JPS6358840B2 - - Google Patents

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JPS6358840B2
JPS6358840B2 JP54164645A JP16464579A JPS6358840B2 JP S6358840 B2 JPS6358840 B2 JP S6358840B2 JP 54164645 A JP54164645 A JP 54164645A JP 16464579 A JP16464579 A JP 16464579A JP S6358840 B2 JPS6358840 B2 JP S6358840B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は精製および解毒された細菌膜プロテオ
グリカン（bacterial membranal
proteoglycan）、該プロテオグリカンの製造方法
および該プロテオグリカンを用いた免疫アジユバ
ント（immunity adjuvant）に関する。 ワクチンは一般に１種あるいは２種以上の免疫
性成分、すなわち免疫反応を起こすことができる
成分、によつて作られる。しかしながら、場合に
よつては免疫性成分はそれ単独では免疫力を発揮
することができないか、あるいは発揮したとして
もごくわずかしか発揮できないことがある。その
ような場合には、「免疫アジユバント」として知
られる物質を使用することが必要である。 一般に、免疫アジユバントはそれ自身は免疫性
ではないが免疫刺激作用を有する物質である。免
疫アジユバントの一例として不完全フロイントア
ジユバント（IFA）が挙げられる。このIFAは85
％のパラフインと15％のナフタレンとからなる。
本発明はワクチンに使用される免疫アジユバン
ト、さらに詳しくは細菌のリボソームあるいは
RNA（リボ核酸）からなるワクチンに使用される
免疫アジユバントに関する。この種のワクチンは
特にフランス国特許第73−43957号に記載されて
いる。 上記ワクチンはそれに対して免疫を得ることが
望まれる病原菌から抽出される細菌リボソームあ
るいは細菌RNAを免疫性成分として含んでいる。
しかしながら、上記フランス国特許第73−43957
号に記載されているようにこれら免疫性成分は細
菌の膜から抽出される細菌膜プロテオグリカンか
らなる免疫アジユバンドが存在する場合にしか完
全な作用を発揮しない。 しかしながら、従来の上記プロテオグリカンの
製造方法によつては、プロテオグリカンを完全に
精製し、解毒することはできず、場合によつては
得られるプロテオグリカンはワクチン反応すなわ
ち発熱反応を引き起こしてしまう。そのような反
応は避けられるのが望ましい。 従つて、本発明は細菌膜プロテオグリカンを精
製し、水溶性の細菌膜プロテオグリカンを得るた
めの方法を提供しようとするものである。本発明
の製造方法によつて得られるプロテオグリカンは
単に濾過だけによつて滅菌することができ、従つ
てこれまでプロテオグリカンの性質を変えてしま
う危険性があつた熱の使用を不要なものとする。
上記のような理由から、本明細書における「精製
されたプロテオグリカン」とは水溶性のプロテオ
グリカンを意味する。 本発明の精製された細菌膜プロテオグリカンの
製造方法は、粗細菌膜プロテオグリカンを水媒体
中で塩基あるいは次亜臭素酸塩で処理し、その後
水溶液中に存在する精製された細菌膜プロテオグ
リカンから過剰の上記塩基あるいは次亜臭素酸塩
および不溶性残留物を除去することからなる。 本発明の方法の一実施例においては、粗プロテ
オグリカンが0.05乃至2M、好ましくは0.1Mのモ
ル濃度を有する水酸化アルカリ水溶液、特に水酸
