JPS6371183A - ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用 - Google Patents

ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用

Info

Publication number
JPS6371183A
JPS6371183A JP62209123A JP20912387A JPS6371183A JP S6371183 A JPS6371183 A JP S6371183A JP 62209123 A JP62209123 A JP 62209123A JP 20912387 A JP20912387 A JP 20912387A JP S6371183 A JPS6371183 A JP S6371183A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ptc
gene
gene according
ptt
resistant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP62209123A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0797994B2 (ja
Inventor
エックハルト、シュトラウホ
ウォルフガング、ウォールレーベン
ワルター、アルノルト
レナーテ、アリヤー
アルフレート、ピューラー
ゲルハルト、ウェーナー
リューディガー、マルクバルト
ズザンネ、グラープライ
ディーター、ブラウアー
クラウス、バールチュ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19863628747 external-priority patent/DE3628747A1/de
Priority claimed from DE19863642829 external-priority patent/DE3642829A1/de
Priority claimed from DE19873700313 external-priority patent/DE3700313A1/de
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Publication of JPS6371183A publication Critical patent/JPS6371183A/ja
Publication of JPH0797994B2 publication Critical patent/JPH0797994B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
    • C12P41/007—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving acyl derivatives of racemic amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8277—Phosphinotricin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Compounds Of Alkaline-Earth Elements, Aluminum Or Rare-Earth Metals (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Catalysts (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ホスフィノトリシン（ＰＴＣ，２−アミノ−４−メチル
ホスフィノ酪酸）はグルタミンシンテターゼの阻害剤で
ある。ＰＴＣは抗生物質ホスフィノドリシル　アラニル
−アラニンの“構造単位”である。このトリペプチド（
ＰＴＴ）は、プラム陽性及びグラム陰性細菌に対し並び
に真菌ボトリチス・シネレア（ＢｏＬｒｙＬＩｓ　ｃｉ
ｎｅｒｅａ）　ｌこ対してン古性である〔バイエルら、
ヘルベチ力・キミ力・アクタ、第５５巻、１９７２年、
第２２４頁（Ｂａｙｃｒ　ａｔ　ａｌ、、１ｌｃｌｖｃ
ｔｌｃａ　Ｃｈｌｎｉｃａ　Ａｃｔａ　５５（１９７２
）２２４））。ＰＴＴはストレプトミセス・ビリドクロ
モゲネス（Ｓｔｒｃｐｔｏｍｙｃｃｓ　ｖｉｒｉｄｏｃ
ｈｒｏｍｏｇｃ−ｎｅｓ）Ｔ　’ｕ　　４　９４　株　
（ＤＳＭ４０７３６　、　Ｄ　　Ｓ　Ｍ４１１２）から
産生される。
西独特許第２，７１７，４４０号明細書は、ＰＴＣが総
