MC512A1 - Nouveau polypeptide et sa préparation - Google Patents

Description

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CAS : 1923

S tf j) o ~z. S. A.

Nouveau polypeptide et sa préparation.

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La présente invention a pour objet un nouveau polypeptide, . en l'espèce le L-séryl-L-tyrosyl-L-séryl-L-norleucyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-5 glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L~lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl~ L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, ainsi que les sels d'addition que forme ce composé avec des acides.

procédé./

L'invention concerne également un/de prépara-10 tion de ce polypeptide, procédé qui consiste a mettre en oeuvre des méthodes généralement connues pour la synthèse de composés de ce genre, en associant les acides aminés dans l'ordre où ils figurent dans le nom chimique donné ci-dessus, les divers acides aminés étant pris isolément 15 ou sous forme de petits motifs peptidiques déjà créés.

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Pour préparer, conformément à l'invention, le nouveau pentacosapeptide, c'est-à-dire le L-séryl-L-tyrosyl-L-séryl-L-norleucyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, on peut par exemple condenser le L-valyl- £ M-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, dans lequel R représente un groupe tert.-butoxy-carbo-nyle ou un groupe tert.-amyloxy-carbonyle, avec l'ester 2,4.5-trichloro-phénylique de la N-benzyloxy-carbonyl-L valyl-glycyl- £-N-R-L-lysyl- t-N-R-L-lysyl-£-N-R-L-lysyl-£-N~R~L-lysyl-L-proline, condenser le N-benzyloxy carbonyl-L-valyl-glycyl-£-N-R-L-lysyl- £.-N~R-L-lysyl-£-N-R-L-lysyl- £~N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- £-N~R~L lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide obtenu, après en avoir chassé le groupe benzyloxy-carbonyle, avec l'ester 2.4.5-trichloro-phénylique de la N-tri-phénylméthyl- "V^-O-tert.-butyl-L-glutamyl-im-triphényl-méthyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-trypto-phanyl-glycyl-£-N-R-L-lysyl-L-proline, condenser le N-triphénylméthyl- "Y-O-tert.-butyl-L-glutamyl-im-tri-phénylméthyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- F-N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-f-N-R-L-lysyl- <£-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-£ -N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, après en avoir éliminé le groupe N-triphénylméthyle,avec l'azide de la N-R'—L-séryl-L-tyrosyl-L-séryl-L-norleucine, composé dans lequel R' désigne un groupe triphénylméthyle, tert.-butoxy-carbonyle ou tert.-amyloxy-carbonyle, et éliminer en milieu acide, en un ou plusieurs stades,

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la totalité des groupes protecteurs contenus dans le nouveau pentacosapeptide protégé obtenu, c'est-à-dire dans le N-R'-L-séryl-L-tyrosyl-L-séryl-L-norleucyl- "Y^-O-tert.-butyl-L-glutamyl-L-im-triphényl-méthyl-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £-N~R-L~ lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-£-N-R-L-lysyl- Ç.-N-R-L-lysyl-£-M-R-L-lysyl-£-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-£ -M-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide,

dans lequel R et R! ont les significations indiquées ci-dessus.

Les composés de départ servant à la préparation du nouveau pentacosapeptide conforme à l'invention, dans la mesure où ils ne sont pas déjà connus, peuvent être préparés par les méthodes classiques de la chimie des peptides, les acides aminés étant unis l'un à l'autre soit isolément, soit après formation de motifs peptidiques de plus petite dimension que le polypeptide cherché.

Le nouveau pentacosapeptide conforme à l'invention peut également être isolé ou utilisé sous forme de ses sels. Comme sels on peut envisager ceux qui dérivent d'acides organiques, comme l'acide acétique l'acide propionique, l'acide glycolique, l'acide lactique, l'acide pyruvique, l'acide malonique, l'acide succinique, l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide tartrique, l'acide citrique, l'acide benzoïque, l'acide cinnamique, l'acide salicylique, l'acide 2-phénoxy-benzoïque, l'acide 2-acétoxy-benzoïque, l'acide mandé-lique, l'acide méthane-sulfonique, l'acide éthane-sulfo-nique, l'acide hydroxy-éthane-sulfonique, l'acide benzène-suifonique, l'acide toluène-suifonique, l'acide naphtalène-sulfonique, l'acide suifanilique, ainsi que

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des acides polymères, comme l'acide tannique, l'acide alginique, l'acide polygalacturonique et la carboxymothyl cellulose, et des sels dérivant d'acides minéraux, comme les acides halohydriques, tels que l'acide chlorhydrique et l'acide bromhydrique, l'acide nitrique, l'acide thio-cyanique, l'acide sulfurique et l'acide phosphorique.

Le nouveau pentacosapeptide et ses sels ont les mêmes propriétés biologiques et thérapeutiques que la corticotrophine naturelle (ACTH).

On peut l'utiliser par exemple pour le traitement des maladies suivantes :

ïhumatismes articulaires aigus et chroniques,

colite ulcéreuse,

néphrose,

collagénoses, comme par exemple lupus érythérnateux, sclérodermie, etc...,

maladies allergiques des divers systèmes d'organes,

comme l'asthme bronchique, l'eczéma, l'urticaire, la dermatite exfoliatrice, le choc anaphylactique, etc..., intoxications d'origines diverses, comme par exemple dans le cas de l'alcoolisme chronique,

tumeurs, comme par exemple leucémies, lymphosarcomes, réticulosarcomes, etc...,

pour empêcher l'atrophie des cortico-surrénales au cours du traitement par des corticostéroi'des,

insuffisances de l'hypophyse.

En comparaison de l'hormone naturelle d'origine animale, le nouveau pentacosapeptide synthétique a le grand avantage d'être dépourvu de propriétés antigé-niques.il peut donc être appliqué sans inconvénient,

pour le traitement des maladies énumérées ci-dessus,

même à des malades ayant présenté des phénomènes d'al

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lergie au cours d'un traitement antérieur par la corti-cotrophine naturelle.

Le nouveau pentacosapeptide, étudié par les méthodes usuelles adoptées pour l'étalonnage, fait preuve d'une très grande activité par rapport à la corti-cotrophine naturelle.

Alors que la corticotrophine naturelle ne peut être purifiée que par des méthodes pénibles et coûteuses, et renferme encore, presque toujours, des impuretés protéiniques macromoléculaires qui peuvent causer de dangereuses réactions anaphylactiques, le nouveau composé synthétique, lui, peut être obtenu directement à un très haut degré de pureté et sans aucune impureté protéinique . De plus, la préparation du nouveau composé synthétique est indépendante de l'approvisionnement en glandes hypophyses, lesquelles ne peuvent être obtenues qu'en quantités limitées et à des prix très élevés.

Contrairement à l'ACTH naturelle qui contient un reste méthionine en position 4, reste qui, on le sait, s'oxyde facilement et fait ainsi perdre son activité à l'hormone, le nouveau polypeptide renferme, en position 4, un reste norleucine qui a les mêmes propriétés stériques que le reste méthionine mais qui résiste à l'oxydation. En outre, le nouveau composé contient deux restes lysines en positions 17 et 18, au lieu des restes arginines présents en ces positions dans la molécule de la corticotrophine naturelle.

Il en résulte que la synthèse du nouveau pentacosapeptide est très simplifiée et que ce composé a l'étonnante propriété de conserver au cours du temps toute son activité biologique.

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Par ailleurs, le nouveau composé renferme, en position 25, un reste valinamide qui n'existe pas en cet endroit dans la corticotrophine naturelle. Ce reste valinamide à l'extrémité carboxylique protège la chaîne peptidique contre les dégradations enzymatiques, ce qui est particulièrement intéressant pour l'administration par la voie sous-cutanée ou intramusculaire. Le nouveau composé peut, de même que l'ACTH naturelle, être également administré sous forme de préparation retard.

Le nouveau pentacosapeptide peut être utilisé comme médicamentj par exemple sous forme de pré-parationè pharmaceutiques. Celles-ci renferment le composé cité en mélange avec une matière support minérale ou organique# appropriée pour l'administration par la voie parentéÉaie. On peut envisager, comme matières supports, celles qui ne réagissent pas avec le nouveau composé, comme par exemple la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, les huiles végétales, l'alcool benzylique, la gomme arabique, les polyalkylène-glycols, la vaseline, le cholestérol ou d'autres excipients pharmaceutiques connus. Les préparations galéniques peuvent être liquides, à l'état de solutions, suspensions ou émulsions. Elles sont éventuellement stérilisées et/ou elles contiennent des adjuvants, tels que des agents de conservation, des stabilisants, des mouillants ou des émulsionnants. Elles peuvent également contenir d'autres corps doués d'activité thérapeutique.

Il est bien entendu que la présente invention ne concerne pas les corps décrits lorsqu'ils sont utilisés en thérapeutique.

