MC451A1

MC451A1 - Perfectionnements aux dispositifs pour l'étude des caractères fermentatifs des cellules vivantes

Info

Publication number: MC451A1
Application number: MC479A
Authority: MC
Original assignee: Promoveo
Priority date: 1963-02-06
Filing date: 1964-01-24
Publication date: 1964-11-27
Also published as: LU45262A1; CH432729A; OA00046A; DE1200478B

Description

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"Perfectionnements aux dispositifs pour l'étude des caractères fermentatifs ,

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des cellules vivantes"

Société à Responsabilité limitée : "PROMOTSO"

La présente invention est relative à des perfectionnements apportés aux dispositifs destinés à être utilisés pour l'étude des caractères fermentatifs des cellules vivantes, telles que bactéries, protozoaires, algues, champignons microscopiques, 5 cellules en culture, etc..»

On sait que pour vérifier en laboratoire l'utilisation ou la non-utilisation métabolliques de substances chimiques par des cellules vivantes, on a parfois utilisé des dispositifs constitués par un disque en matière absorbante, imprégné de la substan-

Pour l'usage, les dispositifs de ce genre sont placés sur un support hydratant et nutritif auquel est ajouté un réactif indicateur approprié, les cellules vivantes à étudier étant déposées sur la surface dudit support. Oe dernier, le plus souvent constitué par un gel nutritif d'agar-agar, permet simultanément la multiplication des cellules, l'humidification du dispositif contenant la substance chimique à étudier et la diffusion dans ledit support de cette substance et de ses produits de dégradation. On conçoit que dans ces conditions les résultats de l'étude soient longs à obtenir et que leur lecture soit délicate.

Les perfectionnements objets de la présente invention ont

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pour but de permettre la réalisation d'un dispositif du genre précité qui ne comporte pas les inconvénients des dispositifs usuels.

•^e dispositif suivant l'invention est principalement remarquable en ce qu'il comprend deux disques en matière absorbante solidaires l'un de l'autre et imprégnés de la substance chimique à essayer et d'un réactif indicateur approprié, le premier de ces disques étant recouvert d'une couche de matière étanche en vue de réaliser des conditions de fermentation anaérobie tandis que le second est destiné à être.mis.en contact avec les cellules vivantes à étudier de façon à former support pour la diffusion du réactif indicateur précité contenu dans le premier disque après réaction de ce rëâctif avec les produits de dégradation de la substance chimique.

On notera que le terme "disque" doit être pris dans un sens très large pour désigner toute surface découpée dans une feuille et présentant en plan un profil quelconque, sans limitation au seul profil circulaire.

Conformément à un premier ràode de mise en oeuvre de l'inven-

tion, la substance chimique à essayer est renfermée, à l'état sec, à l'intérieur du second disque. Les deux disques, après imprégnation et séchage, sônt assemblés l'un à l'autre en superposition, ou en juxtaposition au moyen d'une colle appropriée, prévue perméable de manière à permettre la diffusion de réactif indicateur.

Suivant un autre mode de mise en oeuvre de l'invention, la substance chimique à essayer est renfermée à l'intérieur du premier disque, en même temps que le réactif indicateur. On comprend que si le second disque est réalisé en une matière absorbante susceptible de s'imbiber d'une quantité suffisante de li-

*

quida, il peut directement tenir lieu de support hydratant, la suspension des cellules vivantes à étudier étant disposée sur la surface libre de ce disque en vue de l'imbiber. Ici encore les deux disques peuvent être assemblés l'un à l'autre en'superposition ou en juxtaposition, la couche de matière étanche recou vrant entièrement le premier disque et partiellement le second de manière à ralentir 1'évaporation du liquide d'hydratation, tout en laissant à découvert une partie de la surface dudit disque pour son imbibition et le dépôt direct des cellules vivantes. Dans une variante, les deux disques sont obtenus par découpage d'une ébauche unique dans une feuille de matière absorbante convenablement revêtue d'une couche de matière étanche, la partie de cette ébauche correspondant au premier disque étant imbibée de la substance; chimique à essayer et du réactif indicateur.

Le dessin annexé, donné à titre d'exemple, permettra de mieux comprendre l'invention, les caractéristiques qu'elle présente et les avantages qu'elle est susceptible de procurer : lig. 1 est une vue en plan d'un dispositif réalisé

conformément à un premier mode de mise en oeuvre de l'invention.

