MC320A1 - Procédé de préparation de l'hydroxocobalamine - Google Patents

Description

1 - DESCRIPTIF ET DESSINS

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BREVET D*INVENTION

PROCEDE DE PREPARATION DE L'HYDROXOCOBALAMINE

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DEMANDEURS! Monaieur Robert COTE Monsieur Jean BOIGE

La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation de 1'hydroxocobalaminé ou vitaraine B 12 à partir de la oyaaocoba-• lamine*

Dana ce procédé la transformation de la cy&uo-cobalnmine eat effectuée par hydrogénation suivied'une oxydation*

Des brevets antériecra font état d'une méthode d'hydrogénation de la oyanooobalaminé, mais dans oeux-oi on utilise l'hydrogène comprimé ainsi que des catalyseurs coûteux, ce qui nécessite un équipement compliqué en raison des dangers présentés par ce procédé d'hydrogénation» A/1

(2)

Dons le méthode que nous avons mise au point» l'hydrogénation est effectuée en faisant agir l'hydrogène naissant "in situ" à la température ambiante et sans l'aide d'un catalyseur sur une solution de oyano-cobalaminé»

(l5) La solution de cobalamine réduite est ensuite oxydée par barbotage d'air pour former de l'hydroxocobalaiaine»

L'hydroxooobulaminé est ensuite isolée*

a) soit par cristallisation au seia d'un liquide approprié

b) soit par un procédé chrom&tographique»

(20) Dans tous les cas les liquides utilisés tant pour la cristallisa tion que pour.1'élution sont des mélanges d'eau et de tétrahydrofurane ou de dioxane»

La formule de ces mélanges a été déterminée en tenant compte de la différence de solubilité de 1'hydroxocobalaminé dan» l'eau et

(35) dans le tétrahydrofurane ou le dioxane ainni que dons leurs solutions aqueuses à différentes concentrations*

La présente invention permet ainsi d'obtenir de l'hydroxocobala-mine très pure, & un prix de revient plus bas qu'avec les procédés connus jusqu'à présent et cela beaucoup plus rapidement»

(3°) PREPARATION DE L'ilYDROXOCODALAMINE

Le nouveau procédé, objet du présent brevet, consiste essentiellement à faire passer une solution de cyanocob&laminé dans un acide minéral convenablement choisi (flcl, ïiBr, HI, SÛ4H2) sur une colonne constituée par du zinc méiallique granulé»,Ba réglant le passage de

(36) la solution acide & une vitesse convenable, l'hydrogène naissaut agit sur la eyanocobalaminé en la réduisant, le cobalt devenant divalent en libérant le groupement CN® On oxyde immédiatement à la sortie de la colonne par barbotage d'air et on obtient ainsi

1'Hydroxocobalaminé»

<9)

La solution ainsi obtenue est débarrassée des sels métalliques solubles par aotion d'une base minérale appropriée (HaOH, NH3, Ba (OH)^ etc, après filtration le liquide est concentré sous vide et amené à l'état d'extrait sec» Cet extrait, repris par «ne petite quantité d'alcool méthylique donne une solution rouge que l'on évapore pour obtenir 1'hydroxocobalamine brute#

ISOLEMENT ET PURIFICATION DE L*IIÏDRQXQCOBALAMINE

A) - Ce produit brut redissout dans l'eau distillée privée de C02 donne une solution qui est additionnée d'acétone en quantité suffisante de fagon à obtenir une concentration acétonique de 85^ et cette solution hydro-acétonique est abandonnée & basse tempéra^» ture à la cristallisation»

Les cristaux sont reoueillis par filtration, lavés à l'acétone et à l'éther, puis sèchés sous vide pendant quelques heures»

B) - Uno autre méthode d'isolement et de purification de l'hydro-xocobalamine consiste à faire passer la solution d'hydroxocobaloiaine brute obtenue plus haut sur une colonne d'adaorption à base d'aiumxno après addition de tétrahydrofurane, de façon & obtenir une concentration de 80$ de oe dernier corps» L'hydroxocobalaminé est adaorbée par la colonne et l'élu Mon est effectuée au moyen d* un mélange à parties égales d'eau et de tétrar-kydrofurane» On recueille la portion colorée de l'éluat qui est riche en hydroxocobal aminé » on lui ajoute 9 parties de tétrahydrofurane et on l'abandonne à basse température à la cristallisation»

Sans les opérations précédentes le tétrahydrofurane peut être remplacé par le dioxane, les solutions aqueuses de oe corps étant alors à 20$ et à 50$« « âl

(4)

De toute façon les cristaux d*hydroxooobalamine sont recueillis, lavés et sèohés comme indiqué plue haut#

C) — Procédé do purification plus poussé®

Une purification plus poussée de 1'hydroxocobalamine a été mis également au point*

L'éluat à la sortie de la colonne d*aluuine obtenu plus haut est acidifié par un acide (ïïol, S04H2 eto*.*) puis additionné de 9 volumes de tétrahydrofurane* On agite quelques heures et on laisse oristalliser à basse température*

11 se forme des cristaux rouges qui sont recueillis par filtra/-tion puis sont lavés à l'acétone et à l'éthore Ils sont ensuite redissouts dans l'eau distillée et cette nouvelle aolution est passée sur une colonne "retardion" qui fixe les impuretés mais pas la vitamine* La solution ainsi purifiée est passée alors sur une colonne contenant une résine basique échangouse d'ions, puis débarrassée de C02 par un courant d*azote pur®