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Le nouveau pentacosapeptide et ses sels peuvent également être utilisés comme produits intermédiaires pour la préparation de produits pharmaceutiques.

Au cours de la synthèse on a de préférence fait usage d'esters 2.4.5-trichloro-phényliques de benzyloxy-carbonyl-amino-acides ou, à l'occasion, de benzyloxy-carbonyl-peptides.

Dans la synthèse du nouveau pentacosapeptide il s'est révélé avantageux d'utiliser, pour le blocage du groupe amino du reste sérine, le groupe tri-phénylméthyle, le groupe tert.-butoxy-carbonyle ou le groupe tert.-amyloxy-carbonyle, mais l'on peut également avoir recours à d'autres groupes protecteurs convenables, comme les groupes benzyloxy-carbonyle, trifluoro-acétyle, acétyle, chloracétyle et formyle.

Le groupe tert.-butoxy-carbonyle et le groupe tert.-amyloxy-carbonyle ont fait leurs preuves pour le blocage du groupe £ -amino du reste lysine,

mais, là encore, il est également possible d'utiliser d'autres groupes protecteurs appropriés, comme les groupes benzyloxy-carbonyle, toluène-suifonyle, phta-lyle, formyle et trifluoro-acétyle.

Pour le blocage du groupe ~Y~-carboxylique du reste d'acide glutamique, il est bon d'utiliser le groupe tert,-butyloxy, quoique d'autres groupes protecteurs appropriés, comme les groupes méthoxy, éthoxy, tert.-amyloxy, amide et benzyloxy, peuvent aussi être envisagés dans le même but.

Pour bloquer le groupe imidazole (désigné par l'abréviation "im" dans les noms chimiques) du reste histidine on utilisera avantageusement le groupe tri-phénylméthyle, mais il est également possible d'utiliser

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10

15

20

25

a

à cette même fin d'autres groupes protecteurs convenables, tels que les groupes tert.-butoxy-carbonyle, tert.-amyl-oxy-carbonyle, benzyloxy-carbonyle et benzyle.

nels donnés ci-dessous on a fait emploi des abréviations suivantes :

CBO = benzyloxy-carbonyl

Tri = trityl = triphénylméthyl

CTB = tert,-butyloxy-carbonyl

CAT = tert.-amyloxy-carbonyl

OCP = 2,4.5-trichloro-phénoxy

OTB = tert.-butyloxy

OMe = méthoxy

OEt = éthoxy

Arg = L-arginyl

Glu = L-glutamyl

Gly = glycyl

His = L-histidyl

Lys = L-lysyl

Nie = L-norleucyl

Phe = L-phénylalanyl

Pro = L-prolyl

Ser = L-séryl

Try - L-tryptophanyl

Tyr = L-tyrosyl

Val = L-valyl.

Dans les exemples et les schémas réaction-

r. A-'

Schéma A. Préparation de H-Val~(R)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NB->

(P. = CTB ou CAT)

CBO-

'BO

Tyr i-OCP H-j Pro

CBO

CBO- tyr

Val -NK

Pro

Val

-NHL

CBO-

Val f-OCP H-

Tyr

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-OCP H- j" Val

R

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CBO-j Lys

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Lys n

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Val

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Sch'ma B. Préparation c'e H-'/al-Gly-(R)Lys-(R)Lys-(R)Lys-(R)Lys-Pro-Val-(R)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-IIIi-)

:bo-

:bo-

:bo-

:bo-

CBO.

R R

•rfc '

(R = CTB ou CAT)

Val Gly

-OCP

Val Gly

Val Gly

Val Gly

:B0- I Val Gly

CBO- Val Gly

,ys Lys -Oi "e

CBO- Lys Pro -0Me

H-

R R

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Lys Lys

-0: .e

CBO-

Lys Pro

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CBO-j Lys |-CCP H-j Lys Pro ^~0H

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CBO-

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Lys J-M

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Val Lys Val Tyr Pro Va!

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CBO-

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R

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Val Lys Val Tyr Pro Val ]~i'H

r

Lys Pro

, — .

Val Lys Vr.l Tyr Pro Val ^-HH

Schéma G. Pr'paration de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try~Gly-(R)Lys-Pro-OCP

C

OTB

1

Tri~î Glu

CTB

Tri-

Tri-

Glu

CTB

Glu

OTB

Tri- Glu

OTB

Tri-S Glu

Tri

N0„

His Phe

-Oi.ie CBO-I Arg Try Gly

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Tri

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Lys Pro j-OCP

chôma î). Pr'paration de H^^er-Tyr-der-Mle-Glu-His-Phe^rg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-GIy-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH^

Îl'-J Ser -OH H-j Tyr j-OMe CBo] Ser 1-QH H-j Kle -OMe

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R = CTD eu CAT R' = CTB ou CAT ou Tri

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Tyr Ser Nie

Glu His Phe Arg Try Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys Lys Lys Pro Val Lys Val Tyr Pro Val

-NH„

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Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée.

e;s.:ple 1 :

a) Préparation de l'ester 2,4.5-trichloro-phénylique de l'a-N-benzyloxycarbonyl- £ -N-tertio-butoxycarbonyl-L-lysine ou

CBO-(CTB)Lys-OCP (Schéma A).

On dissout 104 g d'cc-N-benzyloxycarbonyl-£ -N~tertio-butoxycarbonyl-L~lysine et 70 g de 2.4.5-trichlorophénol dans 900 ml de chloroforme et 90 ml d'acétonitrile et on ajoute, à -10°, 56 g de dicyclo-hexyl-carbodi-imide. On secoue pendant 2 heures et on élimine l'urée par filtration. Après avoir évaporé le solvant on dissout le résidu dans de l'éthanol et on précipite par de l'éther de pétrole. Après recristallisation dans un mélange d'éthanol et d'eau on obtient 140 g d'ester 2,4.5-trichlorophénylique de l'a-N-benzyl-oxycarbonyl- <£ -N-tertio-butoxycarbonyl-L-lysine fondant

/— -t22

à 99°. / QL./q = -11° dans le diméthylformamide.

b) Préparation du L-valyl- £ -N-tertio-butoxy-carbonyl-L-lysyl-L~valyl~L-tyrosyl-L~prolyl~ L-valinamide ou

H-Val-(CTB)Lys-Val~Tyr-Pro-Val-NH2 (Schéma A] On dissout 50 g de L-prolyl-L-valinamide (H-Pro-Val-NHg) et 100 g de CB0-(CB0)Tyr~0CP dans 100 ml de diméthylformamide, on laisse reposer la solution pendant 48 heures à 20° et on la filtre. On ajoute à la solution 500 ml d'acide chlorhydrique normal et on dissout le résidu huileux dans de l'acétate d'éthyle. Après avoir lavé la solution avec de l'acide chlorhydrique dilué et avec une solution de bicarbonate de sodium, on l'évaporé à siccité. Après recristallisation dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther diéthylique on obtient

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100 g de CB0-(CB0)Tyr-Pro-Val-Nl^ fondant à 133°. On ajoute à ce composé 90 ml d'une solution binormale d'hydroxyde de sodium et 200 ml d'éthanol. On laisse reposer le tout pendant 1 heure à la température am-5 biante, puis on ajoute 1000 ml d'acide chlorhydrique normal. On lave le précipité d'abord avec de l'eau, puis, après séchage, avec de l'acétate d'éthyle. On obtient 60 g de CBO-Tyr-Pro-Val—Nli-, fondant à 220°. ~

-23° dans le diméthylformamide. On dissout le produit 10 obtenu dans 200 ml d'une solution 4-n d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial et on laisse reposer la solution pendant 1 heure a 20°. Après addition d'éther diéthylique et d'acétate d'éthyle, le H-Tyr-Pro-Val-KTI9 précipite sous forme de brom'nydrate fondant à 220°. On 15 dissout 42 g de H-Tyr-Pro-Val-MP^ .HBr dans 200 ml de diméthylformamide et on ajoute 36 g d'ester 2.4.5-tri-chlorophénylique de la N-benzyloxycarbonyl-L—valine (CBO-Val-OCP) et 12 ml de triéthylamine. On secoue pendant 48 heures à la température ambiante et on ajoute 20 500 ml d'acide chlorhydrique normal. Le produit qui a précipité est dissous dans de l'acétate d'éthyle et la solution est lavée avec de l'acide chlorhydrique dilué et avec une solution de bicarbonate de sodium. On précipite le produit en ajoutant de l'éther à la solution dans 25 l'acétate d'éthyle. On obtient 39 g de CBO-Val-Tyr-Pro-Val-NE^ fondant à 127°. - -26° dans le diméthyl formamide.

On dissout le produit obtenu dans 200 ml d'une solution tétranormale d'acide bromhydrique dans 30 l'acide acétique glacial et on laisse reposer cette solution à 20° pendant 1 heure. Par addition d'éther diéthylique et d'acétate d'éthyle on fait précipiter

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32 g de H-Val-Tyr-Pro-Val-NI-^. HBr.

