KR20170010785A - 항-lgr5 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항-lgr5 항체 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20170010785A
KR20170010785A KR1020167034257A KR20167034257A KR20170010785A KR 20170010785 A KR20170010785 A KR 20170010785A KR 1020167034257 A KR1020167034257 A KR 1020167034257A KR 20167034257 A KR20167034257 A KR 20167034257A KR 20170010785 A KR20170010785 A KR 20170010785A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
lgr5
seq
amino acid
hvr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
KR1020167034257A
Other languages
English (en)
Inventor
앤드류 지. 폴슨
웨이구앙 마오
론 피레스타인
Original Assignee
제넨테크, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제넨테크, 인크. filed Critical 제넨테크, 인크.
Publication of KR20170010785A publication Critical patent/KR20170010785A/ko
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • G01N33/574—
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5758—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites
    • G01N33/5759—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites involving compounds localised on the membrane of tumour or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5152—Tumor cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 항-LgR5 항체 및 이를 사용하는 방법을 제공한다.

Description

항-LGR5 항체 및 이의 용도{ANTI-LGR5 ANTIBODIES AND USES THEREOF}
본 출원은, 이의 전문이 임의의 목적을 위하여 본원에 참고로 포함된, 2014년 6월 11일 출원된 미국 가특허원 제62/010,637호에 대한 우선권을 청구한다.
본 발명은 항-LgR5 항체 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.
암 줄기 세포 가설은, 정상 조직과 유사하게, 특성화된 세포의 뚜렷한 서브세트가 종양을 자가-갱신하고 계속적으로 증식시키는 능력을 갖는다는 것을 상정한다. 암 줄기 세포 (CSC)는 이들을 치료적 처치를 위한 목적하는 표적이 되게 하는, 종양 개시, 진행, 전이, 및 재발과 관계된다.
가장 잘 특성화된 조직 줄기 세포 집단 중 하나는, 항상성 장관 상피(homeostatic intestinal epithelia) 내의 모든 분화된 세포 유형을 야기하는 위장관 내의 류신-풍부 반복-함유 G-단백질-커플링된 수용체 5 (Lgr5) 장샘 세포이다. LgR5는 활성 순환 장관 줄기 세포 (ISC)의 표면에서 발견되는 7-막관통 단백질이다. 인간 LgR5는 907 아미노산 단백질로, 여기서 ~540개 아미노산은 아미노-종결 신호 서열의 절단 후 세포외 공간에 있을 것으로 예측된다. LgR5은, 엑토도메인(ectodomain) 내의 17개의 불완전 류신-풍부 반복 모티프 및 류신-풍부 반복 및 제1 막관통 도메인 사이에 위치한 시스테인-풍부 영역을 포함한다.
LgR5-발현 ISC는 Wnt 조절에 민감성이고, 주요하게 장관 상피의 항상성 재생의 원인으로 작용한다. 마우스 내 LgR5-발현 세포의 제거는 장관 상피의 항상성에 영향을 미치지 않으나, 기타 세포 유형이 이러한 세포 집단을 보충할 수 있다는 것을 암시한다. Tian et al., Nature 478: 255-259 (2011). R-스폰딘은 WNT3A에 의한 WNT 신호전달을 증진시키며, 4개 모두의 R-스폰딘, RSPO1, RSPO2, RSPO3, 및 RSPO4는 LgR5에 결합할 수 있다. Lau et al., Nature 476: 293-297 (2011).
LgR5+ 세포는 또한, 장관 암에 대한 유래 세포로서 작용하고, CSC로서 작용하는 것으로 고려되며, 이는 LgR5+ 세포의 제거가 종양 성장 및 유지에 깊은 영향을 가질 수 있다는 것을 암시한다.
LgR5+ 세포 유해의 APC 돌연변이체 종양의 계통 추적은, 장관 종양 내 다중 세포 유형이 LgR5+ 전구체로부터 유래한다는 것을 예증한다. 더욱이, LgR5+ 세포는, 종양 덩어리에 대한 자손세포를 개시 및 계속적으로 부여하는 것으로 고려되며, 이는 LgR5+ 세포의 제거가 종양 성장 및 유지에 깊은 영향을 가질 수 있다는 것을 암시한다. 그러나, LgR5의 발현 측정에 있어 오랫동안 제기되어왔던 문제점은 고품질의 면역조직화학 (IHC) 반응성 항체의 부족이다.
본 분야에서, LgR5-연관된 병태, 예컨대 암의 치료 및 진단을 위하여 LgR5를 표적화하는 제제에 대한 필요성이 존재한다. 본 발명은 그러한 요구를 충적하고 기타 이점을 제공한다.
요약
항-LgR5 항체 및 면역접합체 및 이를 사용하는 방법이 제공된다. 면역조직화학에 유용한 항-LgR5 항체가 제공된다.
일부 구현예에서, LgR5에 결합하는 단리된 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 또는 (b) 서열 번호: 20의 아미노산 열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는, HVR-H2. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 또는 (b) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a)(i) 서열 번호: 6의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VH 서열; (ii) 서열 번호: 5의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열; 또는 (b)(i) 서열 번호: 8의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VH 서열; (ii) 서열 번호: 7의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 6 또는 서열 번호: 8의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 7 또는 서열 번호: 9의 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 단클론성 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 마우스, 래빗, 인간, 인간화된, 또는 키메라 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 IgG이다.
일부 구현예에서, 본원에서 기재된 항체를 암호화하는 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서 기재된 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체를 생산하는 방법이 제공되며, 이는 본원에서 기재된 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체가 제공되며, 이는 본원에 기술된 항체 및 세포독성 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 제형이 제공되며, 이는 본원에 기술된 항체를 포함하는 면역접합체 및 세포독성 제제 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
일부 구현예에서, 표지에 콘주게이트된, 본원에 기술된 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 표지는 양전자 방출핵(positron emitter)이다. 일부 구현예에서, 양전자 방출핵은 89Zr이다.
일부 구현예에서, 생물학적 샘플 중의 인간 LgR5를 검출하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 인간 LgR5에의 항-LgR5 항체의 결합을 위하여 허용된 조건 하에서, 본원에 기술된 항-LgR5 항체를 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 생물학적 샘플에서 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 생물학적 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플이다.
일부 구현예에서, LgR5-양성 암을 검출하기 위한 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 하기를 포함한다: (i) LgR5-양성 암을 갖거나 이를 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 표지된 항-LgR5를 투여하는 단계로서, 상기 표지된 항-LgR5 항체는 본원에 기술된 항-LgR5 항체를 포함하는, 상기 투여 단계, 및 (ii) 상기 대상체에서 상기 표지된 항-LgR5 항체를 검출하는 단계로서, 상기 표지된 항-LgR5 항체의 검출은 상기 대상체에서의 LgR5-양성 암을 표지하는, 상기 검출 단계. 일부 구현예에서, 표지된 항-LgR5 항체는 양전자 방출핵에 콘주게이트된 항-LgR5 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 양전자 방출핵은 89Zr이다.
일부 구현예에서, LgR5-양성 암을 갖는 암 환자를 동정하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 인간 LgR5에의 항-LgR5 항체의 결합을 위하여 허용된 조건 하에서, 본원에 기술된 항-LgR5 항체를 환자로부터의 암 샘플과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 암 샘플에서 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 암 환자는, 암 샘플 내 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에서 복합체가 검출될 경우, LgR5-양성 암을 갖는 것으로 동정된다. 일부 구현예에서, 상기 암 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플이다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체(immunoconjuage)에 의한 치료를 위하여, 암 환자를 선택하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은, 면역조직화학(IHC)을 사용하여 환자로부터의 암 샘플 내 LgR5 발현 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, LgR5 발현의 상승된 수준은, 암 환자가 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체(immunoconjuage)에 의한 치료로부터 이점을 얻을 가능성이 더욱 크다는 것을 표지한다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 2+ 또는 3+ 염색이다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 3+ 염색이다. 일부 구현예에서, IHC는 본원에 기술된 항체를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 암 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플이다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체에 의한 치료를 위하여 암 환자를 선택하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은, 인간 LgR5로의 항-LgR5 항체의 결합을 위하여 허용된 조건 하에서 본원에 기술된 항-LgR5 항체로 환자로부터의 암 샘플을 접촉시키는 단계, 및 상기 암 샘플 내 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 암 환자는, 암 샘플 내 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에서 복합체가 검출될 경우, 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 암 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플이다.
일부 구현예에서, 암 환자를 치료하는 방법이 제공되고, 이는 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 상기 환자에게 투여여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자로부터의 암 샘플은, 면역조직화학 (IHC)를 사용하여 LgR5 발현의 상승된 수준을 갖는 것으로 측정되었던 것이다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 2+ 또는 3+ 염색이다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 3+ 염색이다. 일부 구현예에서, IHC는 본원에 기술된 항체를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 암 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플이다.
일부 구현예에서, 면역접합체는 하기를 포함하는 LgR5 항체이다: (a) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (c) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (d) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 일부 구현예에서, 면역접합체는 하기를 포함한다: (a) 서열 번호: 33의 VH 서열을 포함하는 항-LgR5 항체 및 서열 번호: 32의 VL 서열, 또는 (b) 서열 번호: 51의 VH 서열 및 서열 번호: 50의 VL 서열. 일부 구현예에서, 면역접합체는 세포독성 제제에 콘주게이트된 항-LgR5 항체를 포함한다.
도 1은 실시예 A에 기술된 바와 같이, 다양한 조직 내의 인간 LgR5 유전자 발현 수준의 도식적 표현을 나타낸다. 도 1의 인세트(inset)는 실시예 A에 기술된 바와 같이, 정상 결장 조직 및 결장 종양 내의 인간 LgR5 유전자 발현 수준의 도식적 표현을 나타낸다.
도 2는 실시예 B에 기술된 바와 같이, 원위치 혼성화에 의한 결장 종양 내의 LgR5의 발현을 나타낸다.
도 3a 및 3b는 (A) 결장 종양 조직 마마이크로어레이 내의 LgR5 발현의 다양한 수준의 유병률 및 (B) 각 결장직장 선암종 샘플로부터의 3개 코어 내의 LgR5 발현의 이종성을 나타내며, 상기 둘 모두는 실시예 B에 기술된 바와 같이 원위치 혼성화에 의하여 측정된다.
도 4a 및 4b는 항체 LGR5.1-12 및 항체 LGR5.26-1의 (A) 경쇄 및 (B) 중쇄의 배열을 나타낸다. 접촉 영역, 초티아 및 카밧 상보성 결정 영역 (CDR, 또한 초가변 영역, 또는 HVR로 지칭됨)이 표지된다. 카밧 HVR은 밑줄로 표시된다.
도 5a, 5b, 및 5c는, 실시예 E에 기술된 바와 같이, 항체 LGR5.1-12로의 (A) 결장 조직, (B) 모낭, 및 (C) 척수의 염색을 나타낸다.
도 6a, 6b, 6c, 및 6d는, 항체 YW353를 사용한 FACS에 의한, (A) LoVo X 1.1 이종이식 종양 세포 및 (B) D5124 이종이식 종양 세포의 표면 상에서 LgR5의 검출 및 실시예 F에 기술된 바와 같이, 항체 LGR5.1-12를 사용한, 면역조직화학에 의한 (C) LoVo X 1.1 이종이식체 종양 및 (D) D5124 이종이식체의 염색을 나타낸다.
도 7a, 7b, 7c 및 7d는 실시예 G에 기술된 바와 같이, 항체 LGR5.1-12를 사용한, 결장 종양의 예시적 0, 1+, 2+, 및 3+ 염색을 나타낸다.
도 8a 및 8b는 실시예 H에 기술된 바와 같이, (A) 항체 LGR5.1-12 및 (B) 항체 LGR5.26-1을 사용한 CXF233 이종이식체 종양 샘플의 염색을 나타낸다.
I. 정의
본원에서 목적으로 "수용체 인간 프레임워크"는 아래에서 정의된 바와 같이 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크로부터 유도된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크 "로부터 유래된" 수용체 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나 이것은 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노산 변화 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 구현예에서, VL 수용체 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열과 서열에서 동일하다.
"친화성"은 분자 (예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위와 그 결합 상대 (예를 들면, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총계의 강도를 지칭한다. 다르게 명시되지 않으면, 본원에서 사용된 바와 같이, "결합 친화성"은 결합 쌍 (예를 들면, 항체 및 항원)의 구성원 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 그 상대 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 나타낼 수 있다. 친화성은 본원에서 기재된 것을 포함하여 당해분야에서 공지된 공통의 방법으로 측정될 수 있다. 결합 친화성 측정을 위한 구체적인 예증적 및 예시적 구현예는 하기에 기재된다.
"친화성 성숙된" 항체는 변형되지 않은 모 항체와 비교하여 하나 이상의 초가변 영역(HVR)에서 하나 이상의 변형을 갖는 항체를 지칭하고, 상기 변형은 항원에 대한 항체의 친화성을 개선시킨다.
용어 "항-LgR5 항체" 및 "LgR5에 결합하는 항체"는 항체가 LgR5의 표적화에서 진단제 및/또는 치료제로 유용하도록 충분한 친화도로 LgR5에 결합할 수 있는 항체를 나타낸다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체의 비관련, 비-LgR5 단백질 결합의 정도는, 예를 들어, 방사면역측정법(RIA)에 의하여, 또는 스캐챠드(scatchard) 분석에 의하여, 또는 표면 플라스몬 공명, 예를 들어, 비아코어(Biacore)에 의하여 측정 시, 상기 항체의 LgR5 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예에서, LgR5에 결합하는 항체는 ≤　1μM, ≤　100 nM, ≤　10 nM, , ≤　5 Nm, , ≤　4 nM, , ≤　3 nM, , ≤　2 nM, ≤　1 nM, ≤　0.1 nM, ≤　0.01 nM, 또는 ≤　0.001 nM (예를 들면, 10-8 M 이하, 예컨대 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-LgR5 항체는 상이한 종 유래의 LgR5 중 보존되어 있는 LgR5의 에피토프에 결합한다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 동안, 비제한적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체)를 포함하여, 다양한 항체 구조, 및 항체 단편을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "항체 약물 콘주게이트" (ADC)는 용어 "면역접합체"에 상당한다.
"항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원을 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편들의 예시들은 비제한적으로 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-사슬 항체 분자 (예컨대, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다가특이적 항체를 포함한다.
표준 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 표준 항체의 이의 항원으로의 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 역으로, 표준 항체는 경쟁 검정에서 50% 이상으로 항체의 이의 항원으로의 결합을 차단한다. 예시적 경쟁 검정이 본원에 제공된다.
용어들 "암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장/증식을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리적 상태를 나타내거나 설명한다. 암의 예는 암종, 림프종 (예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 아세포종, 육종 및 백혈병을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이런 암의 더욱 특정 실례는 편평상피 세포 암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평상피 암종, 복막의 암, 간세포암, 위장관암, 췌장암, 신경교종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 백혈병 및 기타 림프증식성 장애, 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다.
용어 "키메라성" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공급원 또는 종으로부터 유도되는 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 상이한 공급원 또는 종으로부터 유도되는 항체를 지칭한다.
항체의 "부류"는 이의 중쇄가 소유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5개 주요 부류의 항체가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있으며, 이들 중 몇몇은 하위부류(이소형), 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가 구분될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 불린다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "세포독성제"는 세포성 기능을 억제 또는 예방하고/하거나 세포사 또는 파괴를 일으키는 물질을 지칭한다. 세포독성제는, 비제한적으로, 방사성 동위원소 (예를 들면, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학치료제 또는 약물 (예를 들면, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로르암부실, 다우노루비신 또는 다른 개재 약물); 성장 억제성 제제; 효소 및 그 단편 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소 예컨대 소분자 독소 또는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성 독소, 단편 및/또는 그 변이체 포함; 및 아래 개시된 다양한 항종양 또는 항암제를 포함한다.
"효과기 기능"은 항체 이소형과 함께 다양한 항체의 Fc 영역에 기인할 수 있는 상기 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 작동체 기능의 실례에는 하기가 포함된다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체의 하향 조절 (예를 들어, B 세포 수용체); 및 B 세포 활성화.
제제, 예를 들면, 약제학적 제형의 "효과적인 양"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 복용량에서 시간의 기간동안 효과적인 양을 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 분자 상의 부위를 지칭한다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 적어도 불변 영역 부분을 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 원상태 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다.　 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 중쇄의 Cys226 또는 Pro230으로부터 카복실-말단까지 연장된다.　그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 특정되지 않는 경우, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 또한EU 지수로 불리우는 EU 넘버링 시스템에 따르고 이는 하기 문헌에 기재된 바와 같다: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 하기 4가지 FR 도메인으로 구성된다: FR1, FR2, FR3, 및 FR4. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로, VH (또는 VL) 내의 하기 서열 내에 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "LgR5의 글리코실화된 형태"는, 탄수화물 잔기의 부가에 의하여 후-번역 변형된 LgR5의 자연 발생 형태를 지칭한다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되고 상기 세포의 후손을 포함하는, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 1차 형질전환된 세포 및 계대 횟수와 상관없이 이로부터 유래된 후손을 포함하는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함한다. 후손은 모 세포와 핵산 함량에서 완전히 동일할 수는 없고 돌연변이를 함유할 수 있다. 최초 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 또는 선별된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손은 여기에 포함된다.
"인간 항체"는, 인간 또는 인간 세포에 의하여 생성되거나, 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-암호화 서열을 이용한 비-인간 공급원으로부터 유래한 항체의 그것과 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 특이적으로 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다.
"래빗 항체"는, 래빗 또는 래빗 세포에 의하여 생성되거나, 래빗 항체 레퍼토리 또는 다른 래빗 항체-암호화 서열을 이용한 비-래빗 공급원으로부터 유래한 항체의 그것과 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 존재하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위 그룹으로부터이다. 일반적으로, 서열의 하위 그룹은 하기 문헌에서와 같은 하위그룹이다: Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. 일 구현예에서, VL에 대해, 하위그룹은 Kabat et al., 상기에서와 같이 하위그룹 카파 I이다. 일 구현예에서, VH에 대해, 하위그룹은 Kabat et al., 상기에서와 같이 하위그룹 III이다.
"인간화" 항체는 비인간 HVR로부터 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터 아미노산 잔기를 포함하는 키메라성 항체를 지칭한다. 특정 구현예에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 여기에서 HVR (예를 들면, CDR)의 실질적으로 모두는 비인간 항체의 것에 일치하고, 그리고 FR의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 항체의 것에 일치한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유도된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들면, 비인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화 처리되는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "초가변 영역", "HVR"은 서열이 초가변성이고/이거나 구조적으로 정의된 루프 ("초가변 루프")를 형성하는 항체-가변 도메인 영역을 나타낸다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6 개의 HVR; VH에 3 개(H1, H2, H3), 및 VL에 3 개(L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프 및/또는 상보성 결정 영역 (CDR) 유래의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 중 후자는 가장 높은 서열 가변성을 갖고/갖거나 항원 인식을 수반한다. 예시적인 초가변성 루프는 하기에서 발생한다: 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3) (Chothia and Lesk, J. Mol . Biol . 196:901-917 (1987).) 예시적인 CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)은 하기 아미노산 잔기에서 발생한다: L1의 24-34 , L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35B, H2의 50-65, 및 H3의 95-102. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).) VH 내의 CDR1을 예외로 하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. CDR은 또한 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR"을 포함하며, 이는 항원에 접촉하는 잔기이다. SDR은, 소위 간략화된-CDR 또는 CDR이라고 불리는 CDR의 영역 내 함유된다. 예시적인 a-CDR (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2, 및 a-CDR-H3)은 하기 아미노산 잔기에서 발생한다: L1의 31-34, L2의 50-55, L3의 89-96, H1의 31-35B, H2의 50-58, 및 H3의 95-102. (참고: Almagro and Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008).) 다르게 명시되지 않으면, 가변 도메인 (예를 들면, FR 잔기)에서 HVR 잔기 및 다른 잔기는 Kabat et al., 상기에 따라 본원에서 넘버링된다.
"면역접합체"는 비제한적으로 세포독성제를 포함하여 하나 또는 그 초과 이종성 분자(들)에 콘주게이트되는 항체이다. 면역접합체는 용어 "항체 약물 콘주게이트" (ADC)와 동등하다.
"개체" 또는 "환자" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은, 비제한적으로, 사육된 동물 (예를 들면, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류 (예를 들면, 인간 및 비인간 영장류 예컨대 원숭이), 래빗, 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 래트)를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 개체 또는 대상체는 인간이다.
"단리된" 항체는 그 자연 환경의 성분으로부터 분리되는 것이다. 일부 구현예에서, 항체는 다음 기술에 의한 측정시 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다: 예를 들어, 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC). 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토를 위해 하기의 문헌을 참조한다: 예를 들어, Flatman et al., J. Chromatogr . B 848:79-87 (2007).
"단리된" 핵산은 이의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만 상기 핵산 분자는 염색체외적으로 존재하거나 이의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항-LgR5 항체를 암호화하는 단리된 핵산"은 단일 벡터 또는 별도의 벡터에 상기 핵산 분자(들)을 포함하는, 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 이의 단편)을 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭하고 상기 핵산 분자(들)은 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재한다.
본원에 사용된 용어 "LgR5"는, 세포 내 LgR5 전구체 단백질의 처리로 유발된 임의의 천연, 성숙 LgR5를 지칭한다. 상기 용어는, 달리 표지되지 않는다면, 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간 및 시노몰구스 또는 레서스 원숭이) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한 척추동물 공급원 유래의 LgR5를 포함한다. 상기 용어는 또한 LgR5의 천연 발생 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 신호 서열을 갖는 예시적인 인간 LgR5 전구체 단백질의 아미노산 서열 (아미노산 1-21)은 서열 번호: 21에 나타난다. 예시적인 성숙 인간 LgR5의 아미노산 서열은 서열 번호: 22에 제공된다. 예시적인 시노몰구스 원숭이 LgR5의 아미노산 33 내지 907의 예측된 서열은 서열 번호: 23에 나타난다. 신호 서열을 갖는 예시적인 래트 LgR5 전구체의 아미노산 서열 (아미노산 1-21) 및 성숙 서열은 서열 번호: 24 및 25, 각각에 나타난다. 신호 서열을 갖는 예시적인 마우스 LgR5 전구체의 아미노산 서열 (아미노산 1-21) 및 성숙 서열은 서열 번호: 26 및 27, 각각에 나타난다.
용어 "LgR5-양성 암"은 이들 표면 상에 LgR5를 발현하는 세포를 포함하는 암을 지칭한다. 세포가 표면 상의 LgR5를 발현하는지 여부를 측정하기 위한 목적을 위하여, LgR5 mRNA 발현은 세포 표면 상에서의 LgR5 발현과 연관되는 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, LgR5 mRNA의 발현은 원위치 혼성화 및 RT-PCR (정량적 RT-PCR 포함)로부터 선택된 방법에 의하여 측정된다. 대안적으로, 세포 표면 상에서의 LgR5 발현은 예를 들어, 예컨대 면역조직화학, FACS 등과 같은 방법으로 LgR5에 대한 항체를 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "LgR5-양성 암 세포"는 이들 표면 상에 LgR5를 발현하는 암 세포를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질 항체의 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉, 모집단을 포함하는 개별 항체는, 예를 들면, 천연 발생 돌연변이를 함유하거나 또는 단클론성 항체 제제의 생산 동안 발생하는 가능한 변이체 항체 (상기 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다)를 제외하고, 동일하고/하거나 동일한 에피토프를 결합한다. 전형적으로 상이한 결정인자 (에피토프)에 대하여 유도된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체와 대조로, 단클론성 항체 제제의 각각의 단클론성 항체는 항원에서 단일 결정인자에 대해서 유도된다. 따라서, 변형제 "단클론성"은 항체의 실질적으로 균질 모집단으로부터 수득되는 바와 같이 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의해 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않아야 한다.　 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 단클론성 항체는, 비제한적으로 혼성세포 방법, 재조합 DNA 방법, 파아지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 이용하는 방법을 포함하여, 다양한 기술에 의해 생산될 수 있고, 단클론성 항체의 상기 방법 및 다른 예시적인 방법은 본원에서 기재된다.
"노출된 항체"는 이종성 모이어티 (예를 들면, 세포독성 모이어티) 또는 방사선표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 노출된 항체는 약제학적 제형 중에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조와 함께 천연적으로 존재하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디설파이드 결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성된, 약 150,000 돌턴의 이종사량체 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로 각각의 중쇄는 또한 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로 불리우는 가변 영역(VH)에 이어서 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2, 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로 각각의 경쇄는 또한 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로 불리우는 가변 영역(VL)에 이어서 불변 경쇄(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파 (κ) 및 람다(λ)로 불리우는 2개 유형 중 하나에 할당될 수 있다.
용어 "팩키지 삽입물"은 치료학적 물품의 상업 팩키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하기 위해 사용되고 이는 상기 치료학적 물품의 사용에 관한 지적사항, 용도, 투여량, 투여, 조합 치료요법, 사용금지 사항 및/또는 경고에 관한 정보를 함유한다.
표준 폴리펩티드 서열과 관련하여 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열을 정렬하고 필요한 경우 최대 퍼센트 서열 동일성을 성취하기 위해 갭을 도입한 후 표준 폴리펩티드 서열내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 %로서 정의되고 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존성 치환을 고려하지 않는다. 아미노산 서열 동일성을 측정할 목적을 위한 정렬은 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 시판되는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여, 당업계의 기술 범위내에 있는 다양한 방식으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 전장 서열 상에 최대 정렬을 성취하기 위해 요구되는 임의의 알고리듬을 포함하는, 서열을 정렬하기 위한 적당한 파라미터를 결정할 수 있다. 본원에서의 목적을 위해, 그러나, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성시킨다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제조사 (Genentech, Inc.)에 의해 개발되었고, 소스 코드는 사용자 기록문서와 함께 하기와 같이 제출되었다: 미국 저작권 청, 워싱턴 D.C., 20559, 하기 하에서 등록됨: 미국 저작권 등록 번호 TXU510087. ALIGN-2 프로그램은 하기 제조사로부터 시판되고 있고: Genentech, Inc. South San Francisco, California, 또는 소스 코드로부터 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지탈 UNIX V4.0D를 포함하는, UNIX 작동 시스템 상에서 사용을 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되고 다양하지 않다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 상황에서, 소정의 아미노산 서열 B(이는 소정의아미노산 서열 B에 대해, 이것과 또는 이에 대해 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 소정의 아미노산 서열 A로서 대안적으로 표현될 수 있다)에 대해, 이것과 또는 이에 대해 소정의 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성은 다음과 같이 계산된다:
100 배 분획 X/Y
여기서, X는 A 및 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 동일한 매치로서 스코어되는 아미노산 잔기의 수이고 Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, A 대 B의 % 아미노산서열 동일성은 B 대 A의 % 아미노산 서열 동일성은 동일하지 않음을 인식할 것이다. 달리 구체적으로 기재하지 않은 경우, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 직전의 문단에 기재된 바와 같이 수득한다.
용어 "약제학적 제형"은 그안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하기 위한 형태인, 그리고 제형이 투여되는 대상체에 허용불가능하게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약제학적으로 허용되는 담체"는 대상체에 비독성인, 활성 성분외에 약제학적 제형 내의 성분을 지칭한다. 제약학적으로 허용되는 담체에는 완충액, 부형제, 안정제, 또는 보존제가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본원에 사용된 "백금 복합체"는, 비제한적으로 하기인 항-암 화학치료 약물을 치칭한다: 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 이프로플라틴, 사트라플라틴, CI-973, AZ0473, DWA2114R, 네다플라틴, 및 스프리오플라틴 (이는 DNA에 공유적으로 결합하는 이들의 능력에 기반하여 종양에 대해 효능을 발효함).
본원에서 사용된 바와 같이, "치료" (및 이의 문법적 변화 예컨대 "치료한다" 또는 "치료하는")는 치료받는 개체의 당연한 과정을 변경하기 위한 시도로 임상 중재를 지칭하고, 예방을 위해 또는 임상 병리학의 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과에는 비제한적으로 하기를 포함한다: 질환 발생 또는 재발의 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리 결과의 약화, 전이의 방지, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 경감, 및 차도 또는 향상된 예후. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 서행시키기 위해 사용된다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원으로의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄 (각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다. (참고: 예를 들어, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007).) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 추가로, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체 기원의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 참고: 예를 들어, Portolano et al., J. Immunol . 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 이것이 연결된 또 다른 핵산을 증가시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서 벡터뿐만 아니라 이것이 도입되는 숙주 세포의 게놈 내로 함입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 "발현 벡터"로서 본원에 지칭된다.
II. 조성물 및 방법
일 양태에서, 본 발명은 부분적으로, 로LgR5에 결합하는 항체 및 그러한 항체를 포함하는 면역접합체를 기반으로 한다. 본 발명의 항체 및 면역접합체는, 예를 들어, LgR5-양성 암의 진단 또는 기반에 유용하다.
A. 예시적인 항- LgR5 항체
일부 구현예에서, 본 발명은 LgR5에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. LgR5는, 예를 들어, 활성 순환 장관 줄기 세포의 표면 상에서, 발견된 7-막관통 단백질이다. LgR5은 검사된 결장 종양 절편의 약 77% 내에 발현된다. 참고 , 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2013/149159. 신호 서열을 갖는 예시적인 자연 발생 인간 LgR5 전구체 단백질 서열 (아미노산 1-21)은 서열 번호: 21에 제공되고, 상응하는 성숙 LgR5 단백질 서열은 서열 번호: 22 (서열 번호: 21의 아미노산 22-907에 상응함)에 나타난다.
일부 구현예에서, 본 발명은 인간 LgR5의 아미노산 22 내지 322 내의 에피토프에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 아미노산 22 내지 322 이외에 있는 인간 LgR5 세포외 도메인 내의 에피토프에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 인간 LgR5의 아미노산 323 내지 558 내의 에피토프에 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
항체 αLgR5 .1-12 및 기타 구현예
일 측면에서, 본 발명은 하기로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일 측면에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다. 추가 구현예에서, 항체는 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 추가 구현예에서, 항체는 (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일 구현예에서, 항체는 (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 3개 모두의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인: (i) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (ii) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (iii) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및 (b) 하기로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 3개 모두의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인: (i) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (ii) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간화된 것이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 인간 수용체 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 상기 기술된 HVR 및 래빗 프레임워크 영역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 6에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 6에서 VH 서열을 포함하고 이는 상기 서열의 번역 후 변형을포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 5에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 5에서 VL 서열을 포함하고 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VL은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는, 서열 번호: 6 및 서열 번호: 5에서 VH 및 VL 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 6의 VH 서열 및 서열 번호: 5의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 인간 LgR5로의 결합을 위하여, 서열 번호: 6의 VH 서열 및 서열 번호: 5의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 인간 LgR5로의 결합을 위하여, 서열 번호: 6의 VH 서열 및 서열 번호: 5의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 아미노산 22 내지 322 이외에 있는 인간 LgR5 세포외 도메인 내의 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 huYW353 또는 8E11에 의한 인간 LgR5의 결합을 위하여 경쟁하지 않는다. 일부 구현예에서, 인간 LgR5의 아미노산 323 내지 558 내의 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 키메라성, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하여, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG1 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다:
항체 αLgR5 .26-1 및 기타 구현예
