LU87894A1 - Didesoxyinosine par desamination enzymatique de la didesoxyadenosine - Google Patents

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LU87894A1
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Farina Vittorio
Daniel A Benigni
Paul R Brodfuehrer
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Squibb Bristol Myers Co
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Description

Didésoxvinosine par désamination enzymatique de la didésoxvadénosine.
Domaine de l'invention.
La présente invention concerne un procédé perfectionné de préparation de la ß-(D)-21,3'-didésoxy-inosine.
> Arrière-plan de l'invention.
Normalement, la 21,3'-didésoxycytidine (ddC) est synthétisée à partir de la 2 '-désoxycytidine1,2. C'est un procédé général pour la synthèse des 2,3'-didésoxy-nucléosides. Toutefois, les composés de départ pour cette ) synthèse sont extrêmement onéreux et ne sont pas disponibles en grande quantité. En outre, les réactifs nécessaires pour cette désoxygénation sont aussi très chers.
La demande de brevet EUA 028 817 du 20 mars 1987 décrit un procédé de préparation de 2',3'-didésoxy-i nucléosides de formule
Figure LU87894A1D00031
où B représente une base purique ou pyrimidique et R représente H ou un radical hydroxy-protecteur, comprenant les stades (a) de convertir une γ-carboxy-y-butyrolactone en une 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-y-butyro-I lactone, (b) de convertir l'intermédiaire du stade (a) en le 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2',3'-didésoxy-pentofuranose, (c) de convertir 1 ' intermédiaire du stade (b) en le 1-0-radical activateur-5-O-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2 ' ,3'-didésoxypentofuranose, (d) de convertir i l'intermédiaire du stade (c) en le 1-radical partant-5-0-radical hydroxy-protecteur-2 ' , 3 ' -didésoxypentofuranose, (e) de faire réagir l'intermédiaire du stade (d) avec une base purique ou pyrimidique activée et (f) de recueillir le didésoxynucléoside du stade (e). Le produit résultant comprend un mélange des ß- et α-anomères qui peuvent être séparés suivant des techniques de chromatographie et de cristallisation bien connues dans le domaine que l'invention concerne.
Dans ce domaine, un procédé perfectionné reste nécessaire, suivant lequel le ß-anomère généralement actif ou plus actif des (D)-2',3'-didésoxynucléosides puisse être obtenu sélectivement sans la séparation onéreuse et lente par chromatographie ou cristallisation fractionnée des ß-et ct-anomères. Ceci est particulièrement important lorsque la forme ß-anomère désirée doit être obtenue en grandes quantités.
L'inosine, ou 9-ß-(D)-ribofuranosylhypoxanthine suivant la nomenclature chimique, résulte biochimiquement de la désamination enzymatique de l'adénosine, ou 9-ß-(D)-ribofuranosyl-9H-6-amino-purine. Ce processus, sous l'effet de l'adénosine désaminase, dégrade métaboliguement les purines en hypoxanthines qui sont excrétées par les animaux supérieurs. L'inosine peut être préparée à partir de l'adénosine par incubation avec de l'adénosine désaminase purifiée d'origine naturelle, par exemple d'intestin de boeuf. Dans des applications telles que celles-ci, qui mettent des substrats naturels en jeu, on sait que l'enzyme désamine sélectivement un seul énantiomère de la paire racémiaue. La spécificité enzymatique n'est pas connue au préalable quand des mélanges anomères de nucléosides structurellement modifiés sont présentés comme substrats. La spécificité sur la base du processus connu de sélection énantiomère de l'enzyme n'est pas la base de la spécificité dans l'application à un mélange anomère.
RESUME DE L'INVENTION.
En résumé, l'invention a pour objet un procédé efficace pour préparer sélectivement la ß—(D)—21,3 ' — didésoxyinosine de formule
Figure LU87894A1D00051
formule A
où I est la base purique, l'inosine. Le procédé comprend la préparation d1 un mélange a-, ß-anomère de (0)-2^31 -didésoxy-adénosine qui est ensuite soumis à la désamination enzymatique sélective convertissant la base adénosine en inosine pour le seul isomère ß~(D) qui est facile à isoler et aisément purifié par simple recristallisation.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L»INVENTION.
