JPS6363942A - フロ−サイトメ−タ−および他の分析機器を検定するための方法 - Google Patents
フロ−サイトメ−タ−および他の分析機器を検定するための方法Info
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- JPS6363942A JPS6363942A JP62214975A JP21497587A JPS6363942A JP S6363942 A JPS6363942 A JP S6363942A JP 62214975 A JP62214975 A JP 62214975A JP 21497587 A JP21497587 A JP 21497587A JP S6363942 A JPS6363942 A JP S6363942A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
（産業上の利用分野）
粒子または細胞分析に使用される市販の機器は多数ある
０粒子、特に生物学的粒子または細胞の特性は分析中ま
たは粒子が流水中を移動したり懸濁液中を運ばれる間粒
子が比較的安定したままである技法で決定され得る。フ
ローサイトメーター（流動細胞計測Ｉｆｆ）は知られて
おり、動いている粒子の特性を分析したり検出するのに
役立つ、典型的なフローサイトメトリー機器では、細胞
や他の生物学的粒子は液体流水中を流され、各粒子を、
好適なのは一時に、受容部位を通過させ、粒子の物理的
または化学的特性を測定する０種々の信号は電気的、音
響的および放射性を含む粒子の種々の特性に関連して検
出され１：′ｆるが、フローサイトメーターは通常機器
を通過する粒子の分析には光学的信号による。多くの場
合、分析機器を静的または動的な状態のいずれかで粒子
の分析に使用するとしても、機器の使用を準備するのに
予備的なセットアツプ工程を通常必要とする。細胞また
は他の生物学的粒子が極めて小さくてその粒子に関して
検出される信号がしばしば低い場合、分析を行なう前に
、試験結果の信頼性を確実にするために機器の適当な検
定を行なうのが望ましい。 （従来技術） 生物学的粒子または細胞分析に有用な機器を検定するた
めの現行の技法は測定者の技術に強く依存する。換言す
ると、検定手順中に対照を調整し、適当な閾値を決定し
、実施される特定の試験毎に何種もの標準を保持するた
めに検定者の判断および経験が必要である。実際に経験
を績んだ測定者は、使用前に機器を非常にうまく検定で
きるとはいえ、適当な検定を達成したと感するにはこの
ような測定者は多くの感および熟考を強いられる。 例えば、フローサイトメーターのような機器の種々の光
学的要素を配列する場合、検定する人間は典型的には画
面またはＣＲＴを見て、種々の対照の調整とともに視覚
による判断によって機器が検定されたことを判断する。 もちろん典型的な視覚による検定技法を実行するときに
は、試験結果の再現性に妥協があり得る。 フローサイトメーターおよび他の生物学的粒子分析機器
は通常実際の分析を受けようとする粒子や細胞の型に似
た粒子で検定する。従って検定粒子は大きさ、容積、表
面特性、粒状性、色調の特徴（細胞着色剤、染料、免疫
蛍光標識など）のような調べる粒子に似た特性を持つよ
うに選択されるべきである。フローサイトメトリー機器
の過去および現行の検定手順は検定段階にニワトリ赤血
球細胞の利用を含む、ニワトリ赤血球細胞は検定手順の
いくつかの点では信顆できるけれど、やはりいくつかの
光関連特性におけるスペクトル不足のため完全に満足と
いう訳ではない、検定目的のための生物学的試料に加え
て、微細球状ビーズが細胞分析機器の検定に役立ってい
る。ｒＩＡえば米国特許第４，３３１．８６２号には粒
子計測機器の検定にラテックス物質からできたビーズの
使用が記述されている。フローサイトメトリー機器の検
定に特に使用される検定用ビーズは、フローサイトメト
リースタンダーヅコーボレイション（Ｆ ｌｏｗ Ｃｙ
ｔｏｍｅｔｒｙＳＬａｎｄａｒｄｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ）、リサーチトライアングルパーク（Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ）、ノースカロラ
イナから購入できる。 （発明が解決しようとする問題点） たとえ検定用ビーズの有効性が粒子分析機器の検定技法
を改善したとしても、また機器が適当に検定されたか否
かを決めるのに測定者の感がかなり必要である。従って
再現性ある試験結果を提供するだけでなく、現在利用さ
れている検定技法に伴なう熟考および恣による推旦を除
去する検定手順を確立する必要および要請が未だにある
。本発明が目指すのはこのような改善の実現に対するも
のである。 （問題点を解決するための手段） 本発明の方法は、分析下の粒子から少なくとも１種類の
光ＩｇＩ連信号を得るための機器を用Ｉｗ禽こめにこの
ような機器を検定する方法であり、分析したい粒子に関
連した１個以上の既知特性を持つ検定粒子に入射光ビー
ムをあてることからなる。検定粒子からの光信号および
ノイズ信号の両方を検出する。好ましくは、検定混合物
中の蛍光粒子のような一方の型の粒子から光信号を検出
し、検定混合物中の非蛍光粒子のようなもう一方の型の
粒子からノイズ信号を検出する。検出された光信号とノ
イズ信号との比率を測定し、この比率を記録する。その
測定比率を機器の性能限界の閾値を表わす先に決定され
た比率（以下、先決比率とよぶ）と比較する。もし先決
比率に到達しない場合、検定粒子を入射光ビーム中に入
れたまま機器操作を調整して、測定比率を先決比率に到
達または超過させ、それによって機器は検定され、その
後分析する粒子から光信号を得るように検定されること
を本方法は含む。 本発明のこの点の好適な実施君様では、フローサイトメ
トリー以外器の検定にその方法を用い、それは試験すべ
きｉｆｆ子に関連した既知特性を持つ検定粒子を液体流
水中で流して、各検定粒子を実質的に一時に１ｇづつ入
射光ビームを通過させることを含む、検定粒子に関連す
る光信号およびノイズ信号の両方を検出し、信号とノイ
ズとの比率を決定する。この比率は光信号とノイズ信号
との間の測定分離値として記録する。測定分離値を機器
の限界性能のためのｌ！Ｊ［を表わす先決の分離値と比
較する。もし先決の分離値に到達しない場合、機器の操
作を調整して、測定分離値を先決分順値に到達させて、
それによって機器は検定され、ひきつづき分析する粒子
からの光信号を得る。 本発明のもう一つの観点は、粒子の２色蛍光分析を実行
するための機器の検定に使用するための試薬キットであ
る。そのキットは第１波長で蛍光を発光できる検定粒子
を持つ第１容器からなる。 第２容器は第２波長で蛍光を発光できる検定粒子を含有
する。第３容器は実質的に蛍光を発光できない検定粒子
を持っている。このキットまたは試薬はフローサイトメ
トリー機器を検定するための上述の方法に使用するのに
適している。 本発明の更にもう一つの観点は蛍光分析機器を検定する
ための粒子標準品に関するもので、該標準品は特定の蛍
光団と反応するまでは、自動蛍光を含めていかなる蛍光
も発光しない四酸化オスミウム固定ニワトリ赤血球から
なる。 本発明の原理によると、検定方法および物質は現行の既
知の使用されている検定技法へのかなりの改善法を提供
する９本発明は、検定ＷＡ準品および／または先に決定
されて測定者が保有している閾値を使って粒子分析ｉ器
を測定者が検定することを可能にする。好ましくは、機
器の限界性能を明示するための閾値は、検定標的がわか
るように検定手順巾測定者に表示される。閾値が達成さ
れるまで機器を調整およびチューニングすることによっ
て、測定者は機器が実施される試験に正しく機能するこ
とを確実にする。検定の怒および視覚に依存する技法は
、本発明の検定手順によって不要とされ、検定誤差は軽
減または除去され、試験の再現性は高められる０本発明
の検定手順は、適正な検定が機器の光学系統の適正な配
）；１を確実にし、補正技法の実施によってスペクトル
の混合を補償し、そして特に粒子の免疫蛍光分析のため
の機器の性能を最適にするために、機器の感度について
測定行に情報を提供するので、フローサイトメトリー機
器に特に適している０本発明の１１１点や特色はフロー
サイトメトリー以外にも及び、自動′Ｘ１＠鏡、蛍光ｉ
ｍ鏡、定量顕微鏡、画像分析機などのような他の分析機
器にも利用できることを指摘すべきである。
０粒子、特に生物学的粒子または細胞の特性は分析中ま
たは粒子が流水中を移動したり懸濁液中を運ばれる間粒
子が比較的安定したままである技法で決定され得る。フ
ローサイトメーター（流動細胞計測Ｉｆｆ）は知られて
おり、動いている粒子の特性を分析したり検出するのに
役立つ、典型的なフローサイトメトリー機器では、細胞
や他の生物学的粒子は液体流水中を流され、各粒子を、
好適なのは一時に、受容部位を通過させ、粒子の物理的
または化学的特性を測定する０種々の信号は電気的、音
響的および放射性を含む粒子の種々の特性に関連して検
出され１：′ｆるが、フローサイトメーターは通常機器
を通過する粒子の分析には光学的信号による。多くの場
合、分析機器を静的または動的な状態のいずれかで粒子
の分析に使用するとしても、機器の使用を準備するのに
予備的なセットアツプ工程を通常必要とする。細胞また
は他の生物学的粒子が極めて小さくてその粒子に関して
検出される信号がしばしば低い場合、分析を行なう前に
、試験結果の信頼性を確実にするために機器の適当な検
定を行なうのが望ましい。 （従来技術） 生物学的粒子または細胞分析に有用な機器を検定するた
めの現行の技法は測定者の技術に強く依存する。換言す
ると、検定手順中に対照を調整し、適当な閾値を決定し
、実施される特定の試験毎に何種もの標準を保持するた
めに検定者の判断および経験が必要である。実際に経験
を績んだ測定者は、使用前に機器を非常にうまく検定で
きるとはいえ、適当な検定を達成したと感するにはこの
ような測定者は多くの感および熟考を強いられる。 例えば、フローサイトメーターのような機器の種々の光
学的要素を配列する場合、検定する人間は典型的には画
面またはＣＲＴを見て、種々の対照の調整とともに視覚
による判断によって機器が検定されたことを判断する。 もちろん典型的な視覚による検定技法を実行するときに
は、試験結果の再現性に妥協があり得る。 フローサイトメーターおよび他の生物学的粒子分析機器
は通常実際の分析を受けようとする粒子や細胞の型に似
た粒子で検定する。従って検定粒子は大きさ、容積、表
面特性、粒状性、色調の特徴（細胞着色剤、染料、免疫
蛍光標識など）のような調べる粒子に似た特性を持つよ
うに選択されるべきである。フローサイトメトリー機器
の過去および現行の検定手順は検定段階にニワトリ赤血
球細胞の利用を含む、ニワトリ赤血球細胞は検定手順の
いくつかの点では信顆できるけれど、やはりいくつかの
光関連特性におけるスペクトル不足のため完全に満足と
いう訳ではない、検定目的のための生物学的試料に加え
て、微細球状ビーズが細胞分析機器の検定に役立ってい
る。ｒＩＡえば米国特許第４，３３１．８６２号には粒
子計測機器の検定にラテックス物質からできたビーズの
使用が記述されている。フローサイトメトリー機器の検
定に特に使用される検定用ビーズは、フローサイトメト
リースタンダーヅコーボレイション（Ｆ ｌｏｗ Ｃｙ
ｔｏｍｅｔｒｙＳＬａｎｄａｒｄｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ）、リサーチトライアングルパーク（Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ）、ノースカロラ
イナから購入できる。 （発明が解決しようとする問題点） たとえ検定用ビーズの有効性が粒子分析機器の検定技法
を改善したとしても、また機器が適当に検定されたか否
かを決めるのに測定者の感がかなり必要である。従って
再現性ある試験結果を提供するだけでなく、現在利用さ
れている検定技法に伴なう熟考および恣による推旦を除
去する検定手順を確立する必要および要請が未だにある
。本発明が目指すのはこのような改善の実現に対するも
のである。 （問題点を解決するための手段） 本発明の方法は、分析下の粒子から少なくとも１種類の
光ＩｇＩ連信号を得るための機器を用Ｉｗ禽こめにこの
ような機器を検定する方法であり、分析したい粒子に関
連した１個以上の既知特性を持つ検定粒子に入射光ビー
ムをあてることからなる。検定粒子からの光信号および
ノイズ信号の両方を検出する。好ましくは、検定混合物
中の蛍光粒子のような一方の型の粒子から光信号を検出
し、検定混合物中の非蛍光粒子のようなもう一方の型の
粒子からノイズ信号を検出する。検出された光信号とノ
イズ信号との比率を測定し、この比率を記録する。その
測定比率を機器の性能限界の閾値を表わす先に決定され
た比率（以下、先決比率とよぶ）と比較する。もし先決
比率に到達しない場合、検定粒子を入射光ビーム中に入
れたまま機器操作を調整して、測定比率を先決比率に到
達または超過させ、それによって機器は検定され、その
後分析する粒子から光信号を得るように検定されること
を本方法は含む。 本発明のこの点の好適な実施君様では、フローサイトメ
トリー以外器の検定にその方法を用い、それは試験すべ
きｉｆｆ子に関連した既知特性を持つ検定粒子を液体流
水中で流して、各検定粒子を実質的に一時に１ｇづつ入
射光ビームを通過させることを含む、検定粒子に関連す
る光信号およびノイズ信号の両方を検出し、信号とノイ
ズとの比率を決定する。この比率は光信号とノイズ信号
との間の測定分離値として記録する。測定分離値を機器
の限界性能のためのｌ！Ｊ［を表わす先決の分離値と比
較する。もし先決の分離値に到達しない場合、機器の操
作を調整して、測定分離値を先決分順値に到達させて、
それによって機器は検定され、ひきつづき分析する粒子
からの光信号を得る。 本発明のもう一つの観点は、粒子の２色蛍光分析を実行
するための機器の検定に使用するための試薬キットであ
る。そのキットは第１波長で蛍光を発光できる検定粒子