On ajoute alors 9 volumes de tétrahydrofurone, la solution eut placée dans un flacon fermé, sous atmosphère d'azote, ensemencée de quelques cristaux d*hydroxooobalamine et mise au réfrigérateur* Il se forme des cristaux qui sont recueillis par filtration sous courant d'azote, puis lavé«à l'acétone et à l'éther et enfin sèchés sous vide* Ils sont conservés à basse température sous azote, dans des flaoons bien bouchés*

EXEMPLE 1

0 gr* 20 de cyanocobalamine sont dissouts dans 50 cc d'Hcl N/lO cette solution est passée sur une oolonne de 100 cc contenant 40 grammes de zinc métal granulé, on lave deux foie la colonne avec 10 cc d'eau distillée

(#)

(95) Les liquides sont recueillis dans un flacon et on y fait barboter un courant d'air»

L'oxydation par l*air est poursuivie pendant 10 minutes après réoeption de la dernière eau de lavagef la solution est alors rouge rubis»

(lOO) On neutralise par Na OH N/lO on agitant, on filtre et le

A

filtrat est évaporé sous vide à basse température" jusqu'à siccité* On obtient ainsi de l'hydroxocobalomino solide*

Ce produit est alors dissout dans 20 oo d'eau déminéralisée privée de C02* On y ajoute 20 oc d'acétone et laisse au réfri-(105) gératour pendant 24 Heures*

L'hydroxocobalamine cristallise, on recueille les cristaux que l'on lave aveo quelques centimètres cubes d'acétone puis d'éther, puis on les sèche sous vide à température ambiante*

EXEMPLE II

(110) On opère comme dans l'exemple I, la solution oxydée par l'air est amonéo à pli 0 à l'aide de soude caustique N/'îO*

On ajoute 4 volumes de tétrahydrofurane et l'on verse la solution sur une colonne chromatographiquo d'alumine*

La colonne est élùée au moyen d'un mélange & parties égales (llô) d'eau et de tétrahydrofurane*

On recueille la portion colorée riche en hydroxocobalamine* L'éluat rouge fonoé est additionné do 9 volumes de tétrahydrofurane puis ensemenoé avec quelques cristaux d'hydroxocobalamine mis au réfrigérateur jusqu'à cristallisation .■•complète. (120) Les cristaux sont recueillis par filtration puis sont lavés h l'acétone et à l'éther et sèchés;sous vide à température ambiante

i-, .A'-ii-

EOMPLE III

On hydrogèçe et on traite Ogr.2) de cyanooobalaminé ooume don» l'exemple I et on chromatographie la solution sur colonne d'alumine comme done l'exemple II.

Le riche éluat obtenu est acidifié et amené à pH 1,2 au moyen do Bel 6N puis on y ajoute © volume» de tétrahydrofurane. ce mélange est agité pondant 3 heure» dans an cristallisoir placé dans l'eau glacée*

Les cristaux rouges de chioro-oobalaœino formés sont recueillis par filtration et lavés à. l'acétone et à 1 'éther.

Ces cristaux sont dissouts dons l'eau distillée & raison de 50 cc d'eau pour Ogr* 20 de cristaux.

La solution ainsi obtenue est passée sur deux colonnes réunies, (l3B) la première étant une colonne à résine "retardion" et la seconde une colonne à résine échangouse d'ions* La vitesse de passage est de Bcc par minute. Lorsque le liquide commence à devenir rosé on recueille la solution, et on lave les colonnes deux fois avec 10 co d'eau distillée, pendant toute la durée de l'opération un (140) courant d'assoie pur est envoyé dons le flacon de réception*

On ajoute 0 volumes de tétrahydrofurane et le flacon bouché, la solution étant sous azote, le tout est laissé au réfrigérateur pendant 24 Heures*

Les cristaux qui se sont formés sont recueillis par filtration, (145) toujours sous azote, puis lavés à l'acétone et à 11éther et sèchén sous vide.

(125)

(130)

Claims (1)

1. (1)

   RESUME

   OC—Ct—W mmaamrn W»» 8»

   Le présent brevet concernes

   1®) Une méthode nouvelle de production d'hydroxocobalamine à (i50) partir de cyano-cobalamine par réduotion au moyen de l'hydrogène naissant obtenu par passage d'une solution de oyanocobalamine en milieu acide dans une colonne contenant du ssino, puis par oxyda»

   tion du liquide obtenu par barbotage d'air*

   S0) Une technique de séparation et purification de l'bydroxo-(155) cobalcunine produite par cristallisation dans 1*acétone*

   3*) Un procède de purification del'hydroxocobalamine par chromatographie sur aluraiEsau moyen de solutions aqueuses à différents titres de tétrahydrofurane ou de dioxane*

   4») Un procédé de purification complémentaire de l'hydroxo-(l0O) cobaieunine à partir de 1*éluat chromatographie' complexé à un acide pour une première cristallisation* Le produit obtenu après dissolu»» tion dans l'eeu passe sur une double colonne "retardion" ©twéchangeuso d'ions" puis on oristallise dans un solvant

   La présente description se compose de 7 feuillets numéros de t & 7* £<wvo rwv^~<n ) WÀ ^

   Monsieur COTE Robert Louis Florentin —

   Eden Park- Boulevard do Belgique & MONACO (Ptê)

   Monsieur BOIGE Jean

   SE, Avenue Vercingétorix à ÀULNAI SOUS BOIS (S* & 0*}