LU85512A1

LU85512A1 - Preparation de compositions d'aerosols

Info

Publication number: LU85512A1
Application number: LU85512A
Authority: LU
Inventors: John Gerard Mcgurk; George Conway Gilroy; Alastair Roderick Ross
Original assignee: Sterwin Ag
Priority date: 1983-08-17
Filing date: 1984-08-17
Publication date: 1985-04-24
Also published as: ES8506445A1; DK163479B; IL72590A0; GB8420850D0; IT8422357A1; NZ209112A; IE842121L; FR2550706A1; FR2550706B1; SE459471B; JPS6089414A; DK392884D0; SE8404118L; GB2145107A; KR850001689A; BE900375A; DK392884A; GB8322178D0; AU569314B2; IT8422357A0

Description

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La présente invention concerne la préparation de compositions d*aérosols et, de manière plus particulière, la préparation in situ de liposomes en se servant d’un système d’aérosol sous pression.

5 Certains composés à activité thérapeutique s'ad ministrent à des patients par inhalation, c’est-à-dire que ces substances sont introduites dans les voies respiratoires par le nez ou la bouche sous la forme d'une vapeur ou d’un gaz, ou sous la forme d'un brouillard, 10 en même temps qu'une matière servant de support ou de véhicule qui se présente sous la forme d'une vapeur ou d'un gaz. De manière similaire, pour certains traitements de la peau, par exemple, pour le traitement de plaies ouvertes ou de foulures ou d'entorses, pour le 15 traitement de troubles dermatologiques, ou à des fins cosmétiques, il-peut être souhaitable d'administrer un composé actif par pulvérisation, sous la forme d'un gaz, d'une vapeur ou d'un brouillard. Dans chaque circons-* “tance, il est souhaitable qu'une proportion aussi élevée 20 que possible du composé actif intact atteigne l'endroit où l'on attend qu'il exerce son action et, dans ce cas, il arrive quelquefois que le composé actif doive demeurer _ intact pendant une certaine période à l'endroit où l'on attend qu'il exerce son action. Cela revient à dire que 25 le composé actif doit être administré sans qu'il se décompose, que ce soit au cours de son transit ou immédiatement lors de son entrée en contact avec le patient.

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Ainsi, par exemple, lors de l'administration du composé bronchodilatateur anti-asthmatique connu sous le nom de bitoltérol (décrit dans la description du brevet britannique N° 1 298 771), il est souhaitable 5 d'administrer le composé en manière telle que l'on obtienne une pénétration maximale des bronches par la substance active, de façon à parvenir à des taux de composé actif des plus efficaces aux endroits d'action nécessaires.

10 Dans le passé, on a suggéré de produire des compo sitions de liposomes contenant des substances biologiquement actives et des compositions de ce genre sont décrites, par exemple, dans les descriptions des brevets britanniques N° 1 575 343, 1 575 344 et 2 013 609 A.

5 15 Cependant, dans des compositions connues de ce type, la -p matière liposomique en est une qui est préparée au pré- ; alable et séchée, typiquement par lyophilisation (séchage par congélation). On reconstitue ensuite la matière liposomique par mélange à l'eau.

20 De même, on connaît des compositions d'aérosols contenant diverses matières cosmétiques et thérapeutiques -voir par exemple les descriptions des brevets britanniques N° 780 885 , 993 702, 1 302 671, 1 381 184, 1 516 195 - s____et 2 001 334 A. Cependant, bien que des compositions 25 d’aérosols de cette nature puissent contenir certains ingrédients lipidiques, ces ingrédients sont invariablement présents simplement en tant qu'agents de dispersion, de suspension, d'émulsion et analogues. Au surplus, ces î compositions sont destinées à produire soit un spray sec, 30 si bien qu'aucune formation liposomique n'est possible, soit comme dans le cas de la crème de base de la description du brevet britannique 780 885, présentées sous forme d'un prémélange émulsionné de n'importe auel / “ " “ * , · 3 ,· Au surplus, comme décrit dans le mémoire descriptif du brevet des E.U.A. N° 3 594 476, il a été proposé de préparer des aérosols de lécithine, intéressants pour le traitement de troubles pulmonaires, qui peuvent faculta-5 tivement contenir d’autres agents thérapeutiques, comme des antibiotiques. Suivant le procédé de préparation . décrit, on prépare d’abord une suspension de DL- dipalmitoyl-a-lécithine dans de l’eau (ou une solution saline), tout médicament étant dissous dans l'eau ou la 10 solution saline, la suspension étant ensuite nébulisée, c’est-à-dire transformée en un aérosol, dans un générateur a ultrasons alimenté en un courant d'air servant de véhicule ou support. Par conséquent, le procédé décrit repose sur le recours à un équipement à ultrasons rela- * 15 tivement coûteux pour produire le mélange final néces- Γ saire de lécithine et d'eau, comme aussi sur l'emploi ς d’un mélange initial constitué de lécithine en suspension dans de l'eau. De même l'équipement ultrasonique peut être bruyant et ne conviendrait pa^'de ce fait, à l'utilisa- 20 tion sur une base générale.

Au surplus, ainsi que le décrit le mémoire descriptif du brevet des E.U.A. 4 371 451, il a été proposé de produire des compositions de démoulage d'ustensiles de cuisson à base de lécithine, constituées d'eau, de 25 lécithine et d'éther diméthylique servant de propulseur. Bien que dans cette description, les solutions soient * distribuées à partir d'un récipient à aérosol, ici encore, le procédé décrit reposé sur l'emploi d'un mélange ini- ç. tial de lécithine dispersée dans de l’eau. Au surplus, 30 ce que l'on recherche dans ce cas est un séchage rapide et l'obtention d'un mince revêtement de lécithine qui ne mousse pas, plutôt qu'une matière liposomique en tant que telle.

in La demanderesse a découvert à présent, non sans /J 35 surprise, qu'en utilisant un système à aérosol sous M pression, une matière liposomique pouvait être formée * * * 4 * de manière extemporanée à partir de composants lipidiques ^ et aqueux séparés et que des matières actives de diverses â natures pouvaient être administrées avec un effet amélio ré en les dispensant sous forme d’un mélange pulvérisé 5 avec un véhicule ou support liposomique formé in situ au * moment de débiter 1 e mélange de pulvérisation. De même, une telle matière liposomique formée in situ au moment de débiter 1 e mélange de pulvérisation est en soi intéressante, par exemple, pour le traitement de 10 troubles pulmonaires bien connus des spécialistes.

Par conséquent, la présente invention a pour objet un procédé de préparation de liposomes, procédé qui se caractérise en ce que l’on rassemble sous pression au moins deux constituants séparés, à savoir un premier 15 constituant formé d'eau et un second constituant formé d'une matière lipidique et en ce que l'on fait passer le mélange sous pression à travers un ajutage ou tout autre dispositif de façon à engendrer un spray du type aérosol contenant des liposomes.

20 Le procédé suivant la présente invention assure la préparation in situ ou extemporanée de liposomes en utilisant un système d'aérosol sous pression. Suivant la présente invention, un premier constituant et un second constituant formés d'une matière lipidique sèche sont t ---- ' ' 25 mélangés de façon à obtenir un spray dans lequel les , liposomes peuvent être présents tels quels ou sous forme d'un véhicule ou support liposomique pour une ou plusieurs autres matières. Par conséquent, selon une caractéris-^ tique préférée de la présente invention, cette dernière a 30 pour objet un aérosol liposomique comprenant un véhicule ou support liposomique et une matière active séparée qui, en général, est une substance à activité biologique et/ou intéressante pour le traitement ou les soins f, du corps humain ou animal. Une telle matière active sera // if

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5 généralement aussi une matière non lipidique, bien que.dans certaines circonstances, on puisse utiliser un lipide pour véhiculer ou supporter une partie active, par exem- •.w * pie, qui y est attachée.

5 On peut aussi mettre la présente invention en oeuvre pour préparer et fournir un aérosol liposomique tel quel, c’est-à-dire sans autre matière ou composé actif séparé. De tels aérosols trouvent application de * diverses manières, que ce soit pour préparer des lipo-10 somes per se destinés à diverses applications ou que ce soit dans le domaine thérapeutique. Plus particulièrement, ils se révèlent intéressants dans le domaine de la parturition ou des enfants nouveaux-nés soumis à des difficultés respiratoires (syndrome de détresse respira-15 toire) peuvent être assistés afin de respirer plus normalement par l’administration d'une matière lipidique à leurs régions bronchiques pour augmenter les faibles taux de surfactif pulmonaire naturellement présent constatés ^ chez ces enfants.

