LU87280A1

LU87280A1 - Didesoxyinosine par desamination enzymatique de la didesoxyadenosine

Info

Publication number: LU87280A1
Application number: LU87280A
Authority: LU
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1987-07-17
Filing date: 1988-07-15
Publication date: 1989-03-08
Also published as: PT88017B; AT395977B; GR1000483B; FI883339A0; PT88017A; CA1335187C; ES2007532A6; KR930005870B1; KR900001858A; FI92602B; ATA173088A; GR880100455A; FI883339A7; FI92602C

Description

88/B.52.761

!‘ Ο "7 Ο Ο h GRAND-DUCHÉ DE LUXEMBOURG

Brevet N°.....Q....../........C,.........Q U Monsieur le Ministre du ........de l’Économie et des Classes Moyennes ΈίΓε délivré Service de la Propriété Intellectuelle

re e vre 0¾¾) LUXEMBOURG

/i.y-ff j)eman(je ,je Brevet d’invention Ü4. Όλ*C·» 1 ------------------------------V---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ( 1) I. Requête

La société dite:. BRISTOL-MYERS COMPANY, 345 Park Avenue, ( 2) NEW YORK, N.Y. 10154/ Etats-Unis d'Amérique/ représentée_____________ 'parMonsieur Jacques de Muyser, agissant, en qualité de__ ........mandataire_____________________________________________________________________________________________________________________________________________ ( 3) déposent)ce quinze juillet. 1900 quatre-vingt huit______________________________________________ ( 4) à_______15_____________ heures, au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, à Luxembourg: 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d’invention concernant: "Didésoxyinosine par désamination enzymatique de la...................................... ,« ........dïdésô^^ ...........................................................................................................................................................................................................................

2. la description en langue------------------.Êtangaisse................................................de l’invention en trois exemplaires; 3. ................LL...........................................planches de dessin, en trois exemplaires;· 4. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, le...................J...............................................................; 5. la délégation de pouvoir, datée de................................................................................................................ le..........................................................-.....................; 6. le document d’ayant cause (autorisation); déclare(nt) en assumant la responsabilité de cette déclaration, que l’(es) inventeur(s) est (sont): ( 6)

Voir désignation séparée (pas à________mentionner)_________________________________________ revendique(nt) pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de ( 7) ______________brevet__________________________déposée(s)&(«jaux Etats-Unis d'Amérique le(9)_____17 juillet 1987_________________________________;_________________________ sous le N° (10) 074.844_________________________________________________________________________ au nom de (U) §_jjxs«nteurs___________________________________________________________________________ élit(élisent) domicile pour lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg ___________________ ________________________35/ boùlevard Royal______________________________________________________ ¢2) sollicite(nt) la délivrance d’un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les annexes susmentionnées, avec ajournement de cette délivrance à______________________Ü____________________________________________________________________mois. (13) ^Lg'Séposant / mandataire:___________________________________________1-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------—...... (14) / I I À X JL Jl X JCf H· Procès-verbal de Dépôt La susdite Jemande de brevet d’invention a été déposée au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, Service la Propriété IntellectugJlôàiÿxembourg, en date du: 15 juillet 1988 / *' æO ''· #\ Pr. le Ministre de l’Economie e^les Classes Moyennes, à...............i.5.............heures f jg \a, \ pf f .

Kô\ 1¾¾ / Le chef du service de^jp nopnété intellectuelle, A 68007_ L ' . ' _r \ f\_ ~ ΡΧΡΓ.ΤΓΑΤΓΠΝ.ς RF.T.ATTVF.S AU FORMin^WE jSV.Ibl^QlW^ / JJT ♦ f A f) f> (1) s'il y a Heu "Demande de certificat d’addition au brSvSPWÏffïipaÎ, à la demande de brevet principal No............cjfir...........”-(2) inscrire les nom, prénom, profession, ( yJ_ 7 U adresse du demandeur, lorsque celui-ci est un particulier ou les dénomination sociale, forme juridique, adresse du siège social, lorsque le demandeur est une personne morale - (3) inscrire les nom, prénom, adresse du mandataire agrée, conseil en propriété industrielle, muni d’un pouvoir spécial, s’il y a lieu; "représenté par....... agissant en qualité de mandataire” ^ - (4) date de dépôt en toutes lettres - (5) titre de l’invention - (6) inscrire les noms, prénoms, adresses des inventeurs ou l’indication "(voir) désignation séparée (suivra)”, lorsque ia dési- / λ vV t gnation se fait ou se fera dans un document séparé, ou encore l’indication "ne pas mentionner”, lorsque l’inventeur signe ou signera un document de non-mention à joindre à une désignation { ,τ * X LM c4nnr4A nrXconfA futur» _/7\ bradât H’nririîrinn mciriM*» H’iifîlifrf hrpvi»f »»iirnnften iCRF.V nrnteettnn intemntînnflle ίΡΓΤ) — fÄ) Etal danstemiel le nrâmier dénât a été effectué ' 88/B.52.761