を持つ第１容器からなる。 第２容器は第２波長で蛍光を発光できる検定粒子を含有
する。第３容器は実質的に蛍光を発光できない検定粒子
を持っている。このキットまたは試薬はフローサイトメ
トリー機器を検定するための上述の方法に使用するのに
適している。 本発明の更にもう一つの観点は蛍光分析機器を検定する
ための粒子標準品に関するもので、該標準品は特定の蛍
光団と反応するまでは、自動蛍光を含めていかなる蛍光
も発光しない四酸化オスミウム固定ニワトリ赤血球から
なる。 本発明の原理によると、検定方法および物質は現行の既
知の使用されている検定技法へのかなりの改善法を提供
する９本発明は、検定ＷＡ準品および／または先に決定
されて測定者が保有している閾値を使って粒子分析ｉ器
を測定者が検定することを可能にする。好ましくは、機
器の限界性能を明示するための閾値は、検定標的がわか
るように検定手順巾測定者に表示される。閾値が達成さ
れるまで機器を調整およびチューニングすることによっ
て、測定者は機器が実施される試験に正しく機能するこ
とを確実にする。検定の怒および視覚に依存する技法は
、本発明の検定手順によって不要とされ、検定誤差は軽
減または除去され、試験の再現性は高められる０本発明
の検定手順は、適正な検定が機器の光学系統の適正な配
）；１を確実にし、補正技法の実施によってスペクトル
の混合を補償し、そして特に粒子の免疫蛍光分析のため
の機器の性能を最適にするために、機器の感度について
測定行に情報を提供するので、フローサイトメトリー機
器に特に適している０本発明の１１１点や特色はフロー
サイトメトリー以外にも及び、自動′Ｘ１＠鏡、蛍光ｉ
ｍ鏡、定量顕微鏡、画像分析機などのような他の分析機
器にも利用できることを指摘すべきである。
第１図（ａ）から第１図＜ｃｌ）はそれぞれ容積、側面
散乱、蛍光色１および蛍光色２のｔ１種類のパラメータ
ーのチャンネルに対する事ＰＡ数（カウント）を例示す
るヒストグラムのグラフ表示である；第１図にはさらに
容積がノイズ事例や平均チャンネル統計に関連した結果
であって、側面散乱、蛍光色１および蛍光色２の平均チ
ャンネル目盛りには信号、ノイズ、分離および最小値を
も例示する。 第２図（、）は２色蛍光分析（Ｐ Ｌ ２対ＦＬＩ）の
点分布グラフ表示であり、第２図（ｂ）は蛍光分析に対
する四面散乱の点分布グラフ表示である；第２図は機器
配列目的へのチャンネル平均をも表示する。 第３［２１（ａ）は２色蛍光分析（Ｆ Ｌ ２対ＦＬＬ
）の点分布グラフ表示であり、第３図（ｂ）は容積分析
に対する側面散乱の点分布グラフ表示である；第３［３
は更に機器の光電子増倍管による蛍光色１（ＦＬｌ）、
蛍光色２（ＦＬ２）および側面散乱（ＳＳＣ）の分布の
チャンネル平均を表示する。 第４図（、）は未補正蛍光分析を例示する２色蛍光分１
（ＰＬ２対ＦＬＬ＞の点分布グラフ表示である；第４図
（ａ）は蛍光色１で着色されていない分布と着色された
分布との間の平均チャンネルの差異をも表示する。第４
１２Ｉ（ｂ）は補正された蛍光分析を例示する２色蛍光
分析（Ｆ Ｌ ２対ＦＬＬ）の点分布グラフ表示である
；第４図（ｂ）は補正をした後、未着色分布と蛍光色２
分布（ＦＬ２）との間のヱー均チャンネル差異ｆ！：＃
Ｊ表示する。 本発明は多種類の形態における実施態様によって満足さ
れるが、本明細書には発明の好適な実施態様ｆ！：図面
を引用して訂細に記述する０本明細書中の例は発明の原
理の典型と考えるべきであり、例示された実施態様に発
明を限定するつもりでないことは言うまでもない０発明
の範囲は特許請求の範囲およびそれらの均等範囲によっ
て判断される。 図面を直接参照する前に、以下に図面と共に記述される
検定技法は、フローサイトメトリー機器に関連している
ものである。特に記述されている典型的な検定手順は、
ベクトンディッキンソンイムノサイトメトリーシステム
社（Ｂ ｅ：ｔｏｎＤ １ｃｋｉｎｓｏｎ Ｉ ｗ＋ｍ
ｕｎｏｃｙｔｏ＋ａｅｔｒｙ Ｓ ｙｓＬｅｍｓ）、マ
ウンテンビュー（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖ ｉｅｗ）、カ
リホルニアによって市販されているＦＡＣ３ＴＭ 分析
器に関連している。第１図のヒストグラムおよび第２〜
４図の点分布表示は検定操作中にＦＡＣＳ分析器のスク
リーンに見られる典型的な表示である０本発明の原理に
従って検定操作を実施するための適当なソフトウェアは
種々の検定操作や機能を容易にするためにフローサイト
メトリー機器に供給され得る。 簡単に言えば、検定されるべきフローサイトメトリー機
２）は、分析される粒子の液体流水を提供するためのノ
ズルまたは類似装置を含む。典型的には、粒子の液体流
水は鞘液で覆うことによって、流体力学的に収束させて
、粒子流液の流れに正しい角度で通常照射される入射光
ビームを通って流すことができるようにする。これらの
粒子が光と一ノ、を通過する時、各粒子に伴なう光特性
を検出し得る。それ故、蛍光を測定するための光検出器
１個以上および１以上の方向における光散乱の吸収を測
定するための光検出器などが含まれ得る。 これらの光検出器は光信号を電気信号に変換する光電子
増倍管（ＰＵＴ）を含む５粒子に伴なう光の検出に加え
て、粒子が穴（オリフィス）を通過するときに、電気的
インピーダンス測定が行なわれ得る。このインピーダン
ス測定は、粒子容積に関連し、よく知られたコールタ−
（ＣｏｕｌＬｅｒ）の原理に基づいている。ＦＡＣ３分
ｔＲＲでは、以下に記述されるようにして検定されるが
、蛍光と光散乱（この場合は入射光ビームに対して粒子
から大体９０゜への散乱を測定する側面散乱）の２種類
の色を検出するためのＰＭＴが備えられている。ＦＡＣ
３分析機は更に、粒子容積に伴なう電気的インピーダン
スの測定をも可能にする。従って粒子の４種類のパラメ
ーターまたは特性を検出または測定できるが、それらの
全てのパラメーターは、試料中の粒子のこれらの特性の
測定においてこのｔＲ３を用いる何に検定しなければな
らない、 本発明の検定技法は、機器性能下限の閾値に
基づいて検定されることをその８１器の測定者に知らせ
る。この最小閾値から、粒子分析、特に免疫蛍光測定を
行なうための機器の感度がわかる０例えば四面散乱およ
び容積に加えて、記述されている特定のフローサイトメ
トリーＩｌｌ 器は２種類の色の蛍光、すなわち全体で
４種属のパラメーターの検出ができろ。 説明の都： −ｉ ４１ｈ ＴＶ！的な用途を例にして
述べれば、分析される粒子の第１の蛍光色は、ＦＩＴＣ
Ｍ色４（１１胞て代にされるフルオレセインで１９２さ
れた粒子に関連した緑色スペクトル領域であり９分析さ
れろ粒子の第２の蛍光色は、ＰＥ着色細胞で代表される
フィコエリスリン標識粒子に関連した赤色スペクトル領
域であろう、もちろん、望むならば、行なう試験および
分析される粒子または細胞によって池の蛍光団や標識剤
を用いることもできる。 測定ｔが、例えばその日の始めに、処方された試験用の
準幅のために機器のスイッチを入れる時、機器の光字要
素は配列されていないかも知れない。 もし実施される試験が白血球メｆ’ｌのような免疫系の
粒子を検査するためのデータ獲得に関連する場合、測定
者はｌＲ８がこれらの試験を行なうのに適当な感度に検
定されているがどうかの確認を望むであろう０機器の感
度性能およびそれによって供給される結果を第１図に示
す、第１［ｉｌの詳細を記ｊ１するにあたり、この感度
試験はｌｉｔに機器が白血球や他の免疫系細胞や粒子の
ようなある型の粒子を分析するのに適切に検定できるか
どうかを決めるための確認試験であることは言うまでも
ない。 もし感度試験の結果がＶ％器の最小性能のための閾値が
満足されたときは、ｖｉ器は適切に検定されたことを意
味し、その後機器を粒子分析に用いるのにＩＲ器を更に
調整したり、配列したり、チューニングする必要はない
、しかし信頼性のある測定のためには、通常さらにいく
らかの調整をして機器を検定する必要があるので、第１
図の表示に関して感度を決定する前に、測定者は以下の
第２−４図に関して説明される調整および検定工程を保
証することを希望するかも知れない。以下の説明におい
て、感度の決定およびそれを達成する方法をまず第１図
の表示をもとに記述する。 本手順を始めるには、測定者は本発明の検定粒子を使用
する。各容器に好ましくは異なったプラスチック微細球
形またはビーズを有する３個の容器を含む試薬キットが
供給される。好適な形としては、これらの種々のビーズ
はゼラチン、０．１％ツイーン２０および防腐剤として
０．１％アジ化ナトリウムを含むリンＩＩ ｉＩ 街液
（ＰＢＳ）に保持する。 約５ミクロンの直径のフルオレセイン標ａ（Ｆ ＩＴＣ
）ビーズを第１容器に用意する。約５ミクロンの直径の
フィコエリスリン標識（ＰＥ）ビーズを第２容器に用意
する。約４．５ミクロンの直径の非標本ビーズを第３容
器に含める。その３個の容器の各々のビーズの濃度は約
１０６粒子／ｍｌである。 滅菌ｒ’Ｂｓ３ｚ／にＦＩＴＣ，ＰＥおよび非標話ビー
ズの３種類の試薬を１滴ずつ添加して１ 該 該の比率
に混合して試料管をｆｊｔＪする。混合物の入ったこの
試料管を次にＦＡＣ３分析機に入れて、実質的に一時に
１個の粒子を入射光ビームに通過させる既知の方法で測
定する。 容積、光散乱および２種類の蛍光決定因子に関する信号
の検出に加えて、各パラメーターへのノイズ信号もその
機器で検出される。第１図はヒストグラムの型式で与え
られる４つのパラメーターの機器画面への表示を表わす
、ヒストグラｌ、のＹ軸は粒子カウント数であり、Ｘ軸
はデータ獲得を行なう間の電気的チャンネル数である。 記述されている実施態様では、種々のヒストグラムのＸ
軸に沿って２５５チヤンネルが存在する。ヒストグラム
は対数目盛りの相関で記録または表示することにより、
ノイズと信号との間のヒストグラムピークの分離を一定
の差異として視認できるが、実際には直線的比率として
表わされるのが好ましい。 より詳しくは、光関連信号は側面散乱、ＦＩＴＣおよび
ＰＥに関してそれぞれ第１図（ｂ） 、 （ｃ）および
（ｄ）に示されている。まず第１図（ｂ）を見ると、側
面散乱信号は曲線１２で示され、ノイズは領域１４で示
される。同様に第１図（ｃ）ではＦＩＴＣ信号は曲線１
６で示され、ノイズは領域１８で示される。 第１図（ｄ）ではＰＥ信号は曲線２０で示され、ノイズ
は領域２２内に示される。第１図（ａ）に示される容積
に関しては、容積信号は曲線２４で示され、ノイズ検出
はノイズ事例数としてヒストグラムの下に示される。 散乱および蛍光の光関連信号、すなわち第１図（ｂ）、
（ｃ）および（ｄ）に関して、実際の光信号とノイズ信
号との間に分離または差異があることがわかる。上述の
ように、信号とノイズとの間の分離は対数目盛で計算す
るのが好ましいが、信号のノイズへの比率はヒストグラ
ムのＸ軸に直線的差異として表わされる。それ故、ヒス
トグラムを見る時に、散乱、ＦＩＴＣおよびＰＥに関し
て信号とノイズのピークの間の間隔や分間を容易に認謂
できる。 蛍光分析についての第１図（ｃ）および（ｄ）のヒスト
グラムでは、実際に測定されているものは前述の試薬に
よって与えられるような非標識ビーズに比較した標識ビ
ーズの平均蛍光強度間の分；量である。それ故、第１図
（ｅ）では曲線１６はＦＩＴＣで標識されたビーズの平
均蛍光強度を表わし、曲線１８は検定目的に使用された
試薬混合物中の非標識ビーズの結果として生じるノイズ
強度を表わす。 同様に第１［］（ｄ）では曲線２０はＰＥで標識された
ビーズの平均蛍光強度を表わし、曲線２２は検定のため
にコ１ｃ薬混合物によって与えられる非標識ビーズから
のノイズの平均強度を表わす。このように、ＦＩＴＣ５
議ビーズ、ＰＥ標識ビーズおよび非標識ビーズの等しい
割合の単一の試藁混き物を与えることによって、２色蛍
光分析への機器の検定は容易に達成され得る。 第１図（１］）で表わされるような側面散乱信号に関し
ては、ノイズが実際に検出されて、ノイズと信号との間
の分χ値を測定し得る。第１図（ｂ）の領域１４で表わ
されるノイズは蛍光信号で生ずるような非標識細胞によ
るものではないのでこれが必要である。この図では、側
面散乱（ＳＳＣ）ノイズは関連のない信号で誘発され、
ノイズのための対照信号を生ずる。従って、対！ｑ信号
を生じさせるために、ＦＬ２信号が任意に遊択されてい
る。フローサイトメトリー機器でＦＬ２基準を調整して
、機器を通るｌＪ例速度（または粒子の流速）を容積、
ＦＬＩおよびＰＬ２に関するデータを得るときの事例速
度の約２倍にすることによって、ノイズを側面散乱信号
に導入する。この手段によってノイズが側面散乱信号中
に生じて、ノイズと散乱信号との間に直線化された分離
量が決定され得る。 ヒストグラム型式で好ましく与えられるグラフ表示に加
えて、検定される機器の画面にはデジタル読み出しの型
式で結果を表示するようにプログラムすることもできる
。検定手順を含めて、機器のためのソフトウェアは蓄積
されたデータに関する情報を供給するように容易にプロ
グラムすることができる。それ故第１図ではヒストグラ
ムの下に、ノイズ事例および平均チャンネル信号が測定
者によって読めるように容積結果がデジタル読み出し型
式で記録されている。ＦＡＣ３分析機のような機器の検
定では、８頂平均チャンネルは容積ヒストグラムのほぼ
真中の目盛のはずである。真中の目盛を読むということ
は粒子が流れるオリフィスが正しく選択され、機器の容
積基準が適切に設定されていることを示す、５００以下
のノイズ＄例レベルは機器が適切に設定されていること
を忍昧する。 第１図の画面には第１図（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）の
各ヒストグラムに関連したデジタル読み取り値も表示す
る。ＳＳＣ，ＦＬＩおよびＰＬ２の種々のパラメーター
を信号、ノイズ、分離、最小およびロットＩＤの読み取
りと共に表示する。ロットＩＤおよび最小値は相互に関
連している０機器に検定用ビーズの混合物を入れる前に
、測定者は検定手順を規定するプログラムにロフトＩＤ
番号を入力する。検定用ビーズは種々の蛍光光度、強度
などを含む変「ヒしやすい性質を持つので、機器の検定
はこれらの変化しやすい性質を考慮に入れねばならない
