MC1271A1

MC1271A1 - Procede d'obtention d'un agent anti-tumoral

Info

Publication number: MC1271A1
Application number: MC791396A
Authority: MC
Inventors: Osswald Hans; Youssef Mahmoud
Original assignee: Deutsches Krebsforsch
Priority date: 1978-07-20
Filing date: 1979-07-19
Publication date: 1980-05-23
Also published as: DE2832009A1; DE2832009C2; AU4907679A; JPS5519270A; US4766149A; FI792218A7; ZA793603B; ATE11220T1; CA1151065A; AU529657B2; EP0007597B1; DD144864A5; NO792398L; EP0007597A1; DK305479A

Description

La chimiothérapie des tumeurs malignes exige laréal sation de grands progrès.Jusqu'à présent> le traitement de tumeurs a été effectué essentiellement à l'aide d'agents chimiothérapeutiques anti-néoplastiques parmi lesquels on peut mentionner notamment les antimétabolites, les alkylants (également appelés alcoylants) et les substances d ' intercalation, ainsi que des principes extraits de substances végétales. Etant donné que ces matières exercent une influence non seulement sur les cellules tumorales, mais aussi sur d'autres systèmes à profilération rapide de l'organisme, par exemple les centres hémopoïéti-ques, les formations dermiques etép.iderntiques.j les muqueuses et l'épithélium germinatif, le succès thérapeutique est limité par des effets indésirables.

L'amélioration de l'effet chimiothérapeutique sans accroissement de l'effet toxique est par conséquent un but à rechercher.

On vient de découvrir que l'utilisation de sar-cosine (N-méthylglycine) et de quelques-uns de ses dérivés parmi lesquels on peut mentionner les N-( alkyle inférieur.) -glycines dont la partie N-alkylique comprend 1 à 4 atomes de carbone, leurs amides d'acides et leurs esters alkyli-ques inférieurs ayant 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alkylique du reste ester, notamment à côté de la sarcosine proprement dite, les- dérivés tels que la N-éthyl-glycine, la N-n-propylglycine, leurs amides d-'acides ainsi que l'anhydride de sarcosine ou la créatinine, individuellement ou en mélange, comme agents anti-tumoraux dans le cas de diverses tumeurs, produit un effet favorable, notamment en association avec d'autres agents anti-tumoraux parmi lesquels on peut mentionner principalement les alkylants et les substances d'intercalation.

Ainsi par exemple, on obtient une élévation de plus du double de l'effet thérapeutique (anti-tumoral) de 1'adriamycine ou du cyclophosphamide dans le cas de tumeurs susceptibles de transplantation, sans accroissement des effets secondaires de toxicité, lorsqu'on injecte la

sarcosine un certain temps après 1'adriamycine ou le cyclophosphamide. Etant donné que la sarcosine, en tant qu'aminoacide, a une toxicité extrêmement faible, elle n'exerce pas d'effets toxiques à la dose qui doit être considérée en vue de la posologie pratique.

L'utilisation de sarcosine et des dérivés mentionnés de ce composé en association avec les agents chimiothérapeutiques anti-néoplastiques précités accroît en fait leur effet thérapeutique de façon suradditive sans élévation des effets secondaires de toxicité. L'administration est habituellement effectuée dans un intervalle de temps, et d'ordinaire, les agents anti-néoplastiques sont absorbés d'abord, et la sarcosine ou les dérivés de sarcosine sont absorbés ensuite* après un certain temps.

Mais l'administration simultanée des deux substances actives s'est aussi révélée avantageuse, notamment dans le cas d'agents d'intercalation.

Il est intéressant de remarquer également que des tumeurs à implantation intracérébrale (dans le cerveau), qui échappent à l'influence du cyclophosphamide, peuvent être guéries chez plus de 50 % des animaux d'essai par l'association du cyclophosphamide et de la sarcosine.

L'espoir d'une amélioration considérable des possibilités thérapeutiques dans le traitement des tumeurs est par conséquent permis.

Cette propriété de la sarcosine et'de ses dérivés semble être spécifique, attendu que, par exemple,la sarcosine, l'anhydride de sarcosine (sarcosine AH), le N-méthylglycinamide et le N-propylglycinamide produisent un effet anti-tumoral dans le cas de diverses tumeurs de transplantation, ce à quoi s'oppose le fait intéressant que la créatine, dérivé d'isourée de la sarcosine, est inactive tandis que la créatinine, qui est l'anhydride de la créatine, exerce un effet anti-tumoral.

L'invention concerne également un prodédé de production d'un agent anti-tumoral efficace, par combinaison (A) d'au moins un représentant du groupe comprenant la

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sarcosine, desN-(alkylô inférieur)-glycines ayant 1 à 4 atomes de carbone dans le résidu N-alkyle et leurs amides, leurs esters alkyliques inférieurs ayant 1 à 3 atomes de carbone dans le résidu alkyle de l'ester, l'anhydride 5 de sarcosine et la créatinine, avec (B) un agent antitumoral usuel, notamment du type appelé agent cytostati-que. Ces agents anti-tumoraux sont énumérés par exemple dans "Ullmann's Enzyklopaedie der Techn. Chemie", 4ème édition, volume 9, pages 705-714, sous le titre "Cytosta-10 tica- Un intérêt spécial est présenté sous ce rapport par les agents alkylants anti-néoplastiques, les agents d'intercalation et les anti-métabolites.

Le procédé consiste à faire entrer les composants (A) et (B) en contact intime;de préférence en solu-15 tion, généralement en quantités correspondant à un rapport de (A) à (B) de 2:1 à 50:1 parties en poids, notamment de 2:1 à 10:1 parties en poids. Le produit résultant, qui pourrait être considéré comme un produit'd'addition ou comme un sel double, est isolé d'une manière connue, par 20 exemple' par séchage- sous vide» lyophilisation' ou' tout procédé pratique, et formulé en unités posologiques renfermant une dose efficace, d'une manière usuelle, par exemple par encapsulage ou transformation en granulés, éventuellement en association avec des substances habituelles telles 25 que charges, excipients et/ou autres substances auxiliaires avantageuses.

En raison de la grande toxicité de la plupart des agents cytostatiques, il est souvent plus pratique de formuler les préparations conformément à leur toxicité 30 (DLj-q), en combinant les ingrédients (A) et (B) de telle manière que, généralement, une proportion représentant 1/10 à 1/20 de la dose DL^0 de (B) soit combinée avec une proportion de 1/20 à 1/100 de la dose DL^Q de (A) (DL^q exprimé en mg/kg) pour la réalisation d'unités posologi-35 ques. Les unités préférées laissent une grande marge de sécurité et renferment donc une proportion d'environ 1/10 à 1/20, notamment d'environ 1/15 de la dose DL^q de (B)

en combinaison avec une proportion allant de 1/20 à 1/40, notamment de 1/25 à 1/30,de la dose DL^-q de (A).

