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネ
ー）（２１）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）
と同様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法
による特性を以下に記載する。
１８０５（ｗ）、１７７０（ｍ）、１７４５（ｓ）、１
７００（ｍ）、１３８５（ｍ）、１２８０（ｍ）、１２
５５（ａ）、１２３０（ｓ）、１２０５（ｓ）ＮＭＲ（
ＤＭＳ Ｏ、’Ｉ ＯＯＭＨｚ ） ：δ−２，９５ｐ
ｐｍ （１３ｐ ４ Ｈ）、δ−４，７５ｐｐｍ（ｓ、
ｂｒ 、３１）、δ項八０−９．０ｐｐｍ（ｍ、１７Ｈ
）−ｒ ススー！’クト＃ ： ｍ／ｚ−５９４：Ｍ”
（陽イオン）実施例 ５ ベンジル４− （Ｎ −（４’−メトキシフェニル）ス
ルファミドシーベンゾエートおよびアクリジン−９−カ
ルボン酸クロライド塩酸塩（３）から出発するＮ−（４
−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイル
オキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチル
アクリジニウム９−カルボン酸アミドフルオロスルホネ
ー）（２１）の製造を（１７）の合成（実施例４参照）
と同様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法
による特性を以下に記載する。
Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−ベンジルオ
キシカルボニル−ベンゼンスルホニル）−アクリジン−
９−カルボン酸アミド（１Ｂ）収率ニア０％ 融点：
１８２−１８３℃ＮＭＲ（ＤＭＳ０．１００ＭＨｚ）
： Ｊ−３，５１）ｐｍ（ｓ 、 ５Ｈ）、δ＝５．５
ｐｐｍ（ｓ 、 ２Ｈ）、δ−６，３５−６，６３ｐｐ
ｍ（ｄ、 ｂｒ、２Ｈ）、δ−７，０５−７，２ｐｐｍ
（ｄｙｂｒｐ２Ｈ）、δ−７，５５−８，５ｐｐｍ（ｍ
、１７Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−カルボキシ
ベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミ
ド臭化水素酸塩（１））収率：９５％ 融点：２７３°
Ｃ（分解）ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、１００ＭＨｚ）：δ１３
−３．５ ｐｐｍ （ｓ ２３ Ｈ）、δ＃６．４−６
．６ ｐｐｍ （ｄＸｂｒｓ ２ Ｈ）、δ−７，０
５−７，２１）ｐｍ （ｄ ｐｂｒ、２Ｈ）、δ＝７．
７−８．５ ｐｐｍ（ｍ ｐ １２ ｄ ）Ｎ−（４−
メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオ
キシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９−
カルボン酸アミド収率：５０％ 融点： ２５２−２５
４°ＣＮＭＲ（０Ｍ３０，１００ＭＩ（ｚ）：δ＝２．
９５ｐｐｍ（Ｓｐ４Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｚ（ｓ、３Ｈ
）、δ＝６．４−６４−６６ｐｐ、ｂｒ、２Ｈ）、δ−
７，０５−７，２５ｐｐｍ （ｄｐ ｂｒ ｔ ２Ｈ）
、δ−７，８−８，６ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ） 工Ｒ：３０５０ＣＦ１ １８０５（Ｗ）、ｊ７８０（ｍ
）、１７４０（ｓ）、１７００（ｍ）、１５０５（ｍ）
、１３７０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２００（ｓ）、
１１８５ Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンセンスルホニル）−１０
−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオ
ロスルホネー）（２１）この物質は反応時には析出せず
、溶液を濃縮して残留物全ジイソゾロビルエーテルと共
に攪拌することによシ得られる。
キシカルボニル−ベンゼンスルホニル）−アクリジン−
９−カルボン酸アミド（１Ｂ）収率ニア０％ 融点：
１８２−１８３℃ＮＭＲ（ＤＭＳ０．１００ＭＨｚ）
： Ｊ−３，５１）ｐｍ（ｓ 、 ５Ｈ）、δ＝５．５
ｐｐｍ（ｓ 、 ２Ｈ）、δ−６，３５−６，６３ｐｐ
ｍ（ｄ、 ｂｒ、２Ｈ）、δ−７，０５−７，２ｐｐｍ
（ｄｙｂｒｐ２Ｈ）、δ−７，５５−８，５ｐｐｍ（ｍ
、１７Ｈ） Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−カルボキシ
ベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酸アミ
ド臭化水素酸塩（１））収率：９５％ 融点：２７３°
Ｃ（分解）ＮＭＲ（ＤＭＳｏ、１００ＭＨｚ）：δ１３
−３．５ ｐｐｍ （ｓ ２３ Ｈ）、δ＃６．４−６