、従ってどのロフトＩＤ番号の検定用ビーズを用いるか
に依存して、種々の分ｇｉｌｉａが最小機器性能のため
の最小または閾値として予め確立されている。ソフトウ
ェアを前もってプログラノ、し得るので、ロットＩＤ番
号を検定手順の最初に測定者がプログラムに入れさえす
れば先決の最小分離値が確立されて第１図のディスプレ
ーに表示される。 第１図（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のそれぞれのヒスト
グラムに関連した側面散乱、ＦＬＩおよびＦＬ２の信号
およびノイズに対する平均中央チャンネル値が第１［Ｋ
の底部に表示されている０例えば、側面散乱信号は１９
２の平均チャンネル中央値を持つことが表示され、これ
に対してノイズの平均チャンネル中央値は１６である。 これらの信号およびノイズ結果の間の分離は１７６と記
録される。側面散乱信号のために先に決定された最小分
Ｍ値は１６０である。この最小側面散乱分離値は、機器
が側面散乱測定を確実に行なうために十分検定するため
の目標の水準である。それ故、実際に測定された分離は
１７８であるので最小を越えている。従ってその８！器
は側面散乱を検出信号とするその後の粒子試験を検定で
きるとみなされる。 信号、ノイズおよび分離の平均チャンネル中央値のデジ
タル表示はＦＬＩおよびＰＬ２信号についても提供され
る。第１図の例に示されるように、ＦＬＩおよびＦＬ２
の両方の分層値は最小分離値を越えているので、機器が
これら２種類の信号についても適切に検定されているこ
とを測定者は容易に判断できる。上述の検定手順のソフ
トウェアは、対数目盛で信号とノイズとの比率を検定す
るが、画面上ではピークが相互に離れ、それ故解釈する
のに便利なように間隔をあける直線性（雷数）ｆ−基に
して比率を表示する。散乱や蛍光の光関連代号の多くま
たは全てが先に決められた最小以下の分層値と測定され
た場きには、適切な検定のために更に機器を調整しなけ
ればならない。第２゜３および４図は機器性能を最適に
するように光学的要素を配列するためにこの検定調整を
実施し、ＰＭ”ｌｌ整を行ない、粒子の２色蛍光分析に
おけるスペクトルの混合や重複を補正する際のＦＡＣ８
ＡＣ８分析機表示を例示する。 光学的要素を最適な性能のために適切に配列されたこと
を確実にするために機器ｔｒＡ１１するには、上述の試
薬キットの第１容器からＦＩＴＣ１’Ｉｎビーズを用い
て検定を実施することができる。滅菌ＰＢＳ１ａＺにＦ
ＩＴＣビーズ試薬を１滴加えてＦＩＴＣ！識ビーズ懸濁
液の試験管を用意する９次喀 にこの試験管をＦＡＣ３分析機に屏着して、検定用ソフ
トウェアと組合せると画面に第２図に示されるような点
分布図が表示される。第２図（ａ）はＦＬ２対ＦＬＬを
示し、第２図（ｂ）は側面散乱（ＳＳＣ）対ＦＬＩを示
す０点分布図の下にはＦＬＩ。 ＰＬ２およびＳＳＣの信号のチャンネル平均に関するデ
ジタル情報が表示されている。まず第２図（ａ）に関し
ては言及すれば、緑色（ＦＩＴＣ）ビーズの点分布が表
示の中央付近に位置すると、検定が達成される０点分布
がこの位置に移動するようして述べれば、測定者はこれ
らの信号を最大にすることによって検定を確かなものに
する。集光レンズ制御のような機器の光字的要素をこれ
らの信号の平均が最大になるように：Ａ整し、しがも、
これらがほぼ同時に最大になるようにすべきである。 最大付近になると、第２図（ａ）に表示される点分布は
測定者によってできるだけ隙間のないようにされる。第
２図（ｂ）および点分布図の下に示されるＳＳＣ信号平
均に関して述べれば、通常前もって決められた目標値が
検定のための目標である。 例えば、ＦＡＣ３分析機では、ＳＳＣ信号チャンネル平
均の目標は約１９０である。この目標値を達成するため
、ＳＳＣ信号平均が約１９０にり１１達するまで、測定
者はＭ％２：の側面散乱（ＳＳＣ）ＰＭＴ電圧を調整す
る。光学的要素またはＰＭＴのその他の：Ａ整もＳＳＣ
信号平均を目標水準に到達させるのに必要でありうる６
点分布およびデジタル読み取り数の両者は、測定者が適
当な光学的配列に機器を検定する手助けをする。 光字的配列と同様にして、光電子増信管（ＰＭＴ）も検
定手順中に調整されうる。第３図はＰＭＴ該１整に関連
した典型的な点分布図を示す、第３図（ａ）はＦＬ２対
ＦＬＩの点分布図であり、第３図（ｂ）は側面散乱（Ｓ
ＳＣ）対容積の点分布図である。ＰＭＴ：Ｉ！ＩＭｉを
行なうべきかどうかの決定には、測定音は上述とは異な
る検定粒子を用いて手順を行なう、このＰ Ｍ Ｔ ′
Ａ整の場合、測定者は滅菌ＰＢ３１ｉＮに上述の試不キ
ットの非標識ビーズ容器から１滴の非Ｆ！２ビーズを添
加して、非５識ビーズ懸濁液を用意する０次にこの非標
議ビーズの試験管をＦＡＣＳ分析機に装着し、検定用ソ
フトウェアと組合せると、画面に第３図に示されるよう
な点分布図が表示される９点分布図に加えて、第３図は
ＦＬＩ、ＰＥ２およびＳＳＣの３種類のパラメーターの
分布のチャンネル中央平均値を表わす３つの数字も表示
される。検定粒子をコントロールされた一定の速度でｖ
ｉ器中に流しながら、測定者はＦＬＩ平均、ＰＥ２平均
およびＳＳＣ平均の幀を前もって決めた目標値に合せる
。ＦＬＩおよびＦＬ２平均の両方に、前もって決められ
た目標は例えば３０付近に設定され、もしその値が達成
されない場合、測定者は画面に表示されるＦＬＩまたは
ＰＥ２のチャンネル平均ができるだけ３０近くに設定さ
れるまで機器の各蛍光１または蛍光２のＰ Ｍ Ｔ電圧
調整をする。同様にして、ＳＳＣ平均の目標を例えば１
９０に設定する。もしこの水準が最初に表示されない場
合、測定者は画面に表示されるＳＳＣのチャンネル平均
ができるだけ１９０近くに設定されるまで機器の光散乱
のＰＭＴ電圧調竺をする。もちろん、これらの平均値は
典型的な１コ標値を意味するものであって、Ｒ器設計、
実施する試験やその池の要素によって変化し得ることは
言うまでもない、もしチャンオ・小平均の満足な値を達
成できない場合、測定者は第２Ｉ２Ｉに関連して記載し
た機器の配列手順に戻らねばならない。 ＰＭＴをＸＩ！ｌ整して機器の光学的要素の配列を行な
った後、機器の検定を達成するにはもう一つの３１を行
なう、この追加された調整は、２色蛍光分析を行なう場
合におけるスペクトルの混合や重複の補正に関連する。 この手順は望ましくない緑色信号を赤色（ＰＥ着色）集
団から除去し、望ましくない赤色信号を緑色（ＦＩＴＣ
着色）集団から除去して、蛍光補正のための７Ａ塾を果
す。 蛍光補正手順を行なうには、上述の感度試験に関してｆ
ｊ成したものと同様の検定粒子の試験管で始めるのが好
ましい、この試験管は滅菌ＰＢＳ３ＩＩｌに上述容器か
らＦＩＴＣ，ＰＥおよび非標識ビーズの各々１滴ずつを
添加することによりその３種類の試薬の１ ：ｌ 該混
合物として用意される。 この試験管が分析機器に装着されると、検定手順用のソ
フトウェアプログラムと組合わされて、画面は第４図（
＆）に見られるような非補正蛍光を表わす点分布図を即
時に表示する。第４図（ａ）に表示された３つの分離し
た点の集団は非着色、緑色着色および赤色着色検定ビー
ズを表わす、非着色ビーズはスクリーン上で領域２８と
して例示される左下部角の正方形の内側に位置するのが
典型である。赤色（ＰＥ着色）ビーズは領域３０として
示される非着色集団の上方部位に位置するのが典型であ
る。緑色集団は領域３２として示される非着色集団の右
側部位に位置する。蛍光補正が機器によって与えられる
まで、領域２８．３０および３２の位置は近似だけであ
る。第４図（ａ）の点分布図の下にはＦして変動しない
場き、蛍光補正のためのＦｌ整を行なわねばならない。 画面に記録される補正値ができるだけ零に近づくまで、
機器のＦＬＩ補正およびＰＥ２補正を調整することによ
って、２色蛍光分析のための補正をする。ｙＪｆｉを行
った後、補正値は零の上方と下で等しく変動及び変化す
るはずである。ＦＬＩ補正に関して、補正された値は非
着色集団の下向横軸チャンネルと緑色着色集団の平均横
軸チャンネルとの間の差を表わす。ＦＬ１補正調節を機
コニで′Ａ岱して画面上の値が零に近ずくと、点分布図
の緑色集団３２は第４１図（ｂ）で見られるように、水
平軸に平行な水平軸について非着色集団２８と等しくな
るまで下方向に移動するはずである。 同様の方法で、画面上のＦＬ２補正の次に記載されてい
る平均チャンネル差異は、非着色と赤色着色集団の平均
垂直チャンネルの相異を表わす。 ＰＬ２補正調節を機器で調整して画面上の値が零に近す
いた時、点分布図の赤色集団３０は第４図（１，）に示
されるように垂直軸に平行な垂直軸について非着色集団
２８と等しくなるまで垂直に移動するはずである。ＦＬ
ＩおよびＰＥ２：Ｉ！Ｉ節のこれらの調整は、赤色集団
から不要な緑色信号の集団を電気的に差し引くこと、お
よび緑色集団から不要の赤色信号の集団を電気的に差し
引くことによって蛍光補正を達成する。コンピューター
プログラムによって零に設定された画面上の蛍光補正の
前もって決められた鎖が満たされると補正は達成される
。 もし満足なまたは目標の設定を達成できない場合、１１
１１定者は上で失明されたような配列およびＰＭＴ：Ｉ
！１整手順に戻る必要がある。 配列、ＰＭＴ：Ａｆｆｉおよび蛍光補正が達成されると
、測定者は第１図に基づいて上述した感度試験に戻る。 もし検定される各パラメーターについて最小分離値を達
成すれば、測定者は実施せんとする試験が適切に検定さ
れているという十分な信頼を持ってそのｎ器の使用に移
ることができる。 ここに記述された検定手順に利用される検定粒子に関し
ては、標準品として種々の粒子が使用し得る０例えば分
析を受ける実際の粒子と同様の特性を持つか、または持
つように処理され得る粒子または細胞のような生物学的
試料を用いることができる。この方針に沿うと、ニワト
リ赤血球は適切な選択技法で使用され得る。ニワトり赤
血球細胞を修飾した形態の粒子は粒子標準品として使用
され得る。特に蛍光で標識した四酸化オスミウム固定ニ
ワトリ赤血球細胞は、生物学的細胞と同様の大きさの散
乱特性を持つので、粒子標準品として役立つ、更に四酸
化オスミウム固定化はｆ（ｉｔ １１２１の自己蛍光を
消す、これらの細胞をビオチン化して、既知の方法でア
ビジンに結合された蛍光団と反応させる。細胞に結合し
たアビジン複合体の蛍光は細胞上の四酸化オスミウムに
よって消されることはない、アビジンに結合される特定
の蛍光団は細胞表面着色に特色をもつスペクトル性を持
つ、多種類の蛍光団が下記のものを含めて複合体に使用
し得る。 本発明の検定粒子として最も好適なものはプラスチック
微細球状ビーズである。このようなビーズは大体均一の
直径に仕上げて、蛍光団や他の色素ａ識剤が表面結合す
るための好適な表面特性を有し得る。実質的に球状のビ
ーズは０．５と２０ミクロンの間の直径（最も好ましく
は２と８ミクロンの間）を持つように作製して、これら
の検定用ビーズを白血球と同程度の大きさにする。ビー
ズは通常は充実体として作製されるがリボゾームや池の
微小担体のような中空や小胞にもできる。更にビーズは
本発明に従って作用するためには完全な球形である必要
はない、ポリスチレン、ポリアクリルアミドおよび池の
ラテックス物質がビーズの成形に使用することができ、
ポリビニルクロリド、ポリプロピレンなどのような他の
プラスチック物質も利用することができる。上述のビー
ズへのフルオレセインやフィコエリスリン原本の池に、
本発明用の蛍光Ｆ！２剤としてアロフィコシアニン、テ
キサスレッド、ローダミン、ローダミン型化合物および
その他の蛍光着色剤も使用できる０機器の検定用のこれ
らの試薬のキットの作製では、標識あるいは非標諏のビ
ーズは１０’から１０”粒子／ｘｌ（好ましくは少なく
とも１０６粒子／ｘｌ）の範囲の濃度で存在するように
ビーズを水中分￥ＨＩ５として供給するのが好ましい。 検定手順をフローサイトメトリー機器を具体的な例とし
て上述したが、本発明はこれに限定されるものではない
、実際、本発明の検定手順は移動粒子のみならず非移動
粒子を分析する機器にも適用できる。百億分析機ととも
に蛍光、自動および定量顕微鏡のような種々の顕微鏡も
本発明に従って検定することができる。 従って、本発明は分析中の粒子から少なくとも１種類の
光関連信号を得るための機器を、使用する前に検定する
ための方法および物質を提供する。 本発明は適当なソフトウェアを使用して、機器で特定の
光関連パラメーターを検定することを決定するために満
たさねばならない信号のノイズへの比率の最小値を表示
することができる。直線性目盛での差異としての信号の
ノイズへの比率を記録することによって、測定者に便利
になるばかりでなく当て推量、目分量への依存や誤差が
実質的に減少または排除される０本発明の技法および物
質は臨床詮所的応用にもすばらしい確実性を与える。
散乱、蛍光色１および蛍光色２のｔ１種類のパラメータ
ーのチャンネルに対する事ＰＡ数（カウント）を例示す
るヒストグラムのグラフ表示である；第１図にはさらに
容積がノイズ事例や平均チャンネル統計に関連した結果
であって、側面散乱、蛍光色１および蛍光色２の平均チ
ャンネル目盛りには信号、ノイズ、分離および最小値を
も例示する。 第２図（、）は２色蛍光分析（Ｐ Ｌ ２対ＦＬＩ）の
点分布グラフ表示であり、第２図（ｂ）は蛍光分析に対
する四面散乱の点分布グラフ表示である；第２図は機器
配列目的へのチャンネル平均をも表示する。 第３［２１（ａ）は２色蛍光分析（Ｆ Ｌ ２対ＦＬＬ
）の点分布グラフ表示であり、第３図（ｂ）は容積分析
に対する側面散乱の点分布グラフ表示である；第３［３
は更に機器の光電子増倍管による蛍光色１（ＦＬｌ）、
蛍光色２（ＦＬ２）および側面散乱（ＳＳＣ）の分布の
チャンネル平均を表示する。 第４図（、）は未補正蛍光分析を例示する２色蛍光分１
（ＰＬ２対ＦＬＬ＞の点分布グラフ表示である；第４図
（ａ）は蛍光色１で着色されていない分布と着色された
分布との間の平均チャンネルの差異をも表示する。第４
１２Ｉ（ｂ）は補正された蛍光分析を例示する２色蛍光
分析（Ｆ Ｌ ２対ＦＬＬ）の点分布グラフ表示である
；第４図（ｂ）は補正をした後、未着色分布と蛍光色２
分布（ＦＬ２）との間のヱー均チャンネル差異ｆ！：＃
Ｊ表示する。 本発明は多種類の形態における実施態様によって満足さ