Il peut parfois être préférable d'encapsuler les composants (A) et (B) de telle manière que l'un de ces composants soit, en partie, encapsulé séparément dans une capsule à effet prolongé qui se trouve elle-même renfermée dans une capsule commune à la préparation totale, en sorte qu'une partie de la combinaison est libérée à l'organisme plus tàrd que l'autre. Des procédés permettant d'effectuer ce. type d'encapsulage • sont bien connus dans la pratique. Lorsqu'on procède de la sorte, une partie seulement des corps réactionnels (A) et (B) réagit avant l'encapsulage tandis qu'une partie de (A) ou de (B) est encapsulée séparément.

L'invention est illustrée par les exemples suivants. Les essais portant sur les animaux ont été effectués sur des souris ou sur des rats.

EXEMPLE 1

Effet de la sarcosine et des N-alkylglycinamides individuellement et en association avec l'endoxane utilisé comme autre composé anti-tumoral (les résultats sont donnés sur les tableaux I à III).

Une étude de l'effet de la sarcosine et de divers dérivés de cette substance dans la leucémie P 388 a conduit au résultat que des taux de guérison pouvaient être obtenus dans une proportion du même ordre que pour l'endoxane (cyclophosphamide) utilisé comme substance positive de référence, comme l'indique le tableau I. Le N-propanolglycinamide (série 2 du tableau I), qui apparaît comme substance de comparaison (de même que l'endoxane dans les séries 10 et 11) sur le tableau I, s'est montré peu actif en ce qui concerne le taux de guérison (5 animaux guéris sur 10) et le taux ILS de survie (pourcentage de survie de la série traitée par rapport à la série témoin), bien que cette substance soit un parent proche du N-propylglycinamide.

5

Au contraire, la sarcosine â la dose unique de 270 mg/kg^.s'est montrée comparable à l'endoxane utilisé comme témoin positif (voir séries 10 et 11) tant du point de vue du taux de guérison (11 animaux guéris sur 5 15) que du point de vue du taux de survie. En répétant l'administration de la dose de sarcosine de 270 mg/kg au bout de 48 heures (série 4), on a pu obtenir une légère amélioration des taux de guérison et de survie. L'anhydride de sarcosine, appelé sarcosine AH sur le tableau (séries 10 5 et 6) utilisé à une dose équimolaire comparativement à

la sarcosine, a exercé un effet chimiothérapeutique relativement plus faible» en une seule administration (série 5). Ce n'est que lorsqu'on administre deux doses d'anhydride de sarcosine espacées de 48 heures que les taux de guérison 15 et de survie augmentent. Au contraire, le N-méthylglycina-mide produit dès la première administration un effet optimal (série 7) qui ne peut plus être amélioré par l'administration de deux doses égales. Le N-propylglycinamide (série 9) exerce, de même que le N-méthylglycinamide, 20 par administration d'une dose, un effet chimiothérapeutique prononcé.

On peut faire varier la posologie de chaque substance individuelle. Des essais approfondis portant sur la sarcosine ainsi que sur son anhydride ont montré entre 25 temps que l'optimum d'activité pour la sarcosine est obtenu dans une plage posologique de 150 à 270 mg/kg- tandis que l'anhydride de sarcosine exerce son meilleur effet chimiothérapeutique dans la plage de 200 à 320 mg/kg. Des accroissements de la dose au-delà de la plage indiquée n'ont 30 plus permis d'améliorer l'effet chimiothérapeutique.

On doit également prendre en considération l'utilisation d'une dose équitoxique de sarcosine et de ses dérivés, comme l'indiquent les commentaires qui suivent. Dans les essais dont il est question dans le présent 35 mémoire, l'endoxane (cyclophosphamide) a été utilisé comme substance de comparaison, et il apparaît donc intéressant de faire une comparaison entre la dose de 30 et

respectivement 60 mg/kg d'endoxane utilisée en chimiothérapie et la dose létale 50 (DL 50) qui s'élève à 450 mg/kg pour l'endoxane? administré par voie sous-cutanée. En s'appuyant sur la dose minimale d'endoxane utilisée en thérapeutique, on trouverait un facteur 15, c'est-à-dire que la dose de 30 mg/kg d'endoxane multipliée par 15 correspondrait à la dose DL 50 d'endoxane. Pour la sarcosine, la dose DL 50 atteint 6500 mg/kg.

La différence entre la dose la plus faible de sarcosine (270 mg/kg) utilisée dans cet essai et la dose DL 50 de la sarcosine donnerait un facteur 23, c'est-à-dire que l'administration de 23 fois la dose de sarcosine utilisée en thérapeutique correspondrait à la dose DL 50 de sarcosine. Pour l'anhydride de sarcosine, on obtient une DL 50 de 8300 mg/kg. Dans le modèle d'essai utilisé (leucémie P 388), la sarcosine et ses dérivés offrent donc des avantages par rapport à l'endoxane, en raison de leur toxicité plus faible. Dans une étude comparable portant sur la sarcosine, son anhydride et la créatinine, sur le modèle de la leucémie L 1210» l'anhydride de sarcosine»'tout comme la créatinine, a même présenté un effet anti-tumoral à peine meilleur que celui de la sarcosine.

Comme on l'a déjà mentionné, l'invention concerne l'application très intéressante et par conséquent appréciable de la sarcosine et des dérivés indiqués en association avec d'autres agents anti-tumoraux, notamment, avec des alkylants et des substances d'intercalation; parmi les alkylants, on mentionne principalement le cyclophosphamide (endoxane) et la 1,3-bis-(2-chloréthyl)-1-nitroso-urée ainsi que la l-(2-chloréthyl)-3-fcyclohexyl)-1-nitroso-urée et d'autres dérivés de 2-chloréthyl-l-nitroso-urée et,

comme substances d'intercalation, on mentionne principalement 1'adriamycine, la dactinomycine, le chlorambucile et le melphalan. Pour l'association avec des métabolites, on doit mentionner principalement le méthotrexate.

La sarcosine et ses dérivés portant un groupe carboxyle libre ou de l'azote basique encore disponible

7

pour la formation d'un sel, peuvent être utilisés sous la forme d'un sel classique? par exemple de métal alcalin ou d'ammonium, ce qui en améliore habituellement la solubilité.

5 A titre d'exemple, on doit mentionner l'asso ciation de la sarcosine avec l'endoxane dans le carcinome de Lewis-Lung de la souris. Le carcinome de Lewis-Lung représente l'une des tumeurs les moins transplantables, qui se caractérisent par la formation de métastases. Le 10 carcinome de Lewis-Lung est un carcinome bronchique de la souris qui, après implantation dans la musculature de la cuisse gauche, conduit en un temps relativement court à une formation prononcée de métastases dans le poumon. Il en résulte un modèle de tumeur qui, par suite de la for-15 mation de métastases, correspond davantage au comportement biologique de tumeurs chez l'homme.