Fig. 2 est une coupe suivant II-II (fig. 1).

Fig. 3 est une vue en plan d'une autre forme de réalisation.

Fig. 4 e§t la coupe correspondante suivant I7-IV (fig.3)

Fig. 5 et 6 montrent respectivement en coupe une variante de fig, 2 et de ïig, 4.

Fig. 7 est une vue en plan d'un dispositif suivant un autre mode de mise en/oeuvre de l'invention.

Fig. 8 en est une coupe suivant VIII-YIII (fig. 7).

Fig. 9 montre en plan la disposition d'une série de dispositifs suivant fig. 7 sur le fond d'un récipient.

Fig. 10 est une vue en plan d'une variante de fig. 7.

Fig. 11 en est la coupe correspondante suivant ZI-ZI

(fig. 10).

Fig. 12 est une vue analogue à fig. 9, mais correspondant au dispositif suivant fig. 10.

Fig. 13 est une vae en plan d'une autre forme de réalisation du dispositif suivant fig. 7'.

Fig. 14 et 15 montrent en plan deux variantes de fig. 13.

Le dispositif représenté en fig. 1 et 2 est constitué par l'assemblage de deux disques 1 et 2 en matière absorbante (papier buvard, papier pour séparations électrophorétiques, papier échangeur d'ions, tissu de fibres de verre ou matières absorbantes analogues). Chaque disque présente un profil substantiellement circulaire, étant noté que le disque 1 est de diamètre légèrement plus petit que le disque 2. Les deux disques sont assemblés en superposition au moyen d'une colle appropriée, prévue perméable, et l'ensemble est recouvert par une couche de matière étanche à l'air et à l'eau (paraffine ou substance analogue), laquelle couche laisse à découvert la face libre du disque 2;

Préalablement à leur assemblage, le disque 1 a été imprégné d'un réactif indicateur coloré (indicateur de pH par exemple), tandis que le disque 2 a été imprégné de la substance chimique à essayer, utilise., à forte concentration ; les deux disques ont été ensuite séchés, le dispositif obtenu après assemblage pouvant ainsi être conservé aussi longtemps qu'on le désire» »

Au moment de l'utilisation le dispositif 1-2-3 est placé dans un récipient sur le fond transparent 4 (fig,2) duquel repose un support hydratant et nutritif 5 (gel d'agar-agar ou

* *

analogue) j préalablement à la mise en place du dispositif on a étalé sur la surface du support 5 une couche 6 de la suspension cellulaire à étudier, le récipient est ensuite fermé et introduit à l'intérieur d'une étuve, le fond 4 étant tourné vers le haut»,

On comprend que les produits provenant de la dégradation de la substance chimique contenue dans le disque 2 au contact de la suspension cellulaire 6, diffusent dans ce disque 2, en même temps que le réactif indicateur dont est imprégné le disque 1, On conçoit par ailleurs que les conditions d'ana.érobiose déterminées par la couche 3 favorisent l'apparition:.rapide de résultats nets et précis, lesquels peuvent être facilement examinés sur la face libre du disque 2 par le lecteur àjbravers le fond transparent 4 du récipient. Il va de soi qu'on peut disposer à l'intérieur d'un même récipient plusieurs dispositifs 1-2-3, convenablement répartis.

Dans la variante de fig. 3 et 4, les deux disques, référencés 11 et 12, sont assemblés l'un à l'autre en juxtaposition suivant une sécante commune a, l'ensemble de ces disques éiîant recouvert par une couche de matière étanche 13V

On comprend que dans l'une et l'autre variantes la couche de matière étanche 25 (fig» 5) ou 35 (fig. 6) peut n'intéresser que la seule surface du disque 1, respectivement 11, qui renferme le réactif indicateur.

Dans le mode de mise en oeuvre de l'invention illustré en fig. 7 et 8, les deux: disques 101 et 102 sont assemblées en juxtaposition suivant la sécante a, comme dans le cas de fig. 3 et 4. Toutefois, le plus petit de ces disques, à savoir le disque 101, est simultanément imprégné de la substance chimique à essayer et du réactif indicateur coloré j il suffit à cet effet de. plonger ce disque 101, avant assemblage avec le disque 102, dans un mélange liquide contenant la substance chimique à haute concentration et le réactif indicateur, ledit disque étant ensuit séché, la couche de matière étanche 103 est constituée par une bande souple ou pellicule en acétate de cellulose, chlorure de polyvinyle ou matière analogue, étant noté que cette bande recouvre entièrement le disque 101 et laisse à découvert une partie de la surface du disque 102.