れるが、本明細書には発明の好適な実施態様ｆ！：図面
を引用して訂細に記述する０本明細書中の例は発明の原
理の典型と考えるべきであり、例示された実施態様に発
明を限定するつもりでないことは言うまでもない０発明
の範囲は特許請求の範囲およびそれらの均等範囲によっ
て判断される。 図面を直接参照する前に、以下に図面と共に記述される
検定技法は、フローサイトメトリー機器に関連している
ものである。特に記述されている典型的な検定手順は、
ベクトンディッキンソンイムノサイトメトリーシステム
社（Ｂ ｅ：ｔｏｎＤ １ｃｋｉｎｓｏｎ Ｉ ｗ＋ｍ
ｕｎｏｃｙｔｏ＋ａｅｔｒｙ Ｓ ｙｓＬｅｍｓ）、マ
ウンテンビュー（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖ ｉｅｗ）、カ
リホルニアによって市販されているＦＡＣ３ＴＭ 分析
器に関連している。第１図のヒストグラムおよび第２〜
４図の点分布表示は検定操作中にＦＡＣＳ分析器のスク
リーンに見られる典型的な表示である０本発明の原理に
従って検定操作を実施するための適当なソフトウェアは
種々の検定操作や機能を容易にするためにフローサイト
メトリー機器に供給され得る。 簡単に言えば、検定されるべきフローサイトメトリー機
２）は、分析される粒子の液体流水を提供するためのノ
ズルまたは類似装置を含む。典型的には、粒子の液体流
水は鞘液で覆うことによって、流体力学的に収束させて
、粒子流液の流れに正しい角度で通常照射される入射光
ビームを通って流すことができるようにする。これらの
粒子が光と一ノ、を通過する時、各粒子に伴なう光特性
を検出し得る。それ故、蛍光を測定するための光検出器
１個以上および１以上の方向における光散乱の吸収を測
定するための光検出器などが含まれ得る。 これらの光検出器は光信号を電気信号に変換する光電子
増倍管（ＰＵＴ）を含む５粒子に伴なう光の検出に加え
て、粒子が穴（オリフィス）を通過するときに、電気的
インピーダンス測定が行なわれ得る。このインピーダン
ス測定は、粒子容積に関連し、よく知られたコールタ−
（ＣｏｕｌＬｅｒ）の原理に基づいている。ＦＡＣ３分
ｔＲＲでは、以下に記述されるようにして検定されるが
、蛍光と光散乱（この場合は入射光ビームに対して粒子
から大体９０゜への散乱を測定する側面散乱）の２種類
の色を検出するためのＰＭＴが備えられている。ＦＡＣ
３分析機は更に、粒子容積に伴なう電気的インピーダン
スの測定をも可能にする。従って粒子の４種類のパラメ
ーターまたは特性を検出または測定できるが、それらの
全てのパラメーターは、試料中の粒子のこれらの特性の
測定においてこのｔＲ３を用いる何に検定しなければな
らない、 本発明の検定技法は、機器性能下限の閾値に
基づいて検定されることをその８１器の測定者に知らせ
る。この最小閾値から、粒子分析、特に免疫蛍光測定を
行なうための機器の感度がわかる０例えば四面散乱およ
び容積に加えて、記述されている特定のフローサイトメ
トリーＩｌｌ 器は２種類の色の蛍光、すなわち全体で
４種属のパラメーターの検出ができろ。 説明の都： −ｉ ４１ｈ ＴＶ！的な用途を例にして
述べれば、分析される粒子の第１の蛍光色は、ＦＩＴＣ
Ｍ色４（１１胞て代にされるフルオレセインで１９２さ
れた粒子に関連した緑色スペクトル領域であり９分析さ
れろ粒子の第２の蛍光色は、ＰＥ着色細胞で代表される
フィコエリスリン標識粒子に関連した赤色スペクトル領
域であろう、もちろん、望むならば、行なう試験および
分析される粒子または細胞によって池の蛍光団や標識剤
を用いることもできる。 測定ｔが、例えばその日の始めに、処方された試験用の
準幅のために機器のスイッチを入れる時、機器の光字要
素は配列されていないかも知れない。 もし実施される試験が白血球メｆ’ｌのような免疫系の
粒子を検査するためのデータ獲得に関連する場合、測定
者はｌＲ８がこれらの試験を行なうのに適当な感度に検
定されているがどうかの確認を望むであろう０機器の感
度性能およびそれによって供給される結果を第１図に示
す、第１［ｉｌの詳細を記ｊ１するにあたり、この感度
試験はｌｉｔに機器が白血球や他の免疫系細胞や粒子の
ようなある型の粒子を分析するのに適切に検定できるか
どうかを決めるための確認試験であることは言うまでも
ない。 もし感度試験の結果がＶ％器の最小性能のための閾値が
満足されたときは、ｖｉ器は適切に検定されたことを意
味し、その後機器を粒子分析に用いるのにＩＲ器を更に
調整したり、配列したり、チューニングする必要はない
、しかし信頼性のある測定のためには、通常さらにいく
らかの調整をして機器を検定する必要があるので、第１
図の表示に関して感度を決定する前に、測定者は以下の
第２−４図に関して説明される調整および検定工程を保
証することを希望するかも知れない。以下の説明におい
て、感度の決定およびそれを達成する方法をまず第１図
の表示をもとに記述する。 本手順を始めるには、測定者は本発明の検定粒子を使用
する。各容器に好ましくは異なったプラスチック微細球
形またはビーズを有する３個の容器を含む試薬キットが
供給される。好適な形としては、これらの種々のビーズ
はゼラチン、０．１％ツイーン２０および防腐剤として
０．１％アジ化ナトリウムを含むリンＩＩ ｉＩ 街液
（ＰＢＳ）に保持する。 約５ミクロンの直径のフルオレセイン標ａ（Ｆ ＩＴＣ
）ビーズを第１容器に用意する。約５ミクロンの直径の
フィコエリスリン標識（ＰＥ）ビーズを第２容器に用意
する。約４．５ミクロンの直径の非標本ビーズを第３容
器に含める。その３個の容器の各々のビーズの濃度は約
１０６粒子／ｍｌである。 滅菌ｒ’Ｂｓ３ｚ／にＦＩＴＣ，ＰＥおよび非標話ビー
ズの３種類の試薬を１滴ずつ添加して１ 該 該の比率
に混合して試料管をｆｊｔＪする。混合物の入ったこの
試料管を次にＦＡＣ３分析機に入れて、実質的に一時に
１個の粒子を入射光ビームに通過させる既知の方法で測
定する。 容積、光散乱および２種類の蛍光決定因子に関する信号
の検出に加えて、各パラメーターへのノイズ信号もその
機器で検出される。第１図はヒストグラムの型式で与え
られる４つのパラメーターの機器画面への表示を表わす
、ヒストグラｌ、のＹ軸は粒子カウント数であり、Ｘ軸
はデータ獲得を行なう間の電気的チャンネル数である。 記述されている実施態様では、種々のヒストグラムのＸ
軸に沿って２５５チヤンネルが存在する。ヒストグラム
は対数目盛りの相関で記録または表示することにより、
ノイズと信号との間のヒストグラムピークの分離を一定
の差異として視認できるが、実際には直線的比率として
表わされるのが好ましい。 より詳しくは、光関連信号は側面散乱、ＦＩＴＣおよび
ＰＥに関してそれぞれ第１図（ｂ） 、 （ｃ）および
（ｄ）に示されている。まず第１図（ｂ）を見ると、側
面散乱信号は曲線１２で示され、ノイズは領域１４で示
される。同様に第１図（ｃ）ではＦＩＴＣ信号は曲線１
６で示され、ノイズは領域１８で示される。 第１図（ｄ）ではＰＥ信号は曲線２０で示され、ノイズ
は領域２２内に示される。第１図（ａ）に示される容積
に関しては、容積信号は曲線２４で示され、ノイズ検出
はノイズ事例数としてヒストグラムの下に示される。 散乱および蛍光の光関連信号、すなわち第１図（ｂ）、
（ｃ）および（ｄ）に関して、実際の光信号とノイズ信
号との間に分離または差異があることがわかる。上述の
ように、信号とノイズとの間の分離は対数目盛で計算す
るのが好ましいが、信号のノイズへの比率はヒストグラ
ムのＸ軸に直線的差異として表わされる。それ故、ヒス
トグラムを見る時に、散乱、ＦＩＴＣおよびＰＥに関し
て信号とノイズのピークの間の間隔や分間を容易に認謂
できる。 蛍光分析についての第１図（ｃ）および（ｄ）のヒスト
グラムでは、実際に測定されているものは前述の試薬に
よって与えられるような非標識ビーズに比較した標識ビ
ーズの平均蛍光強度間の分；量である。それ故、第１図
（ｅ）では曲線１６はＦＩＴＣで標識されたビーズの平
均蛍光強度を表わし、曲線１８は検定目的に使用された
試薬混合物中の非標識ビーズの結果として生じるノイズ
強度を表わす。 同様に第１［］（ｄ）では曲線２０はＰＥで標識された
ビーズの平均蛍光強度を表わし、曲線２２は検定のため
にコ１ｃ薬混合物によって与えられる非標識ビーズから
のノイズの平均強度を表わす。このように、ＦＩＴＣ５
議ビーズ、ＰＥ標識ビーズおよび非標識ビーズの等しい
割合の単一の試藁混き物を与えることによって、２色蛍
光分析への機器の検定は容易に達成され得る。 第１図（１］）で表わされるような側面散乱信号に関し
ては、ノイズが実際に検出されて、ノイズと信号との間
の分χ値を測定し得る。第１図（ｂ）の領域１４で表わ
されるノイズは蛍光信号で生ずるような非標識細胞によ
るものではないのでこれが必要である。この図では、側
面散乱（ＳＳＣ）ノイズは関連のない信号で誘発され、
ノイズのための対照信号を生ずる。従って、対！ｑ信号
を生じさせるために、ＦＬ２信号が任意に遊択されてい
る。フローサイトメトリー機器でＦＬ２基準を調整して
、機器を通るｌＪ例速度（または粒子の流速）を容積、
ＦＬＩおよびＰＬ２に関するデータを得るときの事例速
度の約２倍にすることによって、ノイズを側面散乱信号
に導入する。この手段によってノイズが側面散乱信号中
に生じて、ノイズと散乱信号との間に直線化された分離
量が決定され得る。 ヒストグラム型式で好ましく与えられるグラフ表示に加
えて、検定される機器の画面にはデジタル読み出しの型
式で結果を表示するようにプログラムすることもできる
。検定手順を含めて、機器のためのソフトウェアは蓄積
されたデータに関する情報を供給するように容易にプロ
グラムすることができる。それ故第１図ではヒストグラ
ムの下に、ノイズ事例および平均チャンネル信号が測定
者によって読めるように容積結果がデジタル読み出し型
式で記録されている。ＦＡＣ３分析機のような機器の検
定では、８頂平均チャンネルは容積ヒストグラムのほぼ
真中の目盛のはずである。真中の目盛を読むということ
は粒子が流れるオリフィスが正しく選択され、機器の容
積基準が適切に設定されていることを示す、５００以下
のノイズ＄例レベルは機器が適切に設定されていること
を忍昧する。 第１図の画面には第１図（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）の
各ヒストグラムに関連したデジタル読み取り値も表示す
る。ＳＳＣ，ＦＬＩおよびＰＬ２の種々のパラメーター
を信号、ノイズ、分離、最小およびロットＩＤの読み取
りと共に表示する。ロットＩＤおよび最小値は相互に関
連している０機器に検定用ビーズの混合物を入れる前に
、測定者は検定手順を規定するプログラムにロフトＩＤ
番号を入力する。検定用ビーズは種々の蛍光光度、強度
などを含む変「ヒしやすい性質を持つので、機器の検定
はこれらの変化しやすい性質を考慮に入れねばならない
、従ってどのロフトＩＤ番号の検定用ビーズを用いるか
に依存して、種々の分ｇｉｌｉａが最小機器性能のため
の最小または閾値として予め確立されている。ソフトウ
ェアを前もってプログラノ、し得るので、ロットＩＤ番
号を検定手順の最初に測定者がプログラムに入れさえす
れば先決の最小分離値が確立されて第１図のディスプレ
ーに表示される。 第１図（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のそれぞれのヒスト
グラムに関連した側面散乱、ＦＬＩおよびＦＬ２の信号
およびノイズに対する平均中央チャンネル値が第１［Ｋ
の底部に表示されている０例えば、側面散乱信号は１９
２の平均チャンネル中央値を持つことが表示され、これ
に対してノイズの平均チャンネル中央値は１６である。 これらの信号およびノイズ結果の間の分離は１７６と記
録される。側面散乱信号のために先に決定された最小分
Ｍ値は１６０である。この最小側面散乱分離値は、機器
が側面散乱測定を確実に行なうために十分検定するため
の目標の水準である。それ故、実際に測定された分離は
１７８であるので最小を越えている。従ってその８！器
は側面散乱を検出信号とするその後の粒子試験を検定で
きるとみなされる。 信号、ノイズおよび分離の平均チャンネル中央値のデジ
タル表示はＦＬＩおよびＰＬ２信号についても提供され
る。第１図の例に示されるように、ＦＬＩおよびＦＬ２
の両方の分層値は最小分離値を越えているので、機器が
これら２種類の信号についても適切に検定されているこ
とを測定者は容易に判断できる。上述の検定手順のソフ
トウェアは、対数目盛で信号とノイズとの比率を検定す
るが、画面上ではピークが相互に離れ、それ故解釈する
のに便利なように間隔をあける直線性（雷数）ｆ−基に
して比率を表示する。散乱や蛍光の光関連代号の多くま
たは全てが先に決められた最小以下の分層値と測定され
た場きには、適切な検定のために更に機器を調整しなけ
ればならない。第２゜３および４図は機器性能を最適に
するように光学的要素を配列するためにこの検定調整を
実施し、ＰＭ”ｌｌ整を行ない、粒子の２色蛍光分析に
おけるスペクトルの混合や重複を補正する際のＦＡＣ８
ＡＣ８分析機表示を例示する。 光学的要素を最適な性能のために適切に配列されたこと
を確実にするために機器ｔｒＡ１１するには、上述の試
薬キットの第１容器からＦＩＴＣ１’Ｉｎビーズを用い
て検定を実施することができる。滅菌ＰＢＳ１ａＺにＦ
ＩＴＣビーズ試薬を１滴加えてＦＩＴＣ！識ビーズ懸濁
液の試験管を用意する９次喀 にこの試験管をＦＡＣ３分析機に屏着して、検定用ソフ
トウェアと組合せると画面に第２図に示されるような点
分布図が表示される。第２図（ａ）はＦＬ２対ＦＬＬを
示し、第２図（ｂ）は側面散乱（ＳＳＣ）対ＦＬＩを示
す０点分布図の下にはＦＬＩ。 ＰＬ２およびＳＳＣの信号のチャンネル平均に関するデ
ジタル情報が表示されている。まず第２図（ａ）に関し
ては言及すれば、緑色（ＦＩＴＣ）ビーズの点分布が表
示の中央付近に位置すると、検定が達成される０点分布
がこの位置に移動するようして述べれば、測定者はこれ
らの信号を最大にすることによって検定を確かなものに
する。集光レンズ制御のような機器の光字的要素をこれ