合的除草剤として作用することを開示している。公開Ｐ
ＣＴ出願ＷＯ第８６１０２０９７号明細書は、ＰＴＣに
対する耐性がグルタミンシンテターゼの過剰産生に起因
する植物について開示する。このタイプの過剰産生、例
えば遺伝子増幅に基づくもの、は不安定性というリスク
を伴う。
かかる不安定性はグルタミンシンテターゼ過剰産生の低
下と関係するものであり、ＰＴＣの競合的阻害作用が再
度発現することになるであろう。
これに対し、特許請求の範囲で規定される不発明は、Ｐ
ＴＣ耐性遺伝子及びＰＴＣ耐性植物製造のためのその使
用に関する。しかも、この遺伝子は耐性マーカーとして
も使用することができる。
更には、この遺伝子はラセミＰＴＣのＬ型の選択的Ｎ−
アセチル化にも適している。
本発明のＰＴＣ耐性遺伝子は、ＰＴＴ耐性に関して選択
されたストレプトミセス・ビリドクロモゲネスＤＳＫ１
４１１２由来全ＤＮＡをＢａｍＨＩて切断し、大きさ４
．０ｋｂの断昌をクローニングし、更にＰＴＴ耐性につ
いて選別することにより得ることができる。制限地図（
第１図）はこの４．０ｋｂ断Ｉ−＋の特徴を詳しく表わ
している。
この４　ｋ　ｂ所員部分のクローニング実験は、コード
領域部位を更に正確に局在化させるために行なイ）れた
。これによって、耐性遺伝子は］、６ｋｂＳｓ　ｔＩＩ
−３ｓ　ｔ　Ｉ断片（第１図において０．５５〜２．１
５１立）」二１こ１立置する二とか明らかになった。Ｂ
ｇｌＩＩで消化した場合に断片がｉｒ−？られたが、こ
の断片は大きさが０．８ｋｂであって、プラスミドに組
込みかつストレプトミセス・リビダンス（ＳＬｒｅｐＬ
ｏＩｌｙｃｅｓ　ｌ１ｖｉｄａｎｓ）を形質転換させた
後にはＰＴＴ耐性を与える。この耐性はＰＴＣのＮ−ア
セチル化により生じる。
０．８ｋｂ断片のマキサム（Ｍａｘａｉ）及びギルバー
ト（Ｇｉｌｂｃｒｔ）配列決定により、ＤＮＡ配列配列
後記）が決定される。耐性遺伝子の位置は、この配列の
開放読取り伜から決定することかできる（２５８位以後
）。遺伝ｆ−の末端は掲示された中で端から２番目のヌ
クレオチド（８０６位）に位置しており、即ち最後のヌ
クレオチド（８０７位）が停止コードンの最初のヌクレ
オチドとなっている。
ＤＮＡ配列ｌにおけるシャインーダルガルノ（Ｓｈｉｎ
ｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ）配列は、開始コードンとして機
能するＧＴＧと同様に、下線によって強調されている。
したがって、最初の下線部分が究極的な読取り枠を表わ
す。
ＤＮＡ配列■は、配列決定された遺伝子中の制限部位を
示す。７回以上配列を切断する酵素は示されていない。
抗生物質ＰＴＴは細菌によって取込まれ、ＰＴＣに分解
される。後者もまた細菌中のグルタミンシンテターゼを
阻害することから、細菌はグルタミン欠乏により死滅す
る。したがって、ＰＴＴ産生細菌はＰＴＴの作用から自
らを保護するメカニズム、即ち産生されたＰＴＴの再取
込みを妨げるか又は分解産物ＰＴＣを変化させるような
メカニズム、を有していなければならない。しかしなが
ら、驚くべきことに、ＰＴＴ産生株Ｓ、ピリドクロモゲ
ネスＤＳＭ４１１２は、その自らの抗生物質に対して感
受性を有している。ところが予想に反し、ＰＴＴ耐性に
ついて選択することにより、ＰＴＴに耐性でありかつ隣
接コロニーのバックグラウンド増殖を抑制する選択味を
１０−５の驚異的高率で発現させることがｎ■能であっ
た。
遺伝子バンクは、ＤＮＡを単離し、それをＢａｍＨＩで
切断し、かつそれをストレプトミセテスベクターと連結
することにより、これらの選択味のＤＮＡから製造され
た。連結混合産物で市販Ｓ、リビダンスＴＫ２３株を形
質転換して、連結混合産物１μｇ当たり約１〜５ｋｂの
挿入物を有する約５０００〜１００００個の形質転換味
が得られた。形質転換株中にＰＴＴ耐性Ｓ、リビダンス
株が存／ＥＬでいた。プラスミドの単離及びＳ、リビダ
ンスの再形質転換によって、耐性がプラスミドにコード
されていることを証明することが可能であった。耐性を
になう遺伝子は４ｋｂＢａｍＨＴ断片上に位置している
（第１図）。コード領域は（１，８ｋｂＢｇｌｌＩ断片
上に位置する。
ＢａｍＨＩ断片は酵素Ｃｌａ　Ｉ、ＥｃｏＲＴ。
ＥｃｏＲＶ、Ｈｉ　ｎｄＩＩＩ、Ｈｐａ　Ｉ、Ｋｐｎ　
ＬＰｖｕｌ、ＰｖｕＩＩ及びＸｈｏＩの切断部位を有し
ていない。
ストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔ　ｒｃｐ−
ｔｏｍｙｃｃｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）Ｆ　Ｅ
　ＲＭＢ　Ｐ　−１３０／ＡＴＣＣ２１７０５（欧州特
