KR20120061908A

KR20120061908A - 암 줄기세포-표적 및 약물 내성 암 치료

Info

Publication number: KR20120061908A
Application number: KR1020127007326A
Authority: KR
Inventors: 앙겔리카 뷔르게르
Original assignee: 코미녹스 인코포레이티드
Priority date: 2009-09-10
Filing date: 2010-09-09
Publication date: 2012-06-13
Also published as: WO2011031890A4; WO2011031890A3; PT2475362T; IN2012DN02008A; TW201114430A; CA2772411C; EP2475362A2; US20110059186A1; TR201905548T4; AU2010292192B2; CA2772411A1; WO2011031890A2; CY1121973T1; KR101721009B1; BR112012008315B1; LT2475362T; SG10201608967WA; RU2568834C2; TWI564012B; AR079000A1

Abstract

본 발명은 약물 내성 암 줄기세포 집단 뿐만 아니라 약물 내성 성숙 암 세포를 감소 또는 제거하는 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공한다.

Description

암 줄기세포-표적 및 약물 내성 암 치료{CANCER STEM CELL-TARGETED AND DRUG RESISTANT CANCER THERAPY}

관련 출원에 대한 전후 참조

본 출원은 미국 가출원 제 61/241,180호(2009년 9월 10일 출원)에 대한 우선권을 주장하며, 이의 전문이 본 명세서에 참조로 편입된다.

발명의 분야

본 발명은 암 세포를 예방, 치료, 감소 또는 제거하기 위한 방법 및 약학 조성물을 제공하며; 보다 구체적으로 본 발명은 암 줄기세포 및 약물 내성 암 세포를 감소 또는 제거하는 소디움 메타 아르세나이트의 예방 및/또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법을 제공한다.

인간 말단 소립(telomere)은 (TTAGGG)n 헥사뉴클레오타이드 반복을 포함하여 구성된 염색체 말단에 있는 논-코딩 DNA-서열이다. 각각의 세포 분열 도중에, 말단 소립 DNA(30-100bp)는 말단-복제 문제(end-replication problem) 때문에 소실된다(Blackburn D.H., Nature, 408:53-56, 2000 & Phatak, P. 등., Br. J. Pharmacol., 152:1003-11, 2007). 말단 소립은 염색체 무결성을 유지시키며, 결함 유전자의 복제를 억제시킨다. 염색체는 제한된 양의 말단 소립 DNA를 가진 채로 생을 시작하기 때문에, 세포는 말단 소립의 임계적 길이에 이르기 전까지 단지 한정된 수의 분열을 겪는다. 정상 세포가 임계적 말단 소립 길이에 이를 경우에, 이들은 세포 주기를 빠져나와 반복 서열을 받게 된다(Phatak, P. 등., Br. J. Pharmacol., 152: 1003-11, 2007 & Holt, S.E. 등., Nature Biotechnol., 14: 1734-1741, 1996). 그러나, 정상 세포에서 악성 세포로의 초기 종양형성 도중에, 말단 소립은 약화되나, 그 다음 효소 텔로머라아제의 재활성화를 통해 대부분 짧지만 안정한 길이로 유지된다(Blackburn D.H., Nature, 408:53-56, 2000; Phatak, P. 등., Br. J. Pharmacol, 152: 1003-11, 2007 & Holt, S.E. 등., Nature Biotechnol., 14: 1734-1741, 1996). 텔로머라아제는 리보핵산 단백질 역전사 효소(ribonucleoprotein reverse transcriptase)이며, 이는 새로운 말단 소립 반복의 부가를 위한 주형 및 촉매 소단위 hTERT(인간 텔로머라아제 역전사 효소)로 작용한다. 텔로머라아제는 암 세포가 유한 증식의 기본적 한계를 극복하도록 하며, 이들을 불멸 상태로 만든다. 따라서, 텔로머라아제 및 말단 소립은 항암 치료를 위한 유망한 표적으로 부각되었다(Phatak, P. 등., Br. J. Pharmacol., 152: 1003-11, 2007, Chumsri, S. 등., Curr. Opin. Mol. Ther. 10: 323-333, 2008).

암에 대해 효과적이며 궁극적으로 치유력이 있는 치료법을 개발하는데 있어서 주요 문제는 암은 이종성이며, 성숙 세포들 뿐만 아니라 줄기세포라고 칭하여지는 자기 재생에 관여하는 세포들을 함유하고 있다는 사실에 있다. 현재의 세포독성 항암제는 주로 성숙 세포 집단을 사멸하는데 목적을 두지만, 암 줄기세포를 근절하지 못한다. 결과적으로, 암은 종종 재발하고, 그 다음 종양은 보다 공격적인 줄기세포성 약물 내성 암세포를 포함하게 된다(Chumsri,S. 등., Curr. Opin. Mol. Ther. 10: 323-333, 2008). 따라서, 약물 내성 암 줄기세포 및 성숙 암 세포를 포함하는 성숙 세포 및 줄기세포성 암 세포 모두를 감소시키거나 제거하기 위해 텔로머라아제를 억제하거나 말단 소립을 표적할 수 있는 새로운 치료제 및/또는 요법이 요구된다.

본 발명의 일 견지로, 환자에서 난치성 형태(refractive form)의 암을 치료하는 방법이 제공된다. 이는 환자에게 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트(NaAsO₂ 또는 KML001) 단독 또는 이를 다른 항암제(들)와 병용하여 투여함으로써 이루어진다. 특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트는 하루에 1회 이상 0.1-20mg의 단위 투여량으로 투여된다. 특정 구현으로, 환자는 소디움 메타 아르세나이트로 치료받은 후에 줄기세포 집단의 존재에 대해 모니터된다. 다른 특정 구현으로, 환자는 소디움 메타아르세나이트로 치료받은 후에 4년까지 또는 그 이상의 기간동안 줄기세포 집단의 존재에 대해 모니터될 수 있다. 특정 구현으로, 상기 난치성 형태의 암은 전립선암, 폐암, 림프종 또는 백혈병이다.

본 발명의 다른 견지로, 정상 혈청 IL-6 수준 보다 높은 혈청 IL-6을 갖는 암 환자 치료 방법으로서, 상기 환자에게 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트를 투여하는 단계, 및 최종 소디움 메타 아르세나이트 치료 후에 환자의 혈청 IL-6 수준을 모니터하는 것을 포함하는, 암 환자 치료 방법이 제공된다. 환자의 IL-6 수준 모니터링은 소디움 메타 아르세나이트 치료 종결 후에 4년까지 또는 그 이상의 기간동안 주기적으로 행해질 수 있다.

본 발명의 다른 견지로, 약물 내성 형태의 암으로 고통받는 환자에서 항암제의 효능을 증진시키는 방법으로서, 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트 및 상기 암이 약물 내성인 것으로 나타난 항암제를 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 약물 내성 형태의 암으로 고통받는 환자에서 항암제의 효능을 증진시키는 방법이 제공된다.

본 발명의 다른 견지로, 환자에서 암 세포가 이전에는 내성적이었던 항암제에 대해 난치성 암 세포를 민감하게 만드는(sensitizing) 방법으로서, 치료적으로 유효한 양의 각 소디움 메타 아르세나이트 및 상기 항암제를 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암 세포가 이전에는 내성적이었던 항암제에 대해 난치성 암 세포를 민감하게 만드는 방법이 제공된다. 상기 항암제는 소디움 메타 아르세나이트 치료 요법의 투여 전에, 소디움 메타 아르세나이트 치료 요법의 종결 후에 또는 소디움 메타 아르세나이트 치료 요법의 투여 도중에 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 견지로, 환자에서 암의 재발을 억제 또는 예방하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 하나 이상의 항암제를 이용한 치료 요법의 종결 후에 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현으로, 상기 환자는 소디움 메타 아르세나이트를 이용한 치료 후에 암 줄기세포 집단의 존재에 대해 모니터된다. 모니터링은 4년까지 또는 그 이상의 기간동안 주기적으로 행해질 수 있다.

특정 이론이나 메카니즘으로 규정하려는 것은 아니나, 암 줄기세포 집단의 감소 또는 제거는 암 줄기세포 집단에 의해 생성되는 암 세포 집단을 감소 또는 제거하여, 이에 따라 종양의 성장, 종양의 규모 치수, 종양의 형성 및/또는 전이의 형성을 감소 또는 제거한다. 즉, 암 줄기세포 집단의 감소 또는 제거는 종양의 형성, 재형성 또는 성장 및/또는 암 세포의 전이를 억제한다.

일 견지에 따르면, 본 발명은 약물 내성 암 줄기세포 집단을 감소 또는 제거하기에 충분한 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 견지와 관련된 다른 구현으로, 상기 암 줄기세포 집단은 파클리탁셀에 내성적이다. 다른 관련 구현으로, 상기 암 줄기세포 집단은 도세탁셀에 내성적이다.

도 1a는 DU145wt 및 Doc50 내성 세포에서 Hoechst 33342 염료를 이용한 사이드 집단(side population)(SP)의 검출을 나타낸다. 도 1b는 유동 세포 분석법(flow cytometry)에 의해 측정된 wt 및 내성 클론에서 Pgp의 세포 표면 발현을 나타낸다. 백색 곡선 = PE(피코에리틴)-아이소타입 대조군 염색 세포이며, 그리고 회색 곡선 = Pgp 양성 세포임. 도 1c는 wt 및 탁산-내성 DU145 세포에서 아이소타입 대조군(백색 곡선)과 비교한 CD44 염색(회색 곡선)의 히스토그램을 나타낸다. 도 1d는 MTT 어세이에서 도세탁셀(docetaxel)로 처리된 경우 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀 및 DU154wt 세포와 비교한 성장 곡선을 나타낸다. 도 1e는 MTT 어세이에서 KML001로 처리된 경우 파클리탁셀, 도세탁셀 및 DU154wt 세포와 비교한 성장 곡선을 나타낸다.
도 2a는 DCV 염료로 염색된 DU145wt 세포의 사이드 집단을 나타낸다. 도 2b는 BCRP/ABCG2 인히비터 푸미트레모르긴 C(FTC)로 처리된 DU145wt의 사이드 집단을 나타낸다. 도 2c는 Pgp/ABCB1 인히비터 베라파밀로 처리된 DU145wt의 사이드 집단을 나타낸다.
도 3a는 일반(대조군) 배지로 처리된 DU145wt를 나타낸다. 도 3b는 72시간동안 IC100 농도(13μM)로 KML을 함유하는 전처리된 배지를 함유하는 DU145wt를 나타낸다.
도 4a는 KML001로 처리된 DU145/Pac200을 보여주는 MTT 증식 어세이를 나타낸다. 도 4b는 GRN163L로 처리된 DU145/Pac200을 보여주는 MTT 증식 어세이를 나타낸다.
도 5a는 DCV 염료로만 처리된 DU145/Pac200의 사이드 집단을 나타낸다. 도 5b는 DCV 및 푸미트레모르긴 C(FTC)로 처리된 DU145/Pac200의 사이드 집단을 나타낸다. 도 5c는 DCV 및 베라파밀로 처리된 DU145/Pac200의 사이드 집단을 나타낸다. 도 5d는 IC100 농도로 KML001로 처리된 DU145/Pac200을 보여주는 사이드 집단 어세이를 나타낸다. 도 5e는 IC100 농도로 GRN163L로 처리된 DU145/Pac200을 보여주는 사이드 집단 어세이를 나타낸다.
도 6a 및 6b는 미처리된 세포주와 KML001 처리된 세포주에서 형성된 평균 수의 콜로니로서 콜로니 형성 분석법(clonogenic assay)에서 전립선 암세포(각각, DU145 및 DU145/pac200)의 성장을 나타낸다.
도 7은 전립선 암세포주, DU145/pac200로부터 얻어진 미분류 세포, SP- 분획 및 SP+ 분획을 비교한 KML001로 5일간 처리된 스탠다드 MTT로 부터 얻어진 성장 곡선이다.
도 8a 및 8b는 정량 RT-PCT에 의해 측정된 hTERT 유전자 발현을 나타낸다. A. 분류된 분획에서 텔로머라아제 mRNA 전사 수준: DU145/pac200 SP- 분획 및 SP+ 분획은 유사한 발현 수준을 갖는다. B. IC50 및 IC100으로 KML001 처리 72시간 후 스탠다드 MTT에 의해 측정된 hTERT 발현 수준 감소.