REVENDICATION DE LA PRIORITE

de la demande de brevet / dccxocxfètextfHlxIiîs: EK Aux Etats-Unis d'Amérique Du 17 juillet 1987 (no. 074.844) i Mémoire Descriptif déposé à l'appui d'une demande de

BREVET D’INVENTION

au

Luxembourg au nom de : BRISTOL-MYERS company . NEW YORK, N.Y. 10154 (Etats-Unis d'Amérique) pour: "Didésoxyinosine par désamination enzymatique de la i didésoxyadénosine." \

Didésoxyinosine par désamination enzymatique de la didésoxyadénosine

Domaine de l'invention

La présente invention concerne un procédé perfectionné de préparation de la ß-2',31-didésoxyinosine .

Arrière-plan et références

Normalement, la 21,3'-didésoxycytidine (ddC) 12 est synthétisée à partir de la 2'-désoxycytidine ' . C'est un procédé général pour la synthèse des 2,3'-di-désoxynucléosides. Toutefois, les composés de départ pour cette synthèse sont extrêmement onéreux et ne sont pas disponibles en grande quantité. En outre, les réactifs nécessaires pour cette désoxygénation sont aussi très chers.

La demande de brevet EUA 028.817 du 20 mars 1987 décrit un procédé de préparation de 2',3'-didés-oxynucléosides de formule où B représente une base purique ou pyrimidique et R représente H ou un radical hydroxy-protecteur, comprenant les stades (a) de convertir une ^-carboxy-/-buty-rolactone en une 5-O-radical hydroxy-protecteur-méthyl-"jf-butyrolactone, (b) de convertir l'intermédiaire du stade (a) en le 5-O-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2',3'-didésoxypentofuranose, (c) de convertir l'intermédiaire du stade (b) en le 1-O-radical activateur-5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-21,31-didésoxypentofuranose, (d) de convertir l'intermédiaire du stade (c) en le 1-radical partant-5-O-radical hydroxy-protecteur -2',3'-didésoxypentofuranose, (e) de faire réagir l'intermédiaire du stade (d) avec une base purique ou 2 pyrimidique activée et (f) de recueillir le didésoxy-nucléoside du stade (e). Le produit résultant comprend un mélange des ß- et of-anomères qui peuvent être séparés suivant des techniques de chromatographie et de cristallisation bien connues dans le domaine que l'invention concerne.

Dans ce domaine, un procédé perfectionné reste nécessaire, suivant lequel le β-anomère généralement actif ou plus actif des 21,3'-didésoxynucléosi-des puisse être obtenu sélectivement sans la séparation onéreuse et lente par chromatographie ou cristallisation des/S - et Ot-anomères.

RESUME DE L'INVENTION

En résumé, l'invention a pour objet un procédé pour préparer sélectivement la /3-2 ' , 3 '-didésoxyino-sine de formule H°—1 i où I est la base purique hypoxanthine, suivant lequel on obtient la 2',3'-didésoxyadénosine qui est ensuite soumise à la désamination enzymatique et au remplacement de l'adénine par l'hypoxanthine.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention a pour objet un procédé pour préparer sélectivement la ß-2',3'-didésoxyinosine de formule H0—I ] où I représente la base purique, l'hypoxanthine, qui comprend les stades : (a) de convertir une H-carboxy-Y-butyrolac- » 3 tone de formule

HOOC

*c!>° en une 5-0-radical hydroxy-protecteur - méthyl-^-buty-rolactone de formule RO-, où R représente un radical hydroxy-protecteur; (b) de convertir l'intermédiaire du stade (a) de formule C en le 5-0-.radical hydroxy-protecteur-méthyl-2,3-didésoxypentofuranose de formule RO ——'1

D

où R représente un radical hydroxy-protecteur; (c) de convertir l’intermédiaire du stade (b) de formule D en le 1-0-radical activateur-5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2,3-didésoxypentofuranose de formule RO—i