On dissout 29 g de H-Val~Tyr-Pro-Val-NHp.HBr et 33 g de CBG~(CTB)Lys~OCP (voirsection a )

dans 100 ml de diméthylformamide et on ajoute 7,5 ml de triéthylamine. On secoue pendant 48 heures à 20°, on ajoute 500 ml d'acide acétique normal et on lave le produit qui a précipité d'abord avec de l'eau puis avec de l'acétate d'éthyle. On recueille 35 g de CBO-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NB,, qui fond à 125° avec décomposition. L ™ ~25° dans le diméthylformamide.

On dissout 39 g de CBO-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NI-^ dans 500 ml de méthanol et on hydrogène à la pression normale en présence d'un catalyseur au palladium. On filtre, on évapore le filtrat sous pression réduite et on traite le résidu par de l'éther. On obtient de cette façon 28 g de H-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH-),

A

qui fond à 145° (avec décomposition). £~cr._/~^ = -30°

dans le diméthylformamide.

On dissout 33 g de H-(CT3)Lys~Val-Tyr-Pro~ Val-NP^ et 23 g de CBO-Val-OCP dans 150 ml de diméthylformamide et on laisse reposer la solution à 20° pendant 48 heures. Après quoi on évapore la solution sous pression réduite et on dissout le résidu dans un peu de n-butanol et d'acétate d'éthyle. On lave la solution avec de l'acide sulfurique dilué et avec une solution de bicarbonate de sodium, puis on l'évaporé à siccité. Après traitement par de l'éther diéthylique on obtient 33 g de N-C BO-V a1-(CTB)Ly s-Va1-Tyr-Pr o-V a1-NI^ fondant à 171°.

Z™- *—O i

L /d = ~27° dans le diméthylformamide.

On dissout le produit obtenu dans 500 ml de méthanol et on l'hydrogène sous la pression normale en présence d'un catalyseur au palladium. On filtre, on

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évapore le filtrat sous pression réduite et on sèche le résidu à 40°. On obtient 22 g de H-Val-(CTB) Lys-Val-Tyip-

JbH *|

Pro-Val-Nî-^. / «—/d =-26° dans le diméthylformamide.

g) L-Valyl-glycyl- £,-N-tert.butoxycarbony1-L-lysyl-N~tert.butoxycarbonyl-L-lysyl- c -N-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl- £. -N-tert. butoxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl~L-valyl~ £ -N-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide ou H-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-.Tyr-Pro-Val-NH?

(Schéma B).

On dissout 470 g de CB0-(CBT)Lys-0H et 182 ml de triéthylamine dans 5 litres d'acétate d'éthyle, on ajoute goutte à goutte, à -5°, 125 ml de chlorofor-miate d'éthyle, on agite pendant 30 minutes à -5°, on ajoute 190 g de H-Pro-OMe, on laisse reposer à 20° pendant 4 heures, on lave avec de l'acide sulfurique dilué et avec de l'ammoniaque, on sèche et on évapore.

On obtient 550 g d'un dipeptide huileux que l'on dissout dans 3 litres de dioxanne. On refroidit la solution à 0°, on y ajoute 3 litres d'une solution normale d'hydroxyde de sodium, on secoue pendant 1 heure à 20°, on concentre à 3 litres, on ajoute 3 litres d'eau, on lave avec de l'éther diéthylique , on refroidit à 0°, on acidifie à pH 2 avec de l'acide phosphorique à 10 on extrait par de l'acétate d'éthyle l'huile qui a précipité, on sèche, on évapore, on lave le résidu avec de l'éther de pétrole et on le sèche. On obtient 470 g de CBQ-(CTB)Lys-Pro-OH 7^ = -43° dans le diméthylformamide),

que l'on dissout dans 3 litres de méthanol et 300 ml d'eau et qu'on hydrogène en présence de 30 g d'un catalyseur a base de palladium sur charbon (a 10 % de Pd). On filtre, on évapore le filtrat et on lave le résidu par de l'éther diéthylique. On obtient 323 g de H-(CTB)Lys-Pro-OH fon

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dant à 114°. £"a_7q° = -52° dans le diméthylformamide.

On dissout le dipeptide obtenu ci-dessus dans 1000 ml de diméthylformamide, on ajoute à la solution 480 g de CBO-(CTB)Lys-OCP, on la laisse reposer à 20° pendant 12 heures, on l'évaporé, on dissout le résidu dans 1000 ml d'une solution de bicarbonate de sodium, on lave la solution avec de l'éther diéthylique, on acidifie la phase aqueuse avec une solution à 10 % d'acide citrique, on extrait avec de l'acétate d'éthyle, on sèche, on évapore et on travaille le résidu avec de l'éther de pétrole. On recueille 308 g de CBO-(CTB) Lys-(CTB) lys-Pro-OH (fondant à 125°)qu'on dissout dans 3 litres de méthanol et 300 ml d'eau. On hydrogène en présence de 45 g de palladium sur charbon, on filtre, on évapore le filtrat et on recristallise le résidu dans un mélange de dioxanne et d'éther diéthylique. On obtient 205 g de H-(CTB)Lys-

(CTB)Lys-Pro-OH fondant à 160°. = -24° dans le diméthylformamide.

On dissout 380 g de CBO-(CIB)Lys-OH et 260 g de H-(CTB)Lys-OMe dans un mélange de 1500 ml d'acétonitrile et 300 ml de diméthylformamide, on refroidit à -20°, on ajoute 206 g de dicyclohexyl-carbodi-imide, on secoue a -5° pendant 12 heures, on filtre, on évapore, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide sulfurique dilué et une solution ammoniacale, on sèche, on évapore et on fait cristalliser le d'éther/

résidu dans un mélange/diéthylique et d'éther de pétrole. On obtient 410 g de CBO-(CTB)Lys-(CTB)Lys-OMe fondant à 105°. C*Jf = -10° dans le méthanol.

On dissout l'ester dipeptidique obtenu ci-dessus dans 3 litres de méthanol, on l'hydrogène en présence de 50 g d'un catalyseur au palladium, on filtre et on évapore le filtrat. On dissout le résidu dans

1000 ml de diméthylformamide, on ajoute 310 g de CBO-Val-Gly-OCP, on laisse reposer à 20° pendant 12 heures, on évapore, on travaille le résidu avec de l'éther diéthylique, on le recristallise dans un mélange de parties 5 égales de méthanol et d'eau et on le sèche. On obtient

448 g de CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Oile fondant à 191°,

= —16° dans le méthanol. On dissout l'ester tétrapeptidique ainsi obtenu dans 600 ml de méthanol, on ajoute 200 ml d'hydrate d'hydazine, on laisse reposer 10 à 20° pendant 16 heures, on verse le tout dans 2 litres d'eau, on filtre, on lave à l'eau, on sèche sur acide sulfurique, on dissout le produit sec dans du méthanol, on verse la solution dans de l'éther, on filtre et on sèche On obtient 366 g de CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-NHNH, 15 fondant à 204—206°. = -11° dans le diméthylfor mamide. On dissout 48,2 g de CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-NHNH-j dans un mélange, refroidi à -10°, de 400 ml de diméthylformamide, 100 ml â'isopropanol et 60 ml d'acide on/

chlorhydrique tétranormal,/ntroduit la solution goutte à 20 goutte, tout en agitant énergiquement, dans 14 ml d'une solution 5~n de nitrite de sodium, on agite pendant encore 5 minutes à -5°, on ajoute 35 ml de triéthylamine puis 1000 ml d'eau glacée, on essore soigneusement, on dissout le précipité dans 200 ml de diméthylformamide,

A CTB) -Lys-/

25 on ajoute 28,5 g de H-(CTB)LysP/Pro~OH et 7 ml de triéthyl amine, on concentre à 180 ml sous vide poussé, on laisse reposer à 0° pendant 16 heures, on ajoute 1500 ml d'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide acétique dilué, on chasse l'acétate d'éthyle par évaporation, on verse le 30 résidu dans 2 litres d'eau, on filtre et on sèche sur hydroxyde de sodium. On obtient 42 g de CBO-Val-Gly-(CTB)-Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys—(CTB)Lys-Pro-OH fondant à 156° avec décomposition. / cc_7d° = ~5° dans le diméthylformamide.

- 19 -

1923

On dissout l'heptapeptide ainsi obtenu dans 160 ml de pyridine absolue,on évapore, on dissout le résidu dans 160 ml de pyridine absolue, on ajoute 22 g de phosphite de tris-(2.4.5-trichlorophényle), on agite à 20° pendant 16 heures, on évapore, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide sulfurique dilué puis avec une solution normale de bicarbonate de sodium, on sèche sur sulfate de sodium, on évapore et on fait cristalliser le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. On obtient 44 g de CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys~(CTB)Lys~ (CTB)Lys—Pro-OCP, que l'on dissout aussitôt dans 150 ml de diméthylformamide. On ajoute à la solution obtenue 38 g de H-Val-(CTB) Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH^, on laisse reposer la solution à 20° pendant deux jours, on ajoute de l'éther diéthylique pour faire précipiter le produit, on le sépare par filtration et on le sèche. On dissout le produit obtenu dans un mélange 8:2 de méthanol et d'eau, on traite par un échangeur d'ions acide, on évapore et on fait cristalliser le résidu dans un mélange 8:2 d'éthanol et d'eau. On obtient 45,5 g de CBO-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NHg fondant à 198° avec décomposition.

