MD3443009T2 - Anticorpi anti-TIM-3 și compoziții - Google Patents

Anticorpi anti-TIM-3 și compoziții Download PDF

Info

Publication number
MD3443009T2
MD3443009T2 MDE20190216T MDE20190216T MD3443009T2 MD 3443009 T2 MD3443009 T2 MD 3443009T2 MD E20190216 T MDE20190216 T MD E20190216T MD E20190216 T MDE20190216 T MD E20190216T MD 3443009 T2 MD3443009 T2 MD 3443009T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
tim
acid sequences
Prior art date
Application number
MDE20190216T
Other languages
English (en)
Inventor
Trine Lindsted
Torben Gjetting
Gunther Roland Galler
Monika Gad
Michael Monrad Grandal
Klaus Koefoed
Michael Kragh
Ivan David Horak
Thomas Bouquin
Mikkel Wandahl Pedersen
Original Assignee
Symphogen As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Symphogen As filed Critical Symphogen As
Publication of MD3443009T2 publication Critical patent/MD3443009T2/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39566—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against immunoglobulins, e.g. anti-idiotypic antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Această invenţie se referă la anticorpi anti-TIM-3 şi la compoziţii de anticorpi şi la utilizarea lor în creşterea imunităţii la un pacient, de exemplu, pentru a trata cancerul.

Description

STADIUL TEHNICII
TIM-3 (imunoglobulină de celule T şi care conţine domeniul de mucină 3), cunoscută, de asemenea, sub numele de HAVCR2 (receptor celular 2 al virusului hepatitei A) sau CD366, este un membru al familiei de proteine de imunoglobulină de celule T şi domeniu de mucină. TIM-3 este codificată la oameni de către gena Havcr2 şi este o glicoproteină de tip I de 33 kDa cu un domeniu IgV distal de membrană şi un domeniu de mucină proximal de membrană. Conţine o regiune conservată de cinci reziduuri Tyr în domeniul intracelular, care sunt fosforilate la legarea ligandului. TIM-3 este exprimată de o serie de celule diferite care provin din ambele braţe adaptative şi înnăscute ale sistemului imunitar, inclusiv celulele T, celulele dendritice, macrofagele, şi celulele natural killer (NK). Exprimarea TIM-3 este scăzută în celulele T naïve, dar devine puternic reglată în sus la activarea celulelor T. Spre deosebire de celulele T, celulele înnăscute, cum ar fi celulele dendritice, celulele NK şi monocitele, au o exprimare bazală a TIM-3 ridicată. TIM-3 a fost asociată cu mai mulţi liganzi, în mare parte promiscui, inclusiv galectina-9, fosfatidilserina, CEACAM-1 şi HMGB-1, dar rolurile exacte ale acestor liganzi sunt în prezent necunoscute.
Cu toate că s-a sugerat că TIM-3 este un inhibitor al punctului de control, există dovezi relativ rare care să susţină ideea că TIM-3 mediază în mod direct suprimarea activării celulelor T sau secreţia de citokine într-o manieră similară cu, de ex., PD-1. Mai mult decât atât, şi spre deosebire de PD-1, TIM-3 pare să joace un rol în reglarea celulelor sistemului înnăscut, şi în special a celulelor dendritice. Publicaţia de brevet de invenţie PCT WO 2013/006490 şi Kikushige şi Miyamoto (Int J Hematol., 98: 627-33 (2013)) se referă la anticorpi anti-TIM-3 murini şi iau în considerare utilizarea lor pentru detectarea şi/sau tratamentul cancerului. Majoritatea datelor funcţionale legate de TIM-3 şi rolul său în imunologia tumorii provin din studii in vivo folosind diverşi anticorpi. În majoritatea acestor studii, din cauza validării slabe a anticorpilor, nu este clar dacă efectele anticorpilor TIM-3 sunt mediate de inhibarea legării ligandului sau de un efect agonist asupra ţintei.
Având în vedere proprietăţile sale de reglare a răspunsului imun, TIM-3 a fost investigată ca o ţintă potenţială pentru imunoterapie, inclusiv pentru tratamentul cancerului şi al bolilor autoimune. Un singur anticorp anti-TIM-3 este în prezent în dezvol¬tare clinică, dar în prezent nu există anticorpi anti-TIM-3 aprobaţi.
Având în vedere rolul critic al TIM-3 ca un modulator imunitar, este nevoie de terapii imune noi şi îmbunătăţite care să ţintească TIM-3 pentru a trata cancerele şi anumite tulburări ale sistemului imunitar.
EXPUNEREA INVENŢIEI
Prezenta invenţie este îndreptată spre noi anticorpi recombinanţi, aşa cum sunt definiţi în revendicări, care ţintesc TIM-3, precum şi compoziţii farmaceutice care cuprind unul sau mai mulţi dintre aceşti anticorpi, de ex., un anticorp anti-TIM-3 care, prin intermediul activităţii asupra TIM-3 activează diverse celule imune, cum ar fi celulele prezentatoare de antigen profesionale (de ex., celulele dendritice şi macrofagele) şi celulele T (de ex., celulele T helper şi celulele T citotoxice). Prezenta invenţie este îndreptată, de asemenea, spre utilizarea anticorpilor şi a compoziţiilor farmaceutice pentru creşterea imunităţii la un pacient, şi pentru tratamentul cancerelor care provin din ţesuturi precum piele, plămân, intestin, ovar, creier, prostată, rinichi, ţesuturi moi, sis¬temul hematopoietic, cap şi gât, ficat, vezică urinară, sân, stomac, uter şi pancreas. Comparativ cu tratamentele disponibile în prezent pentru astfel de cancere, inclusiv tratamentele cu anticorpi, se are în vedere că anticorpii din invenţie pot oferi un răspuns clinic superior fie singuri, fie în combinaţie cu un alt terapeutic pentru cancer, cum ar fi un anticorp care ţinteşte o altă proteină de tip punct de control imun.
Anticorpii din prezenta invenţie cuprind secvenţele de aminoacizi H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 din ID. SECV. NR.: 7-12, respectiv. În unele variante de realizare, prezenta invenţie furnizează un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, unde anticorpul anti-TIM-3 este anticorpul menţionat în acest document ca anticorp 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086 sau 17144.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, unde anticorpul anti-TIM-3 este anticorpul menţionat în acest document ca anticorp 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, sau 20621 sau o variantă a oricăruia dintre aceştia, unde varianta poate conţine, de ex., anumite modificări minime de aminoacizi în raport cu respectivul anticorp (de ex., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, sau 10 modificări de aminoacizi, care pot fi, de ex., în regiunile cadru) fără a pierde specificitatea de legare la antigen a anticorpului.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, oricare dintre anticorpii 15086,15086, 15086,16837, 15086,17145, 15086,17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, şi 20621.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde o H-CDR3 care cuprinde secvenţa de aminoacizi H-CDR3 din SECV ID NR: 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102, 112, 122, 132, 142, 152, 162,172, 182, 192, 202, 212, 222, sauI 232.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde H-CDR1-3 care cuprind secvenţele H-CDR1-3, respectiv, din SECV ID NRs: 30-32, 40-42, 50-52, 60-62, 70-72, 80-82, 90-92, 100-102, 110-112, 120-122, 130-132, 140-142, 150-152, 160-162, 170-172, 180-182, 190-192, 200-202, 210-212, 220-222, sau 230-232.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului greu (VH) care este cel puţin 90% (de ex., cel puţin 92%, cel puţin 95%, cel puţin 98%, sau cel puţin 99%) identic în secvenţa de aminoacizi cu SECV ID NR: 3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un VH care cuprinde SECV ID NR: 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218 sau 228.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un lanţ greu (HC) care cuprinde secvenţa de aminoacizi VH din SECV ID NR:28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228 şi secvenţa de aminoacizi a regiunii constante a lanţului greu (CH) din SECV ID NR: sau SECV ID NR: 5 sau SECV ID NR: 23, 24 sau 25.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde o L-CDR3 care cuprinde secvenţa de aminoacizi L-CDR3 din SECV ID NR: 35, 45, 55, 65, 75, 85, 95, 105, 115, 125, 135, 145, 155 165,175, 185, 195, 205, 215, 225,
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde L-CDR1-3 care cuprind secvenţele L-CDR1-3, respectiv, din SECV ID NRs: 33-35, 43-45, 53-55, 63-65, 73-75, 83-85, 93-95, 103-105, 113-115, 123-125, 133-135, 143-145, 153-155, 163-165, 173-175, 183-185, 193-195, 203-205, 213-215, 223-225, sau 233-235.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului uşor (VL) care este cel puţin 90% (de ex., cel puţin 92%, cel puţin 95%, cel puţin 98%, sau cel puţin 99%) identic în secvenţă cu secvenţa de ami¬noacizi VL din SECV ID NR: 4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un VL care cuprinde secvenţa de aminoacizi VL din SECV ID NR: 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un lanţ uşor (LC) care cuprinde secvenţa de aminoacizi VL din SECV ID NR: 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229 şi secvenţa de aminoacizi a regiunii constante a lanţului uşor din SECV ID NR: 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde oricare dintre secvenţele de lanţ greu de mai sus şi oricare dintre secvenţele de lanţ uşor de mai sus.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde o H-CDR3 şi o L-CDR3 care cuprind secvenţele de aminoacizi H-CDR3 şi L-CDR3, respectiv, din SECV ID NRs: 32 şi 35, 42 şi 45, 52 şi 55, 62 şi 65, 72 şi 75, 82 şi 85, 92 şi 95, 102 şi 105, 112 şi 115, 122 şi 125, 132 şi 135, 142 şi 145, 152 şi 155, 162 şi 165, 172 şi 175, 182 şi 185, 192 şi 195, 202 şi 205, 212 şi 215, 222 şi 225, şi 232 şi 235.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 care cuprind secvenţele H-CDR1-3 şi L-CDR1-3, respectiv, din SECV ID NRs: 30-35, 40-45, 50-55, 60-65, 70-75, 80-85, 90-95, 100-105, 110-115, 120-125, 130-135, 140-145, 150-155, 160-165, 170-175, 180-185, 190-195, 200-205, 210-215, 220-225, sau 230-235.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un VH care este cel puţin 90% (de ex., cel puţin 92%, cel puţin 95%, cel puţin 98%, sau cel puţin 99%) identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228, şi un VL care este cel puţin 90% (de ex., cel puţin 92%, cel puţin 95%, cel puţin 98%, sau cel puţin 99%) identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un VH care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228, şi un VL care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un LC care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229 şi secvenţa de ami¬noacizi din SECV ID NR: 6; şi un HC care cuprinde (i) secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, sau (ii) sec¬venţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228 şi secvenţa de aminoacizi din 23, 24 sau 25.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen care cuprinde secvenţele de aminoacizi H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 din:
a) SECV ID NR: 30-35, respectiv;
b) SECV ID NR: 40-45, respectiv;
c) SECV ID NR: 50-55, respectiv;
d) SECV ID NR: 60-65, respectiv;
e) SECV ID NR: 70-75, respectiv;
f) SECV ID NR: 80-85, respectiv;
g) SECV ID NR: 90-95, respectiv;
h) SECV ID NR: 100-105, respectiv;
i) SECV ID NR: 110-115, respectiv;
j) SECV ID NR: 120-125, respectiv;
k) SECV ID NR: 130-135, respectiv;
l) SECV ID NR: 140-145, respectiv;
m) SECV ID NR: 150-155, respectiv;
n) SECV ID NR: 160-165, respectiv;
o) SECV ID NR: 170-175, respectiv;
p) SECV ID NR: 180-185, respectiv;
q) SECV ID NR: 190-195, respectiv;
r) SECV ID NR: 200-205, respectiv;
s) SECV ID NR: 210-215, respectiv;
t) SECV ID NR: 220-225, respectiv; sau
u) SECV ID NR: 230-235, respectiv.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen care concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, un anticorp ale cărui domenii variabile ale lanţului greu şi uşor cuprind secvenţele de aminoacizi din:
a) SECV ID NR: 3 şi 4, respectiv;
b) SECV ID NR: 15 şi 4, respectiv;
c) SECV ID NR: 28 şi 29, respectiv;
d) SECV ID NR: 38 şi 39, respectiv;
e) SECV ID NR: 48 şi 49, respectiv;
f) SECV ID NR: 58 şi 59, respectiv;
g) SECV ID NR: 68 şi 69, respectiv;
h) SECV ID NR: 78 şi 79, respectiv;
i) SECV ID NR: 88 şi 89, respectiv;
j) SECV ID NR: 98 şi 99, respectiv;
k) SECV ID NR: 108 şi 109, respectiv;
l) SECV ID NR: 118 şi 119, respectiv;
m) SECV ID NR: 128 şi 129, respectiv;
n) SECV ID NR: 138 şi 139, respectiv;
o) SECV ID NR: 148 şi 149, respectiv;
p) SECV ID NR: 158 şi 159, respectiv;
q) SECV ID NR: 168 şi 169, respectiv;
r) SECV ID NR: 178 şi 179, respectiv;
s) SECV ID NR: 188 şi 189, respectiv;
t) SECV ID NR: 198 şi 199, respectiv;
u) SECV ID NR: 208 şi 209, respectiv;
v) SECV ID NR: 218 şi 219, respectiv; sau
w) SECV ID NR: 228 şi 229, respectiv.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen care cuprinde un domeniu variabil al lanţului greu şi un domeniu variabil al lanţului uşor cu secvenţe de aminoacizi cel puţin 90% identice cu secvenţele de aminoacizi din:
a) SECV ID NR: 3 şi 4, respectiv;
b) SECV ID NR: 15 şi 4, respectiv;
c) SECV ID NR: 28 şi 29, respectiv;
d) SECV ID NR: 38 şi 39, respectiv;
e) SECV ID NR: 48 şi 49, respectiv;
f) SECV ID NR: 58 şi 59, respectiv;
g) SECV ID NR: 68 şi 69, respectiv;
h) SECV ID NR: 78 şi 79, respectiv;
i) SECV ID NR: 88 şi 89, respectiv;
j) SECV ID NR: 98 şi 99, respectiv;
k) SECV ID NR: 108 şi 109, respectiv;
l) SECV ID NR: 118 şi 119, respectiv;
m) SECV ID NR: 128 şi 129, respectiv;
n) SECV ID NR: 138 şi 139, respectiv;
o) SECV ID NR: 148 şi 149, respectiv;
p) SECV ID NR: 158 şi 159, respectiv;
q) SECV ID NR: 168 şi 169, respectiv;
r) SECV ID NR: 178 şi 179, respectiv;
s) SECV ID NR: 188 şi 189, respectiv;
t) SECV ID NR: 198 şi 199, respectiv;
u) SECV ID NR: 208 şi 209, respectiv;
v) SECV ID NR: 218 şi 219, respectiv; sau
w) SECV ID NR: 228 şi 229, respectiv.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen care cuprinde un lanţ greu şi un lanţ uşor ale căror domenii variabile au secvenţele de aminoacizi din:
a) SECV ID NR: 3 şi 4, respectiv;
b) SECV ID NR: 28 şi 29, respectiv;
c) SECV ID NR: 38 şi 39, respectiv;
d) e)- SECV ID NR: 48 şi 49, respectiv;
e) SECV ID NR: 58 şi 59, respectiv;
f) SECV ID NR: 68 şi 69, respectiv;
g) SECV ID NR: 78 şi 79, respectiv;
h) SECV ID NR: 88 şi 89, respectiv;
i) SECV ID NR: 98 şi 99, respectiv;
j) SECV ID NR: 108 şi 109, respectiv;
k) SECV ID NR: 118 şi 119, respectiv;
l) SECV ID NR: 128 şi 129, respectiv;
m) SECV ID NR: 138 şi 139, respectiv;
n) SECV ID NR: 148 şi 149, respectiv;
o) SECV ID NR: 158 şi 159, respectiv;
p) SECV ID NR: 168 şi 169, respectiv;
q) SECV ID NR: 178 şi 179, respectiv;
r) SECV ID NR: 188 şi 189, respectiv;
s) SECV ID NR: 198 şi 199, respectiv;
t) SECV ID NR: 208 şi 209, respectiv;
u) SECV ID NR: 218 şi 219, respectiv; sau
v) SECV ID NR: 228 şi 229, respectiv.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde:
a) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6;
b) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6;
c) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6;
d) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6;
e) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6;
f) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6;
g) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6;
h) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6;
i) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6;
j) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6;
k) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6;
l) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6;
m) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6;
n) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6;
o) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6;
p) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6;
q) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6;
r) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6;
s) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6;
t) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6; sau
u) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi 5 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde:
a) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6;
b) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6;
c) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6;
d) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6;
e) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6;
f) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6;
g) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6;
h) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6;
i) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6;
j) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6;
k) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6;
l) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6;
m) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6;
n) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6;
o) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6;
p) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6;
q) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6;
r) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6;
s) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6;
t) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6; sau
u) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi 23 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde:
a) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6;
b) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6;
c) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6;
d) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6;
e) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6;
f) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6;
g) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6;
h) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6;
i) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6;
j) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6;
k) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6;
l) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6;
m) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6;
n) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6;
o) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6;
p) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6;
q) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6;
r) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6;
s) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6;
t) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6; sau
u) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi 24 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde:
a) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6;
b) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6;
c) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6;
d) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6;
e) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6;
f) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6;
g) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6;
h) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6;
i) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6;
j) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6;
k) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6;
l) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6;
m) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6;
n) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6;
o) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6;
p) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6;
q) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6;
r) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6;
s) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6;
t) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6; sau
u) un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi 6.
Invenţia furnizează un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, unde respectivul anticorp cuprinde H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 care cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-12, respectiv.
În anumite variante de realizare, invenţia furnizează un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, unde respectivul anticorp cuprinde un VH care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi un VL care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4.
În variante particulare de realizare, invenţia furnizează un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde un lanţ greu care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi 25 şi un lanţ uşor care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia care se leagă la un epitop al TIM-3 care cuprinde reziduurile de aminoacizi F61 şi 1117 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 20293, sau 20131). Epitopul poate cuprinde suplimentar reziduul de aminoacid R69 (de ex., anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, sau 20293). Epitopul poate cuprinde suplimentar P50, E62, M118, şi D120 (de ex., anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, sau 20131) şi poate cuprinde suplimentar reziduurile de aminoacizi R69, V60, şi G64 (de ex., anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, sau 15086.17144).
Anticorpul sau porţiunea se poate lega la un epitop al TIM-3 care cuprinde reziduurile de aminoacizi P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, şi D120 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, sau 15086.17144), reziduurile de aminoacizi F61, R69, şi 1117 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 20293), sau reziduurile de aminoacizi P50, F61, E62, 1117, M118, şi D120 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 20131).
Invenţia furnizează un anticorp monoclonal sau o porţiune de legare la antigen a acestuia care se leagă la un epitop al TIM-3 care cuprinde reziduurile de aminoacizi 62-67 din SECV ID NR: 236 (adică anticorpul 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, sau 20293). În acest document este descris un anticorp monoclonal sau o porţiune de legare la antigen a acestuia care se leagă la un epitop al TIM-3 care cu¬prinde reziduurile de aminoacizi 114-117 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 20131).
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 este un anticorp IgG, de ex., un anticorp IgG uman. În anumite variante de realizare, anticorpul cuprinde cel puţin o mutaţie în regiunea FC. În variante particulare de realizare, anticorpul cuprinde o mutaţie în una sau mai multe dintre poziţiile de aminoacid de lanţ greu 228, 233, 234 şi 235, care sunt numerotate în conformitate cu schema de numerotare IMGT. Pentru exemplificare, un reziduu de aminoacid sau ambele reziduuri de aminoacizi de la poziţiile 234 şi 235 pot suferi mutaţie la Ala, şi/sau reziduul de aminoacid de la poziţia 228 poate suferi mutaţie la Pro.
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie are cel puţin una dintre următoarele proprietăţi:
a) se leagă la TIM-3 uman cu o KD de 23 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă;
b) se leagă la TIM-3 de cynomolgus cu o KD de 22 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă;
c) se leagă la TIM-3 uman cu o EC50 de 1,2 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin ELISA;
d) se leagă la TIM-3 de cynomolgus cu o EC50 de 46 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin ELISA;
e) creşte secreţia IFN-γ într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă unidirecţională;
f) creşte secreţia de IFN-γ într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă bidirecţională;
g) creşte secreţia de TNF-α într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă unidirecţională;
h) creşte secreţia de TNF-α din celulele dendritice; şi
i) inhibă interacţiunea TIM-3 cu fosfatidilserina.
Exemplele de astfel de anticorpi includ, fără limitare, anticorpul 15086.15086 (având cel puţin proprietăţile a, c, d, e, g, şi h); anticorpul 15086.17145 (având cel puţin proprietăţile a, c, d, e, g, h, şi i), şi anticorpul 15086.16837 sau 15086.17144 (având cel puţin proprietăţile a, c, şi d). În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie are toate dintre respectivele proprietăţi. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile a, c, d, e, g, şi h. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile a, c, d, e, g, h, şi i. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile a, c, şi d. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile a, b, c, d, e, f, şi h. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile c, e, f, şi h. În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen are cel puţin proprietăţile c, d, e, f, şi h.
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie măreşte activitatea celulelor NK. În unele variante de realizare, această activitate poate media ADCC.
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie nu concurează pentru legarea la TIM-3 cu ABTIM3 (din publicaţia PCT WO 2015/117002) şi/sau mAb15 (din publicaţia PCT WO 2016/111947). În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie nu se leagă la acelaşi epitop ca ABTIM3 şi/sau mAB15; pentru exemplificare, anticorpul sau porţiunea din invenţie se leagă la unul sau mai multe reziduuri de pe TIM-3 care nu sunt legate de ABTIM3 şi/sau mAb15.
În alte aspecte, prezenta invenţie furnizează compoziţii farmaceutice care cuprind cel puţin un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, aşa cum este definit în revendicări, şi un excipient acceptabil din punct de vedere farmaceutic, opţional cu un agent terapeutic suplimentar, cum ar fi un agent chimioterapeutic, un agent anti-neoplazic, un agent antiangiogenic, un inhibitor al tirozin kinazei, sau un inhibitor al căii TIM-3.
Prezenta invenţie furnizează suplimentar molecule de acid nucleic izolate care cuprind o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, sau ambele, ale unui anticorp anti-TIM-3 sau ale unei porţiuni de legare la antigen, aşa cum este definit în revendicări.
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, vectori care cuprind o astfel de moleculă de acid nucleic izolată, unde respectivul vector cuprinde suplimentar o secvenţă de control al exprimării.
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, celule gazdă care cuprind o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, şi o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, ale unui anticorp anti-TIM-3, aşa cum este definit în revendicări.
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, o metodă pentru producerea unui anticorp anti-TIM-3 sau a unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, aşa cum este definit în revendicări, cuprinzând furnizarea unei celule gazdă care cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia şi o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia ale unui anticorp anti-TIM-3 sau ale unei porţiuni de legare la antigen, aşa cum este definit în revendicări, cultivarea respectivei celule gazdă în condiţii adecvate pentru exprimarea anticorpului sau porţiunii, şi izolarea anticorpului rezultat sau a porţiunii rezultate.
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, o moleculă de legare bispecifică având o porţiune de legare la antigen a unui anticorp anti-TIM-3 aşa cum este definit în revendicări şi o porţiune de legare la antigen a unui alt anticorp distinct, cum ar fi a unui alt anticorp anti-TIM-3 (de ex., alt anticorp anti-TIM-3 descris în acest document) sau un anticorp care ţinteşte o proteină diferită, cum ar fi o altă proteină de tip punct de control imun, un antigen de cancer, sau o altă moleculă de suprafaţă celulară a cărei activitate mediază o stare de boală cum ar fi cancerul.
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia sau o moleculă de legare bispecifică, aşa cum se defineşte în revendicări, pentru utilizare în creşterea imunităţii la un pacient care are nevoie de acest lucru.