化ナトリウム水溶液、によつて処理される。この
処理は周囲温度付近の温度、例えば25℃で数時間
乃至数十時間、例えば24時間、行なわれる。ま
た、この処理は好ましくは撹拌しながら行なわれ
る。上記処理によつてプロテオグリカンが制御さ
れた方法で加水分解され、プロテオグリカンから
水溶液成分が抽出される。 この実施例においては、過剰の水酸化アルカリ
を除去するために水解物が塩酸のような酸によつ
て中和され、この中和によつて生じる塩は例えば
蒸留水に対する透析によつて除去される。不溶性
残留物は沈澱によつて、より好ましくは遠心分離
によつて除去される。この遠心分離は例えば４℃
で30000ｇで45分間行なわれる。得られる上澄み
液は精製された水溶性プロテオグリカンを含んで
ある。 本発明の方法の第２の実施例においては、粗プ
ロテオグリカンが水媒体中で次亜臭素酸アルカリ
によつて数十分間処理される。好ましくはこの処
理は周囲温度で撹拌しながら行なわれる。上記処
理の後、過剰の次亜臭素酸アルカリが除去され
る。この過剰の次亜臭素酸アルカリの除去は好ま
しくは流水に対して、次いで蒸留水に対して24時
間透析することによつて行なわれる。不溶性残留
物は上述と同様の方法で除去される。 さらに、本発明の方法は、好ましくは上記に加
えて水媒体中での酸性加水分解によつて脂質Ａを
沈澱させて除去することを含む。上記水媒体中で
の酸性加水分解は、好ましくは70乃至100℃の温
度で約１容量％の氷酢酸の存在下で約90分間行な
われる。 また、本発明はワクチンの免疫アジユバントと
して用いられる精製された水溶性細菌膜プロテオ
グリカンを提供するものである。本発明のプロテ
オグリカンは重量％で表わされる以下のような組
成を有する： ヘキソース 24乃至42％ タンパク質 31乃至53％ 脂 質 12乃至18％ ヘキソサミン ２乃至６％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ 本発明のプロテオグリカンのうち、特に上記水
酸化アルカリを使用する方法によつて得られるプ
ロテオグリカンは以下のような組成を有してい
る： ヘキソース 37±５％ タンパク質 36.5±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ５±２％ RNA ＜0.5％ DNA ≪0.2％ LPS ＜0.001％ また、本発明のプロテオグリカンのうち、特に
上記次亜臭素酸塩を使用する方法によつて得られ
るプロテオグリカンは以下のような組成を有して
いる： ヘキソース 29±５％ タンパク質 48±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ４±２％ RNA ＜0.5％ DNA ≪0.2％ LPS ＜0.001％ 本発明のプロテオグリカンの各成分はそれぞれ
以下のような分析法によつて分析される： ヘキソース…アントロンとの反応（T.A.Scottお
よびE.H.Melvin氏による1953、Analyt.
Chem.25、1956.参照） タンパク質…ビウレツト反応（A.G.Gornall.C.A.
BardaxillおよびV.V.David氏による1949、J.
Biol.Chem.177、751参照） 脂質…有機溶媒による全抽出に基づく重量分析 ヘキソサミン…ｐ−ジメチルアミノベンズアルデ
ヒドとの反応（W.T.S.MorganおよびC.J.M.
Rondell氏による1955、Biochem.J.61参照） RNA…260nｍにおける直接UV分光測光法、お
よびオルシノールとの反応（C.V.Lusena氏に
よる1951、Canad.J.Biochem.29、107−108参
照） DNA…染色されたジフエニルアミン反応（K.