Q Q

r<xJD = +5° dans le diméthylformamide. On dissout le tridécapeptide obtenu dans 500 ml de méthanol, on l'hydrogène en présence sie 5 g d'un catalyseur à base de palladium sur charbon, on filtre, on évapore et on travaille le résidu avec de l'éther diéthylique. On obtient 26,3 g de H-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro—Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH^ qui fond à 198°.

d) Ester 2,4.5-trichlorophénylique de la trityl~0~tert.butyl-L~glutamyl~im-tri-tyl-L~histidyl-L-phénylalanyl~L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- 8 -N-tert.feùtoxycar-. bonyi-L-lysyl-L-proline ou Tri-Glu(OT B)-(Tri)Hi s-Ph e-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OCP' (Schéma C).

On dissout 300 g de CB0-(N02)Arg-Try-Gly~ OMe dans 5 litres d'un mélange 8:2 de dioxanne et d'eau, on ajoute 720 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium, on laisse reposer à 20° pendant 1 heure, on verse le tout dans 16 litres d'acide sulfurique 0,05-n, on sépare le précipité par essorage, on le lave avec de l'eau, de l'alcool, de l'éther diéthylique et de l'éther de pétrole, et on le sèche. On obtient 285 g de CBO~(NQ-)) Arg-Try-Gly-OH (fondant à 225% / œ_J~f^ = -1 4° dans le diméthylformamide), que l'on dissout dans 3,5 litres de pyridine absolue. On ajoute 250 g de phosphite de tris-(2,4,5-trichlorophényle), on agite à 20° pendant 16 heures, on évapore, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide sulfurique dilué, on sèche et on évapore. On fait cristalliser le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther diéthylique et l'on obtient ainsi 370 g de CB0-(N02)Arg-Try-Gly-OCP fondant à 124° ./~a_7][)^ = ~*9° dans le diméthylformamide.

On dissout l'ester tripeptidique ainsi obtenu dans 700 ml de diméthylformamide, on ajoute 220 g de H-(CTB)Lys-Pro-OH (voir section c ) , on agite à 20° pendant 16 heures, on précipite par de l'éther diéthylique , on filtre, on dissout le précipité dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'eau, on lave avec de l'acide citrique normal, on sèche et on évapore. On fait cristalliser le résidu deux fois dans l'acétate d'éthyle. On obtient 370 g de CBO-(N02 )Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OH fondant à 142°. = -20° dans le diméthylformamide.

- 21 -

1923

On dissout 245 g de CBO-(NC^)Arg-Try~Gly~ (CTB)Lys~Pro-OH dans 450 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 50 ml d'eau et 50 g d'un catalyseur à base de palladium sur charbon (à 10 % de Pd), on hydrogène, on élimine le catalyseur par filtration, on évapore le filtrat, on dissout le résidu dans de l'eau, on lyophilise et on sèche sur soude caustique. On obtient 135 g de H-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OH. £~a_~J^ - -9° dans un mélange 95:5 d'acide acétique et d'eau. On dissout 457 g de H-His~Phe-0Me.2HBr et 266 ml de triéthylamine dans 1000 ml de diméthylformamide, on agite pendant 10 minutes à 0°, on filtre, on ajoute au filtrat 496 g de CBO-Glu (OTB)-OCP et on laisse reposer le tout à 20° pendant 16 heures» On chasse le diméthylformamide par évaporation, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave la solution avec une solution aqueuse diluée d'acide acétique et une solution normale de bicarbonate de sodium, on la sèche sur sulfate de sodium, on l'évaporé et on fait cristalliser le résidu dans de l'acétate d'éthyle. On obtient 338 g de CBO-Glu(OTB)-His-Phe-OMe fondant à 183°. = -21° dans le diméthylformamide.

On dissout le tripeptide obtenu ci-dessus dans 3 litres de méthanol, on l'hydrogène en présence de 50 g d'un catalyseur à base de palladium sur charbon (à 10 % de Pd), on filtre, on évapore le filtrat, on dissout le résidu dans 1,5 litre dé chlorure de méthylène, on refroidit à 0°, on ajoute 140 ml de triéthylamine puis 270 g de triphényl-chloro-méthane, on laisse reposer le tout à 20° pendant 16 heures, on lave avec de l'acide acétique dilué, avec de l'eau et avec une solution normale de bicarbonate de sodium, on sèche et on évapore. On dissout le résidu dans de l'éther diéthylique et on

— zz —

précipite par de l'éther de pétrole. On obtient 483 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His~Phe-OMe (fondant à 80° avec décomposition)que l'on dissout dans 1000 ml de méthanol. On ajoute 50 ml d'hydrazine, on laisse reposer pendant 24 heures à 20°, on concentre à 500 ml, on ajoute 5 litres d'éther diéthylique, on lave avec une solution 0,1-n de chlorure de sodium, on sèche, on concentre à 500 ml et on précipite par de l'éther de pétrole. On obtient 390 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-NHNBp fondant à 80° avec décomposition. L = -14°

dans le diméthylformamide.

On dissout 41,6 g de Tri—Glu(OTB)-(Tri)His— Phe~NHNB-> dans 100 ml de diméthylformamide et 100 ml d'isopropanol, on refroidit à -10° et on ajoute 40 ml d'acide chlorhydrique 4-n puis, tout en agitant, 9 ml d'une solution 5-n de nitrite de sodium. Au bout de 5 minutes on introduit le mélange dans 28 ml de triéthylamine et 1000 ml d'eau glacée, on essore, on dissout le précipité dans de l'acétate d'éthyle, on lave avec une solution saturée de chlorure de sodium, on sèche, on évapore à 0°, on dissout le résidu dans 100 ml de diméthyl formamide, on ajoute 26 g de triacétate de H-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro—OH et 4,5 ml de triéthylamine, on laisse reposer à 0° pendant 16 heures, on ajoute 1000 ml d'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide acétique 0,5-n, de l'eau et de la pyridine 0,5-n, on évapore, on dissout le résidu dans 100 ml d'acétate d'éthyle et on précipite par de l'éther diéthylique. On obtient 46,4 g de Tri-Glu (OTB)-(rri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OH fondant à 180°. = -13°dans le diméthylformamide. On dissout le peptide obtenu ci-dessus dans 200 ml de pyridine, on refroidit la solution à -20° on y ajoute 30 ml d'une

- 23 -

1923

solution normale d'acide chlorhydrique dans du dioxanne,

on agite pendant 5 minutes à -20°, on ajoute 7,8 ml de triéthylamine, on concentre à la moitié du volume, 30 g /

on ajoute/Se phosphite de tris-(trichlorophényle), on 5 laisse reposer le tout à 20° pendant 16 heures, on éva pore, on travaille le résidu avec de l'éther diéthylique, on le dissout dans de l'acétate d'éthyle, on précipite par de l'éther diéthylique, on filtre et on sèche. On obtient 51,6 g de chlorhydrate de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His— 10 Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OCP.HC1 fondant à 170°

avec décomposition. = -20° dans le diméthyl-

f ormamide.

V

- 24 - 1923

EXEMPLE 5 :

e) L-séryl-L-tyrosyl-L~séryl-L-norleucyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptopha-nyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide ou

H-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val- Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH^ (schéma D).

On dissout 174 g de Tri-Ser-OH et 117 g de H-Tyr-OMe dans un mélange de 2 litres d'acéto-nitrile, 1 litre de chloroforme et 50 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution à -10°, on y ajoute 124 g de dicyclohexyl-carbodiimide et on agite pendant 5 heures à 20°. On filtre, on lave avec 1,5 litre de pyridine, on évapore à siccité les filtrats réunis et on fait cristalliser le résidu dans de l'acétate d'éthyle chaud. On obtient 221 g de Tri-Ser-Tyr-OMe

21

fondant à 232°. /~a 7 = - 34° dans le diméthyl-

D

formamide. On dissout le produit obtenu dans 500 ml de diméthyl-formamide et on ajoute 100 ml d'hydrazine.

On laisse reposer à 20° pendant 24 heures, on verse la solution dans 5 litres d'eau, on centrifuge, on dissout le résidu huileux dans 2 litres d'acétate d'éthyle et on lave la solution obtenue avec de l'eau jusqu'à neutralité. On la sèche sur sulfate de sodium,

on l'évaporé à siccité et on lave le résidu avec de l'éther. On obtient 182 g de Tri-Ser-Tyr-NHNH^ fondant

à 120° (avec décomposition). f~ o. = -30° dans le

D

diméthyl-formamide.