Prezenta invenţie furnizează suplimentar un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia sau o moleculă de legare bispecifică, aşa cum se defineşte în revendicări, pentru utilizare în tratarea cancerului la un pacient care are nevoie de acest lucru. În unele variante de realizare, cancerul provine dintr-un ţesut selectat din grupul care este constituit din piele, plămân, intestin, ovar, creier, prostată, rinichi, ţesuturi moi, sistemul hematopoietic, cap şi gât, ficat, vezică urinară, sân, stomac, uter şi pancreas. În unele variante de realizare, pacientul are leucemie (de ex., leucemie mieloidă acută), limfom Hodgkin, sau limfom non-Hodgkin. În unele variante de realizare, pacientul are o tumoră solidă (de ex., o tumoră solidă avansată sau metastatică). În unele variante de realizare, pacientul are melanom, cancer pulmonar fără celule mici, cancer colorectal, sau carcinom cu celule renale. În anumite variante de realizare, metoda cuprinde suplimentar administrarea unui agent chimioterapeutic, a unui agent anti-neoplazic, a unui agent anti-angiogenic, a unui inhibitor al tirozin kinazei, şi/sau a unui inhibitor al căii TIM-3.
Prezenta invenţie furnizează suplimentar anticorpi anti-TIM-3 sau porţiuni de legare la antigen sau molecule de legare bi-specifice aşa cum se descrie în acest document pentru utilizare în tratamentele menţionate mai sus, adică, tratamentul unui pacient uman care are nevoie de acesta pentru a-şi îmbunătăţi sistemul imunitar, şi tratamentul unui pacient uman cu cancer, cum ar fi unul dintre cancerele menţionate mai sus. Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, articole de fabricaţie care cuprind anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen sau moleculele de legare multi-specifice (de ex., bi-specifice) descrise în acest document, precum şi metode pentru fabricarea respectivelor articole de fabricaţie.
SCURTĂ DESCRIERE A DESENELOR
Figura 1 prezintă curbele doză-răspuns ale anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 pentru producerea de IFN-γ într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă (MLR) unidirecţională.
Figura 2 prezintă curbele doză-răspuns ale anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 pentru producerea de TNF-α într-o analiză MLR unidirecţională.
Figura 3 prezintă efectul asupra subseturilor de celule dendritice purificate al anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144, măsurat ca niveluri de TNF-α utilizând analiza de citokină de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso.
Figura 4 prezintă legarea TIM-3-Fc la celule pozitive (apoptotice) la fosfatidilserină (PtdS) în prezenţa unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie precum şi a unui anticorp anti-TIM-3 de control pozitiv şi a doi anticorpi de control negativ. A: Anticorp anti-TIM-3 din invenţie [15086.17145]; B: anticorp anti-TIM-3 neblocant de control negativ [15338.15338]; C: anticorp anti-TIM-3 de referinţă [18571.18571]; D: anticorp anti-PD-1 de control negativ Keytruda® (pembrolizumab).
Figura 5 prezintă curbele doză-răspuns a nouă anticorpi anti-TIM-3 pentru producerea de IFN-γ într-o analiză MLR unidirecţională.
Figura 6 prezintă curbele doză-răspuns a zece anticorpi anti-TIM-3 pentru producerea de IFN-γ într-o analiză MLR bidirecţională. Anticorpul 15086.17145 este arătat ca "15086."
Figura 7 prezintă curbele doză-răspuns a nouă anticorpi anti-TIM-3 pentru producerea de TNF-α în celule dendritice derivate din monocite de la doi donatori independenţi.
Figura 8 prezintă o vedere de ansamblu a grupurilor de epitopi (binurilor de epitopi) identificate prin analiza competiţiei de legare a unui panou de optsprezece anticorpi anti-TIM-3. Anticorpii în formă de cerc conectaţi prin linii negre indică activitate de blocare încrucişată în ambele orientări. Anticorpii în formă de pătrat indică blocarea unidirecţională atunci când anticorpul este testat numai în soluţie. Liniile întrerupte indică blocarea unidirecţională atunci când anticorpii sunt doar imobilizaţi. Anticorpii sunt grupaţi în conformitate cu şabloanele de competiţie cu alţi anticorpi anti-TIM-3. Anticorpul 15086.17145 este arătat ca "15086."
Figura 9 prezintă locaţiile epitopilor de anticorpi pe structura domeniului TIM-3 IgV uman (PDB 5F71). O succesiune de imagini ale domeniului TIM-3 IgV uman este prezentată în trei orientări diferite şi este indicată locaţia situsului de legare la fosfatidilserină. Locaţiile epitopilor mapaţi sunt prezentate în culori închise pe un model de umplere a spaţiului TIM-3 pentru fiecare anticorp. Fragmentul Fab 15086 este arătat ca "15086" iar fragmentul Fab 20293 este arătat ca "20293."
DESCRIEREA DETALIATĂ A INVENŢIEI
Prezenta invenţie furnizează noi anticorpi anti-TIM-3 uman care pot fi utilizaţi pentru a îmbunătăţi sistemul imunitar la un pacient uman, cum ar fi un pacient cu cancer. Dacă nu este declarat în alt fel, aşa cum este utilizat în acest document, "TIM-3" se referă la TIM-3 uman. O secvenţă de polipeptidă TIM-3 umană este disponibilă sub numărul de acces Uniprot Q8TDQ0 (HAVR2_HUMAN), prezentată aici ca SECV ID NR: 236.
Termenul "anticorp" (Ab) sau "imunoglobulină" (Ig), aşa cum este utilizat în acest document, se referă la un tetramer care cuprinde două lanţuri grele (H) (aproximativ 50-70 kDa) şi două lanţuri uşoare (L) (aproximativ 25 kDa) inter-conectate prin legături de disulfură. Fiecare lanţ greu este compus dintr-un domeniu variabil al lanţului greu (VH) şi o regiune constantă a lanţului greu (CH). Fiecare lanţ uşor este compus dintr-un domeniu variabil al lanţului uşor (VL) şi o regiune constantă a lanţului uşor (CL). Domeniile VH şi VL pot fi subdivizate în continuare în regiuni de hipervariabilitate, denumite "regiuni de determinare a complementarităţii" (CDR), intercalate cu regiuni care sunt mai conservate, denumite "regiuni cadru" (FR). Fiecare VH şi VL este compus din trei CDR (H-CDR desemnează în acest document o CDR din lanţul greu; iar L-CDR desemnează în acest document o CDR din lanţul uşor) şi patru FR, dispuse de la capătul amino-terminal la capătul carboxil-terminal în următoarea ordine: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Atribuirea numerelor aminoacizilor în lanţul greu sau uşor poate fi în conformitate cu definiţiile IMGT® (Lefranc şi colab., Dev Comp Immunol, 27 (1): 55-77 (2003)); sau definiţiile lui Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 şi 1991)); Chothia şi Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987); sau Chothia şi colab., Nature, 342: 878-883 (1989).
Termenul "anticorp recombinant" se referă la un anticorp care este exprimat dintr-o celulă sau linie celulară cuprinzând secvenţa(e) de nucleotide care codifică anticorpul, unde secvenţa(e) de nucleotide nu este asociată (sunt asociate) în mod natural cu celula.
Termenul "proteină izolată", "polipeptidă izolată" sau "anticorp izolat" se referă la o proteină, o polipeptidă sau un anticorp care, în virtutea originii sale sau sursei de provenienţă (1) nu este asociată/asociat cu componente asociate în mod natural care o/îl însoţesc în starea sa nativă, (2) este liberă/liber de alte proteine din aceeaşi specie, (3) este exprimată/exprimat de o celulă dintr-o specie diferită, şi/sau (4) nu se găseşte în natură. Prin urmare, o polipeptidă care este sintetizată chimic sau sintetizată într-un sistem celular diferit de celula din care aceasta provine în mod natural va fi "izolată" de componentele sale asociate în mod natural. O proteină poate fi, de asemenea, făcută în mod substanţial liberă de componente asociate în mod natural prin izolare, utilizând tehnici de purificare a proteinelor binecunoscute în domeniul de specialitate.
Aşa cum este utilizat în acest document, termenul "linie germinală" se referă la secvenţele de nucleotide şi aminoacizi ale genelor şi segmentelor de gene de anticorpi pe măsură ce acestea sunt transmise de la părinţi la descendenţi prin intermediul celulelor germinale. Secvenţele liniei germinale se disting de secvenţele de nucleotide care codifică anticorpi în celulele B mature, care au fost alterate prin recombinare şi evenimente de hipermutaţie în timpul maturizării celulelor B. Un anticorp care "utilizează" o secvenţă de linie germinală particulară are o secvenţă de nucleotide sau de aminoacizi care se aliniază cu acea secvenţă de nucleotide de linie germinală sau cu secvenţa de aminoacizi pe care o specifică mai îndeaproape decât cu orice altă secvenţă de nucleotide sau aminoacizi de linie germinală.
Termenul "afinitate" se referă la o măsură a atracţiei dintre un antigen şi un anticorp. Atractivitatea intrinsecă a anticorpului pentru antigen este exprimată de obicei drept constanta de echilibru a afinităţii de legare (KD) a unei interacţiuni anticorp-antigen particulare. Se spune că un anticorp se leagă în mod specific la un antigen atunci când KD este ≤ 1 mM, preferabil ≤ 100 nM. O constantă A a afinităţii de legare KD poate fi măsurată, de ex., prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă (BIAcore™) sau Interferometrie Bio-Layer, pentru exemplificare folosind sistemul SPR XPR36 ProteOn™ de la Bio-Rad sau sistemul Octet™.
Termenul "koff" se referă la constanta vitezei de disociere a unei interacţiuni anticorp-antigen particulare. O constantă a vitezei de disociere koff poate fi măsurată prin Interferometrie Bio-Layer, pentru exemplificare folosind sistemul Octet™.
Termenul "epitop", aşa cum este utilizat în acest document, se referă la o porţiune (determinant) a unui antigen care se leagă în mod specific la un anticorp sau o moleculă înrudită, cum ar fi o moleculă de legare bispecifică. Determinanţii epitopici constau, în general, din grupări de suprafaţă active din punct de vedere chimic de molecule cum ar fi aminoacizii sau carbohidraţii sau lanţurile laterale de zahăr şi au, în general, caracteristici structurale tri-dimensionale specifice, precum şi caracteristici de sarcină specifice. Un epitop poate fi "liniar" sau "conformaţional". Într-un epitop liniar, toate punctele de interacţiune dintre o proteină (de ex., un antigen) şi o moleculă de interacţiune (cum ar fi un anticorp) apar liniar de-a lungul secvenţei primare de aminoacizi a proteinei. Într-un epitop conformaţional, punctele de interacţiune apar peste reziduurile de aminoacizi pe proteină care sunt separate unul de celălalt în secvenţa primară de aminoacizi. Odată ce este determinat un epitop dorit pe un antigen, este posibil să se genereze anticorpi la acel epitop folosind tehnici binecunoscute în domeniul de specialitate. Pentru exemplificare, un anticorp la un epitop liniar poate fi generat, de ex., prin imunizarea unui animal cu o peptidă având reziduurile de aminoacizi ale epitopului liniar. Un anticorp la un epitop conformaţional poate fi generat, de ex., prin imunizarea unui animal cu un mini-domeniu care conţine reziduurile relevante de aminoacizi ale epitopului conformaţional. Un anticorp la un epitop particular poate fi generat, de asemenea, de ex., prin imunizarea unui animal cu molecula ţintă de interes sau o porţiune relevantă a acesteia (de ex., ECD al TIM-3), apoi screening-ul pentru legarea la epitop.
Se poate determina dacă un anticorp se leagă la acelaşi epitop ca, sau concurează pentru legare cu un anticorp anti-TIM-3 din invenţie prin utilizarea metodelor cunoscute în domeniul de specialitate, incluzând, fără limitare, analize de competiţie, binning-ul epitopilor, şi scanarea cu alanină. Anticorpul de testat şi un anticorp anti-TIM-3 din invenţie se pot lega la cel puţin un reziduu comun (de ex., cel puţin două, trei, patru, cinci, şase, şapte, opt sau nouă reziduuri comune) pe TIM-3. Reziduurile de contact pe TIM-3 pot fi complet identice între anticorpul de testat şi anticorpul anti-TIM-3 din invenţie. Se poate permite anticorpului anti-TIM-3 din invenţie să se lege la TIM-3 în condiţii de saturare şi apoi se măsoară capacitatea anticorpului de testat de a se lega la TIM-3. Dacă anticorpul de testat este capabil să se lege la TIM-3 în acelaşi timp cu anticorpul anti-TIM-3 de referinţă, atunci anticorpul de testat se leagă la un epitop diferit de anticorpul anti-TIM-3 de referinţă. Totuşi, dacă anticorpul de testat nu este capabil să se lege la TIM-3 în acelaşi timp, atunci anticorpul de testat se leagă la acelaşi epitop, la un epitop suprapus, sau la un epitop care se află în imediata apropiere a epitopului legat de anticorpul anti-TIM-3 din invenţie. Acest experiment poate fi efectuat folosind, de ex., ELISA, RIA, BIACORE™, Interferometrie Bio-Layer sau citometrie în flux. Pentru a testa dacă un anticorp anti-TIM-3 concurează încrucişat cu un alt anticorp anti-TIM-3, se poate folosi metoda de competiţie descrisă mai sus în două direcţii, adică determinând dacă anticorpul cunoscut blochează anticorpul de testat şi invers. Astfel de experimente de competiţie încrucişată pot fi efectuate, de ex., folosind un instrument SPR IBIS MX96 sau sistemul Octet™.
În anumite cazuri poate fi de dorit să se altereze unul sau mai multe reziduuri de aminoacizi din CDR în scopul de a îmbunătăţi afinitatea de legare la epitopul ţintă. Acest lucru este cunoscut ca "maturarea de afinitate". În domeniul de specialitate sunt cunoscute diverse metode de maturare de afinitate, pentru exemplificare metoda de mutageneză de saturaţie de scanare in vitro descrisă de Burks şi colab., Proc Natl Acad Sci USA, 94: 412-417 (1997), şi metoda de maturare de afinitate in vitro treptată a Wu şi colab., Proc Natl Acad Sci USA, 95: 6037-6042 (1998).
Termenul "porţiune de legare la antigen" a unui anticorp (sau pur şi simplu "porţiune de anticorp"), aşa cum este utilizat în acest document, se referă la una sau mai multe porţiuni sau fragmente ale unui anticorp care păstrează capacitatea de a se lega în mod specific la un antigen (de ex., TIM-3 uman, sau o porţiune a acestuia). A fost demonstrat faptul că anumite fragmente ale unui anticorp de lungime completă pot îndeplini funcţia de legare la antigen a anticorpului. Exemplele de fragmente de legare cuprinse în cadrul termenului "porţiune de legare la antigen" includ (i) un frag¬ment Fab: un fragment monovalent alcătuit din domeniile VL, VH, CL şi CH1; (ii) un fragment F(ab')2: un fragment bivalent care cuprinde două fragmente Fab legate printr-o punte de disulfură în regiunea balama; (iii) un fragment Fd care constă din domenii VH şi CH1; (iv) un fragment Fv care constă din domeniile VL şi VH ale unui singur braţ al unui anticorp, (v) un fragment dAb, care constă dintr-un domeniu VH; şi (vi) o regiune izolată de determinare a complementarităţii (CDR) capabilă să se lege în mod specific la un antigen. Mai mult decât atât, deşi cele două domenii ale fragmentului Fv, VL şi VH, sunt codificate de gene separate, ele pot fi unite, folosind metode recombinante, de un linker sintetic care le permite să fie făcute ca un singur lanţ proteic în care domeniile VL şi VH se împerechează pentru a forma molecule monovalente (cunoscute ca Fv cu lanţ unic (scFv)). De asemenea, în cadrul invenţiei sunt molecule de legare la antigen care cuprind un VH si un VL. În cazul unui VH, molecula poate cuprinde, de asemenea, una sau mai multe dintre o regiune CH1, balama, CH2, sau CH3. Se intenţionează, de asemenea, ca astfel de anticorpi cu lanţ unic să fie cuprinşi în cadrul termenului "porţiune de legare la antigen" a unui anticorp. Sunt incluse, de asemenea, alte forme de anticorpi cu lanţ unic, cum ar fi diacorpii. Diacorpii sunt anticorpi bivalenţi, bispecifici, în care domeniile VH şi VL sunt exprimate pe un singur lanţ polipeptidic, dar folosind un linker care este prea scurt pentru a permite împerecherea între cele două domenii de pe acelaşi lanţ, forţând astfel domeniile să se împerecheze cu domenii complementare ale altui lanţ şi creând două situsuri de legare la antigen.
Porţiunile de anticorp, cum ar fi fragmentele Fab şi F(ab')2, pot fi preparate din anticorpi întregi folosind tehnici convenţionale, cum ar fi digestia cu papaină sau pepsină a anticorpilor întregi. Mai mult, anticorpii, porţiunile de anticorpi şi moleculele de imunoadeziune se pot obţine utilizând tehnici de ADN recombinant standard, de ex., aşa cum este descris în acest document.
Clasa (izotipul) şi subclasa anticorpilor anti-TIM-3 pot fi determinate prin orice metodă cunoscută în domeniul de specialitate. În general, clasa şi subclasa unui anticorp pot fi determinate folosind anticorpi care sunt specifici pentru o clasă şi subclasă particulară de anticorpi. Astfel de anticorpi sunt disponibili în comerţ. Clasa şi subclasa pot fi determinate prin ELISA, Western Blot precum şi prin alte tehnici. Alternativ, clasa şi subclasa pot fi determinate prin secvenţierea întregilor regiuni constante ale lanţurilor grele şi/sau uşoare ale anticorpilor sau a unei porţiuni a regiunilor constante ale lanţurilor grele şi/sau uşoare ale anticorpilor, compararea secvenţelelor de aminoacizi cu secvenţele de aminoacizi cunoscute ale diferitelor clase şi subclase de imunoglobuline, şi determinarea clasei şi subclasei anticorpilor.
Atunci când se face referire la reziduuri de aminoacizi particulare într-o poziţie dată a unei secvenţe de anticorp, o indicaţie de, de ex., "35S" se referă la poziţie şi reziduu, adică, în acest caz indică faptul că un reziduu de serină (S) este prezent în poziţia 35 a secvenţei. În mod similar, o indicaţie de, de ex., "13Q+35S" se referă la cele două reziduuri în poziţiile respective.
Dacă nu este indicat în alt fel, toate numerele de reziduuri de aminoacizi de anticorpi la care se face referire în această descriere a invenţiei sunt cele din schema de numerotare IMGT®.
Anticorpi anti-TIM-3
Prezenta invenţie furnizează anticorpi direcţionaţi împotriva TIM-3, şi porţiuni de legare la antigen ale acestora, aşa cum se defineşte în revendicări. Într-o variantă particulară de realizare, anticorpii sunt anticorpi umani generaţi de la şobolani transgenici care sunt capabili să genereze anticorpi cu idiotipuri umane.
Un avantaj al noilor anticorpi anti-TIM-3 din invenţie este că ei pot activa puternic celulele dendritice (a se vedea, de ex., Exemplul 4). Deşi nu se doreşte să fie legat de nicio teorie particulară, se crede că anticorpii anti-TIM-3 din invenţie sunt capabili să stimuleze celulele T (de ex., celulele T specifice tumorii) prin activarea celulelor dendritice. Mai mult decât atât, prezenta cerere de brevet demonstrează pentru prima dată că anticorpii anti-TIM-3 de izotip IgG1 sau IgG2 au niveluri ridicate de activitate în timp ce anticorpii de izotip IgG4 sau IgG1 - LALA sunt non-funcţionali sau slab funcţionali (a se vedea, de ex., Exemplele 3 şi 4). Fără a dori să fie legate de vreo teorie particulară, datele inventatorilor sugerează că un anticorp anti-TIM-3 care poate lega încrucişat TIM-3 prin intermediul receptorilor Fc este un activator deosebit de puternic al sistemului imunitar. Pentru exemplificare, un anticorp anti-TIM-3 IgG2 din invenţie se poate lega la FcyR2A găsit pe celulele dendritice, şi se crede că activează celulele dendritice prin reticularea moleculelor TIM-3 de pe acestea.
Anticorpii anti-TIM-3 făcuţi cunoscuţi în acest document pot fi menţionaţi fie printr-un număr de 5 cifre, de ex. "20131", fie printr-un număr din 10 cifre, de ex. "15086.16837". Numerele din 10 cifre cu aceleaşi prime cinci cifre sunt derivate din acelaşi anticorp părinte, ca în cazul anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144. Este de aşteptat ca astfel de anticorpi, care partajează aceleaşi şase CDR-uri, să aibă aceleaşi, sau în mod substanţial aceleaşi proprietăţi de legare la ţintă. Aşa cum va fi evident din secvenţele de proteine şi ADN furnizate în acest document, variantele 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 au doar o singură diferenţă de aminoacizi în secvenţa VH în comparaţie cu anticorpul 15086 părinte ("15086.15086"), şi anume E, mai degrabă decât Q, în poziţia 6, în timp ce secvenţele de aminoacizi VL sunt identice. De asemenea, va fi evident că aceste variante diferă în primul rând prin formatul/subclasa lor de anticorpi, adică:
15086.15086: IgG1
15086.16837: IgG1 LALA
15086.17145: IgG2
15086.17144: IgG4
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-9, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 3;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 3;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 3 şi 5;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 10-12, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6;
i) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 3 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 este selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-12, respectiv;
b) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 3 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4; şi
c) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 3 şi 5; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-9, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 10-12, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6;
i) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 este selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-12, respectiv;
b) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4; şi
c) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-9, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 23 sau 24;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 10-12, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4;
În unele variante de realizare, anticorpul anti-TIM-3 este selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 7-12, respectiv;
b) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 4; şi
c) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 23 sau 24; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 30-32, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 33-35, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 30-35, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 29 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 40-42, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 38;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 38;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 43-45, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 39;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 39;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 40-45, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 39;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 39; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 38 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 39 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 50-52, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 48;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 48;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 53-55, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 49;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 49;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 50-55, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 49;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 49; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 48 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 49 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 60-62, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 58;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 58;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 63-65, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 59;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 59;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 60-65, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 59;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 59; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 58 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 59 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 70-72, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 68;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 68;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 73-75, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 69;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 69;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 70-75, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 69;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 69; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 68 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 69 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 80-82, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 78;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 78;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 83-85, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 79;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 79;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 80-85, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 79;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 79; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 78 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 79 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 90-92, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 88;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 88;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 93-95, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 89;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 89;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 90-95, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 89;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 89; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 88 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 89 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 100-102, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 98;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 98;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 103-105, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 99;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 99;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 100-105, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 99;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 99; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 98 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 99 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 110-112, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 108;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 108;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 113-115, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 109;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 109;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 110-115, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 109;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 109; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 108 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 109 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 120-122, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 118;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 118;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 123-125, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 119;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 119;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 120-125, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 119;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 119; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 118 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 119 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 130-132, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 128;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 128;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 133-135, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 129;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 129;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 130-135, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 129;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 129; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 128 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 129 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 140-142, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 138;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 138;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 143-145, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 139;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 139;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 140-145, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 139;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 139; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 138 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 139 şi 6.