．６ ｐｐｍ （ｄＸｂｒｓ ２ Ｈ）、δ−７，０
５−７，２１）ｐｍ （ｄ ｐｂｒ、２Ｈ）、δ＝７．
７−８．５ ｐｐｍ（ｍ ｐ １２ ｄ ）Ｎ−（４−
メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミドイルオ
キシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９−
カルボン酸アミド収率：５０％ 融点： ２５２−２５
４°ＣＮＭＲ（０Ｍ３０，１００ＭＩ（ｚ）：δ＝２．
９５ｐｐｍ（Ｓｐ４Ｈ）、δ＝３．５ｐｐｚ（ｓ、３Ｈ
）、δ＝６．４−６４−６６ｐｐ、ｂｒ、２Ｈ）、δ−
７，０５−７，２５ｐｐｍ （ｄｐ ｂｒ ｔ ２Ｈ）
、δ−７，８−８，６ｐｐｍ（ｍ、１２Ｈ） 工Ｒ：３０５０ＣＦ１ １８０５（Ｗ）、ｊ７８０（ｍ
）、１７４０（ｓ）、１７００（ｍ）、１５０５（ｍ）
、１３７０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２００（ｓ）、
１１８５ Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイ
ミドイルオキシカルボニルベンセンスルホニル）−１０
−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオ
ロスルホネー）（２１）この物質は反応時には析出せず
、溶液を濃縮して残留物全ジイソゾロビルエーテルと共
に攪拌することによシ得られる。
収率：８０％
ＮＭＲ（ＤＭＳ ０ 、１００Ｍｄｚ ） ：δ−２，
９５ｐｐｍ（ｓ、４Ｈ）、δ−３，５ｐｐｍ（ｓ 、
３Ｈ）、δ＝４．８ｐｐｍ（ｓ 、 ｂｒ 、 ３Ｈ）
、δ＝６．４５−６．７ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ
＝ ７．２−７．４ ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ−
７，７−９７−９ｐｐ、１２Ｈ）マススペクトル： ｍ
／ｚ−６２４Ｍ＋（陽イオン）ＩＲ：３４４０ｃ＋＋＋
−１（ｂｒ）、３１００．２９５０．１８０５（ｖ）
、１７７５（＋ｆｆ１）、１７４［１（Ｓ）、１６９５
（ｍ）、１１０（ｍ）、１５０５（ｍ）、１３７５（ｍ
）、１２８０（ｍ）、１２ｓｏ（ｓ）、１２０５（Ｓ） 実施例 ６ ベンジル３−１：Ｎ−（４’−メトキシフェニルスルフ
ァミド〕−ハンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発スるＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−ｉｏ−メチルアク
リジニウム９−カルボン醪アミドフルオロスルホネート
（２５）の製造を（１７）の合成（実、鴇例４参照）と
同様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法に
よる特性を以下に記載する。
９５ｐｐｍ（ｓ、４Ｈ）、δ−３，５ｐｐｍ（ｓ 、
３Ｈ）、δ＝４．８ｐｐｍ（ｓ 、 ｂｒ 、 ３Ｈ）
、δ＝６．４５−６．７ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ
＝ ７．２−７．４ ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ、２Ｈ）、δ−
７，７−９７−９ｐｐ、１２Ｈ）マススペクトル： ｍ
／ｚ−６２４Ｍ＋（陽イオン）ＩＲ：３４４０ｃ＋＋＋
−１（ｂｒ）、３１００．２９５０．１８０５（ｖ）
、１７７５（＋ｆｆ１）、１７４［１（Ｓ）、１６９５
（ｍ）、１１０（ｍ）、１５０５（ｍ）、１３７５（ｍ
）、１２８０（ｍ）、１２ｓｏ（ｓ）、１２０５（Ｓ） 実施例 ６ ベンジル３−１：Ｎ−（４’−メトキシフェニルスルフ
ァミド〕−ハンゾエートおよびアクリジン−９−カルボ
ン酸クロライド塩酸塩（３）から出発スるＮ−（４−メ
トキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキ
シカルボニルベンゼンスルホニル）−ｉｏ−メチルアク
リジニウム９−カルボン醪アミドフルオロスルホネート
（２５）の製造を（１７）の合成（実、鴇例４参照）と
同様にして行う。個々の合成工程の収率および分光法に
よる特性を以下に記載する。
Ｎ−（４−メトキシフェニル） −Ｎ−（３−ベンジル
オキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９
−カルボンｍアミド（２２）収率ニア０％ 融点： １
６８−１７０℃）ＪＭＲ（ＤＭＳ Ｏ、１００１Ｊ（ｚ
戸δ＝５．５ｐｐｒｒｒ（ａ 、ろＨ）、２口５．４５
ｐｐｍ（Ｓ Ｆ ２ Ｈ）、δ−６．５ｐｐｍ（ｓ ｐ
ｂｒ ｔ ２Ｈ）、δ−７，１ｐｐｚ（ｂｒ 、 ２
Ｈ）、δニア、３−８−８ｐｐｍ （ｍ ｐ １７ Ｈ
）Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−カルボキ
シベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酵ア
ミド具化水素酸塩（２３）収率：９０％ 融点：２６４