Comme le fait apparaître le tableau II, l'endoxane a été administré (séries 2 à 6) en une dose unique croissante (80, 120, 160 mg/kg) ainsi qu'en trois doses 20 de 80 mg/kg par semaine et 120 mg/kg par semaine. Dans le cas de l'administration d'une seule dose de 80 mg/kg d'endoxane (série 2), le taux de guérison est de 2 animaux sur 15 et le taux de survie est de 110 %.

Dans le cas de Irassociation de 80 mg/kg d'en-25 doxane avec 270 mg/kg de sarcosine, les partenaires de l'association se suivant à un intervalle de 6' heures (série 7), 10 animaux sur 15 sont guéris et le taux de survie s'élève à 187 %. Une comparaison de l'effet produit sur les taux de guérison et de survie dans le cas de l'asso-30 ciation endoxane-sarcosine (série 7) avec l'effet chimiothérapeutique produit par une dose double d'endoxane (160 mg/kg, voir série 5), montre que le taux de guérison (4 animaux sur 15) est nettement plus faible. Dans le calcul de la différence des nombres d'animaux guéris, qui 35 reçoivent 80 mg/kg d'endoxane (série 2) comparativement à l'association endoxane-sarcosine (série 7), par la méthode de Vierfelder, en posant 2a ^ 0,5, on trouve une

8

différence significative du point de vue statistique. L'importance de l'intervalle de temps entre l'administration d'endoxane et l'administration de sarcosine est visible dans les séries 8 et 9. Une prolongation à 8 heures 5 de l'intervalle de temps n'entraîne qu'une légère modification du taux de guérison et de survie (série 8). Par contre, le raccourcissement à trois heures de l'intervalle de temps (série 9) entraîne une nette réduction du taux de guérison et de survie.

10 Malgré les différences importantes, en ce qui concerne le temps de doublement de la tumeur ainsi que le temps de génération des cellules tumorales, entre le carcinome de Lewis-Lung et le carcinome d'Ehrlich ou le sarcome 180, l'intervalle de temps de 6 heures entre 1'en-15 doxane et d'autres alkylants est optimal et on peut parler d'un intervalle général d'environ 4 à 18 heures.

Le tableau III reproduit les résultats obtenus pour des associations entre l'endoxane (cyclophosphamide) et la sarcosine. Le traitement débute lorsque la tumeur 20 a atteint un poids moyen de 3,5 g, afin de réaliser des conditions expérimentales plus sévères. On choisit comme modèle de tumeur le carcinome d'Ehrlich de la souris et une durée de traitement de 4 semaines. A la dose de 120 mg/kg (série 2), l'endoxane ne permet pas de guérison 25 de la tumeur; toutefois, on observe une nette inhibition du développement. Si l'on double la dose d'endoxane à 240 mg/kg (série 3), 5 animaux sur 15 guérissent. La sarcosine en monothérapie (série 4) n'exerce pas d'effet anti-tumoral. L'association sarcosine-endoxane (série 5) 30 permet d'obtenir un effet curatif important (10 animaux guéris sur 15). Etant donné que l'endoxane a été utilisé dans toutes les associations à la dose de 120 mg/kg, il y a lieu de remarquer que l'association sarcosine-endoxane dépasse nettement l'effet curatif de la dose doublée d'en-35 doxane dans la série 3. L'administration simultanée de sarcosine et d'endoxane ne présente pas de différence importante par rapport à la monothérapie à l'endoxane r(série 2).

9

Au contraire, l'association endoxane-sarcosine produit une faible amélioration de l'effet curatif dans un intervalle de temps de 3 heures (série 7). L'association endoxane-sarcosine, selon laquelle les partenaires ont 5 été utilisés dans un intervalle de temps de 6 heures (12 animaux guéris sur 15), produit une nette différence par rapport à la série 3 (monothérapie à l'endoxane). Dans le cas de la prolongation de l'intervalle de temps (18 heures) entre l'administration d'endoxane et l'administration de 10 sarcosine, l'effet curatif diminue à nouveau. Des distinctions notables apparaissent en outre dans la comparaison de la différence de poids corporel entre le début et la fin de l'essai dans la série traitée à l'endoxane (voir dernière colonne) et les associations endoxane-sarcosine. 15 II apparaît nettement que la baisse de poids corporel dans le cas des associations endoxane-sarcosine est plus faible que dans le cas des séries à l'endoxane.

Comme le montre le tableau III, l'optimum de l'échelonnement dans le temps entre un agent néoplastique 20 connu et la sarcosine ou un dérivé de sarcosine va de

3 à 6 heures, étant donné que la perte de poids des animaux d'essai atteint alors un minimum.

EXEMPLE 2

25 Effet de 1'adriamycine, utilisée comme autre composé antitumoral, individuellement et en association avec la sarcosine (résultats donnés sur les tableaux IV et V).

Le tableau IV montre que 1'adriamycine à la dose de 2,5 mg/kg par voie intraveineuse (série 2) dans 30 le cas du sarcome 180 n'exerce pas d'effet curatif ni de réduction appréciable du poids moyen de la tumeur; le poids moyen de la tumeur est réduit de moins de 50 % par rapport au témoin (série 2). L'association simultanée d'adriamycine et de sarcosine (série 3) a pour effet que 35 6 animaux sur 10 sont guéris et que, chez les animaux guéris, la réduction du poids de la tumeur est appréciable.

Les résultats donnés sur le tableau V correspondent également à l'administration de 1'adriamycine à dose élevée (8 mg/kg) par voie intraveineuse dans le sarcome 180 (série 2). Pour cette dose, on assiste à une réduction importante du développement de la tumeur par rapport à la série témoin; l'effet curatif dans cette série (1 animal guéri sur 15) s'accompagne toutefois là aussi d'effets secondaires de toxicité (1 animal sur 15 meurt). Par contre, l'association sarcosine-adriamycine aboutit selon l'intervalle de temps à une élévation notable du taux de guérison (9 animaux sur 15) sans qu'il y ait de cas mortels dus à des effets de toxicité. On note une tendance similaire en comparant la différence de poids corporel dans les deux séries traitées. On doit alors remarquer que dans toutes les séries témoins, la différence de poids corporel entre le début et la fin de l'essai est relativement grande. Cela s'explique par la cachexie-tumorale qui résulte du développement continu, non inhibé, de la tumeur.