본 발명은 포유류, 특히 사람에서 암을 예방, 치료, 및/또는 관리하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 암 줄기세포 집단 뿐만 아니라 약물 내성 성숙 암 세포 및 약물 내성 암 줄기세포를 감소 또는 제거하는 치료적으로 유효한 양의 소디움 메타 아르세나이트를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 소디움 메타 아르세나이트(KML001), 전립선 암의 치료용으로 임상 시험 단계 I/II에 있는 약물이 텔로머라아제의 촉매 소단위 및 말단 소립 모두를 표적할 수 있으며 케모-네이브(chemo-naive) 및 화학치료-내성 전립선 암 세포주의 성숙 및 줄기세포 집단의 성장을 억제할 수 있다는 발견에 일부 기초한다.

정의

본 명세서에 사용된, 용어 "암 줄기세포(들)(cancer stem cell(s))"는 고 증식성 암 세포의 전구세포일 수 있는 세포를 칭한다. 암 줄기세포는 마우스와 같이 면역약화된 포유류에서 종양을 형성하며, 전형적으로는 마우스와 같이 면역약화된 포유류에서 후속된 연속 이식시 종양을 형성하는 능력을 나타내는 종양 재성장 능력을 갖는다. 암 줄기세포는 또한 전형적으로 종양의 규모에 비해 느리게 성장한다. 즉, 암 줄기세포는 일반적으로 휴지 상태에 있다. 특정 구현으로, 반드시 그러한 것은 아니지만, 암 줄기세포는 종양의 약 0.1-20%에 해당할 수 있다.

본 명세서에 사용된, 용어 "항암제(anti-cancer agent)"는 약물, 면역치료, 표적 치료, 호르몬 치료, 알킬화제, 대사저해제, 안트라시클린, 식물 알칼로이드, 토포이소머라아제 인히비터, 키나아제 인히비터 및 다른 항종양제를 포함하는 화학치료, 수술 및 방사선 치료를 포함하는 어떠한 암 치료를 칭한다.

본 명세서에 사용된, 용어 "치료적으로 유효한 양(therapeutically effective amount)"은 암 줄기세포 또는 암의 발달, 재발 또는 시작 및 이의 하나 이상의 증상의 억제를 일으키거나, 다른 치료의 예방 효과(들)를 증진 또는 향상시키거나, 암의 중증도 및 기간을 감소시키거나, 암의 하나 이상의 증상을 완화시키거나, 암의 진전을 억제하거나, 암의 퇴행을 일으키거나, 혹은/그리고 다른 치료의 치료 효과(들)을 증진 또는 향상시키기에 충분한 소디움 메타 아르세나이트(SMA)의 양을 칭한다. 본 발명의 특정 구현으로, SMA의 치료적으로 유효한 양은 투여시 하기 결과들 중 하나, 둘 또는 셋, 또는 그 이상을 달성하기에 효과적인 양이다: (1) 암 줄기세포 집단의 감소 또는 제거; (2) 암 세포 집단의 감소 또는 제거; (3) 종양 또는 신생 세포(neoplasm)의 성장의 감소; (4) 종양 형성의 장애; (5) 일차, 국부적 및/또는 전이성 암의 근절, 제거 또는 조절; (6) 사망률의 감소; (7) 무병(disease-free), 무재발(relapse-free), 무진행(progression-free) 및/또는 전반적인 생존기간 또는 생존율의 증가; (8) 반응 속도, 반응 지속성, 또는 반응하거나 차도가 있는 환자 수의 증가; (9) 종양의 크기가 유지되고 증가하지 않거나, 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 4% 미만, 또는 2% 미만으로 증가함; (10) 차도가 있는 환자 수의 증가; (11) 차도의 길이 또는 기간의 증가; (12) 암 재발률의 감소; (13) 암 재발에 대한 시간의 증가; (14) 암-관련 증상 및/또는 삶의 질 개선 및 (15) 암 세포의 약물 내성 감소.

본 명세서에 사용된, 용어 "치료적으로 유효한 요법(therapeutically effective regimen)"은 암 또는 이의 증상의 치료 및/또는 관리를 위한 소디움 메타 아르세나이트의 투여, 투여시기, 투여빈도 및 투여기간에 대한 요법을 칭한다. 특정 구현으로, 상기 요법은 하기 결과 중 하나 이상을 달성한다: (1) 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소 또는 제거; (2) 암 세포 집단의 감소 또는 제거; (3) 종양 또는 신생 세포의 성장의 감소; (4) 종양 형성의 장애; (5) 일차, 국부적 및/또는 전이성 암의 근절, 제거 또는 조절; (6) 사망률의 감소; (7) 무병, 무재발, 무진행 및/또는 전반적인 생존기간 또는 생존율의 증가; (8) 반응 속도, 반응 지속성, 또는 반응하거나 차도가 있는 환자 수의 증가; (9) 입원율의 감소; (10) 입원 기간의 감소; (11) 종양의 크기가 유지되고 증가하지 않거나, 10% 미만, 바람직하게는 5% 미만, 바람직하게는 4% 미만, 바람직하게는 2% 미만으로 증가함; 및 (12) 차도가 있는 환자 수의 증가; (13) 암 세포가 난치성인 약물 또는 약물들에 대한 암 줄기세포를 포함하는 암 환자의 약물 내성 암 세포의 민감도 증가.

본 명세서에 사용된, 용어 "대상자(subject)" 및 "환자(patient)"는 호환적으로 사용될 수 있다. 본 명세서에 사용된, 용어 "대상자"는 동물, 바람직하게 비-영장류(예, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 및 영장류(예, 원숭이 및 인간)와 같은 포유류 및 가장 바람직하게는 인간을 칭한다. 일부 구현으로, 상기 대상자는 농장 동물(예, 말, 돼지 또는 소) 및 애완동물(예, 개 또는 고양이)과 같은 인간이 아닌 동물이다. 특정 구현으로, 상기 대상자는 노령 인간이다. 다른 구현으로, 상기 대상자는 성인 인간이다. 다른 구현으로, 상기 대상자는 아동 인간이다. 다른 구현으로, 상기 대상자는 유아 인간이다.

본 명세서에 사용된, 용어 "차도(remission)"는 암 활성의 회복 가능성을 가진 검출가능한 암의 부재로 입증되는 대상자의 건강 상태를 의미한다.

암 줄기세포는 종양의 독특한 소 집단(보통 0.1-10% 정도이나 0.1-20% 이상과 같이 많을 수 있음)을 포함하며, 종양의 나머지 90% 정도(즉, 종양 벌크)에 비해 보다 발암성이며, 상대적으로 보다 느리게 성장하거나 휴지 상태에 있으며, 그리고 종양 벌크에 비해 보통 상대적으로 보다 내화학성이다. 통상적인 치료 및 요법이 주어지면, 대부분 신속히 증식하는 세포들(즉, 종양 벌크를 포함하는 암 세포들)를 공격하도록 디자인되고, 보통 느리게 성장하는 암 줄기세포는 이보다 신속히 성장하는 종양 벌크에 비해 통상적인 치료 및 요법에 대해 상대적으로 내성적으로 될 수 있다. 암 줄기세포는 다중-약물 내성 및 항세포사멸 경로와 같이 상대적으로 화학내성적으로 만드는 다른 특징들을 발현할 수 있다. 앞서 언급된 사항들은 후기 단계의 암을 가진 대부분의 환자에서 장기간의 효과를 보장하기 위한 표준 종양학 치료 요법의 실패, 즉, 암 줄기세포를 적절히 표적하고 근절하는 것에 대한 실패에 대한 주요 이유에 해당할 수 있다. 일부 예로, 암 줄기세포(들)는 종양의 시조 세포이다(즉, 이는 종양 벌크를 포함하는 암 세포들의 전구세포이다.).

암 줄기세포는 매우 다양한 타입의 암으로 확인되었다. 예를 들어, Bonnet 등은 유동 세포 분석법을 이용하여 특정 표현형의 CD34+ CD38-을 갖는 백혈병 세포를 분리해 낼 수 있었으며, 후속적으로 (주어진 백혈병의 1% 미만을 포함하는) 이러한 세포들은, 대부분의 백혈병에서 잔존하는 99+%와는 달리, 면역결핍 마우스 내로 이식될 경우에 이로부터 유도되었을 때 백혈병을 재현할 수 있음을 입증할 수 있었다. 참조 예, "Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell," Nat Med 3:730-737 (1997). 즉, 이러한 암 줄기세포는 10,000 백혈병 세포에서 1미만으로 발견되었으나, 이러한 저 빈도 집단은 인간 백혈병을 본래의 종양에서와 동일한 조직학적 표현형을 갖는 증증의 복합 면역결핍/비-비만 당뇨병(NOD/SCID) 마우스로 개시되게 하고 연속적으로 전이할 수 있었다.

Cox 등은 표현형 CD34+/CD10- 및 CD34+/CD19-를 가지며, 면역약화된 마우스에 ALL 종양을 이식할 수 있었던 인간 급성 림프구성 백혈병(ALL) 세포의 소 분획, 즉, 암 줄기세포를 발견하였다. 이와 대조적으로, ALL 벌크를 사용하여도, 일부 경우에 10배 이상의 세포를 주입하여도 마우스의 이식이 안되는 것으로 관찰되었다. 참조 Cox 등., "Characterization of acute lymphoblastic leukemia progenitor cells," Blood 104(19): 2919-2925(2004).

다발성 골수종은 대부분의 집단이 CD138+ 골수성 세포인 데 비해 CD138-인 소 집단의 세포를 함유하는 것으로 발견되었으며, 이는 보다 큰 클론 형성능 및 발암성의 잠재력을 갖는 것으로 발견되었다. 참조 Matsui 등., "Characterization of clonogenic multiple myeloma cells," Blood 103(6): 2332. 상기 저자들은 다발성 골수종의 CD138-소 집단이 암 줄기세포 집단인 것으로 결론지었다.