20 De préférence, cependant, on fournit une matière active séparée qui peut initialement être présente dans le premier ou, plus avantageusement, le _______second constituant. Une telle matière active peut être présente sous la forme d'une suspension, pour ne la citer 25 qu’en exemple une poudre sèche, dans le premier ou le • ---“—second constituant, mais se trouve, de préférence, en solution dans l’un des constituants. En utilisant une solution de matière active, il est possible d'éviter une quelconque décantation ou un quelconque dépôt comme ce 30 serait le cas avec une suspension et toute variation consé-~ cutive de la dose administrée due à la décantation ou au dépôt.

Dans le procédé suivant la présente invention, l’action de formation et/ou de pulvérisation du mélange 35 conduit à la préparation d’une matière liposomiaue. Par / // * , · 6 conséquent, la demanderesse suppose que lorsque le me- ‘ Γ lange est formé, il se produit une émulsion comprenant des micelles lipidiques en suspension dans de l’eau, qui engendre ensuite des liposomes lors de la pulvérisation.

5 Au surplus, lorsqu’une matière active est présente, la matière liposomique comprend de la substance active sup-* portée ou véhiculée par un milieu aqueux, soit emprisonnée sous forme encapsulée, entre3es couches lipidiques, soit prise en sandwich entre des molécules de lipides. En fai-10 sant varier les conditions dans lesquelles les deux constituants sont mélangés et/ou pulvérisés, on peut faire varier le calibre des liposomes et les proportions relatives de matière active libre et incorporée entre de très larges limites, la limite supérieure allant jusqu’à une 15 incorporation d’environ 100 Ainsi, par exemple, en * formant et/ou pulvérisant le mélange d'aérosol sous divers degrés d’activité de mélange, par exemple, comme cela se ! .. produit dans des conditions turbulentes créées notamment dans une chambre de mélange et/ou les moyens d'alimenta-20 tion qui y sont associés et/ou dans un ajutage de pulvérisation, on peut former un spray, soit sous forme d’un spray possédant une proportion élevée de matière active “libre -donnant une action rapide avec une réserve de matière active à libération lente- soit sous forme d'un 25_spray possédant une faible proportion de matière active libre -donnant une action plus lente avec une libération , plus maîtrisée ou réglée et plus prolongée de la matière « active. Ainsi, dans le dernier cas, on peut produire une composition comprenant une matière active, dans laquelle 3° on permet à une proportion élevée de la matière d’âtre véhiculée sous une forme ’’protégée'' vers l’endroit souhaité de l’action et/ou d'agir autrement d'une manière à libération soutenue du principe actif.

Le procédé selon la présente invention est appli-35 cable à la préparation, sous une forme convenant à l'ad- / i 7 ministration immédiate, de compositions comprenant une large gamme de matières biologiquement actives et/ou de Γ matières intéressantes pour le traitement ou les soins du corps humain ou animal. De manière typique, on peut 5 mettre le procédé suivant l’invention en oeuvre en vue de la préparation de compositions comprenant des composés , thérapeutiquement actifs, y compris ceux utilisés pour les traitements appliqués en médecine vétérinaire, tout » aussi bien que des réactifs à activité biologique, des 10 matières actives du point de vue cosmétique, des composés possédant une valeur nutritive et d’autres substances employées pour traiter ou soigner le corps humain ou animal.

Les matières à activité cosmétique appropriées 15 comprennent des produits destinés aux soins de la peau et aux soins capillaires, par exemple des agents humectants, des agents tannants artificiels (éventuellement en Ç. association à des colorants), des agents qui s’opposent aux brûlures solaires^solubles dans l’eau, des antidia-20 phorétiques, des déodorants, des astringeants et des produits de rafraîchissement, de tonification, de cicatrisation, de kératolyse et de dépilation, des eaux par- _______fumées, des extraits de tissus animaux ou végétaux, des colorants capillaires solubles dans l’eau, des agents 25 antipellicules, des agents antiséborrhée , des agents .·.........oxydants, par exemple des agents de blanchiment et des agents réducteurs.

1 Les composés à activité thérapeutique que l’on peut mentionner comprennent les vitamines, les stéroïdes, les hor-30 mones, les peptides actifs, les enzymes, les vaccins, les agents * anti-inflammatoires, les antibiotiques et les bactéricides.

Cependant, le procédé suivant la présente invention est tout particulièrement applicable à l’administration de composés thérapeutiquement actifs utilisés en thérapie 35 par inhalation, comme des bronchodilatateurs et des λ composés anti-asthme, comme aussi des agents antitumoraux.

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De "tels composés, inclus dans ou avec le véhicule ou support liposomique, sont capables de pénétrer dans 1*arbre bronchique, permettant ainsi de modifier avantageusement l'efficacité du traitement thérapeutique. De manière » 5 similaire, pour le traitement de plaies cutanées ou d'autres traitements dermatologiques, ou pour un traite-* ment cosmétique, on peut utiliser le véhicule ou support liposomique en vue de produire (de manière bénéfique) un effet modifié, par exemple un effet de libération soute-10 nue, permettant ainsi de maintenir un niveau de traitement particulier pendant une plus longue période de temps.

Conformément à ce qui précède et à titre d'exemple uniquement, on peut mentionner les composés spécifiques et les modes d'administration qui suivent : 15

Composé actif . Classe de Mode d’adminis- __composé__tration_

Stanozolol Stéroïde anaboUque Topique

Hydrocortisone (et Stéroïde anti-in- Topique ses esters) flammatoire

Betaméthasone (et Stéroïde anti-in- Topique 20 Ses esters, e.g. son flammatoire valérate)

Bitoltérol (et ses Catécholamine bron- Inhalation esters e.g. son mé- chodilatateur " sylate)____ 25 Salbutamol Catécholamine bron- Inhalation chodilatateur

Théophylline Xanthène broncho- Inhalation dilatateur

Chromoglycate de Anti-asthme non Inhalation * 30 sodium stéroïdique n-Acétylmuramyl-1- Agent activant ma- Inhalation/ alanyl-d-isogluta- crophage (dipeptide intranasale mine (dipeptide ad- anti-tumoral) juvant) 55 Propranolol Agent B-bloqueur et Intravaginal contraceptif i I , 9

Bien entendu, il sera parfaitement compris des ~ spécialistes de la technique que l’on peut mettre en ^ oeuvre une très large gamme d’autres matières actives, i comme aussi d’autres modes d’administration. Par exemple, 5 des compositions produites par mise en oeuvre du procédé suivant la présente invention et contenant des matières * actives appropriées, pourraient être administrées directement, c'est-à-dire appliquées à l’oeil ou même ad- * ministrées par la voie intraveineuse.

10 Au surplus, on peut faire mention de matières à activité biologique qui peuvent également être thérapeutiquement actives, comme des vaccins, ou d'autres matières à activité biologique intéressante , comme des réactifs, tels que des antigènes et/ou des anticorps, par exemple 15 l'IgG anti-lapin. Les réactifs de cette nature peuvent être intéressants comme marqueurs, plus particulièrement pour tester des échantillons de sang, typiquement en présence ou en l'absence de maladies. La matière liposomique produite conformément à la présente invention peut être 20 une substance qui est chargée positivement ou négativement ou qui est neutre. La matière comprend une substance lipidique particulaire, existant en dispersion ou en sus-pension aqueuse et peut inclure une “ou plusieurs autres matières actives. Au surplus, la matière lipidique peut 25 se présenter sous la forme de bi-couches lipidiques uni-f lamellaires et/ou multilamellaires qui peuvent entraîner ou véhiculer en association avec elles, n’importe quelle autre matière active précitée.