일 측면에서, 본 발명은 하기로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일 측면에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다. 추가 구현예에서, 항체는 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 추가 구현예에서, 항체는 (a) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일 구현예에서, 항체는 (a) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (b) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 3개 모두의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인: (i) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (ii) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (iii) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및 (b) 하기로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 3개 모두의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인: (i) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (ii) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간화된 것이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 수용체 인간 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 상기 기술된 HVR 및 래빗 프레임워크 영역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 8의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호 8에서 치환되고, 삽입되고/되거나 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호 8에서 VH 서열을 포함하고 이는 상기 서열의 번역 후 변형을포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 7에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호 7에서 VL 서열을 포함하고 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, Vl은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (b) 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3를 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는, 그 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호: 8 및 서열 번호: 7, 각각에서 VH 및 VL 서열을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 8의 VH 서열 및 서열 번호: 7의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 인간 LgR5로의 결합을 위하여, 서열 번호: 8의 VH 서열 및 서열 번호: 7의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 인간 LgR5의 아미노산 22 내지 322 내의 에피토프로의 결합을 위하여, 서열 번호: 8의 VH 서열 및 서열 번호: 7의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 키메라성, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하여, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG2a 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이 단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다:
항체 8E11 및 기타 구현예
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간화된 것이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 인간 수용체 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 특정 구현예에서, 인간 수용체 프레임워크는 인간 VL 카파 IV 공통 (VLKIV) 프레임워크 및/또는 VH 프레임워크 VH1 이다. 특정 구현예에서, 인간 수용체 프레임워크는 인간 VL 카파 IV 공통 (VLKIV) 프레임워크 및/또는 VH 프레임워크 VH1 이며, 이는 중쇄 프레임워크 영역 FR3 내의 R71S 돌연변이 및 A78V 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 서열 번호: 65 내지 68로부터 선택된 중쇄 프레임워크 FR3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 서열 번호: 66의 중쇄 프레임워크 FR3 서열을 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 중쇄 가변 도메인 프레임워크는 서열 번호: 65 내지 68로부터 선택된 FR3 서열을 갖는 변형된 인간 VH1 프레임워크이다. 일부 그러한 구현예에서, 중쇄 가변 도메인 프레임워크는 서열 번호: 66의 FR3 서열을 갖는 변형된 인간 VH1 프레임워크이다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 서열 번호: 61의 경쇄 프레임워크 FR3 서열을 포함한다. 일부 그러한 구현예에서, 중쇄 가변 도메인 프레임워크는 서열 번호: 61의 FR3 서열을 갖는 변형된 VL 카파 IV 공통 (VLKIV) 프레임워크이다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 및 45로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 및 45로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 및 45에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 및 45로부터 선택된 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 31의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 33의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 35의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 37의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 39의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 41의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 43의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 45의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 및 45로부터 선택된 VH 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 및 44로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 및 44로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 및 44로부터 선택된 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 및 44로부터 선택된 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 32의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 34의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 36의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 40의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 42의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 44의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL) 서열을 포함한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 및 44로부터 선택된 아미노산 서열의 VL 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VL 은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 31 및 서열 번호: 30의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 33 및 서열 번호: 32의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 35 및 서열 번호: 34의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 37 및 서열 번호: 36의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 39 및 서열 번호: 39의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 41 및 서열 번호: 40의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 43 및 서열 번호: 42의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 서열 번호: 45 및 서열 번호: 44의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 33의 VH 서열 및 서열 번호: 32의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 22-323 내에 있거나 이에 중첩된다. 일부 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 1-312 내에 있거나 이에 중첩된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 키메라성, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하여, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG1 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다.
항체 YW353 및 기타 구현예
일 양태에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간 항체이다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 26의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 51의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 51에서 치환되고, 삽입되고/되거나 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 51에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 51의 VH 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 50에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 50에서 치환되고, 삽입되고/되거나 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다. 임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 50의 VL 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VL 은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 50의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 51 및 서열 번호 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 51의 VH 서열 및 서열 번호: 50의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 22-123 내에 있거나 이에 중첩된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 1-102 내에 있거나 이에 중첩된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 인간 항체를 포함하는, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG2a 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다.
항체 3G12 및 기타 구현예
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간화된 것이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 인간 수용체 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 특정 구현예에서, 인간 수용체 프레임워크는 인간 VL 카파 공통 (VLK) 프레임워크 및/또는 인간 VH 하위그룹 3 공통 (VH3) 프레임워크이다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 47의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 47의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 47의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 47의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 47의 VH 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 46의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 46의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 46의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 46의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 46의 VL 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VL 은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 47 및 서열 번호: 46의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 47의 VH 서열 및 서열 번호: 46의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 324-423 내에 있거나 이에 중첩된다. 일부 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 303-402 내에 있거나 이에 중첩된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 324-555 내에 있거나 이에 중첩된다. 일부 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 303-534 내에 있거나 이에 중첩된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 키메라성, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하여, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG1 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다.
항체 2H6 및 기타 구현예
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-LgR5 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, (d) 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (e) 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및, (f) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
임의의 상기 구현예에서, 항-LgR5 항체는 인간화된 것이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 임의의 상기 구현예에서와 같이 HVR를 포함하고, 그리고 추가로, 인간 수용체 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 특정 구현예에서, 인간 수용체 프레임워크는 인간 VL 카파 공통 (VLK) 프레임워크 및/또는 인간 VH 하위그룹 3 (VH3) 프레임워크이다.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 49의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 49의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 49의 VH 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VH 는 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 서열 번호: 48의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 48의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 관하여 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-LgR5 항체는 LgR5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열 번호: 48의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열 번호: 48의 아미노산 서열에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 (즉, FR 내의) 영역에서 발생한다.
임의로, 항-LgR5 항체는 서열 번호: 48의 아미노산 서열의 VL 서열을 포함하고, 이는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, VL 은 하기로부터 선택된 1, 2, 또는 3개 HVR을 포함한다: (a) 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
또 다른 측면에서, 항-LgR5 항체가 제공되고, 여기서, 상기 항체는 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 양태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 구현예에서, 항체는 서열 번호: 49 및 서열 번호: 48의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 이는 각각, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 서열 번호: 49의 VH 서열 및 서열 번호: 48의 VL 서열을 포함하는, 항-LgR5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 324-423 내에 있거나 이에 중첩된다. 일부 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 303-402 내에 있거나 이에 중첩된다. 특정 구현예에서, 서열 번호: 21의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 324-555 내에 있거나 이에 중첩된다. 일부 구현예에서, 서열 번호: 22의 에피토프에 결합하는 항체가 제공되며, 이는 아미노산 303-534 내에 있거나 이에 중첩된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-LgR5 항체는, 키메라성, 인간화, 또는 인간 항체를 포함하여, 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-LgR5 항체는 항체 단편, 예를 들면, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 실질적 전장 항체, 예를 들면, IgG1 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같이 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
추가의 측면에서, 상기 임의의 양태에 따른 항-LgR5 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같이단독으로 또는 조합적으로 임의의 특징을 혼입할 수 있다:
1. 항체 친화성
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 ≤　1μM, ≤　100 nM, ≤　10 nM, ≤　1 nM, ≤　0.1 nM, ≤　0.01 nM, 또는 ≤　0.001 nM, 및 임의로 ≥　10-13 M. (예를 들어, 10-8 M 이하, 예컨대 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
하나의 양태에서, Kd는 하기의 검정에 의해 기재된 바와 같은 목적하는 항체의 Fab 버전 및 이의 항원과 함께 수행된 방사능표지된 항원 결합 검정(RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성은 일련의 적정된 비표지된 항원의 존재하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시키고 이어서 결합된 항원을 항-Fab 항체 코팅된 플레이트로 포획함에 의해 측정된다 (예를 들어, 참고: Chen et al., J. Mol . Biol . 293:865-881(1999)). 검정용 조건을 수립하기 위해, MICROTITER® 다중-웰 플레이트 (Thermo Scientific)는 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6)에서 포착 항-Fab 항체 (Cappel Labs)의 5 μg/ml로 밤새 코팅되고, 그리고 그 뒤에 2 내지 5 시간동안 실온 (대략 23℃)에서 PBS내 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 차단된다. 비-흡착제 플레이트 (Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 해당 Fab의 연속 희석으로 혼합된다 (예를 들면, 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치, Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). 그 다음 해당 Fab는 밤새 항온처리되지만; 그러나, 항온처리는 평형이 달성됨을 확인하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들면, 약 65 시간)동안 계속할 수 있다. 그 후에, 혼합물은 실온에서 (예를 들면, 1 시간 동안) 항온처리를 위해 포착 플레이트로 이동된다. 이어서, 상기 용액을 제거하고 플레이트는 PBS 중에서 0.1% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20®)으로 8회 세척하였다. 플레이트를 건조시키는 경우, 150 μl/웰의 섬광제 (MICROSCINT-20 TM; Packard)를 첨가하고 플레이트는 10분 동안 TOPCOUNT TM 감마 카운터 (Packard) 상에서 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도는 경쟁 결합 검정에 사용하기 위해 선택한다.
일부 구현예에서, Kd는 BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 이용한 표면 플라스몬 공명 검정을 사용하여 ~10 반응 유니트 (RU)에서 고정된 항원 CM5 칩으로 25℃ 에서 수행된다. 간략하게, 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, BIACORE, Inc.)은 이의 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드 하이드로클로라이드 (EDC) 및 N-하이드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원은 pH 4.8, 10 mM 아세트산나트륨으로 5 μg/ml (~0.2 μM)까지 희석되고, 그 다음 5 μl/분의 유속으로 주입되어 커플링된 단백질의 대략 10 반응 유니트 (RU)를 달성한다. 항원 주사 후, 1 M 에탄올아민을 주사하여 미반응된 그룹을 차단시킨다. 역학적 측정을 위해, 2배 연속 희석된 Fab (0.78 nM 내지 500 nM)를 대략 25 μl/min의 유속으로 25°C 에서 PBS 중에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20TM) 계면활성제 (PBST)와 함께 사용한다. 결합율 (kon) 및 해리율 (koff)은 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함에 의해 단순한 1 대 1 랑무이르 결합 모델 (BIACORE ® Evaluation Software version 3.2)을 사용하여 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 비율 koff/kon 으로서 계산한다. 참고: 예를 들어, Chen et al., J. Mol . Biol. 293:865-881 (1999). 만일 가역속도(on-rate)가 상기 표면 플라스몬 공명 검정에 의해 106 M- 1 s-1 를 초과하면, 분광기, 예컨대 정지-유동 구비된 분광광도계 (Aviv Instruments) 또는 교반된 큐벳을 갖춘 8000-시리즈 SLM-AMINCOTM 분광광도계 (ThermoSpectronic)에서 측정된 바와 같이 항원의 증가 농도의 존재하에 25℃ 에서 pH 7.2, PBS내 20 nM 항-항원 항체 (Fab 형태)의 형광 방출 세기 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)에서의 증가 또는 감소를 측정하는 형광성 켄칭 기술을 이용함으로써 가역 속도는 측정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기술된 다른 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 참고: Hudson et al. Nat. Med . 9:129-134 (2003). scFv 단편의 검토를 위하여, 다음을 참고하며: 예를 들어,
Figure pct00001
, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); 또한 다음을 참고한다: WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458. 에피토프 잔기를 결합하는 회수 수용체를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해, 다음을 참고한다: 미국 특허 번호 5,869,046.
디아바디는 2가 또는 이특이적일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 다음을 참고한다: 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med . 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 6444-6448 (1993). 트리아바디 및 테트라바디가 또한 하기에 기술된다: Hudson et al., Nat. Med . 9:129-134 (2003).
단일-도메인 항체는 항체의 모든 또는 일부의 중쇄 가변 도메인 또는 모든 또는 일부의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체 (Domantis, Inc., Waltham, MA; 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 6,248,516 B1)이다.
항체 단편은, 본원에 기술된 온전한 항체의 단백질분해 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포에 의한 생산 (예컨대 이 . 콜라이 또는 파지)를 비제한적으로 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화된 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 키메라성 항체이다. 특정 키메라 항체는 다음의 문헌에 기재되어 있다: 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)). 일 예에서, 키메라성 항체는 비인간 가변 영역 (예를 들면, 마우스, 래트, 햄스터, 래빗, 또는 비인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유도된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 부류로부터 변화된 "부류 스위칭된" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 구현예에서, 키메라 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간화되어 인간에 대한 면역원성이 감소되어 있고 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 보유한다. 일반적으로, 인간화된 항체는 하나 이상의 가변 도메인을 포함하고, 여기서 HVR, 예를 들어, CDR, (또는 이의 일부)는 비-인간 항체로부터 유래하고 FR (또는 이의 일부)은 인간 항체 서열로부터 기원한다. 인간화된 항체는 임의로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체에서 일부 FR 잔기는 비인간 항체 (예를 들면, HVR 잔기가 유도되는 항체)로부터 상응하는 잔기로 치환되어, 예를 들면, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선한다.
인간화 항체 및 이의 제조 방법은, 예를 들면, 하기에 고찰되고: Almagro and Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008), 추가로, 예를 들어, 하기 문헌에 기재되어 있다: Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 86:10029-10033 (1989); 미국 특허 번호 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (하기를 기술: SDR (a-CDR) 그래프팅); Padlan, Mol . Immunol . 28:489-498 (1991) (하기를 기술: "재표면화"); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (하기를 기술: "FR 셔플링"); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (하기를 기술: FR 셔플링에 대한 "유도된 선택" 접근법).
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: "베스트-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Sims et al. J. Immunol . 151:2296 (1993)); 특정 하위 그룹의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Carter et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J . Immunol ., 151:2623 (1993)); 인간 성숙한 (체세포적으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식선 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Almagro and Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008)); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역 (참고: 예를 들어, Baca et al., J. Biol . Chem . 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol . Chem . 271:22611-22618 (1996)).
4. 인간 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 다음 문헌에 기재되어 있다: van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol . 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr . Opin . Immunol . 20:450-459 (2008).
인간 항체는 항원성 유발에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 온전한 인간 항체 또는 온전한 항체를 제조하도록 변형된 형질전환 동물에게 면역원을 투여함에 의해 제조될 수 있다. 상기 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나 염색체외적으로 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합된 인간 면역글로불린 유전자좌 모두 또는 일부를 함유한다. 상기 형질전환 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되어 있다. 형질전환 동물로부터 인간 항체를 수득하기 위한 방법의 검토를 위해, 다음의 문헌을 참조한다: Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). 또한 참고: 예를 들어, 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 (XENOMOUSETM 기술을 기재함); 미국 특허 번호 5,770,429 (HuMab®기술을 기재함); 미국 특허 번호 제7,041,870호(K-M MOUSE® 기술을 기재함), 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900 (VelociMouse® 기술을 기재함). 상기 동물에 의해 발생된 온전한 항체로부터 인간 가변 영역은, 예를 들면, 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해, 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 혼성세포 기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 제조를 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되었다. (참고: 예를 들어, Kozbor J. Immunol ., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).) 인간 B 세포 혼성세포 기술을 통해 제조된 인간 항체가 또한 다음 문헌에 기재되어 있다: Li et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 103:3557-3562 (2006). 추가의 방법은 예를 들어 다음의 문헌에 기재된 것들을 포함한다: 미국 특허 번호 제7,189,826호 (혼성세포 세포주로부터 모노클로날 인간 IgM 항체의 제조를 기재함) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (인간-인간 혼성세포를 기재함). 인간 혼성세포 기술 (Trioma technology)은 또한 다음 문헌에 기재되어 있다: Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005).
인간 항체는 또한 인간 유래된 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인서열을 단리시킴에 의해 제조될 수 있다. 상기 가변 도메인 서열은 이어서 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기에 기재되어 있다.
5. 라이브러리- 유래된 항체
본 발명의 항체는 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대한 조합적 라이브러리를 스크리닝함에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, 파아지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 목적하는 결합 특성을 갖는 항체들에 대해 상기 라이브러리를 스크리닝하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 상기 방법은 다음 문헌에서 검토된다: 예를 들어, Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) 및 추가로 예를 들어, 문헌(참조: McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol . Biol . 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol . Biol . 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol . 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol . Methods 284(1-2): 119-132(2004).
특정 파아지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝하고 파아지 라이브러리에서 무작위로 재조합되고, 이는 이어서 다음의 문헌에 기재된 바와 같이 항원-결합 파아지에 대해 스크리닝될 수 있다: Winter et al., Ann. Rev. Immunol ., 12: 433-455 (1994). 파아지는 전형적으로 단일쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 혼성세포를 작제할 필요 없이 면역원에 대한 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 순수 레퍼토리는 다음 문헌에 기재된 바와 같은 임의의 면역화 없이 광범위한 비-자가 및 또한 자가 항원에 대한 단일 항체 공급원을 제공하기 위해 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)될 수 있다: Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). 최종적으로, 순수 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 비재배열된 V-유전자 분절을 클로닝하고 고도의 가변성 CDR3 영역을 암호하고 시험관내 재배열을 성취하기 위해 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함에 의해 합성적으로 제조될 수 있고, 이는 다음 문헌에 기재된 바와 같다: Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol ., 227: 381-388 (1992). 인간 항체 파아지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는 예를 들어, 다음의 문헌을 포함한다: 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 고려된다.
6. 다중특이적 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어, 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 결합 특이성들 중 하나는 LgR5에 대한 것이고 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 구현예에서, 이특이적 항체는 LgR5의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 LgR5를 발현하는 세포에 세포독성제를 국소화하는데 사용될 수 있다. 이특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 비제한적으로 하기를 포함한다: 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 동시-발현 (참고: Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), 및 "크놉-인-홀" 가공 (참고: 예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168). 다중 특이적 항체는 또한 다음과 같이 제조될 수 있다: 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 스티어링 효과를 가공함에 의해 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교 결합시킴에 의해 (참고: 예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); 이중특이적 항체를 생산하기 위하여 류신 지퍼(leucine zipper)를 사용함으로써 (참고: 예를 들어 Kostelny et al., J. Immunol ., 148(5):1547-1553 (1992)); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)); 및 단일쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용함으로써 (참고: 예를 들어, Gruber et al., J. Immunol ., 152:5368 (1994)); 및 다음 문헌에 기재된 바와 같이 3특이적 항체를 제조함에 의해 (참고: 예를 들어, Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)).
"옥토퍼스 항체"를 포함하는, 3개 이상의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 가공된 항체는 또한 본원에 포함된다(참고: 예를 들어 US 2006/0025576A1).
본원에서 항체 또는 단편은 또한 LgR5 및 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이원 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다(참고: 예를 들어 US 2008/0069820).
7. 항체 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 성질을 개선시키는 것이 요구될 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 적당한 변형을 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열내 잔기들로부터의 결실 및/또는 이들로의 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이 만들어져서 최종 작제물에 도달할 수 있다, 단, 최종 작제물은 원하는 특성, 예를 들면, 항원-결합을 보유한다.
a) 치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 돌연변이 유발을 위한 목적하는 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "보존적 치환"이라는 표제하에 표 1에 나타낸다. 보다 실질적 변화는 "예시적 치환"의 표제하에 표 1에 제공되고, 추가로 아미노산 측쇄 부류를 참조로 하기에 기재된 바와 같다. 아미노산 치환은 관심 항체, 및 원하는 활성, 예컨대 보유된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대하여 스크리닝된 생성물로 도입될 수 있다.
본래
잔기 		예시적인
치환 		바람직
치환
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; 노르류신 Leu
Leu (L) 노르류신; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 Leu
아미노산은 통상의 측쇄 성질에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류의 구성원으로 교환시킬 필요가 있다.
치환형 변이체의 한 유형은 모 항체 (예를 들면 인간화 또는 인간 항체)의 하나 또는 그 초과 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택되는 수득한 변이체(들)은 모 항체에 대하여 특정 생물학적 특성 (예를 들면, 증가된 친화성, 감소된 면역원성)에서 변형 (예를 들면, 개선)을 가질 것이고/이거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환형 변이체는, 예를 들면, 파아지 디스플레이-기반 친화성 성숙 기술 예컨대 본원에서 기재된 것을 이용하여 편리하게 발생될 수 있는 친화성 성숙된 항체이다. 간략하게, 하나 이상의 HVR 잔기는 변이되고, 변이체 항체는 파지 상에 디스플레이되고, 특정 생물학적 활성 (예컨대, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경 (예를 들면, 치환)은, 예를 들면, 항체 친화성을 개선하기 위해 HVR에서 실시될 수 있다. 상기 변형은 HVR "핫스팟", 즉, 체세포 성숙화 공정 동안에 고빈도의 돌연변이를 진행하는 코돈에 의해 암호화된 잔기들 (참고: 예를 들어, Chowdhury, Methods Mol . Biol . 207:179-196 (2008)), 및/또는 SDR (a-CDR) 내에서 실시될 수 있고, 수득한 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화성에 대해 시험된다. 2차 라이브러리로부터 작제하고 재선택함에 의한 친화성 성숙화가 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다: Hoogenboom et al. Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001). 친화성 성숙화의 일부 구현예에서, 다양성이 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류 발생 경향 PCR, 쇄 셔플링 또는 올리고뉴클레오티드 지시된 돌연변이유발)에 의한 성숙화를 위해 선택되는 가변 유전자에 도입된다. 이어서 2차 라이브러리를 생성시킨다. 이어서 상기 라이브러리는 목적하는 친화성을 갖는 임의의 항체 변이체를 동정하기 위해 스크리닝한다. 다양성을 도입하기 위한 또 다른 방법은 HVR 지시된 방법을 포함하고, 여기서, 여러 HVR 잔기들 (예를 들어, 한번에 4 내지 6개 잔기들)은 무작위화된다. 항원 결합에 관여된 HVR 잔기는, 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여 특이적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 흔히 표적화된다.
특정 구현예에서, 치환, 삽입 또는 결실은 상기 변형이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한 하나 이상의 HVR에 존재할 수 있다. 예를 들면, 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들면, 본원에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 HVR에서 실시될 수 있다. 상기 변형은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각각의 HVR은 변형되지 않거나 단지 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기들 또는 영역들의 동정을 위해 유용한 방법은 다음 문헌에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불리운다: Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. 상기 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹 (예를 들면, 충전된 잔기 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu)은 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들면, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 확인되고 대체되어 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 측정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능성 민감성을 입증하는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 접촉을 확인하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조는 항체와 항원 사이의 접촉 지점을 동정하기 위하여 사용된다. 상기 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기들은 치환을 위한 후보물로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 이들이 목적하는 성질을 함유하는지를 측정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1 잔기 내지 100 이상 잔기를 함유하는 폴리펩티드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열간 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단의 효소 (예를 들어, ADEPT를 위해) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드로의 융합을 포함한다.
b) 당화 변이체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 항체가 당화되는 범위를 증가 또는 감소하기 위해 변경된다. 항체에 대한 당화 부위의 부가 또는 결실은 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성될 수 있어서 하나 또는 그 초과 당화 부위는 제조 또는 제거된다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 여기에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 원상태 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결부에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 이분지 올리고당을 포함한다. 참고: 예를 들어, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들면, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토오스, 및 시알산, 뿐만 아니라 이분지 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코오스를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 제조하기 위해 실시될 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코오스가 부족한 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 상기 항체에서 푸코오스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어, WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정기에 의한 측정시 Asn297에 부착된 모든 당구조(예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조)의 합과 비교하여, Asn297에서 당 쇄내 푸코스의 평균 양을 산출함에 의해 측정한다. Asn297은 Fc 영역에서의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 배치된 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; 그러나, Asn297은, 항체내 작은 서열 변이로 인해, 위치 297의 약 ± 3 아미노산 업스트림 또는 다운스트림, 즉, 위치 294 와 300 사이에 또한 배치될 수 있다. 상기 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 참고: 예를 들어, 미국 특허 공보 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공보의 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol . 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004). 탈푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주의 예시는 단백질 푸코실화는 하기를 포함한다: 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem . Biophys. 249:533-545 (1986); US Pat Appl No US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11에서), 녹아웃 세포주, 예를 들어, 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8 , 녹아웃 CHO 세포 (참고: 예를 들어, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107).