許出願公開節０．１７３．３２７号、第７図）に関する
、まだ詳細には特徴づけられていない耐性遺伝子の制限
地図との比較により、本発明の耐性遺伝子はＰＴＴ生合
成遺伝子に関する研究中に見出された公知遺伝子と異な
ることが示される。
一方ではＳ、ピリドクロモゲネスＤ　Ｓ　Ｍ４１１２及
びＳ、リビダンスＴＫ２３の細胞抽出物と、他方ではＰ
ＴＴ耐性Ｓ、ピリドクロモゲネス選択味及びプラスミド
担持Ｓ、リビダンス形質転換株と、ＰＴＣ及びアセチル
ＣｏＡとのインキュベーションにより、後者の細胞がア
セチル化活性を何することを明らかにすることができた
。クロマトグラフィー試験は、アセチル化がアミノ基で
生じることを示している。
ＰＴＴ耐性が大腸菌（ＩＥｓｅｈｅｒｊｃｈｆａ　ｃｏ
ｌｉ）でもみられ、よって耐性メカニズムがプラム陰性
菌でも機能していることから、輸送現象に基づく耐性を
除去することができる。したがって、植物プロモーター
に結合させた後適当なベクターを用いて、本発明の耐性
遺伝子を植物に組込んで形質転換させることができ、も
ってこの方法によりＰＴＣ耐性植物を製造することがで
きる。
ＰＴＣのＮ−アセチル化は、Ｌ型のみの選択的アセチル
化が生じることから、合成り、　　Ｌ−ＰＴＣのラセミ
分割のためにも利用することができる。
このように、本発明は、ラセミＰＴＣのＬ型の選択的Ｎ
−アセチル化のための耐性遺伝子の使用にも関する。
本発明の耐性遺伝子によりコードされたＰＴＣアセチル
トランスフェラーゼは、Ｌ型のみを選択的に攻撃し、Ｄ
型は未変化のままであることがら、例えば西独特許第２
，７１７，４４０号の方法から得られるように、ラセミ
体をこの酵素のアセチル化作用に供することにより、ラ
セミＰＴＣを光学対掌体に分割するために使用すること
ができる。
かくして得られる混合物は次いで、性質の違いに基づき
自体公知の方法で分割される。
Ｎ−アシル−Ｄ、Ｌ−アミノ酸をアシラーゼ（ｉＣｔ体
に固定しておいてもよい）と接触させてＬ−アミノ酸を
選択的に遊離させ、次いで酸性化後にＮ−アシル−Ｄ−
アミノ酸含Ｈ混＆物からこのＬ−アミノ酸を水溶性溶媒
で抽出することが、開示されている（英国特許第１．　
３６９□４６２号明細書）、Ｎ−７シルー　Ｄ、Ｌ　−
ＰＴＣ（７）同（，１の分画は、例えば西独公開第２．
９３９．２６９号又は米国特許第４，２２６，９４１号
明細書に開示されている。
本発明では残存するＤ　−ＰＴＣは公知の方法（欧州特
許出願公開第（ＥＰ−Ａ）０．１３７゜３７１号、実施
例８）でラセミ化され、次いで元のプロセスに戻される
。
必ずしも必要ではないが、酵素を単離することはｎ■能
であり、ここで酵素とは本文及び以ドにおいて常に酵素
的に活性な部分をも意味しているつもりである。酵素が
単離される場合、これは遊離型として又はＩｌ！体に固
定されて使用することができる。適当な担体の例はＥＰ
−Ａ第 （１，１４１，２２３号明細書に記載されている。
しかしながら、酵素をｌｉｔ離するのではなく、本発明
の酵素を発現するいずれかの望ましいＰＴＣ耐性細胞を
用いることが得策である。したがってＳ。
ピリドクロモゲネスＤＳＮ１４１１２のＰＴＴ耐性選択
株を用いることが、可能かつ得策である。更には、本発
明の遺伝子で形質転換されかつＰＴＣアセチルトランス
フェラーゼを発現しつるいずれかの望ましい細胞を用い
ることが、可能かつ有利である。このような関係から、
本発明の遺伝子は、これもその活性部分を意味するつも
りであるが、プラスミドに組込まれた形で又はトランス
フェクション（ｒｒａｎｓｌ’ｅｃｔｉｏｎ）のような
他の慣用的遺伝子操作法により宿主細胞中に導入するこ
とができる。例えばＥＰ−Ａ第０．１６３，２４９号及
び第０．１７１，０２４号明細書の公知の方法による、
例えば大腸菌発現プラスミドへの組込み及びかかるプラ
スミドによる大腸菌の形質転換が得策である。
ラセミ体中のＬ−ＰＴＣの本発明によるＮ−アセチル化
の場、５、ｐＴｃアセチルトランスフェラーゼを発現す
る細胞は遊離又は固定された形で使用することができる
が、固定化としては慣用的方法が適用される（例えば西
独公開第 ３．２３７，３４１号明細書及びそこで引用された文献
）。
Ｌ　−ＰＴＣの本発明による酵素的アセチル化は、酵素
反応に関して慣用的な方法により行なわれるが、その方
法の条件は使用される生物の特徴によって定められる。
原則として、これに適した方法は上記選択的脱アシル化
方法と同様である。
本発明はド記例によって詳細に説明されている。
他に菖及のない限り、及び６分率は重量基準である。
例にＰＴＴ耐性選択株 Ｓ、ピリドクロモゲネスＤＳＭ４１１２株を最少培地〔
ホップウッドら、ストレプトミセスの遺伝子操作、実験