La matière liposomique comprend, de manière typique, 30 un phospholipide et est, de préférence, un phospholipide qui est constitué par une phosphatidyl choline, par exemple la dipalmitoyl phosphatidyl choline, telle quelle ou sous la forme de lécithine; une phosphatidyl éthanol-amine; ou une phosphatidyl sérine. La matière liposomique 35 peut être formée à partir d'un phospholipide seul ou en- jj semble avec du cholestérol et/ou au moins un composé qui fl t 10 ί , est susceptible de conférer une charge à la matière liposomique. Ainsi, par exemple, une charge peut être C conférée à la matière liposomique en utilisant du dicétyl phosphate ou de l’acide phosphatidique, qui peut donner 5 une matière lipidique négativement chargée, ou de la stéarylamine qui peut donner une matière lipidique positi-' vement chargée.

L’utilisation des matières susmentionnées ainsi que leurs proportions, comme aussi le très large choix de 10 matières et les variations des proportions que l’on peut mettre en oeuvre, sont bien connus des spécialistes de la technique. Cependant, à titre d’exemple uniquement, selon une forme de réalisation préférée suivant la présente invention, le second constituant peut comprendre 15 un phospholipide constitué d'une phosphatidyl choline et de cholestérol, typiquement en des proportions molaires relatives d'environ 8 : à partir d'environ 1 à environ 2, par exemple environ 8,5 : 1.

Selon une autre forme de réalisation préférée sui-20 vant la présente invention, le second constituant peut comprendre un phospholipide constitué d'une phosphatidyl choline, de cholestérol et de dicéthyl phosphate, typiquement en-des proportions molaires relatives d'environ 8 : à partir d'environ 1 à environ 2 : à partir d'environ 25 1 a environ 0,05, par exemple environ 8,5:1 : à partir d'environ 0,7 à environ 0,07.

Selon une autre forme de réalisation préférée suivant la présente invention, le second constituant peut comprendre un phospholipide constitué d'une phos-30 phatidyl choline, de cholestérol et d'acide phosphati- dique, typiquement en des proportions molaires relatives d'environ 8 : à partir d’environ 1 à environ 2 : à partir d’environ 1 à environ 0,01, par exemple environ 8,5:1 : environ 0,1.

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Selon encore une autre forme de réalisation préfé-rée suivant la présente invention, le second constituant peut comprendre un phospholipide constitué d'une phospha-* ticfyl— choline , de cholestérol et de stéarylamine, 5 typiquement en des proportions molaires relatives d’environ 8 : à partir d'environ 1 à environ 2 : à partir d’environ à environ 0,05» par exemple environ 8,5 : 1 : à environ 0,06.

« · D'autre part, le second constituant peut aussi 10 comprendre, par exemple : un mélange d'une phosphatidyl choline, par exemple la lécithine et de l'acide phosphatidique, par exemple en un rapport d'environ 60 : à environ 1; ou un mélange d'une phosphatidyl choline, par exemple 15 la lécithine et de dicétyl phosphate, par exemple en un rapport d'environ 15 : à environ 1.

^ La matière liposomique aqueuse produite conformé ment à la présente invention doit, de préférence, posséder un pH dont la valeur se situe dans la gamme phy-20 siologique et, par conséquent, de préférence, dans la gamme d’environ 6,8 à environ 7»4, plus avantageusement d’environ 7 à environ 7»4. A cette fin, elle peut également contenir un tampon ou un système de tamponnement, en une quantité appropriée à l’établissement et au main-25 tien de la valeur souhaitée du pH et, à cette fin, convient parfaitement un tampon au phosphate qui peut comprendre, de manière typique, du phosphate dihydrogéné de sodium et ί du phosphate hydrogéné disodique. Au surplus, un tel tampon peut de préférence être inclus dans le premier ~ 50 constituant aqueux. Cependant, dans certaines circons tances, par exemple lorsque la matière active comprend un réactif, tel qu’un marqueur d'essai, le pH peut se situer en dehors des limites physiologiques.

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En fonction des ingrédients du second constituant, il peut être nécessaire ou préférable d’inclure un véhicule liquide physiologiquement acceptable, de préférence, un liquide dans lequel à la fois la matière lipidique et 5 n’importe quel autre matière active sont solubles. A ce point de vue, les véhicules liquides préférés sont des solvants organiques relativement volatils, par exemple * l'éhtanol, le chloroforme (sujet à des règles d'emploi 10 locales), l'éther et l’alcool isopropylique.

Au surplus, le premier constituant peut également comprendre un véhicule liquide physiologiquement acceptable, outre l’eau. Un tel véhicule peut être un solvant organique, de préférence^ un solvant organique miscible à 15 l'eau, volatil, dont l’éthanol constitue un exemple préféré.

Selon une forme de réalisation préférée de l’inven-/ tion, on mélange les premier et second constituants sous 5 pression par l'emploi d’un ou plusieurs propulseurs pour aérosols, qui peuvent être un ingrédient de l'un ou de 20 deux constituants et/ou être fournis séparément. De préférence cependant, un propulseur est un ingrédient du second constituant et la pression est appliquée au pre-inier constituant par l'intermédiaire d’un propulseur qui en est maintenu séparé.

25 De manière typique, le propulseur ou chaque pro pulseur peut être constitué d’un hydrocarbure ou un hydrocarbure halogéné ou un mélange de tels hydrocarbures, i A titre d'exemples de propulseurs de ce genre, on peut citer le propane, le butane, l'éther diméthylique et le 30 propulseur 11 ( dichlorofluorométhane ), bien que le di-chlorodifluorométhane ou le dichlorotétrafluoréthane ou leurs mélanges soient préférés. Le propulseur peut 01 Û if . /v/f I t

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I 0 être un composé considéré comme étant un propulseur à basse pression, développant des pressions allant jusqu’à environ 1,72 à environ 2,07 bars, comme un mélange 20 : 80 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluor-5 éthane, ou bien le propulseur peut être un propulseur à pression relativement élevée, développant des pressions allant jusqu’à environ 4,83 bars, comme un mélange 80 : 20 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluoro-méthane. Il faut bien évidemment comprendre que les taux 10 de dosage relatifs^comme entre les constituantSj peuvent être réglés et être ameéns à varier, entre autres, en fonction de la pression de propulseur utilisée pour chaque constituant.

15 Dans le procédé conforme à la présente invention, il est préférable que les premier et second constituants soient chacun amenés isolément par rapport à l’autre, que chacun des constituants soit amené en doses distinctes réglées dans une chambre de mélange sous leur 20 propre pression de propulseur et que le mélange ainsi engendré soit débité à partir de la chambre de mélange à travers un orifice sous la pression provenant d’au moins l’un des propulseurs précités. De préférence éga-__ lement, le premier et le second constituants sont mélangés 25 en manière telle que l’on débite une dose mesurée de n’importe quelle matière active précitée. î Plus avantageusement encore, le second constituant est amené sous forme de dose mesurée à une dose mesurée du premier, constituant et est, de préférence, adg en 30 contact avec au moins la plus grosse part du premier constituant en de multiples endroits dans ladite dose mesurée, ainsi, plus spécialement, le procédé selon l'invention se caractérise des plus avantageusement par la suite des étapes opératoires qui suivent, à savoir; r · 14 le premier constituant est amené dans une chambre de mélange en une quantité dosée; une quantité dosée du second constituant est amenée * dans la chambre de mélange de manière à engendrer un mé-5 lange turbulent de deux constituants, de préférence en , amenant le second constituant dans la chambre de mélange en une multiplicité d’endroits; et le mélange est déchargé de la chambre de mélange. Commodément, la quantité dosée du premier consti-10 tuant est réglée en amenant le premier constituant dans la chambre de mélange en une quantité telle qu’elle remplisse la chambre et en choisissant le volume de la chambre de façon à obtenir la quantité dosée souhaitée du premier constituant.

15 La présente invention concerne également un embal lage à utiliser pour la préparation d’un aérosol liposo-^ inique, lequel emballage comprend au moins une première et une second chambres, une chambre contenant un premier constituant comprenant de l’eau, qui peut être une ma-20 tière aqueuse tamponnée et l'autre chambre contenant un second constituant comprenant une matière lipidique, l'un des-constituants incluant facultativement, de préférence en suspension ou en solution dans ce constituant, ~une matière active précitée, par exemple, pour l’utili- 25 sation en vue du traitement ou des soins du corps humain ou animal et l’une des ou les deux chambres, et/ou un troisième chambre, comprenant une matière servant de propul- it seur, l’emballage étant pourvu d'un agencement pour débiter; sous la forme d'un spray, un mélange des premiers 30 et second constituants débités depuis leurs chambres respectives, sous l'effet de la pression développée par. la ou les matières servant de propulseurs.