항체 변이체는 이등분한 올리고당으로 추가 제공되고, 예를 들면, 여기에서 항체의 Fc 영역에 부착된 이분지 올리고당은 GlcNAc에 의해 이등분된다. 상기 항체 변이체는 푸코실화를 감소시킬 수 있고/있거나 ADCC 기능을 개선시킬 수 있다. 상기 항체 변이체의 예는 예를 들어 다음 문헌에 기재되어 있다: WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.). Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토오스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 상기 항체 변이체는 CDC 기능을 개선시킬 수 있다. 상기 항체 변이체는 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다: WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.).
c) Fc 영역 변이체
특정 구현예에서, 하나 또는 그 초과 아미노산 변형은 본원에 제공된 항체의 Fc 영역속에 도입될 수 있고, 그렇게 함으로써 Fc 영역 변이체를 발생시킨다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 항체 변이체는 모두가 아닌 일부 효과기 기능을 보유하고, 이는 생체내 항체의 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요한 또는 유해한 적용에 바람직한 후보로 만든다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체 (FcR) 결합 검정은 항체가 FcγR 결합이 없지만(따라서, ADCC 활성이 없는) FcRN 결합 능력을 보유함을 확신하기 위해 수행될 수 있다. ADCC, NK 세포 매개용 1차 세포는 Fc(RIII 만을 발현하고, 반면에 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII을 발현한다. 조혈 세포상의 FcR 발현은 다음 문헌의 464 페이지 상의 표 3에 요약되어 있다: Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol . 9:457-492 (1991). 목적하는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적인 예는 다음문헌에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 제5,500,362호 (참고: 예를 들어 Hellstrom, I. et al. Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 83:7059-7063 (1986)) 및 Hellstrom, I et al., Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (참고: Bruggemann, M. et al., J. Exp . Med . 166:1351-1361 (1987)). 대안적으로, 비-방사능활성 검정 방법이 사용될 수 있다(예를 들어, 유동 세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사능활성 세포독성 검정 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96® 비-방사능활성 세포독성 검정 (Promega, Madison, WI)을 참조한다). 상기 검정을 위해 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 천연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 해당 분자의 ADCC 활성은 하기와 같이 생체내 평가된다: 예를 들면, 하기에 기술된 바와 같은 동물 모델: Clynes et al. Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 95:652-656 (1998). C1q 결합 검정은 또한 항체가 C1q를 결합할 수 없음에 따라서 CDC 활성이 부재임을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 참고: 예를 들어, C1q 및 C3c 결합 ELISA: WO 2006/029879 및 WO 2005/100402. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다(참고: 예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). FcRn 결합 및 생체내 제거/반감기 측정은 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (문험참조: 예를 들어, Petkova, S.B. et al., Int'l . Immunol . 18(12):1759-1769 (2006)).
감소된 효과기 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기들 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것들을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 상기 Fc 돌연변이체는 잔기들 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR로의 개선되거나 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (참고: 예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol . Chem . 9(2): 6591-6604 (2001).)
특정 구현예에서, 항체 변이체는, ADCC를 개선하는 하나 또는 그 초과 아미노산 치환, 예를 들면, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형은 변형된 (즉, 개선되거나 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 유도하는 Fc 영역에 수행되고, 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 바와 같다: 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol . 164: 4178-4184 (2000).
증가된 반감기 및 모계 IgG의 태아로의 전달에 관여하는 신생태아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol . 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol . 24:249 (1994))가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재된다.　 상기 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 그안에 하나 또는 그 초과 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 상기 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 것들, 예를 들어, Fc 영역 잔기 434의 치환 (미국 특허 번호 7,371,826)을 포함한다.
또한 다음 문헌을 참조한다: Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 Fc 영역 변이체의 다른 예에 관한 WO 94/29351.
d) 시스테인 가공된 항체 변이체
특정 구현예에서, 시스테인 가공된 항체를 제조하는 것이 요구될 수 있고, 예를 들어, "thioMAb"가 있고 여기서, 항체 중 하나 이상의 잔기들은 시스테인 잔기들로 치환된다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 상기 잔기를 시스테인으로 치환시킴으로써, 반응성 티올기는 그렇게 함으로써 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 항체를 콘주게이트하는데 사용되어, 본원에서 추가로 기재된 바와 같이, 면역접합체를 제조할 수 있다. 특정 구현예에서, 하기의 잔기들 중 임의의 하나 이상은 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카밧 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 가공된 항체는 다음의 문헌에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다: 예를 들어, 미국 특허 번호 7,521,541.
e) 항체 유도체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 추가로 개질되어 당해기술에 공지되어 있고 쉽게 이용가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유할 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 비제한적으로 수용성 폴리머를 포함한다. 수용성 폴리머의 비-제한적인 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 비닐피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코-폴리머, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에서 그 안정성 때문에 제조시 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의의 분자량일 수 있고, 그리고 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 다양할 수 있고, 만일 1 초과 폴리머가 부착되면, 이들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은, 만일 항체 유도체가 한정된 조건하에서의 요법 등에서 사용된다면, 비제한적으로, 개선되는 항체의 특정한 특성 또는 기능을 포함하는 고려사항에 기반하여 측정될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 방사선에 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티 및 항체의 콘주게이트가 제공된다. 하나의 양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (참고: Kam et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 그리고 비제한적으로 통상적인 세포를 해하지 않는 파장을 포함하지만, 항체-비단백질성 모이어티에 대한 세포 근위부가 사멸되는 온도까지 비단백질성 모이어티를 가열시킨다.
B. 재조합 방법 및 조성물
항체는 다음 문헌에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 제조될 수 있다: 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567. 일 구현예에서, 본원에서 기재된 항-LgR5 항체를 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다. 상기 핵산은 항체 (예를 들면, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 추가 구현예에서, 상기 핵산을 포함하는 하나 또는 그 초과 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 상기 구현예에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다 (예를 들면, 하기로 형질전환된다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일 구현예에서, 숙주 세포는 진핵 세포 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프 세포이다(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포). 일 구현예에서, 항-LgR5 항체의 제조 방법이 제공되고, 여기서 상기 방법은, 항체의 발현에 적합한 조건 하에서, 상기 제공된 바와 같이, 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포 배양, 및 임의로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체 회수를 포함한다.
항-LgR5 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들면, 상기에서 기재된 바와 같이, 항체를 암호화하는 핵산은 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 또는 그 초과 벡터에 단리 및 삽입된다. 상기 핵산은 쉽게 단리될 수 있고 종래의 절차를 이용하여 (예를 들면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함으로써) 서열화될 수 있다.
항체 암호화 벡터의 클로닝 또는 발현을 위해 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 당화 및 Fc 효과기 기능이 요구되지 않는 경우 세균에서 제조될 수 있다. 세균에서 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현을 위해, 다음 문헌을 참조한다: 예를 들어, 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523. (또한 참고: Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, 이. 콜라이에서 항체 단편의 발현을 기재함.) 발현 후, 상기 항체는 가용성 분획에서 세균 세포 페이스트로부터 단리되고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물 예컨대 사상균 또는 효모는, 당화 경로가 부분적으로 또는 완전히 인간 당화 패턴으로 항체의 생산을 초래하는 "인간화,"되는 진균 및 효모 균주를 포함하여, 항체-암호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 참고: Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
당화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다중세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유도된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 연계하여 사용될 수 있는 많은 바쿨로바이러스 균주가 동정되었다.
식물 세포 배양물은 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 참고 , 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (형질전환 식물에서 항체를 제조하기 위한 PLANTIBODIESTM 기술을 기재함).
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 현탁제에서 성장하도록 적응되는 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 하기이다: SV40 (COS-7)에 의하여 변형된 원숭이 신장 CV1 세포주; 인간 배아 신장 세포주 (예를 들면 하기에 기술된 바와 같은 293 또는 293 세포: Graham et al., J. Gen Virol . 36:59 (1977)에 기재된 바와 같이 293 또는 293 세포); 어린 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (하기에 기술된 바와 같은 TM4 세포: 예를 들면, Mather, Biol . Reprod . 23:243-251 (1980)); 몽키 신장 세포 (CV1); 아프리칸 그린 몽키 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 다음 문헌에 기재된 바와 같은 TRI 세포: 예를 들어, Mather et al., Annals N.Y . Acad . Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; 및 FS4 세포. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 포함하고, 이는 DHFR- CHO 세포 (참고: Urlaub et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216 (1980)); 및 Y0, NS0 및 Sp2/0와 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산을 위해 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 다음 문헌을 참조한다: 예를 들어, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
C. 검정
본원에서 제공된 항-LgR5 항체는 당해기술에서 공지된 다양한 검정에 의해 그 물리적/화학 특성 및/또는 생물학적 활성으로 확인, 스크리닝, 또는 특징화될 수 있다.
일 측면에서, 본 발명의 항체는, 예를 들면, 공지된 방법 예컨대 ELISA, FACS, 또는 웨스턴 블랏에 의해 그 항원 결합 활성에 대해 시험된다.
또 다른 측면에서, 경쟁 검정은 본원에서 기재된 LgR5에의 결합을 위해 본원에 기술된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 경쟁 항체는 크레네주맙 또는 본원에 기술된 항체에 의해 결합된 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 세부적인 예시적 방법은 다음 문헌에 제공되어 있다: Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
예시적인 경쟁 검정에서, 고정된 LgR5는 LgR5 (예를 들면, 본원에 기술된 임의의 항체)에 결합하는 제1 표지된 항체 및 LgR5에의 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 그 능력에 대해 시험되는 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. 제2 항체는 혼성세포 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 LgR5는 제2 비표지된 항체가 아닌 제1 표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. LgR5에의 제1 항체의 결합에 허용된 조건 하에서 항온처리 이후, 과잉의 미결합된 항체는 제거되고, 고정된 LgR5에 관련된 표지의 양이 측정된다. 만일 고정된 LgR5에 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비하여 시험 샘플에서 실질적으로 감소되면, 그러면 그것은 제2 항체가 LgR5로의 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 것을 나타낸다. 다음 문헌을 참조한다: Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
D. 면역접합체
본 발명은 또한 하나 또는 그 초과 세포독성제, 예컨대 화학치료제 또는 약물, 성장 억제성 제제, 독소 (예를 들면, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 그 단편), 또는 방사성 동위원소 (예를 들어, 방사콘주게이트)에 콘주게이트되는 본원에서 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
면역접합체는 약물 모이어티의 종양으로의 표적화된 전달, 및, 일부 구현예에서 그 안의 세포내 누적을 가능케 하고, 여기서 비콘주게이트된 약물의 전신성 투여가 정상 세포로의 허용불가능한 독성 수준을 유발할 수 있다 (Polakis P. (2005) Current Opinion in Pharmacology 5:382-387).
항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 표적화된 화학치료적 분자이며, 이는 항원-발현 종양 세포로 강력한 세포독성 약물을 표적화함으로써 항체 및 세포독성 약물 둘 다의 특성을 조합하며 (Teicher, B.A. (2009) Current Cancer Drug Targets 9:982-1004), 이로써 효능을 최대화하고 오프-타겟 독성을 최소화함으로써 치료학적 지수를 증진시킨다 (Carter, P.J. and Senter P.D. (2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169; Chari, R.V. (2008) Acc . Chem . Res. 41:98-107 .
본 발명의 ADC 화합물은 항암 활성을 갖는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC 화합물은 약물 모이어티에 콘주게이트된, 즉 공유적으로 부착된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 링커를 통하여 약물 모이어티에 공유적으로 부착된다. 본 발명의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 유효량의 약물을 종양 조직에 선택적으로 송달함으로써 더 큰 선택성, 즉 더 작은 유효량이 달성되는 한편, 치료 지수 ("치료적 윈도우(therapeutic window)")를 증가시킬 수 있다.
항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티 (D)는, 세포독성 또는 세포휴지 효과를 갖는 임의의 화합물, 모이어티, 또는 기를 포함할 수 있다. 약물 모이어티는 튜불린 결합, DNA 결합 또는 상호작용, 및 RNA 폴리머라아제, 단백질 합성, 및/또는 토포이소머라아제 억제를 비제한적으로 포함하는 기전에 의한 이들의 세포독성 및 세포정지 효과에 영향을 줄 수 있다. 예시적 약물 모이어티는 비제한적으로 하기를 포함한다: 메이탄시노이드, 돌라스태틴, 오리스타틴, 칼리키아마이신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 네모루비신 및 이의 유도체, PNU-159682, 안트라사이클린, 듀오카르마이신, 빈카 알칼로이드, 탁산, 트리코테센, CC1065, 캄프토테신, 엘리나피드, 및 입체이성질체, 동배체, 유사체 및 이의 유도체 (세포독성 활성을 가짐).
E. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 임의의 항-LgR5 항체는 생물학적 샘플에서 LgR5의 존재 검출에 유용하다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. "생물학적 샘플"은 세포 또는 조직 (예를 들어, 암성, 또는 잠재적 암성 결장, 결장직장, 소장, 자궁내막, 췌장, 또는 난소 조직을 포함하는 생검 재료)을 포함한다.
일 구현예에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-LgR5 항체가 제공된다. 추가의 측면에서, 생물학적 샘플 중의 LgR5의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 항-LgR5 항체의 LgR5로의 결합을 허용하는 조건하에서 상기 생물학적 샘플을 본원에 기재된 항-LgR5 항체와 접촉시키고 복합체가 생물학적 샘플 내에서의 항-LgR5 항체와 LgR5 간에 형성되는지를 검출함을 포함한다. 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일 구현예에서, 예를 들면, LgR5가 환자의 선택용 바이오마커인 경우, 항-LgR5 항체가 사용되어 항-LgR5 항체를 이용한 요법에 자격있는 대상체를 선택하는데 사용된다. 추가 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직이다 (예를 들어, 암성, 또는 잠재적 암성 결장, 결장직장, 소장, 자궁내막, 췌장, 또는 난소 조직을 포함하는 생검 재료).
추가 구현예에서, 항-LgR5 항체는, 예를 들어, 생체내 이미지화에 의하여, 대상체 내 LgR5 양성 암을, 하기를 위하여 생체내 검출하기 위하여 사용된다: 예를 들어, 암의 진단, 예측, 또는 분류 목적을 위하여, 요법의 적절한 코스를 결정함에 의하여, 또는 요법에 대한 암의 반응을 모니터링함에 의하여. 생체내 검출을 위한 본 분야에 알려진 일 방법은 면역-양전자 방출 단층촬영 (면역-PET)이며, 이는 예를 들어, 하기에 기술된 바와 같다: van Dongen et al., The Oncologist 12:1379-1389 (2007) 및 Verel et al., J. Nucl . Med . 44:1271-1281 (2003). 그러한 구현예에서, LgR5-양성 암을 검출하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는, 방법이 개시된다: LgR5-양성 암을 갖거나 이를 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 표지된 항-LgR5를 투여하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 표지된 항-LgR5 항체를 검출하는 단계로서, 상기 표지된 항-LgR5 항체의 검출은 상기 대상체에서의 LgR5-양성 암을 표지하는, 상기 검출 단계. 그러한 특정 구현예에서, 상기 표지된 항-LgR5 항체는 양전자 방출핵에 콘주게이트된 항-LgR5 항체, 예컨대 68Ga, 18F, 64Cu, 86Y, 76Br, 89Zr, 및 124I를 포함한다. 특정 구현예에서, 양전자 방출핵은 89Zr이다. 89Zr-표지된 항체를 제조하고 사용하는 비제한적인 예시적 방법이 하기에 기술된다: 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2011/056983. 일부 구현예에서, 표지된 항-LgR5 항체는 하나 이상의 지르코늄 복합체에 콘주게이트된 시스테인 조작된 항체이다. 참고 , 예를 들어, WO 2011/056983.
추가 구현예에서, 진단 또는 검출 방법은 하기를 포함한다: LgR5의 존재에 대하여 시험될 생물학적 샘플과, 기질에 고정화된 제1 항-LgR5 항체를 접촉시키는 단계, 제2 항-LgR5 항체를 상기 기질에 노출시키는 단계, 및 상기 제2 힝-LgR5가 상기 생물학적 샘플 내 상기 제1 항-LgR5 항체 및 LgR5 사이의 복합체에 결합되는지 여부를 검출하는 단계. 기질은 임의의 지지 매질, 예컨대 유리, 금속, 세라믹, 폴리머 비드, 슬라이드, 칩, 및 기타 기질일 수 있다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직 (예를 들어, 암성, 또는 잠재적 암성 결장, 결장직장, 소장, 자궁내막, 췌장, 또는 난소 조직을 포함하는 생검 재료)이다. 특정 구현예에서, 제1 또는 제2 항-LgR5 항체는 본원에 기술된 임의의 항체이다. 그러한 구현예에서, 제2 항-LgR5 항체는 αLgR5.1-12 또는 본원에 기술된 αLgR5.1-12로부터 유래된 항체일 수 있다. 그러한 구현예에서, 제2 항-LgR5 항체는 αLgR5.26-1 또는 본원에 기술된 αLgR5.26-1로부터 유래된 항체일 수 있다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따라 진단 또는 검출될 수 있는 예시적 장애는 하기를 포함한다: LgR5-양성 암, 예컨대 LgR5-양성 결장직장 암 (선암종 포함), LgR5-양성 소장암 (선암종, 육종(예컨대 평활근육종) 포함), 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양, 및 림프종), LgR5-양성 난소암 (난소 장액성 선암종), LgR5-양성 췌장암 (췌장 도관 선암종 포함) 및 LgR5-양성 자궁내막 암.
일부 구현예에서, LgR5-양성 암은 실시예에서 본원에 기술된 조건 하에서, 염색이 매우 약하거나 아예 없는 것에 상응하는, "0" 초과의 LgR5 면역조직화학 (IHC) 스코어를 수용하는 암이다 (참고, 예를 들어, 실시예 F, H, 및 I). 추가 구현예에서, LgR5-양성 암은 실시예에서 본원에 기술된 조건 하에서, 1+, 2+ 또는 3+ 수준에서의 LgR5를 발현한다 (참고, 예를 들어, 실시예 F, H, 및 I). 일부 구현예에서, 하나 이상의 세포주는 염색 수준에 대한 대조군으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 실시예 I 내의 표 4에서 나타난 세포주는 염색 수준에 대한 대조군으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포주 SW480, RKO, COLO741, HCT-15, CX-1, HT-29, SW1116, HCA-7, 및/또는 COLO-205는 염색 0에 대한 대조군으로 사용될 수 있고/있거나; 세포주 SW948, CACO-2, 및/또는 C2BBel는 염색 1+에 대한 대조군으로 사용될 수 있고/있거나; 세포주 T84, SW1463, SK-CO-1, 및/또는 LOVO는 염색 2+에 대한 대조군으로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 암은 실시예 H에서 본원에 기술된 조건 하에서 정의된 바와 같이, 50 초과의 H 스코어를 수용하는 암이다 (50% + 기준을 사용하여 1+, 2+ 또는 3+의 전체 스코어에 상응하여). 일부 구현예에서, 항-LgR5 암은 실시예 H에서 본원에 기술된 조건 하에서 정의된 바와 같이, 10 초과의 H 스코어를 수용하는 암이다 (10% + 기준을 사용하여 1+, 2+ 또는 3+의 전체 스코어에 상응하여).
일부 구현예에서, LgR5-양성 암은, LgR5 mRNA을 검출하는 역-전사효소 PCR (RT-PCR) 검정에 따라, LgR5를 발현하는 암이다. 일부 구현예에서, RT-PCR은 정량적 RT-PCR이다.
특정 구현예에서, 표지된 항-LgR5 항체가 제공된다. 표지는 비제한적으로 하기를 포함한다: 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티 (예컨대 형광성, 발색성, 전자-조밀성, 화학발광성, 및 방사성 표지), 뿐만 아니라 간접적으로 검출되는 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드, 예를 들어 효소 반응 또는 분자 상호반응. 예시적 표지는 방사능동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단, 예를 들어, 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 단실, 움벨리페론, 루세리페라제 예를 들어, 반딧불이 루시페라제 및 세균성 루시페라제(미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP), 알칼리 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들어, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제, 헤테로사이클릭 옥시다제, 예를 들어, 우리카제 및 크산틴 옥시다제를 포함하지만 이에 제한되지 않고, 이들은 HRP, 락토퍼옥시다제, 또는 마이크로퍼옥시다제와 같이 염료 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 사용하는 효소, 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파아지 표지, 안정한 유리된 라디칼 등과 커플링된다. 또 다른 구현예에서, 표지는 양전자 방출핵(positron emitter)이다. 양전자 방출핵은 하기를 비제한적으로 포함한다: 68Ga, 18F, 64Cu, 86Y, 76Br, 89Zr, 및 124I. 특정 구현예에서, 양전자 방출핵은 89Zr이다.
F. 약제학적 제형
본원에 기재된 바와 같은 항-LgR5 항체 또는 면역접합체의 약제학적 제형은 상기 항체 또는 목적하는 정도의 순도를 갖는 면역접합체를 하나 이상의 임의의 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합함에 의해 제조되고 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), 동결건조된 제형 또는 수용액 형태이다. 약제학적으로 허용되는 담체는 일반적으로 사용되는 투여 용량 및 농도에서 수용체에 비독성이고 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만)의 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어, 혈청 알부민, 겔라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어, 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이팅제, 예를 들어, EDTA; 당, 예를 들어, 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 짝이온, 예를 들어, 나트륨; 금속 착물 (예를 들어 Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 본원에서 예시적 약제학적으로 허용되는 담체는 간질 약물 분산제, 예를 들어, 가용성 중성-활성 하이알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어, 인간 가용성 PH-20 하이알루로니다제 당단백질, 예를 들어, rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다.　 특정 예시적 sHASEGP 및 rHuPH20을 포함하는 사용 방법은 다음 문헌에 기재되어 있다: 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968.　 일 측면에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예를 들어, 콘드로이티나제와 조합된다.
예시적인 동결건조된 항체 또는 면역접합체 제형이 미국 특허 번호 6,267,958에 기재된다. 수성 항체 또는 면역접합체 제형은 다음 문헌에 기재된 것들을 포함하고 [참고: 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908], 후자 제형은 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원에서의 상기 제형은 또한 시험된 특정 징후에 필요한 만큼 하나 이상의 활성 성분들을 함유할 수 있고, 바람직하게는 서로 부정적 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에서, 예를 들어, LgR5-양성 암, 예컨대 LgR5-양성 결장 암 또는 LgR5-양성 결장직장 암의 치료를 위하여, 아바스틴® (베바시주맙)을 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
활성 성분들은 예를 들어, 코나세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 나노입자 및 나노캡슐) 중에 또는 마크로에멀젼 중에 하이드록시메틸셀룰로스 또는 겔라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 중에 포집될 수 있다. 상기 기술은 다음 문헌에 개시되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
지속-방출 제제는 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는, 매트릭스가 형상화된 물품, 예를 들면 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태인, 항체 또는 면역접합체를 함유하는 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 포함한다.
생체내 투여용으로 사용될 제형은 일반적으로 멸균성이다. 멸균은, 예를 들면, 멸균된 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
G. 치료학적 방법 및 조성물
본원에서 제공된 임의의 항-LgR5 항체 또는 면역접합체는 방법, 예컨대 치료 방법에서 사용될 수 있다.
일 양태에서, 본원에서 제공된 항-LgR5 항체 또는 면역접합체는 LgR5-양성 세포의 증식을 억제하는 방법에서 사용되고, 상기 방법은 상기 세포의 표면 상에서 LgR5에 대한 항-LgR5 항체 또는 면역접합체의 결합을 위하여 허용된 조건 하에서, 상기 세포를 상기 항-LgR5 항체 또는 면역접합체에 노출시켜, 이로서 상기 세포의 증식을 억제하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법이다. 추가 구현예에서, 세포는 결장, 결장직장, 소장, 난소, 췌장, 및 자궁내막 세포이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-LgR5 항체 또는 면역접합체는, 상기 암의 세포의 적어도 부분에서 선종성 결장 폴립증 (APC) 유전자 내 돌연변이 및/또는 Kras 유전자 내 돌연변이를 포함하는 암의 치료 방법에서 사용된다. 다양한 구현예에서, 암은 결장, 결장직장, 소장, 난소, 췌장, 및 자궁내막암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-LgR5 항체 또는 면역접합체는, 상기 암의 세포의 적어도 부분에서 APC 유전자 내 돌연변이 및/또는 Kras 유전자 내 돌연변이를 포함하는 결장 또는 결장직장 암의 치료 방법에서 사용된다. 암(결장 및 결장직장 암 포함)에 발견되는 비제한적인 예시적 Kras 돌연변이는 하기를 포함한다: 하기에서의 돌연변이: Kras 코돈 12 (예컨대, G12D, G12V, G12R, G12C, G12S, 및 G12A), 코돈 13 (예를 들어., G13D 및 G13C), 코돈 61 (예를 들어., G61H, G61L, G61E, 및 G61K), 및 코돈 146. 참고, 예를 들어, Yokota, Anticancer Agents Med . Chem ., 12: 163-171 (2012); Wicki et al., Swiss Med . Wkly, 140: w13112 (2010). 암에서 발견되는 비제한적인 예시적 APC 돌연변이는 하기를 포함한다: 돌연변이 클러스터 영역 (MCR)에서의 돌연변이, 예컨대 정지 코돈 및 절단된 APC 유전자 산물을 유발하는 프레임시프트 돌연변이. 참고: 예를 들어, Chandra et al., PLoS One, 7: e34479 (2012); 및 Kohler et al., Hum. Mol . Genet., 17: 1978-1987 (2008).
일부 구현예에서, 암치료 방법은 대상체에 항-LgR5 항체 또는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 대상체는 암 세포의 적어도 부분에서 Kras 돌연변이 및/또는 APC 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 암은 결장, 결장직장, 소장, 난소, 췌장, 및 자궁내막암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 결장 및/또는 결장직장 암이다. 일부 구현예에서, 대상체는 이전에 암 세포의 적어도 부분에서 Kras 돌연변이 및/또는 APC 돌연변이를 포함하는 암을 갖는 것으로 확인되었다. 일부 구현예에서, 암은 LgR5-양성이다.
샘플 내 다양한 바이오마커의 존재는 비제한적으로 하기를 포함하는, 이의 다수가 본 분야에 알려져 있고, 숙련가에게 이해되는, 다양한 방법에 의하여 분석될 수 있다: 면역조직화학 ("IHC"), 웨스턴 블랏 분석, 면역침전, 분자 결합 검정, ELISA, ELIFA, 형광 활성 세포 분류 ("FACS"), 마이크로어레이, 프로테오믹스, 정량적 혈액 기반 검정 (예를 들어 혈청 ELISA로서), 생화학 효소적 활성 검정, 원위치 혼성화, 서던 분석, 노던 분석, 전체 게놈 서열분석, 폴리머라아제 쇄 반응 ("PCR") (정량적 실시간 PCR ("qRT-PCR") 및 기타 증폭 유형 검출 방법, 예컨대, 예를 들어 분지된 DNA, SISBA, TMA 등, RNA-서열분석(RNA-Seq), FISH, 마이크로어레이 분석, 유전 발현 프로파일링, 및/또는 유전자 발현의 일련 분석 ("SAGE"), 뿐만 아니라 단백질, 유전자, 및/또는 조직 어레이 분석에 의하여 수행될 수 있는 다양한 범위의 검정 중 임의의 것. 유전자 및 유전자 산물의 위치를 평가하기 위한 전형적인 프로토콜은, 예를 들어 하기에서 발견될 수 있다: Ausubel et al., eds., 1995, Current Protocols In Molecular Biology, 유닛 2 (노던 블랏), 4 (서던 블랏), 15 (면역 블랏) 및 유닛 18 (PCR 분석). 멀티플렉스 면역검정, 예컨대 Rules Based Medicine or Meso Scale Discovery ("MSD")에서 이용가는한 것들이 또한 사용될 수 있다.
시험관내 세포 증식 억제는 Promega (Madison, WI)에서 상업적으로 이용가능한 CellTiter-GloTM 발광 세포 생존력 검정을 사용하여 검정될 수 있다. 상기 검정은 대사적으로 활성인 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량화에 근거한 배양물 내의 생존 세포의 수를 측정한다. 참고 : Crouch et al. (1993) J. Immunol . Meth . 160:81-88, 미국 특허 번호 6602677. 상기 검정은 자동화된 초고속 스크리닝 (HTS)에 따라서 96 또는 384 웰 포맷 (format)으로 수행될 수 있다. 참고 : Cree et al. (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404. 상기 검정은 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 배양된 세포에 직접 첨가하는 것을 포함한다. 이러한 결과는 루시퍼라아제 반응에 의하여 생산된 발광 신호의 세포 용해 및 생성을 초래한다. 이러한 발광 신호는 ATP의 양에 비례하며, 여기서 상기 양은 배양물 내에 존재하는 생세포의 수에 정비례한다. 데이터는 루미노미터 또는 CCD 카메라 이미지화 장치에 의하여 기록될 수 있다. 발광 산출량은 상대적 밝기 단위 (RLU)로서 표시된다.
또 다른 측면에서, 약제로서 사용되기 위한 항-LgR5 항체 또는 면역접합체가 제공된다. 추가 측면에서, 치료 방법에서 사용되기 위한 항-LgR5 항체 또는 면역접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, LgR5-양성 암을 치료하는데 사용되기 위한 항-LgR5 항체 또는 면역접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은, 항-LgR5 항체 또는 면역접합체의 유효량을 개체에 투여하는 것을 포함하는, LgR5-양성 암을 갖는 개체의 치료 방법에서 사용을 위한 항-LgR5 항체 또는 면역접합체를 제공한다. 한 상기 구현예에서, 상기 방법 추가로, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가 치료제의 유효량을 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제의 제작 또는 제조에서 항-LgR5 항체 또는 면역접합체의 사용를 위해 제공된다. 일 구현예에서, 약제는 LgR5-양성 암의 치료를 위한 것이다. 추가 구현예에서, 상기 약제는 LgR5-양성 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이며, 여기서 상기 방법은 LgR5-양성 암을 갖는 개체에게 상기 약제의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 한 상기 구현예에서, 상기 방법 추가로, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가 치료제의 유효량을 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 LgR5-양성 암의 치료 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 상기 방법은 LgR5-양성 암을 갖는 개체에게 유효량의 항-LgR5 항체 또는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 한 상기 구현예에서, 상기 방법 추가로, 아래에서 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가 치료제의 유효량을 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
상기 구현예 중 임의의 것에 따른 LgR5-양성 암은, 예를 들어, 하기일 수 있다: LgR5-양성 결장직장 암 (선암종 포함), LgR5-양성 소장암 (선암종, 육종(예컨대 평활근육종) 포함), 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양, 및 림프종), LgR5-양성 난소암 (난소 장액성 선암종), LgR5-양성 췌장암 (췌장 도관 선암종 포함) 및 LgR5-양성 자궁내막 암.
일부 구현예에서, LgR5-양성 암은 실시예에서 본원에 기술된 조건 하에서, 염색이 매우 약하거나 아예 없는 것에 상응하는, "0" 초과의 LgR5 면역조직화학 (IHC) 스코어를 수용하는 암이다 (참고, 예를 들어, 실시예 F, H, 및 I). 추가 구현예에서, LgR5-양성 암은 실시예에서 본원에 기술된 조건 하에서, 1+, 2+ 또는 3+ 수준에서의 LgR5를 발현한다 (참고, 예를 들어, 실시예 F, H, 및 I). 일부 구현예에서, 하나 이상의 세포주는 염색 수준에 대한 대조군으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 실시예 I 내의 표 4에서 나타난 세포주는 염색 수준에 대한 대조군으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포주 SW480, RKO, COLO741, HCT-15, CX-1, HT-29, SW1116, HCA-7, 및/또는 COLO-205는 염색 0에 대한 대조군으로 사용될 수 있고/있거나; 세포주 SW948, CACO-2, 및/또는 C2BBel는 염색 1+에 대한 대조군으로 사용될 수 있고/있거나; 세포주 T84, SW1463, SK-CO-1, 및/또는 LOVO는 염색 2+에 대한 대조군으로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-LgR5 암은 실시예 H에서 본원에 기술된 조건 하에서 정의된 바와 같이, 50 초과의 H 스코어를 수용하는 암이다 (50% + 기준을 사용하여 1+, 2+ 또는 3+의 전체 스코어에 상응하여). 일부 구현예에서, 항-LgR5 암은 실시예 H에서 본원에 기술된 조건 하에서 정의된 바와 같이, 10 초과의 H 스코어를 수용하는 암이다 (10% + 기준을 사용하여 1+, 2+ 또는 3+의 전체 스코어에 상응하여).
일부 구현예에서, LgR5-양성 암은, LgR5 mRNA을 검출하는 역-전사효소 PCR (RT-PCR) 검정에 따라, LgR5를 발현하는 암이다. 일부 구현예에서, RT-PCR은 정량적 RT-PCR이다.
임의의 상기 구현예에 있어서 "개체"는 바람직하게는 인간일 수 있다.
추가 측면에서, 본 발명은, 예를 들면, 임의의 상기 치료 방법에서 사용을 위해, 본원에서 제공된 임의의 항-LgR5 항체 또는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 일 구현예에서, 약제학적 제형은 본원에서 제공된 임의의 항-LgR5 항체 또는 면역접합체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 제형은 본원에서 제공된 임의의 항-LgR5 항체 또는 면역접합체 및, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같이 적어도 하나의 추가 치료제를 포함한다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 요법에서 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 적어도 하나의 추가 치료제와 공동-투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는, 예를 들어, LgR5-양성 암, 예컨대 LgR5-양성 결장 암 또는 LgR5-양성 결장직장 암의 치료를 위한, 아바스틴® (베바시주맙)이다.
상기 지칭된 상기 병용 요법은 병용 투여 (2 또는 그 초과 치료제가 동일 또는 개별의 제형에 포함되는 경우), 및 개별 투여를 포함하고, 이 경우에, 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 투여는 추가 치료제 및/또는 보조제의 투여 이전, 동시, 및/또는 이후 발생할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 또한, 방사선 요법과 합동으로 이용될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체 (및 임의의 추가의 치료학적 제제)는 비경구, 폐내 및 비강내 및 경우에 따라 국소 치료를 위해, 병변내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 투여가 잠시인지 만성적인지에 부분적으로 의존하여, 투여는 임의의 적합한 경로, 예를 들면 주사로, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사로 될 수 있다. 비제한적으로 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼러스 투여, 및 펄스 주입을 포함하는 다양한 복용 계획이 본원에서 고려된다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 양호한 의료 실시와 일치된 방식으로 제형화, 복용, 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려 요인은 치료되는 특정한 장애, 치료되는 특정한 포유동물, 개별적인 환자의 임상적 조건, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 계획, 및 의료 종사자에게 공지인 다른 요인을 포함한다. 항체 또는 면역접합체는 문제의 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 또는 그 초과 제제와 임의로 제형화될 필요는 없지만, 제형화된다. 상기 다른 제제의 유효량은 제형 중에 존재하는 항체 또는 면역접합체의 양, 장애의 유형 또는 치료 및 상기 논의된 다른 인자들에 좌우된다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 바와 같은 투여 경로, 또는 본원에 기재된 용량의 약 1 내지 99% 또는 경험적으로/임상적으로 적당한 것으로 결정된 임의의 용량 및 임의의 경로와 함께 동일한 용량으로 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, (단독으로 또는 하나 또는 그 초과 다른 추가 치료제와 병용하여 사용될 때) 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 적절한 복용량은 치료받는 질환의 유형, 항체 또는 면역접합체의 유형, 중증도 및 질환의 추이, 항체 또는 면역접합체가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 요법, 항체 또는 면역접합체에 대한 환자의 임상 이력 및 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체 또는 면역접합체는 환자에게 1회에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 항체 또는 면역접합체의 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들어 0.1mg/kg-10mg/kg)은 예를 들어, 하나 이상의 별도의 투여 또는 연속 주입에 의한 것이든 상관 없이 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 용량일 수 있다. 한 전형적인 1일 복용량은 상기 지칭된 인자에 따라 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 초과 범위일 것이다. 수일 또는 더욱 긴 기간 동안 반복된 투여의 경우에, 질환에 따라, 치료는 일반적으로, 질환 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 지속될 것이다. 항체 또는 면역접합체의 하나의 예시적 용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위에 있다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 또는 10 mg/kg 중 하나 이상의 용량(또는 이들의 임의의 조합)이 환자에게 투여될 수 있다. 그러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주마다 또는 3주마다 투여될 수 있다 (예컨대, 따라서 환자가 약 2 회 내지 약 20 회, 또는 예컨대 약 6 회 용량의 항체를 투여받는다). 최초의 더 많은 로딩 용량에 이어, 하나 이상의 더 적은 용량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투약량 섭생이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 전통적인 기술과 검정에 의해 쉽게 모니터링된다.