Comme d'autres essais l'ont montré, on peut, concevoir également une association avec d'autres agents chimiothérapeutiques anti-tumoraux (anti-néoplastiques), l'avantage de ces associations résidant également dans le fait qu'un effet néoplastique suradditif est atteint sans accroissement de la toxicité, attendu que la sarcosine et ses dérivés ne sont que peu toxiques. Cela-offre la possibilité de préparer des associations permettant l'administration simultanée de sarcosine et/ou d'un dérivé de sarcosine, notamment avec des substances à intercalation, l'association sarcosine-adriamycine étant particulièrement remarquable.

Les tableaux I, II et III suivants regroupent les essais décrits dans l'exemple 1 et les tableaux IV et V reproduisent les résultats obtenus dans les essais décrits dans l'exemple 2.

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TABLEAU I

N° de Substance série active

Dose in- Dose-

divi- totale duelle mg/kg mg/kg

Cas de Cas mor-guéri- tels son

ILS, Temps moyen % de survie

1

Témoin - -

15/15

7-

r 10,73

-:1

2

N-propanol-glycinami-de, voie sous.-cutanée

450

5/15

10/15-

16,03

10

- 12,7

-:i

3

Sarcosine, voie sous-cutanée

270

270 '

11/15

' 4/15

135,47 .

10

- 12,5

- i.

acres'

Sarcosine, . • •

voie Sous-

cutanée ' 270 270 13^15 2^15 151,22 10 - 12 - 14

48h Safcosine? 270 270

voie sous-

r-n f snpp

Sarcosine, .• .

AH, voie 260 260 6/15 9/15 85,15 13 - 13,1 - 1-

sous-cutanée g Sarcosine,

260 250 . .

tanee _ 8/15 ' 7/15 106,89 13 - 13,28 -

après 48h Sarcosine, ■ .

AH, voie ^ 260 260 '

sous-cutanee

7 • N-taéthyl- . '

glycinamide 318 318 9/15 6/15 112,48 10 - 12 - 13 voie sous- — cutanée

N-méthylgly-° cinamiae,

voie sous— °''0 cutanée après 48h N-rr.éthylgly-

cinainide, 313 31S

voie sous- cutanee

8/15 7/15 100,02 10 - 11,71 -

12

TABLEAU I (suite)

N ° de série

Substance Dose in-active • divi-duelle mg/kg

Dose totale rng/kg

Cas de guéri-■ son

Cas mortels •

ILS,

fV /O

Temps rnoy-de survie

9

N-propylglv-cinamide,

voie sous- 380 cutanée

380

9/15

6/15

113,73

10-12,3-15

•10

• Endoxane, voie 30 sous-cutanée

30

9/15

6/15

126,15

14-15,66-1

11

_Endoxane? voie qq sous-cutanée

60

10/15

5/15

107,51

14-18,4-2:

Souche :•

D2B6F1

Tumeur :

P 38S

Mode de transplantation:

intrapéritonéal

Date de transplantation :

16 mai.

1978

Début du traitement :

17 mai

1978

Nombre de jours de traitement :

1 fois par semaine

Durée du traitement :

1 semaine

Fin de l'essai :

9 juin

1978

Nombre d'animaux par série :

15

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TABLEAU II

N ° de série

Substance Dose in-• active •divi-duelle mg/kg

• Dose totale . mg/kg .

Cas de .guérison

Cas mortels "

ILS ?

0/

Temps mov de survie

1

Témoin • —

-

'15/15

• -

"26-27-29

2

Endoxane,voie sous-cutanée • 1 x traitement

80

2/15

13/15

•110,9

37-53,0-68

3 .

Endoxane,voie sous-cutanée, 120 1 x traitement

120

1/15

14/15

60,5

36-40,7-55

■4

Endoxane»voie 120 sous-cutanée

360 •

3/15 .

12/15

139,3

•47-59,6r61

5

Sndoxane, voie-sous-cutanée 1 gQ 1 x traitement

160 '

4/15

11/15

135,9

47-55,6-70

6

Endoxane,voie 80 sous-cutanée

240. ..

-

15/15

92,5

. 43-56,8-60

7

iprès ô h

Endoxanej voie sous-cutanée gg sarcosine,voie sous-cutaneé ^70

240 810 .

10/15

5/15 '

187,4

44-55,8-60

S

ipres

O "N U 11

Endoxane,voie sous-cutanée, 00 . - ou Sarcosine,

voie sous- 270

cutanée

240 810

9/15

6/15

169,7

36-50,1-60

Q

\

Endoxane ,• voie sous-cutanée gQ

240

5/15

10/15

147,1

47-55,5-60

*0 U

Inosine,voie 200 sous-çutanée

600

14

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids de la tumeur au début du traitement :

Date de transplantation :

Début du traitement :

Nombre de jours de traitement:

Durée du traitement :

Fin de l'essai :

Nombre d'animaux par série :

Carcinome de Lewis-Lung intramusculaire

1,2 g - traitement débutant au bout de 5 jours

1 mars 1978 6 mars 1978 1 fois par semaine 1 ou 3 semaines 30 avril 1978 15

TABLEAU III

N° de série

Substance active

Dose individuelle mg/kg

Dose totale • mg/kg

Cas de guérison • •

Cas mortels

Poids moyen de tumeur

Dif f erenc-de poids corporel moyen

1

Témoin

—

-

16,9

—21,3 %

2

Endoxane

' 120

■ 480

-

3,3 .

-15,3 %

3

Endoxane

. -240

960

5/15

-

' 2,4

-19,3 %

4

Sarcosine

280

1120

-

' -

14,7

-21,1 %

• 5

après 4 h

Sarcosine,_ voie sous-• cutanée

Cndoxane,voie sous-cutanée

280 ' 120

11.20 430

10/15

—

1,4

- 7,7 %'

6

Endoxane + Sarcosine

120 280

430

1120

2/15

- -

3,2

- 7,1 %

s après 3 h

Endoxane,voie sous-cutanée

Sarcosine

120 230

4S0 1120

4/15

-

2,4

- 4,5 %

8

après 6 h

Endoxane, voi.e sous-cutanée

Sarcosine

120 280

480 1120

12/15

-

2,5

- 2,8 %

9

a^rès 13 h

Endoxane,voie sous-cutanée

Sarcosine, voie, sous-cutanée

120

280

430 1120

6/15

-

3/1

- 7,3 S

16

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids moyen de tumeur au début du traitement :

Date de transplantation :

Début du traitement :

Nombre de jours de traitement:

Durée du traitement :

Fin de l'essai :

Nombre d'animaux par série :

Swiss

Carcinome diploïde d1Ehrlich intramusculaire 3,8 g

3 mars 1977 8 mars 1977

1 fois par semaine

4 semaines

4 avril 1977 15 souris

TABLEAU xV

N° de série

Substance Dose in- Dose active divi- totale duelle mg/kg mg/kg

Cas a a guérison

Cas iîior- Poids tels moyen de-tumeur

Différence de poids corporel . moyen

1

Témoin — '—

-

- - 14,7

-26,3 %

2

Adriamycine,

voie intra'- 2,5 •• . 10 veineuse " ■

• • -

8,9

-17v0 %

3

Adriamycine

+ "2,5 10 "

Sarcosine, „ „

voie intra- 200 • 800

vei npusp

6/15

2,9

-10,1 %

Souche :

Swiss

Tumeur :

Sarcome 180

Mode de transplantation :

intramusculaire

Poids de tumeur au début du traitement :

en (M

i—1

Date de transplantation :

21 janvier 1977

Début du traitement :

24 janvier 1977

Nombre de jours de traitement :

1 fois par'semaine

Durée du traitement :

4 semaines

Fin de l'essai :

26 février 1977

Nombre d'animaux par série :

15 souris.

