JPS6358839B2

JPS6358839B2 -

Info

Publication number: JPS6358839B2
Application number: JP56098113A
Authority: JP
Priority date: 1981-06-23
Filing date: 1981-06-23
Publication date: 1988-11-17
Also published as: JPS57212200A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗真菌剤などとして有用なエキノサイ
ドＡの新規製造法に関する。エキノサイド（Echinoside）Ａは特願昭54−
160181号に記載されているとおり、ナマコ類
（Holothuroidea）のアクチノピーガ
（Actinopyga）属に属するアクチノピーガ・エキ
ニーテス（Actinopyga echinites JAEGER）か
ら単離された抗真菌活性を有するオリゴ配糖体で
あり、次の構造式で表わされる。エキノサイドＡの性状は次のとおりである。 (1) 分子式（分子量） C₅₄H₈₇O₂₆SNa（1206） (2) 元素分析 C₅₄H₈₇O₂₆SNa・2H₂Oとして計算値 C52.16；H7.38；S2.58 実験値 C52.41；H7.37；S2.42 (3) 融点 228〜230℃（80％EtOH） (4) 〔α〕¹² _D−6.0゜（pyridine、Ｃ＝1.36） (5) 210nｍより長波長には紫外吸収を示さない。 (6) IR（KBr、cm^-1） 3380（vs^*）、2940（ｓ）、
2850（sh）、1760（sh）、1745（ｓ）、1635（ｓ）、
1460（ｓ）、1385（ｓ）、1260（ｓ）、1070（ｓ）、
945（ｗ）、895（ｗ）、820（ｗ）、780（ｗ）＊vs 非常に強いｓ強いｍ中程度ｗ弱い (7) CHCl₃、アセトンに溶けない。メタノール、エタノール、水に溶けにくい。含水メタノール、含水エタノールに溶ける。 DMSO、ピリジンによく溶ける。 (8) 呈色反応（TLC）発色試薬 Ehrlich……negative B.C.G.……negative Anthrone……青２，４−DNP……橙１％Ce（SO₄）₂・10％H₂SO₄……赤紫色 potassium rhodizonate test……陽性（オレ
ンジ） (9) 臭いはなく中性物質である。 (10) 無色針状晶である。 (11) CD（MeOH、ｃ＝0.196）、〔θ〕₂₄₈0、〔θ〕₂₂₃
−4000（neg、max）、〔θ〕₂₁₆0、〔θ〕₂₁₂＋4500
（end absorption） (12) Rf 0.08 TLC Kieselgel 60F₂₅₄ 展開溶媒 CHCl₃−MeOH−H₂O＝65：
35：10（下層）本発明者らはさらに研究を重ねた結果、アクチ
ノピーガ属とは異なるボハドシア（Bohadschia）
属のクロテナマコ（Bohadschia graeffei SEM
PER）を用いてエキノサイドＡを極めて高収率
で抽出することに成功し、これに基づいて本発明
を完成した。すなわち本発明は、クロテナマコの体壁を溶媒
抽出することを特徴とするエキノサイドＡの製造
法である。溶媒抽出はエキノサイドＡを溶解し得る水およ
び／または親水性有機溶媒、たとえば低級アルコ
ール（例、メタノール、エタノール、プロパノー
ル）、アセトンなどを用いて抽出することにより
行われる。溶媒の使用量はクロテナマコの体壁１
Kgに対して、たとえばメタノールの場合、通常約
１〜５程度である。有機溶媒による抽出は含水
状態で行うのが望ましいが、通常ナマコ体壁中に
含まれる水分でこの役割を果すことができる。抽
出は一般に熱抽出が効率良く、通常溶媒の沸点ま
たはそれ以下の温度で行われ、とりわけ還流下に
行うのが好都合である。抽出液は減圧下に濃縮し、その残渣を水および
水と混らずエキノサイドＡを溶解し得る有機溶媒
（例、ブタノール）の混液で分配する。混液中の
水と非水溶性有機溶媒の比率は、通常約１：１で
差し支えないが、必要により適宜調整し得る。上記分配によつて得られる有機溶媒層を減圧下
に濃縮した後、その残渣を精製することによつて
エキノサイドＡが高収率で得られる。精製法とし
ては、たとえば再結晶、カラムクロマトグラフイ
ーなどがあげられる。再結晶による精製は、まず
上記濃縮残渣をエキノサイドＡを溶解し難い適当
な溶媒またはその混液で洗浄することによつて可
溶性部分を除き、ついで通常の再結晶操作を行う
のが望ましい。洗浄液としては、たとえばクロロ
ホルム−メタノール−水の混液が好都合に用いら
れる。混液は通常容量比で水１に対してクロロホ
ルム３〜５、メタノール10〜20程度の割合で調製
される。洗浄は室温もしくは冷却下で撹拌しなが
ら実施するのが好ましい。洗浄後は通常過によ
つて不溶部（エキノサイドＡ）を採取し、再結晶
操作に付す。再結晶溶媒としては、たとえばクロ
ロホルム−メタノール−水の混液や含水メタノー
ル、含水エタノール、含水アセトニトリルなどが
あげられる。上記混液を用いる場合、その配合割
合（容量比）は、通常水１に対してクロロホルム
１〜３、メタノール４〜８程度が望ましい。再結
晶操作は常法に従つて実施することができる。本発明方法によれば、上記のような溶媒操作の
みでも高収率でエキノサイドＡを結晶状で製造す
ることができ、工業的にも極めて有利である。本
方法ににおける好ましい実施態様としては、たと
えばクロテナマコの体壁をメタノールで熱抽出
し、抽出液の濃縮残渣を水−ブタノールで分配
後、ブタノール層を濃縮し、その残渣をクロロホ
ルム−メタノール−水の混液で精製してエキノサ
イドＡを結晶化するエキノサイドＡの製造法があ
げられる。本方法によつて製造されるエキノサイドＡは優
れた抗真菌作用を有し、その抗菌スペクトルも広
いので、抗真菌剤、たとえば抗カビ剤、抗白癬菌
剤、抗カンジダ菌剤などとして、白癬症（例、水
虫など）やカンジダ症などの治療・予防に有用で
ある。エキノサイドＡは毒性が低いので、上記用途に
経口的に用いることもできるが、通常は外用剤と
して非経口的に用いるのが望ましい。かかる外用
の抗真菌剤として用いる場合、エキノサイドＡを
微粉末状でそのまま適用するかまたはエキノサイ
ドＡを含有する抽出エキスの状態で適用してもよ
いが、通常は適当な担体とともに医薬組成物の形
で使用するのが望ましい。抗真菌剤としての医薬組成物は、たとえばエキ
ノサイドＡを適当な液体担体（たとえば溶剤）に
溶解するか、あるいはこれに分散させ、または適
当な固体担体（たとえば希釈剤、増量剤）と混合
するか、あるいはこれに吸着させ、必要な場合に
はさらにこれらに、適当な添加剤、たとえば乳化
剤、分散剤、懸濁剤、展着剤、浸透剤、湿潤剤、
粘漿剤、安定剤などを添加して、たとえば溶液
剤、顆粒剤、乳剤、懸濁剤、軟膏剤、散剤、噴霧
剤、パスター剤、パツプ剤などを剤型とすること
ができる。液体担体としては、具体的には例えば水、アル
コール類（たとえばメチルアルコール、エチルア
ルコール、グリコール、グリセリンなど）、グリ
コールエーテル類（たとえばエチレングリコール
モノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノ
メチルエーテルなど）等に用いられる。固体担体
としては具体的には、例えばワツクス類（たとえ
ばポリエチレングリコール4000、鯨蝋、木蝋な
ど）等が挙げられる。抗真菌剤中における有効成分量は、限定される
べきものではないが、たとえば水虫治療の目的で
用いる場合、通常は製剤全体に対してエキノサイ
ドＡ約0.01〜70重量％、より好ましくは約0.1〜
５重量％である。又、本発明における抗真菌剤は
公知の他の抗真菌剤と同様、たとえばサリチル酸
などの角質溶解剤、たとえばウンデシレン酸、グ
リセオフルビン、フエザチオン等の他の抗菌剤、
たとえばペニシリン類、セフアロスポリン類、ス
トレプトマイシン、フラジオマイシン、テトラサ
イクリン等の他の抗生物質をさらに含んでいても
よい。上記の抗真菌剤は常法に従つて１日１〜数回患
部に塗布、噴霧などの手段で適用される。以下に、試験例および実施例によつて本発明を
さらに詳細に説明するが、本発明の範囲がこれら
に限定されるものではない。試験例エキノサイドＡの抗菌力試験寒天培地による倍数希釈法を用いエキノサイド
Ａの下記試験菌に対する最少生育阻止濃度を求め
た。検定培地は１％グルコース・ブイヨン寒天培
地（PH6.0）で、試験化合物をメタノールに溶解
後、殺菌水で希釈して用いた。培地中の濃度は1/
１０になる様調整した。各試験菌は菌液塗抹接種法
を用い、培養は28℃、３日間行なつた。試験結果を表１に示す。