임의의 상기 제형 또는 치료 방법이 면역접합체 및 항-LgR5 항체 둘 모두를 이용하여 수행될 수 있음이 이해된다.
H. 제조 물품
또 다른 양태에서, 전술한 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 내포하는 제조 물품이 제시된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 결합된 표지 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적절한 용기에는 예로서, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등이 포함된다. 이들 용기는 다양한 물질, 예를 들면, 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 그것만으로 있거나 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합되고 그리고 멸균된 접근 포트를 가질 수 있는 조성물을 수용한다 (예를 들면 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖춘 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 본 조성물에서 적어도 하나의 활성제는 항-LgR5 항체 또는 면역접합체이다. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물이 선택 질환의 치료에 사용됨을 나타낸다. 더욱이, 제조 물품은 (a) 조성물이 여기에 함유된 제1 컨테이너(여기서, 상기 조성물은 본 발명의 항체 또는 면역접합체를 포함한다); 및 (b) 조성물이 여기에 함유된 제2 컨테이너(여기서, 상기 조성물은 추가의 세포독성 또는 다른 치료학적 제제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 제조 물품은 조성물이 특정 질환을 치료하는데 이용될 수 있다는 것을 표시하는 포장 삽입물을 더욱 포함할 수도 있다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 제조 물품은 추가로, 약제학적으로-허용가능한 완충액, 예컨대 정균 주사용 물 (BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로오스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 포함할 수 있다. 이것은 다른 완충액, 희석제, 여과기, 바늘, 그리고 주사기를 비롯하여, 상업적인 이용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 더욱 포함할 수도 있다.
III. 실시예
하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기 제공된 일반적인 설명이 주어지면, 다양한 다른 구현예가 실시될 수 있음이 이해된다.
A. 인간 LgR5 유전자 발현
인간 LgR5 유전자 발현을 하기를 함유하는 등록상표의 데이터베이스를 사용하여 분석하였다: 유전자 발현 정보 (GeneExpress®, Gene Logic Inc., Gaithersburg, MD). GeneExpress® 데이터베이스의 도식적 분석을 마이크로어레이 프로필 뷰어를 사용하여 수행하였다. 도 1은 다양한 조직 내의 인간 LgR5 유전자 발현의 도식적 표현이다. y-축 상의 범위는 혼성 신호 강도에 기반한 유전자 발현 수준을 표지한다. 점은 각 열거된 조직의 명칭으로부터 연장된 선의 좌측 방향 및 우측 방향, 둘 다의 방향으로 나타난다. 상기 선의 좌측으로 나타나는 점은 정상 조직 내의 유전자 발현을 나타내며, 상기 선의 우측으로 나타나는 점은 종양 및 사멸된 조직 내의 유전자 발현을 나타낸다. 도 1은 정상 비교군과 비교한, 특정 종양 또는 사멸된 조직 내의 증가된 LgR5 유전자 발현을 나타낸다. 특히, LgR5는 결장직장, 자궁내막, 및 난소 종양에서 실질적으로 과발현된다. 도 1, 인세트(inset)는, LgR5가 적어도 하기 결장 종양에서: 선암종, 양성 종양, 전이성 결장 종양, 및 또한 하기에서: 50% 미만 (도 1 인세트에서의 "낮은 함량")의 함량을 갖는 조직 내에서 과발현되지만; 정상 결장, 크론병, 또는 궤양성 대장염 내에서 과발현되지 않는다는 것을 나타낸다. 인간 LgR5 발현은 정상 뇌, 근육, 난소 및 태반 조직 내 낮은 수준의 발현을 갖고, 정상 조직 내에서 훨씬 낮다.
B. 결장 종양 내 인간 LgR5의 유병률
결장직장 암 내의 LgR5의 발현을 평가하기 위하여, 57개 1차 결장직장 선암종을 다양한 공급원으로부터 수득하였다 (Asterand, Detroit, MI; Bio-Options, Fullerton, CA; University of Michigan, Ann Arbor, MI; Cytomyx, Rockville, MD; Cooperative Human Tissue Network, Nashville, TN; Indivumed, Hamburg, Germany; ProteoGenex, Culver City, CA). 샘플의 44 퍼센트는 남성으로부터 유래되었고, 환자의 평균 연령은 66세였다 (31세 내지 93세 범위). 조직 마이크로어레이 (TMA)를 하기에 기술된 바와 같은 중복 코어를 사용하여 조립하고: Bubendorf L, et al., J Pathol. 2001 Sep;195(1):72-9, 매칭된 사례로부터의 5개 정상 결장직장 점막 샘플을 포함한다.
LgR5 발현을, 표 2에 나타는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 원위치 혼성화에 의하여 측정하였다. 참고: 예를 들어,, Jubb AM, et al., Methods Mol Biol 2006; 326:255-64. β-액틴에 대한 ISH을, 분석 전 결장직장 암 조직 내의 mRNA 강도를 확인하는데 사용하였다.
표 2. 원위치 혼성화 프로브 동위원소에 대한 프라이머 서열
유전자 유전자은행 수탁 프로브에 상보적인 뉴클레오티드 안티센스 (AS) 또는 센스 (S) 정방향 프라이머 (5' 내지 3') 역방향 프라이머 (5' 내지 3')
Lgr5 NM_003667 508 AS ACCAACTGCATCCTAAACTG (서열 번호: 92) ACCGAGTTTCACCTCAGCTC (서열 번호: 93)
Lgr5 NM_003667 496 S ACATTGCCCTGTTGCTCTTC (서열 번호: 94) ACTGCTCTGATATACTCAATC (서열 번호: 95)
LgR5 혼성화 강도는 하기 도식에 따라 숙련된 병리학자에 의하여, 강도 (실버 그레인(silver grains)) 뿐만 아니라 염색의 폭을 고려하여 스코어링되었다.　
0 (음성): 혼성화가 매우 약함 또는 없음 (>90%의 종양 세포 중)
1+ (경도): 우세한 혼성화 패턴이 약함
2+ (중간 정도의): 우세한 혼성화 패턴은 신생성 세포 중 다수 (> 50%) 내에서 중간정도로 강함
3+ (강함): 우세한 혼성화 패턴은 신생성 세포 중 다수 (> 50%) 내에서 강함
센스 프로브를 혼성화 특이성에 대해 조절하기 위하여 사용하였다.
도 2는 1+, 2+, 및 3+ 수준의 염색을 갖는 예시적 결장 종양 절편을 나타낸다. 상부 패널은 어두운 필드 이미지를 나타내고, 하부 패널은 밝은 필드 이미지를 나타낸다. 어두운 필드 이미지의 실버 그레인(silver grain)의 침적은 프로브의 혼성화 및 LgR5 mRNA의 발현을 표지한다. 분석된 결장 종양 절편의 ~77% (41/53)는 LgR5 양성이었고, 이는 1+, 2+, 또는 3+ 수준에서의 염색을 나타내며, 한편 34% (18/53)는 2+ 또는 3+ 염색을 나타낸다. 57개 샘플 중 4개를 LgR5 발현에 대하여 비정보적 방식으로 분석하였다.
결장 종양 내 Lgr5 발현의 유의성을 평가하기 위하여, 결장직장 선암종에 대한 수술적 절제를 경험했던 집단-기반의 일련의 환자를, 1988년부터 2003까지 세인트 제임스 대학 병원 (Leeds, UK)에서의 병리학 자료로부터 회귀적으로 컴파일링하였다. 조직 마이크로어레이 (TMA)를 하기에 기술된 바와 같은 환자 당 정상 점막 중 1개 코어 및 선암종 중 3개 코어로 작제하였다: Bubendorf L, et al., J Pathol. 2001 Sep;195(1):72-9. ISH를 수행하고, 상기 기술된 바와 같이 스코어링하였다. 상동한 종양으로부터의 3개 코어에 걸친 발현의 이종성이 또한 측정되었으며, 이는 상기 3개 코어 중 1개에서 불일치의 특정 수준을 나타내는 종양의 비율로서 표시된다. 예를 들어, 3개 코어가 +1, +3, 및 +3의 스코어를 갖는 경우, 상기 종양으로부터의 상기 3개 코어 중 1개는 2로 불일치된다.
도 3a는, 원위치 혼성화로 측정 시, 결장 종양 조직 마이크로어레이 내에서의 LgR5 염색의 0, 1+, 2+, 및 3+ 수준의 유병률을 나타낸다. 결장 종양 조직의 75%는 1+, 2+, 또는 3+ 수준에서의 염색을 나타내며, 한편 37%는 2+ 또는 3+ 염색을 나타낸다. 도 3b는 LgR5 발현의 이종성을 나타낸다. 종양의 67%는 3개 코어에 걸쳐 이종성을 나타내지 않았다. 32%는 3개 코어 중 1개에서 불일치를 나타내며, 오직 1%만이 1 초과의 불일치를 나타냈다.
C. 면역조직화학에 적랍하지 않은 상업적으로 이용가능한 항체
Lgr5의 발현 측정에 있어서의 문제점은 고품질의 면역조직화학 (IHC) 반응성 항체의 부족이다. Lgr5의 RNA 발현은 이전에 제한적으로 검사되어왔지만; 위, 결장, 및 모낭 외의 인간 내 정상 조직 발현 패턴에 대한 데이터가 거의 없다.
IHC 항체로서 시판된 6개의 상이한 상업적 항체가 면역조직화학을 위한 항체로서의 적합성에 대해 시험되었다. 래빗 다클론성 항체 MC-1235 (MBL International Corp., Woburn, MA)를 293개 세포의 표면 상에 발현된 LgR5로의 결합에 대해 시험하였으며, 관찰된 LgR5 검출은 없었다. 래빗 다클론성 항체 MC-1236 (MBL International Corp., Woburn, MA)는 293개 세포 상에 과발현된 경우 LgR5를 염색시킬 수 있었으나, 오직 벡터로 형질감염된 293개 세포와 비교하여, LoVo 결장 암 세포 상에서 특이적 LgR5 염색이 관찰되지 않았다. 더욱이, MC-1236로 염색된 뇌 조직은 높은 수준의 혈관내 염색을 나타냈으며, 이는 혈청의 가능한 잠재적 염색을 암시한다.
래빗 단클론성 항체 2495-1 (Epitomics, Burlingame, CA)는 293개 세포의 표면 상에서 발현된 LgR5를 특이적으로 염색하는 것으로 밝혀졌다. LoVo 및 D5124 결장 암 세포는 약한 세포질 염색을 나타냈으며, 일부 SW116 결장 암 세포는 매우 약한 염색을 나타냈다. 인간 결장 및 소장 조직은 상피 부분 내에서 매우 약한 염색을 나타냈으며, 이는 장관 장샘에 걸친, 광범위하게 확산된 세포질 염색을 특징으로 한다. 주지된 장샘의 기저 부분 내의 특이적 염색은 없으나, 시험된 세포주 또는 조직 중 임의의 것에서 관찰된 막-특이적 염색은 없었다.
하기와 같은 3개의 추가의 상업적 항체를 특이적 LgR5 염색에 대해 시험하였다: 래빗 다클론성 항체 HPA012530 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 래빗 단클론성 항체 LS-C105455 (LifeSpan BioSciences, Inc., Seattle, WA), 및 마우스 단클론성 항체 TA503316 (OriGene, Rockville, MD). 항체 중 어떤 것도 정상 인간 소장 및/또는 결장 조직 샘플의 특이적 막질 염색을 나타내지 않았으며, 그러한 조직 중 장샘 기저부 내 LgR5도 검출되지 않았다.
D. 래빗 단클론성 항체 생성
마우스 내 IHC 반응성 항체를 개발하기 위한 시도에 대한 몇몇의 실패 후, 래빗 내의 IHC 반응성 항체를 생성하였다. 래빗은 하기로 면역화되었다: LgR5 세포외 도메인 (ECD) huFc (서열 번호: 96) 융합 단백질 (CHO 세포 내에서 생산됨). 시험 채혈을 사용한 LgR5에 대한 혈청 역가는 표준 프로토콜을 사용하여 평가되었다. 2마리 래빗이 양호한 면역 반응을 갖는 것으로 밝혀졌고, 비장절제 및 단클론성 융합을 위한 후보로서 선택되었다.
비장절제를 수행하였고, 비장세포를 단리하였고, 200 x 106 림프구 세포를 100 x 106 융합 상대 세포로 융합하였고, 그리고 96-웰 플레이트로 플레이팅하였다 (Epitomics, Burlingame, CA). 플레이트를 표준 조건 하에 배양하였다.
플레이트를 표준 ELISA 프로토콜을 사용하여 스크리닝하였고, 플레이트를 LgR5 세포외 도메인 (ECD)-huFc 융합으로 코팅하였다. 3개 클론을 선택하고 24-웰 플레이트로 팽창시켰다. 상기 팽창된 클론 중 36을 ELISA 및 면역조직화학 (IHC)로, 인간 또는 마우스 LgR5를 발현하는 293개 세포를 사용하여 시험하였다.
상기 클론이 인간 장관 장샘 기저 원주형 세포 상의 LgR5를 인식한 항체를 생산하였는지 여부를 측정하는 것을 포함한, 추가적 시험 후, 항체 1-12 및 26-1을 클로닝을 위하여 선택하였다. 간략하게, 혼성세포로부터의 mRNA를 하기를 사용하여 단리하였고: TuboCapture 키트 (Qiagen: Catalog #72232) (제조사의 설명서에 따라), 이후 올리고-dT(oligo-dT) 프라이머를 사용하여 cDNA로 역전사하였다. 중쇄 (VH)의 가변 영역을 PCR 증폭하였다. 전체 경쇄 (LC)는 PCR이었다. PCR-증폭된 VH 영역을 제한 효소 HindIII 및 Kpnl을 사용하여 소화하였다. PCR-증폭된 LC를 제한 효소 HindIII 및 NotI를 사용하여 소화하였다. 소화된 산물을 Qiagen QIAquick PCR 정제 키트 (카탈로그 #28014)를 사용하여 정제하였다. 정제 후, VH 및 LC를 중쇄 또는 경쇄 발현 벡터로 결찰시키고, DH5α 세포로 변형시켰다 (MC Lab, catalog #DA-100). 변형된 콜로니를 선택하고, 삽입체를 상응하는 제한 효소를 사용하여 예상된 크기로 확인하였다. 예상된 크기의 삽입체를 갖는 플라스미드를 TT5 프라이머를 사용하여 서열분석하였다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 서열이 하기에 나타난다: 도 4, 및 서열 번호: 6 및 5, 각각 (항체 1-12에 대함); 도 4, 및 서열 번호: 8 및 7, 각각 (항체 26-1에 대함).
상기 중쇄 및 경쇄 발현 벡터를 CHO 세포 내로 공동-형질감염하고, 단백질 A를 사용하여 세포 배양물 상청액으로부터 정제하였다.
E. 항체 에피토프 결정
FACS 경쟁 검정을, 항체 1-12 및 26-1을 사용하여 인식된 에피토프를 매핑하는데 사용하였다. 간략하게, 인간 LgR5는 293개 세포 내에서 발현되었고, 경쟁 검정을 항체 huYW353를 사용하여 수행하였고 (각각 중쇄 및 경쇄 98 및 88), 이는 아미노산 22 내지 122를 포함하는 LgR5 상의 에피토프에 결합하는 것으로 이전에 나타났으며, 항체 8E11 (서열 번호: 29 및 28에 각각 나타난 중쇄 및 경쇄 가변 영역), 이는 아미노산 22 내지 322를 포함하는 LgR5 상의 에피토프에 결합하는 것으로 이전에 나타났다.
항체 26-1은 huYW353 및 8E11과 LgR5 결합에 대해 경쟁하는 것으로 밝혀졌으며, 한편 항체 1-12는 huYW353 또는 8E11와 LgR5 결합에 대해 경쟁하지 않았다. (데이터 비도시). 따라서, 항체 26-1은 인간 LgR5의 아미노산 22 내지 322의 영역 내의 에피토프에 결합하고, 한편 항체 1-12는 상기 영역 외의 에피토프에 결합한다.
F. 정장 조직 상에서의 LgR5의 검출
항체 LGR5.1-12를 정상 인간 조직 상의 LgR5의 발현을 검출하는데 사용하였다. Lgr5에 대한 면역조직화학 (IHC)를 다코 유니버설 자동염색기(Dako Universal Autostainer; Dako, Carpinteria, CA) 상에서 수행하였다. 간략하게, 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 전체 조직 및 조직 마이크로어레이 절편을 탈파라핀화하고, 항원 탈마스킹을 PT 모듈 (Thermo Scientific, Kalamazoo, MI)에서 표적회수(Target Retrieval) pH 6 (Dako)로 99℃에서 20분간 수행하였다. 내인성 퍼옥시다제를 PBS 중 3% H2O2의 처리로 4분간 억제시키고, 내인성 비오틴을 아비딘/비오틴 차단 키트(Vector Labs, Burlingame, CA)를 사용하여 차단시켰다. 내인성 IgG를 3% BSA/PBS 내의 10% 당나귀 혈청을 사용하여 차단하였고, Lgr5 (LGR5.1-12)에 대한 1차 항체를 실온에서 60분간 4 μg/ml에서 항온처리하였다. 비오티닐화 당나귀 항-래빗 IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA)을 실온에서 30분간 항온처리하고, 이후 실온에서 Vectastain ABC Elite-HRP (Vector Labs)로 30분간 처리하였다. 항체 결합을 금속 증진된 DAB(Metal enhanced DAB; Pierce Rockford, IL)로 실온에서 5분간 검출하고, 절편을 Mayer's Hematoxylin (Rowley Biochemical, Danvers, MA)으로 반대염색하였다.
항체 LGR5.1-12로 예상된 패턴으로 정상 장관 장샘을 염색하였다. 도 5a을 참고한다. 모낭에서 또한 중간정도의 염색이 관찰되었으며 (도 5b), 약한 염색이 나팔관, 자궁내막, 부신, 및 척수 내에서 관찰되었다 (도 5c).
G. 이종이식 종양 상의 LgR5의 검출
LoVo X 1.1 및 D5124 이종이식 모델 마우스로부터 단리된 종양을 유동 세포분석으로 분석하여, 항체 YW353를 사용한 LgR5의 표면 발현을 측정하였다. 간략하게, Lovo1.1 또는 D5124 종양을 수확하고, 콜라게나아제 효소 혼합물을 갖는 인산-완충된 염수 (PBS) 내의 1% 소 혈청 알부민 (BSA)로 처리하였다. 종양을 37℃에서 15분간 항온처리하고, 세포를 1% BSA로 PBS 중 세정하였다. 세포를 스핀다운시키고, 염화암모늄-칼륨 용해 완충액 내에 재현탁하여 적혈구 세포를 용해하였다. 세포를 PBS 중 1% BSA로, RRMI 1640 배지를 10% 소 태아 혈청 (FBS)으로 세정하였다. 세포를 형광-활성화된 세포 분류 완충액 (1% BSA를 갖는 PBS) 내에서 재현탁하고, 항-LgR5 항체로 45분간 항온처리하고, 이후 PE에 콘주게이트된 인간 2차 항체로 30분간 항온처리하였다. 분석을 FACSCalibur™ 유동세포분석기 (BD Biosciences)로 수행하였다.
도 6은 실험 결과를 나타낸다. (A) LoVo X 1.1 이종이식 종양 세포 및 (B) D5124 이종이식 종양 세포의 표면 상에서의 LgR5는 항체 YW353를 사용하여 FACS에 의하여 검출 가능하였다. LgR5 면역조직화학에 의하여, LgR5의 발현은, 항체 LgR5.1-12를 사용한, (C) LoVo X 1.1 이종이식체 종양 및 (D) D5124 이종이식체 둘 모두에 대하여 2+였다. (C)에 나타난 패널 상부에, 염색의 각 수준을 나타내는 필드 내 세포 백분율이 있다.
H. 면역조직화학에 의한, 결장 종양 상에서의 LgR5의 유병률
결장 종양 내 LgR5의 유병률을 측정하기 위하여, 실시예 E에 기술된 바와 같이, 항체 LGR5.1-12를 사용하여, 143개 상이한 결장 종양 유래의 코어를 함유하는 조직 마이크로어레이 상에서 면역조직화학을 수행하였다.
결장 종양 중 40 퍼센트는 LgR5에 대해 양성이었고, 하기 기준을 사용하여 다음과 같이 스코어링되었다: 29% (41/143): 1+로 스코어링됨, 9% (13/143): 2+로 스코어링됨, 그리고 2% (3/143): 3+로 스코어링됨):
0 = 염색 없음,
1+ = 경미한 염색,
2+ = 경도의 염색, 및
3+ = 강한 염색.
잔여 결장 종양 (86/143)은 항체 LGR5.1-12를 사용한 IHC에 의하여 0으로 스코어링하였다. 도 7a 내지 7d는 항체 LGR5.1-12를 사용한, 결장 종양의 예시적 0, 1+, 2+, 및 3+ 염색을 나타낸다.
IHC 염색에서의 실질적인 이종성이 관찰되었다. IHC를, 이에 따라, 항체 LGR5.1-12를 사용한 19개 결장암 종양 절편 상에서 수행하였다. 상기 절편 중 3개는 LgR5 발현에 대하여 음성이었고, 2개 절편 중 상기 세포의 50% 초과가 LgR5에 대해 양성이었고, 그리고 잔여 절편은 0 내지 50% 염색을 나타냈다. 표 3은 각 수준에서 염색된 각 절편 내 세포의 백분율 및 하기를 사용한 전체 스코어를 나타낸다: 50% 기준 (즉, 세포 중 50% 이상이 LgR5에 대해 양성임) 또는 10% 기준 (즉, 세포 중 10%가 LgR5에 대해 양성임). 비교를 위하여, 본원에 기술된 D5124 및 LoVo 이종이식체 종양 내 관찰된 염색이 또한 포함되었다. H 스코어는 하기와 같다: (1+에서의 세포 염색 %) + (2+에서의 세포 염색 %)x2 + (3+에서의 세포 염색 %)x3. H 스코어는 각 염색 강도에서의 세포 백분율로 고려된다.
항체 LGR5.1-12를 사용한 결장 종양 절편의 면역조직화학
샘플 0 +1 +2 +3 H-스코어 전체 스코어 (50%+ 기준) 전체 스코어 (10%+ 기준)
HP-2889 40 45 15 0 75 1+ 1+
HP-9328 80 17 3 0 23 0 1+
HP-11394 85 10 5 0 20 0 1+
HP-19862 85 0 15 0 30 0 2+
HP-19882 75 25 0 0 25 0 1+
HP-20531 60 40 0 0 40 0 1+
HP-21638 25 65 10 0 85 1+ 1+
HP-23099 85 15 0 0 15 0 1+
HP-23301 15 20 65 0 150 2+ 2+
HP-23302 50 45 5 0 55 1+ 1+
HP-23433 55 5 35 5 90 0 2+
HP-23451 95 5 0 0 5 0 0
HP-24574 75 10 15 0 40 0 2+
HP-24583 100 0 0 0 0 0 0
HP-24586 85 10 5 0 20 0 1+
HP-24589 100 0 0 0 0 0 0
HP-24592 90 10 0 0 10 0 1+
HP-24671 100 0 0 0 0 0 0
HP-24672 95 5 0 0 5 0 0
D5124 제노(xeno) 모형 10 20 70 0 160 2+ 2+
LOVO 제노(xeno) 모형 45 20 25 10 100 2+ 2+
이러한 결과는 항체 LGR5.1-12가 결장 종양에서 LgR5 발현을 검출할 수 있다는 것을 예증한다. 요약하면, Lgr5 RNA 및 단백질 발현은, 이종성 Lgr5가 결장 종양 내에서 발현된다고 하더라고, 다중 정상 조직 부분 내에서 관찰된다.
I. 항체 LGR5 .26-1에 의한 면역조직화학
항체 LGR5.26-1에 의한 염색을, CXF233 (인간 결장 종양 모델; 온코테스트(Oncotest)) 이종이식 종양 내의, 그리고 다양한 결장 암 세포주 내의 항체 LGR5.1-12 로의 염색과 비교하였다. LgR5에 대한 면역조직화학 (IHC)를 다코 유니버설 자동염색기(Dako Universal Autostainer; Dako, Carpinteria, CA) 상에서 수행하였다. 간략하게, 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 종양 조직을 탈파라핀화하고, 항원 탈마스킹을 PT 모듈 (Thermo Scientific, Kalamazoo, MI)에서 표적회수(Target Retrieval) pH 6 (Dako)로 99℃에서 20분간 수행하였다. 내인성 퍼옥시다제를 PBS 중 3% H2O2의 처리로 4분간 억제시키고, 내인성 비오틴을 아비딘/비오틴 차단 키트(Vector Labs, Burlingame, CA)를 사용하여 차단시켰다. 내인성 IgG를 3% BSA/PBS 내의 10% 당나귀 혈청을 사용하여 차단하였고, Lgr5 (LGR5.1-12 또는 26-1)에 대한 1차 항체를 실온에서 60분간 4 μg/ml에서 항온처리하였다. 비오티닐화 당나귀 항-래빗 IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA)을 실온에서 30분간 항온처리하고, 이후 실온에서 Vectastain ABC Elite-HRP (Vector Labs)로 30분간 처리하였다. 항체 결합을 금속 증진된 DAB(Metal enhanced DAB; Pierce Rockford, IL)로 실온에서 5분간 검출하고, 절편을 Mayer's Hematoxylin (Rowley Biochemical, Danvers, MA)으로 반대염색하였다.
도 8에서 나타난 바와 같이, 항체 LGR5.1-12 (A) 및 항체 LGR5.26-1 (B)는 CXF233 이종이식 종양 샘플 내에서 유사한 염색 패턴을 나타낸다.
각 세포주는 또한 하기 수준의 발현으로의 RNAseq 데이터를 사용한 lgr5 유전자 발현에 의하여 또한 특성화된다: 없음, 매우 낮음, 낮음, 경도, 및 높음 추가로, LgR5 수준은 상기 기술된 바와 같이, 실질적으로 IHC에 의하여 세포주 내에서 측정된다. 이들 실험 결과를 표 4에서 보여준다.
항체 LGR5.1-12 및 LGR5.26-1을 사용한 결장암 세포주의 IHC 염색
RNA서열 발현 세포주 FACS Ab1 -12 Ab26 -1
없음 SW480 0 0
없음 RKO 0 0
없음 COLO741 0 0
매우 낮음 HCT-15 0 0
매우 낮음 CX-1 0 0
매우 낮음 HT-29 0 0
매우 낮음 SW403 2+ (60%) 1+ (65%)
낮음 SW1116 0 0
낮음 HCA-7 0 0
낮음 COLO-205 0 0
낮음 LS180 - 0 1+ (10%)
낮음 SW948 1+ (15%) 1+ (10%)
경도 CACO-2 1+ (15%) 1+ (15%)
경도 T84 2+ (40%) 2+ (40%)
경도 KM-12 2+ (25%) 1+ (60%)
경도 C2BBe1 1+ (10%) 1+ (15%)
높음 DLD-1 - 0 1+ (10%)
높음 SW620 - 0 1+ (20%)
높음 SW1463 +/- 2+ (50%) 2+ (25%)
높음 SK-CO-1 +/- 2+ (80%) 2+ (85%)
높음 LS174T - 0 0
높음 LOVO ++ 2+ (50%) 2+ (50%)
항체 LGR5.1-12 및 항체 LGR5.26-1 둘 모두는 많은 상이한 결장암 세포주의 표면 상에서 LgR5를 검출할 수 있었다.
이전의 발명이 이해를 명백히 할 목적으로 설명 및 실시예를 통해 일부 상세하게 기재되었지만, 기재 및 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로서 해석되지 말아야 한다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 명백히 그 전문이 본원에 참고로 인용된다.
서열 표
서열 번호 내용 서열
1 αLgR5.1-12 경쇄 AYDMTQTPAS VEVAVGGTVT IKCQASQSIG SNLAWYQQKP GQPPKLLIYG ASNLASGVSS RFKGSGSGTE FTLTISDLEC ADAATYYCQT TYGSSSDGFF WTFGGGTEVV VKGDPVAPTV LIFPPAADQV ATGTVTIVCV ANKYFPDVTV TWEVDGTTQT TGIENSKTPQ NSADCTYNLS STLTLTSTQY NSHKEYTCKV TQGTTSVVQS FNRGDC
2 αLgR5.1-12 중쇄 QSLEESGGGL VQPEGSLTLT CTASGFSFSR TYWICWDRQA PGKGLEWIAC IYAGGSDNTY YASWAKGRFT ISKTSSTTVT LQVTSLTAAD TATYFCARYY AGSSEYFNLW GPGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPCCGDTPS STVTLGCLVK GYLPEPVTVT WNSGTLTNGV RTFPSVRQSS GLYSLSSVVS VTSSSQPVTC NVAHPATNTK VDKTVAPSTC SKPTCPPPEL LGGPSVFIFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSQDDPEVQ FTWYINNEQV RTARPPLREQ QFNSTIRVVS TLPIAHQDWL RGKEFKCKVH NKALPAPIEK TISKARGQPL EPKVYTMGPP REELSSRSVS LTCMINGFYP SDISVEWEKN GKAEDNYKTT PAVLDSDGSY FLYSKLSVPT SEWQRGDVFT CSVMHEALHN HYTQKSISRS PGK
3 αLgR5.26-1 경쇄 AFELTQTPSS VEAAVGGTVT IKCQASQSIS VGLAWYQQKP GQPPKLLIYK ASTLASGVPS RFKGSRSGTE FTLTISDLEC ADAATYYCQS YYDSSTTANV FGGGTEVVVK GDPVAPTVLI FPPAADQVAT GTVTIVCVAN KYFPDVTVTW EVDGTTQTTG IENSKTPQNS ADCTYNLSST LTLTSTQYNS HKEYTCKVTQ GTTSVVQSFN RGDC
4 αLgR5.26-1 중쇄 QSLEESGGDL VKPGGTLTLT CTASGIDFSY YSYMCWVRQA PGKGLEWIAC IYAGTSGSTY YASWAKGRFT ISKTSSTTVT LQMISLTAAD TATYFCARSY YTFGVNGYAW DLWGPGTLVT VSSASTKGPS VFPLAPCCGD TPSSTVTLGC LVKGYLPEPV TVTWNSGTLT NGVRTFPSVR QSSGLYSLSS VVSVTSSSQP VTCNVAHPAT NTKVDKTVAP STCSKPTCPP PELLGGPSVF IFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSQDDP EVQFTWYINN EQVRTARPPL REQQFNSTIR VVSTLPIAHQ DWLRGKEFKC KVHNKALPAP IEKTISKARG QPLEPKVYTM GPPREELSSR SVSLTCMING FYPSDISVEW EKNGKAEDNY KTTPAVLDSD GSYFLYSKLS VPTSEWQRGD VFTCSVMHEA LHNHYTQKSI SRSPGK
5 αLgR5.1-12 경쇄 가변 영역 AYDMTQTPAS VEVAVGGTVT IKCQASQSIG SNLAWYQQKP GQPPKLLIYG ASNLASGVSS RFKGSGSGTE FTLTISDLEC ADAATYYCQT TYGSSSDGFF WTFGGGTEVV VK
6 αLgR5.1-12 중쇄 가변 영역 QSLEESGGGL VQPEGSLTLT CTASGFSFSR TYWICWDRQA PGKGLEWIAC IYAGGSDNTY YASWAKGRFT ISKTSSTTVT LQVTSLTAAD TATYFCARYY AGSSEYFNLW GPGTLVTVSS
7 αLgR5.26-1 경쇄 가변 영역 AFELTQTPSS VEAAVGGTVT IKCQASQSIS VGLAWYQQKP GQPPKLLIYK ASTLASGVPS RFKGSRSGTE FTLTISDLEC ADAATYYCQS YYDSSTTANV FGGGTEVVVK
8 αLgR5.26-1 중쇄 가변 영역 QSLEESGGDL VKPGGTLTLT CTASGIDFSY YSYMCWVRQA PGKGLEWIAC IYAGTSGSTY YASWAKGRFT ISKTSSTTVT LQMISLTAAD TATYFCARSY YTFGVNGYAW DLWGPGTLVT VSS
9 αLgR5.1-12 HVR-L1 QASQSIGSNL A
10 αLgR5.1-12 HVR-L2 GASNLAS
11 αLgR5.1-12 HVR-L3 QTTYGSSSDG FFWT
12 αLgR5.1-12 HVR-H1 RTYWIC
13 αLgR5.1-12 HVR-H2 CIYAGGSDNT YYASWAK
14 αLgR5.1-12 HVR-H3 YYAGSSEYFN L
15 αLgR5.26-1 HVR-L1 QASQSISVGL A
16 αLgR5.26-1 HVR-L2 KASTLAS
17 αLgR5.26-1 HVR-L3 QSYYDSSTTA NV
18 αLgR5.26-1 HVR-H1 YYSYMC
19 αLgR5.26-1 HVR-H2 CIYAGTSGST YYASWAK
20 αLgR5.26-1 HVR-H3 SYYTFGVNGY AWDL
21 인간 LgR5 전구체; LGR5_인간 NP_003658; 신호 서열 = 아미노산 1-21; 22 내지 558는 세포외 도메인(ECD)임 MDTSRLGVLL SLPVLLQLAT GGSSPRSGVL LRGCPTHCHC EPDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LLPNPLPSLR FLEELRLAGN ALTYIPKGAF TGLYSLKVLM LQNNQLRHVP TEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTEIPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IPDYAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIRTLSNLK ELGFHSNNIR SIPEKAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGRSA FQHLPELRTL TLNGASQITE FPDLTGTANL ESLTLTGAQI SSLPQTVCNQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSF SVCQKLQKID LRHNEIYEIK VDTFQQLLSL RSLNLAWNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPIT GLHGLTHLKL TGNHALQSLI SSENFPELKV IEMPYAYQCC AFGVCENAYK ISNQWNKGDN SSMDDLHKKD AGMFQAQDER DLEDFLLDFE EDLKALHSVQ CSPSPGPFKP CEHLLDGWLI RIGVWTIAVL ALTCNALVTS TVFRSPLYIS PIKLLIGVIA AVNMLTGVSS AVLAGVDAFT FGSFARHGAW WENGVGCHVI GFLSIFASES SVFLLTLAAL ERGFSVKYSA KFETKAPFSS LKVIILLCAL LALTMAAVPL LGGSKYGASP LCLPLPFGEP STMGYMVALI LLNSLCFLMM TIAYTKLYCN LDKGDLENIW DCSMVKHIAL LLFTNCILNC PVAFLSFSSL INLTFISPEV IKFILLVVVP LPACLNPLLY ILFNPHFKED LVSLRKQTYV WTRSKHPSLM SINSDDVEKQ SCDSTQALVT FTSSSITYDL PPSSVPSPAY PVTESCHLSS VAFVPCL
22 인간 LgR5 성숙 (신호 서열 없음); 아미노산 22 내지 907 GSSPRSGVL LRGCPTHCHC EPDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LLPNPLPSLR FLEELRLAGN ALTYIPKGAF TGLYSLKVLM LQNNQLRHVP TEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTEIPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IPDYAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIRTLSNLK ELGFHSNNIR SIPEKAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGRSA FQHLPELRTL TLNGASQITE FPDLTGTANL ESLTLTGAQI SSLPQTVCNQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSF SVCQKLQKID LRHNEIYEIK VDTFQQLLSL RSLNLAWNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPIT GLHGLTHLKL TGNHALQSLI SSENFPELKV IEMPYAYQCC AFGVCENAYK ISNQWNKGDN SSMDDLHKKD AGMFQAQDER DLEDFLLDFE EDLKALHSVQ CSPSPGPFKP CEHLLDGWLI RIGVWTIAVL ALTCNALVTS TVFRSPLYIS PIKLLIGVIA AVNMLTGVSS AVLAGVDAFT FGSFARHGAW WENGVGCHVI GFLSIFASES SVFLLTLAAL ERGFSVKYSA KFETKAPFSS LKVIILLCAL LALTMAAVPL LGGSKYGASP LCLPLPFGEP STMGYMVALI LLNSLCFLMM TIAYTKLYCN LDKGDLENIW DCSMVKHIAL LLFTNCILNC PVAFLSFSSL INLTFISPEV IKFILLVVVP LPACLNPLLY ILFNPHFKED LVSLRKQTYV WTRSKHPSLM SINSDDVEKQ SCDSTQALVT FTSSSITYDL PPSSVPSPAY PVTESCHLSS VAFVPCL
23 시노몰구스 원숭이 LgR5 부분 서열, 예측됨; 전장 전구체의 아미노산 33 내지 907에 상응하는 것으로 예측됨 GCPTHCHCEP DGRMLLRVDC SDLGLSELPS NLSVFTSYLD LSMNNISQLL PNPLPSLRFL EELRLAGNAL TYIPKGAFTG LYSLKVLMLQ NNQLRQVPTE ALQNLRSLQS LRLDANHISY VPPSCFSGLH SLRHLWLDDN ALTEIPVQAF RSLSALQAMT LALNKIHHIP DYAFGNLSSL VVLHLHNNRI HSLGKKCFDG LHSLETLDLN YNNLDEFPTA IRTLSNLKEL GFHSNNIRSI PEKAFVGNPS LITIHFYDNP IQFVGRSAFQ HLPELRTLTL NGASQITEFP DLTGTANLES LTLTGAQISS LPQTVCNQLP NLQVLDLSYN LLEDLPSFSV CQKLQKIDLR HNEIYEIKVD TFQQLLSLRS LNLAWNKIAI IHPNAFSTLP SLIKLDLSSN LLSSFPVTGL HGLTHLKLTG NHALQSLISS ENFPELKIIE MPYAYQCCAF GVCENAYKIS NQWNKGDNSS MDDLHKKDAG MFQVQDERDL EDFLLDFEED LKALHSVQCS PSPGPFKPCE HLLDGWLIRI GVWTIAVLAL TCNALVTSTV FRSPLYISPI KLLIGVIAVV NMLTGVSSAV LAGVDAFTFG SFARHGAWWE NGVGCQVIGF LSIFASESSV FLLTLAALER GFSVKCSAKF ETKAPFSSLK VIILLCALLA LTMAAVPLLG GSEYGASPLC LPLPFGEPST TGYMVALILL NSLCFLMMTI AYTKLYCNLD KGDLENIWDC SMVKHIALLL FTNCILYCPV AFLSFSSLLN LTFISPEVIK FILLVIVPLP ACLNPLLYIL FNPHFKEDLV SLGKQTYFWT RSKHPSLMSI NSDDVEKQSC DSTQALVTFT SSSIAYDLPP SSVPSPAYPV TESCHLSSVA FVPCL
24 래트 LgR5 전구체; LGR5_래트 NP_001100254; 신호 서열 = 아미노산 1-21 MDTSRVRMLL SLLALLQLVA AGSPPRPDTM PRGCPSYCHC ELDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LPASLLHRLR FLEELRLAGN ALTHIPKGAF AGLHSLKVLM LQNNQLRQVP EEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTDVPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IADHAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIKTLSNLK ELGFHSNNIR SIPERAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGISA FQHLPELRTL TLNGASQITE FPDLTGTATL ESLTLTGAKI SSLPQTVCDQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSL SGCQKLQKID LRHNEIYEIK GGTFQQLFNL RSLNLARNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPVT GLHGLTHLKL TGNRALQSLI PSANFPELKI IEMPYAYQCC AFGGCENVYK IPNQWNKDDS SSVDDLRKKD AGLFQVQDER DLEDFLLDFE EDLKVLHSVQ CSPPPGPFKP CEHLFGSWLI RIGVWTTAVL ALSCNALVAF TVFRTPLYIS SIKLLIGVIA VVDILMGVSS AILAVVDTFT FGSFAQHGAW WEGGIGCQIV GFLSIFASES SVFLLTLAAL ERGFSVKCSS KFEMKAPLSS LKAIILLCVL LALTIATVPL LGGSEYNASP LCLPLPFGEP STTGYMVALV LLNSLCFLIM TIAYTRLYCS LEKGELENLW DCSMVKHTAL LLFTNCILYC PVAFLSFSSL LNLTFISPEV IKFILLVIVP LPACLNPLLY IVFNPHFKED MGSLGKQTRF WTRAKHPSLL SINSDDVEKR SCDSTQALVS FTHASIAYDL PSDSGSSPAY PMTESCHLSS VAFVPCL
25 래트 LgR5 성숙 (신호 서열 없음); 아미노산 22 내지 907 GSPPRPDTM PRGCPSYCHC ELDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LPASLLHRLR FLEELRLAGN ALTHIPKGAF AGLHSLKVLM LQNNQLRQVP EEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTDVPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IADHAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIKTLSNLK ELGFHSNNIR SIPERAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGISA FQHLPELRTL TLNGASQITE FPDLTGTATL ESLTLTGAKI SSLPQTVCDQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSL SGCQKLQKID LRHNEIYEIK GGTFQQLFNL RSLNLARNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPVT GLHGLTHLKL TGNRALQSLI PSANFPELKI IEMPYAYQCC AFGGCENVYK IPNQWNKDDS SSVDDLRKKD AGLFQVQDER DLEDFLLDFE EDLKVLHSVQ CSPPPGPFKP CEHLFGSWLI RIGVWTTAVL ALSCNALVAF TVFRTPLYIS SIKLLIGVIA VVDILMGVSS AILAVVDTFT FGSFAQHGAW WEGGIGCQIV GFLSIFASES SVFLLTLAAL ERGFSVKCSS KFEMKAPLSS LKAIILLCVL LALTIATVPL LGGSEYNASP LCLPLPFGEP STTGYMVALV LLNSLCFLIM TIAYTRLYCS LEKGELENLW DCSMVKHTAL LLFTNCILYC PVAFLSFSSL LNLTFISPEV IKFILLVIVP LPACLNPLLY IVFNPHFKED MGSLGKQTRF WTRAKHPSLL SINSDDVEKR SCDSTQALVS FTHASIAYDL PSDSGSSPAY PMTESCHLSS VAFVPCL
26 마우스 LgR5 전구체; LGR5_마우스 NP_034325; 신호 서열 = 아미노산 1-21 MDTSCVHMLL SLLALLQLVA AGSSPGPDAI PRGCPSHCHC ELDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LPASLLHRLC FLEELRLAGN ALTHIPKGAF TGLHSLKVLM LQNNQLRQVP EEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTDVPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IADYAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIKTLSNLK ELGFHSNNIR SIPERAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGVSA FQHLPELRTL TLNGASHITE FPHLTGTATL ESLTLTGAKI SSLPQAVCDQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSL SGCQKLQKID LRHNEIYEIK GSTFQQLFNL RSLNLAWNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPVT GLHGLTHLKL TGNRALQSLI PSANFPELKI IEMPSAYQCC AFGGCENVYK ISNQWNKDDG NSVDDLHKKD AGLFQVQDER DLEDFLLDFE EDLKALHSVQ CSPSPGPFKP CEHLFGSWLI RIGVWTTAVL ALSCNALVAL TVFRTPLYIS SIKLLIGVIA VVDILMGVSS AVLAAVDAFT FGRFAQHGAW WEDGIGCQIV GFLSIFASES SIFLLTLAAL ERGFSVKCSS KFEVKAPLFS LRAIVLLCVL LALTIATIPL LGGSKYNASP LCLPLPFGEP STTGYMVALV LLNSLCFLIM TIAYTKLYCS LEKGELENLW DCSMVKHIAL LLFANCILYC PVAFLSFSSL LNLTFISPDV IKFILLVIVP LPSCLNPLLY IVFNPHFKED MGSLGKHTRF WMRSKHASLL SINSDDVEKR SCESTQALVS FTHASIAYDL PSTSGASPAY PMTESCHLSS VAFVPCL
27 마우스 LgR5 성숙 (신호 서열 없음); 아미노산 22 내지 907 GSSPGPDAI PRGCPSHCHC ELDGRMLLRV DCSDLGLSEL PSNLSVFTSY LDLSMNNISQ LPASLLHRLC FLEELRLAGN ALTHIPKGAF TGLHSLKVLM LQNNQLRQVP EEALQNLRSL QSLRLDANHI SYVPPSCFSG LHSLRHLWLD DNALTDVPVQ AFRSLSALQA MTLALNKIHH IADYAFGNLS SLVVLHLHNN RIHSLGKKCF DGLHSLETLD LNYNNLDEFP TAIKTLSNLK ELGFHSNNIR SIPERAFVGN PSLITIHFYD NPIQFVGVSA FQHLPELRTL TLNGASHITE FPHLTGTATL ESLTLTGAKI SSLPQAVCDQ LPNLQVLDLS YNLLEDLPSL SGCQKLQKID LRHNEIYEIK GSTFQQLFNL RSLNLAWNKI AIIHPNAFST LPSLIKLDLS SNLLSSFPVT GLHGLTHLKL TGNRALQSLI PSANFPELKI IEMPSAYQCC AFGGCENVYK ISNQWNKDDG NSVDDLHKKD AGLFQVQDER DLEDFLLDFE EDLKALHSVQ CSPSPGPFKP CEHLFGSWLI RIGVWTTAVL ALSCNALVAL TVFRTPLYIS SIKLLIGVIA VVDILMGVSS AVLAAVDAFT FGRFAQHGAW WEDGIGCQIV GFLSIFASES SIFLLTLAAL ERGFSVKCSS KFEVKAPLFS LRAIVLLCVL LALTIATIPL LGGSKYNASP LCLPLPFGEP STTGYMVALV LLNSLCFLIM TIAYTKLYCS LEKGELENLW DCSMVKHIAL LLFANCILYC PVAFLSFSSL LNLTFISPDV IKFILLVIVP LPSCLNPLLY IVFNPHFKED MGSLGKHTRF WMRSKHASLL SINSDDVEKR SCESTQALVS FTHASIAYDL PSTSGASPAY PMTESCHLSS VAFVPCL
28 mu8E11 경쇄 가변 영역 NIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPARFSGSG SRTDFTLTID PVEADDAATY YCQQNYEDPF TFGSGTKVEI KR
29 mu8E11 중쇄 가변 영역 QVQLQQSGTE LMKPGASVKI SCKATGYTFS AYWIEWIKQR PGHGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVKATF SSDTSSNTVY IQLNSLTYED SAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTTLKVSS
30 hu8E11.v1 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
31 hu8E11.v1 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TSDTSTSTVY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
32 hu8E11.v2 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
33 hu8E11.v2 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRATF TSDTSTSTVY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
34 hu8E11.v3 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SRTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
35 hu8E11.v3 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TSDTSTSTVY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
36 hu8E11.v4 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SRTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
37 hu8E11.v4 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRATF TSDTSTSTVY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
38 hu8E11.v5 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
39 hu8E11.v5 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TRDTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
40 hu8E11.v6 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
41 hu8E11.v6 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TADTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
42 hu8E11.v7 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SRTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
43 hu8E11.v7 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TRDTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
44 hu8E11.v8 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SRTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KR
45 hu8E11.v8 중쇄 가변 영역 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRVTI TADTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS
46 mu3G12 경쇄 가변 영역 DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLQW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGI YFCSQSTHFP YTFGGGTKLE IKR
47 mu3G12 중쇄 가변 영역 QVQLQQPGAE MVKPGASVKL SCKASVDTFN SYWMHWVKQR PGQGLEWIGE INPSNGRTNY IEKFKNRATV TVDKSSSTAF MQLSSLTSED SAVYYCATGW YFDVWGAGTT VTVSS
48 mu2H6 경쇄 가변 영역 DIVMTQSPSS LTVTAGEKVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WFQQKPGQPP KLLIYWASTR ESGVPDRFTG SGSGTDFTLT ISNVQAEDLA VYYCQNDYSF PFTFGQGTKV EIKR
49 mu2H6 중쇄 가변 영역 EVQLQQSGPE LVKPGTSMKI SCKASGYSFT GYTMNWVKQS HKNGLEWIGL INCYNGGTNY NQKFKGKATL TVDKSSSTAF MELLSLTSED SAVYYCARGG STMITPRFAY WGQGTLVTVS S
50 YW353 경쇄 가변 영역 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVS TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SYTTPPTFGQ GTKVEIKR