Kondo 등은 C6-신경교종 세포주로부터 소 집단의 세포를 분리하였으며, 이는 면역약화된 마우스에서 신경교종을 자기 재생하고 재현하는 능력에 의해 암 줄기세포 집단으로 확인되었다. 참조 Kondo 등., "Persistence of a small population of cancer stem-like cells in the C6 glioma cell line," Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101: 781-786 (2004). 이 연구에서, Kondo 등은 암 세포주가 상기 암 세포주의 이식 능력을 면역결핍 마우스에 부여하는 암 줄기세포의 집단을 함유하는 것을 밝혀냈다.

유방암은 (표면 마커 CD44+CD24low를 함유하는) 줄기세포 특성을 갖는 소 집단의 세포를 함유하는 것으로 나타났다. 참조 Al-Hajj 등., "Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells," Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:3983-3988(2003). 총 종양 세포 집단의 1-10%에 해당하는 이러한 세포의 200 정도로 적은 세포들은 NOD/SCID 마우스에서 종양을 형성할 수 있다. 이에 반해, 이러한 표현형이 없는(즉, 종양 벌크) 20,000 세포들의 이식은 종양을 재성장시킬 수 없었다.

인간 전립선 종양으로부터 유도된 소 집단의 세포들은 이들로부터 유도되어 전립선 암 줄기세포 집단을 구성하는 전립선 종양의 표현형을 자기-재생하고 재현하는 것으로 발견되었다. 참조 Collins 등., "Prospective Identification of Tumorigenic Prostate Cancer Stem Cells," Cancer Res 65(23): 10946-10951(2005).

Fang 등은 암 줄기세포 특성을 가진 흑색종으로부터 소 집단의 세포들을 분리하였다. 특히, 이러한 소 집단의 세포들은 분화 및 자기-재생할 수 있었다. 배양시 상기 소 집단은 구(sphere)를 형성하였으나, 그 병소로부터 얻어진 보다 분화된 세포 분획은 보다 부착적이었다. 더욱이, 상기 소 집단을 함유하는 구형 세포들은 마우스로 이식될 경우에 부착된 세포들에 비해 더 발암성이었다. 참조 Fang 등., "A Tumorigenic Subpopulation with Stem Cell Properties in Melanomas," Cancer Res 65(20): 9328-9337(2005).

Singh 등은 뇌 종양 줄기세포를 발견하였다. 분리하여 누드 마우스 내로 이식하였을 경우, CD133+ 암 줄기세포는 CD133- 종양 벌크 세포와 달리 연속적으로 이식될 수 있는 종양을 형성한다. 참조 Singh 등., "Identification of human brain tumor initiating cells," Nature 432:396-401 (2004); Singh 등., "Cancer stem cells in nervous system tumors," Oncogene 23:7267-7273(2004); Singh 등., "Identification of a cancer stem cell in human brain tumors," Cancer Res. 63:5821-5828(2003).

통상적인 암 치료는 신속히 증식하는 세포들(즉, 종양 벌크를 형성하는 세포들)을 표적하기 때문에, 이러한 치료는 암 줄기세포의 표적 및 약화에 상대적으로 비효율적인 것으로 여겨진다. 실제로, 백혈병 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포는 통상적인 화학요법 치료(예, Ara-C, 다우노루비신) 뿐만 아니라 보다 신규한 표적 치료제(예, Gleevec®, Velcade®)에 상대적으로 내성적인 것으로 나타났다. 화학치료에 내성적인 다양한 종양의 암 줄기세포의 예 및 이들이 내성적인 것에 대한 메카니즘은 하기 표에 나타내었다.

예를 들어, 백혈병 줄기세포는 상대적으로 느리게 성장하거나 휴지 상태에 있으며, 다중-약물 내성 유전자를 발현하며, 이들의 화학내성에 기여하는 다른 항세포사멸 메카니즘-특징들을 이용한다. 참조 Jordan 등., "Targeting the most critical cells: approaching leukemia therapy as a problem in stem cell biology", Nat Clin Pract Oncol. 2: 224-225(2005). 또한, 이들의 화학내성에 의해 암 줄기세포는 치료 실패에 기여할 수 있으며, 또한 임상적 차도 후에 환자에서 만성적(persist)일 수 있어, 이에 따라 이러한 잔존 암 줄기세포는 나중에 재발에 기여할 수 있다. 참조 Behbood 등., "Will cancer stem cells provide new therapeutic targets?" Carcinogenesis 26(4): 703-711(2004). 따라서, 암 줄기세포 표적은 암 환자에 대해 향상된 장기 결과를 제공하는 것으로 예측된다. 따라서, 암 줄기세포를 표적하도록 디자인된 새로운 치료제 및/또는 요법이 이러한 목적을 달성하는데 요구된다.

본 발명은 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트를 이를 필요로 하는 대상자에게 투여함으로써 상기 목적을 달성한다.

이에 한정하는 것은 아니나, 신생물, 종양, 전이, 백혈병 또는 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 어느 질병이나 질환을 포함하는 암 또는 종양 질환(neoplastic disease)이 이를 필요로 하는 대상자에게 예방적으로 또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트를 투여함으로써 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있다.

본 발명은 성숙 암 세포 뿐만 아니라 암 줄기세포, 그리고 특히, 약물 내성 암 줄기세포를 감소 또는 제거하여 암을 예방, 치료, 및/또는 관리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상자에게 예방적으로 또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 약 5% 감소를 일으킨다. 특정 구현으로, 암 줄기세포 집단의 감소는 예를 들어, 소디움 메타 아르세나이트 치료의 종결 후 4년까지 또는 그 이상으로 주기적으로 모니터된다. 따라서, 특정 구현으로, 본 발명은 대상자에서 암의 재발을 예방, 암을 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 이를 필요로 하는 대상자에게 유효량의 소디움 메타 아르세나이트의 1 투여량 이상을 투여하는 단계; (b) 특정 수의 투여량의 투여 전, 투여 도중 및/또는 투여 후에 그리고 후속적인 투여량의 투여 전에 대상자에서 암 줄기세포 집단을 모니터하는 단계; 및 (c) 필요에 따라 단계 (a)를 반복함으로써 대상자에서 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 5% 감소를 검출하는 단계를 포함한다. 만일, 환자의 암 줄기세포 집단을 모니터링하는 과정 도중에 상기 줄기세포 집단이 증가되는 것이 나타날 경우에, 그 수행 의사는 동일하거나 다른 투여량 및/또는 투여 요법으로 환자에게 다시 소디움 메타 아르세나이트(단독 또는 다른 항암제와 함께)를 투여할 수 있다.

소디움 메타 아르세나이트는 (정맥내와 같이) 비경구, 복강내 또는 경구를 포함하는 어떠한 형태로 환자에게 투여될 수 있다. 일일 투여량은 하루에 걸쳐 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 소디움 메타 아르세나이트 치료 요법은 1 내지 10 연속일, 또는 1 내지 5, 4, 3 또는 2 연속일과 같이 1 내지 10일 사이의 어느 일수와 같이 1일 이상동안 일일 투여량의 투여를 포함할 수 있다. 선택적으로, 투여 요법은 예를 들어, 1주 내지 1개월동안, 예를 들어, 2일에 1회 또는 3일에 1회 또는 4일에 1회와 같이 또는 예를 들어, 3일의 무치료 연속일 후에 예를 들어, 3일의 치료 연속일과 같은 비연속 형태와 같이, 수일에 걸쳐 소디움 메타 아르세나이트의 투여량을 투여하는 것을 포함하며, 필요에 따라 패턴을 반복하거나 변형하는 것을 포함한다. 숙련된 수행자는 환자 건강, 나이, 크기, 약물 수용성 등에 기초하여 환자에게 최상의 결과를 달성하는데 필요한 소디움 메타 아르세나이트의 가장 효과적인 투여 방식 및 투여량을 용이하게 결정할 수 있다.

특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 98% 또는 99% 감소를 일으킨다. 예를 들어, 일부 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 약 5-99%, 5-80%, 5-40%, 10-99%, 10-80%, 10-60%, 10-40%, 20-99%, 20-80%, 20-60%, 20-40%, 50-98%, 50-80% 또는 60-99% 감소를 일으킨다.

다른 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 1.1배, 1.2배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 25배, 50배, 75배, 100배, 200배 또는 1000배 감소를 일으킨다. 일부 구현으로, 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소는 상기 요법의 투여 2주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 9개월, 1년, 2년, 3년 또는 4년 후에 발생한다. 암 줄기세포 집단을 검출하고, 암 줄기세포의 양의 변화를 측정하는 방법은 아래에 설명된다. 암 줄기세포의 증가가 모니터링 기간 도중에 검출되는 경우에, 그 환자는 다른 요법의 (이전 요법과 동일하거나 다른) 소디움 메타 아르세나이트 및/또는 다른 항암제(들)와 함께 치료받을 수 있다.

일부 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트 치료의 양 또는 요법은 암 세포 집단뿐만 아니라 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소를 일으킨다. 특정 구현으로, 암 세포 집단의 감소, 또는 암 세포 집단의 감소와 암 줄기세포 집단의 감소가 주기적으로 모니터된다. 따라서, 일 구현으로, 본 발명은 대상자에서 암을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 이를 필요로 하는 대상자에게 유효량의 소디움 메타 아르세나이트의 1 투여량 이상을 투여하는 단계; (b) 특정 수의 투여량의 투여 전, 투여 도중 및/또는 투여 후에 그리고 후속적인 투여량의 투여 전에 대상자에서 암 줄기세포 집단을 모니터하는 단계; 및 (c) 필요에 따라 단계 (a)를 반복함으로써 대상자에서 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 5% 감소를 검출하는 단계를 포함한다.

특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 암 세포 집단의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 98% 또는 99% 감소를 일으킨다. 예를 들어, 일부 구현으로, 상기 요법은 암 세포 집단의 약 2-98%, 5-80%, 5-40%, 10-99%, 10-80%, 10-60%, 10-40%, 20-99%, 20-80%, 20-60%, 20-40%, 50-98%, 50-80% 또는 60-99% 감소를 일으킨다. 다른 특정 구현으로, 상기 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 적어도 1.1배, 1.2배, 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 25배, 50배, 75배, 100배, 200배 또는 1000배 감소를 일으킨다. 일부 구현으로, 암 세포 집단의 감소는 상기 요법의 투여 2주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 9개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 또는 10년 후에 발생한다. 암 세포 집단을 검출하고, 암 세포의 양의 변화를 측정하는 방법은 아래에 설명된다.