マニュアル、ザ・ジョン・インズ・ファンデーション、
ノーリッジ、イングランド、１９８５年、２３３頁（Ｉ
ｌｏｐｖｏｏｄ　ｅｃ　ａｌ、、ＧｅｎｅｔｉｃＭ）Ｌ
ｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｌ’　ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃ
ｅｓ、Ａ　１．ａＬ）ｏｒａＬｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｔ
ｈｅ　Ｊｏｈｎ　Ｉｎｎｅｓ　Ｆｏｕｎｄａｔｌｏｎ、
Ｎｏｒｖｊｅｈ。
Ｅｎｇｌａｎｄ（１９８５）、ｐａｇｅ２３３））で培
養し、Ｐ　Ｔ　Ｔ　濃度を増加させながら加えた。１Ｈ
ｆｆｉ１００μｚ　／　ｍｌで、約１０５のコロニーに
つき１つの耐性コロニーが見出された。
例２：ベクターの調製 プラスミドｐｓＶＨ１（欧州特許第 ０．０７０．５２２号明細書、米国特許第４．６７３，
６４２号明細書）をＢｇｌＩＩで切断し、大きさ約７．
１ｋｂの断片を分離し、チオストレプトン耐性の１．１
ｋｂＢｃｌｌ断片と連結させる（欧州特許出願公開第０
．１５８，２０１号）。大きさが約８．１５ｋｂのプラ
スミドｐＥＢ２が得られる（第２図）。
例３：耐性遺伝子の分離 全ＤＮＡを例１の選択様から分離し、これをＢａｍＨＩ
で切断する。プラスミドｐＥＢ２をＢａｍＨＩで同様に
開環し、２つの混合物を合わせ、連結させる。連結混合
産物でＳ、リビダンスＴＫ２３（ジョン・インズ・ファ
ンデーションから人手可能）を形質転換すると、約１〜
５ｋｂの挿入物をＨする５０００〜１００００個の形質
転換株が連結混合産物１μｇ当たりから得られる。
ＰＴＴ耐性について選別により２つの耐性Ｓ、リビダン
スコロニーが得られる。取込まれたプラスミドを後者か
ら分離し、ＢａｍＨＩで切断する。
耐性の要因となる遺伝子を含む４ｋｂＢａｍＨＩ断片が
見出される。このプラスミドをｐＰＲｌ（第３図）と命
名した。
Ｓ、リビダンスＴＫ２３の再形質転換により形質転換株
はＰＴＴ１００μｚ　／　ｍｌ含Ｈ最少培地で増殖する
ことから、ＰＴＴ耐性がプラスミドにコードされている
ことが示される。
例４：Ｎ−アセチル化によるＰＴＣ不活性化の証明 クローニングした断片のアセチル化活性を証明するため
に、ド記株を試験した：Ｓ、ピリドクロモゲネスＤＳＭ
４０７３６、Ｓ、ピリドクロモゲネス（ＰＴＴ耐性変異
株）、Ｓ、リビダンスＴ　Ｋ２３及びＳ、リビダンスＴ
Ｋ２３　（ｐＰＲｌ）。
そのためには、株を溶菌培地Ａ（欧州特許出願公開箱０
．１５８，８７２号、第６頁）に接種し、かつオービタ
ルシェーカー（ｏｒｂｌＬａｌ　５ｈａｋｅｒ）中３０
℃で２０間インキニベーションすることが必要である。
回収後、閑糸体１１１１ｇを適当な緩衝液〔例えばＲＳ
緩衝液ニジ−・ジエイ・トムソンら、ジャーナル・オブ
・バクテリオロジー、第１５１巻、１９８２年、第６７
８−６８５頁（Ｃ，Ｊ、Ｔｈｏ−ｍｐｓｏｎ　ｅｔ　ａ
ｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ　１５１（＋９８２）、６７８−６８５）　）生起
音波で破壊する。ＰＴＣ分解を測定するための典型的実
験操作法は下記のとおりである。
ＰＴＣ（２５０μｇ／ｍｌ）溶液１００μｌ及びアセチ
ルＣｏＡ（４αｇ／ｍ１）５０μｌを粗抽出物２５０μ
ｍに加え、混合物を３０℃で２時間インキュベーション
する。その時点でもなお存在するＰＴＣ量をＨＰＬＣで
測定する。この結果は以下のとおりである。
Ｓ、リビダンスＴ　Ｋ　２３　　　１００％Ｓ、ピリド
クロモゲネス　　　　７２９６（ＤＳＭ４０７３６） Ｓ、ピリドクロモゲネス　　　　　７９６選択株 Ｓ、リビダンスＴＫ２３　　　　３１％（ｐ　ＰＲ１） 薄層クロマトグラフィーによる参照物質にンヒドリンで
染色されない）との比較は、ＰＴＣのＮ−アセチル化が
生じたことを示すものである。
ψυＬ　　（（４ｊｕｃＤＬ　　龜　　１ｃ　ＩＩ　ｔ
りυ−（１（ト龜　　　　　ψＳ　Ｃ（Ｌｌ’ｌ　（ヒ
（ヘ　　　　　　　　　ｈ　　　　　　　　　１　　　
　　　　　　　　嘴　　　　　　　　　冑
【図面の簡単な説明】 第１図は、本発明によるＰＴＣ耐性遺伝子の制限地図で
ある。 第２図は、プラスミドｐＥ８２の制限地図である。 第３図は、プラスミドｐＰＲ１の制限地図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ホスフィノトリシル−アラニル−アラニン（ＰＴＴ
    ）に耐性のストレプトミセス・ビリドクロモゲネスＤＳ
    Ｍ４１１２を選別し、耐性株由来全ＤＮＡをＢａｍＨＩ
    で切断し、大きさ４．０ｋｂ断片をクローニングし、更