51 YW353 중쇄 가변 영역 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT SYSISWVRQA PGKGLEWVAE IYPPGGYTDY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKAR LFFDYWGQGT LVTVSS
52 mu8E11 HVR L1 RASESVDNYG NSFMH
53 mu8E11 HVR L2 LASNLES
54 mu8E11 HVR L3 QQNYEDPFT
55 mu8E11 HVR H1 GYTFSAYWIE
56 mu8E11 HVR H2 EILPGSDSTD YNEKFKV
57 mu8E11 HVR H3 GGHYGSLDY
58 Hu8E11 경쇄 (LC) 프레임워크 1 (FR1) DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INC
59 Hu8E11 LC FR2 WYQQKPGQPP KLLIY
60 Hu8E11.v1 LC FR3
Hu8E11.v2 LC FR3
Hu8E11.v5 LC FR3
Hu8E11.v6 LC FR3		 GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YC
61 Hu8E11.v3 LC FR3
Hu8E11.v4 LC FR3
Hu8E11.v7 LC FR3
Hu8E11.v8 LC FR3		 GVPDRFSGSG SRTDFTLTIS SLQAEDVAVY YC
62 Hu8E11 LC FR4 FGQGTKVEIK R
63 Hu8E11 중쇄 (HC) 프레임워크1 (FR1) EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKAS
64 Hu8E11 HC FR2 WVRQAPGQGL EWIG
65 Hu8E11.v1 HC FR3
Hu8E11.v3 HC FR3		 RVTITSDTST STVYLELSSL RSEDTAVYYC AR
66 Hu8E11.v2 HC FR3
Hu8E11.v4 HC FR3		 RATFTSDTST STVYLELSSL RSEDTAVYYC AR
67 Hu8E11.v5 HC FR3
Hu8E11.v7 HC FR3		 RVTITRDTST STAYLELSSL RSEDTAVYYC AR
68 Hu8E11.v6 HC FR3
Hu8E11.v8 HC FR3		 RVTITADTST STAYLELSSL RSEDTAVYYC AR
69 Hu8E11 HC FR4 WGQGTLVTVS S
70 mu3G12 HVR L1 RSSQSLVHSN GNTYLQ
71 mu3G12 HVR L2 KVSNRFS
72 mu3G12 HVR L3 SQSTHFPYT
73 mu3G12 HVR H1 VDTFNSYWMH
74 mu3G12 HVR H2 EINPSNGRTN YIEKFKN
75 mu3G12 HVR H3 GWYFDV
76 mu2H6 HVR L1 KSSQSLLNSG NQKNYLT
77 mu2H6 HVR L2 WASTRES
78 mu2H6 HVR L3 QNDYSFPFT
79 mu2H6 HVR H1 GYSFTGYTMN
80 mu2H6 HVR H2 LINCYNGGTN YNQKFKG
81 mu2H6 HVR H3 GGSTMITPRF AY
82 YW353 HVR L1 RASQDVSTAV A
83 YW353 HVR L2 SASFLYS
84 YW353 HVR L3 QQSYTTPPT
85 YW353 HVR H1 GFTFTSYSIS
86 YW353 HVR H2 EIYPPGGYTD YADSVKG
87 YW353 HVR H3 ARLFFDY
88 hu8E11.v2 경쇄 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGNSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQNYEDPF TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
89 hu8E11.v2 중쇄 EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFS AYWIEWVRQA PGQGLEWIGE ILPGSDSTDY NEKFKVRATF TSDTSTSTVY LELSSLRSED TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
90 YW353 경쇄 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVS TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
91 YW353 중쇄 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT SYSISWVRQA PGKGLEWVAE IYPPGGYTDY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKAR LFFDYWGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK
92 안티센스 정방향 프라이머 ACCAACTGCATCCTAAACTG
93 안티센스 역방향 프라이머 ACCGAGTTTCACCTCAGCTC
94 센스 정방향 프라이머 ACATTGCCCTGTTGCTCTTC
95 센스 역방향 프라이머 ACTGCTCTGATATACTCAATC
96 LgR5 ECD huFc
(1 내지 537 은 LgR5 ECD임)		 GSSPRSGVLL RGCPTHCHCE PDGRMLLRVD CSDLGLSELP SNLSVFTSYL DLSMNNISQL LPNPLPSLRF LEELRLAGNA LTYIPKGAFT GLYSLKVLML QNNQLRHVPT EALQNLRSLQ SLRLDANHIS YVPPSCFSGL HSLRHLWLDD NALTEIPVQA FRSLSALQAM TLALNKIHHI PDYAFGNLSS LVVLHLHNNR IHSLGKKCFD GLHSLETLDL NYNNLDEFPT AIRTLSNLKE LGFHSNNIRS IPEKAFVGNP SLITIHFYDN PIQFVGRSAF QHLPELRTLT LNGASQITEF PDLTGTANLE SLTLTGAQIS SLPQTVCNQL PNLQVLDLSY NLLEDLPSFS VCQKLQKIDL RHNEIYEIKV DTFQQLLSLR SLNLAWNKIA IIHPNAFSTL PSLIKLDLSS NLLSSFPITG LHGLTHLKLT GNHALQSLIS SENFPELKVI EMPYAYQCCA FGVCENAYKI SNQWNKGDNS SMDDLHKKDA GMFQAQDERD LEDFLLDFEE DLKALHSVQC SPSPGPFKPC EHLLDGWGRA QVTDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC., ET AL. <120> ANTI-LGR5 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 01146-0035-00PCT <150> US 62/010,637 <151> 2014-06-11 <160> 96 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 216 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 1 Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Thr Tyr Gly Ser Ser Ser 85 90 95 Asp Gly Phe Phe Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp 115 120 125 Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr 130 135 140 Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr 145 150 155 160 Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr 165 170 175 Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser 180 185 190 His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val 195 200 205 Gln Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys 210 215 <210> 2 <211> 443 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 2 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Arg Thr Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Asp Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Val Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Glu Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val 165 170 175 Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr 180 185 190 Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr 260 265 270 Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg 275 280 285 Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile 290 295 300 Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His 305 310 315 320 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg 325 330 335 Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu 340 345 350 Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu 370 375 380 Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly 405 410 415 Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 3 Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Asp Ser Ser Thr 85 90 95 Thr Ala Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp 100 105 110 Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val 115 120 125 Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro 130 135 140 Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly 145 150 155 160 Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn 165 170 175 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys 180 185 190 Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Asp Cys 210 <210> 4 <211> 446 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 4 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly Thr 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Tyr Tyr Ser 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ile Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Thr Phe Gly Val Asn Gly Tyr Ala Trp Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser 130 135 140 Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe 165 170 175 Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro 195 200 205 Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser 210 215 220 Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro 275 280 285 Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr 290 295 300 Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro 340 345 350 Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile 355 360 365 Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly 370 375 380 Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp 405 410 415 Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 5 <211> 112 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 5 Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Thr Tyr Gly Ser Ser Ser 85 90 95 Asp Gly Phe Phe Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 6 <211> 120 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 6 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Arg Thr Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Asp Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Val Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Glu Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 7 <211> 110 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 7 Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Glu Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Asp Ser Ser Thr 85 90 95 Thr Ala Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 8 <211> 123 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 8 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly Thr 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Tyr Tyr Ser 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ile Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Thr Phe Gly Val Asn Gly Tyr Ala Trp Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 9 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 10 Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 11 Gln Thr Thr Tyr Gly Ser Ser Ser Asp Gly Phe Phe Trp Thr 1 5 10 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 12 Arg Thr Tyr Trp Ile Cys 1 5 <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 13 Cys Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 14 Tyr Tyr Ala Gly Ser Ser Glu Tyr Phe Asn Leu 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 15 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Gly Leu Ala 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 16 Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 17 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 17 Gln Ser Tyr Tyr Asp Ser Ser Thr Thr Ala Asn Val 1 5 10 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 18 Tyr Tyr Ser Tyr Met Cys 1 5 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 19 Cys Ile Tyr Ala Gly Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala 1 5 10 15 Lys <210> 20 <211> 14 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 20 Ser Tyr Tyr Thr Phe Gly Val Asn Gly Tyr Ala Trp Asp Leu 1 5 10 <210> 21 <211> 907 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Met Asp Thr Ser Arg Leu Gly Val Leu Leu Ser Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Ala Thr Gly Gly Ser Ser Pro Arg Ser Gly Val Leu Leu Arg 20 25 30 Gly Cys Pro Thr His Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu 35 40 45 Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu 50 55 60 Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln 65 70 75 80 Leu Leu Pro Asn Pro Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg 85 90 95 Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly 100 105 110 Leu Tyr Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg His 115 120 125 Val Pro Thr Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly 145 150 155 160 Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu 165 170 175 Ile Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr 180 185 190 Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn 195 200 205 Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser 210 215 220 Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp 225 230 235 240 Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu 245 250 255 Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile 260 265 270 Pro Glu Lys Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe 275 280 285 Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu 290 295 300 Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu 305 310 315 320 Phe Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr 325 330 335 Gly Ala Gln Ile Ser Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro 340 345 350 Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro 355 360 365 Ser Phe Ser Val Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn 370 375 380 Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Arg Ser Leu Asn Leu Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn 405 410 415 Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn 420 425 430 Leu Leu Ser Ser Phe Pro Ile Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu 435 440 445 Lys Leu Thr Gly Asn His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn 450 455 460 Phe Pro Glu Leu Lys Val Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys 465 470 475 480 Ala Phe Gly Val Cys Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn 485 490 495 Lys Gly Asp Asn Ser Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly 500 505 510 Met Phe Gln Ala Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp 515 520 525 Phe Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser 530 535 540 Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Leu Ile 545 550 555 560 Arg Ile Gly Val Trp Thr Ile Ala Val Leu Ala Leu Thr Cys Asn Ala 565 570 575 Leu Val Thr Ser Thr Val Phe Arg Ser Pro Leu Tyr Ile Ser Pro Ile 580 585 590 Lys Leu Leu Ile Gly Val Ile Ala Ala Val Asn Met Leu Thr Gly Val 595 600 605 Ser Ser Ala Val Leu Ala Gly Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Ser Phe 610 615 620 Ala Arg His Gly Ala Trp Trp Glu Asn Gly Val Gly Cys His Val Ile 625 630 635 640 Gly Phe Leu Ser Ile Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr 645 650 655 Leu Ala Ala Leu Glu Arg Gly Phe Ser Val Lys Tyr Ser Ala Lys Phe 660 665 670 Glu Thr Lys Ala Pro Phe Ser Ser Leu Lys Val Ile Ile Leu Leu Cys 675 680 685 Ala Leu Leu Ala Leu Thr Met Ala Ala Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser 690 695 700 Lys Tyr Gly Ala Ser Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro 705 710 715 720 Ser Thr Met Gly Tyr Met Val Ala Leu Ile Leu Leu Asn Ser Leu Cys 725 730 735 Phe Leu Met Met Thr Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Asn Leu Asp 740 745 750 Lys Gly Asp Leu Glu Asn Ile Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile 755 760 765 Ala Leu Leu Leu Phe Thr Asn Cys Ile Leu Asn Cys Pro Val Ala Phe 770 775 780 Leu Ser Phe Ser Ser Leu Ile Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val 785 790 795 800 Ile Lys Phe Ile Leu Leu Val Val Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn 805 810 815 Pro Leu Leu Tyr Ile Leu Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Leu Val 820 825 830 Ser Leu Arg Lys Gln Thr Tyr Val Trp Thr Arg Ser Lys His Pro Ser 835 840 845 Leu Met Ser Ile Asn Ser Asp Asp Val Glu Lys Gln Ser Cys Asp Ser 850 855 860 Thr Gln Ala Leu Val Thr Phe Thr Ser Ser Ser Ile Thr Tyr Asp Leu 865 870 875 880 Pro Pro Ser Ser Val Pro Ser Pro Ala Tyr Pro Val Thr Glu Ser Cys 885 890 895 His Leu Ser Ser Val Ala Phe Val Pro Cys Leu 900 905 <210> 22 <211> 886 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gly Ser Ser Pro Arg Ser Gly Val Leu Leu Arg Gly Cys Pro Thr His 1 5 10 15 Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu Arg Val Asp Cys Ser 20 25 30 Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu Ser Val Phe Thr Ser 35 40 45 Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln Leu Leu Pro Asn Pro 50 55 60 Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Ala 65 70 75 80 Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly Leu Tyr Ser Leu Lys 85 90 95 Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg His Val Pro Thr Glu Ala 100 105 110 Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg Leu Asp Ala Asn His 115 120 125 Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly Leu His Ser Leu Arg 130 135 140 His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu Ile Pro Val Gln Ala 145 150 155 160 Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr Leu Ala Leu Asn Lys 165 170 175 Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn Leu Ser Ser Leu Val 180 185 190 Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser Leu Gly Lys Lys Cys 195 200 205 Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp Leu Asn Tyr Asn Asn 210 215 220 Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu Ser Asn Leu Lys Glu 225 230 235 240 Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile Pro Glu Lys Ala Phe 245 250 255 Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe Tyr Asp Asn Pro Ile 260 265 270 Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu Pro Glu Leu Arg Thr 275 280 285 Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu Phe Pro Asp Leu Thr 290 295 300 Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr Gly Ala Gln Ile Ser 305 310 315 320 Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro Asn Leu Gln Val Leu 325 330 335 Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro Ser Phe Ser Val Cys 340 345 350 Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn Glu Ile Tyr Glu Ile 355 360 365 Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu Arg Ser Leu Asn Leu 370 375 380 Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn Ala Phe Ser Thr Leu 385 390 395 400 Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu Leu Ser Ser Phe 405 410 415 Pro Ile Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu Lys Leu Thr Gly Asn 420 425 430 His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn Phe Pro Glu Leu Lys 435 440 445 Val Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys Ala Phe Gly Val Cys 450 455 460 Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn Lys Gly Asp Asn Ser 465 470 475 480 Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly Met Phe Gln Ala Gln 485 490 495 Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp Phe Glu Glu Asp Leu 500 505 510 Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser Pro Gly Pro Phe Lys 515 520 525 Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Leu Ile Arg Ile Gly Val Trp 530 535 540 Thr Ile Ala Val Leu Ala Leu Thr Cys Asn Ala Leu Val Thr Ser Thr 545 550 555 560 Val Phe Arg Ser Pro Leu Tyr Ile Ser Pro Ile Lys Leu Leu Ile Gly 565 570 575 Val Ile Ala Ala Val Asn Met Leu Thr Gly Val Ser Ser Ala Val Leu 580 585 590 Ala Gly Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Ser Phe Ala Arg His Gly Ala 595 600 605 Trp Trp Glu Asn Gly Val Gly Cys His Val Ile Gly Phe Leu Ser Ile 610 615 620 Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr Leu Ala Ala Leu Glu 625 630 635 640 Arg Gly Phe Ser Val Lys Tyr Ser Ala Lys Phe Glu Thr Lys Ala Pro 645 650 655 Phe Ser Ser Leu Lys Val Ile Ile Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ala Leu 660 665 670 Thr Met Ala Ala Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser Lys Tyr Gly Ala Ser 675 680 685 Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro Ser Thr Met Gly Tyr 690 695 700 Met Val Ala Leu Ile Leu Leu Asn Ser Leu Cys Phe Leu Met Met Thr 705 710 715 720 Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Asn Leu Asp Lys Gly Asp Leu Glu 725 730 735 Asn Ile Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile Ala Leu Leu Leu Phe 740 745 750 Thr Asn Cys Ile Leu Asn Cys Pro Val Ala Phe Leu Ser Phe Ser Ser 755 760 765 Leu Ile Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val Ile Lys Phe Ile Leu 770 775 780 Leu Val Val Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ile 785 790 795 800 Leu Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Leu Val Ser Leu Arg Lys Gln 805 810 815 Thr Tyr Val Trp Thr Arg Ser Lys His Pro Ser Leu Met Ser Ile Asn 820 825 830 Ser Asp Asp Val Glu Lys Gln Ser Cys Asp Ser Thr Gln Ala Leu Val 835 840 845 Thr Phe Thr Ser Ser Ser Ile Thr Tyr Asp Leu Pro Pro Ser Ser Val 850 855 860 Pro Ser Pro Ala Tyr Pro Val Thr Glu Ser Cys His Leu Ser Ser Val 865 870 875 880 Ala Phe Val Pro Cys Leu 885 <210> 23 <211> 875 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 23 Gly Cys Pro Thr His Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu 1 5 10 15 Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu 20 25 30 Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln 35 40 45 Leu Leu Pro Asn Pro Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg 50 55 60 Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly 65 70 75 80 Leu Tyr Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg Gln 85 90 95 Val Pro Thr Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg 100 105 110 Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly 115 120 125 Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu 130 135 140 Ile Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr 145 150 155 160 Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn 165 170 175 Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser 180 185 190 Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp 195 200 205 Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu 210 215 220 Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile 225 230 235 240 Pro Glu Lys Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe 245 250 255 Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu 260 265 270 Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu 275 280 285 Phe Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr 290 295 300 Gly Ala Gln Ile Ser Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro 305 310 315 320 Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro 325 330 335 Ser Phe Ser Val Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn 340 345 350 Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu 355 360 365 Arg Ser Leu Asn Leu Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn 370 375 380 Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn 385 390 395 400 Leu Leu Ser Ser Phe Pro Val Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu 405 410 415 Lys Leu Thr Gly Asn His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn 420 425 430 Phe Pro Glu Leu Lys Ile Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys 435 440 445 Ala Phe Gly Val Cys Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn 450 455 460 Lys Gly Asp Asn Ser Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly 465 470 475 480 Met Phe Gln Val Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp 485 490 495 Phe Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser 500 505 510 Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Leu Ile 515 520 525 Arg Ile Gly Val Trp Thr Ile Ala Val Leu Ala Leu Thr Cys Asn Ala 530 535 540 Leu Val Thr Ser Thr Val Phe Arg Ser Pro Leu Tyr Ile Ser Pro Ile 545 550 555 560 Lys Leu Leu Ile Gly Val Ile Ala Val Val Asn Met Leu Thr Gly Val 565 570 575 Ser Ser Ala Val Leu Ala Gly Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Ser Phe 580 585 590 Ala Arg His Gly Ala Trp Trp Glu Asn Gly Val Gly Cys Gln Val Ile 595 600 605 Gly Phe Leu Ser Ile Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr 610 615 620 Leu Ala Ala Leu Glu Arg Gly Phe Ser Val Lys Cys Ser Ala Lys Phe 625 630 635 640 Glu Thr Lys Ala Pro Phe Ser Ser Leu Lys Val Ile Ile Leu Leu Cys 645 650 655 Ala Leu Leu Ala Leu Thr Met Ala Ala Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser 660 665 670 Glu Tyr Gly Ala Ser Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro 675 680 685 Ser Thr Thr Gly Tyr Met Val Ala Leu Ile Leu Leu Asn Ser Leu Cys 690 695 700 Phe Leu Met Met Thr Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Asn Leu Asp 705 710 715 720 Lys Gly Asp Leu Glu Asn Ile Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile 725 730 735 Ala Leu Leu Leu Phe Thr Asn Cys Ile Leu Tyr Cys Pro Val Ala Phe 740 745 750 Leu Ser Phe Ser Ser Leu Leu Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val 755 760 765 Ile Lys Phe Ile Leu Leu Val Ile Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn 770 775 780 Pro Leu Leu Tyr Ile Leu Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Leu Val 785 790 795 800 Ser Leu Gly Lys Gln Thr Tyr Phe Trp Thr Arg Ser Lys His Pro Ser 805 810 815 Leu Met Ser Ile Asn Ser Asp Asp Val Glu Lys Gln Ser Cys Asp Ser 820 825 830 Thr Gln Ala Leu Val Thr Phe Thr Ser Ser Ser Ile Ala Tyr Asp Leu 835 840 845 Pro Pro Ser Ser Val Pro Ser Pro Ala Tyr Pro Val Thr Glu Ser Cys 850 855 860 His Leu Ser Ser Val Ala Phe Val Pro Cys Leu 865 870 875 <210> 24 <211> 907 <212> PRT <213> Rattus rattus <400> 24 Met Asp Thr Ser Arg Val Arg Met Leu Leu Ser Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Val Ala Ala Gly Ser Pro Pro Arg Pro Asp Thr Met Pro Arg 20 25 30 Gly Cys Pro Ser Tyr Cys His Cys Glu Leu Asp Gly Arg Met Leu Leu 35 40 45 Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu 50 55 60 Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln 65 70 75 80 Leu Pro Ala Ser Leu Leu His Arg Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg 85 90 95 Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr His Ile Pro Lys Gly Ala Phe Ala Gly 100 105 110 Leu His Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg Gln 115 120 125 Val Pro Glu Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly 145 150 155 160 Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Asp 165 170 175 Val Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr 180 185 190 Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Ala Asp His Ala Phe Gly Asn 195 200 205 Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser 210 215 220 Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp 225 230 235 240 Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Lys Thr Leu 245 250 255 Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile 260 265 270 Pro Glu Arg Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe 275 280 285 Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Ile Ser Ala Phe Gln His Leu 290 295 300 Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu 305 310 315 320 Phe Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ala Thr Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr 325 330 335 Gly Ala Lys Ile Ser Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asp Gln Leu Pro 340 345 350 Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro 355 360 365 Ser Leu Ser Gly Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn 370 375 380 Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Gly Gly Thr Phe Gln Gln Leu Phe Asn Leu 385 390 395 400 Arg Ser Leu Asn Leu Ala Arg Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn 405 410 415 Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn 420 425 430 Leu Leu Ser Ser Phe Pro Val Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu 435 440 445 Lys Leu Thr Gly Asn Arg Ala Leu Gln Ser Leu Ile Pro Ser Ala Asn 450 455 460 Phe Pro Glu Leu Lys Ile Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys 465 470 475 480 Ala Phe Gly Gly Cys Glu Asn Val Tyr Lys Ile Pro Asn Gln Trp Asn 485 490 495 Lys Asp Asp Ser Ser Ser Val Asp Asp Leu Arg Lys Lys Asp Ala Gly 500 505 510 Leu Phe Gln Val Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp 515 520 525 Phe Glu Glu Asp Leu Lys Val Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Pro 530 535 540 Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Phe Gly Ser Trp Leu Ile 545 550 555 560 Arg Ile Gly Val Trp Thr Thr Ala Val Leu Ala Leu Ser Cys Asn Ala 565 570 575 Leu Val Ala Phe Thr Val Phe Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Ser Ser Ile 580 585 590 Lys Leu Leu Ile Gly Val Ile Ala Val Val Asp Ile Leu Met Gly Val 595 600 605 Ser Ser Ala Ile Leu Ala Val Val Asp Thr Phe Thr Phe Gly Ser Phe 610 615 620 Ala Gln His Gly Ala Trp Trp Glu Gly Gly Ile Gly Cys Gln Ile Val 625 630 635 640 Gly Phe Leu Ser Ile Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr 645 650 655 Leu Ala Ala Leu Glu Arg Gly Phe Ser Val Lys Cys Ser Ser Lys Phe 660 665 670 Glu Met Lys Ala Pro Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ile Ile Leu Leu Cys 675 680 685 Val Leu Leu Ala Leu Thr Ile Ala Thr Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser 690 695 700 Glu Tyr Asn Ala Ser Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro 705 710 715 720 Ser Thr Thr Gly Tyr Met Val Ala Leu Val Leu Leu Asn Ser Leu Cys 725 730 735 Phe Leu Ile Met Thr Ile Ala Tyr Thr Arg Leu Tyr Cys Ser Leu Glu 740 745 750 Lys Gly Glu Leu Glu Asn Leu Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Thr 755 760 765 Ala Leu Leu Leu Phe Thr Asn Cys Ile Leu Tyr Cys Pro Val Ala Phe 770 775 780 Leu Ser Phe Ser Ser Leu Leu Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val 785 790 795 800 Ile Lys Phe Ile Leu Leu Val