- 25 - 1923

On dissout 131 g de CBO—Ser~OH et

95 g de chlorhydrate de H-Nle-OMe dans 2 litres de chloroforme et 70 ml de triéthylamine, on refroidit la solution à -10°, on y ajoute 124 g de dicyclohexyl-

carbodiimide et on agite à 20° pendant 5 heures. On filtre, on évapore le filtrat, on lave le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'eau et on le sèche. On le recristallise dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole et l'on obtient ainsi 151 g de

— 22

CBO-Ser-Nle-OMe fondant à 71°. / a 7 = -19° dans

D

le méthanol. On élimine le groupe CBO par hydrogénation catalytique dans du méthanol en présence d'un catalyseur au palladium et d'une quantité équivalente d'acide chlorhydrique. Après élimination du catalyseur, évaporation et addition d'éther diéthylique on obtient le chlorhydrate de H-Ser-Nle-OMe.

On dissout 46 g de Tri-Ser-Tyr-NHNf-^ dans un mélange de 120 ml de diméthyl-formamide, 120 ml d'isopropanol et 120 ml d'eau, on refroidit la solution à -10°, on y ajoute 44 ml d'acide chlorhydrique 6-n et, tout en agitant énergiquement, on ajoute 3,5 g de nitrite de sodium. Au bout de 5 minutes on ajoute 250 ml d'une solution normale de bicarbonate de potassium et 1500 ml d'eau. On sépare le produit solide par essorage, on le dissout dans 200 ml de diméthylformamide, on ajoute à la solution 24 g de chlorhydrate de H-Ser-Nle-OMe et 23 ml de triéthylamine et on laisse reposer le tout à 20° pendant 16 heures.

On verse la solution dans 1000 ml d'eau on extrait avec de l'acétate d'éthyle, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore. Après avoir lavé le résidu avec de l'éther., on obtient 56,5/de Tri-Ser-Tyr-

- 26 -

1923

Ser-Nle-OMe fondant à 130-140° (avec décomposition).

~ — 20

/. a_J = -7° dans le diméthyl-formamide.

D

On dissout le produit obtenu dans 200 ml d'éthanol chaud, on ajoute à la solution 3 ml d'hydrazine, on la laisse reposer à 20° pendant 24 heures, on y ajoute 200 ml d'éther, on filtre, on lave avec de l'éther et on sèche sous pression réduite sur anhydride phosphorique et acide sulfurique concentré. On obtient 51 g de Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NP^ fondant à 205°.

On dissout 6,1 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OCP.HCl et 5,7 g de H-Val~Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 dans 20 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 3,0 g d'imidazole et on laisse reposer à 20° pendant 3 jours. On ajoute encore 0,6 g du même chlorhydrate d'octapeptide, on abandonne le mélange à 20° pendant 16 heures, on précipite par de l'acétate d'éthyle, on filtre, on dissout le précipité dans de l'éthanol, on précipite par de l'acétate d'éthyle, on filtre, on dissout le précipité dans de l'éthanol, on précipite par de l'acétate d'éthyle, on filtre et on sèche. On obtient 8,0 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)

Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH9(fondant à 195° avec décompo-20

sition. / a_J - -27° dans le diméthylformamide)

que l'on dissout dans 200 ml d'un mélange 8:2 d'acide acétique et d'eau. On laisse reposer la solution à 30° pendant 2 heures, on l'évaporé, on lave avec de l'acétate d'éthyle, on filtre et on sèche. On obtient 7 g d'acétate de H-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)-Lys-Pro-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-

Pro-Val-(CTB)Ly s-Val-Tyr-Pro-Val-NI^ •

On dissout 1,65 g de Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NI^ dans 6 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 2 ml d'eau, on refroidit à -10°, on ajoute 1 ml d'acide chlorhydrique 6-n, on ajoute 140 mg de nitrite de sodium, on agite pendant 5 minutes à -5°, on ajoute 300 ml d'une solution 0,2-n de bicarbonate de potassium et on centrifuge. On dissout le Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-N3 obtenu dans 50 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 5,02 g d'acétate de H-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try-

Gly-(CTB)Lys-Pro-Val ■ Gly-(CTB)Lys-

(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH^, on laisse reposer le mélange à 0° pendant 12 heures, on y ajoute une quantité supplémentaire de tétrapeptidazide préparée à partir de 1,0 g de Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNHp, on laisse reposer à 0° pendant 6 heures, on évapore, on travaille le résidu avec de l'acétate d'éthyle, on le lave avec de l'acétone chaude et de l'acétate d'éthyle et on le sèche sous pression réduite. On dissout le produit obtenu dans 100 ml d'acide trifluoracétique, on abandonne la solution pendant 1 heure à 20° sous azote, on l'évaporé, on travaille le résidu avec de l'acétate d'éthyle, on filtre et on sèche. On dissout le produit obtenu dans 500 ml d'acide acétique 0,2-n, on traite la solution par de 1'Amberlit-IRA-410 sous forme acétate, on filtre et on lyophilise. Après séchage sur hydroxyde de sodium on obtient 3,5 g d'acétate de H-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-Nî-^ qui se comporte comme un corps unique a la chromatographie et a l'électro-phorèse. (L'hydrolyse totale donne la composition suivante en acides aminés : Ser^ gTYri 9Nle1 0Glu0 9

His1,1Phe1,0Arg1,1Gly2/0Lys6,1Pro2,9Val4,0 ; °îuant au tryptophane il est, on le sait, décomposé par hydrolyse totale acide). Le produit peut être utilisé seul ou après avoir été transformé en un autre sel. Il peut être conservé à l'état sec, en solution ou adsorbé sur un support.

EXEMPLE 2 :

a) Préparation du thiocarbonate de O-tert.-amyle et S-phényle.

On dissout 296 ml d'alcool tert.- amy-lique dans 212 ml de pyridine et 800 ml de chloroforme, et on ajoute goutte à goutte, à 20°, 410 g de chloro-thioformiate de S-phényle. Lorsque la réaction est terminée on agite pendant encore 4 heures à 70°. On lave avec de l'acide chlorhydrique dilué, avec une solution de bicarbonate de sodium et avec une solution saturée de chlorure de sodium. On chasse le solvant par évaporation et, après distillation fractionnée, on obtient 390 g de thiocarbonate de S-phényle et O-tert.-amyle. Ce composé bout à 105-107° sous 4-5 mm de mercure.

b) Préparation du carbazate de tert.-amyle.

On introduit goutte à goutte 81 g d'hydrate d'hydrazine dans 170 g de thiocarbonate de S-phényle et O-tert.-amyle. La température s'élève alors à 70-80°. On agite pendant encore 6 heures et on ajoute une solution de 47 g d'hydroxyde de sodium dans 40 ml d'eau. Le mélange ainsi obtenu est ensuite soumis à une extraction continue à l'éther pendant 24 heures. On sépare la phase éthérée, on la sèche sur sulfate de sodium et on chasse le solvant par évaporation. Par distillation fractionnée on isole 105 g de

- 29 - 1923

carbazate de tert.-amyle, corps qui bout à 84° sous 3 mm de mercure.

c) Préparation de l'a-N~benzyloxy-carbonyl-£ -N-tert.-amyloxy-carbonyl-L~lysine ou 5 CBO-(CAT)Lys-OH .

On dissout 35 g de carbazate de tert.-amyle dans 28 ml d'acide acétique glacial et 40 ml d'eau, et on ajoute goutte à goutte, à -10°, une solution de 40 g de nitrite de sodium dans 50 ml d'eau. On agite 10 pendant encore 1 heure et on ajoute 300 ml d'éther. On lave la phase éthérée avec de l'eau et avec une solution de bicarbonate de sodium, puis, après séchage sur sulfate de sodium, on l'évaporé. On recueille 35 g de tert.-amyloxy-carbonyl-azide (CAT-azide), composé que 15 l'on ne peut pas distiller car il risquerait d'exploser.

On dissout le CAT-azide dans 200 ml de dioxanne et on ajoute la solution obtanue à un mélange de 62 g d'ct-N~benzyloxy-carbonyl-L-~ lysine, 350 ml d'eau et 15 g d'oxyde de magnésium. On agite le mélange réac-20 tionnel v, 40° pendant 16 heures, on le filtre et on chasse le dioxanne par évaporation à 40°. Après avoir ajouté 400 ml d'eau on acidifie avec une solution diluée d'acide sulfurique et on extrait avec de l'acétate d'éthyle. Après séchage sur sulfate de sodium on évapore 25 le solvant sous pression réduite. On obtient 57 g de CBO-(CAT)Lys-OH. faJ ^ = -12° dans le diméthylformamide .