___0 ^ OA

'Clx où R représente un radical hydroxy-protecteur et A représente un radical O-activateur choisi parmi les radicaux alcoylcarbonyle, arylcarbonyle, alcoylthio-carbonyle, arylthiocarbonyle, alcoylsulfonyle, aryl-sulfonyle et carbonate dont la partie alcoyle peut être un radical C^-C^-alcoyle non substitué ou substitué et dont la partie aryle peut être un radical phényle 4 non substitué ou substitué et le substituant sur les parties alcoyle et aryle peut être choisi parmi 1 à 3 radicaux sélectionnés entre les radicaux halo et C-^-C^-alcoxy ; (d) de convertir l'intermédiaire du stade (c) de formule E, par réaction avec un composé de formule MX, en le 1-radical partant-5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2,3-didésoxypentofuranose de formule RO | *exx où R représente un radical hydroxy-protecteur et X représente un radical partant choisi entre Cl et Br et M est choisi entre H et (CH^^Si; (e) de faire réagir l'intermédiaire du stade (d) de formule F avec un dérivé d'adénine activé,dont la base,1'adénine, a été activée par réaction du radical N-6-amino pendant et de l'atome d'azote N-9 sur le noyau de l'adénine avec un composé activateur choisi parmi les agents de silylation, d'acétylation et de benzoylation, en présence d'un acide de Br0nsted ou d'un acide de Lewis et en présence d'un solvant choisi parmi les solvants polaires et non polaires; (f) de soumettre l'intermédiaire du stade (e) à une réaction chimique propre à déplacer le 5-O-radi-cal hydroxy-protecteur pour donner un mélange anomère deß- et a-2',3'-didésoxyadénosine; (g) de mettre le mélange deyâ- et<X-2',3'-didésoxyadénosine du stade (f) en contact avec l'enzyme, l'adénosine désaminase, avec une préférence spéciale dans un milieu aqueux neutre, pour opérer le déplacement du radical amino pendant à la position 6 du système cyclique de la purine (adénine) sélectivement dans la ß-2',3'-didésoxyadénosine à l'aide d'un ( t 5 radical hydroxyle de façon à convertir l'adénosine en inosine; et (h) de recueillir la /3 1 -2 1 ,3-didésoxyinosine du stade (g) ci-dessus.

Le procédé pour produire la /3-2 1 , 3 '-didésoxy-inosine conforme à l'invention à partir de la 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-Y-butyrolactone est exposé au schéma I ci-après.

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Comme il ressort du schéma I et des exemples d'application ci-après, les stades (d) et (e) sont exécutés avec avantage et de préférence dans un seul réacteur par addition successive d'un agent d'halogénation et d'un dérivé d'adénine activé au l-0-acétyl-5-0-ben-zoyl-2,3-pentofuranose de formule 3.

Le composé de départ , la /-carboxy-y-butyro-lactone, peut être obtenu aisément à partir d'acide glutamique suivant les techniques habituelles exposées dans la littérature chimique^.

Une combinaison de réactions chimiques donne un 2,3-didésoxypentafuranose convenablement bloqué 3_.

Ce composé et ses dérivés sont décrits dans la littérature .

Par conséquent, la conversion du composé de départ, la 'f -carboxy-/-butyrolactone, en une 5-0-ra-dical hydroxÿ-protecteur-méthyl-butyrolactone au stade (a) comprend la réduction du radical y-carboxyle en un radical hydroxyméthyle, puis la réaction avec un réactif protecteur de la fonction hydroxyle. Par exemple, la réduction du radical /-carboxyle et la protection du radical /-hydroxyméthyle résultant au moyen du radical benzyle (PhCF^-) ou du radical benzoyle (PhC(O)-) au stade (a) est effectuée par réaction en succession du composé de départ de formule 1 avec BH,?SMe9 et avec PhCfi^Br ' ou PhC(0)Cl. Il est préféré d'utiliser le radical benzoyle plutôt que le radical benzyle parce que l'élimination ultérieure du radical benzoyle protecteur s'est révélée se faire plus aisément et donner un plus haut rendement en produit.

Le radical fonctionnel alcool primaire peut être protégé sous la forme d'un éther, comme un éther trialcoyl- ou dialcoyl-aryl- ou diaryl-alcoyl- ou tri-aryl-silylique, benzylique substitué ou non substitué, alcoylique substitué ou non substitué ou allylique, ou 9 sous la forme d'un ester, comme un ester a radical benzoyle, mésitoyle, pivaloyle, acétyle substitué ou non substitué ou carbonate. On peut se référer à "Protective Groups in Organic Syntesis," T.W. Greene, John Wiley, New York 1981 pour une description plus détaillée de radicaux protecteurs et des réactions chimiques les concernant. Dans une forme de réalisation davantage préférée, il est fait usage du radical benzoyle comme radical hydroxy-protecteur pour le radical alcool primaire à la position 5 parce que, comme indiqué ci-dessus, l’élimination ultérieure du radical benzoyle protecteur s'est révélée se faire plus aisément et donner un plus haut rendement en produit. Le radical 5-O-benzoyle protecteur peut être éliminé aisément par hydrolyse en milieu basique, par exemple par réaction avec du méthanol saturé d'ammoniac.