La présente invention a pour objet un procédé pour préparer sélectivement la ß-(D)-2',3'-didésoxyinosine de formule
Figure LU87894A1D00052
formule A
où I représente la base purique, l'inosine/ qui comprend les stades : 1. de préparer un mélange anomère d'a- et ß-(0)-2^31 -didésoxyadénosine; 2. de désaminer sélectivement la ß-(D)-21,3'-didésoxyadénosine anomère en mettant le mélange anomère du stade 1 en contact avec l'enzyme adénosine désaminase; et 3 . de collecter la ß- (0)-2^31 -didésoxyadénosine produite au stade 2.
Un procédé typique dpour préparer le mélange anomère utilisé au stade 1, comprend les stades : (a) de convertir une (D)-γ-carboxy-y-butyro-lactone de formule
Figure LU87894A1D00053
formule 1 en une 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-y-butyrolactone de formule
Figure LU87894A1D00061
formule 2 ù R représente un radical hydroxy-protecteur, en faisant réagir le composé de formule l avec un agent réducteur du radical carboxyle, puis en protégeant le radical hydroxy-méthyle résultant; (b) de convertir l'intermédiaire du stade (a) de formule 2 en le 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2,3-didésoxypentofuranose de formule
Figure LU87894A1D00062
formule 3 où R représente un radical hydroxy-protecteur, en faisant réagir le composé de formule 2 avec un agent réducteur du radical carbonyle; (c) de convertir l'intermédiaire du stade (b) de formule 3 en le l-o-radical activateur-5-o-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2 ,3-didésoxy-(D)-pentofuranose de formule
Figure LU87894A1D00063
formule 4 où R représente un radical hydroxy-protecteur et A représente un radical O-activateur choisi parmi les radicaux alcoylcarbonyle, arylcarbonyle, alcoylthiocarbonyle, aryl-thiocarbonyle, alcoylsulfonyle, arylsulfonyle et carbonate, dont la partie alcoyle peut être un radical C1-C3-alcoyle non substitué ou substitué et dont la partie aryle peut être un radical phényle non substitué ou substitué et le substituant sur les parties alcoyle et aryle peut être choisi parmi 1 à 3 radicaux sélectionnés entre les radicaux halo et c^-Cj-alcoxy, en faisant réagir le composé de formule 3 avec un agent d'acylation, de sulfonylation ou de carbonylation correspondant au radical A ci-dessus; (d) de convertir l'intermédiaire du stade (c) de formule 4, par réaction avec un composé de formule HX ou un halogénure de triméthylsilyle en le 1-radical partant-5-0-radical hydroxy-protecteur-2,3-didésoxy-(D)-pentofuranose de formule
Figure LU87894A1D00071
formule 5 où R représente un radical hydroxy-protecteur et X représente un radical partant choisi entre P, Cl, Br et I; (e) de faire réagir l'intermédiaire du stade (d) de formule 5 avec un dérivé d'adénine activé, dont la base, l'adénine, a été activée par réaction des radicaux hydroxyle et amino pendants du noyau de l'adénine avec un composé activateur choisi parmi les agents de silylation, d'acétylation et de benzoylation, en présence d'un acide de Bronsted ou d'un acide de Lewis et en présence d'un solvant organique inerte; (f) de recueillir le mélange anomère d'a- et ß-(D)-2',3'-didésoxyadénosine après avoir éliminé le radical 5-0-hydroxy-protecteur du produit intermédiaire du stade (e) ci-dessus.
Le composé de départ, ou (D)-γ-carboxy-y-butyro-lactone, peut être obtenu aisément à partir d'acide L-glutamique suivant les techniques habituelles exposées dans la littérature chimique3.