【表】

【表】実施例エキノサイドＡの製造クロテナマコBohadschia graeffei（SEM
PER）の体壁120匹（14Kg）を細かく切断した
後、メタノール（20）で熱抽出（３回）する。
メタノールを減圧濃縮し得られる残渣（70ｇ）
を、水−ブタノール（約10−約10）で分配す
る。ブタノール層を減圧濃縮し得られる残渣
（230ｇ）にクロロホルム（400ml）、メタノール
（1500ml）、水（100ml）を加え、室温（15℃）で
24時間撹拌した後、過し不溶部（130ｇ）を得
る。不溶部６ｇをクロロホルム（80ml）−メタノ
ール（240ml）−水（40ml）から再結晶しエキノサ
イドA5ｇ（45％from ｎ−BuOH ext.）を得る。上記クロテナマコより得られたエキノサイドＡ
は、Actinopyga echinites（Jaeger）より得ら
れている標品のエキノサイドＡと混融、〔α〕_D、
¹³CNMRにより同定した。

Claims

【特許請求の範囲】１クロテナマコの体壁を溶媒抽出することを特
徴とするエキノサイドＡの製造法。２特許請求の範囲第１項記載の方法において、
クロテナマコの体壁を親水性有機溶媒で抽出し、
抽出物を水−非水溶性有機溶媒で分配後、有機溶
媒層からエキノサイドＡを結晶化させるエキノサ
イドＡの製造法。３特許請求の範囲第１項記載の方法において、
クロテナマコの体壁のメタノールで熱抽出し、抽
出液の濃縮残渣を水−ブタノールで分配後、ブタ
ノール層を濃縮し、その残渣をクロロホルム−メ
タノール−水の混液で精製してエキノサイドＡを
結晶化させるエキノサイドＡの製造法。