일부 구현으로, 상기 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 벌크 종양 크기의 감소 뿐만 아니라 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소를 일으킨다. 특정 구현으로, 벌크 종양 크기의 감소; 벌크 종양 크기의 감소및 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소; 또는 벌크 종양 크기의 감소, 암 줄기세포 집단의 감소 및 암 세포 집단의 감소가 주기적으로 모니터된다. 따라서, 일 구현으로, 본 발명은 (a) 필요로 하는 대상자에게 유효량의 소디움 메타 아르세나이트의 1 투여량 이상을 투여하는 단계; (b) 특정 수의 투여량의 투여 전, 투여 도중 및/또는 투여 후에 그리고 후속적인 투여량의 투여 전에 대상자에서 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기를 모니터하는 단계; 및 (c) 필요에 따라 단계 (a)를 반복함으로써 대상자에서 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기의 적어도 5% 감소를 검출하는 단계를 포함한다.

특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트의 양 또는 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 감소를 일으킨다. 예를 들어, 일부 구현으로, 상기 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기의 약 2-98%, 5-80%, 5-40%, 10-99%, 10-80%, 10-60%, 10-40%, 20-99%, 20-80%, 20-60%, 20-40%, 50-99%, 50-80% 또는 60-99% 감소를 일으킨다. 다른 특정 구현으로, 상기 요법은 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기의 적어도 1.1배, 1.2배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 25배, 50배, 75배, 100배, 200배 또는 1000배 감소를 일으킨다. 일부 구현으로, 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단 및 벌크 종양 크기의 감소는 상기 요법의 투여 2주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 9개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 또는 10년 후에 발생한다.

다수의 공지된 방법이 종양 벌크 크기를 평가하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법의 비제한적인 예는 영상법(예, 컴퓨터 단층촬영(CT), 자기공명영상(MRI), 초음파, X-선 영상, 유방조영술, PET 스캔, 방사성 핵종 스캔, 뼈 스캔), 시각적 방법(예, 결장경 검사, 기관지경 검사, 내시경술), 물리적 검사(예, 전립선 검사, 유방 검사, 림프절 검사, 복부 검사, 직장 검사, 일반 촉진), 혈액 시험(예, 전립선 특이 항원(SPA) 시험, 암배 항원(CEA) 시험, 암 항원(CA)-125 시험, 알파-페토프로틴(AFP), 간 기능 시험), 골수 분석(예, 혈액학적 악성 종양의 경우), 조직병리학, 세포학 및 유동 세포 분석법을 포함한다.

일부 구현으로, 상기 벌크 종양 크기는 영상법에 의해 검출되는 종양 병소의 크기에 기초한 평가에 의해 측정될 수 있다. 특정 구현으로, 상기 평가는 Response Evaluation Criteria In Solid Tumors (RECIST) Guidelines(Therasse, P. 등, "New Guidelines to Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors," J. of the Nat. Cane. Inst. 92(3), 205-216(2000))에 따라 수행된다. 예를 들어, 특정 구현으로, 벌크 종양 크기를 대표하는 대상자에서의 병소는 통상적인 영상 기술이 사용될 경우(예, 통상적인 CT 스캔, PET 스캔, 뼈 스캔, MRI 또는 x-선), 기준선(치료전)에서 이들의 가장 긴 직경이 적어도 20mm 이상이 되도록 선택되고, 나선형 CT 스캔이 사용될 경우에 기준선에서 이들의 가장 긴 직경이 적어도 10mm 이상이 되도록 병소가 선택되어야 한다.

일부 구현으로, 영상 기술과 혈청 마커 검출의 조합이 벌크 종양 크기의 감소를 평가하는데 사용될 수 있다. 이러한 혈청 마커의 비제한적인 예는 전립선 특이 항원(PSA), 암배 항원(CEA), 암 항원(CA) 125 및 알파-페토프로틴(AFP)을 포함한다.

본 발명은 차도가 있는 대상자에서 암의 재발을 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상자에게 치료적으로 또는 예방적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트를 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법은 소디움 메타 아르세나이트를 최대 허용 용량(MTD) 이하의 투여량으로 또는 '부작용이 관찰되지 않는 수준(no observed adverse effect level)(NOAEL)' 이하의 투여량으로 대상자에게 투여하는 것을 포함한다. 소디움 메타 아르세나이트의 MTDs는 전형적으로 I 단계 투여량 에스컬레이션 시험의 결과에 기초한다. 특정 구현으로, 또한 환자는 차도가 있는 환자의 제 1선의 치료에 사용된 항암제와 같이 제 2의 항암제의 치료적으로 유효한 양으로 처리될 수 있다. 제 2의 항암제는 소디움 메타 아르세나이트와 동시에, 투여 후 또는 투여 전에 투여될 수 있다.

동물 시험에서 측정된 NOAEL은 보통 인간 임상 시험을 위한 최대 권장 출발 투여량을 결정하는데 사용된다. NOAELs은 인간 당량 투여량(HEDs)을 결정하는데 추정될 수 있다. 전형적으로, 종들 사이에서의 이러한 외삽(extrapolation)은 체표면적(즉, mg/㎡)으로 정규화된 투여량에 기초하여 수행된다. 특정 구현으로, 상기 NOAELs은 마우스, 햄스터, 래트, 페럿, 기니 피그, 토끼, 개, 영장류(원숭이, 마모셋, 스쿼럴 원숭이, 개코 원숭이), 마이크로피그 및 미니피그 중 어디에서나 측정될 수 있다. NOAELs의 사용 및 이들의 인간 당량 투여량을 결정하는 외삽에 대한 설명은 다음 논문을 참조바란다: Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research(CDER), Pharmacology and Toxicology, July 2005. 따라서, 특정 구현으로, 상기 요법은 HED 미만의 투여량으로 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 차도가 있는 대상자에서 암의 재발을 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 예방적으로 또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트를, 이를 필요로 하는 대상자에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 방법은 HED 이하의 투여량으로 대상자에게 소디움 메타 아르세나이트를 투여하는 것을 포함한다.

본 발명에 따라, 예방적으로 및/또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트가 암을 가지거나 암으로 발달할 것으로 예측되는 대상자(예, 특정 타입의 암에 대한 유전적 소인을 가진 대상자, 발암 물질에 노출된 대상자, 새로 진단된 암을 가진 대상자, 암 치료에 실패한 대상자, 암으로부터 재발된 대상자 또는 특정 암으로부터 차도가 있는 대상자)에게 투여된다. 특정 구현으로, 이에 한정하는 것은 아니나, 물리적 검사(예, 전립선 검사, 유방 검사, 림프절 검사, 복부 검사, 직장 검사, 일반 촉진), 시각적 방법(예, 결장경 검사, 기관지경 검사, 내시경술), PAP 스메어 분석(자궁경부암), 대변구아이악검사(stool guaiac test), 혈액 시험(예, 완전 혈구 측정(CBC) 검사, 전립선 특이 항원(SPA) 시험, 암배 항원(CEA) 시험, 암 항원(CA)-125 시험, 알파-페토프로틴(AFP), 간 기능 시험), 염색체 분석(karyotyping analyses), 골수 분석(예, 혈액학적 악성 종양의 경우), 조직병리학, 세포학, 가래 검사 및 영상법(예, 컴퓨터 단층촬영(CT), 자기공명영상(MRI), 초음파, X-선 영상, 유방조영술, PET 스캔, 방사성 핵종 스캔, 뼈 스캔)을 포함하는 현재 사용되는 기술에 의해 측정시 상기 대상자는 차도가 있는 상태이거나 암이 없는 것으로 나타난다.

일 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 종양, 암세포 또는 신생물을 제거하는 수술을 받으려거나 받은 대상자에게 투여된다. 특정 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 종양, 암세포 또는 신생물을 제거하는 수술과 동시에 또는 수술 후에 대상자에게 투여된다. 다른 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 종양 또는 신생물을 제거하는 수술 전에, 그리고 일부 구현으로는 수술 도중에 그리고/또는 수술 후에 대상자에게 투여된다.

특정 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 방사선 치료를 받으려거나 받은 대상자에게 투여된다. 특히 이러한 대상자들은 화학치료, 호르몬 치료 및/또는 면역치료를 포함하는 생물학적 치료를 받은 자 뿐만 아니라 수술을 받은 자이다.

다른 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 호르몬 치료 및/또는 면역치료 및/또는 표적 치료를 포함하는 생물학적 치료를 받으려거나 받고 있거나, 혹은 받은 대상자에게 투여된다. 특히 이러한 대상자들은 화학치료 및/또는 방사선 치료를 받은 자 뿐만 아니라 수술을 받은 자이다.

특정 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 하나 이상의 치료에 실패하거나 불응된 환자에게 투여된다. 일 구현으로, 암이 치료에 불응되는 것이란 암 세포의 적어도 일부 유의한 부분이 사멸되지 않거나 이들의 세포분열이 막아지지 않은 것을 의미한다. 암 세포가 불응되는지 여부를 검사하는 것은 이러한 정황으로 기술적으로 수용된 "불응(refractory)"의 의미를 사용하여 암 세포에서 치료의 효과를 평가하는 당 기술분야에 알려진 어느 방법에 의해 생체내 또는 시험관내에서 이루어질 수 있다.

특정 구현으로, 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 화학치료 및 호르몬 치료와 같은 다른 치료 요법에 대한 암 세포 내성의 발달과 관련된 사이토카인 IL-6의 증가된 수준을 가진 환자에게 투여된다.