Une combinaison de réactions chimiques donne un 2,3-didésoxypentofuranose convenablement bloqué 2. Ce composé et ses dérivés sont décrits dans la littérature.
Par conséquent, la conversion du composé de départ, la (D)-y-carboxy-y-butyrolactone, en une 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-y-butyrolactone au stade (a) comprend la réduction du radical γ-carboxyle en un radical hydroxyméthyle, puis la réaction avec un réactif protecteur de la fonction hydroxy le. Par exemple, la réduction du radical γ-carboxyle et la protection du radical γ-hydroxy-méthyle résultant au moyen du radical benzyle (PhCH2-) au stade (a) sont effectuées en faisant réagir le composé de • départ de formule 1 en succession avec BH3.SMe2 et avec PhCH2Br.
Le radical fonctionnel alcool primaire peut être protégé sous la forme d'un éther, comme un éther trialcoyΙου dialcoyl-aryl- ou diaryl-alcoyl- ou triaryl-silylique, benzylique substitué ou non substitué, alcoylique substitué ou non substitué ou allylique, ou sous la forme d'un ester, comme un ester à radical benzoyle, mésitoyle, pivaloyle, acétyle substitué ou non substitué ou carbonate. On peut se référer à "Protective Groups in Organic Syntesis," T.W. Greene, John Wiley, New York 1981 pour une description plus détaillée de radicaux protecteurs et des réactions chimiques les concernant. Dans une forme de réalisation davantage préférée, il est fait usage, comme radical hydroxy-protecteur pour le radical alcool primaire à la position 5, du radical benzyle et plus avantageusement du radical benzoyle en raison de leur 'Stabilité et de leur préparation bien connue.
La conversion de la 5-0-radical hydroxy-pro-tecteur-y-butyrolactone en le 5-0-radical hydroxy-pro-tecteur-2,3-didésoxypentafuranose de formule 3 au stade (b) est effectuée par réaction de l'intermédiaire de formule 2. avec NaH et HC02Et, suivis de HCl.
Il est évident pour les spécialistes en la matière que l'invention concerne que l'un quelconque de divers agents réducteurs peut être utilisé pour exécuter le stade (a) et/ou le stade (b) indépendamment (c'est-à-dire en succession) ou simultanément. D'autres agents réducteurs utiles en dehors de BH3.SMe2 utilisé pour le stade (a) et/ou le stade (b) comme décrit ci-dessus sont notamment NaBH4,
NaBH4 plus LiCl OU A1C13 ou BF3, LiAlH4, LiAlH (OMe) 3, LiAlH(O-t-Bu)3, (Sia)2BH (disiamyl-borane) et d'autres dialcoyl-boranes. Le disiamyl-borane est préféré comme agent réducteur en raison de sa commodité de manipulation et de sa réactivité.
Le stade (c) de conversion de l'intermédiaire de formule 3. en l'intermédiaire de formule 4., portant un radical hydroxyle "activé" à la position C(l) du système cyclique du 2,3-didésoxypentofuranose peut être exécuté à l'aide de tout réactif propre à convertir ce radical hydroxyle en un radical qui peut être déplacé aisément par Cl ou Br par réaction avec HCl ou HBr ou, de préférence, avec TMSBr ou TMSCl (plus) une quantité catalytique de TMSI ("TMS" représente le radical triméthylsilyle). De tels radicaux qui peuvent être déplacés aisément sont notamment des radicaux O-activateurs choisis parmi alcoylcarbonyle, arylcarbonyle, alcoylthiocarbonyle, arylthiocarbonyle, alcoylsulfonyle, arylsulfonyle et carbonate dont la partie alcoyle peut être un radical C^Cj-alcoyle substitué ou non substitué et dont la partie aryle peut être un radical phényle substitué ou non substitué et dont le substituant sur les parties alcoyle et aryle peut être choisi parmi 1 à 3 radicaux sélectionnés entre les radicaux halo et C^Cj-alcoxy. Plus avantageusement, ce radical activateur est choisi parmi les radicaux acétoxy et benzoyloxy correspondants (à ceux ci-dessus) et est très avantageusement le radical acétoxy. Le stade (c) peut être exécuté avec avantage au moyen du réactif anhydride acêtique/pyridine.