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De préférence, l'agencement distributeur ou de débit est tel que le rapport de mélange des constituants soit réglé (c'est-à-dire amené à un niveau mesuré ou dans une étroite plage mesurée de rapports), si bien que 5 la dose mesurée souhaitée de n'importe quelle matière active précitée puisse être débitée.

Une fois encore, il est préférable que la matière active soit en suspension ou en solution dans le second constituant comprenant une matière lipidique et, plus 10 avantageusement, le composé actif doit être en solution, afin d'éviter une décantation ou un dépôt. En général, la matière active, le premier et le second constituant et le propulseur sont tels que décrits plus haut à.propos du procédé suivant l’invention.

15 De préférence, l'emballage conforme à la présente invention comprend un orifice de décharge et une chambre de mélange et un dispositif à soupape pour permettre aux premier et second constituants précités d'être débités depuis leurs chambres respectives sous l'effet de la pres-20 sion développée par un ou plusieurs propulseurs dans la chambre de mélange et de régler2e rapport des constituants (c'est-à-dire τι un niveau mesuré ou dans une étroite plage mesurée de rapports), de façon que la dose mesurée souhaitée de mélange, c'est-à-dire la matière active plus £5 ïè véhicule ou support liposomique ou le liposome per se, puisse être débitée à travers l'orifice de décharge.

^ De préférence, ledit dispositif à soupape comprend un agencement (à savoir deux valves ou soupapes) qui permettent, en série, de débiter le premier constituant dans 30 la chambre de mélange de façon à remplir la chambre, de débiter une dose mesurée du second constituant dans la chambre de mélange, de manière à engendrer un mélange turbulent des deux constituants et de décharger le mélange /! à travers l'orifice de décharge. De préférence également, fil 35 le dispositif à soupape comprend un agencement pour per- * * -¾ 16 ’ « mettre de débiter le second constituant dans la chambre de mélange à plusieurs endroits dans la chambre.

Si on le souhaite, des moyens de mélange supplémentaires peuvent également être prévus, que ce soit en 5 amont ou en aval de la chambre de mélange, pour créer des conditions de mélange intime et/ou turbulent supplémentaires, de façon à promouvoir la formation liposomique préalablement à la décharge à travers 1*orifice de décharge. Ainsi, par exemple, l'agencement de l'ori-"ÎO fice de décharge peut, lui-même, comprendre une chambre de mélange secondaire dans laquelle on amène le mélange de façon à créer des conditions de turbulence , par exemple, en l'introduisant tangentiellement dans la chambre par l’intermédiaire d'une ou plusieurs entées avant la > 'décharge.' 15 Dans l'emballage suivant la présente invention, la première chambre peut être un premier sac ou boîte pour aérosol, la seconde chambre peut être un second sac ou boîte pour aérosol et les boîtes ou autres premières et secondes chambres fermées peuvent être agencées : 20 bout à bout avec dispositif à soupape respectif et la chambre de mélange disposés, entre ou au-dessus des boîtes ou autres chambres; côte à côte avec le dispositif à soupape respectif £ula_chambre ch mélange disposés entre ou au-dessus des 25 boîtes ou autres chambres; ou la première dans la seconde (ou vice-versa) avec le dispositif à soupape et la chambre de mélange disposés dans ou au-dessus de la boîte ou autre chambre externe. Des récipients pour aérosols utilisant ce type 30 d’agencement sont décrits par exemple, dans les mémoires descriptifs des brevets des E.U.A. N® 3 325 056 et 3 326 416.

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Dans l’emballage suivant la présente invention, peut être prévu un boîtier externe, par exemple une boîte ÎSi en fer blanc, dans lequel les chambres fermées peuvent * être disposées et à travers lequel le dispositif à soupape 5 peut être mis en fonctionnement. Dans un tel emballage, il est préférable que le second constituant inclue un propulseur et soit disposé dans une chambre fermée interne à parois rigides, le second constituant soit disposé dans une chambre fermée externe à parois souples, 10 enveloppant de préférence la chambre interne, le boîtier soit un boîtier à parois rigides et l’espace entre la chambre fermée externe et le boîtier enveloppant inclue un propulseur. Un agencement particulièrement préféré d’un emballage à deux constituants pour parvenir à ces 15 caractéristiques est celui décrit dans la demande de brevet européen N° 84-10-4589.1 »basée sur la demande de c brevet suisse 4450/83, déposée le 16 août 1983. Cependant, si on le souhaite, l’agencement de la chambre interne peut être le même que l’agencement de la chambre externe, 20 c'est-à-dire un agencement conformément auquel la chambre interne est réalisée sous forme de chambre à parois souples, entourée d’une chambre à parois rigides contenant un propulseur.

__Ainsi qu’on le comprendra parfaitement à la lecture 25 de la description qui suit, lors de la mise en pratique de la présente invention, la dose de la matière active ; débitée au cours de chaque fonctionnement de l’emballage / » » 18 peut être amenée à varier fortement en fonction de toute une série de facteurs, parmi lesquels on peut plus particulièrement citer : 1. la concentration de la matière active dans 5 le premier et/ou le second constituants; et 2. le rapport de mélange des premier et second constituants.

Dans le cas du rapport de mélange des constituants, celui-ci dépend de l’ampleur des quantités dosées du pre-10 mier et du second constituants débités pour le mélange, qui dépendra son tornades dispositifs de mélange et/ou à soupape particuliers mis en oeuvre. Dans 3e cas particuiier cfe l'agencement spécialement préféré mentionné plus haut, la chambre de mélange possède, de préférence, un volume ^ d'environ 50 à environ 100, par exemple 75 à 100, microlitres et la soupape qui règle la dose du second constituant en débite, de préférence, d'environ 50 à environ 100 microlitres dans la chambre de mélange par mise en fonctionnement. Dans le cas du calibre des liposomest \ 20 ia demanderesse suppose que celui-ci est réglé principa- | lement par la pression engendrée par le propulseur ou

Tes'propulseurs et/oü par la viscosité des constituants.

De manière générale, plus les constituants sont vigoureusement mélangés, plus faible sera le calibre des 25 liposomes. Le calibre de l'orifice de décharge ou de distribution cfe 3a soupape que l'on utilise pour débiter I i 3es constituants mélangés peut également affecter 3e calibre des liposomes produits et, de préférence , un tel orifice de décharge possède un calibre d'environ 30 350 à environ 450 microns.

i i ft f\ .

t t v 19 D’autre part, une fois que les paramètres susmentionnés ont été fixés, on peut aisément assurer la proportion de -s- dosage qui en résulte, tout comme on peut déterminer le degré d’incorporation de n’importe quelle matière active, 5 ainsi que le calibre des liposomes produits.

Ainsi que les personnes familières avec la mise en composition de matières actives avec des substances • servant de supports ou de véhicules le comprendront parfaitement, conformément à la présente invention, la 10 proportion d’incorporation de la matière active dans le véhicule ou support liposomique peut avoir un effet prononcé sur le niveau de la dose de base choisi pour la composition globale. Par conséquent, un tel niveau de dose de base sera une question de choix de composi-15 tion ou de formulation dépendant des critères envisagés auxquels une quelconque composition doit répondre.

* La présente invention concerne, au surplus, une matière liposomique ou une composition liposomique, lorsqu'elle est préparée sous la forme d’un spray, par 20 mise en oeuvre d'un procédé tel que décrit dans le présent mémoire ou par l'utilisation d’un emballage tel que •-décrit dans le présent mémoire.

Les exemples qui suivent illustrent le procédé et l'emballage pour aérosols suivant la présente invention.

’ Dans les exemples spécifiques donnés, la plupart des compositions comprennent du molybdate d'ammonium àti- * tre (h matière dense sur 3e plan ces électrons, qji fut simplement incorporé à titre ch marqueur pour faciliter 3a détection des liposomes et 3a mesure ch leur diamètre en utilisant 30 un microscope électronique. Les personnes familières avec les compositions pharmaceutiques comprendront bien évidemment que le molybdate d'ammonium qui est modérément toxique, ne peut faire partie d'une composition de mise en oeuvre réelle destinée à être administrée à un / p jf 35 patient. Ainsi que le permet d’établir une comparaison, // par exemple de l’exemple 19 et de l'exemple 20 qui sui- 20 vent, l’omission du molybdate d’ammonium n’a pas d'effet nuisible sur le taux d’incorporation d'ingrédient actif et, en fait, le taux d’incorporation est même légèrement supérieur dans l'exemple 20. Par conséquent, dans n'im-5 porte lesquelles des compositions illustrées dans les exemples, le marqueur au molybdate peut être omis sans effet préjudiciable et les résultats indiqués peuvent . être obtenus en son absence.