らの信号の平均が最大になるように：Ａ整し、しがも、
これらがほぼ同時に最大になるようにすべきである。 最大付近になると、第２図（ａ）に表示される点分布は
測定者によってできるだけ隙間のないようにされる。第
２図（ｂ）および点分布図の下に示されるＳＳＣ信号平
均に関して述べれば、通常前もって決められた目標値が
検定のための目標である。 例えば、ＦＡＣ３分析機では、ＳＳＣ信号チャンネル平
均の目標は約１９０である。この目標値を達成するため
、ＳＳＣ信号平均が約１９０にり１１達するまで、測定
者はＭ％２：の側面散乱（ＳＳＣ）ＰＭＴ電圧を調整す
る。光学的要素またはＰＭＴのその他の：Ａ整もＳＳＣ
信号平均を目標水準に到達させるのに必要でありうる６
点分布およびデジタル読み取り数の両者は、測定者が適
当な光学的配列に機器を検定する手助けをする。 光字的配列と同様にして、光電子増信管（ＰＭＴ）も検
定手順中に調整されうる。第３図はＰＭＴ該１整に関連
した典型的な点分布図を示す、第３図（ａ）はＦＬ２対
ＦＬＩの点分布図であり、第３図（ｂ）は側面散乱（Ｓ
ＳＣ）対容積の点分布図である。ＰＭＴ：Ｉ！ＩＭｉを
行なうべきかどうかの決定には、測定音は上述とは異な
る検定粒子を用いて手順を行なう、このＰ Ｍ Ｔ ′
Ａ整の場合、測定者は滅菌ＰＢ３１ｉＮに上述の試不キ
ットの非標識ビーズ容器から１滴の非Ｆ！２ビーズを添
加して、非５識ビーズ懸濁液を用意する０次にこの非標
議ビーズの試験管をＦＡＣＳ分析機に装着し、検定用ソ
フトウェアと組合せると、画面に第３図に示されるよう
な点分布図が表示される９点分布図に加えて、第３図は
ＦＬＩ、ＰＥ２およびＳＳＣの３種類のパラメーターの
分布のチャンネル中央平均値を表わす３つの数字も表示
される。検定粒子をコントロールされた一定の速度でｖ
ｉ器中に流しながら、測定者はＦＬＩ平均、ＰＥ２平均
およびＳＳＣ平均の幀を前もって決めた目標値に合せる
。ＦＬＩおよびＦＬ２平均の両方に、前もって決められ
た目標は例えば３０付近に設定され、もしその値が達成
されない場合、測定者は画面に表示されるＦＬＩまたは
ＰＥ２のチャンネル平均ができるだけ３０近くに設定さ
れるまで機器の各蛍光１または蛍光２のＰ Ｍ Ｔ電圧
調整をする。同様にして、ＳＳＣ平均の目標を例えば１
９０に設定する。もしこの水準が最初に表示されない場
合、測定者は画面に表示されるＳＳＣのチャンネル平均
ができるだけ１９０近くに設定されるまで機器の光散乱
のＰＭＴ電圧調竺をする。もちろん、これらの平均値は
典型的な１コ標値を意味するものであって、Ｒ器設計、
実施する試験やその池の要素によって変化し得ることは
言うまでもない、もしチャンオ・小平均の満足な値を達
成できない場合、測定者は第２Ｉ２Ｉに関連して記載し
た機器の配列手順に戻らねばならない。 ＰＭＴをＸＩ！ｌ整して機器の光学的要素の配列を行な
った後、機器の検定を達成するにはもう一つの３１を行
なう、この追加された調整は、２色蛍光分析を行なう場
合におけるスペクトルの混合や重複の補正に関連する。 この手順は望ましくない緑色信号を赤色（ＰＥ着色）集
団から除去し、望ましくない赤色信号を緑色（ＦＩＴＣ
着色）集団から除去して、蛍光補正のための７Ａ塾を果
す。 蛍光補正手順を行なうには、上述の感度試験に関してｆ
ｊ成したものと同様の検定粒子の試験管で始めるのが好
ましい、この試験管は滅菌ＰＢＳ３ＩＩｌに上述容器か
らＦＩＴＣ，ＰＥおよび非標識ビーズの各々１滴ずつを
添加することによりその３種類の試薬の１ ：ｌ 該混
合物として用意される。 この試験管が分析機器に装着されると、検定手順用のソ
フトウェアプログラムと組合わされて、画面は第４図（
＆）に見られるような非補正蛍光を表わす点分布図を即
時に表示する。第４図（ａ）に表示された３つの分離し
た点の集団は非着色、緑色着色および赤色着色検定ビー
ズを表わす、非着色ビーズはスクリーン上で領域２８と
して例示される左下部角の正方形の内側に位置するのが
典型である。赤色（ＰＥ着色）ビーズは領域３０として
示される非着色集団の上方部位に位置するのが典型であ
る。緑色集団は領域３２として示される非着色集団の右
側部位に位置する。蛍光補正が機器によって与えられる
まで、領域２８．３０および３２の位置は近似だけであ
る。第４図（ａ）の点分布図の下にはＦして変動しない
場き、蛍光補正のためのＦｌ整を行なわねばならない。 画面に記録される補正値ができるだけ零に近づくまで、
機器のＦＬＩ補正およびＰＥ２補正を調整することによ
って、２色蛍光分析のための補正をする。ｙＪｆｉを行
った後、補正値は零の上方と下で等しく変動及び変化す
るはずである。ＦＬＩ補正に関して、補正された値は非
着色集団の下向横軸チャンネルと緑色着色集団の平均横
軸チャンネルとの間の差を表わす。ＦＬ１補正調節を機
コニで′Ａ岱して画面上の値が零に近ずくと、点分布図
の緑色集団３２は第４１図（ｂ）で見られるように、水
平軸に平行な水平軸について非着色集団２８と等しくな
るまで下方向に移動するはずである。 同様の方法で、画面上のＦＬ２補正の次に記載されてい
る平均チャンネル差異は、非着色と赤色着色集団の平均
垂直チャンネルの相異を表わす。 ＰＬ２補正調節を機器で調整して画面上の値が零に近す
いた時、点分布図の赤色集団３０は第４図（１，）に示
されるように垂直軸に平行な垂直軸について非着色集団
２８と等しくなるまで垂直に移動するはずである。ＦＬ
ＩおよびＰＥ２：Ｉ！Ｉ節のこれらの調整は、赤色集団
から不要な緑色信号の集団を電気的に差し引くこと、お
よび緑色集団から不要の赤色信号の集団を電気的に差し
引くことによって蛍光補正を達成する。コンピューター
プログラムによって零に設定された画面上の蛍光補正の
前もって決められた鎖が満たされると補正は達成される
。 もし満足なまたは目標の設定を達成できない場合、１１
１１定者は上で失明されたような配列およびＰＭＴ：Ｉ
！１整手順に戻る必要がある。 配列、ＰＭＴ：Ａｆｆｉおよび蛍光補正が達成されると
、測定者は第１図に基づいて上述した感度試験に戻る。 もし検定される各パラメーターについて最小分離値を達
成すれば、測定者は実施せんとする試験が適切に検定さ
れているという十分な信頼を持ってそのｎ器の使用に移
ることができる。 ここに記述された検定手順に利用される検定粒子に関し
ては、標準品として種々の粒子が使用し得る０例えば分
析を受ける実際の粒子と同様の特性を持つか、または持
つように処理され得る粒子または細胞のような生物学的
試料を用いることができる。この方針に沿うと、ニワト
リ赤血球は適切な選択技法で使用され得る。ニワトり赤
血球細胞を修飾した形態の粒子は粒子標準品として使用
され得る。特に蛍光で標識した四酸化オスミウム固定ニ
ワトリ赤血球細胞は、生物学的細胞と同様の大きさの散
乱特性を持つので、粒子標準品として役立つ、更に四酸
化オスミウム固定化はｆ（ｉｔ １１２１の自己蛍光を
消す、これらの細胞をビオチン化して、既知の方法でア
ビジンに結合された蛍光団と反応させる。細胞に結合し
たアビジン複合体の蛍光は細胞上の四酸化オスミウムに
よって消されることはない、アビジンに結合される特定
の蛍光団は細胞表面着色に特色をもつスペクトル性を持
つ、多種類の蛍光団が下記のものを含めて複合体に使用
し得る。 本発明の検定粒子として最も好適なものはプラスチック
微細球状ビーズである。このようなビーズは大体均一の
直径に仕上げて、蛍光団や他の色素ａ識剤が表面結合す
るための好適な表面特性を有し得る。実質的に球状のビ
ーズは０．５と２０ミクロンの間の直径（最も好ましく
は２と８ミクロンの間）を持つように作製して、これら
の検定用ビーズを白血球と同程度の大きさにする。ビー
ズは通常は充実体として作製されるがリボゾームや池の
微小担体のような中空や小胞にもできる。更にビーズは
本発明に従って作用するためには完全な球形である必要
はない、ポリスチレン、ポリアクリルアミドおよび池の
ラテックス物質がビーズの成形に使用することができ、
ポリビニルクロリド、ポリプロピレンなどのような他の
プラスチック物質も利用することができる。上述のビー
ズへのフルオレセインやフィコエリスリン原本の池に、
本発明用の蛍光Ｆ！２剤としてアロフィコシアニン、テ
キサスレッド、ローダミン、ローダミン型化合物および
その他の蛍光着色剤も使用できる０機器の検定用のこれ
らの試薬のキットの作製では、標識あるいは非標諏のビ
ーズは１０’から１０”粒子／ｘｌ（好ましくは少なく
とも１０６粒子／ｘｌ）の範囲の濃度で存在するように
ビーズを水中分￥ＨＩ５として供給するのが好ましい。 検定手順をフローサイトメトリー機器を具体的な例とし
て上述したが、本発明はこれに限定されるものではない
、実際、本発明の検定手順は移動粒子のみならず非移動
粒子を分析する機器にも適用できる。百億分析機ととも
に蛍光、自動および定量顕微鏡のような種々の顕微鏡も
本発明に従って検定することができる。 従って、本発明は分析中の粒子から少なくとも１種類の
光関連信号を得るための機器を、使用する前に検定する
ための方法および物質を提供する。 本発明は適当なソフトウェアを使用して、機器で特定の
光関連パラメーターを検定することを決定するために満
たさねばならない信号のノイズへの比率の最小値を表示
することができる。直線性目盛での差異としての信号の
ノイズへの比率を記録することによって、測定者に便利
になるばかりでなく当て推量、目分量への依存や誤差が
実質的に減少または排除される０本発明の技法および物
質は臨床詮所的応用にもすばらしい確実性を与える。
第１図（ａ）ないしくｄ）は、夫々粒子容積、側面散乱
、蛍光色１および蛍光色２と、粒子カウント数との関係
を示すヒストグラフであり、第１Ｉｍ（ａ）ないしくＪ
）の下方の文字は、上記ヒストグラフと組合せて本発明
に係るＲ器を検定するために該機器の表示装置に上記し
ストグラフと共に表示された情報の一例を図示したもの
である。 第２図（ａ）は２色蛍光分析における蛍光１と蛍光２の
関係を示す点分布グラフであり、第２図（ｂ）は蛍光１
と側面散乱の関係を示す点分布グラフであり、第２図（
ａ）および（ｂ）の下方の文字は、上記点分布グラフを
利用して本発明に係る機器を検定するために必要な情報
の一例が機器の表示部に表示された状態を図示したもの
である。 第３図（ａ）は２色蛍光分析における蛍光１と蛍光２の
関係を示す点分布グラフであり、第３図（ｂ）は粒子容
積分布に対する側面散乱の関係を示す点分布グラフであ
り、第３１１Ｚ（ａ）および（ｂ）の下の文字は、上記
点分布グラフを利用して本発明に係る機器を検定するた
めに必要な情量りの一例が機器の表示部に表示された状
慧を図示したものある。 第４図（ａ）は、未補正状態の機器での蛍光分析におけ
ろ蛍光１と蛍光２の関係を示す点分布グラフであり、第
４図（ｂ）は、補正後の機器での蛍光分析における蛍光
１と蛍光２の関係を示す点分布グラフであり、第４図（
ａ）および（ｂ）の下方の文字は、上記点分布グラフを
利用するために有用な情報の一例が機器の表示部に表示
された状態を図示したものである。 （外４名） （ａ） （ｂ）（ｃ）
（ｄ）１′ｖ！の馳１ ＰＭＴｗｌ箇 ＦＬＩ ＶＯＬ（ａ）
（ｂ）ＦＬＩ 早１９
：３２ ＦＬ２ ＋４２＋ ３１ ＳＳＣ
＋＋’７： １８９配 テＩ
、蛍光色１および蛍光色２と、粒子カウント数との関係
を示すヒストグラフであり、第１Ｉｍ（ａ）ないしくＪ
）の下方の文字は、上記ヒストグラフと組合せて本発明
に係るＲ器を検定するために該機器の表示装置に上記し
ストグラフと共に表示された情報の一例を図示したもの
である。 第２図（ａ）は２色蛍光分析における蛍光１と蛍光２の
関係を示す点分布グラフであり、第２図（ｂ）は蛍光１
と側面散乱の関係を示す点分布グラフであり、第２図（
ａ）および（ｂ）の下方の文字は、上記点分布グラフを
利用して本発明に係る機器を検定するために必要な情報
の一例が機器の表示部に表示された状態を図示したもの
である。 第３図（ａ）は２色蛍光分析における蛍光１と蛍光２の
関係を示す点分布グラフであり、第３図（ｂ）は粒子容
積分布に対する側面散乱の関係を示す点分布グラフであ
り、第３１１Ｚ（ａ）および（ｂ）の下の文字は、上記
点分布グラフを利用して本発明に係る機器を検定するた
めに必要な情量りの一例が機器の表示部に表示された状
慧を図示したものある。 第４図（ａ）は、未補正状態の機器での蛍光分析におけ
ろ蛍光１と蛍光２の関係を示す点分布グラフであり、第
４図（ｂ）は、補正後の機器での蛍光分析における蛍光
１と蛍光２の関係を示す点分布グラフであり、第４図（
ａ）および（ｂ）の下方の文字は、上記点分布グラフを
利用するために有用な情報の一例が機器の表示部に表示
された状態を図示したものである。 （外４名） （ａ） （ｂ）（ｃ）
（ｄ）１′ｖ！の馳１ ＰＭＴｗｌ箇 ＦＬＩ ＶＯＬ（ａ）
（ｂ）ＦＬＩ 早１９
：３２ ＦＬ２ ＋４２＋ ３１ ＳＳＣ
＋＋’７： １８９配 テＩ
Claims (27)
- （１）試験したい粒子に関連した特性を持つ検定粒子を
液体流動液に通して、各検定粒子を実質上一度に一個づ
つ入射光ビームに通過させ；該光ビームを通過する検定
粒子からの光信号を検出し； 該光ビームを通過する検定粒子からのノイズ信号を検出
し； 検出された光信号のノイズ信号との比率を決定し； 光信号とノイズ信号との間の測定された分離値として該
信号を記録し； 該測定された分離値を分析機器の限界性能である閾値を
表わす先に決定された分離値と比較し；および 検定粒子を通過させながら該分析機器を調整して、測定
分離値を先に決定された分離値に到達するまで調整し、
それによって分析する粒子からの光信号を検出し受るよ
うに該分析機器を検定することからなる、分析機器を通
過する粒子からの少なくとも１種類の光関連信号を検出
するためのフローサイトメトリー（流動細胞計測法）用
機器を検定する方法。 - （２）該検定粒子が実質的に球形ビーズである特許請求
の範囲第１項記載の方法。 - （３）該検定粒子が既知波長で蛍光を発光でき、機器を
検定すべき光関連信号が該既知波長の蛍光である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 - （４）該検定粒子が多数の既知波長で蛍光を発光でき、