어느 타입의 암이 본 발명에 따라 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있다. 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있는 암의 비제한적 예는 다음을 포함한다: 이에 한정하는 것은 아니나, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병; 골수아구성, 전골수구성, 골수단구성, 단구성 및 적백혈병성 백혈병과 같은 급성 골수성 백혈병; 및 골수이 형성증후군(MDS); 이에 한정하는 것은 아니나, 만성 골수성 (과립구) 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 모양세포성 백혈병과 같은 만성 백혈병과 같은 백혈병; 진성다혈구증; 이에 한정하는 것은 아니나, 호지킨병, 비-호지킨병과 같은 림프종; 이에 한정하는 것은 아니나, 무증상 다발성 골수종, 비분비 골수종, 골경화성 골수종, 형질세포성 백혈병, 형질세포 골수종 및 형질세포종과 같은 다발성 골수종; 월덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia); 불분명한 징후의 단클론성 감마글로불린 장애(Monoclonal gammopathy of undetermined significance); 양성 단클론성 감마글로불린 장애; 중쇄병(heavy chain disease); 이에 한정하는 것은 아니나, 본 사코마(bone sarcoma), 골육종(osteosarcoma), 연골 육종, 유잉육종(Ewing's sarcoma), 악성거대세포종, 뼈의 섬유육종, 척색종, 골막성 육종, 연조직 육종, 혈관육종(angiosarcoma, hemangiosarcoma), 섬유육종, 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관 육종, 신경초종, 횡문근육종, 활액막육종과 같은 뼈 및 연결 조직 육종; 이에 한정하는 것은 아니나, 신경교종, 성상 세포종, 뇌간부 신경교종, 상의세포종(ependymoma), 핍지교종, 비신경아교종, 청신경종, 두개인두종, 수모세포종, 뇌수막종, 송과체세포종, 송과체아세포종, 프라이머리 뇌 림프종(primary brain lymphoma)과 같은 뇌 종양; 이에 한정하는 것은 아니나, 유관암(ductal carcinoma), 선암, 소엽성(소세포) 암종, 선관내 암종(intraductal carcinoma), 수질 유방암(medullary breast cancer), 점액소 유방암(mucinous breast cancer), 관 유방암(tubular breast cancer), 유두성 유방암(papillary breast cancer), 파제트병 및 염증성 유방암(inflammatory breast cancer)과 같은 유방암; 이에 한정하는 것은 아니나, 갈색세포종(pheochromocytom) 및 부신피질암(Adrenal cortical carcinoma)과 같은 부신암; 이에 한정하는 것은 아니나, 유두 또는 여포성 갑상선암, 갑상선 수질암 및 악성 갑상선암과 같은 갑상선암; 이에 한정하는 것은 아니나, 기능성 췌도 종양, 가스트리노마, 글루카곤종, 비포마(vipoma), 소마토스타틴-분비 종양, 및 카시노이드 또는 아일렛 세포종(islet cell tumor)과 같은 췌장암; 이에 한정하는 것은 아니나 쿠싱병, 프로락틴-분비 종양, 말단 비대증 및 요붕증(diabetes insipius)과 같은 뇌하수체 암; 이에 한정하는 것은 아니나, 홍채 흑색종(iris melanoma), 맥락막 흑색종 및 실리어리 바디 흑색종(cilliary body melanoma) 및 망막아종과 같은 눈 흑색종(ocular melanoma); 편평세포암종, 선암, 및 흑색종과 같은 질암; 편평세포암종, 흑색종, 선암, 기저 세포암, 육종 및 파제트병과 같은 외음부암; 이에 한정하는 것은 아니나, 편평상피암 및 선암과 같은 자궁경부암; 이에 한정하는 것은 아니나, 자궁내막암 및 자궁 육종과 같은 자궁암; 이에 한정하는 것은 아니나, 상피성 난소암, 경계성 난소 종양, 생식세포종 및 기질 종양(stromal tumor)과 같은 난소암; 이에 한정하는 것은 아니나, 편평상피암(squamous cancer), 선암, 선모낭포암(adenoid cystic carcinoma), 점액표피양암종(mucoepidermoid carcinoma), 선편평암종(Adenosquamous carcinoma), 육종, 악성 흑색종, 형질세포종(plasmacytoma), 우상암(verrucous carcinoma) 및 귀리세포(소세포)암종(oat cell(small cell) carcinoma)과 같은 식도암; 이에 한정하는 것은 아니나, 선암, 융기형(폴리포이드)(fungating (polypoid)), 궤양성, 표층 팽창성(superficial spreading), 확산 팽창성(diffusely spreading), 악성 림프종, 지방육종, 섬유육종 및 암육종과 같은 위암; 결장암; 직장암; 이에 한정하는 것은 아니나, 간세포성 암종(hepatocellular carcinoma) 및 간아세포종과 같은 간암; 선암과 같은 담낭암; 이에 한정하는 것은 아니나, 유두성(papillary), 결절성(nodular) 및 확산성과 같은 담관암종(cholangiocarcinomas); 비소세포성 폐암(non-small cell lung cancer), 편평세포암종(표피암), 선암, 대세포암(large-cell carcinoma) 및 소세포성 폐암과 같은 폐암; 이에 한정하는 것은 아니나, 배아 종양, 정상피종(seminoma), 악성(anaplastic), 대표적인(전형적인(typical)), 정모세포성(spermatocytic), 비정상피종(nonseminoma), 태생성 암종(embryonal carcinoma), 기형 암종(teratoma carcinoma), 융모암(요크-삭 종양)과 같은 고환암; 이에 한정하는 것은 아니나, 전립선의 상피내 신생물(prostatic intraepithelial neoplasia), 선암, 평활근육종(leiomyosarcoma) 및 횡문근육종(rhabdomyosarcoma)과 같은 전립선암; 패날 암(penal cancers); 이에 한정하는 것은 아니나, 편평세포암종(squamous cell carcinoma)과 같은 구강암; 기저암(basal cancers); 이에 한정하는 것은 아니나, 선암, 점액표피양암종(mucoepidermoid carcinoma) 및 선모낭포암(adenoidcystic carcinoma)과 같은 타액선 암; 편평세포암종(squamous cell carcinoma) 및 우상암과 같은 인두암(pharynx cancers); 이에 한정하는 것은 아니나, 기저세포 암종, 편평세포암종(squamous cell carcinoma) 및 악성 흑색종, 표층 팽창성 악성 흑색종(superficial spreading melanoma), 결절성 악성 흑색종(nodular melanoma), 악성흑색점흑색종(lentigo malignant melanoma), 선단 흑자성 흑색종(Acral Lentiginous Melanoma)과 같은 피부암; 이에 한정하는 것은 아니나, 신세포암(renal cell carcinoma), 선암, 부신종, 섬유육종, 이행세포암종(transitional cell cancer)(신우 및/또는 수뇨관)과 같은 신장암; 빌름스 종양(Wilms' tumor); 이에 한정하는 것은 아니나, 이행세포암종, 편평세포암종, 선암, 암육종과 같은 방광암. 또한, 암은 점액육종, 골원성육종, 내피육종, 림프관내피육종, 중피종, 활막종, 혈관모세포종, 상피암, 낭종암, 기관지원성암종, 부분분비땀샘 암종, 피지샘암, 유두암 및 유두 선암을 포함한다.

또한, 상기 예방적으로 및/또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 이에 한정하는 것은 아니나, 다음을 포함하는 다양한 암 또는 다른 비정상적 증식성 질환의 치료, 예방, 및/또는 관리에 유용하다: 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 췌장, 위, 자궁경관, 갑상선 및 피부의 암을 포함하는 암; 편평세포암종; 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, B-세포 림프종, T 세포 림프종, 버킷림프종(Burkitt's lymphoma)을 포함하는 림프계열의 혈액종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 포함하는 골수계열 혈액종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 간엽성 기원의 종양; 악성 흑색종, 정상피종, 기형암종, 신경아세포종 및 신경교종을 포함하는 다른 종양들; 성상세포종, 신경아세포종, 신경교종 및 쉬반종을 포함하는 중추 신경 시스템 및 말초 신경 시스템의 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 포함하는 간엽성 기원의 종양; 및 악성 흑색종, 색소성 건피증, 각질극 세포종, 정상피종, 모낭갑상선암 및 기형암종을 포함하는 다른 종양들. 일부 구현으로 세포사멸에서의 이탈과 관련된 암이 본 발명의 방법에 따라 예방, 치료 및/또는 관리된다. 이러한 암은 이에 한정하는 것은 아니나, 여포성 림프종, p53 돌연변이를 갖는 암종, 유방, 전립선 및 난소의 호르몬 의존성 종양, 및 가족성 용종증(Familial Adenomatous Polyposis)과 같은 전암성 병변, 및 골수이형성 증후군을 포함할 수 있다. 특정 구현으로, 악성 종양 또는 (변질형성(metaplasias) 및 형성이상(dysplasias)과 같은) 난증식성 변화(dysproliferative change) 또는 피부, 폐, 간, 뼈, 뇌, 위, 결장, 유방, 전립선, 방광, 신장, 췌장, 난소, 및/또는 자궁의 과증식성 질환이 본 발명의 방법에 따라 예방, 치료 및/또는 관리된다. 다른 특정 구현으로, 육종 또는 악성 흑색종이 본 발명의 방법에 따라 예방, 치료 및/또는 관리된다.

특정 구현으로, 본 발명에 따라 예방, 치료 및/또는 관리되는 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종(예, 다발성 골수종)이다.

본 발명에 따라 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있는 백혈병 및 다른 혈액을 통해 전염되는 암의 비제한적 예는 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia) "ALL", 급성 림프구성 B-세포 백혈병, 급성 림프구성 T-세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병(Acute myeloblastic leukemia) "AML", 급성 전골수구성 백혈병(acute promyelocyte leukemia) "APL", 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈별성 백혈병, 급성 거핵모구백혈병, 급성 단구성 백혈병, 비림프구성 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 만성 골수구성 백혈병(chronic myelocytic leukemia) "CML", 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia) "CLL", 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome) "MDS", 및 모양 세포성 백혈병을 포함한다.

본 발명의 방법에 따라 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있는 림프종의 비제한적 예는 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 발덴스트룀 거대글로불린혈증, 중쇄병(heavy chain disease) 및 진성 다혈구증을 포함한다.

다른 구현으로, 본 발명에 따라 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있는 암은 고형 종양이다. 본 발명의 방법에 따라 예방, 치료 및/또는 관리될 수 있는 고형 종양의 예는 이에 한정하는 것은 아니나, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관 육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유윙종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 대장암, 신장암, 췌장암, 골암, 유방암, 난소암, 전립선암, 식도암(esophageal cancer), 위암, 구강암, 비강암, 식도암(throat cancer), 편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암, 부분분비땀샘 암종, 피지샘암, 유두암, 유두 선암, 낭종암, 수질암종, 기관지원성암종, 신세포암, 간세포암, 담관암, 융모암, 정상피종, 태생성 암종, 빌름스 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 소세포성 폐암종, 방광암종, 폐암, 상피암, 신경교종, 다형성아교모세포종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 뇌수막종, 피부암, 악성 흑색종, 신경아세포종 및 망막아세포종을 포함한다.

일부 구현으로, 환자에서 암을 예방, 치료 및/또는 관리하기 위해 대상자에게 투여되는 소디움 메타 아르세나이트의 투여량은 환자 체중의 250mg/kg 이하, 100mg/kg 이하, 95mg/kg 이하, 90mg/kg 이하, 85mg/kg 이하, 80mg/kg 이하, 75mg/kg 이하, 70mg/kg 이하, 65mg/kg 이하, 60mg/kg 이하, 55mg/kg 이하, 50mg/kg 이하, 45mg/kg 이하, 40mg/kg 이하, 35mg/kg 이하, 30mg/kg 이하, 25mg/kg 이하, 20mg/kg 이하, 15mg/kg 이하, 10mg/kg 이하, 5mg/kg 이하, 2.5mg/kg 이하, 2mg/kg 이하, 1.5mg/kg 이하, 1mg/kg 이하와 같이 500mg/kg 이하이다. 예를 들어, 소디움 메타 아르세나이트는 하루에 1 내지 5회로 약 0.1-10mg/kg, 또는 약 0.25-5mg/kg 범위의 양으로 투여될 수 있다.

다른 구현으로, 환자에서 암을 예방, 치료 및/또는 관리하기 위해 대상자에게 투여되는 소디움 메타 아르세나이트의 투여량은 0.1-20mg, 0.1-15mg, 0.1-12mg, 0.1-10mg, 0.1-8mg, 0.1-7mg, 0.1-5mg, 0.1-2.5mg, 0.25-20mg, 0.25-15mg, 0.25-12mg, 0.25-10mg, 0.25-8mg, 0.25-7mg, 0.25-5mg, 0.5-2.5mg, 1-20mg, 1-15mg, 1-12mg, 1-10mg, 1-8mg, 1-7mg, 1-5mg, 또는 1-2.5mg의 단위 투여량이다.