’Ｃ ＮＭＲ（０Ｍ３０ 、１００ＭＨｚ ） ：δ＝３．５
ｐｐｍ（Ｓ、３Ｈ）、δ＃６．４−６．６ｐｐｍ（ｄ、
ｂｒ、２Ｈ）、δ；乙０−７．２ ｐｐｍ （ｄ ｐｂ
ｒ ｔ ２ Ａ ）、δ−７，６−８−８ｐ ｐｍ
（ｒｎ ！ １２ Ｈ）Ｎ−（４−メトキシフェニル）
−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキシカルボニル（ン
ゼンスルホエル）アクリジン−９−カルボンやアミド収
率；５０％ 融点：２２３−２２５”ＣＮＭＲ（ＤＭＳ
０ 、１００Ｍ［（ｚ ） ：δ−２，９５ｐｐｍ（Ｓ
＃ ４Ｈ）、δ−３１，５ｐｐｍ（ｓ ） ｘＨ）、
’−６．４−６．６ｐｐｍ（ｄ ｓ ｂｒ ｔ ２Ｈ）
、δ−７，０−７，２ｐｐｍ（ｄ ｔ ｂｒ ｔ ２Ｈ
）、δ＝ ７．４−８．９ ｐｐｚ（ｍ、 １２Ｈ） ＩＲ： ３５００ｍ −１（ｂｒ）、３０６０．２９５
０．２８４０．１８０５（”）Ｎ １７８５（ｍ）、１
７４０（１３）、１７００（ｍ）、１５１０（ｍ）、１
３８０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２０５ （ｍ）、１
’＋ ６５ｈ）Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−
（３−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンス
ルホニル）−１０−メチルアクリジニウム９−カルボン
酸アミドフルオ四スルホネー） （２５）収率：９０％ ＮＭＲ（ＤＭＳ ０ 、１００旧ｚ ） ：δ−２，９
５ｐｐ＋？１（ｓ 、 ４Ｈ）、δ−五５５ｐｐｍ（ｓ
、５Ｈ）、δ＝４．８ｐｐｍ（ｓ、ｂｒｐ５Ｈ）、δ−
６，４５−６，７（ａ、ｂｒ、２ａ）、δ−７，０５−
７，３ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ。
オキシカルボニルベンゼンスルホニル）アクリジン−９
−カルボンｍアミド（２２）収率ニア０％ 融点： １
６８−１７０℃）ＪＭＲ（ＤＭＳ Ｏ、１００１Ｊ（ｚ
戸δ＝５．５ｐｐｒｒｒ（ａ 、ろＨ）、２口５．４５
ｐｐｍ（Ｓ Ｆ ２ Ｈ）、δ−６．５ｐｐｍ（ｓ ｐ
ｂｒ ｔ ２Ｈ）、δ−７，１ｐｐｚ（ｂｒ 、 ２
Ｈ）、δニア、３−８−８ｐｐｍ （ｍ ｐ １７ Ｈ
）Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−カルボキ
シベンゼンスルホニル）アクリジン−９−カルボン酵ア
ミド具化水素酸塩（２３）収率：９０％ 融点：２６４
’Ｃ ＮＭＲ（０Ｍ３０ 、１００ＭＨｚ ） ：δ＝３．５
ｐｐｍ（Ｓ、３Ｈ）、δ＃６．４−６．６ｐｐｍ（ｄ、
ｂｒ、２Ｈ）、δ；乙０−７．２ ｐｐｍ （ｄ ｐｂ
ｒ ｔ ２ Ａ ）、δ−７，６−８−８ｐ ｐｍ
（ｒｎ ！ １２ Ｈ）Ｎ−（４−メトキシフェニル）
−Ｎ−（３−スクシンイミドイルオキシカルボニル（ン
ゼンスルホエル）アクリジン−９−カルボンやアミド収
率；５０％ 融点：２２３−２２５”ＣＮＭＲ（ＤＭＳ
０ 、１００Ｍ［（ｚ ） ：δ−２，９５ｐｐｍ（Ｓ
＃ ４Ｈ）、δ−３１，５ｐｐｍ（ｓ ） ｘＨ）、
’−６．４−６．６ｐｐｍ（ｄ ｓ ｂｒ ｔ ２Ｈ）
、δ−７，０−７，２ｐｐｍ（ｄ ｔ ｂｒ ｔ ２Ｈ
）、δ＝ ７．４−８．９ ｐｐｚ（ｍ、 １２Ｈ） ＩＲ： ３５００ｍ −１（ｂｒ）、３０６０．２９５
０．２８４０．１８０５（”）Ｎ １７８５（ｍ）、１
７４０（１３）、１７００（ｍ）、１５１０（ｍ）、１
３８０（ｍ）、１２５０（ｍ）、１２０５ （ｍ）、１
’＋ ６５ｈ）Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−
（３−スクシンイミドイルオキシカルボニルベンゼンス
ルホニル）−１０−メチルアクリジニウム９−カルボン
酸アミドフルオ四スルホネー） （２５）収率：９０％ ＮＭＲ（ＤＭＳ ０ 、１００旧ｚ ） ：δ−２，９
５ｐｐ＋？１（ｓ 、 ４Ｈ）、δ−五５５ｐｐｍ（ｓ
、５Ｈ）、δ＝４．８ｐｐｍ（ｓ、ｂｒｐ５Ｈ）、δ−
６，４５−６，７（ａ、ｂｒ、２ａ）、δ−７，０５−
７，３ｐｐｍ（ｄ、ｂｒ。
２Ｈ）、δ−７，ｓ−ｓ、９ｐｐｍ（＝ｎ、１２Ｈ）Ｉ
Ｒ： ！１５０に−ｔ （ｂｒ）、５０８０．２９５０
．１８Ｃ１５（Ｗ）、１７８０ （ｍ）、１７４０ （
Ｓ ）、３５ １７００ （ｍ）、１６１０（ｍ）、’
Ｉ ５ｊＯ（ｍ）、ｊ３８０（１！１）、１２５０（Ｓ
）、１２０５（８）、’＋ １７０（ｓ ）マススペク
トル： ｍ／ｚ−６２４Ｍ＋（ＩＩイオン）実施例 ７ α−フェトタンパク化学発光イムノアッセイ用トレーサ
調製 １００μ／の抗体（１”９／＋＋＋ｇ）、１ ’１．５
μｌの実、嬬例１によりｇ造されたアクリジニウムチオ
エステル（化合物６ ） （ＤＭＳＯ中１ ｍ９７ｍ１
）および６００μノの接合反応用Ｑ＠液（０，０１Ｍ
ホスフェート、田８．０）ｋ１５分間インキュベートす
る。次に２００μ！のリジン（１ａｍｐ／＊）ｋ添加し
、そしてその混合物を更に１５分間インキュベートする
。
Ｒ： ！１５０に−ｔ （ｂｒ）、５０８０．２９５０
．１８Ｃ１５（Ｗ）、１７８０ （ｍ）、１７４０ （