機器を検定すべき光関連信号がそれぞれ多数の既知波長
の蛍光である特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （５）該検定粒子が実質的に蛍光を発光しないようにさ
れた非標識粒子である特許請求の範囲第１項記載の方法
。 - （６）該検定粒子が、異なった蛍光染色で標識された２
種類の粒子および標識されていない一種類の粒子の混合
物からなり、その結果２つの蛍光信号が検定され、その
際、非標識粒子は各蛍光信号に対する信号とノイズの比
率を確立するために検出されるノイズ信号を生じさせる
手段として役立つ特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （７）該記録工程が検定を実施する測定者に視覚的型式
で該比率を示すことを含む特許請求の範囲第１項記載の
方法。 - （８）該記録工程が光信号とノイズ信号との間の直線的
な差異として比率を表わす特許請求の範囲第１項記載の
方法。 - （９）調整工程が実質的にスペクトルの重複を除くこと
によって各蛍光信号を補正することを含む特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - （１０）試験したい粒子に関連した既知の特性を１個以
上持つ検定粒子に入射光ビームをあて；検定粒子からの
光信号を検出し； 検定粒子からのノイズ信号を検出し； 検出された光信号のノイズ信号への比率を測定してそれ
を記録し； 機器の限界性能である閾値を表わす先に決定された比率
と該測定比率を比較し；および もし先に決定された比率が得られない場合は、検定粒子
を入射光ビーム中に入れたまま機器を調整して、測定比
率を先に決定された比率に到達させ、それによって分析
する粒子からの光信号を検出しうるように該分析機器を
検定することからなる、分析中の粒子から少なくとも１
種類の光関連信号を得るための機器を検定する方法。 - （１１）第１波長で蛍光を発光できる検定粒子を有する
第１容器； 第２波長で蛍光を発光できる検定粒子を有する第２容器
；および 実質的に蛍光を発光できない検定粒子を有する第３容器
； からなる粒子の２色蛍光分析を実施する機器の検定に用
いる試薬キット。 - （１２）該検定粒子の全てが、実質的に０．５と２０ミ
クロンの間の直径を持つ球形ビーズである特許請求の範
囲第１項記載のキット。 - （１３）該ビーズが、プラスチック製物質でできている
特許請求の範囲第２項記載のキット。 - （１４）第１容器内の粒子が表面結合型蛍光染色剤で標
識されている特許請求の範囲第１項記載のキット。 - （１５）蛍光染色剤がフルオレセインである特許請求の
範囲第４項記載のキット。 - （１６）第２容器内の粒子が表面結合型蛍光染色剤で標
識されている特許請求の範囲第１項記載のキット。 - （１７）蛍光染色剤がフィコエリスリンである特許請求
の範囲第６項記載のキット。 - （１８）３個の容器の各々の粒子が少なくとも１０＾５
粒子／ｍｌの濃度で水溶液中に存在する特許請求の範囲
第１項記載のキット。 - （１９）フルオレセイン標識されて実質的に球形である
ビーズを有する第１容器； フィコエリスリンを標識されて実質的に球形であるビー
ズを有する第２容器； 標識されておらず、実質的に球形のビーズを有する第３
容器からなり； 上記全ての容器内のビーズはプラスチックでできていて
、０．５と２０ミクロンの間の直径を持ち、該容器内に
少なくとも１０＾５ビーズ／ｍｌの濃度で水溶液中に存
在することからなる、粒子の２色蛍光分析の実施のため
の機器の検定に用いる試薬キット。 - （２０）蛍光標識した四酸化オスミウム固定ニワトリ赤
血球細胞からなることを特徴とする蛍光分析機器での検
定に用いるための粒子標準品。 - （２１）四酸化オスミウム固定ニワトリ赤血球細胞がビ
オチン化されている特許請求の範囲第１項記載の標準品
。 - （２２）ビオチン−四酸化オスミウム固定ニワトリ赤血
球細胞がアビジンと蛍光団との複合体を含む特許請求の
範囲第２項記載の標準品。 - （２３）複合体の蛍光団がフィコエリスリンである特許
請求の範囲第３項記載の標準品。 - （２４）複合体の蛍光団がフルオレセインである特許請
求の範囲第３項記載の標準品。 - （２５）複合体の蛍光団がアロフィコシアニンである特
許請求の範囲第３項記載の標準品。 - （２６）複合体の蛍光団がローダミンである特許請求の
範囲第３項記載の標準品。 - （２７）複合体の蛍光団がテキサスレッドである特許請
求の範囲第３項記載の標準品。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US901860 | 1986-08-29 | ||
| US06/901,860 US4704891A (en) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | Method and materials for calibrating flow cytometers and other analysis instruments |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6363942A true JPS6363942A (ja) | 1988-03-22 |
| JPH0350212B2 JPH0350212B2 (ja) | 1991-08-01 |
Family
ID=25414938
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62214975A Granted JPS6363942A (ja) | 1986-08-29 | 1987-08-28 | フロ−サイトメ−タ−および他の分析機器を検定するための方法 |
| JP62280840A Granted JPS63171343A (ja) | 1986-08-29 | 1987-11-06 | 蛍光分析機器の検定に用いる試薬キット |
| JP62280841A Granted JPS63177038A (ja) | 1986-08-29 | 1987-11-06 | 螢光分析機器の検定に用いる粒子標準品 |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62280840A Granted JPS63171343A (ja) | 1986-08-29 | 1987-11-06 | 蛍光分析機器の検定に用いる試薬キット |
| JP62280841A Granted JPS63177038A (ja) | 1986-08-29 | 1987-11-06 | 螢光分析機器の検定に用いる粒子標準品 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4704891A (ja) |
| EP (3) | EP0258982B1 (ja) |
| JP (3) | JPS6363942A (ja) |
| AT (2) | ATE80947T1 (ja) |
| DE (2) | DE3781855T2 (ja) |
| ES (2) | ES2035068T3 (ja) |
| GR (2) | GR3004885T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007047154A (ja) * | 2005-07-12 | 2007-02-22 | Sysmex Corp | 粒子分析装置用標準物質 |
Families Citing this family (95)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK164144C (da) * | 1988-11-17 | 1992-10-12 | Slagteriernes Forskningsinst | Fremgangsmaade ved kontrol eller justering af maaleapparater med en optisk sonde og medium til anvendelse ved fremgangsmaaden |
| CA2021658C (en) * | 1989-08-25 | 2001-10-09 | Myron J. Block | Multiplex immunoassay system |
| US5853984A (en) * | 1990-06-11 | 1998-12-29 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Use of nucleic acid ligands in flow cytometry |
| IE76732B1 (en) * | 1990-08-07 | 1997-11-05 | Becton Dickinson Co | One step test for absolute counts |
| JP2913219B2 (ja) * | 1991-03-06 | 1999-06-28 | 株式会社シマ研究所 | 尿沈渣検査成績管理方法 |
| ES2102518T3 (es) * | 1991-08-28 | 1997-08-01 | Becton Dickinson Co | Motor de atraccion por gravitacion para el agrupamiento autoadaptativo de corrientes de datos n-dimensionales. |
| US5451525A (en) * | 1992-02-14 | 1995-09-19 | Coulter Corporation | Method and materials for determining particle count in a flow cytometer |
| EP0586183B1 (en) | 1992-09-04 | 1999-10-13 | Becton, Dickinson and Company | Control particles for cell counting and instrument linearity |
| US5620842A (en) * | 1995-03-29 | 1997-04-15 | Becton Dickinson And Company | Determination of the number of fluorescent molecules on calibration beads for flow cytometry |
| JP3875754B2 (ja) * | 1995-11-17 | 2007-01-31 | シスメックス株式会社 | フローサイトメータ用標準液 |
| US6014904A (en) * | 1996-05-09 | 2000-01-18 | Becton, Dickinson And Company | Method for classifying multi-parameter data |
| JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ， インコーポレイテッド | 光学装置 |
| US6074879A (en) * | 1997-06-23 | 2000-06-13 | Bayer Corporation | Synthetic polymer particles for use as standards and calibrators in flow cytometry |
| US6071689A (en) | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
| US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| US6197520B1 (en) * | 1999-08-13 | 2001-03-06 | University Of Utah Research Foundation | Solution-based color compensation adjusted for temperature and electronic gains |
| US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| EP1295243A4 (en) | 2000-05-11 | 2010-09-01 | Becton Dickinson Co | SYSTEM FOR IDENTIFYING CLUSTERS IN DISPERSION DIAGRAMS INVOLVING SMOOTH POLYGONS WITH OPTIMAL LIMITS |
| US6809804B1 (en) | 2000-05-11 | 2004-10-26 | Becton, Dickinson And Company | System and method for providing improved event reading and data processing capabilities in a flow cytometer |
| CA2822983C (en) | 2000-11-29 | 2017-05-09 | Xy, Llc | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
| US8211629B2 (en) | 2002-08-01 | 2012-07-03 | Xy, Llc | Low pressure sperm cell separation system |
| CA2534394C (en) | 2002-08-15 | 2013-01-08 | Xy, Inc. | High resolution flow cytometer |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| DK2959774T3 (da) | 2003-03-28 | 2019-05-13 | Inguran Llc | Fremgangsmåde til kryokonservering af sædceller |