Ile Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn 805 810 815 Pro Leu Leu Tyr Ile Val Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Met Gly 820 825 830 Ser Leu Gly Lys Gln Thr Arg Phe Trp Thr Arg Ala Lys His Pro Ser 835 840 845 Leu Leu Ser Ile Asn Ser Asp Asp Val Glu Lys Arg Ser Cys Asp Ser 850 855 860 Thr Gln Ala Leu Val Ser Phe Thr His Ala Ser Ile Ala Tyr Asp Leu 865 870 875 880 Pro Ser Asp Ser Gly Ser Ser Pro Ala Tyr Pro Met Thr Glu Ser Cys 885 890 895 His Leu Ser Ser Val Ala Phe Val Pro Cys Leu 900 905 <210> 25 <211> 886 <212> PRT <213> Rattus rattus <400> 25 Gly Ser Pro Pro Arg Pro Asp Thr Met Pro Arg Gly Cys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Cys His Cys Glu Leu Asp Gly Arg Met Leu Leu Arg Val Asp Cys Ser 20 25 30 Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu Ser Val Phe Thr Ser 35 40 45 Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln Leu Pro Ala Ser Leu 50 55 60 Leu His Arg Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Ala 65 70 75 80 Leu Thr His Ile Pro Lys Gly Ala Phe Ala Gly Leu His Ser Leu Lys 85 90 95 Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg Gln Val Pro Glu Glu Ala 100 105 110 Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg Leu Asp Ala Asn His 115 120 125 Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly Leu His Ser Leu Arg 130 135 140 His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Asp Val Pro Val Gln Ala 145 150 155 160 Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr Leu Ala Leu Asn Lys 165 170 175 Ile His His Ile Ala Asp His Ala Phe Gly Asn Leu Ser Ser Leu Val 180 185 190 Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser Leu Gly Lys Lys Cys 195 200 205 Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp Leu Asn Tyr Asn Asn 210 215 220 Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Lys Thr Leu Ser Asn Leu Lys Glu 225 230 235 240 Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile Pro Glu Arg Ala Phe 245 250 255 Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe Tyr Asp Asn Pro Ile 260 265 270 Gln Phe Val Gly Ile Ser Ala Phe Gln His Leu Pro Glu Leu Arg Thr 275 280 285 Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu Phe Pro Asp Leu Thr 290 295 300 Gly Thr Ala Thr Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr Gly Ala Lys Ile Ser 305 310 315 320 Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asp Gln Leu Pro Asn Leu Gln Val Leu 325 330 335 Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro Ser Leu Ser Gly Cys 340 345 350 Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn Glu Ile Tyr Glu Ile 355 360 365 Lys Gly Gly Thr Phe Gln Gln Leu Phe Asn Leu Arg Ser Leu Asn Leu 370 375 380 Ala Arg Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn Ala Phe Ser Thr Leu 385 390 395 400 Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu Leu Ser Ser Phe 405 410 415 Pro Val Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu Lys Leu Thr Gly Asn 420 425 430 Arg Ala Leu Gln Ser Leu Ile Pro Ser Ala Asn Phe Pro Glu Leu Lys 435 440 445 Ile Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys Ala Phe Gly Gly Cys 450 455 460 Glu Asn Val Tyr Lys Ile Pro Asn Gln Trp Asn Lys Asp Asp Ser Ser 465 470 475 480 Ser Val Asp Asp Leu Arg Lys Lys Asp Ala Gly Leu Phe Gln Val Gln 485 490 495 Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp Phe Glu Glu Asp Leu 500 505 510 Lys Val Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Pro Pro Gly Pro Phe Lys 515 520 525 Pro Cys Glu His Leu Phe Gly Ser Trp Leu Ile Arg Ile Gly Val Trp 530 535 540 Thr Thr Ala Val Leu Ala Leu Ser Cys Asn Ala Leu Val Ala Phe Thr 545 550 555 560 Val Phe Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Ser Ser Ile Lys Leu Leu Ile Gly 565 570 575 Val Ile Ala Val Val Asp Ile Leu Met Gly Val Ser Ser Ala Ile Leu 580 585 590 Ala Val Val Asp Thr Phe Thr Phe Gly Ser Phe Ala Gln His Gly Ala 595 600 605 Trp Trp Glu Gly Gly Ile Gly Cys Gln Ile Val Gly Phe Leu Ser Ile 610 615 620 Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr Leu Ala Ala Leu Glu 625 630 635 640 Arg Gly Phe Ser Val Lys Cys Ser Ser Lys Phe Glu Met Lys Ala Pro 645 650 655 Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ile Ile Leu Leu Cys Val Leu Leu Ala Leu 660 665 670 Thr Ile Ala Thr Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser Glu Tyr Asn Ala Ser 675 680 685 Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro Ser Thr Thr Gly Tyr 690 695 700 Met Val Ala Leu Val Leu Leu Asn Ser Leu Cys Phe Leu Ile Met Thr 705 710 715 720 Ile Ala Tyr Thr Arg Leu Tyr Cys Ser Leu Glu Lys Gly Glu Leu Glu 725 730 735 Asn Leu Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Thr Ala Leu Leu Leu Phe 740 745 750 Thr Asn Cys Ile Leu Tyr Cys Pro Val Ala Phe Leu Ser Phe Ser Ser 755 760 765 Leu Leu Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val Ile Lys Phe Ile Leu 770 775 780 Leu Val Ile Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ile 785 790 795 800 Val Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Met Gly Ser Leu Gly Lys Gln 805 810 815 Thr Arg Phe Trp Thr Arg Ala Lys His Pro Ser Leu Leu Ser Ile Asn 820 825 830 Ser Asp Asp Val Glu Lys Arg Ser Cys Asp Ser Thr Gln Ala Leu Val 835 840 845 Ser Phe Thr His Ala Ser Ile Ala Tyr Asp Leu Pro Ser Asp Ser Gly 850 855 860 Ser Ser Pro Ala Tyr Pro Met Thr Glu Ser Cys His Leu Ser Ser Val 865 870 875 880 Ala Phe Val Pro Cys Leu 885 <210> 26 <211> 907 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26 Met Asp Thr Ser Cys Val His Met Leu Leu Ser Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Val Ala Ala Gly Ser Ser Pro Gly Pro Asp Ala Ile Pro Arg 20 25 30 Gly Cys Pro Ser His Cys His Cys Glu Leu Asp Gly Arg Met Leu Leu 35 40 45 Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu 50 55 60 Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln 65 70 75 80 Leu Pro Ala Ser Leu Leu His Arg Leu Cys Phe Leu Glu Glu Leu Arg 85 90 95 Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr His Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly 100 105 110 Leu His Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg Gln 115 120 125 Val Pro Glu Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly 145 150 155 160 Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Asp 165 170 175 Val Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr 180 185 190 Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Ala Asp Tyr Ala Phe Gly Asn 195 200 205 Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser 210 215 220 Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp 225 230 235 240 Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Lys Thr Leu 245 250 255 Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile 260 265 270 Pro Glu Arg Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe 275 280 285 Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Val Ser Ala Phe Gln His Leu 290 295 300 Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser His Ile Thr Glu 305 310 315 320 Phe Pro His Leu Thr Gly Thr Ala Thr Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr 325 330 335 Gly Ala Lys Ile Ser Ser Leu Pro Gln Ala Val Cys Asp Gln Leu Pro 340 345 350 Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro 355 360 365 Ser Leu Ser Gly Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn 370 375 380 Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Gly Ser Thr Phe Gln Gln Leu Phe Asn Leu 385 390 395 400 Arg Ser Leu Asn Leu Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn 405 410 415 Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn 420 425 430 Leu Leu Ser Ser Phe Pro Val Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu 435 440 445 Lys Leu Thr Gly Asn Arg Ala Leu Gln Ser Leu Ile Pro Ser Ala Asn 450 455 460 Phe Pro Glu Leu Lys Ile Ile Glu Met Pro Ser Ala Tyr Gln Cys Cys 465 470 475 480 Ala Phe Gly Gly Cys Glu Asn Val Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn 485 490 495 Lys Asp Asp Gly Asn Ser Val Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly 500 505 510 Leu Phe Gln Val Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp 515 520 525 Phe Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser 530 535 540 Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Phe Gly Ser Trp Leu Ile 545 550 555 560 Arg Ile Gly Val Trp Thr Thr Ala Val Leu Ala Leu Ser Cys Asn Ala 565 570 575 Leu Val Ala Leu Thr Val Phe Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Ser Ser Ile 580 585 590 Lys Leu Leu Ile Gly Val Ile Ala Val Val Asp Ile Leu Met Gly Val 595 600 605 Ser Ser Ala Val Leu Ala Ala Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Arg Phe 610 615 620 Ala Gln His Gly Ala Trp Trp Glu Asp Gly Ile Gly Cys Gln Ile Val 625 630 635 640 Gly Phe Leu Ser Ile Phe Ala Ser Glu Ser Ser Ile Phe Leu Leu Thr 645 650 655 Leu Ala Ala Leu Glu Arg Gly Phe Ser Val Lys Cys Ser Ser Lys Phe 660 665 670 Glu Val Lys Ala Pro Leu Phe Ser Leu Arg Ala Ile Val Leu Leu Cys 675 680 685 Val Leu Leu Ala Leu Thr Ile Ala Thr Ile Pro Leu Leu Gly Gly Ser 690 695 700 Lys Tyr Asn Ala Ser Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro 705 710 715 720 Ser Thr Thr Gly Tyr Met Val Ala Leu Val Leu Leu Asn Ser Leu Cys 725 730 735 Phe Leu Ile Met Thr Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Ser Leu Glu 740 745 750 Lys Gly Glu Leu Glu Asn Leu Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile 755 760 765 Ala Leu Leu Leu Phe Ala Asn Cys Ile Leu Tyr Cys Pro Val Ala Phe 770 775 780 Leu Ser Phe Ser Ser Leu Leu Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Asp Val 785 790 795 800 Ile Lys Phe Ile Leu Leu Val Ile Val Pro Leu Pro Ser Cys Leu Asn 805 810 815 Pro Leu Leu Tyr Ile Val Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Met Gly 820 825 830 Ser Leu Gly Lys His Thr Arg Phe Trp Met Arg Ser Lys His Ala Ser 835 840 845 Leu Leu Ser Ile Asn Ser Asp Asp Val Glu Lys Arg Ser Cys Glu Ser 850 855 860 Thr Gln Ala Leu Val Ser Phe Thr His Ala Ser Ile Ala Tyr Asp Leu 865 870 875 880 Pro Ser Thr Ser Gly Ala Ser Pro Ala Tyr Pro Met Thr Glu Ser Cys 885 890 895 His Leu Ser Ser Val Ala Phe Val Pro Cys Leu 900 905 <210> 27 <211> 886 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27 Gly Ser Ser Pro Gly Pro Asp Ala Ile Pro Arg Gly Cys Pro Ser His 1 5 10 15 Cys His Cys Glu Leu Asp Gly Arg Met Leu Leu Arg Val Asp Cys Ser 20 25 30 Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu Ser Val Phe Thr Ser 35 40 45 Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln Leu Pro Ala Ser Leu 50 55 60 Leu His Arg Leu Cys Phe Leu Glu Glu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Ala 65 70 75 80 Leu Thr His Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly Leu His Ser Leu Lys 85 90 95 Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg Gln Val Pro Glu Glu Ala 100 105 110 Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg Leu Asp Ala Asn His 115 120 125 Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly Leu His Ser Leu Arg 130 135 140 His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Asp Val Pro Val Gln Ala 145 150 155 160 Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr Leu Ala Leu Asn Lys 165 170 175 Ile His His Ile Ala Asp Tyr Ala Phe Gly Asn Leu Ser Ser Leu Val 180 185 190 Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser Leu Gly Lys Lys Cys 195 200 205 Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp Leu Asn Tyr Asn Asn 210 215 220 Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Lys Thr Leu Ser Asn Leu Lys Glu 225 230 235 240 Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile Pro Glu Arg Ala Phe 245 250 255 Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe Tyr Asp Asn Pro Ile 260 265 270 Gln Phe Val Gly Val Ser Ala Phe Gln His Leu Pro Glu Leu Arg Thr 275 280 285 Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser His Ile Thr Glu Phe Pro His Leu Thr 290 295 300 Gly Thr Ala Thr Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr Gly Ala Lys Ile Ser 305 310 315 320 Ser Leu Pro Gln Ala Val Cys Asp Gln Leu Pro Asn Leu Gln Val Leu 325 330 335 Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro Ser Leu Ser Gly Cys 340 345 350 Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn Glu Ile Tyr Glu Ile 355 360 365 Lys Gly Ser Thr Phe Gln Gln Leu Phe Asn Leu Arg Ser Leu Asn Leu 370 375 380 Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn Ala Phe Ser Thr Leu 385 390 395 400 Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu Leu Ser Ser Phe 405 410 415 Pro Val Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu Lys Leu Thr Gly Asn 420 425 430 Arg Ala Leu Gln Ser Leu Ile Pro Ser Ala Asn Phe Pro Glu Leu Lys 435 440 445 Ile Ile Glu Met Pro Ser Ala Tyr Gln Cys Cys Ala Phe Gly Gly Cys 450 455 460 Glu Asn Val Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn Lys Asp Asp Gly Asn 465 470 475 480 Ser Val Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly Leu Phe Gln Val Gln 485 490 495 Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp Phe Glu Glu Asp Leu 500 505 510 Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser Pro Gly Pro Phe Lys 515 520 525 Pro Cys Glu His Leu Phe Gly Ser Trp Leu Ile Arg Ile Gly Val Trp 530 535 540 Thr Thr Ala Val Leu Ala Leu Ser Cys Asn Ala Leu Val Ala Leu Thr 545 550 555 560 Val Phe Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Ser Ser Ile Lys Leu Leu Ile Gly 565 570 575 Val Ile Ala Val Val Asp Ile Leu Met Gly Val Ser Ser Ala Val Leu 580 585 590 Ala Ala Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Arg Phe Ala Gln His Gly Ala 595 600 605 Trp Trp Glu Asp Gly Ile Gly Cys Gln Ile Val Gly Phe Leu Ser Ile 610 615 620 Phe Ala Ser Glu Ser Ser Ile Phe Leu Leu Thr Leu Ala Ala Leu Glu 625 630 635 640 Arg Gly Phe Ser Val Lys Cys Ser Ser Lys Phe Glu Val Lys Ala Pro 645 650 655 Leu Phe Ser Leu Arg Ala Ile Val Leu Leu Cys Val Leu Leu Ala Leu 660 665 670 Thr Ile Ala Thr Ile Pro Leu Leu Gly Gly Ser Lys Tyr Asn Ala Ser 675 680 685 Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro Ser Thr Thr Gly Tyr 690 695 700 Met Val Ala Leu Val Leu Leu Asn Ser Leu Cys Phe Leu Ile Met Thr 705 710 715 720 Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Ser Leu Glu Lys Gly Glu Leu Glu 725 730 735 Asn Leu Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile Ala Leu Leu Leu Phe 740 745 750 Ala Asn Cys Ile Leu Tyr Cys Pro Val Ala Phe Leu Ser Phe Ser Ser 755 760 765 Leu Leu Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Asp Val Ile Lys Phe Ile Leu 770 775 780 Leu Val Ile Val Pro Leu Pro Ser Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ile 785 790 795 800 Val Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Met Gly Ser Leu Gly Lys His 805 810 815 Thr Arg Phe Trp Met Arg Ser Lys His Ala Ser Leu Leu Ser Ile Asn 820 825 830 Ser Asp Asp Val Glu Lys Arg Ser Cys Glu Ser Thr Gln Ala Leu Val 835 840 845 Ser Phe Thr His Ala Ser Ile Ala Tyr Asp Leu Pro Ser Thr Ser Gly 850 855 860 Ala Ser Pro Ala Tyr Pro Met Thr Glu Ser Cys His Leu Ser Ser Val 865 870 875 880 Ala Phe Val Pro Cys Leu 885 <210> 28 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28 Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 29 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Lys Ala Thr Phe Ser Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Asn Ser Leu Thr Tyr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Lys Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v1 light chain variable region <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 31 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequences <220> <223> hu8E11.v1 heavy chain variable region <400> 31 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 32 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v2 light chain variable region <400> 32 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 33 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v2 heavy chain variable region <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Ala Thr Phe Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v3 light chain variable region <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 35 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v3 heavy chain variable region <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v4 light chain variable region <400> 36 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 37 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v4 heavy chain variable region <400> 37 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Ala Thr Phe Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v5 light chain variable region <400> 38 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 39 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v5 heavy chain variable region <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v6 light chain variable region <400> 40 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 41 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v6 heavy chain variable region <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v7 light chain variable region <400> 42 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 43 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v7 heavy chain variable region <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v8 light chain variable region <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 45 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v8 heavy chain variable region <400> 45 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 47 <211> 115 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Met Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Val Asp Thr Phe Asn Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 48 <211> 114 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Asn Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 49 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 49 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Lys Asn Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Cys Tyr Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Thr Met Ile Thr Pro Arg Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 50 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 51 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Tyr Pro Pro Gly Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Arg Leu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 52 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54 Gln Gln Asn Tyr Glu Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 55 Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr Trp Ile Glu 1 5 10 <210> 56 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 56 Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Val <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57 Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr 1 5 <210> 58 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 light chain (LC) framework 1 (FR1) <400> 58 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 59 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 LC FR2 <400> 59 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 60 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v1 LC FR3; Hu8E11.v2 LC FR3; Hu8E11.v5 LC FR3; Hu8E11.v6 LC FR3 <400> 60 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 61 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v3 LC FR3; Hu8E11.v4 LC FR3; Hu8E11.v7 LC FR3; Hu8E11.v8 LC FR3 <400> 61 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 LC FR4 <400> 62 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 63 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 heavy chain (HC) framework1 (FR1) <400> 63 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 <210> 64 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 HC FR2 <400> 64 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 65 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v1 HC FR3; Hu8E11.v3 HC FR3 <400> 65 Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Leu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 66 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v2 HC FR3; Hu8E11.v4 HC FR3 <400> 66 Arg Ala Thr Phe Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Leu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 67 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v5 HC FR3; Hu8E11.v7 HC FR3 <400> 67 Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 68 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11.v6 HC FR3; Hu8E11.v8 HC FR3 <400> 68 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu8E11 HC FR4 <400> 69 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 70 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 70 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln 1 5 10 15 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 71 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 72 Ser Gln Ser Thr His Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 73 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 73 Val Asp Thr Phe Asn Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 74 Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 75 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 75 Gly Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 76 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 77 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 78 Gln Asn Asp Tyr Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79 Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn 1 5 10 <210> 80 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 80 Leu Ile Asn Cys Tyr Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 81 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81 Gly Gly Ser Thr Met Ile Thr Pro Arg Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 85 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Ser Ile Ser 1 5 10 <210> 86 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Glu Ile Tyr Pro Pro Gly Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 87 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Ala Arg Leu Phe Phe Asp Tyr 1 5 <210> 88 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v2 light chain <400> 88 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 89 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu8E11.v2 heavy chain <400> 89 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Val Arg Ala Thr Phe Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly His Tyr Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 90 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 91 <211> 446 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Tyr Pro Pro Gly Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Arg Leu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 92 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense forward primer <400> 92 accaactgca tcctaaactg 20 <210> 93 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense reverse primer <400> 93 accgagtttc acctcagctc 20 <210> 94 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense forward primer <400> 94 acattgccct gttgctcttc acattgccct gttgctcttc 40 <210> 95 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense reverse primer <400> 95 actgctctga tatactcaat c 21 <210> 96 <211> 770 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LgR5 ECD huFc (1 to 537 are LgR5 ECD) <400> 96 Gly Ser Ser Pro Arg Ser Gly Val Leu Leu Arg Gly Cys Pro Thr His 1 5 10 15 Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu Arg Val Asp Cys Ser 20 25 30 Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu Ser Val Phe Thr Ser 35 40 45 Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln Leu Leu Pro Asn Pro 50 55 60 Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Ala 65 70 75 80 Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly Leu Tyr Ser Leu Lys 85 90 95 Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg His Val Pro Thr Glu Ala 100 105 110 Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg Leu Asp Ala Asn His 115 120 125 Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly Leu His Ser Leu Arg 130 135 140 His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu Ile Pro Val Gln Ala 145 150 155 160 Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr Leu Ala Leu Asn Lys 165 170 175 Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn Leu Ser Ser Leu Val 180 185 190 Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser Leu Gly Lys Lys Cys 195 200 205 Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp Leu Asn Tyr Asn Asn 210 215 220 Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu Ser Asn Leu Lys Glu 225 230 235 240 Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile Pro Glu Lys Ala Phe 245 250 255 Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe Tyr Asp Asn Pro Ile 260 265 270 Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu Pro Glu Leu Arg Thr 275 280 285 Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu Phe Pro Asp Leu Thr 290 295 300 Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr Gly Ala Gln Ile Ser 305 310 315 320 Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro Asn Leu Gln Val Leu 325 330 335 Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro Ser Phe Ser Val Cys 340 345 350 Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn Glu Ile Tyr Glu Ile 355 360 365 Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu Arg Ser Leu Asn Leu 370 375 380 Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn Ala Phe Ser Thr Leu 385 390 395 400 Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn Leu Leu Ser Ser Phe 405 410 415 Pro Ile Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu Lys Leu Thr Gly Asn 420 425 430 His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn Phe Pro Glu Leu Lys 435 440 445 Val Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys Ala Phe Gly Val Cys 450 455 460 Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn Lys Gly Asp Asn Ser 465 470 475 480 Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly Met Phe Gln Ala Gln 485 490 495 Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp Phe Glu Glu Asp Leu 500 505 510 Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser Pro Gly Pro Phe Lys 515 520 525 Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Gly Arg Ala Gln Val Thr Asp 530 535 540 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 545 550 555 560 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 565 570 575 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 580 585 590 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 595 600 605 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 610 615 620 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 625 630 635 640 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 645 650 655 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 660 665 670 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 675 680 685 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 690 695 700 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 705 710 715 720 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 725 730 735 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 740 745 750 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 755 760 765 Gly Lys 770