특정 구현으로, 환자에서 암을 예방, 치료 및/또는 관리하기 위해 대상자에게 투여되는 소디움 메타 아르세나이트의 투여량은 환자 체중의 0.01-10g/㎡, 보다 전형적으로 0.1-7.5g/㎡의 범위이다. 일 구현으로, 환자에게 투여되는 투여량은 환자의 표면적의 0.5-5g/㎡ 또는 1-5g/㎡의 범위이다.

일 구현으로, 상기 예방적으로 및/또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트는 하나 이상의 부가적인 치료제와 병용된다. 병용 치료에 사용되는 상기 하나 이상의 부가적인 치료제의 투여량은 환자에서 암을 예방, 치료 및/또는 관리하는데 사용되어왔던 또는 현재 사용되는 것보다 낮을 수 있다. 암을 예방, 치료 및/또는 관리하는데 현재 사용되는 하나 이상의 부가적인 치료제의 권장 투여량은 이에 한정하는 것은 아니나, 이의 전문이 본 명세서에 참조로 편입된 Hardman 등., eds., Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics, 10th ed, Mc-Graw-Hill, New York, 2001; Physician's Desk Reference(60.sup.th ed., 2006)을 포함하는 어느 참고문헌으로부터 얻을 수 있다.

부가적인 암 치료제의 예는 이에 한정하는 것은 아니나, 액시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아도젤레신; 알데스루킨; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티마이드; 암사크리린; 아나스트로졸; 안트라시클린; 안트라마이신; 아스파라기나아제; 아스펠린(asperlin); 아자시티딘(Vidaza); 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 비스포스포네이트(예, 파미드로네이트(Aredria), 소디움 클론드로네이트(Bonefos), 졸레드로닉산(Zometa), 알렌드로네이트(Fosamax), 에디트로네이트, 이반도네이트, 시마드로네이트, 리세드로메이트 및 틸루드로메이트); 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레뷔나 소디움; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼러스테론; 카라세마이드; 카베티머; 카보플라틴; 카무스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 시클로포스파미드; 시타라빈(Ara-C); 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈(Dacogen); 디메틸화제; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드록록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로니틴 하이드로클로라이드; EphA2 인히비터; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 소디움; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티디드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루오로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 소디움; 겜시타빈; 겜시타빈 하이드로클로라이드; 히스톤 디아세틸라아제 인히비터(HDAC-Is); 히드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 이마티닙 메실레이트(Gleevec, Glivec); 인터루킨 II(재조합 인터루킨 II 또는 rIL2 포함), 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-I a; 인터페론 감마-I b; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레날리도미드(Revlimid); 레트로졸; 루프로리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 소디움; 로무스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 안티-CD2 안티바디(예, 시플리주맵(MedImmune Inc.; 국제 공개공보 WO 02/098370, 이의 전문이 본 명세서에 참조로 편입됨); 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 메캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 소디움; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미토산트론 하이드로클로라이드; 미코페놀릭산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오마플라틴; 옥살리플라틴; 옥시수란; 파클리탁셀; 페가스파가아제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 펩플로마이신 설페이트; 페포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 클로메스탄; 포르피머 소디움; 포피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 립도프린; 로글레티마이드; 사핀골; 사핀골 하이드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 스프라포세이트 소디움; 스프라소마이신; 스피로게르마늄 하이드로클로라이드; 스피로무스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 설로페너; 탈리소마이신; 테코갈란 소디움; 테가퍼; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포사이드; 테록시론; 테스톨락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조퓨린; 티아파자민; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 투불로졸 하이드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오타이드; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 비노넬빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 조루비신 하이드로클로라이드를 포함한다. 특정 구현으로, 소디움 메타 아르세나이트는 폐암과 같은 1차 또는 2차 암의 치료시 시스플라틴과 병용하여 사용될 수 있다.

소디움 메타 아르세나이트 및 상기 하나 이상의 부가적인 항암 치료제는 별도로, 동시에, 또는 연속적으로 또는 환자에 의한 허용성에 가장 적합한 어떠한 방식으로 투여될 수 있다. 복합 제제는 동일하거나 다른 투여 경로에 의해 대상자에게 투여될 수 있다. 선택적인 구현으로, 둘 이상의 예방제 또는 치료제가 단일 조성물로 투여된다.

상기 예방적으로 및/또는 치료적으로 유효한 양 또는 요법의 소디움 메타 아르세나이트의 일부로서, 상기 암 줄기 세포집단은 치료제 또는 요법의 효능을 평가하기 위해, 치료제를 유지하거나 변경하기 위한 근거로 사용하기 위해, 그리고 뿐만 아니라 암에 걸린 환자의 예후를 검사하기 위해 모니터될 수 있다. 일 구현으로, 상기 요법을 받고 있는 대상자는 그 요법이 대상자에서 약물 내성 암 줄기세포를 포함하는 암 줄기세포 집단의 감소를 일으키는지 여부를 평가하기 위해 모니터된다.

암 줄기세포의 양은 당 기술분야의 숙련자에게 알려진 표준 기술을 이용하여 모니터/평가될 수 있다. 암 줄기세포는 환자로부터 조직/종양 시료, 혈액 시료 또는 골수 시료와 같은 시료를 획득하고, 그 시료에서 암 줄기세포를 검출함으로써 모니터될 수 있다. 시료에서 암 줄기세포의 양(이는 예를 들어, 전체 세포 또는 전체 암 세포의 퍼센트로 나타낼 수 있음)은 암 줄기세포 상에서 항원이 발현을 검출함으로써 평가될 수 있다. 이러한 활성을 측정하는데 당 기술분야의 숙련자에게 알려진 기술이 사용될 수 있다. 항원 발현은 예를 들어, 이에 한정하는 것은 아니나, 웨스턴 블롯, 면역 조직 화학, 방사 면역 분석 시험, ELISA(효소 결합 면역흡착 시험), "샌드위치(sandwich)" 면역어세이, 면역침전 어세이, 프리시피틴 반응, 겔 확산 프리시피틴 반응, 면역확산 어세이, 응집 어세이, 컴플리먼트-고정 어세이, 면역방사측정법, 형광 면역어세이, 면역 형광법, 프로틴 A 면역어세이, 유동 세포 분석법 및 FACS 분석을 포함하는 면역어세이에 의해 평가될 수 있다. 이러한 환경에서, 대상자로부터 얻어진 시험 시료에서 암 줄기세포의 양은 표준 시료(예, 검출가능한 암을 갖지 않은 대상자로부터 얻어진 시료)에서 줄기 세포의 양에 대해 또는 미리 결정된 기준 범위에 대해, 또는 앞선 시점(예, 치료 전 또는 치료 도중)에서 환자 자신에 대한 결과를 비교함으로써 측정될 수 있다.

특정 구현으로, 환자로부터 얻어진 시료(예, 혈액 또는 종양 조직)에서 암 줄기세포 집단은 유동 세포 분석법에 의해 검출된다. 이 방법은 종양 벌크에 대해 상대적인 암 줄기세포 상에서의 특정 표면 마커의 다른 발현을 활용한다. 표지된 항체(예, 형광 항체)는 시료에서 암 줄기세포들과 반응하는데 사용될 수 있으며, 그 세포들은 후속적으로 FACS 법에 의해 정렬된다. 일부 구현으로, 세포 표면 마커의 혼합물이 시료에서 암 줄기세포의 양을 측정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 양성 및 음성 세포 정렬 모두는 시료에서 암 줄기세포의 양을 평가하는데 사용될 수 있다. 특정 구현으로, 하기 리스트로 나타낸 바와 같은 종양 하버(tumor harbor) 암 줄기세포 및 이들과 관련된 마커들은 다양한 타입의 암과 관련된 암 줄기세포 표현형의 비제한적인 리스트를 제공한다.

종양 암 줄기세포 표현형

백혈병(AML) CD34+/CD38-

유방 CD44+/CD24-

뇌 CD133+

백혈병(ALL) CD34+/CD10-/CD19-

난소 CD138-/CD34-/CD19+

다발성 골수종 CD138-/CD34-/CD19+

만성 골수성 백혈병 CD34+/CD38-

악성 흑색종 CD20+

뇌질피복 세포증 CD133+/RC2+

전립선 CD44+/α2β1hi/CD133+

부가적인 암 줄기세포 마커는, 이에 한정하는 것은 아니나, CD123; CLL-1; CD150, CD244 및 CD48과 같은 SLAMs(signaling lymphocyte activation molecule family receptrers(신호전달 림프구 활성화 분자 패밀리 수용체들); 참조 Yilmaz 등., "SLAM family markers are conserved among hematopoietic stem cells from old and reconstituted mice and markedly increase their purity," Hematopoiesis 107: 924-930 (2006))의 조합, 미국 특허 제6,004,528호(Bergstein), 계류중인 미국 특허출원 제09/468,286호 및 미국 특허공개 제2006/0083682호, 제2007/0036800호, 제2007/0036801호, 제2007/0036802호, 제2007/0041984호, 제2007/0036803호 및 제2007/0036804호에 개시된 마커들을 포함하며, 이것들은 모두 이의 전문이 본 명세서에 참조로 편입된다. 참조 예, 미국 특허 제6,004,528호의 표 1, 및 미국 특허출원 제09/468,286호 및 미국 특허공개 제2006/0083682호, 제2007/0036800호, 제2007/0036801호, 제2007/0036802호, 제2007/0041984호, 제2007/0036803호, 및 제2007/0036804호의 표 1, 2 및 3.

시료의 유동 세포 분석법을 이용하는 특정 구현으로, Hoechst 염색 프로토콜이 종양에서 암 줄기세포를 확인하는데 사용될 수 있다. 간략히, 두 가지 다른 색(전형적으로 빨간색 및 파란색)의 Hoechst 염료를 종양 세포와 함께 배양한다. 암 줄기세포는 벌크 암 세포와 비교하여 이들의 표면 상에서 염료 발산 펌프를 과발현하며, 이는 이러한 세포들이 세포에서 염료가 빠져나가도록 펌핑하도록 한다. 벌크 종양 세포는 대부분 이러한 펌프를 덜 가지므로, 이에 따라 염료에 대해 상대적으로 양성적이며, 이는 유동 세포 분석법에 의해 검출될 수 있다. 전형적으로 염료 양성("염료+") 대 염료 음성("염료-") 세포의 구배는 세포의 전체 집단이 관찰될 경우에 나타난다. 암 줄기세포는 염료- 또는 염료 저(dyelow) 집단에 함유된다. 줄기세포 또는 줄기세포 집단을 특성화하기 위한 Hoechst 염색 프로토콜의 사용예는 Goodell 등., "A leukemic stem cell with intrinsic drug efflux pump capacity in acute myeloid leukemia," Blood, 98(4): 1166-1173(2001) 및 Kondo 등., "Persistence of a small population of cancer stemlike cells in the C6 glioma cell line," Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:781-786(2004)을 참조바란다. 이러한 방식으로, 주어진 치료 또는 요법으로부터 일어난 암 줄기세포 양의 변화를 평가하기 위해 유동 세포 분석법이 치료 전 및 후에 암 줄기세포 양을 측정하는데 사용될 수 있다.