La conversion de la 5-0-radical hydroxy-pro-tecteur-'tf-butyrolactone en le 5-0-radical hydroxy-pro-tecteur-2,3-didésoxypentafuranose de formule 2 au stade (b) peut se faire par réaction de l'intermédiaire 4 de formule 1_ avec NaH et HCÛ2Et, suivis de HCl .

Il est évident pour les spécialistes en la matière que l'invention concerne que l'un quelconque de divers agents réducteurs peut être utilisé pour exécuter le stade (a) et/ou le stade (b) indépendamment , (c'est-à-dire en succession) ou simultanément. D'autres agents réducteurs utiles en dehors de utilisés pour le stade (a) et/ou le stade (b) comme décrit ci-dessus sont notamment [(CH^)2CHCH(CH^)]2BH (disiamyl-borane), NaBH^ plus LiCl ou AlCl^ ou BF^, LiAlH^, LiAlH(OMe)3, LiAlH(O-t-Bu)3 etc. L'utilisation du disiamylborane au stade (b) pour la réduction du radical carbonyle du cycle lactone est spécialement préférée .

Le stade (c) de conversion de l'intermédiaire 10 de formule 2_ en l'intermédiaire de formule 3_ portant un radical O-activateur à la position C(l) du système cyclique du 2,3-didésoxypentafuranose peut être exécuté à l'aide de tout réactif propre à convertir ce radical 1-hydroxyle en un radical qui peut être déplacé aisément par Cl ou Br par réaction avec HCl ou HBr. De tels radicaux qui peuvent être déplacés aisément sont notamment des radicaux O-activateurs choisis parmi alcoylcarbonyle, arylcarbonyle, alcoylthiocarbo-nyle, arylthiocarbonyle, alcoylsulfonyle, arylsulfo-nyle et carbonate dont la partie alcoyle peut être un radical C^-C^-alcoyle substitué ou non substitué et dont la partie aryle peut être un radical phényle substitué ou non substitué et dont le substituant sur les parties alcoyle et aryle peut être choisi parmi 1 à 3 radicaux sélectionnés entre les radicaux halo et C^-C^-alcoxy. Plus avantageusement, ce radical activateur est choisi parmi les radicaux acétoxy et benzoyloxy correspondants (à ceux ci-dessus) et est très avantageusement le radical acétoxy. Le stade (c) peut être exécuté avec avantage au moyen du réactif anhydride acétique/pyridine.

Le stade (d) de déplacement du radical 1-O-activateur fonctionnel par un radical partant choisi entre Cl et Br peut être effectué par réaction du composé 3_ avec HCl ou HBr ou bien un halotrialcoyl-silane de formule R^SiX où R représente un radical alcoyle et X représente un radical halo, plus avantageusement (CH^J^SiBr, dans le CH2CI2 à basse température, menant aux halogénures de furanosyle qui existent en solution sous la forme d'un mélange d'anomères (c\ et ß ) .

Au stade (e) du procédé conforme à l'invention, l'intermédiaire de formule F du stade (d) ci-dessus peut être mis à réagir avec un dérivé d'adénine 11 convenablement activé, dont la base, l'adénine, a été activée par réaction avec des réactifs activateurs bien connus donnant une base silylée, acétylée ou benzoylée, en présence d'un solvant polaire ou non polaire approprié et facultativement en présence d'un acide de Lewis comme, par exemple, un halogénure de bore, un halogénure d'aluminium, un halogénure de titane, le chlorure stannique, un halogénure de zinc, le bromure, l'iodure ou le triflate de triméthylsilyle ou tout autre composé bien connu à utiliser pour des réactions de glycosylation, ou bien en présence d'un acide de Bronsted comme le chlorure, le bromure ou l'iodure d'hydrogène. Il est spécialement utile à ce stade (e) d'utiliser l'adénine silylée en présence de solvants non polaires comme, par exemple, le benzène, le toluène, le chloroforme, le dichlorométhane, le dichloroéthane ou le tétrachlorure de carbone. Des exemples de solvants polaires utiles sont, entre autres, le tétrahydrofuranne et le dioxanne, les nitriles comme 1'acétonitrile, le diméthylformamide et le diméthyl-sulfoxyde. Un exemple de technique utile pour exécuter le stade (e) est donné dans le brevet EUA 4.625.020 de Brundidgeel: al_. qui décrit la réaction de pyrimidines silylées, dont les atomes d'hydrogène actifs des radicaux hydroxyle et amino sont bloqués par des radicaux silyle tels que le radical triméthylsilyle, avec un halogénure de 2-désoxy-2-fluoroarabinofuranosyle.