'1 R

TABL2AU V

N ° de

Substance

Dose in

Dose

Cas de

Cas mor

Poids

Différence série

- active divi totale guéri tels moyen de de poids

duelle mg/kg son

tumeur coroorel

rng/k.g

- •

moyen

1

Témoin

—•

-

15,1

-14,3 %

2

Adriamycine,

-

•

.

vois intraveineuse '

. 8

24

1/15

5,4

- 9,9 % "

Sarcosine, voie

' intraveineusè "

Adriamycine, acres . . , '0 , voie intra—

180 . 8 -

540 .24

' 9/15

■ -

5,0 '

- 3,5 %

•

veineuse

• • • *

•

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids de tumeur au début du traitement

Date de transplantation :

Début du traitement

Nombre -de jours de traitement

Durée du traitement :

Fin de l'essai :

Nombre d'animaux par série:

Swiss

Sarcome 180 in tramusculaire

0,7 g

29 novembre 1976 1er décembre 1976

1 fois par semaine 3 semaines 28 décembre 1976 15 souris.

EXEMPLE 3

Comparaison de l'effet chimiothérapeutique de la sarcosifclé avec celui de l'anhydride de sarcosine (sarcosine AH)

ainsi que celui de l'endoxane dans le carcinosarcome DS à mode intramusculaire d'implantation.

Le traitement est entrepris dans le cas d'une tumeur dont la croissance a beaucoup progressé (poids de tumeur 4,5-5,0 g). La résistance de la tumeur à l'endoxane (cyclophosphamide) ressort de la série 2. La différence entre le poids de tumeur de la série témoin (série 1)

et de la série traitée à l'endoxane (28,6 g/20,1 g) est très faible.

Au contraire, la sarcosine administrée en une seule dose sous-cutanée de 180 mg/kg par semaine produit chez 8 rats sur 10 un effet curatif (série 3). Il est intéressant de constater que dans le cas de l'administration sous-cutanée 3 fois par semaine de 180 mg/kg de sarcosine? on ne parvient pas à obtenir une amélioration de l'effet curatif ou anti-tumoral. La sarcosine AH (anhydride de sarcosine) permet d'obtenir dès l'administration sous-cutanée d'une seule dose de 290 mg/kg un effet curatif chez 10 rats sur 10 (série 5), le même résultat étant obtenu dans le cas de l'administration sous-cutanée de 3 doses de 290 mg/kg de sarcosine AH (série 6). Il semble que la sarcosine et son anhydride interviennent au niveau des progéniteurs de la synthèse de la purine, et on --trouve alors/ en fonction du type de la tumeur, des différences dans le degré d'activité de la sarcosine et de son anhydride? lorsque les deux substances actives sont utilisées en quantités équimolaires. La grande sensibilité du carcinosarcome DS à la sarcosine et à son anhydride offre la possibilité d'expliquer le mécanisme biochimique d'action et d'apporter une solution au problème de l'absence de toxicité même à dose élevée, vis-à-vis de processus normaux de prolifération (par exemple les centres hémopoi'étiques de la moelle osseuse).

Les résultats sont reproduits sur le tableau VI.

20

TABLEAU VI

M3 de série

Substance active

Dose individuelle, rng/kg

Dose totale mg/kg

Cas de guérison

Cas mor

- Poids noyer: de '-.urneur

1

Témoin

-

—

-

28,6 - +

2

Endoxane, voie, intraveineuse

' 60

120

-

20,1

± 1,0

Sarcosine, voie sous-cutanée

180

360

8/10

19,6 i

4'

Sarcosine,voie sous-cutanée . 3 fois par se-- maine Lu »,Ka.,Mer.

ISO

• 720 '

8/10 »

' -

20,7 ' ± 1>5

5

Sarcosine, AH J voie sous- i cutan.ée . j

230

580 .

10/10

-

—

6

Sarcosine, AH,.,:

voie sous- i 290 cutanée i 3 fois par se-j

1160

10/10

—-

. —

maine,

Lu.,Ma.,Mer.

Souche : Tumeur :

Rat

Carcinosarcome DS

Mode de transplantation : Intramusculaire

Poids de tumeur au début du traitement : 4,5-5,0 g

Date de transDlantation: 12 mars 1969

Début du traitement : Durée du traitement : Fin de 1'essai :

Nombre d'animaux par série :

21 mars 1979 2 semaines 2 avril 1979

10

EXEMPLE 4

Comparaison entre l'anhydride de sarcosine et l'endoxane dans le carcinosarcome DS du rat.

On sait par de nombreuses indications données 5 dans la littérature (voir par exemple N. Brock "Expérimental Basis of Cancer Chemotherapy", Chemotherapy _7, 19 -50 (1976)), que le carcinosarcome DS n'est que peu influencé par l'endoxane. Dans l'essai de cet exemple, l'endoxane et l'anhydride de sarcosine ont été soumis à une épreuve 10 comparative. On doit mentionner le fait limitatif que l'endoxane est encore toléré à la dose de 80 mg/kg une fois par semaine, tandis que l'anhydride de sarcosine est bien supporté à la dose quotidienne de 2 x 2000 mg/kg par voie sous-cutanée. On constate que l'endoxane à la dose de 15 60 mg/kg produit une guérison de la tumeur dans le cas de

2 animaux sur 10 tandis que les autres animaux ne subissent pratiquement aucun ralentissement de croissance de la tumeur, comme le fait apparaître une comparaison des poids moyens de tumeur de la série témoin et de la série de 1'en-20 doxane (séries 1 et 2). L'anhydride de sarcosine produit,

à la dose de 290 mg/kg par sous-cutanée (3 fois par semaine) chez 8 animaux sur 10, une régression totale de la tumeur. L'effet anti-tumoral paraît insignifiant dans le cas des deux animaux non guéris. Les résultats sont récapitulés 25 sur le tableau VII suivant :