    にＰＴＴ耐性について選別することにより得ることがで
    きる、ホスフィノトリシン（ＰＴＣ）耐性遺伝子。 ２、第１図に示された制限地図を有する、特許請求の範
    囲第１項記載の遺伝子。 ３、後記のＤＮＡ配列Ｉの２５８−８０６位を有する、
    特許請求の範囲第１項記載の遺伝子。 ４、植物ゲノム中に特許請求の範囲第１項記載の遺伝子
    を組込むことからなる、ＰＴＣ耐性植物の製造法。 ５、植物ゲノム中に特許請求の範囲第２項記載の遺伝子
    を組込むことからなる、ＰＴＣ耐性植物の製造法。 ６、植物ゲノム中に特許請求の範囲第３項記載の遺伝子
    を組込むことからなる、ＰＴＣ耐性植物の製造法。 ７、特許請求の範囲第１項記載の遺伝子を含んでなる、
    細菌に於けるＰＴＴ耐性マーカー。 ８、特許請求の範囲第２項記載の遺伝子を含んでなる、
    細菌に於けるＰＴＴ耐性マーカー。 ９、特許請求の範囲第３項記載の遺伝子を含んでなる、
    細菌に於けるＰＴＴ耐性マーカー。 １０、特許請求の範囲第１項記載の遺伝子を含んでなる
    、植物細胞に於けるＰＴＣ耐性マーカー。 １１、特許請求の範囲第２項記載の遺伝子を含んでなる
    、植物細胞に於けるＰＴＣ耐性マーカー。 １２、特許請求の範囲第２項記載の遺伝子を含んでなる
    植物細胞に於けるＰＴＣ耐性マーカー。 １３、ラセミＰＴＣを、特許請求の範囲第１項記載の遺
    伝子を発現する細胞又はこの遺伝子でコードされた酵素
    と接触させることからなる、ラセミＰＴＣのＬ型の選択
    的Ｎ−アセチル化法。 １４、ラセミＰＴＣを、特許請求の範囲第２項記載の遺
    伝子を発現する細胞又はこの遺伝子でコードされた酵素
    と接触させることからなる、ラセミＰＴＣのＬ型の選択
    的Ｎ−アセチル化法。 １５、ラセミＰＴＣを、特許請求の範囲第３項記載の遺
    伝子を発現する細胞又はこの遺伝子でコードされた酵素
    と接触させることからなる、ラセミＰＴＣのＬ型の選択
    的Ｎ−アセチル化法。
JP62209123A 1986-08-23 1987-08-22 ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用 Expired - Lifetime JPH0797994B2 (ja)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863628747 DE3628747A1 (de) 1986-08-23 1986-08-23 Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung
DE3637307 1986-11-03
DE19863642829 DE3642829A1 (de) 1986-08-23 1986-12-16 Resistenzgen gegen phosphinothricin
DE3628747.4 1987-01-08
DE19873700313 DE3700313A1 (de) 1986-08-23 1987-01-08 Verwendung eines resistenzgens gegen phosphinothricin
DE3637307.9 1987-01-08
DE3700313.5 1987-01-08
DE3642829.9 1987-01-08

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2049140A Division JP2749424B2 (ja) 1986-08-23 1990-02-28 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
JP6249627A Division JPH07147985A (ja) 1986-08-23 1994-10-14 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6371183A true JPS6371183A (ja) 1988-03-31
JPH0797994B2 JPH0797994B2 (ja) 1995-10-25

Family

ID=27433686

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62209123A Expired - Lifetime JPH0797994B2 (ja) 1986-08-23 1987-08-22 ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用