În acest document este descris an anticorpul anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 150-152, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 148;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 148;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 153-155, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 149;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 149;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 150-155, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 149;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 149; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 148 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 149 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 160-162, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 158;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 158;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 163-165, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 159;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 159;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 160-165, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 159;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 159; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 158 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 159 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 170-172, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 168;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 168;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 173-175, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 169;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 169;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 170-175, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 169;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 169; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 168 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 169 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 180-182, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 178;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 178;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 183-185, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 179;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 179;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 180-185, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 179;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 179; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 178 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 179 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 190-192, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 188;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 188;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 193-195, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 189;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 189;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 190-195, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 189;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 189; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 188 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 189 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 200-202, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 198;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 198;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 203-205, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 199;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 199;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 200-205, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 199;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 199; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 198 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 199 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 210-212, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 208;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 208;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 213-215, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 209;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 209;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 210-215, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 209;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 209; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 208 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 209 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 220-222, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 218;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 218;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 223-225, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 219;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 219;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 220-225, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 219;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 219; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 218 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 219 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 selectat din grupul care este constituit din:
a) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 230-232, respectiv;
b) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului greu (VH) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 228;
c) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 228;
d) un anticorp al cărui lanţ greu (HC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25;
e) un anticorp ale cărui L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 233-235, respectiv;
f) un anticorp al cărui domeniu variabil al lanţului uşor (VL) este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 229;
g) un anticorp al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 229;
h) un anticorp al cărui lanţ uşor (LC) cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi 6;
i) un anticorp ale cărui H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 cuprind secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 230-235, respectiv;
j) un anticorp al cărui VH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi al cărui VL este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 229;
k) un anticorp al cărui VH cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi al cărui VL cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 229; şi
l) un anticorp al cărui HC cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 228 şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, 23, 24, sau 25; şi al cărui LC cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 229 şi 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, care concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau care se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, anticorpul 15086.15086 având formatul IgG1, anticorpul 15086.16837 având formatul IgG1 LALA, anticorpul 15086.17145 având formatul IgG2, sau anticorpul 15086.17144 având formatul IgG4. În unele variante de realizare, anticorpul din invenţie este o IgG. În unele variante de realizare, anticorpul din invenţie are un format IgG1, IgG2, IgG3, sau IgG4.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, care concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau care se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, anticorpul 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, sau 20621. În unele variante de realizare, anticorpul din invenţie are un format IgG1, IgG2, IgG3, sau IgG4.
Anticorpul anti-TIM-3 din invenţie, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, nu concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, oricare sau toţi anticorpii din bin-ul 1 de epitopi (anticorp de referinţă mAb 15), bin-ul 2 (de ex., anticorpii 15105 şi 15107), şi bin-ul 8 (de ex., anticorpii 15174 şi 15175), aşa cum este definit în Exemplul 12 de mai jos.
Anticorpul anti-TIM-3 din invenţie, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, nu concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, oricare sau toţi anticorpii din bin-ul 2 de epitopi (de ex., anticorpii 15105 şi 15107) şi bin-ul 8 (de ex., anticorpii 15174 şi 15175), aşa cum este definit în Exemplul 12 de mai jos.
Anticorpul anti-TIM-3 din invenţie, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, nu concurează pentru legarea la TIM-3 uman cu, sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca, oricare sau toţi anticorpii din bin-ul 2 de epitopi (de ex., anticorpii 15105 şi 15107), aşa cum este definit în Exemplul 12 de mai jos.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care concurează pentru legarea la TIM-3 uman sau se leagă la acelaşi epitop al TIM-3 uman ca un anticorp ale cărui CDR1-3 de lanţ greu (H) şi CDR1-3 de lanţ uşor (L) cuprind, respectiv, SECV ID NRs: 7-12, 30-35, 40-45, 50-55, 60-65, 70-75, 80-85, 90-95, 100-105, 110-115, 120-125, 130-135, 140-145, 150-155, 160-165, 170-175, 180-185, 190-195, 200-205, 210-215, 220-225, sau 230-235.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen care are un domeniu variabil al lanţului greu (VH) care este cel puţin 90% identic în secvenţă cu SECV ID NR: 3, 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228,, de ex., cel puţin 95% identic, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identic cu respectiva secvenţă.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului greu (VH) care este cel puţin 90% identic în secvenţă cu SECV ID NR: 3, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228,, de ex. cel puţin 95% identic, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identic cu respectiva secvenţă; şi o regiune constantă a lanţului greu (CH) care este cel puţin 90% identică în secvenţă cu SECV ID NR: 5, de ex. cel puţin 95% identică, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identică cu SECV ID NR: 5.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un lanţ greu (HC) care cuprinde secvenţa de aminoacizi VH dinSECV ID NR: 3, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228 şi secvenţa de aminoacizi CH din SECV ID NR: 5.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului greu (VH) care este cel puţin 90% identic în secvenţă cu SECV ID NR: 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228,, de ex. cel puţin 95% identic, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identic cu respectiva secvenţă; şi o regiune constantă a lanţului greu (CH) care este cel puţin 90% identică în secvenţă cu SECV ID NR: 23, 24 sau 25, de ex. cel puţin 95% identică, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identică cu SECV ID NR: 23, 24 sau 25. În variante particulare de realizare, CH este cel puţin 90% identic în secvenţă cu SECV ID NR: 25, de ex. cel puţin 95% identică, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identică cu SECV ID NR: 25
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un lanţ greu (HC) care cuprinde secvenţa de aminoacizi VH din SECV ID NR: 15, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, sau 228 şi secvenţa de aminoacizi CH din SECV ID NR: 23, 24 sau 25. Lanţul greu poate cu¬prinde secvenţa de aminoacizi CH din SECV ID NR: 25.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului uşor (VL) care este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi VL din SECV ID NR: 4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229, de ex. cel puţin 95% identic, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identic cu respectiva secvenţă.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un domeniu variabil al lanţului uşor (VL) care este cel puţin 90% identic în secvenţă cu secvenţa de aminoacizi VL dinSECV ID NR: 4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229, de ex. cel puţin 95% identic, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identic cu respectiva secvenţă; şi o regiune constantă a lanţului uşor (CL) care este cel puţin 90% identică în secvenţă cu SECV ID NR: 6, de ex. cel puţin 95% identică, cum ar fi cel puţin 96%, cel puţin 97%, cel puţin 98% sau cel puţin 99% identică cu SECV ID NR: 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care are un lanţ uşor (LC) care cuprinde secvenţa de aminoacizi VL din SECV ID NR: 4, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 99, 109, 119, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, sau 229 şi secvenţa de aminoacizi CL din SECV ID NR: 6.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3 care cuprinde oricare dintre lanţurile grele descrise mai sus şi oricare dintre lanţurile uşoare descrise mai sus.
Oricare dintre anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen descrise în acest document poate inhiba legarea liganzilor cum ar fi galectina-9, CEACAM1, HMGB-1, şi fosfatidilserina la TIM-3.
Într-o variantă de realizare, administrarea unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau a unei porţiuni de legare la antigen a acestuia poate activa celulele dendritice, cauzând maturarea acestora şi prin urmare capacitatea lor de a stimula celulele T. Deşi nu se doreşte să fie legat de nicio teorie particulară, se crede că anticorpii anti-TIM-3 din invenţie funcţionează ca activatori ai celulelor dendritice TIM-3, prin care efectul lor asupra celulelor dendritice serveşte la stimularea celulelor T. Într-o configuraţie legată de tumoră, anticorpii anti-TIM-3 ar provoca în acest fel maturarea şi activarea celulelor dendritice asociate tumorii, rezultând activarea celulelor T specifice tumorii.
În unele variante de realizare, oricare dintre anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen, aşa cum sunt definite în revendicări, se pot lega la TIM-3 uman cu o KD de cel puţin 100, cel puţin 50, cel puţin 40, cel puţin 30, cel puţin 25, cel puţin 20, cel puţin 15, cel puţin 10, cel puţin 9, cel puţin 8, cel puţin 7, sau cel puţin 6 nM. În anumite variante de realizare, KD este determinată folosind rezonanţa plasmonului de suprafaţă.
În unele variante de realizare, oricare dintre anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen, aşa cum sunt definite în revendicări, se pot lega la TIM-3 de cynomolgus cu o KD de cel puţin 100, cel puţin 50, cel puţin 40, cel puţin 30, cel puţin 25, cel puţin 24, cel puţin 23, cel puţin 22, cel puţin 21, sau cel puţin 20 nM. În anumite variante de realizare, KD este determinată folosind rezonanţa plasmonului de suprafaţă.
În unele variante de realizare, oricare dintre anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen, aşa cum sunt definite în revendicări, pot avea o aviditate pentru TIM-3 uman cu EC50 ≤ 2, 1,5, 1, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, sau 0,15 nM. În unele variante de realizare, oricare dintre anticorpii anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen, aşa cum sunt definite în revendicări, pot avea o aviditate pentru TIM-3 de cynomolgus cu EC50 ≤ 80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2, 1,5, 1, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, sau 0,15 nM.
Într-o variantă de realizare, administrarea unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau a unei porţiuni de legare la antigen a acestuia poate activa în mod direct celulele T.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, care se leagă la un epitop al TIM-3 care include cel puţin unul (de ex., cel puţin unul, cel puţin doi, cel puţin trei, cel puţin patru, cel puţin cinci, cel puţin şase, cel puţin şapte, cel puţin opt, sau cel puţin nouă) dintre următoarele reziduuri cu SECV ID NR: 236: P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118, şi D120. Un epitop cu orice combinaţie a celor de mai sus.
Un anticorp anti-TIM-3 din invenţie, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, se leagă la un epitop al TIM-3 care include următoarele reziduuri cu SECV ID NR: 236: P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, şi D120.
În acest document este descris un anticorp anti-TIM-3, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, care se leagă la un epitop al TIM-3 care cuprinde reziduurile 62-67 şi/sau 114-117 din SECV ID NR: 236. Anticorpul sau porţiunea se leagă la reziduurile 62-67 (sau un fragment al acestora, cum ar fi un fragment de unul, două, trei, patru sau cinci reziduuri), din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpii 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, şi 20293). În acest document este descris un anticorp sau o porţiune care se leagă la reziduurile 114-117 (sau un fragment al acestora, cum ar fi un fragment de unul, două, sau trei reziduuri) din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpul 20131). Este avut în vedere, de asemenea, un epitop cu orice combinaţie din reziduurile de mai sus.
Un anticorp anti-TIM-3 din invenţie, sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, se leagă la un epitop al TIM-3 care cuprinde reziduurile 62-67 din SECV ID NR: 236. Anticorpul sau porţiunea se leagă la reziduurile 62-67 din SECV ID NR: 236 (de ex., anticorpii 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, şi 20293).
Clasa unui anticorp anti-TIM-3 obţinut prin metodele descrise în acest document poate fi modificată sau schimbată cu o altă clasă sau subclasă. Într-un aspect al invenţiei, o moleculă de acid nucleic care codifică VL sau VH este izolată folosind metode binecunoscute în domeniul de specialitate, astfel încât aceasta nu include secvenţe de acid nucleic care codifică CL sau CH. Moleculele de acid nucleic care codifică VL sau VH sunt apoi legate operativ la o secvenţă de acid nucleic care codifică un CL sau CH, respectiv, dintr-o clasă diferită de moleculă de imunoglobulină. Acest lucru poate fi obţinut folosind un vector sau o moleculă de acid nucleic care cuprinde un lanţ CL sau CH, aşa cum este descris mai sus. Pentru exemplificare, un anticorp anti-TIM-3 care a fost iniţial IgM poate fi schimbat ca clasă la IgG. Mai mult decât atât, schimbarea clasei poate fi utilizată pentru a converti o subclasă de IgG în alta, de ex., de la IgG1 la IgG2. O regiune constantă a lanţului uşor κ poate fi schimbată într-o regiune constantă a lanţului uşor λ. O metodă preferată pentru producerea unui anticorp din invenţie cu un izotip de Ig dorit cuprinde etapele de izolare a unei molecule de acid nucleic care codifică lanţul greu al unui anticorp anti-TIM-3 şi a unei molecule de acid nucleic care codifică lanţul uşor al unui anticorp anti-TIM-3, obţinere a domeniului variabil al lanţului greu, ligatură a domeniului variabil al lanţului greu cu regiunea constantă a unui lanţ greu al izotipului dorit, exprimare a lanţului uşor şi lanţului greu ligaturat într-o celulă, şi colectare a anticorpului anti-TIM-3 cu izotipul dorit.
Anticorpul anti-TIM-3 din invenţie poate fi o moleculă IgG, IgM, IgE, IgA, sau IgD, dar este, în mod obişnuit, de izotip IgG, de ex. din subclasa IgG IgG1, IgG2a sau IgG2b, IgG3 sau IgG4. Într-o variantă de realizare, anticorpul este o IgG1. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul este o IgG2.
Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIM-3 poate cuprinde cel puţin o mutaţie în regiunea Fc. Este cunoscut un număr de mutaţii Fc diferite, unde aceste mutaţii asigură o funcţie efectoare modificată. Pentru exemplificare, în multe cazuri va fi de dorit să se reducă sau să se elimine funcţia efectoare, de ex., în cazul în care interacţiunile ligand/receptor sunt nedorite sau în cazul conjugaţilor anticorp-medicament. Poziţiile de aminoacizi din regiunea Fc care pot fi avantajoase să sufere mutaţie pentru a reduce funcţia efectoare includ una sau mai multe dintre poziţiile 228, 233, 234 şi 235, unde poziţiile de aminoacizi sunt numerotate în conformitate cu schema de numerotare IMGT®.
Într-o variantă de realizare, unul sau ambele reziduuri de aminoacizi la poziţiile 234 şi 235 pot suferi mutaţie, pentru exemplificare, de la Leu la Ala (L234A/L235A). Aceste mutaţii reduc funcţia efectoare a regiunii Fc a anticorpilor IgG1. Suplimentar sau alternativ, reziduul de aminoacid la poziţia 228 poate suferi mutaţie, pentru exemplificare la Pro. Într-o altă variantă de realizare, reziduul de aminoacid la poziţia 233 poate suferi mutaţie, de ex., la Pro, reziduul de aminoacid la poziţia 234 poate suferi mutaţie, de ex., la Val, şi/sau reziduul de aminoacid la poziţia 235 poate suferi mutaţie, de ex., la Ala. Poziţiile de aminoacizi sunt numerotate în conformitate cu schema de numerotare IMGT®.
Într-o altă variantă de realizare, în care anticorpul este din subclasa IgG4, acesta poate cuprinde mutaţia S228P, adică având o prolină în poziţia 228, unde poziţia aminoacidului este numerotată în conformitate cu schema de numerotare Eu IMGT®. Se ştie că această mutaţie reduce schimbul nedorit de braţe Fab (Angal şi colab., Mol Immunol., 30: 105-8 (1993)).
În anumite variante de realizare, un anticorp sau o porţiune de legare la antigen a acestuia din invenţie poate face parte dintr-o moleculă de imunoadeziune mai mare, formată prin asocierea covalentă sau necovalentă a anticorpului sau porţiunii de anticorp cu una sau mai multe alte proteine sau peptide. Exemplele de astfel de molecule de imunoaderenţă includ utilizarea regiunii de nucleu de streptavidină pentru a face o moleculă scFv tetramerică (Kipriyanov şi colab., Human Antibodies and Hybridomas, 6: 93-101 (1995)) şi utilizarea unui reziduu de cisteină, a unei peptide marker şi a unei etichete de polihistidină C-terminală pentru a face molecule scFv bivalente şi biotinilate (Kipriyanov şi colab., Mol. Immunol., 31: 1047-1058 (1994)). Alte exemple includ cazurile în care CDR-urile dintr-un anticorp sunt încorporate într-o moleculă fie covalent, fie necovalent pentru a face din aceasta o imunoadezină care se leagă în mod specific la un antigen de interes. În astfel de variante de realizare, CDR poate fi încorporată (CDR-urile pot fi încorporate) ca parte a unui lanţ polipeptidic mai mare, poate fi legată (pot fi legate) covalent la un alt lanţ polipeptidic, sau poate fi încorporată (pot fi încorporate) necovalent.
Într-o altă variantă de realizare se poate produce un anticorp de fuziune sau imunoadezină care cuprinde tot anticorpul anti-TIM-3 sau o porţiune dintr-un anticorp anti-TIM-3 din invenţie legată la o altă polipeptidă. În anumite variante de realizare, numai domeniile variabile ale anticorpului anti-TIM-3 sunt legate la polipeptidă. În anumite variante de realizare, domeniul VH al unui anticorp anti-TIM-3 este legat la o primă polipeptidă, în timp ce domeniul VL al unui anticorp anti-TIM-3 este legat la o a doua polipeptidă care se asociază cu prima polipeptidă într-o manieră astfel încât domeniile VH şi VL pot interacţiona unul cu celălalt pentru a forma un situs de legare la antigen. Într-o altă variantă preferată de realizare, domeniul VH este separat de domeniul VL de un linker astfel încât domeniile VH şi VL pot interacţiona unul cu altul (de ex., anticorpi cu un singur lanţ). Anticorpul VH-linker-VL este apoi legat la polipeptida de interes. În plus, pot fi creaţi anticorpi de fuziune în care doi (sau mai mulţi) anticorpi cu lanţ unic sunt legaţi unul de altul. Acest lucru este util dacă se doreşte să se creeze un anticorp divalent sau polivalent pe un singur lanţ polipeptidic, sau dacă se doreşte să creeze un anticorp bispecific.
Pentru a crea un anticorp cu un singur lanţ (scFv), fragmentele de ADN care codifică VH şi VL sunt legate operativ la alt fragment care codifică un linker flexibil, de ex., care codifică secvenţa de aminoacizi (Gly4 -Ser)3 (SECV ID NR: 240), astfel încât secvenţele VH şi VL pot fi exprimate ca o proteină cu un singur lanţ continuă, cu domeniile VL şi VH unite de linkerul flexibil. A se vedea, de ex., Bird şi colab., Science, 242: 423-426 (1988); Huston şi colab., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988); şi McCafferty şi colab., Nature, 348: 552-554 (1990). Anticorpul cu un singur lanţ poate fi monovalent, dacă doar un singur VH şi VL sunt utilizate; bivalent, dacă două VH şi VL sunt utilizate; sau polivalent, dacă mai mult de două VH şi VL sunt utilizate. Pot fi generaţi anticorpi bispecifici sau polivalenţi care se leagă în mod specific la TIM-3 uman şi la o altă moleculă, de exemplu.
În alte variante de realizare, pot fi preparaţi alţi anticorpi modificaţi, utilizând molecule de acid nucleic care codifică anticorpul anti-TIM-3. De exemplu, folosind tehnici biologice moleculare standard, urmând învăţăturile din descrierea invenţiei, se pot prepara "corpi kappa" (Ill şi colab., Protein Eng., 10: 949-57 (1997)), "minicorpi" (Martin şi colab., EMBO J., 13: 5303-9 (1994)), "diacorpi" (Holliger şi colab., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)), sau "Janusins" (Traunecker şi colab., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991) şi Traunecker şi colab., Int. J. Cancer (Suppl.), 7: 51-52 (1992)).
Un anticorp anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen din invenţie se poate derivatiza sau lega la o altă moleculă (de ex., o altă peptidă sau proteină). În general, anticorpii sau porţiunile acestora sunt derivatizate astfel încât legarea TIM-3 nu este afectată în mod negativ de derivatizare sau etichetare. În consecinţă, se intenţionează ca anticorpii şi porţiunile de anticorp din invenţie să includă atât formele intacte, cât şi cele modificate ale anticorpilor umani anti-TIM-3, aşa cum se defineşte în revendicări. Pentru exemplificare, un anticorp sau o porţiune de anticorp din invenţie poate fi legat funcţional (prin cuplare chimică, fuziune genetică, asociere necovalentă sau în alt fel) la una sau mai multe alte entităţi moleculare, cum ar fi un alt anticorp (de ex., un anticorp bispecific sau un diacorp), un agent de detectare, un agent farmaceutic, şi/sau o proteină sau peptidă care poate media asocierea anticorpului sau a porţiunii de anticorp cu o altă moleculă (cum ar fi o regiune de nucleu de streptavidină sau o etichetă de polihistidină).
Un tip de anticorp derivatizat este produs prin reticularea a doi sau mai mulţi anticorpi (de acelaşi tip sau de tipuri diferite, de ex., pentru a crea anticorpi bispecifici). Agenţii de reticulare adecvaţi îi includ pe cei care sunt heterobifuncţionali, având două grupări reactive distincte separate printr-un distanţier adecvat (de ex., ester de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidă) sau homobifuncţionali (de ex., suberat de disuccinimidil). Astfel de linkeri sunt disponibili, de ex., de la Pierce Chemical Company, Rockford, II.
Un anticorp anti-TIM-3 poate fi derivatizat, de asemenea, cu o grupare chimică cum ar fi polietilen glicolul (PEG), o grupare metil sau etil, sau o grupare carbohidrat. Aceste grupări pot fi utile pentru a îmbunătăţi caracteristicile biologice ale anticorpului, de ex., pentru a creşte timpul de înjumătăţire în ser.
Un anticorp conform prezentei invenţii poate fi, de asemenea, etichetat. Aşa cum sunt utilizaţi în acest document, termenii "etichetă" sau "etichetat" se referă la încorporarea altei molecule în anticorp. Într-o variantă de realizare, eticheta este un marker detectabil, de ex., încorporarea unui aminoacid radio-etichetat sau ataşarea la o polipeptidă a porţiunilor de biotinil care pot fi detectate prin avidină marcată (de ex., streptavidină care conţine un marker fluorescent sau activitate enzimatică care poate fi detectată prin metode optice sau colorimetrice). Într-o altă variantă de realizare, eticheta sau markerul poate fi terapeutic, de ex., un conjugat de medicament sau toxină. În domeniul de specialitate sunt cunoscute şi pot fi utilizate diferite metode de etichetare a polipeptidelor şi glicoproteinelor. Exemplele de etichete pentru polipeptide includ, dar nu se limitează la, următoarele: radioizotopi sau radionuclizi (de ex., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), etichete fluorescente (de ex., FITC, rodamină, fosfori de lantanide), etichete enzimatice (de ex., peroxidază de hrean, β-galactozidază, luciferază, fosfatază alcalină), markeri chimioluminiscenţi, grupări biotinil, epitopi polipeptidici predeterminaţi recunoscuţi de un reporter secundar (de ex., secvenţe de perechi de fermoar de leucină, situsuri de legare pentru anticorpi secundari, domenii de legare a metalelor, etichete de epitop), agenţi magnetici, cum ar fi chelaţii de gadoliniu, toxine cum ar fi precum toxină pertussis, taxol, citocalazina B, gramicidină D, bromură de etidiu, emetină, mitomicină, etopozid, tenopozid, vincristină, vinblastină, colchicină, doxorubicină, daunorubicină, dihidroxi antracin dionă, mitoxantronă, mitramicină, actinomicină D, 1-dehidrotestoste¬ron, glucocorticoizi, procaină, tetracaină, lidocaină, propranolol, şi puromicina şi analogi sau omologi ai acestora. În unele variante de realizare, etichetele sunt ataşate de braţe distanţiere de diferite lungimi pentru a reduce obstacolul steric potenţial.
În anumite variante de realizare, anticorpii din invenţie pot fi prezenţi într-o formă neutră (inclusiv formele zwitterionice) sau ca o specie încărcată pozitiv sau negativ. În unele variante de realizare, anticorpii pot fi complexaţi cu un contraion pentru a forma o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
Termenul "sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic" se referă la un complex care cuprinde unul sau mai mulţi anticorpi şi unul sau mai mulţi contraioni, unde contraionii sunt derivaţi din acizi anorganici şi organici acceptabili din punct de vedere farmaceutic şi baze anorganice şi organice acceptabile din punct de vedere farmaceutic.
Molecule de legare bispecifice
Într-un aspect suplimentar, invenţia furnizează o moleculă de legare bispecifică având specificitatea de legare a unui anticorp anti-TIM-3 aşa cum este definit în revendicări şi specificitatea de legare a altui anticorp anti-TIM-3 (de ex., alt anticorp anti-TIM-3 descris în acest document) sau un anticorp care ţinteşte o proteină diferită, cum ar fi o altă proteină de tip punct de control imun, un antigen de cancer, sau o altă moleculă de suprafaţă celulară a cărei activitate mediază o stare de boală cum ar fi cancerul. Astfel de molecule de legare bispecifică sunt cunoscute în domeniul de specialitate, iar exemple de diferite tipuri de molecule de legare bispecifice sunt date în altă parte în acest document.