Le stade (d) de déplacement du radical 1-0-activateur fonctionnel par un radical partant choisi entre Cl et Br est effectué par réaction du composé 4 avec HCl (ou HBr) dans le CH2C12 a basse température, menant aux halogé-nures de furanosyle 5a et |>b qui existent en solution sous la forme d'un mélange d'anomères (a et B).
Au stade (e) du procédé conforme à l'invention, l'intermédiaire de formule 5 du stade (d) ci-dessus est mis à réagir avec de l'adénine activée par réaction avec des réactifs activateurs bien connus donnant une base silylée, acétylée ou benzoylée ou une autre adénine acylée, en présence d'un solvant polaire ou non polaire approprié et facultativement en présence d'un acide de Lewis tel que, par exemple, un halogénure de bore, un halogénure d'aluminium, un halogénure de titane, le chlorure stannique, un halogénure de zinc, le bromure, l'iodure ou le triflate de triméthylsilyle ou tout autre composé bien connu à utiliser pour des réactions de glycosylation, ou bien en présence d'un acide de Br0nsted comme le chlorure, le bromure ou l'iodure d'hydrogène. Il est spécialement favorable à ce stade (e) d'utiliser l'adénine silylée en présence de solvants non polaires tels que, par exemple, le benzène, le toluène, le chloroforme, le dich1orométhane, le dichloro-éthane ou le tétrachlorure de carbone. Des exemples de solvants polaires utiles sont, entre autres, le tétrahydro-furanne et le dioxanne, les nitriles tels que l'acéto-nitrile, le diméthylformamide et le diméthylsulfoxyde. Un exemple de mode opératoire utile pour exécuter le stade (e) est donné dans le brevet EUA 4 625 020 de Brundidge et al. qui décrit la réaction de pyrimidines silylées, dont les atomes d'hydrogène actifs des radicaux hydroxyle et amino sont bloqués par des radicaux silyle tels que le radical triméthylsilyle, avec un halogénure de 2-désoxy-2-fluoro-arabinofuranosyle. Pour l'application de ce mode opératoire cité dans la référence au stade (e), une adénine base dont tous les atomes d'hydrogène actifs de fonction amino sont bloqués par des radicaux triméthylsilyle est mise à réagir avec un intermédiaire de formule 5.
Ainsi, la réaction d'un intermédiaire de formule 5 avec une adénine silylée telle que définie ci-dessus dans le CH2C12 ou le CHC13 donne une (D)-21,3'-didésoxy-adénosine protégée sous forme d'un mélange d'anomères.
En variante, dans une autre forme de réalisation de l'invention, lorsqu'au stade (c), le radical "A" est un radical acétyle, l'intermédiaire du stade (c) peut être mis à réagir avec un dérivé d'adénine activé en présence d'un acide de Lewis comme au stade (e) pour donner la 5-0-radical hydroxy-protecteur-2', 3 '-didésoxyadénosine comme produit -sans passer par le stade (d).
Comme indiqué ci-dessus, dans une autre forme de réalisation davantage préférée de l'invention, le l-o-acétyl-5-0-benzoyl-2,3-pentofuranose de formule 4. du stade (c) est mis en contact d'abord avec du bromotriméthyl-silane, puis avec une bis-silyladénine pour donner en un seul stade, sans isolement du l-bromo-5-0-benzoyl-2,3-pentofuranose intermédiaire comme au stade (d), la 5'-0-benzoyl-2 ', 3 ' -didésoxyadénosine comme produit des stades (d) et (e) combinés.