다른 구현으로, 환자로부터 얻어진 시료(예, 종양 또는 정상 조직 시료, 혈액 시료 또는 골수 시료)는 암 줄기세포 집단 또는 암 줄기세포의 양을 평가하기 위해 시험관내 시스템으로 배양된다. 예를 들어, 종양 시료는 연성 아가(agar) 상에서 배양될 수 있으며, 암 줄기세포의 양은 시각적으로 셀 수 있는 세포의 콜로니를 생성하는 시료의 능력과 연관성이 있을 수 있다. 콜로니 형성은 줄기세포 함량의 대리 측정(aurrogate measure)으로 간주되며, 이에 따라 암 줄기세포의 양을 정량화하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 혈액 암에 대해서, 콜로니 형성 어세이는 콜로니 형성 세포(CFC) 어세이, 장기 배양 개시 세포(LTC-IC) 어세이 및 서스펜션 배양 개시 세포(SC-IC) 어세이를 포함한다. 이러한 방식으로, 콜로니 형성 어세이 또는 세포주의 장기 영속/패시지와 같은 관련 어세이는 주어진 치료제 또는 요법으로부터 일어난 암 줄기세포 양의 변화를 평가하기 위해 치료 전 및 후에 암 줄기세포 양을 측정하는데 사용될 수 있다.

특정 구현으로, 암 줄기세포의 양은 (a) 암 줄기세포 상에서 발견되는 세포 표면 마커에 특이적으로 바인딩하는 유효량의 표지된 암 줄기세포 마커 바인딩제를 대상자에게 투여하는 단계, 및 (b) 대상자에서 상기 암 줄기세포 표면 마커가 발현되는 지점에 집중되기에 충분한 시간 간격 후에 대상자에서 상기 표지된 암 줄기세포 마커 바인딩제를 검출하는 단계를 포함하는 방법에 따라, 대상자에서 생체내에서 검출된다. 이러한 구현에 따라, 상기 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제는 예를 들어, 비경구적으로(정맥 내와 같이) 또는 복강 내와 같이 당 기술분야의 어느 적절한 방법에 따라 대상자에게 투여된다. 이러한 구현에 따라, 상기 제제의 유효량은 대상자에서 상기 제제의 검출이 가능한 양이다. 이러한 양은 특정 환자, 사용된 표지 및 사용된 검출법에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 대상자의 크기 및 사용된 영상 시스템이 영상 수단을 이용하여 대상자에서 상기 제제를 검출하는데 필요한 표지된 제제의 양을 결정하는 것으로 당 기술분야에서 이해된다. 예를 들어, 약 5-20밀리큐리의 99Tc와 같은 방사능으로 표지된 제제의 양이 측정된다. 상기 표지된 제제의 투여 후에 대상자에서 상기 암 줄기세포 표면 마커가 발현되는 지점에 집중되기에 충분한 시간 간격은 예를 들어, 사용된 표지의 타입, 투여 방식 및 영상화되는 대상자의 신체 부분과 같이 여러 요인에 따라 달라질 것이다. 특정 구현으로, 충분한 시간 간격은 6-48시간, 6-24시간, 또는 6-12시간이다. 다른 구현으로, 상기 시간 간격은 5-20일 또는 5-10일이다. 표지된 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제의 존재는 당 기술분야에 알려진 영상 수단을 사용하여 대상자에서 검출될 수 있다. 일반적으로, 사용되는 영상 수단은 사용되는 표지의 타입에 따라 달라진다. 숙련자는 특정 표지를 검출하기에 적절한 수단을 결정할 수 있을 것이다. 사용될 수 있는 방법 및 장치는 이에 한정하는 것은 아니나, 컴퓨터 단층촬영(CT), 양전자 방출 단층촬영(PET)과 같은 전신 스캔, 자기공명영상(MRI), 형광 수준을 검출하고 위치를 알아낼 수 있는 영상기 및 초음파 검사법을 포함한다. 특정 구현으로, 상기 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제는 방사성동위원소로 표지되고, 방사선 반응 진료 기구(Thurston 등, 미국 특허 제5,441,050호)를 이용하여 환자에서 검출된다. 다른 구현으로, 상기 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제는 형광 화합물로 표지되고, 형광 반응성 스캐닝 기구를 이용하여 검출된다. 다른 구현으로, 상기 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제는 양전자 방출 금속으로 표지되고, 양전자 방출 단층촬영을 이용하여 환자에서 검출된다. 다른 구현으로, 상기 암 줄기세포 표면 마커-바인딩제는 상자성(paramagnetic) 표지로 표지되고, 자기공명영상(MRI)을 이용하여 환자에서 검출된다.

암 줄기세포를 검출 및/또는 정량화할 수 있는 당 기술분야의 숙련자에게 알려진 어느 시험관내 또는 생체내(생체외) 어세이가 소디움 메타 아르세나이트의 예방적 및/또는 치료적 효능을 평가하기 위해 암 줄기세포를 모니터하는데 사용될 수 있다. 그 다음, 이러한 어세이의 결과는 아마도 상기 암 치료 또는 요법을 유지하거나 변경하는데 사용될 수 있다.

본 명세서에 언급된 모든 공개문헌, 특허 및 특허 출원들은 각각의 공개문헌, 특허 또는 특허출원이 본 명세서에 참조로 편입되도록 구체적이며 개별적으로 나타낸 바와 같은 정도로 본 명세서에 참조로 편입된다. 본 명세서에서 참고문헌의 인용 또는 언급은 본 발명에 대한 선행 기술로서의 인정으로 이해되지 않아야 한다.

실시예

하기의 재료 및 방법이 본 명세서에 나타내는 실시예에 사용되었다.

세포주: DU145wt, DU145/ Pac200 및 DU145/ Doc50 세포들은 매릴랜드 대학교, UMGCC의 Hussain 박사에 의해 제공되었다. 상기 세포주들을 권장대로 5% FBS, 1% 항생제가 보충된 1:1 DMEM/ F12 배지(Invitrogen)에서 37℃ 및 5% CO₂의 표준 조건 하에서 배양하였다. 파클리탁셀 및 도세탁셀 내성 클론을 약물의 도태압(selection pressure) 하에서 유지시켰다.

약물: KML001(소디움 메타 아르세나이트)을 Sigma-Aldrich Co.(CAS# 7784-46-5)로부터 얻었으며; 50mM 약물 스톡을 -20℃에 보관된 PBS 및 분취량으로 준비하였다. GRN163L을 Geron Corp.(Menlo Park, CA)로부터 얻었다. 10mM 워킹 약물 스톡을 PBS에 준비하였다.

MTT 증식 어세이: 기하급수적으로 성장하는 세포들을 수거하고, 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다(DU145wt에 대해 1,500/웰, 그리고 DU145/Pac200 및 DU145/Doc50에 대해 2,000-3,000/웰). 시험하고자 약물을 0.01-100μM 범위 농도로 첨가하여 이들의 성장 억제 포텐셜을 평가하였다. 약물에 5일 연속 노출 후, 필수 염료 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움브로마이드(MTT)를 상기 플레이트에 첨가하였다. 생존가능한 세포에 의한 MTT의 자주색 포르마잔으로의 전환은 550nm 및 Gen5 소프트웨어에서 Synergy2 플레이트를 사용하여 측정하였다. 성장 곡선은 마이크로소프트 엑셀 및 성장 저해 농도 50(IC50)를 사용하여 생성하였으며, 100%로 측정되었다.

세포주의 전처리: DU145wt 및 DU145/ Pac200 세포주를 사이드 집단 어세이(side population assay)를 하기 전에 48시간(PAC200) 또는 72시간(DU145wt) 동안 이들의 IC50 및 IC100 값으로 KML 또는 GRN163L로 처리한 배지에서 성장시켰다.

사이드 집단 어세이: 서브-컨플루언트(sub-confluent) 생존가능 세포들을 카운팅하고(튜브당 106 세포가 필요함), H33343 또는 Dye Cycle Violet(DCV)로 처리하였다. 두 염료 모두 줄기 세포들(사이드 집단)과 성숙 세포들을 구별하는 염료이다. Goodell 등에 의해 기술된 프로토콜을 사용하였다(Goodell, M.A. 등, J. Exp. Med., 183:1797-806, 19966). 3가지 시료들을 매회 분석하였다. 상기 시료들 중 하나는 DCV로만 처리하고, 다른 하나는 DCV 및 50μM Verapamil(PgP 인히비터)로 처리하고, 그리고 마지막 하나는 DCV 및 10μM Fumitremorgin C(FTC, BCRP 인히비터)로 처리하였다. 그 다음, 상기 시료들을 유동 세포 분석법을 사용하여 판독 및 분석하였다.

유동 세포 분석법: 시료들을 BDLSR II 유동 세포 분석기 상에서 판독하였다. 405nM 자외 레이저는 세포 분화에 기초하여 다른 파장을 생성하는 DCV 염료를 자극하였다. 450/50(블루) 및 680/30(레드)에서 검출기는 방출된 파장을 차단하였으며 이에 따른 데이타를 산점도(scatter plot) 상으로 도시하였다. PE(pgp) 또는 APC(CD44) 표지 항체 및 이들의 아이소타입 대조군을 사용하여 CD44 및 Pgp 염색을 수행하였으며, 그 후에 에피토프 표지를 위한 통상적인 절차를 수행하였다.

실시예 1

암 세포주에서 암 줄기세포의 확인

본 시험에서, 암 줄기세포(사이드 집단(SP)라고도 칭함) 및 상기 SP를 형성하는 ATP 바인딩 카세트(ABC) 트랜스포터가 하기 전립선 암 세포주에서 확인되었다: DU145wt(모세포), DU145/ Pac200(파클리탁셀 내성) 및 DU145/ Doc50(도세탁셀 내성).

모든 검사된 전립선 암 세포주들: DU145wt, Du145/ Pac200, DU145/Doc50은 사이드 집단을 나타내었다(도 1, 3, 5). 특히, DU145/ Pac200 및 DU145/Doc50 세포들은 전체 세포 집단의 약 40-60%의 매우 큰 사이드 집단을 가졌으며(도 1, 5), 이는 약물 내성 세포들이 암 줄기세포로부터 생겨날 수 있다는 본 발명자들의 가정과 일치하는 것이다.

실시예 2

약물 내성 암 줄기세포 및 성숙 암 세포의 소디움 메타 아르세나이트에 대한 민감성

탁산(taxane) 내성 세포주 DU145/Pac200(파클리탁셀 고 내성) 및 DU145/Doc50(도세탁셀 고 내성)을 모세포주 DU145 뿐만 아니라 안드로겐(androgen) 내성 암 세포주(LNCaP/C81 및 LAPC-4/CSS100) 및 이에 상응하는 호르몬 반응성 모세포주(LNCaP 및 LAPC-4)와 함께 이들의 소디움 메타 아르세나이트에 대한 반응성을 시험하였다. 표준 MTT 어세이로부터 얻어진 성장 곡선은 이러한 세포주들은 이들의 약물 내성과 관계없이 소디움 메타 아르세나이트에 대해 유사한 민감도로 반응하는 것을 보여주었다(표 1).