En variante, dans une autre forme de réalisation de l'invention, lorsqu'après le stade (c), le radical "A" est un radical acétyle, l'intermédiaire du stade (c) , peut être mis à réagir avec dérivé d'adénine activé en présence d'un acide de Lewis comme au stade (e) pour donner la 5-O-radical hydroxy-protecteur-2',3'-didésoxyadénosine intermédiaire sans passage par un stade (d) distinct.

12

Comme indiqué ci-dessus, dans une autre forme de réalisation davantage préférée de l'invention, le l-0-acétyl-5-0-benzoyl - 2,3-pentofuranose de formule 3_ du stade (c) est mis en contact d'abord avec du bromotriméthylsilane,puis avec une bis-silyladénine pour donner en un seul stade, sans isolement du 1-bromo-5-0-benzoyl-2,3-pentofuranose intermédiaire comme au stade (d) , la 5 ' -0-benzoyl-2 ' , 3 ' -didésoxy.adénosine comme produits des stades (d) et (e) combinés.

Au stade (f) du procédé conforme à la présente invention, la 5'-0-benzoyl-2',3'-didésoxyadénosine est soumise à une réaction chimique éliminant le 5-0-radi-cal protecteur. Des techniques appropriées pour éliminer ce radical protecteur sont bien connues dans le domaine que l'invention concerne et des exemples en sont donnés dans "Protective Groups in Organic Synthesis" de T.W. Greene, John Wiley, New York, 1981, déjà cité. Lorsque le radical protecteur est le radical benzyle, celui-ci peut être éliminé aisément par hydrogénation catalytique (H2/PdCl2) . Plus avantageusement, la 5'-0-benzoyl-2',3'-didésoxyadénosine est mise à réagir avec du méthanol saturé d'ammoniac pour donner la 2',3'-didésoxyadénosine sous la forme d'un mélange des oc- et ß-anomeres.

Au stade (g) du procédé conforme à la présente invention, le mélange de fi - et oc-2 ', 3 ' -didésoxyadénosine du stade (f) est mis en contact avec l'enzyme, l'adénosine désaminase (ADA)^, isolée de la rate du veau, dans un milieu aqueux neutre. Cette enzyme catalyse sélectivement la désamination de la /3-2', 3'-didésoxyadénosine et donne quantitativement la ß-2 ' ,3-didésoxyinosine. Bien que l'adénosine désaminase (ADA) de rate de veau ait été utilisée dans les exemples ci-après, on est porté à croire que toute préparation d'adénosine aminohydrolase ("désaminase," EC 3.5.4.4) t 13 conviendrait. Ainsi, l'utilisation d'une préparation quelconque d'adénosine aminohydrolase (ou "désaminase") propre à désaminer sélectivement la /3-2 ' , 3 ' -didésoxy-adénosine anomère entre dans le cadre du procédé de l'invention. Par conséquent, outre l'utilisation de l'enzyme libre dans un milieu convenable, comme un milieu aqueux neutre décrit ici, il est possible d'utiliser l'enzyme ADA immobilisée sur un substrat compatible approprié, par exemple le polymère oxirane-acry-lique Eupergit C TM (Rohm Pharma Gmb). L'ADA peut être fixé sur le polymère suivant des techniques classiques.

La 2',3'-didésoxyinosine obtenue est avantageusement recueillie en collectant le mélange de réaction du stade (e) ou du stade supplémentaire au cours duquel le 5-0-radical protecteur a été éliminé, en séparant les additifs et réactifs insolubles par filtration sur de la Celite et en purifiant le produit résultant par chromatographie sur une colonne, par exemple une colonne de gel de silice, au moyen d'un mélange d'environ 1 à 5% de méthanol dans du chloroforme comme éluant.