On comprend que si la matière absorbante qui constitue le disque 102 est telle qu'elle retient par capillarité une quantité d'eau suffisante, il n'est plus nécessaire, pour maintenir le dispositif à l'état humide, de le disposer à la surface d'un gel d'agar-agar ou autre support hydratant. A cet effet il suffit que le disque 102 soit réalisé en une matière hautement absorbante, telle qu'un papier recouvert par flockage d'un tapis de fibres de verre perpendiculaire au plan dudit papier, ou une trame fibreuse, par exemple une étoffe non tissée de fibranne-viscose, imprégnée de carboxy-méthyl-cellulose, d'une hemi-cellulose ou d'une substance analogue.

En pareil cas, lorsqu'on désire utiliser le dispositif sui

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vant l'invention, on dispose celui-ci sur un support quelconque à fond transparent, par exemple sur le^ond 104 d'une boîte de Pétri. On ensemence le dispositif en déposant sur la partie du disque 102 qui n'est pas recouverte par la bande 103 un nombre de gouttes de suspension cellulaire suffisant pour imbiber complètement l'ensemble 101-102 par capillarité. Après une période d'incubation à une température convenable, on peut étudier l'action des cellules vivantes sur la substance chimique dont est imprégné le disque 101 par examen de la coloration du disque 102. On conçoit en effet que ..le réactif indicateur diffuse du disque 101 vers le disque 102 en même temps que les produits de dégradation de la substance chimique considérée ; cette diffusion s'effectue à travers la sécante a et le virage de l'ir dieateur apparaît de manière particulièrement nette et rapide au niveau de la frange ou frontière de diffusion.

Comme montré en fig. 9, on peut disposer sur le fond 104

d'un même récipient une série de dispositifs suivant fig, 7 et même

$, chacun de ceux-ci étant fixé par une/bande 103 prévue suffisamment longue à cet effet. On comprend que si les disques 101 de ces dispositifs ont été imprégnés de substances chimiques différentes, on peut ainsi procéder simultanément à une série d'études séparées concernant un même type dé cellules vivantes.

Dans la variante de réalisation représentée en fig. 10 et 11, le dispositif comprend un premier disque 111 en matière absorbante, découpé de manière à présenter un profil ovale. Ce disque 111 est disposé sur un second disque 112, de même profil mais de dimensions nettement plus grandes, fortement désaxé par rapport au premier, le disque 111 est, avant séchage, imprégné avec la substance chimique à essayer et avec le réactif convenable. l'ensemble est recouvert par une couche de matière étanchi

par exemple par une bande d'acétate de cellulose 113, qui n'intéresse qu'une partie seulement de la surface du disque inférieur 112.

le dispositif ainsi constitué est alors disposé contre le fond d'un récipient transparent, les extrémités dépassantes de la bande 113 assurent la fixation du dispositif sur le fond de ce récipient.

On conçoit que l'utilisation â'un tel dispositif est identique à celle décrite en référence à fig. 7 et 8. la suspension cellulaire à étudier est disposée sur la partie dépassante du disque inférieur 112, en quantité suffisante pour humecter l'en semble du dispositif, les virages ou autres réactions apparaissent rapidement dans le disque 112 au niveau de la frange de diffusion du réactif indicateur et peuvent être lus à travers 1> fond transparent du récipient.

Comme montré en fig. 12, il va de soi que la bande 113 peu-comme dans le cas de f ig. 9, être prévue suffisamment longue pour assurer la fixation simultanée de plusieurs dispositifs sur le fond 114 d'un même récipient, lequel peut présenter en plan tout profil désiré.

Dans la forme de réalisation représentée en fig. 13, le dispositif est directement obtenu en découpant une ébauche unique 120 dans une feuille de matière absorbante appropriée. Cett« ébauche 120 présente une partie 121 et une partie 122, toutes deux à profil circulaire mais de diamètres différents. Préalablement au découpage de cette ébauche on a appliqué sur le feuille de matière absorbante une bande 123 d'acétate de cellulose ou matière analogue, cette bande étant dimensionnée de façon à laisser à découvert sur l'ébauche découpée une petite surface 121 a sur le profil 121 et une surface plus grande 122a sur le profil 122. 0

Une fois l'ébauche ainsi réalisée on imprègne la partie correspondant au profil 121 d'un mélange composé de la substance chimique à étudier et du réactif indicateur ; cette imprégnation peut se faire soit en déposant quelques gouttes du mélange liquide précité sur la surface découverte 121a, soit en amenant cette dernière au contact dudit mélange. Lors de l'utilisation du dispositif, il suffit de déposer sur la partie découverte 122a la suspension cellulaire en quantité suffisante pour imbiber, l'ensemble du dispositif, lequel.est placé sur le fond d'un récipient approprié.