De même, bien que diverses proportions d'ingrédients 10 actifs soient indiquées dans les exemples et bien que celles-ci, à leur tour, donnent diverses proportions d’ingrédients actifs libres et incorporés par fonctionnement, ici encore, le spécialiste de ce genre de compositions comprendra facilement que la proportion de la dose et la 15 nature de la composition choisies pour n'importe quel ^ emballage de mise en oeuvre particulier dépendront du régime de dosage particulier auquel on souhaite parvenir, comme aussi de n'importe quel équilibre nécessaire ou souhaité entre une matière active non incorporée et incor-20 porée.

Par exemple, en présumant qu’une personne moyenne applique en.moyenne une composition de crème sur sa peau à la dose de 2,2 mg/cm et, dans la supposition qu’un fonctionnement unique de l'aérosol ou " coup’' »-'25 couvre 25 cm— de peau, on peut établir la comparaison suivante entre les compositions illustrées et standard :

Composition Dose appliquée (microgrammes/ __ cm2) _ 30 Crème de stanozolol (0,1 9») 2,3 Aérosol de stanozolol l'exemple 21 4,0

Crème d’hydrocortisone (1,0 %) Z3 Aérosol d’hydrocortisone cfe l'exemple 25 4,8

Crème de bêtaméthasone (0,1 %) 2,5 /7 35 Aérosol de bêtaméthasone de l’exemple 27 0,64

II

r» λ d- i

Ainsi, la matière active peut être débitée en une dose globale supérieure ou inférieure (ou même à) la dose c standard connue, de façon à obtenir toute variation sou haitée de l’effet, cette variété de l’effet étant augmen-5 tée par le degré d’incorporation choisi. De manière similaire, dans le cas de compositions destinées à l’inhalation, la dose globale peut varier en fonction de l’effet , recherché. Ainsi, par exemple, ainsi que l’exemple 31 l'illustre, le salbutamol peut être débité par mise en ^ action, effectivement sous forme de 125 microgrammes de matière à libération lente et de 125 micro gramme s de matière libre que l'on peut comparer aux 100 microgrammes par mise en action à partir d'un distributeur standard.

Au surplus, ainsi que les exemples 29 et 30 l'illustrent ^ respectivement, la matière active peut être administrée en des doses bien supérieures ou bien inférieures par mise en action que dans le cas du distributeur standard -3r' -c’est-à-dire 933 microgrammes vis-à-vis de 200 micro-grammes (standard) dans le cas du bitoltérol de l’exemple 20 29 et 200 microgrammes vis-à-vis de 2 mg (standard) dans le cas du chromoglycate de sodium de l'exemple 30- bien que, dans les deux cas, la dose puisse être ajustée à la dose standard, en modifiant la quantité globale de matière active supportée ou véhiculée par le second ou le 25 premier constituant respectivement.

EXEMPLE 1

On a dissous 240 mg de lécithine d’oeuf et 28 mg de cholestérol dans 4 ml d'éthanol et on a ajouté la solution ainsi obtenue à 25 g d’un mélange 20 : 80 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluor-éthane servant de propulseur. On a ensuite enfermé hermétiquement le mélange dans un premier récipient muni d'une soupape. On a introduit 25 ml d’une solution /p5 aqueuse de phosphate de sodium 3,3 mM, pH 7,2, dans un y sac en aluminium qui fut ensuite hermétiquement enfermé 22 dans un récipient séparé équipé d’une soupape et contenant 25 g du propulseur précité. On a raccordé les " récipients par l’intermédiaire d'une chambre de mélange et chaque mise en action du mécanisme à soupape libéra 5 une faction aliquote de la solution lipidique et une fraction aliquote de la solution de phosphate dans la chambre de mélange et ensuite dans l'atmosphère interne en passant par un étroit orifice. L'aérosol ainsi obtenu . contenait des liposomes multilamellaires et unilamellaires 10 possédant un diamètre moyen de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 2

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 1, si ce n'est que le premier récipient muni d'une soupape contenait un mélange de 240 mg de lécithine d'oeuf, de 15 28 mg de cholestérol et de 4 mg d'acide phosphatidique dissous dans 4 ml d’éthanol, en même temps que 25 g d'un ^ mélange 40 : 60 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluorométhane servant de propulseur.

On a pu utiliser l'agencement ainsi obtenu pour 20 produire un aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires chargés négativement avec un diamètre moyen de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 5 ____ _____ ______On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 25 1, à l'exception que le premier récipient muni d'une sou- - pape contenait un mélange de 240 mg de lécithine d'oeuf, de 28 mg de cholestérol et de 1,6 g de stéré-J lamine en solution dans 4 ml d'éthanol, en même temps : que 25 g d'un mélange 20 : 80 p/p de dichlorodifluoro- 30 méthane et de dichlorotétrafluoréthane servant de propulseur.

L'agencement ainsi obtenu put être utilisé pour produire un aérosol qui contenait des liposomes uni-. / lamellaires et multilamellaires chargés positivement hf 35 avec un diamètre moyen de 40 nm à 1000 nm.

λ y

V

23 EXEMPLE 4 _ On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 1, V· si ce n’est que le premier récipient muni d’une soupape contenait un mélange de 240 mg de lécithine d'oeuf et de 5 4 mg d'acide phosphatidique en solution dans 4 ml d’étha nol, en même temps que 25 g d’un mélange 20 : 80 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluoréthane * servant d’agent propulseur.

L’agencement ainsi obtenu put être utilisé pour 10 produire un aérosol qui contenait des liposomes unilamel-1aires et multilamellaires chargés négativement avec un diamètre moyen de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 5

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 1, 15 à l’exception que le premier récipient équipé d’une sou-i pape contenait un mélange de 24 mg de dipalmitoylphos- phatidyl choline, de 2,8 mg de cholestérol, de 2 mg de dicétylphosphate et de 2 mg de bitoltérolmésylate en solution dans 4 ml d’éthanol, en même temps que 25g d’un 20 mélange 40 : 60 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluoréthane. servant de propulseur.

L’agencement ainsi obtenu put être utilisé pour produire un aérosol qui contenait des liposomes unilamel-— - laire-s-et multilamellaires chargés négativement avec un 25 diamètre moyen de 40 nm à 1000 nm. Au surplus, plus de 50 % du bitoltérolmésylate furent incorporés aux lipo- * somes.

. 1 EXEMPLE 6

On a répété le procédé décrit à 1’exemple 1, si ce 30 n’est que le premier récipient équipé d’une soupape contenait un mélange de 240 mg de lécithine d’oeuf, de 28 mg de cholestérol, de 2 mg de dicétylphosphate et * « ' 24 - de 20 mg de bitoltérolmésylate en solution dans 4 ml i d'éthanol, en même temps que 25 g d'un mélange 40 : 60 ;r p/p de dichlorodifluorométhane et de dichlorotétrafluor- éthane servant d'agent propulseur.

5 L'agencement ainsi obtenu put être utilisé pour produire un aérosol qui contenait des liposomes uni-lamellaires et multilamellaires possédant un diamètre de « 40 nm à 1000 nm. En outre, plus de 50 % de bitoltérol mésylate furent incorporés aux liposomes.

1° EXEMPLE 7

On a dissous 50 mg de lécithine d’oeuf dans de l'alcool éthylique (96 % BP) (BP = pharmacopée britannique) et on a amené le volume à 1 ,0 ml à 1 * aide d'alcool éthylique de façon à obtenir un constituant lipidique.

" 15 On a transféré la solution ainsi obtenue dans un réci pient en verre et on y a ensuite ajouté 7,0 g de dichlorodifluorométhane. On a alors hermétiquement fermé le récipient en verre avec une soupape mesurant des doses de 65 microlitres, associée à une chambre de mélange de 20 75 microlitres, agencée pour recevoir le constituant lipidique déchargé à travers la soupape doseuse et faisant elle-même partie d'un second système à soupape.