L'utilisation de l'enzyme, l'adénosine désaminase, dans le procédé de la présente invention offre l'avantage que les anomères ( yâ et <x ) résultants ne doivent pas être séparés suivant les techniques onéreuses et lentes de la chromatographie et de la cristallisation bien connues jusqu'à présent dans le domaine que l'invention concerne. La /3-2',3'-didésoxyinosine anomère est recherchée parce qu'elle est 1'anomère actif ou est au moins en substance plus active comme agent antiviral que l'anomère <* .

Les exemples ci-après, dans lesquels les composés sont numérotés avec référence au schéma I, illustrent quelques formes de réalisation représentatives du procédé de l'invention et ne sont pas à considérer t 14 comme en limitant le cadre. Les parties et pourcentages sont toujours en poids et les températures sont en degrés Celsius sauf indication contraire.

PARTIE EXPERIMENTALE EXEMPLE 1 (D)-5-0-Benzyl-2,3-didésoxypentofuranose. 2.

Sous azote, on ajoute goutte à goutte une solution de 15,1 g (0,069 mole) de (D)-5'-benzoyloxy-5-hydroxyméthylbutyrolactone, 1_, dans 50 ml de tétrahydro-furanne sec à 200 ml d'une solution 0,5 M de disiamyl-borane dans du THF à 0°. Après 20 minutes à 0e, on chauffe le mélange de réaction à 22°. On agite le mélange de réaction à 22° pendant 16 heures, puis on y ajoute lentement 12 ml d'eau et on le chauffe au reflux pendant 30 minutes. On refroidit le mélange de réaction à 0°,puis on y ajoute lentement 24 ml de peroxyde d'hydrogène à 30% en maintenant le pH entre 7 et 8 au moyen d'hydroxyde de sodium IN. Au terme de l'addition, on évapore le mélange de réaction sous pression réduite dans un évaporateur rotatif à 30° en un résidu huileux.

On soumet celui-ci au partage entre 500 ml de dichloro-méthane et 150 ml d'eau. On extrait la couche aqueuse 2X avec 100 ml de dichlorométhane, puis on lave le mélange des couches organiques avec 50 ml d'eau, on le sèche sur du sulfate de sodium anhydre et on l'évapore en une huile. Production = 15,3 g (100% ) de 5-0-ben-zoyl-2,3-didésoxypentofuranose. Le spectre ^H-RMN est compatible avec la structure et on utilise l'huile directement au stade suivant.

EXEMPLE 2 l-0-Acétyl-5-0-benzoyl-2,3-didésoxypentofuranose. 3.

On agite une solution de 5-0-benzoyl-2,3-didésoxypentofuranose (15,3 g, 0,069 mole) dans 32 ml de pyridine et 16 ml d'anhydride acétique à 22° pendant 4 heures, puis on la dilue avec 500 ml de dichloromé-

A

15 thane et on ajoute 100 g de glace. On lave le mélange de réaction ensuite 3 X avec 100 ml d'acide chlorhydrique IN, 3 X avec 100 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé et une fois avec 100 ml de saumure. On sèche la couche organique sur du sulfate de sodium et on l'évapore pour obtenir une huile jaune pâle. On peut utiliser celle-ci telle quelle ou la chromatographier sur du gel de silice avec de 11EtOAc/hexane 35% —»· 60%. Production: 15,9 g (87%) de l-0-acétyl-5-0-benzoyl-2,3-didésoxy-pentofuranose. Son spectre RMN est compatible avec la structure.

EXEMPLE 3 5 1-O-Benzoyl-21,3-didésoxyadénosine. 4.

On dissout du l-0-acétyl-5-0-benzoyl-2,3-pen-tofuranose (0,522 g, 0,00198 mole) dans 5 ml de 1,2-dichloroéthane. On y ajoute 276 y«*l (1,2 équivalent) de bromure de triméthylsilyle. On agite le mélange à 22° pendant 15 minutes avant d'y ajouter 11,9 ml d'une solution 0,2 M de bis-silyladénine dans du 1,2-dichloroéthane. On agite la solution pendant 88 heures à 22°. On traite le mélange de réaction ensuite en le refroidissant à 0°, puis en le versant dans 40 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé froid. On soumet le mélange de réaction au partage entre 200 ml de di-chlorométhane et 2 X 40 ml de bicarbonate de sodium aqueux saturé froid et 40 ml de saumure. On sèche la couche organique et on l'évapore pour obtenir une huile incolore qu'on chromatographie sur du gel de silice et qu'on élue avec 8% de méthanol dans du chlorure de méthylène. On collecte les fractions et on rassemble celles qui sont semblables pour obtenir 420 mg de 5'-O-benzoyl-2',3'-didésoxyadénosine sous la forme d'un mélange des anomères (63%).