Burton氏による1956、Biochem.J.62、315参
照） LPS…染色されたカーボシアニン反応（J.Janda
およびE.Work氏による1971、FEBS Letters、
Vol.16、No.．４、p343−345参照） 残留水…カールフイツシヤー反応。 一般に、精製される粗細菌膜プロテオグリカン
はいかなる既知の方法によつて製造されてもよい
が、特に上記フランス国特許第73−43957号に記
載されている方法によつて製造される。すなわ
ち、粉砕した細菌塊（bacterial biommass）を
まず7000乃至8000ｇの重加速度で数分間遠心分離
して細胞屑を沈降させて分離し、次いで20000乃
至40000ｇの重加速度で数十分間遠心分離して膜
を沈降させて分離し、その後塩水中および水中に
おける分別遠心分離によつて上記膜からプロテオ
グリカンを分離することによつて製造される。 下表は細菌塊から精製されたプロテオグリカン
を製造する方法の一例を示すものである。 【表】 ↓
↓
上澄み液
上澄み液


水溶性プロテオ
グリカン
↓

1％CH３COOHに
よる加水分解
↓

30000gでの遠
心分離
↓

透 析

↓

滅 菌

↓

解毒および精製された
プロテオグリカン
本発明の細菌膜プロテオグリカンのうちで特に
重要なものはグラム陰性細菌、より詳しくはクレ
ブシエラ（Klebsiella）属、セラチア（Serratia）
属およびエシエリヒア（Escherichia）属、とり
わけクレブシエラ ニユモニア（Klebsiella
pneumoniae）、セラチア マルセスセンス
（Serratia marcescens）およびエシエリヒア
コリ（Escherichia coli）、の膜から抽出される
プロテオグリカンである。 さらに、本発明は上記本発明の細菌膜プロテオ
グリカンを含有する免疫アジユバント、より詳細
にはそれに対して免疫を得ることが望まれる細菌
から抽出されたリボソームあるいはRNAを免疫
性成分とするワクチンに用いることのできる上記
本発明のプロテオグリカンを含んだ免疫アジユバ
ンドを提供するものである。 本発明の免疫補助剤とともにワクチンに使用す
るのに適したRNAおよびリボソームはいかなる
既知の方法によつて製造されてもよいが、特にフ
ランス国特許第73−43957号、第75−10252号およ
び第76−24124号に記載されている方法によつて
製造される。 本発明のプロテオグリカンを含んだワクチンの
一実施例においては、免疫性成分と本発明のプロ
テオグリカンの重量比は１：1.4乃至１：1.6、好
ましくは１：1.5とされる。 本発明のプロテオグリカンを含んだワクチンの
具体例として、特に以下のような組成のワクチン
が挙げられる： (1) ブロンコ−ORLワクチン（Broncho−ORL
vaccine） (a)リボソームとプロテオグリカンを組合せたワ
クチンクレブシエラ ニユモニアのリボソーム
…3.5μｇストレプトコツクス ニユモニア
（Streptococcus pneumoniae）のリボソー
ム …3.0μｇストレプトコツクス ピオゲネスA12
（Streptococcus pyogenes A12）のリボソ
ーム …3.0μｇヘモフイラス インフルエンザ
（Hemophilus influenzae）のリボソーム
…0.5μｇクレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカ
ン …15.0μｇ (b)リボソームRNAとプロテオグリカンを組合
せたワクチンクレブシエラ ニユモニアのリボソーム
RNA …2.45μｇストレプトコツクス ニユモニアのリボソー
ムRNA …2.10μｇストレプトコツクス ピオゲネスA12のリボ
ソームRNA …2.10μｇヘモフイラス インフルエンザのリボソーム
RNA …0.35μｇクレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカ
ン …10.50μｇ (2) アンチーパイアリアルワクチン（Anti−
pyorrhoeal vaccine） (a)リボソームとプロテオグリカンを組合せたワ
クチンローチア デントカリオサス（Rothia
dentocariosus）のリボソーム …1.2μｇアクチノマイセス ビスコサス
（Actinomyces viscosus）のリボソーム
…1.2μｇストレプトコツクス ムータンス
（Streptococcus mutans）のリボソーム
…0.8μｇストレプトコツクス サリバリス
（Streptococcus salivarius）のリボソーム
…2.0μｇラクトバチルス カセイ（Lactobacillus