Ｓ ）、３５ １７００ （ｍ）、１６１０（ｍ）、’
Ｉ ５ｊＯ（ｍ）、ｊ３８０（１！１）、１２５０（Ｓ
）、１２０５（８）、’＋ １７０（ｓ ）マススペク
トル： ｍ／ｚ−６２４Ｍ＋（ＩＩイオン）実施例 ７ α−フェトタンパク化学発光イムノアッセイ用トレーサ
調製 １００μ／の抗体（１”９／＋＋＋ｇ）、１ ’１．５
μｌの実、嬬例１によりｇ造されたアクリジニウムチオ
エステル（化合物６ ） （ＤＭＳＯ中１ ｍ９７ｍ１
）および６００μノの接合反応用Ｑ＠液（０，０１Ｍ
ホスフェート、田８．０）ｋ１５分間インキュベートす
る。次に２００μ！のリジン（１ａｍｐ／＊）ｋ添加し
、そしてその混合物を更に１５分間インキュベートする
。
このパンチ’１ＰＤ１０カラム（５ｅｐｈａｄｅｘ Ｃ
）２５ 媒ｉ、０．１λ（ホスフェ−）、ｐＨ６，３
に移動相とする）に移す。１０滴／画分を集める。個々
の画分を適宜希釈後その化学発光活性について試験する
（酸化剤３５０μｌ ： ０．１Ｎ ＮａＯＨ中の０．
１％Ｈ２Ｏ２）。トレーサ画分（第１活性ピーク）全プ
ールし４°Ｃで貯蔵する。
）２５ 媒ｉ、０．１λ（ホスフェ−）、ｐＨ６，３
に移動相とする）に移す。１０滴／画分を集める。個々
の画分を適宜希釈後その化学発光活性について試験する
（酸化剤３５０μｌ ： ０．１Ｎ ＮａＯＨ中の０．
１％Ｈ２Ｏ２）。トレーサ画分（第１活性ピーク）全プ
ールし４°Ｃで貯蔵する。
実施例 ８
α−フェトタンパク化学発光イムノアッセイ法５０Ｓの
スタンダード／サンプルおよび１５０ｐｉの緩衝液（ホ
スフェ−） ： ０．ＩＭ ｐＨ６，５，１％Ｔｗｅｅ
ｎ２０．０．１％牛血清アルブミン、０．１ Ｍ Ｎａ
Ｃ１，０，０１％ＮａＮ３ ）をモノクローナル抗−Ａ
ＦＰ抗体で被覆された試験管中で１５分間振盪する。次
に２×１−ずつの緩衝液で洗浄する。２００μｌのトレ
ーサを適宜希釈して添加し、そしてその混合物全１５分
間振盪する。再度１ゴずつの緩衝液で２回洗争する。化
学発光測定を３５０μｌの酸化剤（０，１Ｎ ＮａＯＨ
中０．１％Ｈ２Ｏ２、測定時間２秒）を用いて開始する
。
スタンダード／サンプルおよび１５０ｐｉの緩衝液（ホ
スフェ−） ： ０．ＩＭ ｐＨ６，５，１％Ｔｗｅｅ
ｎ２０．０．１％牛血清アルブミン、０．１ Ｍ Ｎａ
Ｃ１，０，０１％ＮａＮ３ ）をモノクローナル抗−Ａ
ＦＰ抗体で被覆された試験管中で１５分間振盪する。次
に２×１−ずつの緩衝液で洗浄する。２００μｌのトレ
ーサを適宜希釈して添加し、そしてその混合物全１５分
間振盪する。再度１ゴずつの緩衝液で２回洗争する。化
学発光測定を３５０μｌの酸化剤（０，１Ｎ ＮａＯＨ
中０．１％Ｈ２Ｏ２、測定時間２秒）を用いて開始する
。
第１図は、本発明のアクリジニウム誘導体例の抗体接合
体の発光速度を示す。 第２図は、従来のアクリジニウム誘導体例の抗体接合体
の発光速度を示す。 第３図は、α−フェトタンパク（ＡＦＰ）についてのイ
ムノ化学発光測定アッセイ（ＩＣＭＡ）の標準曲線の典
型例ど示す。 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名
体の発光速度を示す。 第２図は、従来のアクリジニウム誘導体例の抗体接合体
の発光速度を示す。 第３図は、α−フェトタンパク（ＡＦＰ）についてのイ
ムノ化学発光測定アッセイ（ＩＣＭＡ）の標準曲線の典
型例ど示す。 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＾１は水素、１〜１０個の炭素原子を有する
アルキル、アルケニルもしくはアルキニル基、またはベ
ンジルもしくはアリール基であり、Ｒ＾２およびＲ＾３
は水素、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、置換
もしくは未置換アミノ基、カルボキシル、Ｃ＿１〜Ｃ＿
４−アルコキシ、シアノまたはニトロ基またはハロゲン
であり、Ｒ＾４はスルホンアミド基がその窒素原子を介
してカルボニル基に直接結合している基であるか、また
は式II −Ｓ−Ｘ−Ｒ＾５（II） （式中Ｘは分枝状もしくは非分枝状脂肪族基または芳香
族基（それはまたヘテロ原子を含むこともできる）であ
り、そしてＲ＾５は穏やかな条件下に生物学的に重要な
物質中のアミノ、カルボキシルもしくはチオール基また
はその他の官能基と選択的に結合され得る反応性基であ
る）で示されるチオアルキルもしくはチオアリール基で
あり、そしてＡ＾■は化学発光を妨げない陰イオンであ
る〕で示される化学発光性アクリジニウム誘導体。 ２）Ｘがメチレン、エチレン、プロピレンまたはオルト
−、メタ−もしくはパラ−フエニレン基である特許請求
の範囲第１項記載のアクリジニウム誘導体。 ３）Ｒ＾５が式III ▲数式、化学式、表等があります▼（III） で示される基である特許請求の範囲第１項記載のアクリ
ジニウム誘導体。 ４）式IV ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡおよびＸは特許請求の範囲第１項における定
義を有する）で示される特許請求の範囲第３項記載のア
クリジニウム誘導体。 ５）Ｒ＾４が式Ｖ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） または式VI ▲数式、化学式、表等があります▼（VI） 〔式中、ＸおよびＲ＾５は特許請求の範囲第１項におけ