Claims (40)

  1. LgR5에 결합하는 단리된 항체로서, 하기를 포함하는, 항체:
    a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    b) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  2. 제1항에 있어서, 하기를 포함하는, 항체:
    a) (i) 서열 번호: 6의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VH 서열; (ii) 서열 번호: 5의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열; 또는
    b) (i) 서열 번호: 8의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VH 서열; (ii) 서열 번호: 7의 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 서열 번호: 6 또는 서열 번호: 8의 VH 서열을 포함하는, 항체.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 7 또는 서열 번호: 9의 VL 서열을 포함하는, 항체.
  5. 서열 번호: 6의 VH 서열; 및 서열 번호: 5의 VL 서열을 포함하는, 항체.
  6. 서열 번호: 8의 VH 서열; 및 서열 번호: 7의 VL 서열을 포함하는, 항체.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 단클론성 항체인 항체.
  8. 청구항 7에 있어서, 마우스, 래빗, 인간, 인간화된, 또는 키메라 항체인, 항체.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 IgG인, 항체.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항의 항체를 암호화하는, 단리된 핵산.
  11. 청구항 10의 핵산을 포함하는, 숙주 세포.
  12. 항체의 생산 방법으로서,
    청구항 11의 숙주 세포를 배양시켜 상기 항체가 생산되도록 하는 단계를 포함하는, 방법.
  13. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항의 항체 및 세포독성 제제를 포함하는, 면역접합체.
  14. 청구항 13의 면역접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 제형.
  15. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 청구항에 있어서, 표지에 콘주게이트되는, 항체.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 표지는 양전자 방출핵인, 항체.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 양전자 방출핵은 89Zr인, 항체.
  18. 생물학적 샘플 내 인간 LgR5를 검출하는 방법으로서,
    청구항 1 내지 9 및 청구항 15 내지 17 중 어느 한 항의 항-LgR5 항체를, 상기 항-LgR5 항체의 인간 LgR5로의 결합을 허용하는 조건하에서, 상기 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계; 및
    복합체가 상기 생물학적 샘플 내에서의 상기 항-LgR5 항체와 인간 LgR5 사이에서 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 항-LgR5 항체가 청구항 4 또는 청구항 5의 항체인, 방법.
  20. 청구항 18 또는 청구항 19에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플인, 방법.
  21. LgR5-양성 암을 검출하는 방법으로서,
    (i) LgR5-양성 암을 갖거나 이를 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 표지된 항-LgR5 항체를 투여하는 단계로서, 상기 표지된 항-LgR5 항체는 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항의 항-LgR5 항체를 포함하는, 상기 투여 단계, 및
    (ii) 상기 대상체에서 상기 표지된 항-LgR5 항체를 검출하는 단계로서, 상기 표지된 항-LgR5 항체의 검출은 상기 대상체에서의 LgR5-양성 암을 표지하는, 상기 검출 단계를 포함하는, 방법.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 표지된 항-LgR5 항체가 표지된 청구항 4 또는 청구항 5의 항체인, 방법.
  23. 청구항 21 또는 22에 있어서, 상기 표지된 항-LgR5 항체는 양전자 방출핵에 콘주게이트된 항-LgR5 항체를 포함하는, 방법.
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 양전자 방출핵은 89Zr인, 방법.
  25. LgR5-양성 암을 갖는 암 환자를 동정하는 방법으로서,
    청구항 1 내지 9 및 청구항 15 내지 17 중 어느 한 항의 항-LgR5 항체를, 상기 항-LgR5 항체의 인간 LgR5로의 결합을 허용하는 조건하에서, 상기 환자로부터의 암 샘플과 접촉시키는 단계, 및
    복합체가 상기 암 샘플 내에서 상기 항-LgR5 항체와 인간 LgR5 사이에 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  26. 청구항 25에 있어서, 상기 암 환자는, 상기 암 샘플 내 상기 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에서 복합체가 검출될 경우, LgR5-양성 암을 갖는 것으로 동정되는, 방법.
  27. 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체에 의한 치료를 위하여 암 환자를 선택하는 방법으로서,
    면역조직화학 (IHC)을 사용하여 상기 환자로부터의 암 샘플 내의 LgR5 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하고,
    LgR5 발현의 상승된 수준은, 상기 암 환자가 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체에 의한 치료로부터 이점을 얻을 가능성이 더욱 크다는 것을 표지하는, 방법.
  28. 청구항 27에 있어서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 2+ 또는 3+ 염색인, 방법.
  29. 청구항 28에 있어서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 3+ 염색인, 방법.
  30. 청구항 27 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, IHC는 청구항 1 내지 9 및 15 내지 17 중 어느 한 항의 항체를 사용하여 수행되는, 방법.
  31. 항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체에 의한 치료를 위하여 암 환자를 선택하는 방법으로서,
    청구항 1 내지 9 및 청구항 15 내지 17 중 어느 한 항의 항-LgR5 항체를, 상기 항-LgR5 항체의 인간 LgR5로의 결합을 허용하는 조건하에서, 상기 환자로부터의 암 샘플과 접촉시키는 단계; 및
    복합체가 상기 암 샘플 내에서의 상기 항-LgR5 항체와 인간 LgR5 사이에 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 청구항 31에 있어서, 상기 암 환자는, 상기 암 샘플 내 상기 항-LgR5 항체 및 인간 LgR5 사이에서 복합체가 검출될 경우, 선택되는, 방법.
  33. 암 환자의 치료 방법으로서,
    항-LgR5 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 상기 환자에게 투여여하는 단계를 포함하고,
    상기 환자로부터의 암 샘플은, 면역조직화학 (IHC)를 사용하여 LgR5 발현의 상승된 수준을 갖는 것으로 측정되었던 것인, 방법.
  34. 청구항 33에 있어서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 2+ 또는 3+ 염색인, 방법.
  35. 청구항 34에 있어서, 상승된 수준의 LgR5 발현은 IHC에 의한 3+ 염색인, 방법.
  36. 청구항 33 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, IHC는 청구항 1 내지 9 및 15 내지 17 중 어느 한 항의 항체를 사용하여 수행되는, 방법.
  37. 청구항 27 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역접합체는 하기를 포함하는 항-LgR5 항체를 포함하는, 방법:
    a) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    b) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    c) 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    d) 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 항-LgR5 항체는 하기를 포함하는, 방법:
    a) 서열 번호: 33의 VH 서열 및 서열 번호: 32의 VL 서열; 또는
    b) 서열 번호: 51의 VH 서열 및 서열 번호: 50의 VL 서열.
  39. 청구항 27 내지 38 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역접합체는 세포독성 제제에 콘주게이트되는 항-LgR5 항체를 포함하는, 방법.
  40. 청구항 25 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 샘플은 결장암 샘플, 결장직장암 샘플, 소장암 샘플, 자궁내막암 샘플, 췌장암 샘플, 또는 난소암 샘플인, 방법.
KR1020167034257A 2014-06-11 2015-06-10 항-lgr5 항체 및 이의 용도 Withdrawn KR20170010785A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462010637P 2014-06-11 2014-06-11
US62/010,637 2014-06-11
PCT/US2015/035111 WO2015191715A1 (en) 2014-06-11 2015-06-10 Anti-lgr5 antibodies and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170010785A true KR20170010785A (ko) 2017-02-01