casei）のリボソーム …1.2μｇクレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカ
ン …9.6μｇ (b)リボソームRNAとプロテオグリカンを組合
せたワクチンローチア デントカリオサスのリボソーム
RNA …0.84μｇアクチノマイセス ビスコサスのリボソーム
RNA …0.84μｇストレプトコツクス ムータンスのリボソー
ムRNA …0.56μｇストレプトコツクス サリバリスのリボソー
ムRNA …1.40μｇラクトバチルス カセイのリボソームRNA
…0.84μｇクレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカ
ン …6.72μｇ (3) ダーマトロジカル アンチ−アクニ ワクチ
ン（Dermatological anti−acne vaccine） (a)リボソームとプロテオグリカンを組合せたワ
クチンコリネバクテリウム アクネス
（Corynebacterium acnes）のリボソーム
…2μｇコリネバクテリウム パルバム
（Corynebacterium parvum）のリボソー
ム …2μｇストレプトコツクス ピオゲネス
（Streptococcus pyogenes）のリボソーム
…2μｇスタフイロコツクス エピデルミデイス
（Staphylococcus epidermidis）のリボソ
ーム …2μｇセラチア マルセスセンスのプロテオグリカ
ン …12μｇ (b)リボソームRNAとプロテオグリカンを組合
せたワクチンコリネバクテリウム アクネスのリボソーム
RNA …1.4μｇコリネバクテリウム パルバムのリボソーム
RNA …1.4μｇストレプトコツクス ピオゲネスのリボソー
ムRNA …1.4μｇスタフイロコツクス エピデルミデイスのリ
ボソームRNA …1.4μｇセラチア マルセスセンスのプロテオグリカ
ン …8.4μｇ (4) ガイナコロジカル ワクチン
（Gynaecological vaccine） (a)リボソームとプロテオグリカンを組合せたワ
クチンエシエリヒア コリのリボソーム …2μｇストレプトコツクス フエカリス
（Streptococcus faecalis）のリボソーム
…2μｇストレプトコツクス Ｈ（Streptococcus
Ｈ）のリボソーム …2μｇスタフイロコツクス エピデルミデイスのリ
ボソーム …2μｇカンジダ アルビカンス（Candida
albicans）のリボソーム …2μｇエシエリヒア コリのプロテオグリカン
…15μｇ (b)リボソームRNAとプロテオグリカンを組合
せたワクチンエシエリヒア コリのリボソームRNA
…1.4μｇストレプトコツクス フエカリスＤ
（Streptococcus faecalis Ｄ）のリボソー
ムRNA …1.4μｇストレプトコツクス ＨのリボソームRNA
…1.4μｇスタフイロコツクス エピデルミデイスのリ
ボソームRNA …1.4μｇカンジダ アルビカンスのリボソームRNA
…1.4μｇエンシエリヒア コリのプロテオグリカン
…10.5μｇ (5) インテステイナル アンチ−チフス ワクチ
ン（Intestinal anti−typhus vaccine） (a)リボソームとプロテオグリカンを組合せたワ
クチンバクテリウム コリ（Bacterium coli）の
リボソーム …2μｇサルモネラ パラチフイＡ（Salmonella
paratyphi Ａ）のリボソーム …2μｇサルモネラ パラチフイＢ（Salmonella
paratyphi Ｂ）のリボソーム …2μｇシゲラ ジセンテリア（Shigella
dysenteriae）のリボソーム …2μｇエンテロコツクス （Enterococcus）のリボ
ソーム …2μｇセラチア マルセスセンスのプロテオグリカ
ン …15μｇ (b)リボソームRNAとプロテオグリカンを組合
せたワクチンバクテリウム コリのリボソームRNA
…1.4μｇサルモネラ パラチフイＡのリボソーム
RNA …1.4μｇサルモネラ パラチフイＢのリボソーム
RNA …1.4μｇシゲラ ジセンテリアのリボソームRNA
…1.4μｇエンテロコツクス のリボソームRNA
…1.4μｇセラチア マルセスセンスのプロテオグリカ
ン …10.5μｇ 次に実施例によつて本発明を説明する。 実施例 １クレブシエラ ニユモニアの粗膜プロテオグリ
カンの製造 下記の成分を含む（１リツトル当り）培養基に
クレブシエラ ニユモニアの亜変種（strain）を
培養した： 肉抽出物 ５ｇ イスト抽出物 ５ｇ 蔗 糖 ２ｇ リン酸水素ニナトリウム 2.5ｇ 培養後、細胞を遠心分離によつて培養基から分
離し、塩水（NaCl）で洗浄し、乾燥し、−20℃で
保存した。発酵によつて得た細菌塊を連続的に遠