る定義を有し、そして式ＶのＲ＾６は１〜１０個の炭素
原子を有するアルキルもしくはアルケニル基、置換アミ
ノ基、またはモルホリノ、ベンジルもしくはアリール基
（これらはヒドロキシル、アミノ、１〜４個の炭素原子
を有するアルコキシまたはアリールオキシにより置換さ
れ得る）であり、そして式VIのＲ＾６は前記置換分のほ
かに水素を表わすこともできる〕で示される置換スルホ
ンアミド基である特許請求の範囲第１項記載のアクリジ
ニウム誘導体。 ６）式VII ▲数式、化学式、表等があります▼（VII） （式中ＡおよびＸは特許請求の範囲第１項における定義
を有する）で示される特許請求の範囲第５項記載のアク
リジニウム誘導体。 ７）まず式VIII ▲数式、化学式、表等があります▼（VIII） （式中Ｙはハロゲンまたはオキシカルボニル−Ｃ＿１〜
Ｃ＿５−アルキル、オキシカルボニルアリールもしくは
イミダゾリド基を表わす）で示されるアクリジン化合物
を第１または第２スルホンアミドと反応させるかまたは
式IX ＨＳ−Ｘ−ＣＯＯＨ（IX） （式中Ｘは特許請求の範囲第１項における定義を有する
）で示されるチオールカルボン酸と反応させ、次いで得
られる酸を所望の基Ｒ＾５含有アクリジン誘導体に変換
し、次いで更にこの誘導体のアクリジン骨格の窒素を４
級化することより成る、特許請求の範囲第１項記載のア
クリジニウム電導体の製造方法。 ８）式VIIIで示される化合物を式Ｘ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｘ） または式Ｘ I ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｘ I ） （式中ＸおよびＲ＾６は特許請求の範囲第５項における
定義を有し、そしてＺはカルボキシル基を保護しその後
ではずされる基である）で示される保護されたスルホン
アミド−カルボン酸と反応させ、そしてそれによつて形
成される酸を所望の基Ｒ＾５含有アクリジニウム誘導体
に変換し、次いでそのアクリジン骨格の窒素を４級化す
ることより成る特許請求の範囲第５項記載の化合物の製
造方法。 ９）特許請求の範囲第１項に記載のアクリジニウム誘導
体を直接にかまたは架橋分子を介して、タンパク、ポリ
ペプチドまたはその他の生物学的に重要な物質に結合さ
せて安定な免疫学的に活性な接合体を形成する発光性化
合物。 １０）拮抗法またはサンドイッチ法において少くとも一
つの免疫学的に活性な成分が固相に固定され、そして少
くとも一つの他の成分であるトレーサが特許請求の範囲
第９項に記載の発光性化合物であることを特徴とする液
体サンプル中の抗原物質を測定するための発光イムノア
ツセイ。 １１）ａ）抗原と特異的に反応する固定された抗体を、
検査対象液のサンプルおよび抗原と特 許請求の範囲第１項記載の化学発光アクリ ジニウム誘導体との接合体と共にインキュ ベートし、 ｂ）そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離し、 ｃ）結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光させ、
そして ｄ）測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る特許請求の範囲第１０項記載の発光イムノ
アツセイ。 １２）標識接合体を添加する前に検査対象液を固定され
た抗体から分離する特許請求の範囲第１１項記載の発光
イムノアツセイ。 １３）ａ）抗原と特異的に反応する固定された抗体を、
検査対象液のサンプルおよび特異的に 反応する第２抗体と特許請求の範囲第１項 記載の化学発光アクリジニウム誘導体との 接合体と共にインキュベートし、 ｂ）そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離し、 ｃ）結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光させ、
そして ｄ）測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る特許請求の範囲第１０項記載の発光イムノ
アツセイ。 １４）標識接合体を添加する前に検査対象液を固定され
た抗体から分離する、特許請求の範囲第１３項記載の発
光イムノアツセイ。 １５）ａ）抗体と特異的に反応する固定された抗原を、
検査対象液のサンプルおよび抗体と特 許請求の範囲第１項記載の化学発光性アク リジニウム誘導体との接合体の溶液と共に インキュベートし、 ｂ）そのサンプルおよび非結合の標識接合体を分離し、 ｃ）結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光させ、
そして ｄ）測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る特許請求の範囲第１０項記載の発光イムノ
アツセイ。 １６）ａ）抗体と特異的に反応する固定された抗原を、