22

TABL3AU VII

M" de série

Substance active

Dose individuelle? mg/kg

Dose mg/kg

Cas de guérison

Cas mortel

Poids moyen de la tu-, rneur

1

Témoin

-

—

-

16,2 ± 1,48

2

Endoxane? voie sous-cutanée 1 fois par semaine

60

180

2/10

—

15,3 ± • 2/1

i

3

Sarcosine. AH, voie sous- • cutanée? 3 fois par semaine

290

2520

8/10

. —

12,4

± 1,2 |

i

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids moyen de la tumeur au début du traitement :

Date de transplantation :

Début du traitement :

Jours de traitement :

Durée du traitement :

Fin de 1'essai :

Nombre d'animaux par série:

Sprague-Dnwley Carcinosarcome DS Intramusculaire

1,5 g

15 février 1979 21 février 1979 lundi, mercredi, vendredi 3 semaines

9 mars 1979

10

EXEMPLE 5

Comparaison des effets chimiothérapeutiques de diverses doses VM 26 et d'anhydride de sarcosine ainsi que de leurs associations dans la tumeur d'ascite diploxde d'Ehrlich' à implantation intra-cérébrale (voir résultats sur le tableau VIII).

La substance VM 26,dérivée d'épipodophyllotoxine» c'est-à-dire le 4'-déméthylépipodophyllotoxine-thénylidène-glucoside, est utilisée dans la leucémie myéloïde aiguë,

dans les tumeurs neurogènes et dans les lyraphoraes malins et les résultats obtenus jusqu'à présent sont apparus intéressants notamment dans le cas des tumeurs neurogènes.

Les tests ont démontré ce qui suit : la substance VM 26, dont les applications cliniques comprennent les tumeurs cérébrales et la maladie d'Hodgkin, exerce' en fonction de la dose dans le cas de la tumeur d'ascite d'Ehrlich à implantation intracérébrale un effet chimiothérapeutique (séries 2 à 4) qui n'aboutit manifestement à un effet curatif prononcé (10 cas de guérison sur 15 souris) que pour l'administration intraveineuse de 12 mg/kg 1 fois par semaine. L'association de VM 26 (6 mg/kg) et d'anhydride de sarcosine (290 mg/kg) dépasse, lors d'une administration simultanée, l'effet curatif d'une monothérapie trois fois plus forte avec la substance VM 26.

(série 5). Tous les animaux guérissent. Au contraire, on observe une activité curative décroissante de'1'association VM26-anhydride de sarcosine lorsque l'intervalle de temps antre les partenaires de l'association atteint 3 ou 6 heures (séries 6 et 7). L'anhydride de sarcosine n'exerce aucune influence sur le taux de mortalité (série 8) dans le cas d'une administration unique, comme on l'utilise dans l'association avec la substance VM 26. De même, la dose d'anhydride de sarcosine administrée 5 jours consécutifs produit la guérison de 13 souris sur 15, tandis que l'administration unique de 1150 mg/kg d'anhydride de sarcosine produit la guérison de 8 souris sur 15. L'anhydride de sarcosine est toléré sans perte de poids dans

24

le cas de l'administration quotidienne sous-cutanée de 2 fois 2500 mg/kg pendant 14 jours, tandis que la substance VM 26 ne peut être administrée sans grave altération toxique qu'une fois par semaine (au total 14 jours) à la 5 dose de 18 mg/kg par voie intraveineuse. Il apparaît intéressant, à côté de l'effet combiné de l'anhydride de sarcosine avec la substance VM 26, que lors de l'administration unique d'une dose élevée ou de l'administration quotidienne d'anhydride de sarcosine» un effet curatif dis-10 tinct peut être obtenu.

25

TABLEAU VIII

N U.3

série

Substance active

Dose individuelle? mg/kg

Dose totale mg/kg

Cas de guérison

Cas mortels

■ Temps moye de survie

!

1

Témoin

-

0/15

15/15

•'6— 6,5--Ô

2

VM 26 - voie intraveineuse

6 "

12

3/15

12/15

6-9,3-13

3

VM 2o - voie intraveineuse

12

• 24

4/15

11/15

i

7- 9,7-13

• 4

Vr»i 26 — voie intraveineuse

18

36 * "

10/15

' 5/15

7-11,8-13

5

VM 26 - voie intraveineuse + Sarcosine AH voie intravei- • neuse

6

290

-

12 580

15/15

0/15'

i 1

1

/«■* o

VM 26 - voie j intraveineuse ; 6 3 h plus tard . j Sarcosine AH voi;e290 sous-cutanée j

12 580

15/15

2/15

!

J *

J

: 6- 7,5- 9

7

VM 26 - voie in-j ^ • traveineuse , 0 6 h plus tard j Sarcosine voih290 sous-cutanée |

12 580

9/15

6/15

■ 6-10,1-13

1

i i

o |Sarcosine AH ° ivoie sous-cutané

!

290

w

550

0/15

15/15

1

: 6- 7,5- 9

Sarcosine .AH

V O.1 c? S OU S - OU C

2 -3 290

29 G0

15/15

9/1 ^

— ^ yV — ^

r : i

1 20 Sarcosine 'H J H50 ■voit; sous-cutanée j \

i

}

9 ~ r 0 | P/T;

1

i i

7/15

- -1 "V '

26

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Date de transplantation :

Début du traitement :

Nombre de jours de traitement :

Durée du traitement

Fin de l'essai :

Nombre d'animaux par série:

Souris Swiss

Carcinome diploïde d'Ehrlich intracérébral

6 mars 1979

7 mars 1979

1 fois par semaine

2 semaines 13 mars 1979 15

27

EXEMPLE 6

Comparaison des associations de la substance VM 26 avec la sarcosine et avec l'anhydride de sarcosine (sarcosine AH) dans la tumeur d'ascite diploïde d'Ehrlich à implan-5 tation intramusculaire.

sarcosine et son anhydride sont utilisés à des doses équi-molaires, on a constaté que contraitement aux observations faites dans le cas de la tumeur d'ascite d'Ehrlich à 10 implantation intracérébrale, l'effet optimal apparaît pour un intervalle de temps des partenaires de l'association (VM 26 avec la sarcosine et l'anhydride de sarcosine)de 6 heures. La sarcosine et son anhydride n'exercent pas d'effet anti-tumoral notable lorsqu'ils sont utilisés une 15 fois par semaine à la même dose que dans l'association.