Pour caractériser le produit obtenu, on en dissout 20 g avec 9 g de dicyclohexylamine dans 30 50 ml d'éther et on laisse reposer la solution à 20° pendant 2 heures. On sépare par filtration le produit mi-î a w o+aiiicé o+ nn la i avp à l'éther. On obtient

- 30 -

1923

22 g du sel de dicyclohexylaminé de CBO-(CAT)Lys-OH, sel qui fond à 130°.

d) Préparation de l'ester méthylique de l'ct-N-

benzyloxy-carbonyl- ^-N-tert.-amyloxy-carbonyl -L-lysine ou CBO-(CAT )Lys-0Me .

On dissout 24 g d'a-N-benzyloxy~ -carbonyl carbonyl-E-N-tert.-amyloxy-L-lysine dans 100 ml d'éther et on ajoute goutte à goutte une solution éthérée de diazo-méthane jusqu'à ce que la coloration jaune persiste. On évapore le solvant sous pression réduite et on sèche le résidu sous vide poussé en présence d'anhydride phosphorique. On obtient 23 g de l'ester méthylique de l'a-N-benzyloxy-carbonyl- £-N-tert.-amyloxy-carbonyl-L-lysine sous forme d'une huile épaisse qui cristallise en quelques jours. Le point de fusion est de 38-41°.

e) Préparation de l'ester 2,4.5-trichloro-phénylique de 1'a-N-benzyloxy-carbonyl- £-N-tert,-amyloxy-carbonyl-L-lysine ou CBO-(CAT )Lys-OCP .

On dissout 24 g de CBO-(CAT)Lys-OH et 13 g de 2.4,5-trichloro-phénol dans 100 ml d'acétate d'éthyle et on ajoute à la solution, à 0°, 14 g de dicyclo-hexyl-carbodiimide. On secoue pendant 16 heures à 20°, on élimine par filtration la dicyclo-hexyl-urée, on évapore le solvant et on fait cristalliser le résidu dans un mélange d'éthanol et d'eau . On obtient 32 g d'ester 2.4.5-trichloro-phénylique de 1'a-N-benzyloxy-carbonyl- £_-N-tert.-amyloxy-carbonyl-L-lysine, qui fond

- 31 -

1923

22

à 78°. £~aJ = -12° dans le diméthyl-formamide.

D

f) Préparation du L-valyl-£-N-tert.-amyloxy-

carbonyl -L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide ou

H-Val-CCADLys-Val-Tvr-Pro-Val-N^ (schéma A).

On dissout 32 g de H-Val-Tyr-Pro-Val-

et/

NH2«HBr / 37 g de CBO-(CAT)Lys-OCP (section e ) dans 150 ml de diméthyl-formamide et on ajoute 8 ml de triéthylamine. On sôcoue à 20° pendant 48 heures, on précipite par 500 ml d'acide acétique normal et on lave le produit qui a précipité avec de l'eau et avec de l'acétate d'éthyle. On obtient 39 g de CB0-(CAT)-Lys-

r- ~r 21

Val-Tyr-Pro-Val-NE} ayant un pouvoir rotatoire / ce /

^ D

égal à -26° dans le diméthyl-formamide.

On dissout 38 g de CBO-(C AT )Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NI-^ dans 500 ml de méthanol et on l'hydrogène pendant 6 heures sous la pression normale en présence d'un catalyseur au palladium. On filtre et on

évapore le solvant sous pression réduite. On obtient

99

32 g de H-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2. £~aj * = -29°

dans le diméthyl-formamide.

On dissout 32 g de H-(CAT)Lys-Val~Lys-Val-Tyr-Pro-Val-Nf-^ et 22 g de CBO-Val-OCP dans 100 ml de diméthyl-formamide et on laisse reposer la solution à 20° pendant 48 heures. On évapore le diméthyl-formamide sous pression réduite et on dissout le résidu dans un peu de n-butanol et d'acétate d'éthyle. On lave avec de l'acide sulfurique dilué et avec une solution de bicarbonate de sodium. Après séchage sur sulfate de sodium on évapore le solvant sous pression réduite. On obtient 36 g de CBO-Val-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2•

_ 32 - 1923

/— -r 22

/ a / = -25° dans le diméthyl-formamide.

~ D

On dissout 36 g de CBO-Val-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 dans 500 ml de méthanol et on hydrogène en présence d'un catalyseur au palladium pendant 6 heures sous la pression normale. On filtre, on évapore le méthanol sous pression réduite et on traite le résidu huileux par de l'éther diéthylique. On obtient 26 g de H-Val-(CATjLys-Val-Tyr-Pro-Val-NP^•

22 r

L&J = -27° dans le diméthyl-formamide.

g) L-valyl-glycyl-£ -N-tert.-amyloxy-carbonyl-L-lysyl-£-N-tert.amyloxy-carbonyl-L-lysyl- £-N-tert.-amyloxy-c arbonyl-L-lysyl-£-N-tert.-amyloxy-carbony1-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- £-N-tert.-amyloxy-carbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide ou H-Val-Gly- ( CAT ) Ly s- ( C AT ) Lys- ( CAT ) Ly s- (C AT ) Ly s-Pro-Val-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 (schéma B).

On dissout 186 g de CBO-(CAT)Lys~OH et 73 ml de triéthylamine dans 2 litres d'acétate d'éthyle, on ajoute goutte à goutte, à -5°, 50 ml de chloroformiate d'éthyle, on agite à -5° pendant 30 minutes, on ajoute 76 g de H-Pro-OMe, on laisse reposer à 20° pendant 4 heures, on lave avec de l'acide sulfurique dilué et avec de l'ammoniaque, on sèche et on évapore. On obtient 230 g d'un dipeptide huileux que l'on dissout dans 1,3 litre de dioxanne. On refroidit la solution à 0°, on y ajoute 1,3 litre d'une solution normale d'hydroxyde de sodium, on secoue à 20° pendant 1 heure, on concentre à 1,3 litre, on ajoute 1,3 litre d'eau, on lave avec de l'éther diéthylique, on refroidit à 0°, on acidifie à pH 2 avec de l'acide phosphorique à 10 %, on extrait l'huile qui a précipité au

- 33 -

1923

moyen d'acétate d'éthyle, on sèche, on évapore, on lave le résidu avec de l'éther de pétrole et on le sèche. On obtient 195 g de CBO-(CAT)Lys-Pro-OH (/""«720 = -45°

D

dans le diméthyl-formamide) que l'on dissout dans 3 li-5 très de méthanol et 300 ml d'eau, puis qu'on hydrogène en présence de 10 g d'un catalyseur à base de palladium sur charbon (à 10 % de Pd). On filtre, on évapore et on lave le résidu avec de l'éther diéthylique. On obtient 130 g de H-(CAT)Lys-Pro-OH fondant à 104° ;

D

10 -55° dans le diméthyl-formamide. On dissout le dipeptide obtenu ci-dessus dans 400 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 195 g de C30-(CAT )Lys-OCP, on laisse reposer pendant 12 heures à 20°, on évapore, on dissout le résidu dans 400 ml d'une solution normale de bicarbonate de so-15 dium, on lave avec de l'éther diéthylique, on acidifie la phase aqueuse avec une solution à 10 % d'acide citrique, on extrait avec de l'acétate d'éthyle, on sèche, on évapore et on travaille le résidu avec de l'éther de pétrole. On obtient 124 g de CB0-(CAT)Lys-Pro-OH (fon-20 dant à 120°) qu'on dissout dans 1 ,3 litre de méthanol et 100 ml d'eau. On hydrogène en présence de 10 g d'un catalyseur à base de palladium sur charbon, on élimine le catalyseur par filtration, on évapore le filtrat et on recristallise le résidu dans un mélange de dioxanne 25 et d'éther diéthylique. On obtient 84 g de H-(CAT)Lys-

(CAT)Lys-Pro-OH fondant à 140°. £~a J 20 = -£6° dans le

D

diméthyl-formamide. On dissout 150 g de CBO-(CAT)Lys-OH et 105 g de H-(CAT)Lys-Of:ie dans un mélange d-a 500 ml d!acétonitrile et 100 ml de diméthyl-formamide, on re-30 froidit à -20°, on ajoute 83 g de dicyclohexyl-carbodi-imide, on secoue à -5° pendant 12 heures, on filtre, on évapore, on dissout le résidu dans de l'acétate

- 34 - 1923

d'éthyle, on lave avec une solution diluée d'acide sulfurique et avec une solution ammoniacale diluée, on sèche, on évapore et on fait cristalliser le résidu dans un mélange d'éther diéthylique et d'éther de pé~

5 trole. On obtient 168 g de CBO-(CAT)Lys-(CAT)Lys-Qîvie fondant à 103°. f«7^ = -12° dans le méthanol. On

D

dissout l'ester dipeptidique obtenu ci-dessus dans 1 litre de méthanol, on hydrogène en présence de 15 g d'un catalyseur au palladium et, après filtration, on éva-10 pore. On dissout le résidu dans 400 ml dê diméthylformamide, on ajoute 125 g de CBO-Val-Gly-OCP, on laisse reposer a 20° pendant 12 heures, on évapore, on triture le résidu avec de l'éther éthylique, on le recristallise dans un mélange de parties égales de 15 méthanol et d'eau et on le sèche. On obtient 180 g de CBO-Val-Gly-(CT)Lys-(CAT)Lys-0Me fondant à 175°.