| WO2004104178A2 (en) | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Xy, Inc. | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
| KR101149880B1 (ko) * | 2003-08-13 | 2012-05-24 | 루미넥스 코포레이션 | 유세포 분석기식 측정 시스템의 하나 이상의 파라미터의 제어 방법 |
| JP4850711B2 (ja) * | 2003-10-02 | 2012-01-11 | ベックマン コールター， インコーポレイテッド | 血液サンプルの有核赤血球の光学測定のリファレンスコントロール |
| EP2260854A1 (en) | 2004-03-29 | 2010-12-15 | Inguran, LLC | Sperm suspensions for sorting into x or y chromosome-bearing enriched populations |
| AU2005266930B2 (en) | 2004-07-22 | 2010-09-16 | Inguran, Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
| DE102004044717B8 (de) * | 2004-09-10 | 2010-12-16 | BAM Bundesanstalt für Materialforschung und -prüfung | Verfahren und Kit zur Kalibrierung eines Photolumineszenzmesssystems |
| ES2547643T3 (es) | 2005-07-12 | 2015-10-07 | Sysmex Corporation | Material de referencia para un analizador de partículas |
| JP4748719B2 (ja) * | 2006-03-02 | 2011-08-17 | 国立大学法人大阪大学 | 生細胞内の特定タンパク質の定量方法および標準蛍光マイクロビーズの作製方法 |
| CN100386054C (zh) * | 2006-04-24 | 2008-05-07 | 西安交通大学 | 用于脉搏血氧仿真器的光散射介质及制备方法 |
| EP2029999A2 (en) * | 2006-05-13 | 2009-03-04 | Dako Denmark A/S | Methods for flow cytometry analyses of cells without lysing subpopulations |
| JP5010443B2 (ja) * | 2006-12-20 | 2012-08-29 | シスメックス株式会社 | 血球分析装置および血球分析方法 |
| CN101226190B (zh) * | 2007-01-17 | 2013-07-03 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 流式细胞术的自动分类方法和装置 |
| DE102007014413B4 (de) * | 2007-03-17 | 2016-02-04 | DüRR DENTAL AG | Verfahren zum Auswerten von Fluoreszenzbildsätzen und Vorrichtung zu seiner Durchführung |
| US8102528B2 (en) * | 2007-09-13 | 2012-01-24 | Brightwell Technologies Inc. | Particle standard and method of calibrating or validating an optical particle analyzer |
| WO2009042423A1 (en) * | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Cellatope Corporation | Methods and compositions for improved diagnostic assays |
| US8187885B2 (en) * | 2009-05-07 | 2012-05-29 | Nodality, Inc. | Microbead kit and method for quantitative calibration and performance monitoring of a fluorescence instrument |
| US20120065092A1 (en) | 2010-09-14 | 2012-03-15 | Wai Hobert | Fusion analyte cytometric bead assay, and systems and kits for performing the same |
| EP2630492B1 (en) * | 2010-10-21 | 2018-03-07 | Nexcelom Bioscience LLC | Internal focus reference beads for imaging cytometry |
| CN107699618B (zh) | 2010-11-12 | 2021-08-20 | 茵赛德斯有限公司 | 非疾病诊断的确定宫颈上皮内瘤样(cin)细胞是否存在于来自受试者的标记液体宫颈细胞样本的方法和系统 |
| JP2013146263A (ja) * | 2011-12-21 | 2013-08-01 | Azbil Corp | 微生物検出装置の校正方法、及び微生物検出装置の校正キット |
| AU2013204688B2 (en) | 2012-01-11 | 2016-02-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Characterization of subvisible particles using a particle analyzer |
| GB2499796B (en) | 2012-02-28 | 2016-06-15 | Ojk Consulting Ltd | Method and system for calibrating a flow cytometer |
| US20150177115A1 (en) | 2012-04-06 | 2015-06-25 | Slingshot Biosciences | Hydrogel particles with tunable optical properties |
| ITTV20130026A1 (it) * | 2013-02-27 | 2014-08-28 | Texa Spa | Metodo e sistema per calibrare uno strumento analizzatore di particolato di un gas |
| US10364277B2 (en) | 2013-07-01 | 2019-07-30 | Newsouth Innovations Pty Limited | Diagnosis and treatment of autoimmune diseases |
| CN107003225B (zh) | 2014-12-04 | 2020-08-18 | 贝克顿·迪金森公司 | 流式细胞术细胞分选系统及其使用方法 |
| CN208443705U (zh) | 2014-12-10 | 2019-01-29 | 贝克顿·迪金森公司 | 光学对准的集光系统和测量系统 |
| JP6692834B2 (ja) | 2015-02-09 | 2020-05-13 | スリングショット バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド | 調整可能な光学特性を有するヒドロゲル粒子およびその使用の方法 |
| EP3259574B1 (en) | 2015-02-18 | 2024-03-27 | Becton, Dickinson and Company | Optical detection systems and methods of using the same |
| CN107428918B (zh) | 2015-03-12 | 2021-07-30 | 贝克顿·迪金森公司 | 紫外线吸收聚合物染料及其使用方法 |
| CN107207874A (zh) | 2015-03-12 | 2017-09-26 | 贝克顿·迪金森公司 | 聚合物bodipy染料及其使用方法 |
| US9733176B2 (en) | 2015-06-17 | 2017-08-15 | Becton, Dickinson And Company | Optical detector scatter cap assembly having a removable scatter bar and methods of using the same |
| CN108351287B (zh) * | 2015-07-15 | 2019-08-09 | 贝克顿迪金森公司 | 用于调整细胞仪测量的系统和方法 |
| US10876953B2 (en) | 2015-07-15 | 2020-12-29 | Becton, Dickinson And Company | System and method for label selection |
| WO2017066404A1 (en) | 2015-10-13 | 2017-04-20 | Omega Biosystems Incorporated | Multi-modal fluorescence imaging flow cytometry system |
| ES2911298T3 (es) | 2015-12-16 | 2022-05-18 | Becton Dickinson Co | Colorantes poliméricos en tándem fluorescentes fotoestables que incluyen complejos de metales luminiscentes |
| WO2017156034A1 (en) | 2016-03-10 | 2017-09-14 | Becton, Dickinson And Company | Methods of evaluating a cellular sample for her-2/neu expression and compositions for practicing the same |
| JP6237806B2 (ja) * | 2016-03-16 | 2017-11-29 | ソニー株式会社 | 微小粒子分取装置 |
| BR112018068866B1 (pt) | 2016-03-17 | 2022-11-29 | Bd Biosciences | Classificação de células utilizando um citômetro de fluxo de fluorescência de alto rendimento |
| GB2548807A (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-04 | Sony Corp | Information processing apparatus,second information processing apparatus, system,method and computer program product |
| CN105928753B (zh) * | 2016-04-18 | 2019-01-15 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 流式细胞仪校准用鸡红细胞的制备方法 |
| CN109070083A (zh) | 2016-04-22 | 2018-12-21 | 贝克顿迪金森公司 | 用于阵列产生的高密度沉积 |
| EP4726370A2 (en) | 2016-05-12 | 2026-04-15 | BD Biosciences | Fluorescence imaging flow cytometry with enhanced image resolution |
| CN118530607A (zh) | 2016-07-07 | 2024-08-23 | 贝克顿·迪金森公司 | 发荧光的水溶剂化共轭聚合物 |
| EP3513167B1 (en) | 2016-09-13 | 2023-05-24 | Becton, Dickinson and Company | Flow cytometer with optical equalization |
| CN109073530B (zh) | 2016-10-03 | 2022-04-26 | 贝克顿·迪金森公司 | 用于确定流式细胞仪中的流体流的液滴延迟的方法和系统 |
| EP3551703A4 (en) | 2016-12-12 | 2021-01-20 | Becton, Dickinson and Company | WATER-SOLUBLE POLYMERIC DYES |
| ES2950436T3 (es) | 2016-12-14 | 2023-10-10 | Becton Dickinson Co | Métodos y composiciones para obtener una valoración de tuberculosis en un sujeto |