心分離を行なうことによつて濃縮および洗浄し
た。このようにして得た細菌濃縮物を生理的血清
に分散させ、分光測光法によつて測定した時の最
終濃度を１リツトルにつき乾燥細胞50ｇとした。 次に、細胞懸濁液を特別な粉砕バルブが取付け
られAPV−マントン ガウリン（APV−
Manton Gaulin）ホモジナイザーに通して細胞
の粉砕を行なつた。この操作の間、懸濁液の温度
を10℃以下に保つた。 次に、以下に述べるような条件で一連の分別遠
心分離操作を行ない、粉砕操作を行なつた細胞懸
濁液から粗プロテオグリカンを分離した。 まず、懸濁液を４℃の温度において7000ｇで10
分間遠心分離し、粉砕されていない細胞および細
胞屑を除去した。その後、上澄み液を４℃の温度
において30000ｇで45分間遠心分離し、粗膜成分
を沈降させた。得られた沈澱物をホモジナイザー
を用いて１容量の冷たい0.15MNaClに分散させ、
その後上記7000ｇと30000ｇの遠心分離操作を再
び行なつた。得られた沈澱物を１容量の蒸留水に
入れ、均一に分散させた後、上記7000ｇと30000
ｇの遠心分離操作を再度行なつた。その後、得ら
れた沈澱物を最初の容量の1/4容量の蒸留水に入
れ、均一に分散させた。得られた懸濁液を7500ｇ
で10分間遠心分離し、粗プロテオグリカンを含有
する上澄み液を得た。 実施例 ２ 精製されたプロテオグリカンの製造 実施例で得た粗プロテオグリカンを含有する上
澄み液に、最終モル濃度が0.1Mとなるようにこ
の上澄み液100mlに対して１mlの割合で10Nの水
酸化ナトリウムを添加した。水酸化ナトリウムを
添加した上澄み液を穏かに撹拌しながら25℃の温
度で24時間放置し、制御された加水分解によつて
プロテオグリカンから水溶性成分を抽出した。 次に、水解物を3Nの塩酸で中和し、生じた塩
化ナトリウムを蒸留水に対する透析によつて除去
した。透析の後、４℃の温度で30000ｇで45分間
遠心分離を行なつて不溶性残留物を除去し、水溶
性プロテオグリカンを含有する上澄み液を得た。 実施例 ３ 精製されたプロテオグリカンの製造 実施例１で得た粗プロテオグリカンを含有する
上澄み液に、その上澄み液100mlに対して２mlの
割合で次亜臭素酸ナトリウム（臭素10ml＋濃縮水
酸化ナトリウム60ml）を添加した。次で次亜臭素
酸ナトリウムを添加した上澄み液を周囲温度で30
分間撹拌し、その後液を流水に対して、次いで蒸
留水に対して24時間透析することによつて過剰の
次亜臭素酸ナトリウムを除去した。透析の後、４
℃の温度で30000ｇで45分間遠心分離を行なつて
不溶性残留物を除去し、水溶性プロテオグリカン
を含有する上澄み液を得た。 実施例 ４ 実施例２で製造されたプロテオグリカンは完全
に解毒されておらず、高熱作用を有するリポ多糖
類をなお少量含んでいる。このような理由から、
実施例２のプロテオグリカンを以下のように処理
した。 まず、水溶性プロテオグリカンを含有する上澄
み液100mlに氷酢酸１mlを添加し、90℃の温度で
90分間加熱した。この加水分解によつて脂質Ａが
リポ多糖類から定量的に分離される。加水分解の
後、液を氷中で冷却して脂質Ａを沈澱させた。０
℃の温度で30000ｇで20分間遠心分離を行なつて
脂質Ａの沈澱を除去し、得られた上澄み液を蒸留
水に対して24時間透析して氷酢酸を除去した。 次に、得られた透析物を0.22μの膜を用いて濾
過して滅菌し、濾過液を凍結あるいは凍結乾燥状
態で保存した。 上述のようにして得たプロテオグリカンは重量
％で表わされる下記のような組成を有していた。 ヘキソース 37±５％ タンパク質 36.5±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ５±２％ RNA ＜0.5％ DNA ≪0.2％ LPS ＜0.001％ 実施例 ５ 実施例４と同様にして、実施例３の精製された
プロテオグリカンから重量％で表わされる下記の
組成を有するプロテオグリカンを得た： ヘキソース 29±５％ タンパク質 48±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ４±２％ RNA ＜0.5％ DNA ≪0.2％ LPS ＜0.001％ 勿論、精製および解毒されたプロテオグリカン
は上述と同様な方法でセラチア マルセスセンス
およびエシエリヒア コリからも得ることがで
き、先に述べたようなワクチン組成物に用いるこ
とができる。 また、本発明のプロテオグリカンを含んだワク
チン組成物は勿論その用途に応じて担体および賦
形剤と共に錠剤とすることによつて使用してもよ
い。先に述べたワクチン組成物は注入するのが好
ましい。 本発明のプロテオグリカンを含んだワクチンを