La substance VM 26 en monothérapie occasionne dans la plage posologique utilisée une inhibition de la tumeur qui croît avec la dose (séries 2 à 4). L'association VM 26 + sarcosine semble être nettement supérieure à la monothérapie par 20 la substance VM 26 tant du point de vue de l'inhibition de la tumeur que de celui du taux de guérison (séries 5 à 7),et on peut alors noter une élévation du taux de guérison même pour l'association à dose croissante de VM 26. Des résultats analogues peuvent être obtenus avec l'asso-25 dation de VM 26 et d'anhydride de sarcosine, le taux de guérison s'élevant manifestement davantage dans la prtie inférieure et la partie moyenne de la plage posologique que dans le cas de la dose maximale de VM 26 (séries 8 à 10). D'autres études doivent indiquer si la sarcosine ou 30 son anhydride exercent un effet curatif dans le cas de la tumeur d'ascite d'Ehrlich à implantation intramusculaire lorsqu'une posologie plus forte ou une administration quotidienne est utilisée.

Dans cette étude comparative, dans laquelle la

Les résultats sont récapitulés sur le tableau IX

35 suivant.

28

TABLEAU IX

' ! '

série

Substance active

Dose individuelle, mg/kg

Dose totale mg/kg

Cas de guérison

Cas mortels

Poids moyen ce tumeur

Différen moyenne poids co norel

1-

Témoin

-

13,9 ± 3,2

- 12

2

VM 26 — voie intraveineuse

5

15

0/15

5,8 ± 1,9

3

V'-' 26 - voie' intraveineuse

10

30

0/15

3,1 ±

4

VM 2 5 - voie intraveineuse

15

45 '

1/15

' 0/15

2,6 ± 1,5'

5

VM 26 - voie incraveineuse 6 n plus tard sarcosine;voie sous-cutanée

5

178

'534

0/15

1,8 ±0,9

6

VM 26 - voie intraveineuse 5 h plus tard sarcosine,voie < sous-cutanée

10 178

• 30 534

5/15

0/15

.0,9. ± 0,5

n i

VM 26 - voie intraveineuse 6 h plus tard sarcosine,voie sous-cutanée

15 178

45 534

13/15

0/15

0,3 ±

8

V." 26 - voie intraveineuse o h plus tard sarcosine,voie sous-cutanée

5

284

15

852

3/15

0/15

1,0' Z 0,4

O

j

VM 26 - voie incravoinause i J h plus card . ' •; sarcosin-2. voie j sous-cutanée I

10 284

30 852

3/15

0/15

0.- 5 ± 0,3

;VM — voie d:;v. ;.\ivt-.trieuse o rlus tard

!G a COSlil * V O j_ -

jsous-cu tanée

"t'D

r. /-: - 1 W -? !

O

^ • O

Z. 0 > 2

29

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids moyen de tumeur au début du traitement :

Date de la transplantation:

Début du traitement :

Nombre de jours de traitement :

Durée du traitement :

Nombre d'animaux par série:

Souris Swiss

Carcinome diploïde d'Ehrlich intramusculaire

1,5 g

9 mars 1979 12 mars 1979

1 fois par semaine 3 semaines 15 souris.

30

EXEMPLE 7

Comparaison des effets du cis-platineet de la sarcosine individuellement et en association (résultats reproduits sur le tableau X).

5 Le cis-platine(cis-dichlorodiaminoplatine?

abréviation CPDD)? a pris une importance particulière à cause des longues périodes de rémission (par exemple jusqu'à 5 ans après la fin du traitement) qu'il a permis d'obtenir dans le cas de tumeurs du testicule? d'ostéo-10 sarcomes et de carcinomes de la prostate.

Dans le cas du carcinome diploïde d'Ehrlich? établi par l'implantation intramusculaire chez des femelles de souris Swiss? on effectue 4 jours après la transplantation de la tumeur? pour un poids moyende tumeur de 2,5 g, 15 le traitement au cis-platine à différentes doses ainsi que le traitement avec des associations de cis-platine et de sarcosine. On utilise comme témoin positif une dose de 120 mg/kg d'endoxane par voie sous-cutanée? que l'on administre de même que les diverses doses de cis-platine in-20 jectéespar voie intraveineuse ainsi que leurs associations avec la sarcosine à des intervalles de 14 jours. Les résultats reproduits sur le tableau suivant montrent que l'endoxane (série 2) produit un effet anti-tumoral prononcé. Le cis-platine (séries 3 à 5) produit à la dose de 8 mg/kg 25 un effet anti-tumoral important et une régression totale de la tumeur. L'association simultanée de cis-platine et de sarcosine (séries 6 à 8) se montre supérieure à la monothérapie au cis-platine. En fonction de la dose utilisée de cis-platine? on observe un net accroissement de 30 l'effet anti-tumoral et du taux de guérison. Même la dose de 4 mg/kg de cis-platine permet d'obtenir en association avec la sarcosine (série 6) une inhibition du développement de la tumeur de plus de 50 %, pour aboutir finalement à la guérison en utilisant 8 mg/kg de cis-platine avec la sar-35 cosine (série 8) dans le cas de 10 animaux sur 15 et pour produire dans le cas des animaux non guéris une inhibition de la tumeur plus intense que le cis-platine à dose égale

31

en monothérapie (série 5). La sarcosine n'exerce pas d'effet chimiothérapeutique en monothérapie dans un intervalle de 14 jours (série 9). Il faudrait alors des doses beaucoup plus fortes dans un intervalle de temps 5 plus court. Des essais sont encore en cours pour démontrer dans quelle mesure, à côté de l'amélioration de l'effet chimiothérapeutique du cis-platine par la sarcosine, d'autres effets jouent encore un rôle (réduction du dépôt de platine dans les tubules du rein, qui constitue l'un des 10 principaux problèmes liés à l'utilisation du cis-platine).

3 2

TABLEAU X

À'0 de. série

Substance active

Dose individuelle, mg/kg

Dose totale mg/kg

Cas de guérison

Cas mortels

Poids moyen de tumeur,

g

Différenc de poids corporel moyen

1

Témoin

-

14,3 ± 5,6

• - 23,2 :

2

Endoxane, voie sous-cutanée

120

o

VD

-

4,7 ± 2,3

4,4 :

3

CPDD - voie intraveineuse

4

12

-

. —

11,1 ± 4,1

- n,6 :

4 ,

CPDD - voie intraveineuse

6

18

/

—

7,8" ± 3,4

- 9,1 :

5

CFDD — voie intraveineuse

S

24

1/15

-

1+

-Ê-

00

«N

00 J

6

CPDD + sàrcosin< voie Intraveineuse

173

*12 554

-

H-

cr\ Ul co

- 3,8

7

CPDD + sarcosim voie intraveineuse

- 6 178

18 534.

2/15

—

4,5 ± 5,2

- 3,2

i

Cj j

CPDD + sarcosinij voie intra- j veineuse

3

173 '

24 5 J'r

10/15

-

i

2,4 + 2,1

4 n y — i-

s. t i

i t

i

Sarcosine i

173

1 !

i

1

i

534 !