Molecule de acid nucleic şi vectori
Prezenta invenţie furnizează, de asemenea, molecule de acid nucleic şi secvenţe care codifică anticorpi anti-TIM-3 sau porţiuni de legare la antigen ale acestora, aşa cum sunt definite în revendicări. În unele variante de realizare, diferite molecule de acid nucleic codifică secvenţele de aminoacizi ale lanţului greu şi lanţului uşor ale anticorpului anti-TIM-3 sau ale unei porţiuni de legare la antigen a acestuia. În alte variante de realizare, aceeaşi moleculă de acid nucleic codifică secvenţele de aminoacizi ale lanţului greu şi lanţului uşor ale anticorpului anti-TIM-3 sau ale unei porţiuni de legare la antigen a acestuia.
O referire la o secvenţă de nucleotide cuprinde complementul acesteia, cu excepţia cazului în care se specifică în alt fel. Prin urmare, o referire la un acid nucleic având o secvenţă particulară ar trebui să fie înţeleasă că cuprinde lanţul său complementar, cu secvenţa sa complementară. Termenul "polinucleotidă", aşa cum este menţionat în acest document, înseamnă o formă polimerică de nucleotide de cel puţin 10 baze în lungime, fie ribonucleotide, fie deoxinucleotide, fie o formă modificată de orice tip de nucleotide. Termenul include forme mono-catenare şi dublu-catenare.
În acest document sunt descrise secvenţe de nucleotide care sunt cel puţin 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% sau 99% identice cu una sau mai multe secvenţe de nucleotide enumerate în acest document, de ex., cu o secvenţă de nucleotide care codifică o secvenţă de aminoacizi selectată din grupul care este constituit din SECV ID NRs: 3, 4, 7-12, 15, 28-35, 38-45, 48-55, 58-65, 68-75, 78-85, 88-95, 98-105, 108-115, 118-125, 128-135, 138-145, 148-155, 158-165, 168-175, 178-185, 188-195, 198-205, 208-215, 218-225, şi 228-235. Termenul "identitate procentuală de secvenţă" în contextul secvenţelor de acid nucleic se referă la reziduurile din două secvenţe care sunt aceleaşi atunci când sunt aliniate pentru o corespondenţă maximă. Lungimea comparaţiei de identitate a secvenţei poate fi pe o întindere de cel puţin aproximativ nouă nucleotide, de obicei cel puţin aproximativ 18 nucleotide, mai de obicei cel puţin aproximativ 24 de nucleotide, de obicei cel puţin aproximativ 28 de nucleotide, mai tipic cel puţin aproximativ 32 de nucleotide şi, de preferinţă, cel puţin aproximativ 36, 48 sau mai multe nucleotide. În domeniul de specialitate există un număr de algoritmi diferiţi cunoscuţi care pot fi utilizaţi pentru a măsura identitatea secvenţei de nucleotide. De exemplu, secvenţele de polinucleotide pot fi comparate folosind FASTA, Gap sau Bestfit, care sunt programe din pachetul Wisconsin versiunea 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. FASTA, care include, de ex., programele FASTA2 şi FASTA3, furnizează alinieri şi identitatea procentuală a secvenţei a regiunilor cu cea mai bună suprapunere între secvenţele de interogare şi de căutare (a se vedea, de ex., Pearson, Methods Enzymol., 183: 63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol., 132: 185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol., 266: 227-258 (1996); şi Pearson, J. Mol. Biol., 276: 71-84 (1998)). Cu excepţia cazului în care se specifică în alt fel, sunt utilizaţi parametrii impliciţi pentru un anumit program sau algoritm. De exemplu, identitatea procentuală a secvenţei între secvenţele de acid nucleic poate fi determinată utilizând FASTA cu parametrii săi impliciţi (o dimensiune a cuvântului de 6 şi factorul NOPAM pentru matricea de scor) sau folosind Gap cu parametrii săi impliciţi, aşa cum este prevăzut în GCG versiunea 6.1, încorporată în acest document aici prin referinţă.
În acest document este descrisă o moleculă de acid nucleic care cuprinde o secvenţă de nucleotide selectată din grupul care este constituit din SECV ID NRs: 26, 27, 36, 37, 46, 47, 56, 57, 66, 67, 76, 77, 86, 87, 96, 97, 106, 107, 116, 117, 126, 127, 136, 137, 146, 147 156, 157, 166,167, 176, 177, 186, 187, 196, 197, 206, 207, 216, 217, 226, şi 227. În acest document sunt descrise molecule de acid nucleic care cuprind secvenţe de nucleotide care sunt cel puţin 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% sau 99% identice cu oricare dintre respectivele secvenţe de nucleotide.
Într-un aspect, invenţia furnizează o moleculă de acid nucleic care cuprinde o secvenţă de nucleotide selectată din grupul care este constituit din SECV ID NR: 1, 2, 13, şi 14.
În oricare dintre variantele de realizare de mai sus, moleculele de acid nucleic pot fi izolate. O moleculă de acid nucleic care codifică lanţul greu şi/sau uşor al unui anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia din invenţie poate fi izolată din orice sursă care produce un astfel de anticorp sau porţiune. În diferite variante de realizare, moleculele de acid nucleic sunt izolate din celulele B care exprimă un anticorp anti-TIM-3 izolat de la un animal imunizat cu un antigen TIM-3 uman, sau dintr-o celulă imortalizată produsă dintr-o astfel de celulă B. Metodele de izolare a aci¬zilor nucleici care codifică un anticorp sunt binecunoscute în domeniul de specialitate. ARNm poate fi izolat şi utilizat pentru a produce ADNc pentru utilizare în reacţia în lanţ a polimerazei (PCR) sau clonarea ADNc a genelor de anticorpi. În anumite variante de realizare, o moleculă de acid nucleic din invenţie poate fi sintetizată, mai degrabă decât izolată.
În unele variante de realizare, o moleculă de acid nucleic din invenţie poate cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică un domeniu VH dintr-un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen din invenţie unită în cadru la o secvenţă de nucleotide care codifică o regiune constantă a lanţului greu din orice sursă. În mod similar, o moleculă de acid nucleic din invenţie poate cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică un domeniu VL dintr-un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen din invenţie unită în cadru la o secvenţă de nucleotide care codifică o regiune constantă a lanţului uşor din orice sursă.
Într-un aspect suplimentar al invenţiei, moleculele de acid nucleic care codifică domeniul variabil al lanţurilor grele (VH) şi/sau uşoare (VL) pot fi "convertite" în gene de anticorpi de lungime completă. Într-o variantă de realizare, moleculele de acid nucleic care codifică domeniile VH sau VL sunt convertite în gene de anticorpi de lungime completă prin inserarea într-un vector de exprimare care codifică deja domeniul constant al lanţului greu (CH) sau domeniul constant al lanţului uşor (CL), respectiv, astfel încât segmentul VH este legat în mod operativ la segmentul (segmentele) CH din cadrul vectorului şi/sau segmentul VL este legat în mod operativ la segmentul CL din cadrul vectorului. Într-o altă variantă de realizare, moleculele de acid nucleic care codifică domeniile VH şi/sau VL sunt convertite în gene de anticorpi de lungime completă prin legarea, de ex., ligatura, unei molecule de acid nucleic care codifică un do¬meniu VH şi/sau VL la o moleculă de acid nucleic care codifică un domeniu CH şi/sau CL folosind tehnici biologice moleculare standard. Moleculele de acid nucleic care codifică lanţurile grele şi/sau uşoare de lungime completă pot fi apoi exprimate dintr-o celulă în care acestea au fost introduse şi anticorpul anti-TIM-3 poate fi izolat.
Moleculele de acid nucleic pot fi utilizate pentru a exprima recombinant cantităţi mari de anticorpi anti-TIM-3. Moleculele de acid nucleic pot fi utilizate, de asemenea, pentru a produce, de ex., anticorpi chimerici, anticorpi bispecifici, anticorpi cu lanţ unic, imunoadezine, diacorpi, anticorpi care au suferit mutaţie şi derivaţi de anticorpi, aşa cum este descris în acest document.
Într-o altă variantă de realizare, o moleculă de acid nucleic din invenţie este utilizată ca o sondă sau un primer PCR pentru o secvenţă specifică de anticorp. De exemplu, acidul nucleic poate fi utilizat ca o sondă în metode de diagnostic sau ca un primer PCR pentru a amplifica regiuni de ADN care ar putea fi utilizate, inter alia, pentru a izola molecule suplimentare de acid nucleic care codifică domenii variabile ale anticorpilor anti-TIM-3. În unele variante de realizare, moleculele de acid nucleic sunt oligonucleotide. În unele variante de realizare, oligonucleotidele provin din domenii înalt variabile ale lanţurilor grele şi uşoare ale anticorpului de interes. În unele variante de realizare, oligonucleotidele codifică toate CDR-urile anticorpilor anti-TIM-3 sau porţiunile de legare la antigen ale acestora din invenţie, aşa cum este descris în acest document.
Moleculele de acid nucleic şi vectorii pot fi utilizaţi pentru a produce anticorpi anti-TIM-3 care au suferit mutaţie. Anticorpii pot suferi mutaţie în domeniile variabile ale lanţurilor grele şi/sau uşoare, de ex., pentru a altera o proprietate de legare a anticorpului. Pentru exemplificare, o mutaţie poate fi făcută în una sau mai multe dintre CDR-uri pentru a creşte sau a reduce KD a anticorpului anti-TIM-3, pentru a creşte sau a reduce koff, sau pentru a altera specificitatea de legare a anticorpului. Una sau mai multe mutaţii pot fi făcute la un reziduu de aminoacid despre care se ştie că este schimbat în comparaţie cu linia germinală într-un anticorp monoclonal din invenţie. Mutaţiile pot fi făcute într-o CDR sau regiune cadru a unui domeniu variabil, sau într-o regiune constantă. Mutaţiile pot fi făcute într-un domeniu variabil. Una sau mai multe mutaţii pot fi făcute la un reziduu de aminoacid despre care se ştie că este schimbat în comparaţie cu linia germinală într-o CDR sau o regiune cadru a unui domeniu variabil al unui anticorp sau unei porţiuni de legare la antigen a acestuia din invenţie.
Regiunea (regiunile) cadru poate (pot) suferi mutaţii astfel încât regiunea (regiunile) cadru rezultată (rezultate) să aibă secvenţa de aminoacizi a genei liniei germinale corespunzătoare. O mutaţie poate fi făcută într-o regiune cadru sau într-o regiune constantă pentru a creşte timpul de înjumătăţire al anticorpului anti-TIM-3. A se vedea, de ex., publicaţia PCT WO 00/09560. O mutaţie într-o regiune cadru sau o regiune constantă poate fi făcută, de asemenea, pentru a altera imunogenicitatea anticorpului, şi/sau pentru a furniza un situs pentru legarea covalentă sau necovalentă la o altă moleculă. În acest document este descris un singur anticorp care poate avea mutaţii în oricare sau mai multe dintre CDR-uri sau regiunile cadru ale domeniului variabil sau în regiunea constantă.
Într-un aspect suplimentar, prezenta invenţie furnizează un vector adecvat pentru exprimarea unuia sau ambelor lanţuri ale unui anticorp anti-TIM-3 sau ale unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, aşa cum este definit în revendicări. Termenul "vector", aşa cum este utilizat în acest document, înseamnă o moleculă de acid nucleic capabilă să transporte un alt acid nucleic la care a fost legată. În unele variante de realizare, vectorul este o plasmidă, adică o piesă circulară dublu catenară de ADN în care pot fi ligaturate segmente suplimentare de ADN. În unele variante de realizare, vectorul este un vector viral, în care segmente suplimentare de ADN pot fi ligaturate în genomul viral. În unele variante de realizare, vectorii sunt capabili de replicare autonomă într-o celulă gazdă în care ei sunt introduşi (de ex., vectori bacterieni având o origine bacteriană de replicare şi vectori epizomali de mamifere). În alte variante de realizare, vectorii (de ex., vectori non-epizomali de mamifere) pot fi integraţi în genomul unei celule gazdă la introducerea în celula gazdă şi, prin urmare, sunt replicaţi împreună cu genomul gazdă. Mai mult, anumiţi vectori sunt capabili să direcţioneze exprimarea genelor la care ei sunt legaţi operativ. Astfel de vectori sunt denumiţi în acest document ca "vectori de exprimare recombinanţi" (sau pur şi simplu, "vectori de exprimare").
Invenţia furnizează vectori care cuprind molecule de acid nucleic care codifică lanţul greu al unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, lanţul uşor al unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, sau ambele lanţuri grele şi uşoare ale unui anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau unei porţiuni de legare la antigen a acestuia. Invenţia furnizează suplimentar vectori care cuprind molecule de acid nucleic care codifică proteine de fuziune, anticorpi modificaţi, fragmente de anticorpi, şi sonde ale acestora.
În unele variante de realizare, anticorpii anti-TIM-3 din invenţie sunt exprimaţi, sau porţiunile de legare la antigen ale acestora sunt exprimate prin inserarea de ADN-uri care codifică lanţuri uşoare şi grele de lungime parţială sau completă, obţinute aşa cum a fost descris mai sus, în vectori de exprimare astfel încât genele sunt legate operativ la secvenţele necesare de control al exprimării, cum ar fi secvenţele de control transcripţional şi translaţional. Vectorii de exprimare includ plasmide, retrovirusuri, adenovirusuri, virusuri adeno-asociate (AAV), virusuri vegetale cum ar fi virusul mozaicului de conopidă, virusul mozaicului tutunului, cosmide, YAC-uri, epizomi derivaţi din EBV, şi altele asemenea. Secvenţa de codificare a anticorpului poate fi ligaturată într-un vector astfel încât secvenţele de control transcripţional şi translaţional din cadrul vectorului servesc funcţia lor intenţionată de reglare a transcripţiei şi translaţiei pentru secvenţa de codificare a anticorpului. Vectorul de exprimare şi secvenţele de control al exprimării pot fi alese pentru a fi compatibile cu celula gazdă de exprimare utilizată. Secvenţa de codificare a lanţului uşor al anticorpului şi secvenţa de codificare a lanţului greu al anticorpului pot fi inserate în vectori separaţi şi pot fi legate operativ la aceleaşi secvenţe de control al exprimării sau la diferite secvenţe de control al exprimării (de ex., promotori). Într-o variantă de realizare, ambele secvenţe de codificare sunt inserate în acelaşi vector de exprimare, şi pot fi legate operativ la aceleaşi secvenţe de control al exprimării (de ex., un promotor comun), pentru a separa secvenţe identice de control al exprimării (de ex., promotori) sau la diferite secvenţe de control al exprimării (de ex., promotori). Secvenţele de codificare ale anticorpului pot fi inserate în vectorul de exprimare prin metode standard (de ex., ligatura situsurilor de restricţie complementare pe fragmentul genei de anticorp şi vector, sau ligatura capătului teşit dacă nu sunt prezente situsuri de restricţie).
Un vector convenabil este unul care codifică o secvenţă de imunoglobulină CH sau CL umană completă din punct de vedere funcţional, cu situsuri de restricţie corespunzătoare proiectate prin inginerie astfel încât orice secvenţă VH sau VL poate fi inserată şi exprimată cu uşurinţă, aşa cum este descris mai sus. Genele de codificare HC şi LC în astfel de vectori pot conţine secvenţe de intron care vor avea ca rezultat randamente de proteine de anticorpi îmbunătăţite global prin stabilizarea ARNm înrudit. Secvenţele de intron sunt flancate de situsuri donor de îmbinare şi acceptor de îmbinare, care determină unde va avea loc îmbinarea ARN. Locaţia secvenţelor de introni poate fi fie în regiuni variabile sau constante ale lanţurilor de anticorpi, fie atât în regiunile variabile cât şi constante atunci când sunt utilizaţi mai mulţi introni. Poliadenilarea şi terminarea transcripţiei pot avea loc la situsurile cromozomiale native în aval de regiunile de codificare. Vectorul de exprimare recombinant poate codifica, de asemenea, o peptidă semnal care facilitează secreţia lanţului de anticorp dintr-o celulă gazdă. Gena lanţului de anticorp poate fi clonată în vector astfel încât peptida semnal este legată în cadru la capătul amino terminal al lanţului de imunoglobulină. Peptida semnal poate fi o peptidă semnal de imunoglobulină sau o peptidă semnal heterologă (adică, o peptidă semnal dintr-o proteină non-imunoglobulină).
În plus faţă de genele lanţului de anticorp, vectorii de exprimare recombinanţi din invenţie poartă secvenţe de reglare care controlează exprimarea genelor lanţului de anticorp într-o celulă gazdă. Se va aprecia, de cei care au pregătire în domeniul de specialitate, că proiectarea vectorului de exprimare, inclusiv selecţia secvenţelor de reglare, poate depinde de factori precum alegerea celulei gazdă care urmează să fie transformată, nivelul de exprimare al proteinei dorite, etc. Secvenţele de reglare preferate pentru exprimarea celulei gazdă de mamifer includ elemente virale care direcţionează niveluri ridicate de exprimare a proteinei în celulele de mamifere, cum ar fi promotorii şi/sau amplificatorii derivaţi din LTR-uri retrovirale, citomegalovirus (CMV) (cum ar fi promotorul/amplificatorul CMV), Virusul Simian 40 (SV40) (cum ar fi promotorul/amplificatorul SV40), adenovirus (de ex., promotorul tardiv principal al adenovirusului (AdMLP)), poliom şi promotori puternici de mamifere cum ar fi promotorii nativi de imunoglobulină şi actină. Pentru descrierea suplimentară a elementelor de reglare virală, şi a secvenţelor acestora, a se vedea, de ex., brevetele de invenţie U.S. 5.168.062, 4.510.245 şi 4.968.615. Metodele pentru exprimarea anticorpilor în plante, inclusiv o descriere a promotorilor şi vectorilor, precum şi transformarea plantelor, sunt cunoscute în domeniul de specialitate. A se vedea, de ex., brevetul de invenţie U.S. 6.517.529. Metodele pentru exprimarea polipeptidelor în celule bacteriene sau celule fungice, de ex., celule de drojdie, sunt, de asemenea, binecunoscute în domeniul de specialitate
În plus faţă de genele lanţului de anticorp şi secvenţele de reglare, vectorii de exprimare recombinanţi din invenţie pot purta secvenţe suplimentare, cum ar fi secvenţele care reglează replicarea vectorului în celulele gazdă (de ex., originile replicării) şi genele marker selectabile. Gena marker selectabilă facilitează selecţia celulelor gazdă în care a fost introdus vectorul (a se vedea, de ex., brevetele de invenţie U.S. 4.399.216, 4.634.665 şi 5.179.017). Pentru exemplificare, în mod tipic, gena marker selectabilă conferă rezistenţă la medicamente, cum ar fi G418, higromicină sau metotrexat, unei celule gazdă în care a fost introdus vectorul. Pentru exemplificare, genele marker selectabile includ gena de dihidrofolat reductază (DHFR) (pentru utilizare în celulele gazdă dhfr cu selecţie/amplificare cu metotrexat), gena neo (pentru selecţia G418) şi gena glutamat sintetază.
Termenul "secvenţă de control al exprimării", aşa cum este utilizat în acest document, înseamnă secvenţe de polinucleotide care sunt necesare pentru a efectua exprimarea şi procesarea secvenţelor de codificare la care acestea sunt legate. Secvenţele de control al exprimării includ secvenţe adecvate de iniţiere a transcripţiei, de terminare, promotor şi amplificator; semnale eficiente de procesare a ARN, cum ar fi semnalele de îmbinare şi poliadenilare; secvenţe care stabilizează ARNm citoplasmatic; secvenţe care îmbunătăţesc eficienţa de translaţie (adică, secvenţa consens Kozak); secvenţe care îmbunătăţesc stabilitatea proteinelor; şi, atunci când se doreşte, secvenţe care îmbunătăţesc secreţia de proteine. Natura unor astfel de secvenţe de control diferă în funcţie de organismul gazdă; la procariote, astfel de secvenţe de control includ în general promotorul, situsul de legare ribozomal şi secvenţa de terminare a transcripţiei; la eucariote, în general, astfel de secvenţe de control includ promotori şi secvenţa de terminare a transcripţiei. Termenul "secvenţe de control" este destinat să includă, cel puţin, toate componentele a căror prezenţă este esenţială pentru exprimare şi procesare, şi poate include, de asemenea, componente suplimentare a căror prezenţă este avantajoasă, pentru exemplificare, secvenţe lider şi secvenţe partener de fuziune.
Celule gazdă şi metode pentru producerea anticorpului şi compoziţiei de anticorp
Un aspect suplimentar al invenţiei se referă la metode pentru producerea compoziţiilor de anticorpi şi a anticorpilor şi a porţiunilor de legare la antigen ale acestora din invenţie. O variantă de realizare a acestui aspect al invenţiei se referă la o metodă pentru producerea unui anticorp aşa cum este definit în revendicări, care cuprinde furnizarea unei celule gazdă recombinante capabile să exprime anticorpul, cultivarea respectivei celule gazdă în condiţii adecvate pentru exprimarea anticorpului, şi izolarea anticorpul rezultat. Anticorpii produşi printr-o astfel de exprimare în astfel de celule gazdă recombinante sunt menţionaţi în acest document ca "anticorpi recombinanţi". Invenţia furnizează, de asemenea, celule descendente ale unor astfel de celule gazdă, şi anticorpi produşi de acestea.
Termenul "celulă gazdă recombinantă" (sau pur şi simplu "celulă gazdă"), aşa cum este utilizat în acest document, înseamnă o celulă în care a fost introdus un vector de exprimare recombinant. Invenţia furnizează celule gazdă care cuprind un vector conform invenţiei descris mai sus. Invenţia furnizează, de asemenea, celule gazdă care cuprind o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, şi o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia ale unui anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen a acestuia din invenţie. Ar trebui să se înţeleagă că "celulă gazdă recombinantă" şi "celulă gazdă" înseamnă nu numai celula subiect particulară, ci, de asemenea, descendenţa unei astfel de celule. Deoarece anumite modificări pot apărea în generaţiile următoare, datorită fie mutaţiei, fie influenţelor mediului, astfel de descendenţi pot să nu fie, de fapt, identici cu celula părinte, dar sunt încă incluşi în domeniul de aplicare al termenului "celulă gazdă" aşa cum este utilizat în acest document.
Moleculele de acid nucleic care codifică anticorpi anti-TIM-3 şi vectorii care cuprind aceste molecule de acid nucleic se pot utiliza pentru transfecţia unei celule gazdă adecvate de mamifer, plantă, bacterie sau drojdie. Transformarea poate fi prin orice metodă cunoscută pentru introducerea polinucleotidelor într-o celulă gazdă. Metodele pentru introducerea polinucleotidelor heterologe în celulele de mamifere sunt bine cunoscute în domeniul de specialitate şi includ transfecţia mediată de dextran, precipitarea cu fosfat de calciu, transfecţia mediată de polibrenă, fuziunea protoplaştilor, electroporarea, încapsularea polinucleotidei (polinucleotidelor) în lipozomi, şi microinjecţia directă a ADN în nuclee. În plus, moleculele de acid nucleic pot fi introduse în celulele de mamifere prin vectori virali. Metodele pentru transformarea celulelor sunt bine cunoscute în domeniul de specialitate. A se vedea, de ex., brevetele de invenţie U.S. 4.399.216, 4.912.040, 4.740.461, şi 4.959.455. Metodele pentru transformarea celulelor de plante sunt bine cunoscute în domeniul de specialitate, incluzând, de ex., transformarea mediată de Agrobacterium, transformarea biolistică, injectarea directă, electroporarea şi transformarea virală. Metodele pentru transformarea celulelor bacteriene şi de drojdie sunt, de asemenea, bine cunoscute în domeniul de specialitate.