免疫作用について試験した。その結果、本発明の
ワクチンは精製および解毒された膜プロテオグリ
カンを使用しているために、フランス国特許第73
−43957号に記載されているワクチンよりもかな
り優れた免疫作用を有していることが判明した。
しかしながら、本発明のプロテオグリカンを含ん
だワクチンの最大の利点は発熱作用を有していな
いということである。 発熱作用の試験を以下のようにして行なつた。
すなわち、１mlのワクチンを２乃至2.5Kgの目方
のウサギの静脈に注射し、サーモカツプルプロー
ブによつて直腸の温度を測定した。得られた結果
を下表に示す。 下表から明らかなように、本発明のプロテオグ
リカンを含んだワクチンは発熱作用を有していな
い 【表】 【表】

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 粗細菌膜プロテオグリカンを水媒体中で塩基
    あるいは次亜臭素酸塩で処理し、その後水溶液中
    に存在する過剰の上記塩基あるいは次亜臭素酸塩
    および不溶性残留物を除去することにより、該水
    溶液中に存在する重量％で表わされる下記の組
    成： ヘキソース 24乃至42％ タンパク質 31乃至53％ 脂 質 12乃至18％ ヘキソサミン ２乃至６％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ を有するプロテオグリカンを精製することからな
    る発熱作用のない細菌膜プロテオグリカンの製造
    方法。 ２ 上記塩基として水酸化アルカリを0.05乃至
    2Mのモル濃度で使用し、この水酸化アルカリに
    よる処理を周囲温度付近の温度で数時間乃至数十
    時間行なうことを特徴とする特許請求の範囲第１
    項記載の製造方法。 ３ 上記次亜臭素酸塩として次亜臭素酸アルカリ
    を使用し、この次亜臭素酸アルカリによる処理を
    周囲温度付近の温度で数十分間行なうことを特徴
    とする特許請求の範囲第１項記載の製造方法。 ４ 上記過剰の塩基あるいは次亜臭素酸塩を透析
    によつて除去し、上記不溶性残留物を遠心分離に
    よつて除去することを特徴とする特許請求の範囲
    第１項、第２項または第３項記載の製造方法。 ５ 上記粗細菌膜プロテオグリカンがグラム陰性
    細菌から抽出された粗細菌膜プロテオグリカンで
    あることを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至
    第４項のいずれかの項記載の製造方法。 ６ 上記グラム陰性細菌がクレブシエラ ニユモ
    ニアであることを特徴とする特許請求の範囲第５
    項記載の製造方法。 ７ 上記グラム陰性細菌がセラチア マルセスセ
    ンスであることを特徴とする特許請求の範囲第５
    項記載の製造方法。 ８ 上記グラム陰性細菌がエシエリヒア コリで
    あることを特徴とする特許請求の範囲第５項記載
    の製造方法。 ９ 粗細菌膜プロテオグリカンを水媒体中で塩基
    あるいは次亜臭素酸塩で処理し、その後水溶液中
    に存在する過剰の上記塩基あるいは次亜臭素酸塩
    および不溶性残留物を除去することにより、該水
    溶液中に存在する重量％で表わされる下記の組
    成： ヘキソース 24乃至42％ タンパク質 31乃至53％ 脂 質 12乃至18％ ヘキソサミン ２乃至６％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ を有するプロテオグリカンを精製し、次いで上記
    精製された細菌膜プロテオグリカンを水媒体中で
    70乃至100℃の温度で酢酸によつて加水分解し、
    生成される不溶性成分を除去することを特徴とす
    る発熱作用のない細菌膜プロテオグリカンの製造
    方法。 １０ 上記塩基として水酸化アルカリを0.05乃至
    2Mのモル濃度で使用し、この水酸化アルカリに
    よる処理を周囲温度付近の温度で数時間乃至数十
    時間行なうことを特徴とする特許請求の範囲第９
    項記載の製造方法。 １１ 上記次亜臭素酸塩として次亜臭素酸アルカ
    リを使用し、この次亜臭素酸アルカリによる処理
    を周囲温度付近の温度で数十分間行なうことを特
    徴とする特許請求の範囲第９項記載の製造方法。 １２ 上記過剰の塩基あるいは次亜臭素酸塩を透
    析によつて除去し、上記不溶性残留物を遠心分離
    によつて除去することを特徴とする特許請求の範
    囲第９項、第１０項または第１１項記載の製造方
    法。 １３ 上記酢酸として氷酢酸を１容量％の濃度で