각각의 전립선 암 세포주는 DCV 사이드 집단 분석을 사용하여 암 줄기세포성 세포 분획의 존재에 대해 분석되었다. Dye Cycle Violet(DCV) 염료 유출에 기초한 사이드 집단(SP)은 상기 약물 내성 세포주에서 확인되었으며, 이는 DU145/Doc50에 대한 Hoechst 33342 염료를 사용한 앞선 결과를 확인시켜주었다(나타내지 않음). SP의 발생은 표준 세포독성 치료제의 작용을 억제시키는데 원인이 있는 P-글리코프로틴 또는 BCRP와 같은 약물 유출 펌프의 발현에 기초한다. 표준 화학치료제 파클리탁셀 및 도세탁셀에 대해 내성적인 DU145 전립선 암 세포주는 가장 높은 SPs를 가졌다(표 1). 호르몬 내성 세포주 LnCaP/C81 및 이의 모세포주 역시 약물 유출 펌프 인히비터 베라파밀(P-gP 인히비터) 또는 퓨미트레모긴 C(FTC, BCRP 인히비터)로 억제가능한 분명한 사이드 집단을 나타내었으며, LAPC-4 및 이의 호르몬 내성 유도체에 대한 최종적인 사이드 집단은 이러한 방법에 의해 검출되지 않았다. 안드로겐 합성 인히비터와 같은 호르몬 치료는 약물 유출 펌프의 기질이 아니기 때문에, 이러한 발견은 놀라운 것이 아니다.

[표 1]

전립선 암 세포주 및 Pgp와 BRCP 트랜스포터 인히비터(베라파밀 및 퓨미트레모긴 C, FTC)로 전처리된 세포에서 DCV 사이드 집단, KML001에 대한 민감도, 말단 소립 길이(TRF) 및 상대 텔로머라아제 활성(TA)의 퍼센트

실시예 3

약물 내성 암 세포주에서 텔로머라아제 활성 및 말단 소립 길이의 측정

본 시험에서, 파클리탁셀 및 도세탁셀에 고 내성적인 DU145/ Pac200 및 DU145/ Doc50 세포주가 이들의 모세포주인 약물 감수성(drug sensitive) DU145 세포와 유사한 텔로머라아제 활성 및 말단 소립 길이를 갖는 것으로 조사되었다(표 1).

[표 1]

인간 전립선 암 세포주에서 탁산 및 말단 소립 길이에 대한 IC50 값

실시예 4

약물 내성 암 줄기세포에 미치는 베라파밀의 영향

Pac 및 Doc 내성 DU145 세포의 SPs는 베라파밀에 의해 억제되었으나 FTC에 의해서는 억제되지 않았으며, 이는 Pgp(P-글리코프로틴)이 SP의 발생에 책임이 있는 주된 트랜스포터임을 제시한다(도 1, 5). 이는 이러한 세포들 뿐만 아니라 전립선 암 특이 줄기세포 마커 CD44에 의한 Pgp의 고 표면 발현과 일치하였다(도 1b).

실시예 5

KML001 및 GRN163L 암 세포 및 암 줄기세포의 영향

본 시험에서, DU145wt, DU145/ Pac200 및 DU145/ Doc50 세포들에 미치는 텔로머라아제 인히비터 KML001(소디움 메타 아르세나이트)의 영향을 현재 후기 임상 시험 중에 있는 텔로머라아제 인히비터인 GRN163L과 비교하였다.

KML001 또는 GRN163L로 처리된 DU145wt, DU145/ Doc50 및 DU145/ Pac200의 MTT 어세이는 뚜렷한 성장 저해를 나타내었다(표 1, 도 1, 4). KML001은 약물-내성적이며 모세포인 DU145 세포에서 동일하게 효과적이었다(표 1, 도 1d).

실시예 6

소디움 메타 아르세나이트 및 GRN163L의 암 줄기세포에 미치는 영향

본 시험에서, 소디움 메타 아르세나이트 및 GRN163에 대해, 소디움 메타 아르세나이트 및 GRN163을 이들의 IC100으로 48-72시간동안 전처리할 경우에, DU145wt 및 DU145/ Pac200의 사이드 집단을 근절시키는 능력을 조사하였다.

본 시험은 DU145 및 DU145/Pac200 세포의 성장을 100% 억제하는 약물 농도로 KML001로 전처리된 DU145 및 DU145/Pac200 세포가 SP를 급격하게 감소시킬 수 있었음을 입증한다(도 3b, 5d). 그러나, 성숙 세포(비-SP) 또한 근절되었다. 특이적(텔로머라아제에 대해서만) SP에 미치는 소디움 메타 아르세나이트의 효과를 입증하기 위해 인히비터 GRN163L가 사용되었다. GRN163L은 또한 SP를 현저히 감소시켰으나, KML001과 동일한 정도로 비-SP 세포를 사멸시키지는 못하였다(도 5).

종합적으로, 상기 데이타는 소디움 메타 아르세나이트가 약물 내성 암 세포 및 약물 내성 암 줄기세포 모두를 근절시키는데 효과적임을 입증한다.

실시예 7

약물 내성 암 세포 집단에서 SP의 분리/KML001에 대한 반응성

모든 전립선 암 세포주, 탁산 내성 및 안드로겐 내성 암 세포주 및 호르몬 반응성 모세포들은 KML001(IC50의 1-6μM)에 유사한 민감도로 반응한다. 파클리탁셀 및 도세탁셀에 내성적인 암 세포주들은 이들의 KML001에 대한 반응용으로 잘 확립된 종양 콜로니 형성 줄기세포 어세이를 이용하여 시험되었다(도 6). 상기 어세이는 이들의 자가 재생 능력에 기인하여 암 줄기세포 집단만을 연성 아가 매트릭스에서 성장시킨다. 따라서, 이러한 어세이는 항암제에 대한 상기 암 줄기세포 집단의 민감도를 특이적으로 시험한다.

상기 세포들의 플레이팅 효능(DU145 및 DU145/Pac200에 대해 2%)은 사이드 집단 어세이에서 측정된 앞서 보고된 줄기 세포 집단(DU145 및 DU145/Pac200에 대해 1%)과 유사하였다. KML001의 존재하에서 콜로니 형성 능력의 감소로 나타난 바와 같이, 모세포주 뿐만 아니라 파클리탁셀 내성 세포주에 있어서 KML001에 대한 유사한 민감도가 관찰되었다. 앞서 수행된 표준 MTT 어세이와 마찬가지로 이러한 어세이에서 상기 세포주에 대해 유사한 IC50(6μM)가 도출되었다(DU145에 대해 4μM 및 DU145/Pac200에 대해 6μM).

탁산 내성 세포주는 가장 높은 SPs를 가졌으나, 호르몬 반응성 세포주 LAPC-4 및 이의 호르몬 내성 유도체는 약물 유출 인히비터, 베라파밀(Pgp 인히비터) 및 퓨미트레모긴 c(FTC, BCRP 인히비터)로 억제가능한 보다 덜 확정적인 SP를 나타내었다. SP 양성 세포주, DU145는 CD44 및 CD133의 존재에 대해 시험하였으며, 그 결과 0.46%가 두 마커 모두를 함유한 것으로 나타났다(데이타는 나타내지 않음).

상기 SP는 벌크 종양 매스로부터 분리되었으며, 표준 MTT 어세이로부터 얻어진 성장 곡선은 모든 분획들, 암 줄기세포성 SP 양성(SP+) 및 음성(SP-) 분획이 KML001과 유사한 민감도로 반응하는 것으로 나타났다(도 7).

실시예 8

말단 소립 길이, 텔로머라아제 활성 및 hTERT 활성의 측정

상기한 바와 같이(실시예 3), SP 어세이로 확인된 암 줄기세포성 분획은 벌크 세포 분획에 비해 더 높은 텔로머라아제 활성을 나타내었다. 예비 시험은 인간 텔로머라아제(hTERT)의 촉매 서브유닛의 mRNA 전사 수준이 두 집단 모두에 대해 유사함을 보여주었으며(도 8a), 이는 상기 암 줄기세포성 집단의 보다 높은 텔로머라아제 활성은 텔로머라아제-관련 단백질에 의한 신호전달 경로를 자극한 결과일 수 있음을 나타낼 수 있다. 정렬되지 않은 DU145/Pac200 세포주에서 예비 시험 결과는 KML001 처리가 IC50 및 IC100에서 72시간 후에 hTERT 전사 수준을 현저히 감소시킴을 나타낸다(도 8b).

상기 약물 유출 펌프(Pgp)는 탁산 내성 전립선 암 세포주에서 대다수의 세포에서 기능적으로 발현되며(멤브레인에서), 이는 이러한 세포주의 SP가 상기 약물 유출 펌프 인히비터 베라파밀로 억제가능하였기 때문인 것으로 예측된다. KML001으로 72시간 동안 IC50으로 처리한 경우는 Pgp 양성 세포 집단을 감소시켰으며, 이는 콜로니 형성 및 SP 어세이의 결과를 확증시켜준다.

실시예 9

파클리탁셀 내성 전립선 암 세포주 DU145/Pac200 뿐만 아니라 모세포주 DU145에서 시스플라틴의 효과를 표준 MTT로 검사하였다. 그 결과, 두 세포주 모두 유사한 민감도(각각, 3 및 4μM의 IC50)로 반응하는 것으로 나타났다. 예비 시험 결과는 모세포주 뿐만 아니라 파클리탁셀 내성 세포주에서 시스플라틴과 KML001 사이의 상승적 효과를 나타낸다(결과는 나타내지 않음).

Claims

난치성(refractive) 형태의 암 치료를 위한 약학 조성물의 제조용으로 사용되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제1항에 있어서,
상기 약학 조성물은 경구 투여용으로 제형화되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제2항에 있어서,
상기 약학 조성물은 0.1-20mg의 투여량으로 소디움 메타 아르세나이트의 양을 운반하도록 제형화되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제1항에 있어서,
상기 암은 탁산(taxane)에 대해 난치성인 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제1항에 있어서,
상기 난치성 형태의 암은 폐암 또는 뇌암인 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제1항에 있어서,
상기 난치성 형태의 암은 백혈병, 골수종 또는 림프종인 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제1항에 있어서,
상기 난치성 형태의 암은 전립선암인 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
환자에서 암의 재발의 치료 또는 예방을 위한 항암제의 제형화에 사용되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제8항에 있어서,
상기 환자는 암으로부터 차도가 있는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제8항에 있어서,
상기 환자는 암 세포를 제거하는 수술로부터 회복중에 있거나 회복된 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
환자에서 암 줄기세포의 제거 또는 감소를 위한 약학 조성물의 제조용으로 사용되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
제11항에 있어서,
상기 암 줄기세포는 약물 내성인 소디움 메타 아르세나이트의 용도.
휴지 상태의(quiescent) 암 세포의 치료를 위한 약학 조성물의 제조용으로 사용되는 소디움 메타 아르세나이트의 용도.