Family

ID=53443029

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167034257A Withdrawn KR20170010785A (ko) 2014-06-11 2015-06-10 항-lgr5 항체 및 이의 용도

Country Status (10)

Country Link
US (2) US10316084B2 (ko)
EP (1) EP3155015A1 (ko)
JP (1) JP2017526618A (ko)
KR (1) KR20170010785A (ko)
CN (1) CN106459202A (ko)
BR (1) BR112016028838A2 (ko)
CA (1) CA2949982A1 (ko)
MX (1) MX2016016233A (ko)
RU (1) RU2016148616A (ko)
WO (1) WO2015191715A1 (ko)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL265274B2 (en) 2016-09-16 2023-11-01 Bionomics Ltd A combination of an antibody against LGR5 and an antibody that inhibits PD-1 for the treatment of tumors
IL324632A (en) 2016-12-01 2026-01-01 Regeneron Pharma Radiolabeled anti-PD-L1 antibodies for immuno-PET imaging
CN110650974B (zh) 2017-02-10 2024-04-19 瑞泽恩制药公司 用于免疫-pet成像的放射性标记的抗-lag3抗体
MY197688A (en) 2017-07-24 2023-07-05 Regeneron Pharma Anti-cd8 antibodies and uses thereof
JP7750828B2 (ja) 2019-09-16 2025-10-07 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 免疫ｐｅｔ撮像のための放射標識されたｍｅｔ結合タンパク質
KR102500434B1 (ko) * 2019-10-01 2023-02-16 가톨릭대학교 산학협력단 위암의 복강 전이 진단용 펩타이드 프로브
WO2024092016A1 (en) * 2022-10-26 2024-05-02 Research Development Foundation Cell targeting constructs and uses thereof

Family Cites Families (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
ES2052027T5 (es) 1988-11-11 2005-04-16 Medical Research Council Clonacion de secuencias de dominio variable de inmunoglobulina.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
WO1993016185A2 (en) 1992-02-06 1993-08-19 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US5686578A (en) * 1994-08-05 1997-11-11 Immunomedics, Inc. Polyspecific immunoconjugates and antibody composites for targeting the multidrug resistant phenotype
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
CA2293829C (en) 1997-06-24 2011-06-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
ES2375931T3 (es) 1997-12-05 2012-03-07 The Scripps Research Institute Humanización de anticuerpo murino.
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
IL138608A0 (en) 1998-04-02 2001-10-31 Genentech Inc Antibody variants and fragments thereof
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
KR100940380B1 (ko) 1999-01-15 2010-02-02 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PT1176195E (pt) 1999-04-09 2013-07-18 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para controlar a actividade de uma molécula funcional sob o ponto de vista imunológico
PT1222292E (pt) 1999-10-04 2005-11-30 Medicago Inc Metodo para regulacao da transcricao de genes exogenos na presenca de azoto
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Kyowa Kirin Co., Ltd. The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
DK2314686T4 (da) 2000-10-06 2023-08-21 Kyowa Kirin Co Ltd Celler, der danner antistofsammensætninger
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
IL155977A0 (en) 2000-11-30 2003-12-23 Medarex Inc Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
NZ581474A (en) 2001-08-03 2011-04-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
AU2003236020B2 (en) 2002-04-09 2009-03-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in GDP-fucose transport
EP1502603A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk AN ANTIBODY COMPOSITION CONTAINING MEDICAMENT FOR PATIENTS WITH Fc gamma RIIIa POLYMORPHISM
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
US20040259150A1 (en) 2002-04-09 2004-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1944320A1 (en) 2002-12-16 2008-07-16 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US20050079574A1 (en) 2003-01-16 2005-04-14 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
DE10339820A1 (de) 2003-08-22 2005-03-17 Hinzmann, Bernd, Dr. Verwendung von an GPR49 bindenden Substanzen zur Diagnose und Behandlung von Krebs
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
JPWO2005035778A1 (ja) 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 α１，６−フコシルトランスフェラーゼの機能を抑制するＲＮＡを用いた抗体組成物の製造法
PT1692182E (pt) 2003-11-05 2010-05-13 Roche Glycart Ag Anticorpos de cd20 com uma afinidade de ligação acrescida ao receptor fc e uma função efectora acrescida
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
CA2561686C (en) 2004-03-31 2014-12-02 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
PT1737891E (pt) 2004-04-13 2013-04-16 Hoffmann La Roche Anticorpos anti p-selectina
MXPA06014065A (es) 2004-06-01 2007-01-31 Genentech Inc Conjugados de droga-anticuerpo y metodos.
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
DK2059533T3 (da) 2006-08-30 2013-02-25 Genentech Inc Multispecifikke antistoffer
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
HRP20151261T1 (hr) 2007-07-02 2016-01-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Sastavi i postupci za lijeäśenje i dijagnosticiranje raka
CA2705509A1 (en) 2007-11-14 2009-05-22 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Diagnosis and treatment of cancer using anti-gpr49 antibody
EP3663318A1 (en) 2008-01-07 2020-06-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
US8742076B2 (en) 2008-02-01 2014-06-03 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
WO2010016766A2 (en) 2008-08-08 2010-02-11 Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen Antibodies recognizing endogenous human lgr5 and/or lgr6
WO2011130598A1 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AR090549A1 (es) * 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015191715A1 (en) 2015-12-17
US10316084B2 (en) 2019-06-11
CN106459202A (zh) 2017-02-22
MX2016016233A (es) 2017-03-31
BR112016028838A2 (pt) 2017-10-24
RU2016148616A (ru) 2018-07-18
CA2949982A1 (en) 2015-12-17
US20190248889A1 (en) 2019-08-15
US20170233471A1 (en) 2017-08-17
EP3155015A1 (en) 2017-04-19
JP2017526618A (ja) 2017-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250073212A1 (en) METHODS OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES
US10889651B2 (en) Anti-Ly6E antibodies and methods of use
CN103596983B (zh) 抗fgfr4抗体及使用方法
US10316084B2 (en) Anti-LGR5 antibodies and uses thereof
RU2727663C2 (ru) Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
KR20190074300A (ko) 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
US8911732B2 (en) Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
KR20180012859A (ko) 항-her2 항체 및 이용 방법
TW202200212A (zh) 包含抗-trop-2抗體之抗體藥物結合物
BR112021010908A2 (pt) Método para tratamento de linfoma difuso de grandes células b, kit e imunoconjugado
HK1231091A1 (en) Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
BR122024012306A2 (pt) Usos de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado, usos de uma quantidade eficaz de polatuzumabe vedotina, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotinas
HK1225612B (zh) 抗Ly6E抗體及使用方法
HK1190734A (en) Anti-fgfr4 antibodies and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A15-nap-PA0105

PG1501 Laying open of application

St.27 status event code: A-1-1-Q10-Q12-nap-PG1501

PC1203 Withdrawal of no request for examination

St.27 status event code: N-1-6-B10-B12-nap-PC1203

P22-X000 Classification modified

St.27 status event code: A-2-2-P10-P22-nap-X000