Linii de celule de mamifere disponibile ca gazde pentru exprimare sunt bine cunoscute în domeniul de specialitate, şi includ multe linii celulare imortalizate disponibile de la American Type Culture Collection (ATCC). Acestea includ, inter alia, celulele de ovar de hamster chinezesc (CHO), celulele NS0, celulele SP2, celulele HEK-293T, celulele 293 Freestyle (Invitrogen), celulele NIH-3T3, celulele HeLa, celulele de rinichi de pui de hamster (BHK), celulele de rinichi de maimuţă verde africană (COS), celulele de carcinom hepatocelular uman (de ex., Hep G2), celulele A549, şi un număr de alte linii celulare. Liniile celulare de preferinţă particulară sunt selectate determinând care linii celulare au niveluri de exprimare ridicate. Alte linii celulare care pot fi utilizate sunt liniile celulare de insecte, cum ar fi celulele Sf9 sau Sf21. Atunci când în celulele gazdă de mamifere sunt introduşi vectori de exprimare recombinanţi care codifică gene de anticorpi, anticorpii sunt produşi prin cultivarea celulelor gazdă pentru o perioadă de timp suficientă pentru a permite exprimarea anticorpului în celulele gazdă sau, mai preferabil, secreţia anticorpului în mediul de cultură în care sunt crescute celulele gazdă. Anticorpii pot fi recuperaţi din mediul de cultură folosind metode standard de purificare a proteinelor. Celulele gazdă de plante includ, de ex., Nicotiana, Arabidopsis, lentile de apă, porumb, grâu, cartofi, etc. Celulele gazdă bacteriene includ speciile E. coli şi Streptomyces. Celulele gazdă de drojdie includ Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae şi Pichia pastoris.
Suplimentar, exprimarea anticorpilor din invenţie sau a porţiunilor de legare la antigen ale acestora din linii celulare de producţie poate fi îmbunătăţită utilizând un număr de tehnici cunoscute. Pentru exemplificare, sistemul de exprimare a genei de glutamin sintetază (sistemul GS) este o abordare uzuală pentru îmbunătăţirea exprimării în anumite condiţii. Sistemul GS este discutat în întregime sau parţial în legătură cu brevetele EP 0 216 846, 0 256 055, 0 323 997 şi 0 338 841.
Este probabil ca anticorpii exprimaţi de linii celulare diferite sau în animalele transgenice să aibă şabloane de glicozilare diferite unul faţă de celălalt. Totuşi, toţi anticorpii codificaţi de moleculele de acid nucleic furnizate în acest document, sau care cuprind secvenţele de aminoacizi furnizate în acest document fac parte din prezenta invenţie, indiferent de starea de glicozilare a anticorpilor, şi, mai în general, indiferent de prezenţa sau absenţa modificării (modificărilor) post-translaţionale.
Compoziţii farmaceutice
Un alt aspect al invenţiei este o compoziţie farmaceutică ce cuprinde ca un ingredient activ (sau ca unicul ingredient activ) un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, o moleculă de legare bi-specifică, sau o compoziţie de anticorp anti-TIM-3 din invenţie. Compoziţia farmaceutică poate cuprinde orice compoziţie de anticorp anti-TIM-3, moleculă de legare bi-specifică, sau anticorp sau porţiune de legare la antigen a acestuia, aşa cum este definit în revendicări. În unele variante de realizare, compoziţiile sunt destinate ameliorării, prevenirii, şi/sau tratamentului unei tulburări legate de TIM-3 (de ex., o tulburare caracterizată prin supraexprimarea sau hiperactivitatea TIM-3 sau a oricăruia dintre liganzii săi) şi/sau cancer. În unele variante de realizare, compoziţiile sunt destinate activării sistemului imunitar. În anumite variante de realizare, compoziţiile sunt destinate ameliorării, prevenirii, şi/sau tratamentului cancerului care îşi are originea în ţesuturi precum piele, plămân, intestin, ovar, creier, prostată, rinichi, ţesuturi moi, sistemul hematopoietic, cap şi gât, ficat, vezică urinară, sân, stomac, uter şi pancreas.
În general, anticorpii din invenţie sau porţiunile de legare la antigen ale acestora sau moleculele de legare bi-specifice din invenţie sunt adecvate pentru a fi administrate ca o formulare în asociere cu unul sau mai mulţi excipienţi acceptabili din punct de vedere farmaceutic, de ex., aşa cum este descris mai jos.
Compoziţiile farmaceutice din invenţie vor cuprinde unul sau mai mulţi anticorpi anti-TIM-3 sau porţiuni de legare, sau molecule de legare bi-specifice, din invenţie, de ex., unul sau doi anticorpi anti-TIM-3 sau porţiuni de legare sau molecule de legare bi-specifice. Într-o variantă de realizare, compoziţia cuprinde un singur anticorp anti-TIM-3 din invenţie sau o porţiune de legare a acestuia.
Compoziţia farmaceutică cuprinde cel puţin un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, de ex., un anticorp anti-TIM-3 sau porţiune, sau o moleculă de legare bi-specifică, şi unul sau mai mulţi anticorpi suplimentari care ţintesc unul sau receptori de suprafaţă celulară mai relevanţi, de ex., unul sau mai mulţi receptori relevanţi de cancer.
Termenul "excipient" este utilizat în acest document pentru a descrie orice ingredient altul decât compusul(i) din invenţie. Alegerea excipientului(lor) va depinde în mare măsură de factori cum ar fi modul particular de administrare, efectul excipientului asupra solubilităţii şi stabilităţii, şi natura formei de dozare. Aşa cum este utilizat în acest document, "excipient acceptabil din punct de vedere farmaceutic" include oricare şi toţi solvenţii, mediile de dispersie, acoperirile, agenţii antibacterieni şi antifungici, agenţii izotonici şi de întârziere a absorbţiei, şi alţii asemenea care sunt compatibili din punct de vedere fiziologic. Câteva exemple de excipienţi acceptabili din punct de vedere farmaceutic sunt apa, soluţia salină, soluţie salină tamponată cu fosfat, dextroza, glicerolul, etanolul şi altele asemenea, precum şi combinaţiile acestora. În multe cazuri, va fi preferabil să se includă în compoziţie agenţi izotonici, pentru exemplificare, zaharuri, polialcooli cum ar fi manitolul, sorbitolul, sau clorura de sodiu în compoziţie. Exemple suplimentare de substanţe acceptabile din punct de vedere far¬maceutic sunt agenţii de umectare sau cantităţile minore de substanţe auxiliare cum ar fi agenţii de umectare sau emulsionare, conservanţii sau tampoanele, care sporesc durata de valabilitate sau eficacitatea anticorpului.
Compoziţiile farmaceutice din prezenta invenţie şi metodele pentru prepararea lor vor fi evidente cu uşurinţă pentru cei care au pregătire în domeniul de specialitate. Astfel de compoziţii şi metode pentru prepararea lor pot fi găsite, de exemplu, în Remington's Pharmaceutical Sciences, ediţia a 19-a (Mack Publishing Company, 1995). Compoziţiile farmaceutice sunt fabricate, de preferinţă, în condiţii GMP (bune practici de fabricaţie).
O compoziţie farmaceutică din invenţie poate fi preparată, ambalată, sau vândută în vrac, ca o doză unitară singură, sau ca o multitudine de doze unitare singure. Aşa cum este utilizată în acest document, o "doză unitară" este o cantitate discretă din compoziţia farmaceutică ce cuprinde o cantitate predeterminată din ingredientul activ. Cantitatea din ingredientul activ este egală, în general, cu doza de ingredient activ care ar fi administrată unui subiect sau o fracţiune convenabilă dintr-o astfel de doză, cum ar fi, pentru exemplificare, o jumătate sau o treime dintr-o astfel de doză.
Orice metodă pentru administrarea peptidelor, proteinelor sau anticorpilor acceptată în domeniul de specialitate poate fi utilizată în mod adecvat pentru anticorpii şi porţiunile de legare la antigen din invenţie.
Compoziţiile farmaceutice din invenţie sunt adecvate, de obicei, pentru administrare parenterală. Aşa cum se utilizează în acest document, "administrarea parenterală" a unei compoziţii farmaceutice include orice cale de administrare caracterizată prin distrugerea fizică a unui ţesut al unui subiect şi administrarea compoziţiei farmaceutice prin breşă în ţesut, rezultând astfel, în general, administrarea directă în fluxul sanguin, în muşchi, sau într-un organ intern. Administrarea parenterală include, prin urmare, dar nu este limitată la, administrarea unei compoziţii farmaceutice prin injectarea compoziţiei, prin aplicarea compoziţiei printr-o incizie chirurgicală, prin aplicarea compoziţiei printr-o rană non-chirurgicală care penetrează ţesutul, şi altele asemenea. În particular, administrarea parenterală este avută în vedere să includă, dar nu este limitată la, injecţie sau perfuzie subcutanată, intraperitoneală, intramusculară, intrasternală, intravenoasă, intra-arterială, intratecală, intraventriculară, intrauretrală, intracraniană, şi intrasinovială; şi tehnici de perfuzie dialitică renală. Este avută în vedere, de asemenea, perfuzia regională. Variantele de realizare particulare includ căile intravenoase şi subcutanate.
Formulările unei compoziţii farmaceutice adecvate pentru administrare parenterală cuprind, de obicei, ingredientul activ combinat cu un transportor acceptabil din punct de vedere farmaceutic, cum ar fi apă sterilă sau soluţia salină izotonică sterilă. Astfel de formulări pot fi preparate, ambalate, sau vândute într-o formă adecvată pentru administrare în bolus sau pentru administrare continuă. Formulările injectabile pot fi preparate, ambalate, sau vândute în formă de dozare unitară, cum ar fi în fiole sau în recipiente cu doze multiple care conţin un conservant. Formulările pentru administrare parenterală includ, dar nu sunt limitate la, suspensii, soluţii, emulsii în vehicule uleioase sau apoase, paste, şi altele asemenea. Astfel de formulări pot cuprinde suplimentar unul sau mai multe ingrediente suplimentare incluzând, dar fără a se limita la, agenţi de suspendare, stabilizare, sau dispersare. Într-o variantă de realizare a unei formulări pentru administrare parenterală, ingredientul activ este furnizat sub formă uscată (adică, pulbere sau granulară) pentru reconstituire cu un vehicul adecvat (de ex., apă sterilă apirogenă) înainte de administrarea parenterală a compoziţiei reconstituite. Formulările parenterale includ, de asemenea, soluţii apoase care pot conţine excipienţi precum săruri, carbohidraţi şi agenţi de tamponare (de preferinţă la un pH de la 3 până la 9), dar, pentru unele aplicaţii, acestea pot fi formulate în mod mai adecvat ca o soluţie non-apoasă sterilă sau ca o formă uscată pentru a fi utilizată împreună cu un vehicul adecvat, cum ar fi apa sterilă, apirogenă. Formele de administrare parenterală cu titlu de exemplu includ soluţii sau suspensii în soluţii apoase sterile, pentru exemplificare, soluţii apoase de propilen glicol sau dextroză. Astfel de forme de dozare pot fi tamponate în mod adecvat, dacă se doreşte. Alte formulări care pot fi administrate parental care sunt utile le includ pe cele care cuprind ingredientul activ sub formă microcristalină, sau într-un preparat lipozomal. Formulările pentru administrare parenterală pot fi formulate pentru a fi cu eliberare imediată şi/sau modificată. Formulările cu eliberare modificată includ eliberarea întârziată, susţinută, pulsată, controlată, ţintită şi programată.
Pentru exemplificare, într-un aspect, soluţiile injectabile sterile pot fi preparate prin încorporarea anticorpului anti-TIM-3 sau a porţiunii de legare la antigen a acestuia, a moleculei de legare bi-specifice, sau a compoziţiei de anticorpi anti-TIM-3 în cantitatea necesară într-un solvent corespunzător cu un ingredient sau o combinaţie de ingrediente enumerate mai sus, după cum este necesar, urmată de sterilizare prin filtrare. În general, dispersiile sunt preparate prin încorporarea compusului activ într-un vehicul steril care conţine un mediu de dispersie bazic şi celelalte ingrediente necesare dintre cele enumerate mai sus. În cazul pulberilor sterile pentru prepararea soluţiilor injectabile sterile, metodele preferate de preparare sunt uscarea în vid şi uscarea prin congelare care produce o pulbere a ingredientului activ plus orice ingredient suplimentar dorit dintr-o soluţie filtrată steril în prealabil a acestuia. Fluiditatea corectă a unei soluţii poate fi menţinută, pentru exemplificare, prin utilizarea unei acoperiri cum ar fi lecitina, prin menţinerea dimensiunii necesare a particulelor în cazul dispersiei şi prin utilizarea de agenţi activi de suprafaţă. Absorbţia prelungită a compoziţiilor injectabile poate fi realizată prin includerea în compoziţie a unui agent care întârzie absorbţia, pentru exemplificare, săruri de monostearat şi gelatină, şi/sau prin utilizarea de acoperiri cu eliberare modificată (de ex., acoperiri cu eliberare lentă).
Anticorpii din invenţie pot fi administraţi, de asemenea, intranazal sau prin inhalare, de obicei sub formă de pulbere uscată (fie singuri, fie sub formă de amestec, fie ca o particulă componentă mixtă, pentru exemplificare, amestecată cu un excipient adecvat acceptabil din punct de vedere farmaceutic) dintr-un inhalator de pulbere uscată, ca un spray de aerosoli dintr-un recipient presurizat, o pompă, un spray, atomizor (preferabil un atomizor care utilizează electrohidrodinamică pentru a produce o ceaţă fină), sau nebulizator, cu sau fără utilizarea unui propulsor adecvat, sau ca picături nazale.
Recipientul sub presiune, pompa, spray-ul, atomizorul, sau nebulizatorul conţine în general o soluţie sau suspensie a unui anticorp din invenţie care cuprinde, pentru exemplificare, un agent adecvat pentru dispersarea, solubilizarea, sau extinderea eliberării substanţei active, un propulsor(i) ca solvent.
Înainte de utilizare într-o formulare de pulbere uscată sau suspensie, produsul medicamentos este în general micronizat la o dimensiune adecvată pentru administrare prin inhalare (de obicei mai mică de 5 microni). Acest lucru poate fi obţinut prin orice metodă de mărunţire corespunzătoare, cum ar fi măcinarea cu jet spiralat, măcinarea cu jet în pat fluidizat, procesarea fluidului supercritic pentru a forma nanoparticule, omo¬genizarea la presiune înaltă, sau uscarea prin pulverizare.
Capsulele, blisterele şi cartuşele pentru utilizare într-un inhalator sau insuflator pot fi formulate pentru a conţine un amestec de pulbere al compusului din invenţie, o bază de pulbere adecvată şi un modificator de performanţă.
O formulare de soluţie adecvată pentru utilizare într-un atomizator care utilizează electrohidrodinamică pentru a produce o ceaţă fină poate conţine o doză adecvată din anticorpul din invenţie per acţionare şi volumul de acţionare poate varia, pentru exemplificare, de la 1 µL până la 100 µL.
La acele formulări din invenţie destinate administrării prin inhalare/intranazale pot fi adăugate arome adecvate, cum ar fi mentolul şi levomentolul, sau îndulcitori, cum ar fi zaharina sau zaharina sodică.
Formulările pentru administrare prin inhalare/intranazală pot fi formulate pentru a fi cu eliberare imediată şi/sau modificată. Formulările cu eliberare modificată includ eliberarea întârziată, susţinută, pulsată, controlată, ţintită şi programată.
În cazul inhalatoarelor şi aerosolilor cu pulbere uscată, unitatea de dozare este determinată cu ajutorul unei supape care furnizează o cantitate măsurată. Unităţile în conformitate cu invenţia sunt configurate în mod obişnuit pentru a administra o doză măsurată sau "puf" dintr-un anticorp din invenţie. Doza zilnică totală va fi administrată, de obicei, într-o singură doză sau, mai uzual, ca doze divizate de-a lungul unei zile întregi.
Anticorpii şi porţiunile de anticorp din invenţie se pot formula, de asemenea, pentru o administrare pe cale orală. Administrarea orală poate implica înghiţire, astfel încât compusul să intre în tractul gastrointestinal, şi/sau administrare bucală, linguală, sau sublinguală prin care compusul intră în fluxul sanguin direct din gură.
Formulările adecvate pentru administrare orală includ sisteme solide, semi-solide şi lichide, cum ar fi tabletele; capsule moi sau tari care conţin multi- sau nano-particule, lichide, sau pulberi; pastile (inclusiv umplute cu lichid); gume; geluri; forme de dozare cu dispersare rapidă; filme; ovule; spray-uri; şi plasturi bucali/mucoadezivi.
Formulările lichide includ suspensii, soluţii, siropuri şi elixiruri. Asemenea formulări pot fi folosite ca umpluturi în capsule moi sau tari (facute, pentru exemplificare, din gelatină sau hidroxipropilmetilceluloză) şi cuprind în mod obişnuit un transportor, pentru exemplificare, apă, etanol, polietilen glicol, propilen glicol, metilceluloză, sau un ulei adecvat, şi unul sau mai mulţi agenţi de emulsionare şi/sau agenţi de suspendare. Formulările lichide pot fi preparate, de asemenea, prin reconstituirea unui solid, pentru exemplificare, dintr-un plic.
Utilizări terapeutice ale anticorpilor şi compoziţiilor din invenţie
Într-un aspect, anticorpii anti-TIM-3 şi porţiunile de legare la antigen ale acestora, compoziţiile anti-TIM-3, şi moleculele de legare bi-specifice din invenţie sunt pentru utilizare în îmbunătăţirea sau activarea sistemului imunitar la un om care are nevoie de acest lucru. În unele variante de realizare, pacientul are o afecţiune caracterizată prin supraexprimarea sau hiperactivitatea TIM-3 sau a oricăruia dintre liganzii săi. În unele variante de realizare, pacientul este imuno-deprimat. În anumite variante de realizare, anticorpul sau porţiunea de legare a antigenului a acestuia, compoziţia, sau molecula de legare bi-specifică este pentru utilizare în tratamentul cancerului, de ex., cancere care provin din ţesuturi cum ar fi pielea, plămânul, intestinul, ovarul, creierul, prostata, rinichiul, ţesuturile moi, sistemul hematopoietic, capul şi gâtul, ficatul, vezica urinară, sânul, stomacul, uterul şi pancreasul, şi orice cancere sau alte afecţiuni care se bazează pe activitatea TIM-3 şi/sau în care pacientul exprimă sau supraexprimă galectina-9, fosfatidilserina, CEACAM-1 şi/sau HMGB-1. Cancerele tratate cu anticorpii anti-TIM-3, porţiunile de legare la antigen ale acestora, compoziţiile de anticorpi anti-TIM-3, şi/sau moleculele de legare bi-specifice din invenţie pot include, de ex., melanomul, cancerul pulmonar fără celule mici, cancerul colorectal, carcinomul cu celule renale, leucemia (de ex., leucemie mieloidă acută), şi tumorile solide (de ex., tumori solide avansate sau metastatice).
În unele variante de realizare, cancerele tratate de anticorpii anti-TIM-3, porţiunile de legare la antigen, compoziţiile anti-TIM-3, şi/sau moleculele de legare bi-specifice din invenţie pot include, de ex., melanomul (de ex., melanomul avansat sau metastatic), cancerul pulmonar fără celule mici, cancerul cu celule scuamoase de cap şi gât, carcinomul cu celule renale, limfomul Hodgkin, limfomul non-Hodgkin, glioblastomul, gliomul, cancerul pulmonar cu celule scuamoase, cancerul pulmonar cu celule mici, carcinomul hepatocelular, cancerul de vezică urinară, cancerul de tract urinar superior, cancerul esofagian, cancerul de joncţiune gastroesofagiană, cancerul gastric, cancerul hepatic, cancerul de colon, carcinomul colorectal, mielomul multiplu, sarcoamele, leucemia mieloidă acută, leucemia mieloidă cronică, sindromul mielodisplazic, cancerul nazofaringian, leucemia limfocitară cronică, leucemia limfo-blastică acută, limfomul limfocitar mic, cancerul ovarian, cancerul gastrointestinal, cancerul peritoneal primar, cancerul de trompe uterine, cancerul urotelial, leucemia/limfomul cu celule T asociat cu HTLV, cancerul de prostată, cancerul genito-urinar, meningiomul, cancerul corticosuprarenal, gliosarcomul, fibrosarcomul, cancerul de rinichi, cancerul de sân, cancerul pancreatic, cancerul endometrial, cancerul de piele cu celule bazale, cancerul de apendice, cancerul de tract biliar, cancerul de glande salivare, cancerul avansat cu celule Merkel, limfomul cu celule B mari difuz, limfomul folicular, mezoteliomul, şi tumorile solide.
Anticorpul sau porţiunea de legare la antigen a acestuia, compoziţia, sau molecula de legare bi-specifică poate fi pentru utilizare în tratarea infecţiilor virale şi/sau parazitare, de ex., în cazul în care agenţii patogeni inhibă răspunsul imun al gazdei.
"A trata", "tratare" şi "tratament" se referă la o metodă de atenuare sau abrogare a unei tulburări biologice şi/sau a cel puţin unul dintre simptomele asociate acesteia. Aşa cum se utilizează în acest document, a "atenua" o boală, tulburare sau afecţiune înseamnă reducerea severităţii şi/sau frecvenţei de apariţie a simptomelor bolii, tulburării, sau afecţiunii. Mai mult decât atât, referinţele din acest document la "tratament" includ referiri la tratament curativ, paliativ şi profilactic.
"Cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic" se referă la cantitatea din agentul terapeutic administrat care va ameliora într-o oarecare măsură unul sau mai multe dintre simptomele tulburării care este tratată. O cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic dintr-un terapeutic anti-cancer, pentru exemplificare, poate avea ca rezultat micşorarea tumorii, supravieţuire crescută, eliminarea celulelor canceroase, progresie a bolii scăzută, inversarea metastazelor, sau alte obiective clinice dorite de profesioniştii din domeniul sănătăţii.
Compoziţiile de anticorpi sau anticorpii sau porţiunile de legare la antigen ale acestora din invenţie pot fi administrate singure sau în combinaţie cu unul sau mai multe alte medicamente sau anticorpi (sau ca orice combinaţie a acestora). Compoziţiile farmaceutice, metodele şi utilizările din invenţie cuprind, prin urmare, de asemenea, variante de realizare ale combinaţiilor (co-administrare) cu alţi agenţi activi, aşa cum este detaliat mai jos.