On a placé l'ensemble ainsi formé dans un second récipient souple (un sac tubulaire) contenant 40 ml 25 d'une solution de molybdate d’ammonium (0,5 % p/v dans de l'eau désionisée) de façon à obtenir un'constituant - aqueux, ce constituant étant en communication avec la chambre de mélange, la seconde soupape se trouvant dans sa position fermée. On a ensuite serti le second réci-30 pient dans une boite contenant 2,0 g de dichlorodifluoro-méthane servant de propulseur, en manière telle que le second système à soupape, associé au sac et à la chambre /

U

25 ' I * de mélange, pût, lorsqu’il fut lui-même mis en action, - également faire fonctionner la première soupape en vue de décharger le constituant lipidique dans la chambre de mélange et a ainsi obtenir une décharge des cons-5 tituants mélangés à partir de l’ensemble à boîte d’aérosol global, par exemple de la manière décrite dans la demande de brevet suisse susmentionnée N° 4450/83.

I ' On a ensuite équipé le second système à soupape d'un i bouton d’actionnement standard avec un orifice de 450 10 microns.

L'ensemble à boîte d'aérosol ainsi obtenu put être utilisé pour produire un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilaméllaires et multilamellaires avec des diamètres de 40 nm à 400 nm.

c 15 EXEMPLE 8

On a répété le procédé décrit à l'exemple 7,si ce n'est que le récipient de verre fut équipé d'une soupape débitant des doses de 50 microlitres, associée à une chambre de mélange de 100 microlitres. L'ensemble 20 à boîte d'aérosol ainsi obtenu put être utilisé pour produire -un-spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires ayant des diamètres de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 9 '· 25 On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 7, " sauf que l'on a équipé le récipient en verre d'une valve débitant des doses de 100 microlitres, associée à une ; chambre de mélange de 100 microlitres. L'ensemble à boîte d'aérosol ainsi obtenu put être utilisé pour pro-30 duire un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires avec des diamètres fde 50 nm à 1000 nm.

fi / 26 EXEMPLE 10 - On a dissous 60,0 mg de lécithine d’oeuf et 7>0 mg de cholestérol dans 1,0 ml d’alcool éthylique (96 % BP). On a transféré la solution ainsi obtenue dans un réci-5 pient en verre et on y a ajouté 6,0 g d’un mélange 20 : 80 p/p de dichlorodifluorométhane et de dichloro-tétrafluoréthane. On a ensuite hermétiquement fermé le récipient en verre avec une soupape débitant des doses de 50 microlitres, associée à une chambre de mélange de 10 100 microlitres, de la manière décrite à l’exemple 7.

On a placé l’ensemble ainsi formé dans un second récipient souple contenant 40 ml d’une solution aqueuse de phosphate de sodium 3,3 mM, possédant un pH de 7,0.

Ici encore, comme à l’exemple 7, on a ensuite serti le 15 second récipient dans une boîte pour aérosol, contenant c 2,0 g de dichlorodifluorométhane servant de propulseur, en manière telle que le second système à soupape pût - assurer la décharge à partir de l'ensemble à boîte pour aérosol global. On a équipé le second système à soupape 20 d'un bouton d'actionnement standard avec un orifice de 450 microns.

L'ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenuimt être utilisé pour engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires 25 avec des diamètres de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLES 11 à 15

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 10, en utilisant dans le récipient de verre, une solution des ingrédients qui suivent, dissous dans 1,0 ml d'-.alcool 30 éthylique (96 % BP), à savoir : * « 27

Exemples n° , 11. 60,0 mg de lécithine d’oeuf, 1,0 mg d’acide phosphatidique et 7,0 mg de cholestérol.

12. 60,0 mg de lécithine d’oeuf, 0,4 mg de stéaryl-5 amine et 7,0 mg de cholestérol.

13. 60,0 mg de lécithine d’oeuf et 1,0 mg d’acide phosphatidique.

14. 0,5 mg de hitoltérolmésylate, 6,0 mg de palmitoyl phosphatidyl choline, 0,5 mg de dicétylphosphate et 0,7 mg 10 de cholestérol.

15. 5,0 mg de hitoltérolmésylate, 60,0 mg de lécithine d’oeuf, 0,5 mg de dicétylphosphate et 7,0 mg de cholestérol.

On a pu utiliser l’ensemble à boîte pour aérosol 15 ainsi obtenu dans chacun des exemples 11 à 15 en vue de - produire un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires avec des diamètres de 40 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 16 20 On a dissous 100 mg de lécithine d'oeuf et 6,0 mg de stanozolol dans de l'alcool éthylique (96 % BP) et on a amené le volume à 2,0 ml à l'aide d'alcool éthylique. On a transféré la solution ainsi obtenue dans un récipient en .........* ' verre et on y a ajouté 9,0 g de dichlorodifluorométhane.

25- On a ensuite hermétiquement fermé le récipient en verre * avec une soupape débitant des doses de 50 microlitres, associée à une chambre de mélange de 100 microlitres, - comme décrit à l'exemple 7.

On a placé l’ensemble ainsi formé dans un second 30 récipient souple, contenant 40 ml d'une solution de molybdate d'ammonium (0,5 % p/p dans de l'eau désionisée).

28

On a à nouveau, comme décrit à 1*exemple 7» serti le " second récipient dans une boîte pour aérosol contenant 2,0 g de dichlorodifluorométhane servant de propulseur, en manière telle que le second système à soupape pût 5 assurer la décharge depuis l’ensemble à boite pour aérosol global. On a ensuite équipé le second système à soupape d’un bouton d’actionnement standard avec un orifice de 450 microns.

On put utiliser l’ensemble a boîte pour aérosol 10 ainsi obtenu pour produire un spray d’aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires avec des diamètres de 40 nm à 110 nm. Des 50,0 microgrammes de stanozolol libérés à chaque mise en action du second système à soupape, une quantité de 21,6 micro-15 grammes se révéla être associée aux liposomes.

V' : EXEMPLE 17

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 16, sauf que la solution introduite dans le récipient en verre était constituée de 450 mg de lécithine d’oeuf et de 160 mg 20 de stanozolol en solution dans de l’alcool éthylique (96 % BP), le volume ayant été complété jusqu’à 3,0 ml par de l’alcool éthylique, que l’on a ajouté 4,5 g de dichlorodifluorométhane au récipient et que le bouton d’actionnement avait-ua-orifice de 360 microns. - 25 L’ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu put être utilisé pour engendrer un spray d’aérosol qui conte-* naît des liposomes unilamellaires et multilamellaires avec des diamètres de 44 nm à 440 nm. Des 500,0 micro-grammes de stanozolol libérés à chaque fonctionnement du 30 second système à soupape, une quantité de 35,4 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

kl I , 25 EXEMPLE 18 * r On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 17, à l’exception que la soupape doseuse était une soupape débitant des doses de 100 microlitres et que le 5 bouton d'actionnement avait un orifice de 450 microns.

On put utiliser l’ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu pour engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires avec des diamètres de 25 nm à 190 nm. Des 1000,0 micro-10 grammes de stanozolol libérés à chaque fonctionnement du second système à soupape, une quantité de 170,5 micro-grammes se révéla être associée aux liposomes.

EXEMPLE 19

On a répété le procédé décrit à l'exemple 16, sauf ς 15 que la solution introduite dans le récipient de verre I était formée de 90 mg de lécithine d'oeuf et de 60 mg de , stanozolol dissous dans de l'alcool éthylique (96 c/o BP), le volume étant complété jusqu’à 3,0 ml avec de l'alcool éthylique et que l'on ajouta 4,5 g de dichlorodifluoro-20 méthane au récipient.

...... On put utiliser l'ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu en vue d’engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-" ' itaires avec des diamètres de 40 nm à 350 nm. Des 500,0 —- 25 microgrammes de stanozolol libérés à chaque fonctionne ment du second système à soupape, une quantité de 81,3 * microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

v EXEMPLE 20

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 30 19, sauf que le second récipient ne contenait que 40 ml d'eau désionisée.

Des 500 microgrammes de stanozolol libérés à f chaque fonctionnement du second système à soupape, une

N

30 4 r quantité de 85,0 microgrammes se révéla être associée * aux liposomes.