/ a J ^ = -18° dans le méthanol.

D

On dissout l'ester tétrapeptidique

/d'hydrate ainsi obtenu dans 200 ml de méthanol, on ajoute 80 mT7 20 d'hydrazine, on laisse reposer à 20° pendant 16 heures, on verse dans 1 litre d'eau, on filtre, on lave à l'eau, on sèche sur acide sulfurique, on dissout dans du méthanol, on verse dans de l'éther, on filtre et on sèche. On obtient 147 g de CBO-Val-Glv-(CAT )Lys-(CAT )Lys-25 NHNH2 fondant à 200°. faj 20 = -10° dans le diméthylformamide.

On dissout 25,0 g de CBO-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys-NHNH2 dans un mélange, refroidi à -10°, de 200 ml de diméthyl-formamide, 50 ml d'iso-30 propanol et 30 ml d'acide chlorhydrique 4-n, on ajoute goutte à goutte, sous vive agitation, 7 ml d'une solution aqueuse 5-n de nitrite de sodium, on agite pendant

Os

- 35 - 1923

encore 5 minutes à -5°, on ajoute 1 8 ml de triéthylamine puis 500 ml d'eau glacée, on essore soigneusement on dissout le précipite dans 100ml de diméthylformamide on ajoute 15,0 g de H-(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-OH et 3^5 ml de triéthylamine, on concentre à 90 ml sous vide poussé, on abandonne à 0° pendant 16 heures, on ajoute 800 ml d'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide acétique dilué, on chasse l'acétate d'éthyle par évaporation, on verse le résidu dans 1 litre d'eau, on filtre et on sèche sur hydroxyde de sodium. On obtient 25 g de CBO-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys~(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-OH fondant à 150° (avec décomposition).

r— -r20

- -6° dans le diméthylformamide.

On dissout 1'heptapeptide ainsi obtenu dans 80 ml de pyridine absolue, on évapore, on dissout le résidu dans 80 ml de pyridine absolue, on ajoute 10 g de phosphite de tris-(2,4.5-trichloro-phényle), on agite pendant 16 heures à 20°, on évapore, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide sulfurique dilué puis avec une solution normale de bicarbonate de sodium, on sèche sur sulfate de sodium, on évapore et on fait cristalliser le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. On obtient 26 g de CBO-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-OCP que l'on dissout aussitôt dans 75 ml de dméthylformamide ; on ajoute à la solution 20 g de H-Val-(CAT)Lys~Val-Tyr-Pro-Val-NHp, on laisse reposer le tout pendant 2 jours à 20°, on précipite par addition d'éther diéthylique, on filtre et on sèche. On dissout le produit obtenu dans un mélange 8:2 de méthanol et d'eau, on traite par un cchangeur d'ions acide, on évapore et on fait

- 36 - 1923

cristalliser le résidu dans un mélange 8:1 d'ethanol et d'eau. On recueille 15,0 g de CBO-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-Val-(CA T)Lys-Va1-Tyr-Pro-Val-M-^ fondant à 1 90° avec décomposition.

/*"*" *7*2 0 /

L a= -6° dans le diméthylformamide.

On dissout le tridécapeptide obtenu dans 500 ml de méthanol, on hydrogène en présence de 5 g d'un catalyseur constitué de palladium sur charbon, on filtre, on évapore et on traite le résidu par de l'éther diéthylique. On obtient 12 g de H-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys~(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-Val-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NI'^ fondant à 198°.

h) Ester 2.4.5-trichloro-phénylique de la trity1-0-tert.-butyl-L-glutamyl-im-trityl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-N-^-tert.-amyloxy—carbonyl-L-lysyl-L-proline ou Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OCP (Schéma C).

On dissout 100 g de C30-(N02)Arg-Try-Gly-Oïie dans 1,5 litre d'un mélange 8-2 de dioxanne et d'eau, on ajoute 250 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium, on laisse reposer à 20° pendant 1 heure, on verse sur 5 litres d'acide sulfurique 0,05-n, on sépare le précipité par essorage, on le lave avec de l'eau, de l'alcool, de l'éther diéthylique et de l'éther de pétrole, et on le sèche. On obtient 95 g de CBO-(îC^Arg-Try-Gly-OH (point de fusion 225° ; {_ —

-14° dans le diméthylformamide) que l'on dissout dans 1,1 litre de pyridine absolue. On ajoute 85 g d'un phosphite de tris-(2.4.5-trichlorophényle), on agite pendant 16 heures à 20°, on évapore, on dissout le résidu d'évaporation dans de l'acétate d'éthyle, on lave

37 -

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avec de l'acide sulfurique dilué, on sèche et on évapore. On fait cristalliser le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther diéthylique et l'on obtient 125 g de CBO-fNOgjArg-Try-Gly-OCP fondant à 124°,

_ ^ Q

^ L a_7 = -9° dans le diméthyl-formamide. On dissout l'ester tripeptidique ainsi obtenu dans 240 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 750 g de H-(CAT )Lys-Pro-OH ( section g), on agite pendant 16 heures à 20°, on précipite par de l'éther diéthylique, on filtre, on 10 dissout le précipité dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'eau, on lave avec une solution normale d'acide citrique, on sèche et on évapore. On recristallise deux fois le résidu dans de l'acétate d'éthyle. On obtient 125 g de CBO-(NC^)Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OH fondant

15 à 140°. /"a 7 ^ = 20° dans le diméthyl-formamide.

D

On dissout 85 g de CB0-(NÛ2)Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OH dans 450 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 50 ml d'eau et 50 g d'un catalyseur constitué de palladium sur charbon (à 10 % de Pd), on 20 hydrogène, on filtre, on évapore, on dissout le résidu dans l'eau, on lyophilise et on sèche sur soude caustique. On obtient 46 g de H-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-

, nr\

OH. / aJ - -9° dans un mélange 95:5 d'acide acétique et d'eau.

25 On dissout 61,5 g de Tri-Glu(OTB)-

(Tri)His-Phe-NHNH2 (exemple 4) dans 150 ml de diméthylformamide et 150 ml d'isopropanol, on refroidit à -10° et on ajoute 60 ml d'acide chlorhydrique 4-n puis, tout en agitant, 13,5 ml d'une solution 5-n de nitrite de 30 sodium. Au bout de 5 minutes on ajoute 42 ml de triéthylamine et 1500 ml d'eau glacée, on essore, on dissout le précipité dans de l'acétate d'éthyle, on

- 38 -

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lave avec une solution saturée de chlorure de sodium, on sèche, on évapore à 0°, on dissout le résidu dans 150 ml de diméthyl-formamide, on ajoute 40,0 g de H-Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OH.3 AcOH et 6,0 ml de tri-5 éthylamine, on laisse reposer à 0° pendant 16 heures, on ajoute 1500 ml d'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide acétique 0,5-n, de l'eau et de la pyridine 0,5-n, on évapore, on dissout le résidu dans 150 ml d'acétate d'éthyle et on précipite par de l'éther 10 diéthylique. On obtient 70 g de Tri-Glu(OTB)~(Tri)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OH fondant à 150° ;

/— -r 20

L^J - -15° dans le diméthyl-formamide.

On dissout le peptide obtenu ci-dessus dans 300 ml de pyridine, on refroidit à -20°, on ajoute 15 45 ml d'une solution normale d'acide chlorhydrique dans du dioxanne, on agite à -20° pendant 5 minutes, on

à/

ajoute 12 ml de triéthylamine, on concentre/Ta moitié du volume, on ajoute 45 g de phosphite de tris-(tri-chlorophényle), on laisse reposer à 20° pendant 16 heu-20 res, on évapore, on travaille le résidu avec de l'éther diéthylique, on le dissout dans de l'acétate d'éthyle, on précipite par de l'éther diéthylique, on filtre et on sèche. On obtient 78 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-

Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-OCP.HCl fondant à 170° avec

... 20 '

25 décomposition. jT&J = -20° dans le diméthylformamide.

i)L-séryl-L-tyrosyl-L-séryl-L-norleucyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-30 lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-

valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide ou H-S er-Tyr-S er-Nle-Glu-Hi s-Ph e-Arg-Try-Gly-Ly s-Pro-Val Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2 p (schéma D).