Aşa cum sunt utilizaţi în acest document, termenii "co-administrare", "co-administrat" şi "în combinaţie cu", cu referire la compoziţiile de anticorpi, anticorpii şi porţiunile de legare la antigen ale acestora, şi moleculele de legare bi-specifice din invenţie cu unul sau mai mulţi alţi agenţi terapeutici, se intenţionează să însemne, şi se referă la, şi includ următoarele:
• administrarea simultană a unei astfel de combinaţii de compoziţie de anticorpi/anticorp/porţiune de legare la antigen/moleculă de legare bi-specifică din invenţie şi agent terapeutic (agenţi terapeutici) către un pacient care are nevoie de tratament, atunci când astfel de componente sunt formulate împreună într-o singură formă de dozare care eliberează respectivele componente în mod substanţial în acelaşi timp către respectivul pacient, • administrarea în mod substanţial simultană a unei astfel de combinaţii de compoziţie de anticorpi/anticorp/porţiune de legare la antigen/moleculă de legare bi-specifică din invenţie şi agent terapeutic (agenţi terapeutici) către un pacient care are nevoie de tratament, atunci când astfel de componente sunt formulate separat unele de celelalte în forme de dozare separate care sunt luate în mod substanţial în acelaşi timp de către respectivul pacient, după care respectivele componente sunt eliberate în mod substanţial în acelaşi timp către respectivul pacient, • administrarea secvenţială a unei astfel de combinaţii de compoziţie de anticorpi/anticorp/porţiune de legare la antigen/moleculă de legare bi-specifică din invenţie şi agent terapeutic (agenţi terapeutici) către un pacient care are nevoie de tratament, atunci când astfel de componente sunt formulate separat unele de celelalte în forme de dozare separate care sunt luate la momente consecutive de către respectivul pacient cu un interval de timp semnificativ între fiecare administrare, după care respectivele componente sunt eliberate la momente în mod substanţial diferite către respectivul pacient; şi • administrarea secvenţială a unei astfel de combinaţii de compoziţie de anticorpi/anticorp/porţiune de legare la antigen/moleculă de legare bi-specifică din invenţie şi agent terapeutic (agenţi terapeutici) către un pacient care are nevoie de tratament, atunci când astfel de componente sunt formulate împreună într-o singură formă de dozare care eliberează respectivele componente într-o manieră controlată, după care acestea sunt eliberate concomitent, consecutiv, şi/sau suprapus în acelaşi timp şi/sau momente diferite către respectivul pacient, unde fiecare parte poate fi administrată fie pe aceeaşi cale, fie pe o cale diferită. Compoziţiile de anticorpi, anticorpii şi porţiunile de legare la antigen ale acestora, şi moleculele de legare bi-specifice din invenţie, pot fi administrate fără tratamente terapeutice suplimentare, adică drept terapie de sine stătătoare. Alternativ, tratamentul cu compoziţiile de anticorpi şi anticorpii şi porţiunile de legare la antigen ale acestora din invenţie poate include cel puţin un tratament terapeutic suplimentar (terapie combinată). În unele variante de realizare, compoziţia de anticorp sau anticorpul sau porţiunea de legare la antigen a acestuia se poate co-administra sau formula cu o altă medicaţie/un alt medicament pentru tratamentul cancerului. Tratamentul terapeutic suplimentar poate cuprinde, de ex., un agent chimioterapeutic, anti-neoplazic, sau anti-angiogenic, un anticorp anti-cancer diferit, şi/sau terapie radio. Prin combinarea compoziţiilor de anticorpi, anticorpilor sau porţiunilor de legare la antigen, sau moleculelor de legare bi-specifice din invenţie cu agenţi cunoscuţi că induc diferenţierea terminală a celulelor canceroase, efectul poate fi îmbunătăţit în continuare. Astfel de compuşi pot fi selectaţi, pentru exemplificare, din grupul care este constituit din acid retinoic, acizi trans-retinoici, acizi cis-retinoici, fenilbutirat, factor de creştere a nervilor, dimetil sulfoxid, forma activă a vitaminei D3, receptorul gamma activat de proliferator de peroxizomi, 13-acetat de 12-O-tetradecanoilforbol, hexame¬tilen-bis-acetamidă, factorul beta de creştere transformant, acid butiric, AMP ciclic, şi vesnarinonă. În unele variante de realizare, compusul este selectat din grupul care este constituit din acid retinoic, fenilbutirat, acid all-trans-retinoic şi forma activă a vitaminei D. Articolele farmaceutice care cuprind o compoziţie de un anticorp anti-TIM-3, anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, sau moleculă de legare bi-specifică din invenţie şi cel puţin un alt agent (de ex., un agent chimioterapeutic, anti-neoplazic, sau anti-angiogenic) pot fi utilizate ca un tratament combinat pentru administrare simultană, separată sau succesivă în terapia cancerului. Celălalt agent poate fi orice agent adecvat pentru tratamentul cancerului particular în cauză, pentru exemplificare, un agent selectat din grupul care este constituit din agenţi de alchilare, de ex., derivaţi de platină precum cisplatină, carboplatină şi/sau oxali¬platină; alcoizi vegetali, de ex., paclitaxel, docetaxel şi/sau irinotecan; antibiotice antitumorale, de ex., doxorubicină (adriamicină), daunorubicină, epirubicină, idarubicină mitoxantronă, dactinomicină, bleomicină, actinomicină, luteomicină, şi/sau mitomicină; inhibitori ai topoizomerazei precum topotecan; şi/sau antimetaboliţi, de ex., fluoruracil şi/sau alte fluorpirimidine. Un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, o moleculă de legare bi-specifică, sau o compoziţie de anticorp anti-TIM-3 din invenţie poate fi utilizată, de asemenea, în combinaţie cu alte terapii anti-cancer, cum ar fi vaccinuri, citokine, inhibitori de enzime şi terapii cu celule T. În cazul unui vaccin, acesta poate fi, de ex., un vaccin proteic, peptidic sau ADN care conţine unul sau mai mulţi antigeni care sunt relevanţi pentru cancerul care este tratat, sau un vaccin care cuprinde celule dendritice împreună cu un antigen. Citokinele adecvate includ, pentru exemplificare, IL-2, IFN-gamma şi GM-CSF. Un exemplu de un tip de inhibitor enzimatic care are activitate anti-cancer este un inhibitor de indoleamin-2,3-dioxigenază (IDO), pentru exemplificare 1-metil-D-triptofan (1-D-MT). Terapia adoptivă cu celule T se referă la diferite tehnici de imunoterapie care implică extinderea sau proiectarea prin inginerie a celulelor T proprii ale pacienţilor pentru a recunoaşte şi ataca tumorile lor. Se are în vedere, de asemenea, că un anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, o moleculă de legare bi-specifică, sau o compoziţie de anticorp anti-TIM-3 din invenţie poate fi utilizată în terapia adjuvantă în conexiune cu inhibitorii tirozin kinazei. Aceştia sunt molecule sintetice, în principal derivate din chinazolină, cu greutate moleculară mică, ce interacţionează cu domeniul intracelular al tirozin kinazei al receptorilor şi inhibă fosforilarea receptorului indusă de ligand prin concurenţa pentru situsul de legare de Mg-ATP intracelular. În unele variante de realizare, compoziţia de anticorp, molecula de legare bi-specifică, sau anticorpul sau porţiunea de legare la antigen a acestuia se poate utiliza în combinaţie cu un altă medicaţie/medicament care mediază activarea sistemului imunitar, incluzând, dar fără a se limita la, un agent care mediază exprimarea sau activitatea A2AR, BLTA, B7-H3, B7-H4, CTLA-4, CD27, CD28, CD39, CD40, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, CTLA-3, CEACAM (de ex., CEACAM-1 şi/sau CEACAM-5), galectina-9, GITR, HVEM, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, LAG-3, NKG2A, OX40, PD-1/PD-L1/PD-L2, TIGIT, TGFR-beta, TNFR2, VISTA şi/sau 2B4. În anumite variante de realizare, agentul este un anticorp sau un fragment de legare la antigen al acestuia care se leagă la una dintre moleculele de mai sus. În anumite aspecte, anticorpii şi porţiunile de legare la antigen, compoziţiile, şi moleculele de legare bi-specifice din invenţiei se pot administra în combinaţie cu alt inhibitor al căii TIM-3, care poate ţinti TIM-3 sau unul sau mai mulţi dintre liganzii săi. Exemplele de astfel de inhibitori includ alţi anticorpi anti-TIM-3 şi anticorpi care ţintesc liganzi TIM-3 şi/sau co-receptori cum ar fi galectina-9, HMGB-1, lipidele fosfatidilserinei, CEACAM1, LILRA1-6, sau LILRB1-5. Se înţelege că compoziţiile de anticorpi, moleculele de legare bi-specifice, şi anticorpii şi porţiunile de legare la antigen ale acestora din invenţie pot fi pentru utilizare într-un tratament aşa cum este descris în acest document.
Doza şi calea de administrare
Compoziţiile de anticorpi din invenţie vor fi administrate într-o cantitate eficientă pentru tratamentul afecţiunii în cauză, adică la doze şi pentru perioade de timp necesare pentru a obţine un rezultat dorit. O cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic poate varia în funcţie de factori precum afecţiunea particulară care este tratată, vârsta, sexul şi greutatea pacientului, şi dacă anticorpii sunt administraţi ca un tratament de sine stătător sau în combinaţie cu unul sau mai multe tratamente pentru cancer suplimentare.
Regimurile de dozare pot fi ajustate pentru a furniza răspunsul optim dorit. Pentru exemplificare, poate fi administrat un singur bolus, pot fi administrate mai multe doze divizate pe parcursul timpului sau doza poate fi redusă sau mărită proporţional după cum indică exigenţele situaţiei terapeutice. Este deosebit de avantajos să se formuleze compoziţii parenterale în formă de unitate de dozare pentru uşurinţa administrării şi uniformitatea dozării. Forma unitară de dozare, aşa cum este utilizată în acest document, se referă la unităţi fizice discrete potrivite ca doze unitare pentru pacienţii/subiecţii care urmează să fie trataţi; fiecare unitate conţinând o cantitate predeterminată de compus activ calculată pentru a produce efectul terapeutic dorit în asociere cu transportorul farmaceutic necesar. Specificaţiile pentru formele unitare de dozare din invenţie sunt dictate în general de, şi dependente în mod direct de (a) caracteristicile unice ale agentului chimioterapeutic şi efectul terapeutic sau profilactic particular care trebuie atins, şi (b) limitările inerente în domeniul de specialitate al compunerii unui astfel de compus activ pentru tratamentul sensibilităţii la indivizi.
Prin urmare, specialistul în domeniu va aprecia, pe baza descrierii furnizate în acest document, că doza şi regimul de dozare sunt ajustate în conformitate cu metode binecunoscute în domeniile de specialitate terapeutice. Adică, doza maximă tolerabilă poate fi stabilită cu uşurinţă, iar cantitatea eficientă care oferă un beneficiu terapeutic detectabil unui pacient poate fi determinată, de asemenea, la fel ca şi cerinţele temporale pentru administrarea fiecărui agent pentru a oferi pacientului un beneficiu terapeutic detectabil. În consecinţă, în timp ce anumite doze şi regimuri de administrare sunt exemplificate în acest document, aceste exemple nu limitează în nici un fel doza şi regimul de administrare care pot fi furnizate unui pacient în practicarea prezentei invenţii.
Trebuie remarcat faptul că valorile dozelor pot varia în funcţie de tipul şi severitatea afecţiunii care trebuie atenuată, şi se pot include doze unice sau multiple. Trebuie să fie înţeles în continuare că pentru orice subiect particular, regimurile de dozare specifice trebuie ajustate pe parcursul timpului în conformitate cu nevoia individuală şi raţionamentul profesional al persoanei care administrează sau supraveghează administrarea compoziţiilor, şi că intervalele de dozare stabilite în acest document sunt numai cu titlu de exemplu şi nu au scopul de a limita domeniul de aplicare sau utilizarea compoziţiei încorporate. Mai mult decât atât, regimul de dozare cu compoziţiile din această invenţie poate fi bazat pe o varietate de factori, inclusiv tipul de boală, vârsta, greutatea, sexul, starea medicală a pacientului, severitatea afecţiunii, calea de administrare, şi anticorpul particular utilizat. Prin urmare, regimul de dozare poate varia mult, dar poate fi determinat în mod curent folosind metode standard. Pentru exemplificare, dozele pot fi ajustate pe baza parametrilor farmacocinetici sau farmacodinamici, care pot include efecte clinice, cum ar fi efectele toxice, şi/sau valori de laborator. Prin ur¬mare, prezenta invenţie cuprinde escaladarea dozei intra-pacient aşa cum este determinată de un specialist în domeniu. Determinarea dozelor şi regimurilor corespunzătoare este binecunoscută în domeniul relevant şi va fi înţeles că este avută în vedere de către specialistul în domeniu, odată furnizate expunerile făcute cunoscute în acest document.
Se are în vedere că o doză adecvată dintr-o compoziţie de anticorp din invenţie va fi în intervalul 0,1-100 mg/kg, cum ar fi aproximativ 0,5-50 mg/kg, de ex., aproximativ 1-20 mg/kg. Compoziţia de anticorpi poate fi administrată, pentru exemplificare, într-o doză de cel puţin 0,25 mg/kg, de ex., cel puţin 0,5 mg/kg, cum ar fi cel puţin 1 mg/kg, de ex., cel puţin 1,5 mg/kg, cum ar fi cel puţin 2 mg/kg, de ex., cel puţin 3 mg/kg, cum ar fi cel puţin 4 mg/kg, de ex., cel puţin 5 mg/kg; şi de ex., până la cel mult 50 mg/kg, cum ar fi până la cel mult 30 mg/kg, de ex., până la cel mult 20 mg/kg, cum ar fi până la cel mult 15 mg/kg. Administrarea va fi repetată, în mod normal, la intervale adecvate, de ex., o dată la fiecare săptămână, o dată la fiecare două săptămâni, o dată la fiecare trei săptămâni, sau o dată la fiecare patru săptămâni, şi atât timp cât este considerat necesar de către medicul responsabil, care poate creşte sau micşora opţional dozarea după cum este necesar.
O cantitate eficientă pentru terapia tumorală poate fi măsurată prin capacitatea sa de a stabiliza progresia bolii şi/sau de a ameliora simptomele la un pacient, şi preferabil de a inversa progresia bolii, de ex., prin reducerea dimensiunii tumorii. Capacitatea unui anticorp, unei porţiuni de legare la antigen, unei molecule de legare bi-specifice, sau unei compoziţii din invenţie de a inhiba cancerul poate fi evaluată prin analize in vitro, de ex., aşa cum este descris în exemple, precum şi în modele animale adecvate care sunt predictive pentru eficacitate în tumorile umane. Regimurile de dozare adecvate vor fi selectate pentru a oferi un răspuns terapeutic optim în fiecare situaţie particulară, pentru exemplificare, administrate ca un singur bolus sau ca o perfuzie continuă, şi cu posibila ajustare a dozei aşa cum este indicat de exigenţele fiecărui caz.
Compoziţii şi utilizări pentru diagnosticare
Anticorpii şi porţiunile de legare la antigen din prezenta invenţie sunt utile, de asemenea, în procesele de diagnosticare (de ex., in vitro, ex vivo). Pentru exemplificare, anticorpii şi porţiunile se pot utiliza pentru a detecta şi/sau măsura nivelul de TIM-3 într-o probă de la un pacient (de ex., o probă de ţesut, sau o probă de fluid corporal, cum ar fi un exudat inflamator, sânge, ser, lichid intestinal, salivă, sau urină). Metodele adecvate de detectare şi măsurare includ metode imunologice cum ar fi citometria în flux, analizele imunosorbente legate de enzime (ELISA), analizele de chimioluminiscenţă, radioimunoanaliza, şi imunohistologia. Invenţia cuprinde suplimentar kituri (de ex., kituri de diagnostic) care cuprind anticorpii şi porţiunile de legare la antigen descrise în acest document.
Cu excepţia cazului în care sunt definiţi în alt fel în acest document, termenii ştiinţifici şi tehnici utilizaţi în legătură cu prezenta invenţie vor avea semnificaţiile care sunt înţelese în mod obişnuit de cei care au pregătire obişnuită în domeniul de specialitate. Metode şi materiale cu titlu de exemplu sunt descrise mai jos, cu toate că metode şi materiale similare sau echivalente cu cele descrise în acest document pot fi utilizate, de asemenea, în practica sau testarea prezentei invenţii. În caz de conflict, prezenta descriere, inclusiv definiţiile, va avea prioritate.
În general, nomenclatura utilizată în legătură cu, şi tehnicile de cultură celulară şi tisulară, biologie moleculară, imunologie, microbiologie, genetică, chimie analitică, chimie organică sintetică, chimie medicinală şi farmaceutică, şi chimia şi hibridizarea proteinelor şi acizilor nucleici descrise în acest document sunt cele bine cunoscute şi utilizate în mod obişnuit în domeniul de specialitate. Reacţiile enzimatice şi tehnicile de purificare sunt efectuate în conformitate cu specificaţiile producătorului, aşa cum se realizează în mod obişnuit în domeniul de specialitate sau aşa cum este descris în acest document.
Mai mult decât atât, cu excepţia cazului în care este cerut în alt fel de context, termenii la singular vor include pluralităţi, iar termenii la plural vor include singularul. De la un capăt la altul al acestei descrieri şi în variantele de realizare, cuvintele "au" şi "cuprind" sau variaţii precum "are", "având", "cuprinde", sau "cuprinzând" vor fi înţelese ca implicând includerea unui număr întreg sau grup de numere întregi declarat, dar nu excluderea oricărui alt număr întreg sau grup de numere întregi.
Cu toate că în acest document este citat un număr de documente, această citare nu constituie o admitere a faptului că oricare dintre aceste documente face parte din cunoştinţele generale comune în domeniul de specialitate.
Pentru ca această invenţie să fie mai bine înţeleasă, sunt prezentate următoarele exemple.
EXEMPLE
Exemplul 1: Clonarea anticorpilor anti-TIM-3 din celulele B de şobolan
Acest exemplu descrie metoda utilizată pentru generarea anticorpilor anti-TIM-3 uman din invenţie. Sunt furnizate, de asemenea, secvenţele de ADN şi de aminoacizi ale anticorpilor.
Materiale şi metode
Anticorpii anti-TIM-3 din invenţie au fost izolaţi dintr-un repertoriu de anticorpi derivati de la şobolani OmniRat® (Osborn şi colab., J Immunol., 190(4): 1481-90 (2013)), o tulpină de şobolan de la OMT (Open Monoclonal Technology, Inc.) care produce anticorpi cu idiotipuri complet umane. Clonarea genelor de anticorpi derivate de la şobolan din celulele B secretoare de anticorpi (ASC) sortate unicelular a fost realizată prin intermediul tehnologiei de descoperire a anticorpilor Symplex™ (Meijer şi colab., J Mol Biol, 358(3): 764-72 (2006)).
O bibliotecă de anticorpi Symplex™ a fost preparată din celule B sortate unicelular din şobolani OmniRat® imunizaţi, biblioteca conţinând perechi de codificare VH şi VL înrudite pentru fiecare celulă B sortată. Constructele de repertoriu de anticorpi care codifică imunoglobuline complet umane în format IgG1 sau IgG2 au fost transfectate în celule Expi293, şi supernatanţii celulari au fost evaluaţi pentru proprietăţile de legare într-un format de mare randament. Potrivirile de succes ale screening-ului au fost analizate prin secvenţiere de ADN şi au fost extrase secvenţele de ADN care codifică anticorpi. Clonele de anticorpi selectate au fost exprimate şi testate din punct de vedere funcţional aşa cum este descris mai jos. Tabelul 1 arată secvenţele de acid nucleic din domeniul variabil al lanţului greu şi uşor ale clonei de anticorp 15086.15086. Tabelul 2 arată secvenţele de aminoacizi ale lanţului greu şi uşor pentru respectiva clonă de anticorp, iar Tabelul 4 arată secvenţele de aminoacizi ale CDR ale lanţului greu şi uşor. Tabelul 3 arată secvenţele de aminoacizi ale regiunii constante a lanţului greu IgG1 şi regiunii constante a lanţului uşor kappa.
Datorită utilizării primerilor degeneraţi în clonarea Symplex™ a fragmentelor de ADNc care codifică anticorpi, un număr de mutaţii cu sens greşit (missense) în capetele amino terminale ale lanţurilor grele şi uşoare a fost corectat pentru anumiţi anticorpi (de ex., anticorpii 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144). Tabelul 5 arată secvenţele domeniului variabil al lanţului greu şi uşor la nivel de ADN din anticorpul optimizat desemnat 15086.16837, 15086.17145, sau 15086.17144 (aceste trei variante diferă în subtipul de izotip, dar au secvenţe de domeniu variabil al lanţului greu şi uşor identice). Procesul de optimizare include potrivirea corecţiei amino terminale cu linia germinală, precum şi optimizarea utilizării codonilor. Ţintele pentru potrivirea cu secvenţele liniei germinale umane au fost IGHV4-31 pentru domeniile variabile ale lanţului greu şi IGKV3-11 pentru domeniile variabile ale lanţului uşor.
Au fost identificaţi anticorpi suplimentari care definesc diferite bin-uri de epitopi. Secvenţele de domeniu variabil al lanţului greu şi uşor ale acestor anticorpi sunt arătate în Tabelul 9 şi Tabelul 10. Au fost identificaţi anticorpi funcţionali suplimentari, iar secvenţele domeniului variabil al lanţului greu şi uşor ale acestora sunt arătate în Tabelul 12 şi Tabelul 13.
Rezultate
Tabelul 1 prezintă secvenţele ADN care codifică anticorpul 15086.15086 clonat cu Symplex™.
Tabelul 1: Secvenţele ADN ale domeniilor variabile ale anticorpului 15086.15086 clonat cu Symplex™
Secvenţă (5' la 3') Secvenţă ADN VH (SECV ID NR: 1) Secvenţă ADN VL (SECV ID NR: 2)
Tabelul 2 prezintă secvenţele de proteine deduse ale anticorpului 15086.15086 clonat cu Symplex™ original. CDR-urile sunt arătate cu caractere aldine şi italice.
Tabelul 2: Secvenţele de proteine ale domeniilor variabile ale anticorpului 15086.15086 clonat cu Symplex™
Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) Secvenţa de proteină VH (SECV ID NR: 3) Secvenţa de proteină VL (SECV ID NR: 4)
Tabelul 3 prezintă regiunile constante ale lanţului greu şi uşor.
Tabelul 3: Secvenţele de proteine ale regiunilor constante
Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1 (SECV ID NR: 5) Regiunea constantă Kappa a lanţului uşor (SECV ID NR: 6)
Tabelul 4 prezintă regiunile de determinare a complementarităţii (CDR-uri) ale lanţului greu şi uşor partajate de anticorpii 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144. Secvenţele CDR au fost determinate în acest document în conformitate cu definiţiile IMGT® pentru CDR1 şi CDR2. Pentru CDR3 de lanţ greu şi uşor, definiţiile din acest document includ un reziduu de aminoacid suplimentar în amonte de IMGT-CDR3 (Cys) şi un reziduu de aminoacid suplimentar în aval (Trp pentru CDR3 din VH, Phe pentru CDR3 din VL).
Tabelul 4: Secvenţele de proteine ale CDR-urilor anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144
Regiune Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) HCDR1 (SECV ID NR: 7) GGSISSGGYY HCDR2 (SECV ID NR: 8) ISYSGSI HCDR3 (SECV ID NR: 9) CASLDSWGSNRDYW LCDR1 (SECV ID NR: 10) QSVSSY LCDR2 (SECV ID NR: 11) DAS LCDR3 (SECV ID NR: 12) CQQRSNWPLTF
Tabelul 5 prezintă secvenţe ADN optimizate care codifică domeniile variabile ale lanţului greu şi uşor partajate de anticorpii 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144.
Tabelul 5: Secvenţele ADN optimizate care codifică domenii variabile ale anticorpilor 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144
Secvenţă (5' la 3') Secvenţă ADN VH (SECV ID NR: 13) Secvenţă ADN VL (SECV ID NR: 14)
Tabelul 6 prezintă secvenţele de proteine din domeniul variabil al lanţului greu şi uşor deduse partajate de anticorpii 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144. CDR-urile sunt arătate cu caractere aldine şi italice. Trebuie reţinut faptul că secvenţa de proteină VL este aceeaşi ca secvenţa de proteină VL neoptimizată.
Tabelul 6: Secvenţele de proteine ale domeniilor variabile ale anticorpilor optimizaţi 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144
Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) Secvenţa de proteină VH (SECV ID NR: 15) Secvenţa de proteină VL (SECV ID NR: 4)
Tabelul 7 prezintă secvenţele ADN care codifică regiunile constante de anticorpi în diferite formate de izotip.
Tabelul 7: Secvenţele ADN care codifică regiuni constante de anticorpi în diferite formate de izotip
Descriere Secvenţă (5' la 3') Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1-LALO (SECV ID NR: 16) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1-LALO excluzând intronii Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1-LALO (SECV ID NR: 17) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1-LALO incluzând intronii Regiunea constantă a lanţului greu de IgG4 (S228P) (SECV ID NR: 18) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG4 (S228P) excluzând intronii Regiunea constantă a lanţului greu de IgG4 (S228P) (SECV ID NR: 19) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG4 (S228P) incluzând intronii Regiunea constantă a lanţului greu de IgG2 (SECV ID NR: 20) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG2 excluzând intronii Regiunea constantă a lanţului greu de IgG2 (SECV ID NR: 21) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG2 incluzând intronii Regiunea constantă Kappa a lanţului uşor (SECV ID NR: 22)
Tabelul 8 prezintă secvenţele de proteine ale regiunilor constante de anticorpi în diferite formate de izotip.