EXEMPLE 21

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 5 20, sauf que la solution introduite dans le récipient en verre contenait 12 mg de stanozolol.

On put utiliser l'ensemble de boites pour aérosol ainsi obtenu en vue d'engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-10 laires avec des diamètres de 40 nm à 350 nm. Des 100 microgrammes de stanozolol libérés à chaque fonctionnement du second système à soupape, une quantité de 76,8 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

V EXEMPLE 22 I 15 On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 21, sauf que le second récipient contenait 40 ml d'une solution d'alcool éthylique (1 % v/v) dans de l'eau désionisée.

On put utiliser l'ensemble à boîte pour aérosol 20_________ „ainsi obtenu en vue d'engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-laires avec des diamètres de 30 nm à 500 nm. Des 100 , -------—microgrammes de stanozolol libérés à chaque fonction nement du second système à soupape, une quantité de 25 77,3 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

' exemple; 23 >- On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 21, sauf que le second récipient contenait 40 ml d’une solution d'alcool éthylique (5 /° v/v) dans de l'eau 30 désionisée.

/ 31

On put utiliser l’ensemble à boite pour aérosol - ainsi obtenu en vue de produire un spray d’aérosol qui \ contenait des liposomes unilamellaires et multilamel- 1aires avec des diamètres de 30 nm à 500 nm. Des 100 5 microgrammes de stanozolol livrés à chaque fonctionne ment du système à soupape, une quantité de 76,3 micro-grammes se révéla être associée aux liposomes.

EXEMPLE 24

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 10 21, sauf que le second récipient contenait 40 ml d'une solution d’alcool éthylique (10 % v/v dans de l'eau désionisée).

i On put utiliser l'ensemble à boite pour aérosol ainsi obtenu en vue d’engendrer un spray d’aérosol qui 15 contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-laires avec des diamètres de 30 nm à 50 nm. Des 100 microgrammes de stanozolol libérés à chaque fonctionnement du système, une quantité de 66,6 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

20 EXEMPLE 25

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 17» sauf que la solution introduite dans le récipient de verre était constituée de 900 mg de lécithine d'oeuf et de 14,4 mg d’hydrocortisone BP en solution dans de 25 l'alcool éthylique (96 % BP), le volume étant complété jusqu'à 3,0 ml avec de l'alcool éthylique.

7 L'ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu put être utilisé pour produire un spray d'aérosol qui conte-naît des liposomes unilamellaires et multilamellaires 30 avec des diamètres de 44 nm à 220 nm. Des 120 microgrammes de 1'hydrocortisone BP libérés à chaque fonctionnement du second système à soupape, une quantité a U1 t* : 32 de 54,0 microgrammes se révéla être associée aux liposomes. EXEMPLE 26

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 16, sauf que la solution introduite dans le récipient 5 de verre était constituée de 841 mg de lécithine d’oeuf, de 54,8 mg de dicétylphosphate et de 14,4 mg d’hydrocortisone BP en solution dans de l’alcool éthylique (96 % BP), le volume étant complété jusqu’à raison de 3,0 ml avec de l’alcool éthylique et que l’on ajouta 4,5 g de 10 dichlorodifluorométhane au récipient.

Des 120.microgrammes d’hydrocortisone BP libérés à chaque fonctionnement du second système à soupape, une quantité de 45>6 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

15 On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 26, sauf que la solution introduite dans le récipient en verre était constituée de 841 mg de lécithine d’oeuf et de 4,8 mg de bêtaméthasone valérate BP/USP/NF (USP = pharmacopée des Etats-Unis d’Amérique, NF = nouveau formulaire) 20 en solution dans de l'alcool éthylique (96 % BP), le volume étant amené à 3,0 ml avec de l'alcool éthylique.

On put utiliser l'ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu en vue d'engendrer un spray d'aérosol qui contenait des_liposomes unilamellaires et multilamellaires avec 25 des diamètres de 20 nm à 300 nm. En outre, 16 microgrammes de bêtaméthasone valérate furent libérés à .chaque fonctionnement du second système à soupape, EXEMPLE 28

On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 30 27, sauf que l'on a omis la bêtaméthasone de la solution introduite dans le récipient en verre.

On put utiliser l’ensemble à boîte pour aérosol /r ainsi obtenu en vue d’engendrer un spray d'aérosol qui * » 33 contenait des liposomes unilemellaires et multilamel-laires avec des diamètres de 30 nm à 1000 nm.

EXEMPLE 29

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 5 26, sauf que la solution introduite dans le récipient en verre était constituée de 141 mg de lécithine d'oeuf et de 112 mg de bitoltérolmésylate en solution dans de l’alcool éthylique (96 % BP), le volume étant amené à 3,0 ml avec de l’alcool éthylique.

10 On put utiliser l’ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu en vue de produire un spray d’aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-laires avec des diamètres de 25 nm à 250 nm. Des 933 microgrammes de bitoltérolmésylate libérés à chaque 15 fonctionnement du second système à soupape, une quantité de 545 microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

EXEMPLE 30

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 28, à l'exception que le second récipient contenait 20 40 ml d'une solution de chromoglycate de sodium USP XX, BP '80 (2 mg/ml) et du molybdate d'ammonium (5 mg/ml) dans un tampon au phosphate de sodium -0,1 M à un pH de - -----?,4.

On put utiliser l'ensemble à boîte pour aérosol 25 ainsi obtenu en vue d'engendrer un spray d'aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires ~~ avec des diamètres de 35 nm à 700 nm. Des 200 microgram- r mes de chromoglycate de sodium libérés à chaque fonction nement du système, une quantité de 22 microgrammes se 30 révéla être associée aux liposomes.

/ 34 « I h * EXEMPLE 51

On a répété le procédé décrit à l’exemple 18, ^ sauf que les 60 mg de stanozolol furent remplacés par % 15 mg de salbutamol base BP.

5 On put utiliser l’ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu en vue de produire un spray d’aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamel-laires avec des diamètres de 30 nm à 300 nm. Des 250 microgrammes de salbutamol libérés à chaque fonctionne-10 ment du second système à soupape, une quantité de 125 t microgrammes se révéla être associée aux liposomes.

EXEMPLE 32

On a répété le mode opératoire décrit à l’exemple 28, sauf que le second récipient contenait 10 ml d'une 15 solution de N-acétylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine /NALAG_7 (100 microgrammes/ml) et du molybdate d'am-* monium (5 mg/ml) dans de l'eau désionisée.

On put utiliser l'ensemble à boîte pour aérosol ainsi obtenu en vue d’engendrer un spray d'aérosol qui 20 contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires. En outre, 10 microgrammes de NALA.G furent libérés à chaque fonctionnement du second système à soupape.

EXEMPLE 53

On a dissous 841 mg de lécithine d'oeuf dans de 25 l’alcool éthylique (96 % BP) et on amené le volume à 3,0 ml avec de l'alcool éthylique. On a transféré la solution ainsi obtenue dans un récipient en verre et on y a ensuite ajouté 4,5 g de 4-dichlorodifluorométhane.

4 On a ensuite hermétiquement fermé le récipient en verre 30 avec une soupape débitant des doses de 50 microlitres, associée à une chambre de mélange de 100 microlitres, comme décrit à l'exemple 7.

35

On a introduit l'ensemble ainsi formé dans un second * récipient souple contenant 35 ml d'une dilution (50 micro litre s/m3) d'IgG anti-lapin (titre 1/64 -vis-à-vis de sérum de lapin normal 1/64(^omme déterminé par titrage à 3a précipi-5 tine sur bloc de gélose) et du molybdate d’ammonium * (5 mg/ml) dans de l'eau désionisée. Ici encore, comme décrit à l’exemple 7» on a ensuite serti le second récipient dans une boîte contenant 2,0 g de dichlorodi-fluorométhane servant de propulseur en manière telle 10 qu'un second système à soupape pût assurer la décharge à partir de l'ensemble à boîte pour aérosol global. On a ensuite équipé le second système à soupape d’un bouton d'actionnement standard avec un orifice de 450 microns.