| US11320437B2 (en) | 2017-02-08 | 2022-05-03 | Becton, Dickinson And Company | Dried dye reagent devices and methods for making and using the same |
| EP3586104B1 (en) | 2017-02-27 | 2026-05-13 | Becton, Dickinson and Company | Light detection systems and methods for using thereof |
| JP6955385B2 (ja) * | 2017-07-14 | 2021-10-27 | 株式会社堀場製作所 | 粒子分析装置における光照射を調整するためのモニター装置 |
| KR20200104399A (ko) | 2018-01-23 | 2020-09-03 | 벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니 | 광 검출을 동적 차폐하기 위한 시스템 및 이를 사용하는 방법 |
| CN119242071A (zh) | 2018-03-30 | 2025-01-03 | 贝克顿·迪金森公司 | 含侧基发色团的水溶性聚合染料 |
| EP3785017B1 (en) | 2018-04-27 | 2025-09-10 | Becton, Dickinson And Company | Collection systems for flow cytometrically sorted samples and methods of using the same |
| CN112449680B (zh) | 2018-06-19 | 2024-08-09 | 贝克顿·迪金森公司 | 用于检测器阵列、系统的可变多路复用开关及其使用方法 |
| CN113785187B (zh) | 2019-03-22 | 2025-01-28 | 贝克顿·迪金森公司 | 使用射频多路复用激发数据对荧光成像进行光谱解混 |
| TW202141019A (zh) | 2020-01-24 | 2021-11-01 | 美商史林夏特生化公司 | 類細胞校正粒子之組合物與方法 |
| CN115176138B (zh) * | 2020-02-24 | 2026-04-28 | 康宁股份有限公司 | 包含具有尼龙-6和染料的纳米颗粒的校准装置 |
| CN115151810A (zh) | 2020-02-25 | 2022-10-04 | 贝克顿迪金森公司 | 实现使用单细胞样品作为单色补偿对照的双特异性探针 |
| CN115485556B (zh) | 2020-05-04 | 2026-02-03 | 弹弓生物科学公司 | 用于多路复用测定的被动光学条形码化的组合物和方法 |
| CN117222880A (zh) * | 2020-12-16 | 2023-12-12 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 用于流式细胞术方法的阈值门控 |
| WO2022225597A1 (en) | 2021-04-23 | 2022-10-27 | Becton, Dickinson And Company | Fluid management system for an analyzer and/or sorter type flow type particle analyzer |
| EP4155349A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-29 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble yellow green absorbing dyes |
| EP4423250A1 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Slingshot Biosciences, Inc. | Hydrogel particles as feeder cells and as synthetic antigen presenting cells |
| WO2023215886A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Slingshot Biosciences, Inc. | Engineered particles as red blood cell mimics and compositions containing same for hematology |
| WO2023235885A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Slingshot Biosciences, Inc. | Apoptotic cell mimic |
| CN120712108A (zh) | 2022-10-26 | 2025-09-26 | 弹弓生物科学公司 | 具有可调整光学性质的大小可调整合成颗粒和用于使用其进行免疫细胞激活的方法 |
| CN121986254A (zh) | 2023-08-29 | 2026-05-05 | 弹弓生物科学公司 | Cd34干细胞模拟物 |
| US20250137905A1 (en) | 2023-10-27 | 2025-05-01 | Becton, Dickinson And Company | Fluid Supply Systems Having a Flow Control Circuit and Single Fluidic Connection, and Methods of Use Thereof |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3406121A (en) * | 1965-10-01 | 1968-10-15 | Dade Reagents Inc | Blood cell counting standard and method of preparing the same |
| US3412037A (en) * | 1966-01-26 | 1968-11-19 | Technicon Corp | Method and means for the calibration of particle counting apparatus |
| US3791517A (en) * | 1973-03-05 | 1974-02-12 | Bio Physics Systems Inc | Digital fluidic amplifier particle sorter |
| US4135821A (en) * | 1977-03-22 | 1979-01-23 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Calibration of optical particle-size analyzer |
| US4331862A (en) * | 1979-02-23 | 1982-05-25 | Ryan Wayne L | Method for calibrating a particle counting machine and a calibration standard therefor |
| US4380392A (en) * | 1981-03-18 | 1983-04-19 | Karabegov Mikhail A | Method and apparatus for calibration of instruments serving to count and to determine the size of particles suspended in dispersion medium |
| US4438390A (en) * | 1981-03-23 | 1984-03-20 | Coulter Electronics, Inc. | Tandem sensing zones for improved signal-to-noise ratio in particle analyzer |
| US4434647A (en) * | 1981-07-27 | 1984-03-06 | Lockheed Corporation | Dynamic spot calibration for automatic particle counters |
| US4475236A (en) * | 1981-11-12 | 1984-10-02 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Method for counting overlapping cell populations in a distribution histogram |
| US4499052A (en) * | 1982-08-30 | 1985-02-12 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus for distinguishing multiple subpopulations of cells |
| JPS59184862A (ja) * | 1983-04-05 | 1984-10-20 | ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニ− | 試料内細胞の複数副次集団を識別する方法と装置 |
| US4596464A (en) * | 1983-10-14 | 1986-06-24 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Screening method for red cell abnormality |
-
1986
- 1986-08-29 US US06/901,860 patent/US4704891A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-07-10 DE DE8787306143T patent/DE3781855T2/de not_active Expired - Lifetime
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- 1987-07-10 EP EP87306145A patent/EP0258983B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-10 ES ES198787306143T patent/ES2035068T3/es not_active Expired - Lifetime
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- 1987-07-10 AT AT87306143T patent/ATE80947T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-10 AT AT87306145T patent/ATE75042T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-08-28 JP JP62214975A patent/JPS6363942A/ja active Granted
- 1987-11-06 JP JP62280840A patent/JPS63171343A/ja active Granted
- 1987-11-06 JP JP62280841A patent/JPS63177038A/ja active Granted
-
1992
- 1992-06-11 GR GR920401228T patent/GR3004885T3/el unknown
- 1992-12-02 GR GR920402771T patent/GR3006407T3/el unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007047154A (ja) * | 2005-07-12 | 2007-02-22 | Sysmex Corp | 粒子分析装置用標準物質 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63171343A (ja) | 1988-07-15 |
| EP0258983B1 (en) | 1992-04-15 |
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| DE3778253D1 (de) | 1992-05-21 |
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| EP0257759A2 (en) | 1988-03-02 |
| DE3781855D1 (de) | 1992-10-29 |
| ES2031507T3 (es) | 1992-12-16 |
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| EP0258983A3 (en) | 1989-09-13 |
| EP0258982B1 (en) | 1992-09-23 |
| US4704891A (en) | 1987-11-10 |
| ATE75042T1 (de) | 1992-05-15 |
| EP0258982A2 (en) | 1988-03-09 |
| EP0258983A2 (en) | 1988-03-09 |
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| JPH0350212B2 (ja) | 1991-08-01 |
| ATE80947T1 (de) | 1992-10-15 |
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