JP2049140A Expired - Lifetime JP2749424B2 (ja) 1986-08-23 1990-02-28 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
JP6249627A Pending JPH07147985A (ja) 1986-08-23 1994-10-14 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
JP8268910A Expired - Lifetime JP2815847B2 (ja) 1986-08-23 1996-10-09 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2049140A Expired - Lifetime JP2749424B2 (ja) 1986-08-23 1990-02-28 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
JP6249627A Pending JPH07147985A (ja) 1986-08-23 1994-10-14 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
JP8268910A Expired - Lifetime JP2815847B2 (ja) 1986-08-23 1996-10-09 ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0257542B1 (ja)
JP (4) JPH0797994B2 (ja)
CN (2) CN1040772C (ja)
AT (1) ATE75776T1 (ja)
AU (1) AU604743B2 (ja)
CA (1) CA1337597C (ja)
DK (1) DK175254B1 (ja)
ES (1) ES2038631T3 (ja)
FI (1) FI100251B (ja)
GR (1) GR3005200T3 (ja)
HU (1) HU217208B (ja)
IL (1) IL83604A (ja)
NZ (1) NZ221526A (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01503434A (ja) * 1986-03-11 1989-11-22 プラント・ジエネテイツク・システムズ・エヌ・ベー グルタミン合成酵素阻害剤に対する耐性を有する遺伝子操作により得られた植物細胞及び植物、前記細胞及び植物を産生するために使用するｄｎａフラグメント及び組換え体
US7795505B2 (en) 2004-11-17 2010-09-14 Hokko Chemical Industry Co., Ltd. Herbicide-resistance gene and utilization thereof

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN87100603A (zh) * 1987-01-21 1988-08-10 昂科公司 抗黑素瘤疫苗
DE3716309A1 (de) * 1987-05-15 1988-11-24 Hoechst Ag Resistenzgen gegen phosphinothricin
DE3732972A1 (de) * 1987-07-02 1989-01-12 Hoechst Ag Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung
DE4126414A1 (de) * 1991-08-09 1993-02-11 Hoechst Ag Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung
DE4222407C1 (de) * 1992-07-08 1993-10-07 Max Planck Gesellschaft Modulartiges Promotor-Konstrukt
AR008158A1 (es) * 1996-09-05 1999-12-09 Syngenta Participations Ag Proceso para el control de malas hierbas en cultivos de plantas utiles que son resistentes a un fosfo-herbicida y una composicion herbicida para dicho uso.