    使用することを特徴とする特許請求の範囲第９項
    乃至第１２項のいずれかの項記載の製造方法。 １４ 上記粗細菌膜プロテオグリカンがグラム陰
    性細菌から抽出された粗細菌膜プロテオグリカン
    であることを特徴とする特許請求の範囲第９項乃
    至第１３項のいずれかの項記載の製造方法。 １５ 上記グラム陰性細菌がクレブシエラ ニユ
    モニアであることを特徴とする特許請求の範囲第
    １４項記載の製造方法。 １６ 上記グラム陰性細菌がセラチア マルセス
    センスであることを特徴とする特許請求の範囲第
    １４項記載の製造方法。 １７ 上記グラム陰性細菌がエシエリヒア コリ
    であることを特徴とする特許請求の範囲第１４項
    記載の製造方法。 １８ 重量％で表わされる下記の組成を有する、
    細菌膜から抽出された発熱作用のない水溶性プロ
    テオグリカン： ヘキソース 24乃至42％ タンパク質 31乃至53％ 脂 質 12乃至18％ ヘキソサミン ２乃至６％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ １９ 重量％で表わされる下記の組成を有するこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第１８項記載のプ
    ロテオグリカン： ヘキソース 37±５％ タンパク質 36.5±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ５±２％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ ２０ 重量％で表わされる下記の組成を有するこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第１８項記載のプ
    ロテオグリカン： ヘキソース 29±５％ タンパク質 48±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ４±２％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ ２１ 細菌のリボソームおよびRNA（リボ核酸）
    のいずれか一方あるいはその両方である免疫性成
    分とともにワクチンを構成することのできる免疫
    アジユバントであつて、重量％で表わされる下記
    の組成を有する、細菌膜から抽出された発熱作用
    のない水溶性プロテオグリカンからなることを特
    徴とする免疫アジユバント： ヘキソース 24乃至42％ タンパク質 31乃至53％ 脂 質 12乃至18％ ヘキソサミン ２乃至６％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ ２２ 上記プロテオグリカンが重量％で表わせる
    下記の組成を有することを特徴とする特許請求の
    範囲第２１項記載の免疫アジユバント： ヘキソース 37±５％ タンパク質 36.5±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ５±２％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ ２３ 上記プロテオグリカンが重量％で表わされ
    る下記の組成を有することを特徴とする特許請求
    の範囲第２１項記載の免疫アジユバント： ヘキソース 29±５％ タンパク質 48±５％ 脂 質 15±３％ ヘキソサミン ４±２％ RNA（リボ核酸） ＜0.5％ DNA（デオキシリボ核酸） ＜0.2％ LPS（リポ多糖類） ＜0.001％ ２４ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： クレブシエラ ニユモニアのリボソーム …3.5μｇ ストレプトコツクス ニユモニアのリボソーム
    …3.0μｇ ストレプトコツクス ピオゲネスA12のリボソー
    ム …3.0μｇ ヘモフイラス インフルエンザのリボソーム
    …0.5μｇ クレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカン
    …15.0μｇ ２５ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： クレブシエラ ニユモニアのリボソームRNA
    …2.45μｇ ストレプトコツクス ニユモニアのリボソーム
    RNA …2.10μｇ ストレプトコツクス ピオゲネスA12のリボソー
    ムRNA …2.10μｇ ヘモフイラス インフルエンザのリボソーム