- 39

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On dissout 18,5 g de Tri-Glu(OTB)-(Tri)IIis~ Phe-Arg-Try—Gly—(CAT)Lys - Pro-OCP.HGl et 18,0 g de H-Val-G1y-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys (CAT)Lys-Pro-Va1- (CAT)^ylè Tyr-Pro-Val-NBj ( section g) dans 60 ml de diméthylfor-5 mamide, on ajoute 9,0 g d'imidazole et on laisse reposer le tout à 20° pendant 3 jours. On ajoute encore 1,8 g du même chlorhydrate d1octapeptide, on laisse reposer le mélange à 20° pendant encore 16 heures, on précipite par de l'acétate d'éthyle, on filtre, on dissout le 10 précipité dans de l'éthanol, on précipite par de l'acé

tate d'éthyle, on filtre et on sèche. On obtient 26,0 g

/Gly-(CAD Lys-

dç^ri-GlufOTB) —(Tri)His-Phe—Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro—Val-/

(CAT) Lys-(CAT) Lys^CAT) Lys-Pro-Val- (CAT) Lys-Val-Tyr-Pro-

—iO n

Val-Nlr^ (fondant à 190° avec décomposition ; L°-J^ ~ 15 -27° dans le diméthylformamide) que l'on dissout dans

200 ml d'un mélange 8:2 d'acide acétique et d'eau. On laisse reposer la solution pendant 2 heures à 30°, on l'évaporé, on lave avec de l'acétate d'éthyle, on filtre et on sèche. On obtient 22 g d'acétate de H-Glu(OTB)-20 (Tri) His-Phe-Arg-Try-Gly-(CAT)Lys-Pro-Val-Gly-(CAT)Lys-

(CAT) Lys-(CAT)Lys^CAT)Lys-Pro-Val-(CAT)Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NI^.

On dissout 2,3 g de Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NH2 (ex.1,sect.e) dans 12 ml de diméthylformamide, on 25 ajoute 4 ml d'eau, on refroidit a -10°, on ajoute 2 ml d'acide chlorhydrique 6-n, on ajoute 280 mg de nitrite de sodium, on agite à -5° pendant 5 minutes, on ajoute 300 ml d'une solution 0,2-n de bicarbonate de potassium et on centrifuge. On dissout le Tri-Ser-Tyr-Ser-N3 obtenu 30 dans 50 ml de diméthylformamide, on ajoute 10,5 g diacé

tate de H-Glu(OTB)-(Tri)His-Phe-Arg~Try-Gly-(CAT)Lys~Pro-

r\

- 40 -

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Val-Gly—(CAT) Lys-Val-Gly-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-(CAT)Lys-Pro-Val-(CAT) Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NI^, on laisse reposer le mélange à 0° pendant 12 heures, on ajoute une quantité supplémentaire de tétrapeptidazide préparée à partir de 2,0 g de Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNP^, on laisse reposer pendant 6 heures à 0°, on évapore, on travaille le résidu avec de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acétone chaude et de l'acétate d'éthyle et on sèche sous pression réduite. On dissout le produit obtenu dans 100 ml d'acide trifluoracétique à 90 %, on laisse reposer à 20° pendant 1 heure sous azote, on évapore, on travaille le résidu avec de l'acétate d'éthyle, on filtre et on sèche. On dissout le produit obtenu dans 500 ml d'acide acétique 0,2-n, on traite la solution par de l'Amberlit-IRA-410 sous forme acétate, on filtre et on lyophilise. Après séchage sur hydroxyde de sodium on obtient 7,5 g d'acétate de H-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val~Tyr~Pro~ Val-NKj Qui se comporte comme un composé bien défini dans la chromatographie et dans l'électrophorèse. L'hydrolyse donne la composition suivante en acides aminés : Ser^ g Tyr1^ 9Nle1.0Glu0> gHis^ Phe? QArg 1 ^ 1Gly2 ? 0Lys6 ^1Pro2 ? g Val^ q ; le tryptophane, on le sait, est décomposé par l'hydrolyse totafe acide. Le produit peut être utilisé tel quel ou après avoir été converti en un autre sel. Il peut être conservé à l'état solide, en solution ou à l'état adsorbé.

Claims (1)

1. R E S U M E

   La présente invention comprend notamment :

   1°) A titre de produits industriels nouveaux, le pentacosapeptide de formule L- seryl -L~tyro-5 syl-L- seryl-L-norleucyl-L-glutamy1-L-histidy1-L-phény-

   lalanyl~L~arginyl-L~tryptophanyl-glycyl-L~lysyl-L-prolyl-L~valyl-glycyl-L~lysyl-L-lysyl~L-lysyl-L~lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, ainsi que les sels d'addition que forme ce composé avec 10 des acides minéraux ou organiques.

   2°) Un procédé de préparation du nouveau pentacosapeptide spécifié sous 1° et de ses sels, procédé qui consiste à mettre en oeuvre des méthodes connues, couramment appliquées dans la chimie des peptides. 15 3°) Des modes d'exécution du procédé

   spécifié sous 2°, présentant les particularités suivantes:

   a) on part d'un N-R'-L~séryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl- Y-C-tert.-butyl~L~glutamyl~im-tri~ phényl-méthy1-L-histidy1-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-

   20 tryptophanyl-glycyl- £ -N—R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-

   glycyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -M-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-

   £ -N-R~L-lysyl~L-prolyl-L-valyl- t. -M-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, dans lequel R désigne un groupe tert,-botoxycarbonyle ou un groupe tertio-25 amyloxycarbonyle et R' représente un groupe triphényl-

   méthyle, tert,-butoxycarbonyle ou tert.amyloxycarbonyle, et on élimine les groupes protecteurs de ce composé, en milieu acide, en un ou plusieurs stades ;

   b) on condense le L-valyl- £ -N-R-L-lysyl-30 L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, dans lequel

   R représente un groupe tert.-butoxycarbonyle ou un groupe tert.-amyloxycarbonyle, avec 11 ester 2.4.5-trichloro-

   q phénylique de la N-benzyloxycarbonyl-L-valyl-glycyl- £ -

   ;\

   - 42 -

   1923

   N—R—L—lysyl— t -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-L-proline, on condense le N-benzyloxycarbonyl-L-valyl-glycyl- £ -N-R-L-Lysyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -N~R~L-lysyl-L-prolyl~L-tfalyl-£-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-vallnamide obtenu, après en avoir éliminé le groupe benzyloxycarbonyle, avec l'ester 2,4,5-trichlorophénylique de la N-triphénylméthyl- Y~0-tert,-butyl-L—glutamyi-im-triphénylméthy1-L-histidy1-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptop'nanyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl-L-proline, on condense le N-triphénylméthyl- ~Y~0~ tert.-butyl-L-glutamyl-inv-triphénylméthyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl— L^-valyl-glycyl- £ -N-R-L—lysyl- •£ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-£ -N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L^-prolyl-L-valinamide obtenu, après en avoir chassé le groupe N-triphénylméthyle avec le N-R'-L-séryl-L-tyrosyl-L-sëryl-L-norleucylazide, dans lequel R1 représente un groupe triphénylméthyle, tertio-butoxycarbonyle ou tertio-amyloxycarbonyle, et on élimine en milieu acide , en un ou plusieurs stades, la totalité des groupes protecteurs contenus dans le nouveau pentacosapeptide. protégé obtenu, c'est-à-dire dans le N-R'-L-séryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl- Y"-0~tert.-butyl-L~glutamyl~im-triphényl-méthyl-L~histidyl-L-phény-lalanyl-L-arginyl—L-tryptophanyl—glycyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl- £-N-R-L-lysyl-£ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- £ -N-R-L~lysyl-L~valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide dans lequel R et R' ont les significations indiquées ci-dessus;

   c) on part d'un N-R'-L-séryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl- "Y*-0-tert ,-butyl-L-glutamyl-im-tri-

   - 43 -

   1923

   phénylméthyl-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L~ tryptophanyl-glycyl- £ -N-R-L~lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl- £. -N-R-L-lysyl- <£ -N-R-L-lysyl-

   <£-N-R-L-lysyl~L~prolyl-L-valyl- <5 -N-R-L~lysyl~L~valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide dans lequel R et R' représente les groupes utilisés dans la chimie des peptides pour protéger les groupes amino, et on élimine ces groupes protecteurs en un ou plusieurs stades ;

   séryl-L-norleucyl- Y"-R"-L-glutamyl-im-R"1-L-histidyl-L-phénylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- 6-N-R-L-lysyl-L~prolyl-L-valyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl-<£, -N-R-L-lysyl- £-N-R-L-lysyl- £. -N-R-L-Iysyl-L-prolyl-L-valyl-£ -N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamide, dans lequel R, R1, R" et R"' représentent chacun l'hydrogène ou l'un des groupes ordinairement utilisés dans la chimie des peptides pour protéger les groupes amino, mais l'un au moins de ces groupes n'étant pas l'hydrogène et on élimine ces groupes protecteurs en un ou plusieurs stades.

   d) on part d'uh N-R'-L-séryl-L-tyrosyl-L-

   José CURAU

   Conseil en Propriété Industrielle

   Par p