!

I

1

-

i i

117 2

± 3,3

i

!

- ' 2

33

Souche :

Tumeur :

Mode de transplantation :

Poids de tumeur au début du traitement :

Date de la transplantation:

Début du traitement :

Nombre de jours de traitement :

Durée de traitement :

Fin de l'essai :

Nombre d'animaux par série:

Swiss

Carcinome d'Ehrlich intramusculaire

2,5 g

12 janvier 1979 16 janvier 1979

1er, 3ème et 5ème jour de la semaine

6 semaines

19 février 1979

15 souris.

34

Préparation 1.

En opérant à la température ambiante, on ajoute sous agitation énergique une solution aqueuse saturée de sarcosine, contenant 28 g de ce composé, à une solution de 12 g d'endoxane dans 500 ml d'éthanol. On continue d'agiter énergiquement le mélange réactionnel puis on le lyophilise au bout de 10 à 15 minutes.

Le résidu est ensuite pressé de manière connue en comprimés, les comprimés sont transformés en une pilule et la pilule est encapsulée ou formulée en une préparation injectable. La dose unitaire contient une quantité d'endoxane de 50 mg, qui est la quantité usuelle pour ce composé, en association avec 117 mg de sarcosine.

Préparation 2.

En suivant le mode opératoire de l'exemple 1, on fait réagir 18 g de sarcosine sous la forme d'une solution aqueuse concentrée, avec 8 g d'adriamycine dissoute dans 500 ml ' d'.éthanol. Le produit d'addition est isolé par lyophilisation. Une dose unitaire contient le complexe d'adriamycine et de sarcosine dans un rapport de 50 mg d'adriamycine pour 1125 mg de sarcosine.

Préparation 3.

On ajoute 29 g d'anhydride de sarcosine dans 250 ml d'eau à une solution éthanolique à 2 %'de 6 g de VM 26. Au bout de quelques minutes d'agitation énergique suivie de repos» on lyophilise la solution résultante et on la formule d'une manière connue en une préparation injectable contenant, par dose unitaire, 30 mg de VM 26 en association avec 1450 mg d'anhydride de sarcosine.

Préparation 4.

On ajoute en agitant énergiquement à une solution aqueuse de 178 g de sarcosine dans 500 ml d'eau, 8 g de cis-platine sous la forme d'une solution aqueuse à 1,5 %

35

qui contient en même temps 0,9 % de NaCl. Après avoir agité énergiquement pendant encore 5 à 10 minutes, on lyophilise le produit de réaction et on le formule d'une manière connue en une préparation injectable contenant 5 80 mg de CPDD, en association avec 1780 mg de sarcosine par dose unitaire.

Tous les pourcentages sont exprimés en poids.

Claims

36 RESUME L'invention a pour objets : I. Un procédé de production d'un agent antitumoral efficace, caractérisé par les points suivants 5 pris séparément ou en combinaisons :

1. Il consiste à combiner (A) au moins une substance choisie dans le groupe comprenant la sarcosine, des N-(alkylC inférieur)-glycines ayant 1 à 4 atomes de carbone dans le résidu N-alkyle, leurs amides, leurs esters

10 alkyliques inférieurs ayant 1 à 3 atomes de carbone dans le résidu ester alkylique, l'anhydride de sarcosine et la créatinine, avec (B) un agent anti-tumoral usuel, par mise en contact intime d'une quantité efficace de chacun des composants (A) et (B), puis à isoler le produit d'addi-15 tion résultant.

2. La mise en contact intime s'effectue dans une solution d'au moins l'un des composants (A) et (B)

et le produit résultant est isolé d'une manière connue.

3. Les composants (A) et (B) sont combinés

20 dans un rapport de 2:1 à 50:1 et notamment de 2:1 à 10:1 parties en poids.

4. Une quantité allant de 1/10 à 1/20

de la dose DL 50 du composant ( B) est combinée avec une quantité allant de 1/20 à 1/100 de la dose DL 50 du com-25 posant (A) pour former une unité posologique.

II. Utilisation de sarcosine et/ou'de dérivés de sarcosine comme substances anti-tumorales, caractérisée par les points suivants pris séparément ou en combinaisons.

1. La sarcosine et/ou ses dérivés sont éven-30 tuellement en association avec d'autres composés antitumoraux.

2. La sarcosine, des N-(alkyleinférieur)glycines ayant 1 à 4 atomes de carbone dans la partie N-alkylique; leurs amides d'acides et leurs esters alkyliques inférieurs

35 ayant 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alkylique du reste ester ainsi que l'anhydride de sarcosine ou la

37

créatinine, sont utlisés individuellement ou en mélange.

3. La N(alkyleinférieur)glycine est la N-éthyl-glycine ou la N-n-propylglycine.

4. D'autres composés anti-tumoraux tels que des alkylants anti-néoplastiques, des substances d'inter-calation et/ou des anti-métatolites sont associés à la sarcosine et/ou à ses dérivés.

5. La sarcosine et/ou ses dérivés sont utilisés en association avec d'autres composés anti-tumoraux connus, simultanément ou selon un intervalle de temps.

6. L'intervalle de temps est de 4 à 18 heures après l'administration de l'autre composé anti-tumoral connu.

III. Un procédé de production de médicaments exerçant un effet anti-tumoral et/ou un effet synergique sur l'activité de composés anti-tumoraux connus, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser des N-(alkyleinférieur) glycines ayant 1 à 4 atomes de carbone dans la partie N-alkylique, leurs amides d'acides et leurs esters alkyliques inférieurs ayant 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alkylique du reste ester ainsi que l'anhydride de sarcosine ou la créatinine individuellement, en mélange ou en association avec des composés anti-tumoraux connus.

IV. Une préparation en association destinée à l'utilisation suivant le paragraphe II, caractérisée en ce qu'elle contient de la sarcosine ou un -dérivé de sarcosine ou de la créatinine* en association avec une substance anti-néoplastique d ' intercalation à des doses d'emploi classique dans le domaine pharmaceutique, éventuellement avec des supports et des substances auxiliaires usuels.;V. Des compositions à effet anti-tumoral et/'ou exerçant un effet synergique sur l'activité de composés anti-tumoraux connus, caractérisées en ce qu'elles contiennent comme composant actif des N-( alkylE inférieur ) -glycines ayant 1 à 4 atomes de carbone dans la partie N-alkylique, leurs amides d'acides et leurs esters;38;alkyliques inférieurs ayant 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alkylique du reste ester ainsi que de l'anhydride de sarcosine ou de la cr.éatinine individuellement, en mélange ou en association avec des agents anti-tumoraux connus.;3§> pag&6;Mo£& siayê-i : Mut f";Moti ajoute* : Hat

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