Au stade (f) du procédé conforme à la présente invention, la 5'-0-benzoyl-2',3'-didésoxyadénosine est soumise à une réaction chimique éliminant le 5-0-radical protecteur. Des techniques appropriées pour éliminer ce radical protecteur sont bien connues dans le domaine que 11 invention concerne et des exemples en sont donnés dans "Protective Groups in Organic Synthesis" de T.W. Greene, John Wiley, New York, 1981, déjà cité. Plus avantageusement, la 5'-O-benzoyl-2*,3'-didésoxyadénosine est mise à réagir avec du méthanol saturé d'ammoniac pour donner la 2 ',3 ' — didésoxyadénosine sous la forme d'un mélange des a- et ß-anomères.
Au stade 2 du procédé faisant l'objet de la présente invention, le mélange d'a- et ß-(D) -2 ', 3 '-didésoxyadénosine du stade 1 est mis en contact avec l'enzyme adénosine désaminase (ADA), isolée de la rate du veau, dans un milieu aqueux neutre. Cette enzyme catalyse sélectivement la désamination du ß-anomère de la (D)-2',3'-didésoxyadénosine et donne quantitativement la ß- (D) -2 ', 3 ' -didésoxy-inosine. Bien que 1'adénosine désaminase (ADA) de rate de veau ait été utilisée dans les exemples exécutés en réalité, on est porté à croire que toute préparation d'adénosine aminohydrolase ( "désaminase," EC 3.5.4.4) conviendrait. Ainsi, l'utilisation d'une préparation quelconque d'adénosine aminohydrolase (ou "désaminase") propre à désaminer sélectivement l'anomère ß-2 '-3 1 -didésoxyadénosine entre dans le cadre du procédé de l'invention. Dès lors, au lieu d'utiliser l'enzyme libre dans un milieu convenable, par exemple un milieu aqueux neutre décrit ici, il est possible d'utiliser l'enzyme ADA immobilisée sur un substrat compatible approprié, par exemple le polymère oxirane-acrylique Eupergit c TM (Rohm Pharma Gmb). L'ADA peut être fixée sur le polymère suivant des techniques classiques.
La (D)-2',3'-didésoxyinosine obtenue est avantageusement recueillie en collectant le mélange de réaction du stade 2, en séparant les additifs et réactifs insolubles par filtration sur de la Celite et en purifiant le produit résultant par simple recristallisation, auxquelles fins le methanol est un solvant de recristallisation préféré. Au stade 2, de l'adénosine désaminase est ajoutée, en quantité catalytique à environ molaire ou en excès, au mélange anomère de (D)-2',3'-didésoxyadénosine du stade l, dans un solvant approprié. Divers solvants peuvent être utilisés, mais les solvants polaires, par exemple l'eau ou l'alcool, sont préférés. La réaction est sensiblement achevée en une durée de moins d'une heure à quelques heures, suivant la quantité d'enzyme, les conditions de réaction et ainsi de suite. La réaction est de préférence exécutée pendant environ 1 à 4 heures à environ 20-25°C.
Pour empêcher des quantités contaminantes de l'a-anomère désaminé de se trouver mélangées au produit, l'avancement de la réaction doit être suivi pour déterminer le temps de contact maximum suivant une technique connue de l'homme de métier, par exemple la chromatographie en couche mince ou la chromatographie liquide sous haute pression.
Comme indication du caractère non évident de ce stade de désamination sélective, il a été déterminé que dans le mélange (L)-anomère, c'est l'a-anomère et non le ß-anomère qui est favorisé par la vitesse de désamination enzymatique. Du fait que l'adénosine désaminase tend à être une enzyme plutôt non spécifique et fort réactive, comme le révèle son action sur des substrats modifiés, il n'était certainement pas évident à priori qu'il existerait une différence de vitesse avantageuse pour la désamination des a- et ß-anomères de la (D)-21,3'-didésoxyadénosine.
L'utilisation de l'enzyme adénosine désaminase dans le procédé de la présente invention offre l'avantage que les anomères (ß et a) résultants ne doivent pas être séparés suivant les techniques onéreuses et lentes de la chromatographie et de la cristallisation bien connues jusqu'à présent dans le domaine que l'invention concerne. La ß-(D)-2',3'-didésoxyinosine anomère est recherchée parce qu'elle est 1'anomère actif ou, au moins, en substance plus actif comme agent antiviral que 1'anomère a.