EXEMPLE 4 2',3'-Didésoxyinosine. 6.

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On fait réagir ce mélange d'anomères (1,66g) avec 170 ml de méthanol saturé d'ammoniac. On bouche étroitement le ballon et on l'agite à 18° pendant 48 heures. La CCM indique que la réaction n'est pas achevée. On évapore le solvant et on le remplace par 170ml de solution fraîche d'ammoniac dans du méthanol. Après encore 48 heures, la CCM indique que la réaction est achevée. Par conséquent, on évapore le solvant et on ajoute de l'éthanol (5 ml). On obtient ainsi des cristaux incolores qu'on recueille et qu'on lave avec 5 ml d’éthanol à 95% pour obtenir 1,20 g (95%) de 2',3'-di-désoxyadénosine 5a conjointement avec son anomère ot 5b dans un rapport de 1:1 indiqué par la ^H-RMN. On dissout le mélange de 2 ' , 3 '-didésoxyadénosine oc +/3 dans 50 ml d'eau déminéralisée et on ajoute à cette solution 10 mg d'adénosine désaminase (type II, de Sigma, 9 uni-tés/mg menant à 0,9/imole/minute). On agite la solution à 20e et on surveille la réaction par HPLC. Après 150 minutes, on ajoute un supplément de 10 mg d'adénosine désaminase. La HPLC indique que la réaction est sensiblement achevée après 3 heures. On concentre le mélange de réaction ensuite (1 à 2 ml) à 35° pour obtenir une huile. On gratte la paroi sous l'huile et on dilue celle-ci lentement avec 2 fractions de 1,5ml de méthanol qui font apparaître des cristaux blancs. Après 15 minutes, on filtre le solide et on lave les cristaux incolores 2 X avec des aliquotes de 1,5 ml de méthanol pour obtenir la 2',3'-didésoxyinosine (120 mg, 48%) . On traite la liqueur-mère comme ci-dessus pour obtenir un supplément de 29 mg (12%) de produit de bonne qualité qu'on caractérise par ^H-RMN. Le spectre de résonance magnétique nucléaire est compatible avec la structure.

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U

BIBLIOGRAPHIE : 1. Samukov, V.V.; Ofitserov, V.I. Bioorg. Khim. 1983, 9, 132.