US6586367B2 (en) 1996-09-05 2003-07-01 Syngenta Crop Protection, Inc. Process for the control of weeds
DE19836659A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Baumwollkulturen
DE19836660A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
DE19836700A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Getreidekulturen
HU230844B1 (en) 1998-08-13 2018-08-28 Bayer Ip Gmbh Herbicides for tolerant or resistant corn cultures
DE19836684A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Reiskulturen
DK1481068T3 (da) 2002-02-26 2011-05-30 Syngenta Ltd Fremgangsmåde til selektivt at producere mandlige eller kvindelige sterile planter
KR100743611B1 (ko) * 2006-03-28 2007-08-01 최광술 산업용 로봇의 케이블 조절장치
AR074941A1 (es) 2009-01-07 2011-02-23 Bayer Cropscience Sa Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion
UY33142A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
BR112012015690A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
AU2010334815B2 (en) 2009-12-23 2015-07-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
UY33140A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
MX2012007360A (es) 2009-12-23 2012-11-06 Bayer Ip Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd.
CN103025166A (zh) 2010-05-21 2013-04-03 拜耳知识产权有限责任公司 用于耐受性或抗性谷物作物的除草剂
CN103025167A (zh) 2010-05-21 2013-04-03 拜耳知识产权有限责任公司 用于耐受性或抗性稻栽培种的除草剂
AU2011254589B2 (en) 2010-05-21 2015-04-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Herbicidal agents for tolerant or resistant rape cultures
AR084387A1 (es) 2010-05-21 2013-05-15 Bayer Cropscience Ag Agentes herbicidas para cultivos de maiz tolerantes o resistentes
WO2012004013A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Bayer Bioscience N.V. Glucosinolate transporter protein and uses thereof
WO2012101118A1 (en) 2011-01-24 2012-08-02 Bayer Cropscience N.V. Use of the rd29 promoter or fragments thereof for stress-inducible expression of transgenes in cotton
EP2524602A1 (de) 2011-05-20 2012-11-21 Bayer CropScience AG Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
UA117816C2 (uk) 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
DE202014101590U1 (de) 2014-04-03 2014-04-29 Igus Gmbh Führungssystem für Versorgungsleitungen und Roboter mit Führungssystem

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3765449D1 (de) * 1986-03-11 1990-11-15 Plant Genetic Systems Nv Durch gentechnologie erhaltene und gegen glutaminsynthetase-inhibitoren resistente pflanzenzellen.