Le procédé pour produire la ß- (D) -2 ', 3 ' -didésoxyinosine conforme à l'invention à partir de la 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-y-butyrolactone est exposé au schéma I ci-après.
Figure LU87894A1D00141
Figure LU87894A1D00151
Les exemples ci-après, dans lesquels les composés sont numérotés avec référence au schéma I, illustrent quelques formes de réalisation représentatives du procédé de l'invention et ne sont pas à considérer comme en limitant le cadre. Les parties et pourcentages sont toujours en poids et les températures sont en degrés Celsius sauf indication contraire.
PARTIE EXPERIMENTALE.
EXEMPLE 1.- (Ό)-5-0-Benzyl-2,3-didésoxypentofuranose. (2)
Sous azote, on ajoute goutte à goutte une solution de 15,1 g (0,069 mole) de (D)-51-benzoyloxy-5-hydroxyméthylbutyrolactone, 1, dans 50 ml de tétrahydro-furanne sec à 200 ml d'une solution 0,5 M de disiamyl-borane dans du THF à 0°. Après 20 minutes à 0°, on chauffe le mélange de réaction à 22°. On agite le mélange de réaction à 22° pendant 16 heures, puis on y ajoute lentement 12 ml d'eau et on le chauffe au reflux pendant 30 minutes. On refroidit le mélange de réaction à 0°, puis on y ajoute lentement 24 ml de peroxyde d'hydrogène à 30% en maintenant le pH entre 7 et 8 au moyen d'hydroxyde" de sodium IN. Au terme de l'addition, on évapore le mélange de réaction sous pression réduite dans un évaporateur rotatif à 30° en un résidu huileux. On soumet celui-ci au partage entre 500 ml de dichlorométhane et 150 ml d'eau. On extrait la couche aqueuse deux fois avec 100 ml de dichlorométhane, puis on lave le mélange des couches organiques avec 50 ml d'eau, on le sèche sur du sulfate de sodium anhydre et on l'évapore en une huile. Production = 15,3 g (100%) de 5-0-benzoyl-2,3-didésoxypentofuranose. Le spectre 1H-RMN est compatible avec la structure et on utilise l'huile directement au stade suivant.
EXEMPLE 2.- l-0-Acétvl-5-0-benzovl-2,3-didésoxypentofuranose. (3)
On agite une solution de 5-0-benzoyl-2,3-didesoxypentofuranose (15,3 g, 0,069 mole) dans 32 ml de pyridine et 16 ml d'anhydride acétique à 22° pendant 4 heures, puis on la dilue avec 500 ml de dichlorométhane et on ajoute 100 g de glace. On lave le mélange de réaction ensuite trois fois avec 100 ml d'acide chlorhydrique IN, trois fois avec 100 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé et une fois avec 100 ml de saumure. On sèche la couche organique sur du sulfate de sodium et on l'évapore pour obtenir une huile jaune pâle. On peut utiliser celle-ci telle quelle ou la chromatographier sur du gel de silice avec du 35% 60% EtOAc/hexane. Production ; 15,9 g (87%) de l-0-acétyl-5-0-benzoyl-2,3-didésoxypentofuranose. Son spectre RMN est compatible avec la structure.