Tabelul 8: Secvenţe de proteine ale regiunilor constante de anticorpi în diferite formate de izotip
Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG1-LALO (SECV ID NR: 23) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG4 (S228P) (SECV ID NR: 24) Regiunea constantă a lanţului greu de IgG2 (SECV ID NR: 25)
Tabelul 9 prezintă secvenţele ADN care codifică domeniile variabile ale lanţului greu şi uşor ale anticorpilor anti-TIM-3 utilizaţi pentru binning-ul epitopilor.
Tabelul 9: Secvenţele ADN ale domeniilor variabile ale anticorpilor de binning anti-TIM-3
Ab SECV ID NR: Secvenţă (5' la 3') 20131 VH 26 20131 VL 27 20293 VH 36 20293 VL 37 15105 VH 46 15105 VL 47 15107 VH 56 15107 VL 57 15109 VH 66 15109 VL 67 15174 VH 76 15174 VL 77 15175 VH 86 15175 VL 87 15260 VH 96 15260 VL 97 15284 VH 106 15284 VL 107 15299 VH 116 15299 VL 117 15353 VH 126 15353 VL 127 15354 VH 136 15354 VL 137 17244 VH 146 17244 VL 147 17245 VH 156 17245 VL 157
Tabelul 10 prezintă secvenţele de proteine din domeniul variabil al lanţului greu şi uşor deduse ale anticorpilor anti-TIM-3 utilizaţi pentru binning-ul epitopilor. CDR-urile sunt arătate cu caractere aldine şi italice.
Tabelul 10: Secvenţe de proteine ale domeniilor variabile ale anticorpilor de binning anti-TIM-3
Ab SECV ID NR: Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) 20131 VH 28 20131 VL 29 20293 VH 38 20293 VL 39 15105 VH 48 15105 VL 49 15107 VH 58 15107 VL 59 15109 VH 68 15109 VL 69 15174 VH 78 15174 VL 79 15175 VH 88 15175 VL 89 15260 VH 98 15260 VL 99 15284 VH 108 15284 VL 109 15299 VH 118 15299 VL 119 15353 VH 128 15353 VL 129 15354 VH 138 15354 VL 139 17244 VH 148 17244 VL 149 17245 VH 158 17245 VL 159
Tabelul 11 prezintă CDR-urile anticorpilor de binning anti-TIM-3. SECV ID NR. pentru CDR-uri sunt arătate sub fiecare secvenţă. Secvenţele CDR au fost determinate în acest document în conformitate cu definiţiile IMGT® pentru CDR1 şi CDR2. Pentru CDR3 de lanţ greu şi uşor, definiţiile din acest document includ un reziduu de aminoacid suplimentar în amonte de IMGT-CDR3 (Cys) şi un reziduu de aminoacid suplimentar în aval (Trp pentru CDR3 din VH, Phe pentru CDR3 din VL).
Tabelul 12 prezintă secvenţele ADN care codifică domeniile variabile ale lanţului greu şi uşor ale anticorpilor anti-TIM-3 suplimentari identificaţi ca anticorpi funcţionali. Secvenţele pentru anticorpii funcţionali 20131 şi 20293 sunt prezentate în Tabelul 9 de mai sus.
Tabelul 12: Secvenţele ADN ale domeniilor variabile ale anticorpilor anti-TIM-3 funcţionali suplimentari
Ab SECV ID NR: Secvenţă (5' la 3') 19324 VH 166 19324 VL 167 19416 VH 176 19416 VL 177 19568 VH 186 19568 VL 187 20185 VH 196 20185 VL 197 20300 VH 206 20300 VL 207 20362 VH 216 20362 VL 217 20621 VH 226 20621 VL 227
Tabelul 13 prezintă secvenţele de proteine deduse ale domeniilor variabile ale lanţului greu şi uşor ale anticorpilor anti-TIM-3 suplimentari identificaţi ca anticorpi funcţionali. CDR-urile sunt arătate cu caractere aldine şi italice. Secvenţele pentru anticorpii funcţionali 20131 şi 20293 sunt prezentate în Tabelul 10 de mai sus.
Tabelul 13: Secvenţele de proteine ale domeniilor variabile ale anticorpilor anti-TIM-3 funcţionali suplimentari
Ab SECV ID NR: Secvenţă (capătul N-terminal la capătul C-terminal) 19324 VH 168 19324 VL 169 19416 VH 178 19416 VL 179 19568 VH 188 19568 VL 189 20185 VH 198 20185 VL 199 20300 VH 208 20300 VL 209 20362 VH 218 20362 VL 219 20621 VH 228 20621_VL 229
Tabelul 14 prezintă CDR-urile anticorpilor anti-TIM-3 funcţionali suplimentari. SECV ID NR. pentru CDR-uri sunt arătate sub fiecare secvenţă. Secvenţele CDR au fost determinate în acest document în conformitate cu definiţiile IMGT® pentru CDR1 şi CDR2. Pentru CDR3 de lanţ greu şi uşor, definiţiile din acest document includ un reziduu de aminoacid suplimentar în amonte de IMGT-CDR3 (Cys) şi un reziduu de aminoacid suplimentar în aval (Trp pentru CDR3 din VH, Phe pentru CDR3 din VL). Secvenţele pentru anticorpii funcţionali 20131 şi 20293 sunt prezentate în Tabelul 11 de mai sus.
Exemplul 2: Analiza de legare cinetică a anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 şi 15086.17144
Acest exemplu demonstrează că afinitatea de legare a anticorpilor 15086.15086 (IgG1), 15086.16837 (IgG1 LALA), 15086.17145 (IgG2), şi 15086.17144 (IgG4 (S228P)) a arătat afinităţi de legare foarte similare cu valori KD în jur de 19-23 nM. "IgG1 LALA" se referă la prezenţa mutaţiilor "LALA" în lanţul greu (L234A/L235A, numerotate în con¬formitate cu schema de numerotare EU (Edelman şi colab., Proc. Natl. Acad. USA, 63: 78-85 (1969)), care sunt cunoscute pentru faptul că reduc funcţia efectoră a regiunii Fc a anticorpilor IgG1 (Armor şi colab., Eur J Immunol., 29 (8):2613-24 (1999); Hezareh şi colab., J Virol., 75 (24): 12161-68 (2001); şi Hessel şi colab., Nature, 449 (7158): 101-104 (2007)).
Materiale şi metode
Analiza de legare cinetică a fost efectuată prin rezonanţa plasmonului de su¬prafaţă (SPR), folosind un microspotter cu flux continuu (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, SUA) combinat cu un instrument Ibis MX96 SPR (IBIS Technologies, Olanda). Analiza prin imagistică a rezonanţei plasmonului de suprafaţă a fost efectuată pe senzori SPR G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, Olanda). Anticorpii anti-TIM-3 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 au fost diluaţi la 0,15 µg/ml în PBS-T (1x PBS cu 0,05% Tween 20, pH 7,4). Anticorpii au fost depuşi pe un G-a-hu-IgG Fc SensEye® timp de 15 minute folosind un microspotter cu flux continuu. După depunere, SensEye® a fost poziţionat în biosenzorul IBIS MX96, iar analiza cinetică a fost efectuată prin aplicarea aşa-numitei serii de titrare cinetică (Karlsson şi colab., Anal Biochem., 349 (1): 136-47 (2006)), în care antigenul ECD al TIM-3 uman monomeric (Acro Biosystems) a fost injectat în concentraţii crescătoare de la 2 nM la 100 nM fără aplicarea etapelor de regenerare a suprafeţei după fiecare injecţie de antigen. Asocierea antigenului a fost efectuată timp de 5 minute şi disocierea antigenului a fost efectuată timp de 45 de minute. Răspunsurile de legare înregistrate au fost adaptate la un model de legare Langmuir 1:1 simplu cu software-ul Scrubber 2 pentru calcularea constantelor on-rate (kon sau ka), off-rate (koff sau kd) şi de afinitate (KD).
Rezultate
Măsurătorile cinetice efectuate pe sistemul IBIS au arătat că anticorpii 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144, în patru formate diferite de izotip, au avut, toţi, cinetici de legare foarte similare cu valori KD în intervalul 19-23 nM (Tabelul 15).
Tabelul 15: Cineticile de legare ale anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.1714 la ECD al TIM-3 uman aşa cum sunt măsurate prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă (SPR)
Format/ Subclasă kon (M-1 s-1) Eroare kon koff (s-1) Eroare koff KD (nM) Eroare KD 15086. 15086 5,06E+05 ± 6.E+02 1,17E-02 ± 8.E-06 23 ± 3,0E-11 15086. 16837 5,83E+05 ± 4.E+02 1,11E-02 ± 4.E-06 19 ± 1,0E-11 15086. 17145 5,56E+05 ± 4.E+02 1,03E-02 ± 4.E-06 19 ± 1,0E-11 15086. 17144 4,96E+05 ± 3.E+02 9,85E-03 ± 4.E-06 20 ± 2,0E-11
Exemplul 3: Evaluarea funcţională in vitro a anticorpului anti-TIM-3
Un panou de mAb unici din subclasa IgG1 a fost clonat aşa cum s-a descris mai sus (Exemplul 1) şi evaluat pentru activitate funcţională la o singură concentraţie (25 ug/ml) în analiza de reacţie limfocitară mixtă unidirecţională (MLR). Anticorpul anti-TIM-3 cel mai funcţional (15086.15086) a fost reformatat în subclasele IgG1 LALA (15086.16837), IgG2 (15086.17145) şi IgG4 (15086.17144).
Acest exemplu demonstrează activitatea funcţională in vitro a diferitelor sub¬clase IgG ale anticorpului anti-TIM-3 prin inducerea secreţiei de citokine dependentă de doză într-o analiză MLR unidirecţională.
Materiale şi metode
În analiza MLR unidirecţională, celulele dendritice (DC) şi celulele T CD4-pozitive (CD4+) izolate de la doi donatori sănătoşi diferiţi sunt co-cultivate pentru a induce o reacţie specifică aloantigenului, rezultând producţia de citokine şi activarea/proliferarea celulelor T. Celulele dendritice au fost diferenţiate de monocitele CD14+ prin 6 zile de cultură cu 20 ng/ml de factor de stimulare a coloniilor de granulocite-macrofage (GM-CSF) şi 20 ng/ml de interleukină-4 (IL-4) şi amestecate într-un raport de 1:10 cu celule T CD4+ izolate din celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC-uri) din material donator sănătos. După 5 zile de cultură, supernatanţii au fost recoltaţi, şi nivelurile de IFN-γ şi TNF-α au fost determinate utilizând analiza de citokină de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso. Această analiză foloseşte etichete electrochimioluminiscente (SULFO-TAG) care sunt conjugate cu anticorpi de detecţie. Atunci când electrozilor de placă se aplică curent, este emisă lumină de eticheta SULFO-TAG, iar intensitatea luminii este măsurată pentru a cuantifica citokinele din probe.
Rezultate
Curbele doză-răspuns în analiza MLR unidirecţională a anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 sunt prezentate în Figurile 1 şi 2. Curbele doză-răspuns au fost generate printr-o titrare de două ori a anticorpilor cu o concentraţie de pornire de 50 ug/ml. Fiecare punct din grafic reprezintă media a trei replicate, barele de eroare reprezentând SEM.
Anticorpii 15086.15086 şi 15086.17145 (variante IgG1 şi IgG2) au prezentat o funcţionalitate similară şi au indus o creştere dependentă de doză atât a IFN-γ cât şi a TNF-α în analiza MLR unidirecţională. Anticorpul 15086.17144 (variantă IgG4) a indus un răspuns numai la cele două concentraţii cele mai mari, în timp ce nu a fost observată nicio funcţionalitate a anticorpului 15086.16837 (variantă IgG1 LALA).
Exemplul 4: Efectul anticorpului anti-TIM-3 asupra subseturilor de celule purificate
Despre TIM-3 s-a raportat mai întâi că este exprimat selectiv de celulele T helper CD4+ producătoare de IFN-γ şi celulele citotoxice T CD8+ (CD8-pozitive), şi s-a demonstrat că este un regulator negativ al răspunsului celulelor T. Ulterior, s-a des¬coperit că TIM-3 este foarte exprimat în mod endogen pe celulele dendritice, monocite şi celulele natural killer (NK) (Freeman şi colab., Immunol Rev, 235: 172-89 (2010); Kuchroo şi colab., Nat Rev Immunol, 8: 577-580 (2008); Anderson şi colab., Science, 318: 1141-1143 (2007); şi Da Silva şi colab., Cancer Immunol Res, 2: 410-422 (2014)). Acest exemplu arată modul în care ligarea TIM-3 de către anticorpi anti-TIM-3 are un efect direct asupra celulelor dendritice, conducând la o creştere a secreţiei de TNF-α.
Materiale şi metode
PBMC, celule T CD4+ naive şi celule CD8+ naive au fost izolate din material donator sănătos. Au fost generate celule dendritice de la trei donatori individuali sănătoşi, aşa cum s-a descris anterior în Exemplul 3. Subseturile de celule izolate au fost incubate timp de 5 zile cu 10 ug/ml din anticorpii indicaţi, şi nivelurile de TNF-α au fost determinate utilizând analiza de citokină de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso.
Rezultate
Efectul direct asupra subseturilor de celule purificate al anticorpilor 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, şi 15086.17144 este afişat în Figura 3, unde fiecare bară reprezintă media a cinci replicate şi barele de eroare reprezintă SEM. Rezultatele demonstrează că prezenţa variantei IgG1 (15086.15086) sau IgG2 (15086.17145) a anticorpului anti-TIM-3 a avut ca rezultat o creştere a secreţiei de TNF-α din celulele dendritice de la toţi cei trei donatori. Un efect similar a fost observat în populaţia PBMC care conţine mai multe subseturi de celule care exprimă TIM-3 (de ex., monocite şi celule NK). Variantele IgG1 LALA (15086.16837) şi IgG4 (15086.17144) au avut doar un efect minim asupra secreţiei de TNF-α. Niciunul dintre anticorpii testaţi nu a avut efect asupra celulelor T CD4+ naive sau a celulelor T CD8+ naive.
Exemplul 5: Analiza citometrică în flux a anticorpilor anti-TIM-3 pentru activitatea de blocare a fosfatidilserinei
Acest exemplu ilustrează modul în care un anticorp anti-TIM-3 din invenţie [15086.17145] a fost testat pentru activitatea de blocare a fosfatidilserinei (PtdS) prin efectuarea unei analize de competiţie citometrică în flux utilizând celule apoptotice pozitive la fosfatidilserină de suprafaţă şi TIM-3 solubil marcat cu fluorocrom.
Materiale şi metode
Activitatea de blocare a fosfatidilserinei a fost investigată într-o analiză pe bază de celule, în care celule T Jurkat sunt induse să sufere apoptoză prin tratament cu Staurosporină (din Streptomyces sp., Sigma-Aldrich, SUA). În timpul apoptozei, PtdS este translocată de pe faţa citoplasmatică a membranei plasmatice la suprafaţa celulei şi permite ca legarea proteinei chimerice TIM-3-Fc umane marcate cu R-PE să fie analizată prin citometrie în flux. Proteina chimerică TIM-3-Fc recombinantă disponibilă în comerţ (R&D Systems, SUA) a fost conjugată la R-PE utilizând kitul de conjugare cu R-Ficoeritrină Lightning-Link® (Innova Biosciences, Marea Britanie). Pentru fiecare concentraţie de anticorp care urmează să fie testată, 25 µl de diluţie de TIM-3-PE (corespunzând la aproximativ 0,33 µg de TIM-3-Fc) au fost amestecaţi cu 25 µl de anticorp (începând la 20 µg/ml final) în tampon de legare Anexină V (BD Pharmingen™, SUA) şi se incubează la temperatura camerei (RT) timp de 20 de minute înainte de adăugarea la celule. Celulele T Jurkat au fost cultivate în prezenţa a 1 µM de Staurosporină timp de 2 ore, spălate o dată în tampon de legare la RT, şi pentru fiecare test, 2x105 celule în 50 µl de tampon de legare au fost combinate cu amestecul anticorp/TIM-3-PE. După 15 minute de incubare la RT, s-au adăugat 100 µl de tampon de legare, celulele au fost centrifugate cu reducerea vitezei de rotire, şi peleţii au fost re-suspendaţi în 100 µl de tampon de legare pentru achiziţie. Legarea TIM-3-PE la celulele apoptotice a fost cuantificată prin citometrie în flux care detectează fluorescenţa PE (MFI). În paralel, expunerea la suprafaţă a PtdS pe celulele tratate cu Staurosporină a fost confirmată prin colorare cu Anexină V-PE (PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I, BD Pharmingen™). Anticorpul anti-PD-1 Keytruda® (pembrolizumab; Merck & Co., Inc.) a fost utilizat drept control negativ pentru legarea TIM-3/blocarea PtdS, şi un anticorp de referinţă anti-TIM-3 ABTIM3 [18571.18571] (WO 2015/117002 A1; Novartis AG) a fost utilizat ca un control pozitiv pentru legarea TIM-3/blocarea PtdS. În plus, un anticorp anti-TIM-3 diferit [15338.15338], care a fost identificat anterior ca un anticorp neblocant, a fost utilizat, de asemenea, drept control negativ pentru blocarea PtdS.
Rezultate
Rezultatele experimentului de competiţie sunt prezentate în Figura 4. Anticorpul anti-TIM-3 [15086.17145] este capabil să inhibe interacţiunea TIM-3-Fc solubil cu PtdS afişată în celule într-o manieră dependentă de doză (Figura 4A). La 3,125 µg/ml, el blochează legarea TIM-3-Fc la celulele PtdS-pozitive până la 2% din legarea detectată în prezenţa unui anticorp anti-TIM-3 neblocant [15338.15338] (Figura 4B). Anticorpul anti-TIM-3 de referinţă [18571.18571] a fost capabil să blocheze legarea până la 3,2% la aceeaşi concentraţie (Figura 4C). Rezultatele pentru anticorpul anti-PD-1 de control negativ Keytruda® sunt prezentate în Figura 4D.
Exemplul 6: Clonarea analogilor de anticorpi de referinţă anti-TIM-3
Analogi de referinţă ai anticorpilor anti-TIM-3 ABTIM3 şi mAb15 sunt utilizaţi în mai multe dintre exemplele din acest document. Analogii de referinţă au fost generaţi aşa cum este descris mai jos.
Secvenţele de aminoacizi ale domeniului variabil al lanţului greu şi uşor ale ABTIM3 şi mAb15 au fost obţinute din cererile de brevet de invenţie prezentate în Tabelul 16 de mai jos. Secvenţele de aminoacizi ale fragmentelor de lanţ greu variabil (VH) şi lanţ uşor variabil (VL) au fost translatate invers în secvenţe ADN cu utilizarea codonului uman. Fragmentele de ADN corespunzătoare au fost apoi sintetizate şi clonate în vectori de exprimare care conţin regiuni constante ale lanţului greu uman constant (oricare dintre cele patru formate de izotip diferite: IgG1, IgG1-LALA, IgG2, sau IgG4) sau regiuni constante ale lanţului uşor kappa uman, rezultând secvenţele de lanţ greu şi uşor ale anticorpului de lungime întreagă. Pentru a preveni schimbul de braţ Fab în varianta IgG4, reziduul de serină de la poziţia 228 (numerotare EU) a fost substituit cu prolină (Angal şi colab., Mol. Immunol., 30: 105-108 (1993)). Celule CHO au fost transfectate cu plasmidele de exprimare rezultate folosind un sistem standard de exprimare a proteinelor. După exprimarea anticorpilor, supernatanţii de anticorpi corespunzători au fost purificaţi utilizând cromatografia pe coloană de purificare a proteinei A standard.
Tabelul 16: Analogi de anticorpi sintetizaţi de gene şi formatul de anticorp corespunzător
Anticorp Numele analogului Documentul de brevet de referinţă Numerele de secvenţă în documentul de brevet de referinţă Diferite formate de izotip uman produse ABTIM3 18564 ABTIM3 WO 2015 117002 (A1) SECV ID NR: 1 (VH) şi 2 (VL) IgG1, IgG1-LALA, IgG2, şi IgG4 18571,18571 ABTIM3 umanizat WO 2015 117002 (A1) SECV ID NR: 131 (VH) şi 132 (VL) IgG1, IgG1-LALA, IgG2, şi IgG4 mAb15 21563 mAb15 WO 2016 111947 (A2) SECV ID NR: 12 (VH) şi 14 (VL) IgG1, IgG1-LALA, IgG2, şi IgG4
Exemplul 7: Evaluarea funcţională in vitro a anticorpilor anti-TIM-3 suplimentari într-o analiză MLR unidirecţională
Acest exemplu demonstrează activitatea funcţională in vitro a nouă anticorpi anti-TIM-3 suplimentari prin inducerea secreţiei de IFN-γ dependente de doză într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă (MLR) unidirecţională.
Materiale şi metode
Analiza MLR unidirecţională a fost configurată aşa cum este descris mai sus în Exemplul 3. Pe scurt, celulele dendritice (DC) şi celulele T CD4+ au fost co-cultivate timp de 5 zile în prezenţa anticorpilor indicaţi. După 5 zile de cultură, supernatanţii au fost recoltaţi şi nivelurile de IFN-γ au fost determinate utilizând analiza IFN-γ de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso.
Rezultate
Curbele doză-răspuns pentru cei nouă anticorpi anti-TIM-3 suplimentari sunt arătate în Figura 5. Toţi cei nouă anticorpi au indus o creştere dependentă de doză a nivelurilor de IFN-γ în această analiză. De notat, nu a fost observat niciun efect al anticorpilor de referinţă ABTIM3 şi mAb15. Curbele doză-răspuns au fost generate printr-o titrare de două ori a anticorpilor cu o concentraţie de pornire de 100 µg/ml. Fiecare punct din grafic reprezintă media a trei replicate, iar barele de eroare reprezintă SEM.
Exemplul 8: Evaluarea funcţională in vitro a anticorpilor anti-TIM-3 suplimentari într-o analiză MLR bidirecţională
Acest exemplu demonstrează activitatea funcţională in vitro a zece anticorpi anti-TIM-3 suplimentari prin inducerea secreţiei de IFN-γ dependente de doză într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă (MLR) bidirecţională.
Materiale şi metode
În analiza MLR bidirecţională, celule mononucleare din sângele periferic (PBMC) de la doi donori sănătoşi diferiţi au fost co-cultivate pentru a induce o reacţie specifică aloantigenului, care a a avut ca rezultat producerea de citokine şi activarea/proliferarea celulelor T. PBMC-urile de la cei doi donori diferiţi au fost amestecate într-un raport de 1:1. După 5 zile de cultură, supernatanţii au fost recoltaţi şi nivelurile de IFN-γ au fost determinate utilizând analiza de citokină de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso.
Rezultate
Curbele doză-răspuns pentru cei zece anticorpi anti-TIM-3 sunt arătate în Figura 6 pentru o pereche de donori. Toţi anticorpii anti-TIM-3 au indus o creştere dependentă de doză a nivelurilor de IFN-γ în această analiză. De notat, nu a fost observat niciun efect al anticorpilor de referinţă ABTIM3 şi mAb15. Curbele doză-răspuns au fost generate printr-o titrare de două ori a anticorpilor cu o concentraţie de pornire de 100 µg/ml. Fiecare punct din grafic reprezintă media a trei replicate, iar barele de eroare reprezintă SEM.
Exemplul 9: Evaluarea funcţională in vitro a anticorpilor anti-TIM-3 suplimentari într-o analiză a celulelor dendritice
Acest exemplu demonstrează activitatea funcţională in vitro a nouă anticorpi anti-TIM-3 prin inducerea secreţiei de TNF-α dependente de doză din celule dendritice derivate de monocite.
Materiale şi metode
Monocite CD14+ au fost izolate din celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC-uri) din material donator sănătos. Celulele dendritice (DC) au fost diferenţiate de monocitele CD14+ prin 6 zile de cultură cu 20 ng/ml de factor de stimulare a coloniilor de granulocite-macrofage (GM-CSF) şi 20 ng/ml de interleukină-4 (IL-4). Celulele dendritice derivate din monocite au fost recoltate şi cultivate timp de 5 zile în prezenţa anticorpilor indicaţi. După 5 zile de cultură, supernatanţii au fost recoltaţi şi nivelurile de TNF-α au fost determinate utilizând analiza TNF-α de electrochimioluminiscenţă pe Scala Meso.