抗体と特許請求の範囲第１項記載の化 学発光性アクリジニウム誘導体との接合体 の溶液と共にインキュベートし、 ｂ）未反応の標識接合体を分離し、 ｃ）検査対象液のサンプルを添加し、 ｄ）その後サンプルを再び分離し、 ｅ）結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光させ、
そして ｆ）測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る特許請求の範囲第１０項記載の発光イムノ
アツセイ。 １７）ａ）抗体と特異的に反応する固定された抗原を、
抗体と特許請求の範囲第１項記載の化 学発光性アクリジニウム誘導体との接合体 の溶液と共にインキュベートし、 ｂ）検査対象液のサンプルを添加し、 ｃ）そのサンプルおよび非結合の接合体を分離し、 ｄ）結合した標識接合体を酸化剤と混合して発光させ、
そして ｅ）測定された発光強度から抗原の存在量を測定する ことより成る特許請求の範囲第１０項記載の発光イムノ
アツセイ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3628573.0 | 1986-08-22 | ||
| DE3628573A DE3628573C2 (de) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | Chemilumineszierende Acridinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6131617A Division JP2766780B2 (ja) | 1986-08-22 | 1994-06-14 | 発光イムノアッセイ用トレーサー |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6357572A true JPS6357572A (ja) | 1988-03-12 |
| JPH0699401B2 JPH0699401B2 (ja) | 1994-12-07 |
Family
ID=6307971
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62206622A Expired - Lifetime JPH0699401B2 (ja) | 1986-08-22 | 1987-08-21 | 化学発光性アクリジン誘導体 |
| JP6131617A Expired - Lifetime JP2766780B2 (ja) | 1986-08-22 | 1994-06-14 | 発光イムノアッセイ用トレーサー |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6131617A Expired - Lifetime JP2766780B2 (ja) | 1986-08-22 | 1994-06-14 | 発光イムノアッセイ用トレーサー |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0647628B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0699401B2 (ja) |
| AT (2) | ATE223903T1 (ja) |
| CA (1) | CA1341402C (ja) |
| DE (4) | DE3645292C2 (ja) |
| DK (1) | DK171437B1 (ja) |
| ES (2) | ES2083949T3 (ja) |
| FI (1) | FI90542C (ja) |
| GR (1) | GR3019470T3 (ja) |
| IE (1) | IE74678B1 (ja) |
| NO (1) | NO171725C (ja) |
| PT (1) | PT85563B (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63112564A (ja) * | 1986-10-22 | 1988-05-17 | アボット・ラボラトリーズ | 化学発光性アクリジニウム塩 |
| JPH08500125A (ja) * | 1993-05-17 | 1996-01-09 | ルミジェン，インコーポレイテッド | ケミルミネッセンス検出に有用な，新規なｎ−アルキルアクリダンカルボキシル誘導体 |
| WO1997033884A1 (en) * | 1996-03-15 | 1997-09-18 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Reagents for labeling sh groups, process for the preparation of them, and method for labeling with them |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2112779B (en) * | 1981-12-11 | 1986-10-15 | Welsh Nat School Med | Aryl acridinium esters as luminescent labelling materials |