    RNA …0.35μｇ クレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカン
    …10.50μｇ ２６ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： ローチア デントカリオサスのリボソーム
    …1.2μｇ アクチノマイセス ビスコサスのリボソーム
    …1.2μｇ ストレプトコツクス ムータンスのリボソーム
    …0.8μｇ ストレプトコツクス サリバリスのリボソーム
    …2.0μｇ ラクトバチルス カセイのリボソーム …1.2μｇ クレブシエラ ニユモニアのリボソーム …9.6μｇ ２７ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： ローチア デントカリオサスのリボソームRNA
    …0.84μｇ アクチノマイセス ビスコサスのリボソーム
    RNA …0.84μｇ ストレプトコツクス ムータンスのリボソーム
    RNA …0.56μｇ ストレプトコツクス サリバリスのリボソーム
    RNA …1.40μｇ ラクトバチルス カセイのリボソームRNA
    …0.84μｇ クレブシエラ ニユモニアのプロテオグリカン
    …6.72μｇ ２８ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： コリネバクテリウム アクネスのリボソーム
    …2μｇ コリネバクテリウム パルバムのリボソーム
    …2μｇ ストレプトコツクス ピオゲネスのリボソーム
    …2μｇ スタフイロコツクス エピデルミデイスのリボソ
    ーム …2μｇ セラチア マルセスセンスのプロテオグリカン
    …12μｇ ２９ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： コリネバクテリウム アクネスのリボソーム
    RNA …1.4μｇ コリネバクテリウム パルバムのリボソーム
    RNA …1.4μｇ ストレプトコツクス ピオゲネスのリボソーム
    RNA …1.4μｇ スタフイロコツクス エピデルミデイスのリボソ
    ームRNA …1.4μｇ セラチア マルセスセンスのプロテオグリカン
    …8.4μｇ ３０ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： エシエリヒア コリのリボソーム …2μｇ ストレプトコツクス フエカリスのリボソーム
    …2μｇ ストレプトコツクス Ｈのリボソーム …2μｇ スタフイロコツクス エピデルミデイスのリボソ
    ーム …2μｇ カンジダ アルビカンスのリボソーム …2μｇ エシエリヒア コリのプロテオグリカン…15μｇ ３１ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： エシエリヒア コリのリボソームRNA …1.4μｇ ストレプトコツクス フエカリスＤのリボソーム
    RNA …1.4μｇ ストレプトコツクス ＨのリボソームRNA
    …1.4μｇ スタフイロコツクス エピデルミデイスのリボソ
    ームRNA …1.4μｇ カンジダ アルビカンスのリボソームRNA
    …1.4μｇ エシエリヒア コリのプロテオグリカン
    …10.5μｇ ３２ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： バクテリウム コリのリボソーム …2μｇ サルモネラ パラチフイＡのリボソーム …2μｇ サルモネラ パラチフイＢのリボソーム …2μｇ シゲラ ジセンテリアのリボソーム …2μｇ エンテロコツクスのリボソーム …2μｇ セラチア マルセスセンスのプロテオグリカン
    …15μｇ ３３ 下記の組成を有する免疫性成分とともにワ
    クチンを構成することができることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項、第２２項または第２３
    項記載の免疫アジユバント： バクテリウム コリのリボソームRNA …1.4μｇ サルモネラ パラチフイＡのリボソームRNA
    …1.4μｇ サルモネラ パラチフイＢのリボソームRNA
    …1.4μｇ シゲラ ジセンテリアのリボソームRNA
    …1.4μｇ エンテロコツクスのリボソームRNA …1.4μｇ セラチア マルセスセンスのプロテオグリカン
    …10.5μｇ
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