On comprend que l'ébauche peut présenter tout profil désiré approprié. En fig. 14 on a représenté une ébauche 130 comprenant une partie 131 à profil substantiellement circulaire, à laquelle fait suite une partie 132 à profil rectangulaire allongé ; la couche 133 de matière étanche laisse à découvert une lunule 131a pour l'imprégnation, ainsi qu'une surface 132a pour le dépôt de la suspension cellulaire envisagée. Dans la variante de fig» 15, l'ébauche 140 est découpée de manière à présenter deux parties 141 et 142 à profil rectangulaire ; ici encore la couche 143 de matière étanche laisse à découvert deux zones 141a et 142a pour l'imprégnation, respectivement pour le dépôt de la suspension cellulaire. Il va de soi que dans les deux variantes de fig. 14 et 15, la partie 132, respectivement 142, peut com4 porter un prolongement présentant en plan tout profil approprié, ledit prolongement pouvant notamment être conformé de façon à faciliter la manipulation du dispositif.

Dans tous les eas on comprend que le dispositif suivant l'invention peut être réalisé de manière simple et économique. De plus et surtout son utilisation est particulièrement pratique puisqu'elle permet l'obtention rapide de résultats nets et précis f\ _

Claims

- 10 -

Il doit d'ailleurs être entendu que la description qui précède n'a été donnée qu'à titre d'exemple et qu'elle ne limite nullement lé domaine de l'invention dont on ne sortirait pas en

équivalents.

remplaçant les détails d'exécution décrits^par tous autres/

RESUME

Dispositif pour l'étude des caractères fermentatifs des cellules vivantes, principalement remarquable en ce qu'il comprend deux disques en matière absorbante solidaires l'un de l'au-tre et imprégnés de la substance chimique à essayer e^'un réac;-, tif indicateur approprié, le premier de ces disques étant recouvert d'une eouche de matière étanche en vue de réaliser des conditions de fermentation anaérobie tandis que le second est destiné à être mis en contact avec les cellules vivantes à étudier de façon à former support pour la diffusion du réactif indicateur précité contenu dans le premier disque après réaction de ce réactif avec les produits de dégradation de la substance chimique, ledit dispositif pouvant en outre présenter les autres

* F

caractéristiques ci-après, prises séparément ou en combinaison :

1°)La substance chimique à essayer est renfermée, à l'état sec, à l'intérieur du second disque.

2°) Dans:,, lel cas-visS sous 1°, la couche de matière étanche recouvre simultanément les deux disques en laissant à découvert l'une seule des faces du second disque.

3°) La substance chimique est renfermée par le premier disque, en même temps que le réactif indicateur.

4°) Dans le cas visé sous 3°, le second disque est réali sé en une matière absorbante susceptible de s'imbiber d'une quantité de liquide suffisante pour que ledit disque constitue directement support hydratant après imbibition avec une suspension cellulaire. n

11

5°) les deux disques sont assemblés en superposition.

6°) les deux disques sont assemblée en juxtaposition.

7°) la couche de matière étanehe est constituée par une bande de matière souple.

5 8°) la bande souple risée sous 7° dépasse de part et d'autre du dispositif de manière à assurer la fixation simultanée de plusieurs dispositifs sur le fond d'un même réci-piént.

9°)Dans le cas visé sous 3° les disques sont 00ns-

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•JO titués par deux parties d'une même ébauche obtenue par décou- .

page dans une feuille de matière absorbante.

10°)la eouche de matière étanche recouvre entièrement le premier disque et laisse à découvert une partie du second disque.

15 11° )l^3ouche de matière étanche laisse à découvert une partie de la surface du premier disque pour l'imbibition d'un mélange liquide renfermant la substance chiaiique à essayer et l'indicateur réactif.

12°) les deux disques présentent un profil ovale,

20 le premier disque, prévu de plus petites dimensions, étant fortement désaxé par rapport au second.

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