| US4745181A (en) * | 1986-10-06 | 1988-05-17 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Polysubstituted aryl acridinium esters |
| NZ227506A (en) * | 1987-12-31 | 1992-06-25 | London Diagnostics Inc | Specific binding assays using chemiluminescent compounds |
| FR2625565A1 (fr) * | 1987-12-31 | 1989-07-07 | London Diagnostics Inc | Esters, thioesters et amides chimioluminescents perfectionnes, et analyses les utilisant |
| DE3844954C2 (de) * | 1988-02-20 | 1998-07-16 | Hoechst Ag | Spezielle chemilumineszierende Acridinderivate und ihre Verwendung in Lumineszenzimmunoassays |
| US6002007A (en) * | 1988-02-20 | 1999-12-14 | Dade Behring Marburg Gmbh | Special chemiluminescent acridine derivatives and the use thereof in luminescence immunoassays |
| US4950613A (en) * | 1988-02-26 | 1990-08-21 | Gen-Probe Incorporated | Proteted chemiluminescent labels |
| US5227489A (en) * | 1988-08-01 | 1993-07-13 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Stable hydrophilic acridinium esters suitable for liposome encapsulation |
| AU634716B2 (en) * | 1988-08-01 | 1993-03-04 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes |
| US5241070A (en) * | 1988-09-26 | 1993-08-31 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof |
| US5663074A (en) * | 1988-09-26 | 1997-09-02 | Chiron Diagnostics Corporation | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester conjugates and syntheses thereof |
| WO1992009580A1 (en) * | 1990-11-21 | 1992-06-11 | Beckman Instruments, Inc. | Chemiluminescent compounds |
| DE4041080A1 (de) | 1990-12-21 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung eines analyten |
| DE4228839A1 (de) | 1992-08-29 | 1994-03-03 | Behringwerke Ag | Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung von Mediatoren |
| BE1008216A4 (fr) * | 1994-01-25 | 1996-02-20 | Biocode Sa | Derives chemoluminescents heterocycliques. |
| CA2193082C (en) * | 1994-06-24 | 2007-08-28 | Stephan Neuenhofer | A method for stabilizing hydrolysis-sensitive molecules or molecular moieties |
| CA2191613A1 (en) * | 1994-07-15 | 1996-02-01 | Adrian John Murray | Chemiluminescent signal enhancement |
| WO1996027785A1 (en) * | 1995-03-03 | 1996-09-12 | Abbott Laboratories | Article and method for conducting chemiluminescent reaction |