2. Prisbe, E.J.; Martin, J.C. Synth. Commun. 1985, 15, 401.

3. Taniguchi, M.; Koga, K.; Yamada, S. Tetrahedron 1974, 30, 3547.

4. Spry, D. V.; Bhala, A.R. Heterocycles, 1985, 23, 1901.

5. Secrist, J. A. et al. J. Med. Chem. 1987, 30, 746.

6. Gillard, J.W.; Israel, M. Tet. Letters 1981, 513.

Claims

1. Procédé de préparation sélective de la fi-2',3'-didésoxyinosine de formule HO—j ί où I représente la base purique, l'hypoxanthine, caractérisé en ce qu'il comprend les stades: (a) de convertir une ^-carboxy-y-butyrolactone de formule HOOC en une 5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-Y-butyro-lactone de formule RO-« où R représente un radical hydroxy-protecteur, en faisant réagir le composé de formule B avec un agent réducteur du radical carboxyle, puis en faisant réagir • le radical hydroxyméthyle résultant avec un réactif apportant un radical hydroxy-protecteur; (b) de convertir l'intermédiaire du stade (a) de formule C en le 5-0-radical hydroxy-protecteur-mé-thyl-2,3-didésoxypentofuranose de formule RO—, U 0 -yOA D où R représente un radical hydroxy-protecteur, en fai- t 19 sant réagir le composé de formule C avec un agent réducteur du radical carbonyle; (c) de convertir l'intermédiaire du stade (b) de formule D en un 1-0-radical activateur-5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2,3-didésoxypento-furanose de formule où R représente un radical hydroxy-protecteur et A est un radical O-activateur choisi parmi les radicaux al-coylcarbonyle, arylcarbonyle, âlcoylthiocarbonyle , arylthiocarbonyle, alcoylsulfonyle, arylsulfonyle et carbonate, dont la partie alcoyle peut être un radical C^-C^-alcoyle substitué ou non substitué et dont la partie aryle peut être un radical phényle substitué ou non substitué et dont le substituant sur les parties alcoyle et aryle peut être choisi parmi 1 à 3 radicaux sélectionnés entre les radicaux halo et C^-C^-alcoxy, en faisant réagir le composé de formule D avec un agent d'acylation, de sulfonation ou de carbonylation correspondant au radical A ci-dessus; (d) de convertir l'intermédiaire du stade (c) de formule E par réaction avec un composé de formule MX en le 1-radical partant-5-0-radical hydroxy-protecteur-méthyl-2 , 3-didésoxypentofuranose de formule RO-j U" 0 V. x F où R représente un radical hydroxy-protecteur et X représente un radical partant choisi entre Cl et Br, en faisant réagir le composé de formule E avec un composé de formule MX où M est choisi entre H et (CH^^Si; » 20 (e) de faire réagir l'intermédiaire du stade (d) de formule F avec un dérivé d'adénine activé dont la base, l'adénine, a été activée par réaction du radical N-6 amino pendant et de l'atome d'azote N-9 du noyau de la base donnée avec un composé activateur choisi parmi les agents de silylation, d'acétylation et de benzoylation, en présence d'un acide de Br0nsted ou d'un acide de Lewis et en présence d'un solvant choisi parmi les solvants polaires et non polaires; et (f) de soumettre l'intermédiaire du stade (e) à une réaction chimique propre à déplacer le 5-O-radi-cal hydroxy-protecteur pour obtenir un mélange anomère de fb- et ex-2 ' , 3 ' -didésoxyadénosine ; (g) de mettre le mélange de ß - et <x-2 ' , 3 ' -didésoxyadénosine du stade (f) en contact avec l'enzyme, l'adénosine désaminase, pour opérer le déplacement du radical amino pendant sur la position 6 du système cyclique de purine (adénine) sélectivement dans la /3-23 '-didésoxyadénosine par un radical hydroxyle de manière à convertir l’adénosine en inosine; et (h) de recueillir la didésoxyinosine du stade (g) ci-dessus.

2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'agent réducteur utilisé aux stades (a) et (b) est choisi entre BH^ (B2Hg), BH3.SMe2, [(CH3)2CHCH(CH3)]2BH, NaBH4; NaBH^ plus l’un d'entre LiCl et A1C13 et BF3, LiAlH4, LiAlH(OMe)3 et LiAlH(O-t-BU)3.

3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'agent réducteur utilisé au stade (b) est C(ch3)2chch(ch3)32bh.

4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le radical hydroxy-protecteur utilisé au stade (a) est choisi parmi les radicaux benzyle substitués et non substitués, trialcoylsilyle, alcoyl- « 21 r arylsilyle, alcoyle substitué et non substitué, vinyle, benzoyle, mésitayle, pivaloyle, acétoxy substitué et non substitué et carbonate.

5. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le radical hydroxy-protecteur est le radical benzoyle.

6. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le radical O-activateur utilisé au stade (c) est choisi parmi les radicaux alcoylcarbo-nyle et arylcarbonyle.

7. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que le radical O-activateur utilisé au stade (c) est choisi entre les radicaux acétyle et benzoyle.

8. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'intermédiaire du stade (c) est mis à réagir avec (CH^J^SiBr comme composé de formule MX.

9. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'au stade (e) le dérivé d'adénine, activé par réaction avec un halotrialcoylsilane comme agent de silylation dont le radical halo est choisi entre bromo et iodo, est mis à réagir avec le 1-radical partant 5-0-radical protecteur-2',3'-didésoxypentafuranose intermédiaire de formule F du ' stade (d) pour donner la 5'-O-radical hydroxy-protec- teur-2',31-didésoxyadénosine intermédiaire.

10. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé en ce que la réaction au stade (e) est exécutée dans un solvant non polaire choisi entre CHC13, CH2C12, C1CH2-CH2C1 et CC14.

11. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les réactions des stades (d) et (e) sont exécutées dans un seul réacteur par addition en succession d'un agent d'halogénation et d'un dérivé » * * * 22 d’adénine activé à l'intermédiaire du stade (c).

12. Procédé suivant la revendication 11, caractérisé en ce que l'agent d'halogénation est le bromotriméthylsilane et le dérivé d'adénine activé est une bis-silyladénine.

13. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'au stade (f), l'intermédiaire du stade (e) dont le radical protecteur est un radical benzoyle est mis à réagir avec du méthanol saturé d'ammoniac pour le déplacement du 5-0-radical hydroxy-protecteur.

14. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'au stade (g) l'enzyme, l'adénosine désaminase, est utilisée sous une forme choisie entre une solution de l'enzyme dans un milieu aqueux neutre et une préparation de l'enzyme immobilisée.