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01503434A (ja) * 1986-03-11 1989-11-22 プラント・ジエネテイツク・システムズ・エヌ・ベー グルタミン合成酵素阻害剤に対する耐性を有する遺伝子操作により得られた植物細胞及び植物、前記細胞及び植物を産生するために使用するｄｎａフラグメント及び組換え体
US7795505B2 (en) 2004-11-17 2010-09-14 Hokko Chemical Industry Co., Ltd. Herbicide-resistance gene and utilization thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU7731887A (en) 1988-05-19
JPH09107981A (ja) 1997-04-28
DK437887A (da) 1988-02-24
EP0257542A3 (en) 1990-03-07
JPH0797994B2 (ja) 1995-10-25
JPH03103193A (ja) 1991-04-30
DK175254B1 (da) 2004-07-26
HUT44621A (en) 1988-03-28
ATE75776T1 (de) 1992-05-15
IL83604A0 (en) 1988-01-31
JP2749424B2 (ja) 1998-05-13
CN87105764A (zh) 1988-11-30
FI873610L (fi) 1988-02-24
CN1225393A (zh) 1999-08-11
IL83604A (en) 2004-02-19
FI873610A0 (fi) 1987-08-20
FI100251B (fi) 1997-10-31
JP2815847B2 (ja) 1998-10-27
CN1124347C (zh) 2003-10-15
GR3005200T3 (ja) 1993-05-24
HU217208B (hu) 1999-12-28
EP0257542A2 (de) 1988-03-02
NZ221526A (en) 1989-03-29
DK437887D0 (da) 1987-08-21
CA1337597C (en) 1995-11-21
EP0257542B1 (de) 1992-05-06
AU604743B2 (en) 1991-01-03
JPH07147985A (ja) 1995-06-13
CN1040772C (zh) 1998-11-18
ES2038631T3 (es) 1993-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5273894A (en) Phosphinothricin-resistance gene, and its use
JP2749424B2 (ja) ホスフィノトリシン耐性遺伝子の使用
US5637489A (en) Phosphinothricin-resistance gene, and its use
AU622662B2 (en) Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode deacetoxycephalosporin c synthetase
Hammer et al. Four genes from Pseudomonas fluorescens that encode the biosynthesis of pyrrolnitrin
US6372479B1 (en) Fusarium sporotrichioides strains for production of B-carotene
JPH10229885A (ja) 新規アルコールアルデヒド脱水素酵素
Best et al. Organization and nucleotide sequences of the genes encoding the biotin carboxyl carrier protein and biotin carboxylase protein of Pseudomonas aeruginosa acetyl coenzyme A carboxylase
NZ224602A (en) Phosphinothricin (ptc)-resistance gene; isolation and incorporation into plants and bacterial populations
WO1989006688A2 (en) Novel enzyme
JP3289726B2 (ja) クラバラン酸の生合成遺伝子
DE68920987T2 (de) Rekombinante DNA enthaltende Expressionsvektoren und für Isopenicillin-N-Epimerase-(Racemase)-Aktivität kodierende DNS-Verbindungen.
EP0583817B1 (en) A transformant capable of producing D-amino acid oxidase
HU220798B1 (hu) A butiro-betain/krotono-betain-L-karnitin-anyagcsere génjeit kódoló DNS-molekulák és alkalmazásuk L-karnitin mikrobiológiai előállítására
US5068189A (en) Recombinant dna vectors encoding a 4"-o-isovaleryl acylase derived from a carbomycin biosynthetic gene, designated care, for use in streptomyces and other organisms
JP3009257B2 (ja) アスパルターゼをコードする遺伝子ｄｎａ及びその利用
KR100514964B1 (ko) 클라불란산 생산이 증가된 미생물
JP2003533166A (ja) オイゲノールおよびフェルラ酸の異化作用の特異的不活性化遺伝子による置換フェノール生産のための生産株の構築
JP3658323B2 (ja) トレハロースシンターゼ蛋白質、遺伝子、プラスミド、微生物、及びトレハロースの製造方法
US6210935B1 (en) Staurosporin biosynthesis gene clusters
US5989903A (en) Strain for the production of 6-dimethyltetracycline, method for producing the strain and vector for use in the method
JP3330670B2 (ja) アルケンモノオキシゲナーゼ、これをコードする遺伝子及び形質転換微生物並びにアルケンのエポキシ化方法
CA2188257A1 (en) Dna encoding cephamycin biosynthesis late enzymes
Jin et al. Genetic analysis on bioconversion of aniline to acetaminophen in Streptomyces fradiae
EP0245523A1 (en) Dna chain containing streptomycin-resistant gene and capable of regulating manifestation of said gene

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term