| US5731148A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-24 | Gen-Probe Incorporated | Adduct protection assay |
| EP0761652A1 (en) * | 1995-08-01 | 1997-03-12 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Acridinium compound having a plurality of luminescent groups and binding groups, and conjugate thereof |
| US6030803A (en) * | 1996-07-16 | 2000-02-29 | De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgeszonheid En Cultuur | Dibenzodihydropyridinecarboxylic esters and their use in chemiluminescent assay methods |
| BE1011206A4 (fr) * | 1997-06-11 | 1999-06-01 | Biocode Sa | Derives chimioluminescents heterocycliques. |
| EP1496050A1 (en) | 2003-07-08 | 2005-01-12 | Roche Diagnostics GmbH | Novel chemiluminescent compounds and their use |
| DE602004027737D1 (de) | 2003-07-30 | 2010-07-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Neue chemilumineszenzverbindungen und ihre verwendung |
| WO2005015214A1 (en) | 2003-07-30 | 2005-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel chemiluminescent compounds and their use |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1461877A (en) * | 1974-02-12 | 1977-01-19 | Wellcome Found | Assay method utilizing chemiluminescence |
| GB2008247B (en) * | 1977-11-17 | 1982-12-15 | Welsh Nat School Med | Detecting or quantifying substances using labelling techniques |
| GB2112779B (en) * | 1981-12-11 | 1986-10-15 | Welsh Nat School Med | Aryl acridinium esters as luminescent labelling materials |
-
1986
- 1986-08-22 DE DE3645292A patent/DE3645292C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-22 DE DE3628573A patent/DE3628573C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1987
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1994
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-
1996
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63112564A (ja) * | 1986-10-22 | 1988-05-17 | アボット・ラボラトリーズ | 化学発光性アクリジニウム塩 |
| JPH08500125A (ja) * | 1993-05-17 | 1996-01-09 | ルミジェン，インコーポレイテッド | ケミルミネッセンス検出に有用な，新規なｎ−アルキルアクリダンカルボキシル誘導体 |
| WO1997033884A1 (en) * | 1996-03-15 | 1997-09-18 | Ss Pharmaceutical Co., Ltd. | Reagents for labeling sh groups, process for the preparation of them, and method for labeling with them |
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