On put utiliser l'ensemble à boite pour aérosol 15 ainsi obtenu pour engendrer un spray d’aérosol qui contenait des liposomes unilamellaires et multilamellaires.

tel·- 5 microlitres d’IgG anti-lapin (titre 1/64) furent libérer à chaque fonctionnement du second système à soupape.

Il faut bien comprendre que l'invention ne se limite 20 nullement aux détails décrits dans les exemples spécifiques susmentionnés. Ainsi, par exemple, toute une série d'autres matières lipidiques peut être utilisée pour former la matière liposomique et on peut véhiculer ou supporter à l'aide de cette dernière une très large 25 gamme de substances—actives. De même, on peut utiliser un grand nombre d’autres agencements d'aérosols, plus particulièrement l'un des autres agencements spécifiques s, décrits plus haut. Au surplus, la pression nécessaire jBut être engendrée par des moyens autres que l'emploi J 30 d'un ou plusieurs propulseurs pour aérosols.

/ / « » * 36

Dans l’ensemble, ainsi que cela sortira clairement de la description qui précède, dans sa globalité, l’in-vention concerne n’importe quel procédé pour la préparais tion in situ de liposomes en utilisant un système d’aé- 5 rosol sous pression, que les liposomes comprennent ou non, ou se trouvent ou non avec; un constituant actif séparé ainsi qu’un emballage à utiliser pour une telle préparation.

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Claims

37 * ' . . - 1. Procédé de préparation de liposomes à partir - d’une matière lipidique et d’eau, caractérisé en ce que l'on rassemble sous pression au moins deux constituants 5 séparés, un premier constituant comprenant de l’eau et un second constituant comprenant une matière lipidique et en ce qu’on fait passer le mélange sous pression à travers un ajutage ou tout autre agencement de façon à engendrer un spray d’aérosol contenant des liposomes.
2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu’au moins l’un desdits premier et second constituants comprend une matière active qui présente une activité biologique et/ou est intéressante pour le traitement ou les soins du corps humain ou 15 animal.
3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que la matière lipidique se trouve en solution dans le premier ou dans le second constituant.
4. Procédé suivant l’une quelconque des revendica-20 tions 2 et 3, caractérisé en ce que la matière active présente un intérêt thérapeutique ou cosmétique.
5. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que la matière active est un bronchodilatateur, un --—composé anti-asthme, un agent anti-tumoral, un agent anti-25 inflammatoire, un agent contraceptif ou un stéroïde ana-* bolique.
6. Procédé suivant l’une quelconque des revendi cations 2 et 3, caractérisé en ce que la matière active V est un antigène, un anticorps ou un autre réactif biolo- 30 giquement actif.
7. Procédé suivant l’une quelconque des revendica tions précédentes, caractérisé en ce que la matière * /7 /» / Ü * ‘ | H 36 lipidique au second constituant est une substance phos-ά pholipidique choisie da façon à donner un liposome posi- tivement chargé, négativement chargé ou neutre.
8. Procédé suivant l'une quelconque des revendi-5 cations précédentes, caractérisé en ce que le second . constituant comprend un véhicule liquide physiologique ment acceptable et/ou le premier constituant comprend ' un véhicule liquide physiologiquement acceptable, outre l'eau.
9. Procédé suivant l'une quelconque des revendica tions précédentes, caractérisé en ce que le premier et le second constituants sont mélangés sous l'effet de la pression produite par au moins un propulseur d'aérosol qui peut être un ingrédient de l'un des ou des deux 15 constituants et/ou être fourni séparément.
10. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé s en ce qu'un propulseur est un ingrédient du second cons- - tituant et en ce que l'on applique une pression au pre- mier constituant par l'intermédiaire d’un propulseur qui 20 en est maintenu séparé.
11. Procédé suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le premier et le second constituants sont chacun amenés isolément l'un de l'autre, chacun des constituants est amené en * 25 doses distinctes réglées dans une chambre de mélange sous l'effet de leur propre pression de propulseur et en ce que le mélange ainsi formé est déchargé de la chambre de ^ mélange par l'intermédiaire d'un orifice, sous l'effet • de la pression d'au moins l'un des propulseurs précités. Si
12. Procédé suivant l'une quelconque des revendi cations 2 à 11, caractérisés en ce que le premier et le second constituants sont mélangés en manière telle que l'on obtienne une dose mesurée de ladite matière active.
15. Procédé suivant l’une quelconque des revendi- f35 cations précédentes, caractérisé en ce que le second 39 , * » * $ *» constituant est amené sous la forme d’une dose mesurée -r à une dose mesurée du premier constituant. ^ 14. Procédé suivant l’une quelconque des revendi cations 11 à 13, caractérisé en ce qu’en série, on amène 5 le premier constituant à la chambre de mélange , de manière à remplir la chambre, on amène une dose mesurée du second constituant dans la chambre de mélange de * manière à engendrer un mélange turbulent des deux cons tituants et on décharge le mélange de la chambre de 10 mélange.
15. Emballage à utiliser pour la préparation d’un aérosol liposomique, caractérisé en ce qu’il comprend au moins une première et une seconde chambres, une chambre contenant un premier constituant comprenant de 15 l’eau et l’autre chambre comprenant un second constituant comprenant une matière lipidique et l'une des ou les deux ~ chambres et/ou une troisième chambre incluant une .s. matière servant de propulseur, l'emballage comprenant * un agencement pour débiter sous forme d'un spray, un 20 mélange des premier et second constituants amenés à partir de leurs chambres respectives, sous l’effet de la pression développée par la ou les matières servant de propulseurs.
16. Emballage suivant la revendication 15, caracté- » 25 riséeice cp’ai moins l'un-desdits premier et second cons tituants comprend une matière active qui est biologiquement active et/ou intéressante pour le traitement ou les soins du corps humain ou animal et en ce que l'agencement débiteur ou distributeur est tel que Tj 30 le rapport de mélange des constituants soit réglé de façon que l'on puisse ainsi débiter la dose mesurée souhaitée de ladite matière active. / * -5 I * ' 9 40
17. Emballage suivant l’une quelconque des re-vendications 15 et 16, caractérisé en ce qu'il comprend Mi également un orifice de décharge et une chambre de mélange et un dispositif à soupape pour permettre 5 l’amenée desdits premier et second constituants à partir de leurs chambres respectives, sous l’effet de la pression développée par un ou plusieurs propulseurs dans la * chambre de mélange et pour régler le rapport des composants, de façon à pouvoir débiter la dose mesurée sou- 10 haitée de mélange à travers l’orifice de décharge.
18. Emballage suivant la revendication 17, caractérisé en ce que le dispositif à soupape comprend un agencement destiné à permettre, en série, l’amenée du premier constituant à la chambre de mélange en vue de 15 remplir cette chambre, l’amenée d’une dose mesurée du second constituant dans la chambre de mélange en manière ^ telle qu’il se produise un mélange turbulent des deine constituants et la décharge du mélange à travers l’ori-* fice de décharge précité.
19. Emballage suivant l’une quelconque des reven dications 17 et 18, caractérisé en ce que le dispositif à soupape comprend un .agencement destiné à permettre l’amenée du second constituant dans la chambre de mélange en une multiplicité d’endroits dans cette chambre. . 25 2Ql. ^Emballage suivant l’une quelconque des reven dications 17 à 19» caractérisé en ce que la première et * la seconde chambres sont des chambres fermées disposées l’une dans l’autre et en ce que le dispositif à soupape et la chambre de mélange sont disposés dans et/ou au- 30 dessus de la chambre externe.
21. Emballage suivant la revendication 20, caractérisé en ce que le second constituant comprend un propulseur et est disposé dans une chambre fermée à parois rigides, interne, le premier constituant est / 41 V Ί . ' disposé dans une chambre fermée à parois souples, •\ externe, l’emballage comprend un boîtier a parois 's» -, rigides^ externe, dans lequel les chambres sont dis- 2,: posées et par l’intermédiaire duquel le dispositif à 5 soupape peut être amené à fonctionner et l’espace entre la chambre fermée externe et le boîtier enveloppant, comprend un propulseur.
22. Compositions liposomiques ou liposomes lorsqu’ils sont préparés sous la forme d’un spray par la 10 mise en oeuvre d’un procédé suivant l’une quelconque des revendications 1 à 14 ou par l’utilisation d’un emballage suivant l’une quelconque des revendications . 15 à 21. r ... . -*--·· i , f-\‘