EXEMPLE 3.- 51-O-Benzovl-2'.3-didésoxvadénosine. (4)
On dissout du l-0-acétyl-5-0-benzoyl-2,3-pento-furanose (0,522 g, 0,00198 mole) dans 5 ml de 1,2-dichloro-éthane. On y ajoute 276 μΐ (1,2 équivalent) de bromure de triméthylsilyle. On agite le mélange pendant 15 minutes à 22° avant d'y ajouter 11,9 ml d'une solution 0,2 M de bis-silyladénine dans du 1,2-dichloroéthane. On agite la solution pendant 88 heures à 22°. On traite le mélange de réaction ensuite en le refroidissant à 0°, puis en le versant dans 40 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé froid. On soumet le mélange de réaction au partage entre 200 ml de dichlorométhane deux fois 40 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé froid et 40 ml de saumure. On sèche la couche organique et on l'évapore pour obtenir une huile incolore qu'on chromatographie sur du gel de silice et qu'on élue avec 8% de méthanol dans du chlorure de méthylène. On collecte les fractions et on rassemble celles qui sont semblables pour obtenir 420 mg de 5'-O-benzoyl-2',3'-didésoxy-adénosine sous la forme d'un mélange des anomères (63%). EXEMPLE 4 21.3'-Didésoxvinosine. (6)
On ajoute 170 ml de méthanol saturé d'ammoniac à ce mélange d'anomères (1,66 g). On bouche étroitement le ballon et on l'agite à 18° pendnt 48 heures. La CCM indique que la réaction n'est pas achevée. On évapore le solvant et on le remplace par 170 ml de solution fraîche d'ammoniac dans du methanol. Après encore 48 heures, la CCM indique que la réaction est achevée. Par conséquent, on évapore le solvant et on ajoute de l'éthanol (5 ml). On obtient ainsi des cristaux incolores qu'on recueille et qu'on lave avec 5 ml d'éthanol à 95% pour obtenir 1,20 g (95%) de 2',3'-didésoxy-adénosine 5a conjointement avec son anomère a 5b dans un rapport de 1:1 indiqué par la 1H-RMN. On dissout le mélange de 2 ' ,3 '-didésoxyadénosine a + ß dans 50 ml d'eau déminéralisée et on ajoute à cette solution 10 mg d'adénosine désaminase (type XI, de Sigma, 9 unités/mg menant à 0. 9.μιηοΐβ/ιηιη^β) . On agite la solution à 20° et on surveille la réaction par HPLC. Après 150 minutes, on ajoute un supplément de 10 mg d'adénosine désaminase. La HPLC indique que la réaction est sensiblement achevée après 3 heures. On concentre le mélange de réaction ensuite (là 2 ml) à 35° pour obtenir une huile. On gratte la paroi sous l'huile et on dilue celle-ci lentement avec 2 fractions de 1,5 ml de methanol qui font apparaître des cristaux blancs. Après 15 minutes, on filtre le solide et on lave les cristaux incolores deux fois avec des aliquotes. de 1,5 ml de methanol pour obtenir la 2 1,3'-didésoxyinosine (12 0 mg, 48%) . On traite la liqueur-mère comme ci-dessus pour obtenir un supplément de 29 mg (12%) de produit de bonne qualité qu'on caractérise par 1H-RMN. Le spectre de résonance magnétique nucléaire est compatible avec la structure. BIBLIOGRAPHIE : 1. Samukov, V.V.; Ofitserov, V.I. Bioorg. Khim. 1983, 9, 132.
2. Prisbe, E.J.; Martin, J.C. Synth. Commun. 1985, 15, 401.
3. Taniguchi, M.; Koga, K.; Yamada, S. Tetrahedron 1974, 30. 3547.

Claims (3)

1, - Procédé perfectionné pour produire sélectivement la ß-(D)-2',31-didésoxyinosine, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement d'un mélange a- et ß-anomère de (D)-2',3'-didésoxyadénosine au moyen d'adenosine désaminase tout en surveillant la conversion du ß-anomère désaminé préférentiellement de façon à imposer le temps de réduction et réduire au minimum la désamination de l'a-anomère pour ainsi produire de la ß-(D)-2',3'-didêsoxyinosine qui est isolée du mélange de réaction.
2, - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'adénosine désaminase est dissoute dans un milieu aqueux neutre en vue de son contact avec le mélange anomère de (D)-2',3'-didésoxyadénosine.
3, - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'une préparation d'adénosine désaminase immobilisée est utilisée pour l'opération de désamination.
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