Rezultate
Curbele doză-răspuns pentru cei nouă anticorpi anti-TIM-3 suplimentari sunt arătate în Figura 7. Toţi cei nouă anticorpi anti-TIM-3 au indus o creştere dependentă de doză a nivelurilor de TNF-α din celulele dendritice derivate din monocite în doi donori independenţi. De notat, nu a fost observat niciun efect al anticorpilor de referinţă ABTIM3 şi mAb15. Curbele doză-răspuns au fost generate printr-o titrare de două ori a anticorpilor cu o concentraţie de pornire de 100 µg/ml. Fiecare punct din grafic reprezintă media a trei replicate, iar barele de eroare reprezintă SEM.
Exemplul 10: Măsurarea afinităţilor anticorpilor pentru TIM-3 uman şi de cynomolgus
Acest exemplu demonstrează afinităţile de legare ale fragmentelor Fab de anti-TIM-3 pentru domeniile extracelulare TIM-3 umane şi de cynomolgus, măsurate prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă (SPR).
Materiale şi metode
Analiza de legare cinetică a fost efectuată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă (SPR), folosind un microspotter cu flux continuu (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, SUA) combinat cu un instrument SPR IBIS MX96 (IBIS Technologies, Olanda).
Fragmentele Fab anti-TIM-3 au fost generate din variantele de secvenţă corectate ale anticorpilor selectaţi în format IgG1 LALA utilizând kituri de scindare enzimatică standard (Genovis, Suedia). Fragmentele Fab sunt etichetate ca Fab [număr de anticorpi]. Secvenţa de aminoacizi a domeniului variabil al lanţului greu utilizată pentru Fab 15086 este secvenţa corectată arătată în SECV ID NR: 7. ADNc-ul de TIM-3 care codifică domeniul extracelular al TIM-3 uman şi de cynomolgus a fost sintetizat şi clonat într-un vector care conţine un promotor CMV şi o secvenţă IgG1 Fc umană (AA P101-K330), rezultând fuziunea C-terminală a IgG1 Fc la ECD clonat al TIM-3. Constructele de fuziune TIM-3 Fc au fost generate prin PCR standard şi tehnici de proiectare prin inginerie şi proteina a fost exprimată tranzitoriu în 2 ml de cultură folosind un sistem de exprimare ExpiCHO™. Constructele de fuziune TIM-3 Fc umane au fost recoltate după 9 zile şi supernatanţii au fost testaţi pentru afinitatea de legare la fragmentele Fab anti-TIM-3 prin SPR. Antigenii au fost purificaţi folosind proceduri standard şi capturaţi pe un G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, Olanda) timp de 15 minute folosind un micro¬spotter cu flux continuu (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, SUA). După depunere, SensEye® a fost poziţionat în biosenzorul IBIS MX96, situsurile de captură rămase au fost blocate, şi proteinele capturate au fost fixate la suprafaţă folosind kitul FixIT (Ssens BV, Olanda). Analiza cinetică a fost efectuată prin aplicarea aşa-numitei serii de titrare cinetică (Karlsson R., 2006), în care fragmentele Fab monomerice ale anticorpilor din invenţie au fost injectate în concentraţii crescătoare de la 1 nM la 100 nM fără aplicarea etapelor de regenerare a suprafeţei după fiecare injecţie de Fab. Asocierea Fab a fost efectuată timp de 15 minute şi disocierea antigenului a fost efectuată timp de 15 de minute. Răspunsurile de legare înregistrate au fost adaptate la un model de legare Langmuir 1:1 simplu cu software-ul Scrubber 2 pentru calcularea constantelor on-rate (kon sau ka), off-rate (koff sau kd) şi de afinitate (KD).
Rezultate
Rezultatele măsurătorii de afinitate demonstrează că Fab 15086, Fab 20293 şi Fab 20131 şi cei doi anticorpi de referinţă leagă TIM-3 uman şi de cynomolgus cu afinităţi diferite. Cineticile de legare detaliate sunt prezentate în Tabelul 17 de mai jos.
Tabelul 17: Cineticile de legare ale fragmentelor Fab anti-TIM-3 la ECD al TIM-3 uman sau de cynomolgus, aşa cum sunt măsurate prin SPR.
Fragment Fab TIM-3 ECD kon (M-1 s-1) koff (s-1) KD (nM) 15086 uman 2,3E+05 5,0E-03 22 15086 de cynomolgus 1,3E+04 2,8E-02 2200 20293 uman 2,9E+05 3,6E-03 13 20293 de cynomolgus 1,7E+06 3,5E-03 21 20131 uman 7,6E+04 4,1E-04 5,5 20131 de cynomolgus 4,8E+06 3,9E-04 22 18564 ABTIM3 uman 2,7E+05 2,1E-04 0,77 18564 ABTIM3 de cynomolgus 1,5E+05 3,9E-03 25 21563 mAb15 uman 7,9E+05 6,3E-04 0,80 21563 mAb15 de cynomolgus ND ND ND *ND: Nu a fost determinat
Exemplul 11: Determinarea ELISA a legării anticorpului la ECD al TIM-3 uman şi de cynomolgus
Acest exemplu demonstrează avidităţile de legare ale anticorpilor anti-TIM-3 pentru ECD al TIM-3 uman şi de cynomolgus, aşa cum sunt măsurate prin ELISA.
Materiale şi metode
Legarea anticorp-antigen a fost măsurată prin ELISA cu antigeni de fuziune TIM-3 Fc acoperiţi la 1 µg/ml. Antigenii umani şi de cynomolgus au fost obţinuţi de la Sino Biologicals. Anticorpii anti-TIM-3 au fost incubaţi cu antigenii acoperiţi la diferite concentraţii începând de la 150 µg/ml (1000 nM) în titrări în serie de două ori. După spălare, anticorpii legaţi au fost detectaţi prin anticorpi secundari conjugaţi cu HRP (peroxidază de hrean).
Rezultate
ELISA a demonstrat că toţi anticorpii evaluaţi sunt capabili să se lege atât de ECD al TIM-3 uman, cât şi de cynomolgus. Este raportată concentraţia anticorpilor anti-TIM-3 care produce jumătate din legarea maximă (EC50). Toţi anticorpii testaţi au legat TIM-3 uman cu valori EC50 în jur de 1 nM sau mai mici, în timp ce s-a observat variaţie mult mai mare în legarea la TIM-3 de cynomolgus (Tabelul 18). Unii anticorpi, cum ar fi 20131, 20185, 20293 şi ABTIM3, au arătat legare identică atât la TIM-3 uman, cât şi de cynomolgus. Alţi anticorpi, cum ar fi 19324, 19416, 19568, şi 20300, au arătat legare intermediară la TIM-3 de cynomolgus, în timp ce anticorpii 20362, 20621 şi 15086.17145 au arătat reactivitate încrucişată slabă la TIM-3 de cynomolgus (reducere a EC50 mai mare de 100 de ori). Curbele de legare pentru anticorpii care au prezentat cea mai scăzută reactivitate încrucişată la TIM-3 de cynomolgus au arătat în mod clar legarea saturată la antigen atunci când au fost testaţi la cea mai mare concentraţie în evaluarea ELISA.
Tabelul 18: Avidităţile de legare (EC50) ale anticorpilor anti-TIM-3 la TIM-3 uman sau de cynomolgus aşa cum sunt măsurate prin ELISA
Anticorp EC50 (nM) Raport EC50 cynomolgus/uman TIM-3 uman TIM-3 de cynomolgus 19324 0,73 18,38 25 19416 0,20 9,42 47 19568 0,38 30,20 79 20131 0,13 0,13 1 20185 0,17 0,15 1 20293 0,31 0,32 1 20300 1,13 45,30 40 20362 0,26 124,80 481 20621 0,22 29,70 135 15086,17145 0,125 17,50 134 18564 ABTIM3 0,07 0,07 1
Exemplul 12: Binning-ul de epitopi al anticorpilor anti-TIM-3
Acest exemplu ilustrează modul în care anticorpii anti-TIM-3 din invenţie pot fi grupaţi în bin-uri de epitopi pe baza şabloanelor de competiţie împerecheate. Anticorpii care aparţin diferitelor bin-uri de epitopi recunosc diferiţi epitopi în domeniul extracelular (ECD) al TIM-3.
Materiale şi metode
Investigarea competiţiei de anticorpi împerecheate a fost efectuată prin analiza de rezonanţă a plasmonului de suprafaţă (SPR) folosind un microspotter cu flux continuu (CFM) (Wasatch Microfluidics, SUA) combinat cu un instrument SPR IBIS MX96 (IBIS Technologies, Olanda). Analiza de imagistică prin rezonanţă a plasmonului de suprafaţă a fost efectuată pe un senzor SPR G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, Olanda). Un total de şaisprezece anticorpi anti-TIM-3 IgG2 umani şi doi anticorpi de referinţă IgG4 (ABTIM3 şi mAb15) au fost diluaţi la 15 µg/ml în tampon PBS care con¬ţine 0,05% Tween 20 (PBS-T), pH 7,0. Anticorpii au fost capturaţi pe suprafaţa senzorului anti-Fc prin depunere timp de 15 minute folosind un microspotter cu flux continuu. După depunere, SensEye® a fost poziţionat în biosenzorul IBIS MX96 şi situsurile anti-Fc reziduale au fost blocate prin injectarea a 30 µg/ml de IgG1 umană non-specifică. Anticorpii capturaţi au fost conjugaţi la suprafaţă folosind un kit Fixlt (Ssens BV, Olanda). După prepararea senzorului, analiza competiţiei anticorpilor a fost efectuată folosind o analiză sandwich clasică în care anticorpii imobilizaţi s-au legat de 200 nM de antigen TIM-3 monovalent solubil (Acro Biosystems, China), urmată de sondarea pentru legarea cu un alt anticorp anti-TIM-3. Apoi, au fost efectuate injecţii individuale ale fiecăruia dintre cei optsprezece anticorpi anti-TIM-3 diluaţi la 15 µg/ml în tampon PBS-T pentru a stabili şabloane de competiţie de anticorpi. După fiecare ciclu de competiţie, suprafaţa senzorului a fost regenerată cu 100 mM de tampon H3PO4, pH 3,0.
Rezultate
Şablonul de competiţie al optsprezece anticorpi anti-TIM-3 este prezentat în Figura 8. Anticorpii mAb15 (bin 1), 15105 şi 15107 (bin 2), 15260 şi ABTIM3 (bin 3), 17244 (bin 7), şi 15174 şi 15175 (bin 8) nu au prezentat activitate funcţională în analizele MLR pe bază de celule descrise în acest document, dar au fost incluşi deoarece ei au recunoscut epitopi distincţi. Anticorpii din bin-ul 8 au fost testaţi doar în soluţie, deoarece legarea TIM-3 a fost redusă în mod semnificativ atunci când aceşti anticorpi au fost capturaţi pe suprafaţa senzorului (blocare unidirecţională). Prin urmare, aceşti anticorpi sunt reprezentaţi prin pătrate. S-a descoperit că anticorpii anti-TIM-3 funcţionali se leagă la trei bin-uri de epitopi (bin-urile 4, 5 şi 6) care concurează încrucişat. Anticorpii funcţionali care aparţin bin-ului de epitopi 4 au inclus anticorpii 20621, 20293, 19568, 20362, 15086.17145, şi 19416. Aceşti anticorpi s-au încrucişat unul pe altul şi anticorpii din bin-urile de epitopi 3, 5, 6 şi 7. Anticorpii funcţionali care aparţin bin-ului de epitopi 5 au inclus anticorpii 20131 şi 20185. Aceşti anticorpi s-au încrucişat unul pe altul şi anticorpii din bin-urile de epitopi 3, 4, 6 şi 7. În plus, 20131 şi 20185 au împiedicat, de asemenea, legarea mAb15 atunci când au fost capturaţi doar pe suprafaţa senzorului (blocare unidirecţională, linii întrerupte). În cele din urmă, anticorpii funcţionali care aparţin bin-ului de epitopi 6 au inclus anticorpii 19324 şi 20300. Aceşti anticorpi s-au încrucişat unul pe altul şi toţi ceilalţi anticorpi, cu excepţia anticorpilor din bin-ul 2.
Din rezultatele prezentate mai sus se poate deduce că anticorpii funcţionali din bin-urile de epitopi 4, 5 şi 6 sunt epitopi de legare care sunt distincţi de anticorpii de referinţă ABTIM3 (bin 3) şi mAb15 (bin 1) (Figura 1), deoarece fiecare grup de binning are şabloane de competiţie unice în comparaţie cu ceilalţi anticorpi anti-TIM-3 din panou.
Exemplul 13: Maparea epitopilor anticorpilor anti-TIM-3 prin mutageneza TIM-3
Epitopii de anticorpi pot fi caracterizaţi în general ca epitopi liniari (numiţi, de asemenea, epitopi continui) sau epitopi conformaţionali (numiţi, de asemenea, epitopi discontinui). În timp ce epitopii liniari sunt definiţi pe baza unei singure secvenţe de aminoacizi continue, epitopii conformaţionali pot consta din multe secvenţe liniare discontinue mai mici sau reziduuri de contact unic. O colecţie de reziduuri de contact care se grupează la interfaţa proteinei intermoleculare dintre anticorp şi antigen este denumită, de asemenea, un punct fierbinte (Moreira şi colab., Proteins, 68 (4): 803-12 (2007)). Acum este recunoscut pe scară largă faptul că majoritatea epitopilor de celule B sunt discontinui în natură (Sivalingam şi Shepherd, Mol Immunol., 51 (3-4): 304-9 (2012)), Kringelum şi colab., Mol Immunol., 53 (1-2): 24-34 (2013)) cu epitopul mediu care se întinde pe 15-22 de reziduuri de aminoacizi dintre care 2-5 aminoacizi contribuie la cea mai mare parte a legării (Sivalingam şi Shepherd, supra).
Prin clasificarea afinităţii de legare la 129 de mutanţi TIM-3 diferiţi, acest exemplu ilustrează modul în care epitopii de legare ai Fab 15086, Fab 20293, şi Fab 20131 pot fi împărţiţi în epitopi liniari şi puncte fierbinţi care sunt distincte de epitopii recunoscuţi de anticorpii de referinţă ABTIM3 şi mAb15.
Materiale şi metode
Receptorul TIM-3 uman constă dintr-un domeniu extracelular (ECD) de 181 de aminoacizi (reziduurile 22-202) urmat de un domeniu transmembranar (reziduurile 203-223) şi un domeniu citoplasmic (reziduurile 224-301). TIM-3 aparţine super familiei de imunoglobuline şi ECD este compus din două domenii - un domeniu de mucină şi un domeniu IgV. Domeniul IgV conţine un sandwich de două niveluri β, format din interacţiunile a 7 catene β antiparalele dispuse în două foi β cu catenele β GFCC' pe o parte şi catenele β BED pe partea opusă. Cele două foi β sunt stabilizate printr-o legătură de disulfură între reziduurile C54 - C123. O structură cristalină este disponibilă pentru IgV TIM-3 uman (PDB 5F71). Domeniul IgV TIM-3 nu are o catenă A ca alte domenii IgV, dar posedă două legături de disulfură suplimentare (C58-C63 şi C52-C110) care poziţionează buclele CC' şi FG în imediata apropiere, formând o despicatură unică pentru legarea ligandului fosfatidilserină (PS). Există o structură cristalină a TIM-3 murin în complex cu ligandul PS (3KAA), demonstrând contacte de legare a ligandului la buclele CC' şi FG.
Au fost identificaţi mai mulţi liganzi şi/sau co-receptori pentru TIM-3, inclusiv HMGB-1, galectina-9, CEACAM-1, şi fosfatidilserina (Chiba şi colab., Nat. Immunology, 13 (9): 832-42 (2012), Li şi colab., Hepatology, 56 (4):1342-51 (2012), DeKruyff şi colab., J Immunology, 184 (4): 1918-30 (2010), Das şi colab., Immunol Rev., 276 (1): 97-111 (2017)).
Secvenţele de proteine de TIM-3 uman şi ortologi au fost descărcate de la UniProt; uman (Q8TDQ0; SECV ID NR: 236), maimuţă cynomolgus (Macaca fascicularis, G7P6Q7; SECV ID NR: 237), şoarece (Mus musculus, Q8VIM0; SECV ID NR: 238) şi şobolan (Rattus norvegicus, P0C0K5; SECV ID NR: 239). Aceste secvenţe sunt arătate în Tabelul 23. Identitatea de secvenţă dintre diferitele secvenţe extracelulare de aminoacizi TIM-3 este arătată în Tabelul 19 de mai jos.
Tabelul 19: Diferenţele de aminoacizi dintre, şi identitatea de secvenţă faţă de domeniul extracelular TIM-3 uman.
Diferenţe de aminoacizi % Identitate de secvenţă ECD al TIM-3 de cynomolgus 22 85,3 ECD al TIM-3 de şobolan 54 64,0 ECD al TIM-3 de şoarece 59 60,7
Din structurile cristaline şi secvenţele de aminoacizi au fost identificate reziduurile de aminoacizi expuse la suprafaţă şi 82 de substituţii individuale de alanină au fost proiectate în ECD al TIM-3 uman (scanare de alanină).
Pentru a mapa epitopii liniari în contextul structurii TIM-3 nativ uman, au fost generate 47 de proteine chimerice în care 10 aminoacizi din secvenţa ECD al TIM-3 uman au fost schimbaţi secvenţial la secvenţa de şoarece în segmente care s-au suprapus prin 5 aminoacizi, şi s-au suplimentat cu versiuni de şobolan şi cynomolgus în bucle critice. Schimburile de secvenţe au fost efectuate în domeniul extracelular al TIM-3 uman din care fac parte aminoacizii 22-199.
ADNc care codifică domeniul extracelular al TIM-3 uman a fost sintetizat şi clonat într-un vector care conţine promotorul CMV şi secvenţa IgG1 Fc umană (AA P101 -K330), rezultând fuziunea C-terminală a IgG1 Fc la ECD al TIM-3 clonat. Constructele de fuziune de TIM-3 Fc umane mutate au fost generate prin PCR standard şi tehnici de proiectare prin inginerie şi proteina a fost exprimată tranzitoriu în 2 ml de cultură folosind un sistem de exprimare ExpiCHO™. Constructele de fuziune TIM-3 Fc umane au fost recoltate, purificate şi testate pentru afinitatea de legare la fragmentele Fab anti-TIM-3 prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă (SPR). Proteinele de fuziune TIM-3 au fost imobilizate pe un pe un G-a-hu-IgG Fc SensEye® (Ssens BV, Olanda) timp de 15 minute folosind un microspotter cu flux continuu (CFM, Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, SUA). După depunere, SensEye® a fost poziţionat în biosenzorul IBIS MX96 şi proteinele capturate au fost fixate la suprafaţă folosind kitul FixIT (Ssens BV, Olanda). Analiza cinetică a fost efectuată prin aplicarea aşa-numitei serii de titrare cinetică (Karlsson R., 2006), în care fragmentele Fab monomerice ale anticorpilor din invenţie au fost injectate în concentraţii crescătoare de la 1 nM la 100 nM fără aplicarea etapelor de regenerare a suprafeţei după fiecare injecţie de Fab. Asocierea Fab a fost efectuată timp de 15 minute şi disocierea antigenului a fost efectuată timp de 15 de minute. Răspunsurile de legare înregistrate au fost adaptate la un model de legare Langmuir 1:1 simplu cu software-ul Scrubber 2 pentru calcularea constantelor on-rate (kon sau ka), off-rate (koff sau kd) şi de afinitate (KD).
Rezultate
Afinităţile de legare ale Fab-urilor anti-TIM-3 15086, 20293, 20131 şi a analogilor de referinţă ABTIM3 şi mAb15 au fost evaluate în raport cu legarea modificată la constructele mutante TIM-3.
Afinităţile de legare ale fragmentelor Fab pentru constructele TIM-3 care au suferit mutaţie au fost exprimate ca raport între KD de mutant/KD de tip sălbatic (afinitate de legare normalizată). Tabelele 20 şi 21 arată proteinele chimerice şi mutanţii de alanină care au dat rezultate de diferenţiere. O reducere a afinităţii de cel puţin 5 ori a fost folosită ca un criteriu de prag pentru detectarea afinităţii de legare reduse la constructele TIM-3 mutante. În unele cazuri nu a putut fi detectată nicio legare la Fab-urile specifice. Aceste constructe au fost enumerate ca NB (nu se leagă).
Analiza a arătat că epitopii de legare ai Fab-urilor anti-TIM-3 15086, 20293 şi 20131 au fost în mod clar distincţi în comparaţie cu anticorpii de referinţă ABTIM3 şi mAb15. 15086 şi 20293 nu s-au legat la proteina chimerică cu secvenţa de şoarece inserată la poziţiile 62-67, aproape de buclele de legare de ligand CC' şi FG, în timp ce ABTIM3 de referinţă s-a legat (Tabelul 20). Epitopul lui 15086 de pe TIM-3 s-a extins dincolo de această întindere de aminoacizi care include P50, V60, F61, E62, G64, R69 şi reziduurile de buclă FG I117, M118, D120 aşa cum se evidenţiază prin scanare de alanină (Tabelul 21). Fab 20293 a avut un epitop foarte asemănător cu 15086, cu excepţia faptului că reziduurile M118 şi D120 au afectat numai legarea la 15086 atunci când au suferit mutaţie la alanină. S-a descoperit că Fab 20131 se leagă la un epitop diferit prezent în bucla FG la reziduurile 114-117, iar acest lucru a fost extins prin scanare de alanină pentru a include reziduurile 118, 120 şi, de asemenea, reziduurile CC' F61 şi E62. Comună pentru 15086, 20293, şi 20131 a fost sensibilitatea pentru o mutaţie de alanină la poziţia F61, la care niciunul dintre cei doi anticorpi de referinţă nu a prezentat sensibilitate. Cu toate că anticorpul de referinţă mAb15 nu s-a legat de secvenţa mutantă la poziţiile 62-67, analog cu 15086 şi 20293, epitopul mAb15 a fost în mod clar distinct deoarece acest anticorp nu s-a legat de două constructe suplimentare în care secvenţa din poziţiile 74-85 a fost schimbată la şoarece. Anticorpul ABTIM3 a prezentat în mod clar un epitop diferit definit de constructele liniare care au suferit mutaţie la poziţiile 22-28, 107-144 şi 123-128, aşa cum este evidenţiat prin afinitatea de legare modificată la aceste proteine (Tabelul 20). Un rezumat al constatărilor de mapare a epitopilor este arătat în Tabelul 22 de mai jos şi un model molecular al modului în care epitopii se mapează pe suprafaţa domeniului TIM-3 IgV este prezentat în Figura 9.
În rezumat, am demonstrat la un nivel molecular, prin analizarea legării la un panou de 129 de mutanţi TIM-3, faptul că cele trei Fab-uri 15086, 20293, şi 20131 recunosc epitopi unici, dar parţial suprapuşi, în partea de sus a domeniului TIM-3 IgV. Această constatare este în concordanţă cu analiza de binning de epitopi (Exemplul 12) care arată că toţi cei trei anticorpi se leagă la epitopii care concurează încrucişat care se suprapun, care împreună constituie o suprafaţă funcţională pe domeniul TIM-3 IgV. Aceşti epitopi se suprapun în mod clar cu situsul de legare de fosfatidilserină, precum şi aminoacidul E62, care este esenţial pentru legarea HMGB-1 şi CEACAM1 (Chiba şi colab., Nat. Immunology, 13 (9): 832-42 (2012), Das şi colab., Immunol Rev., 276 (1): 97-111 (2017)), în timp ce cei doi anticorpi de referinţă au epitopi situaţi mai mult în partea de mijloc a domeniului IgV (mAb15) şi pe cealaltă parte a domeniului IgV (ABTIM3). Rezultatele sunt în concordanţă cu datele de binning de epitopi, care arată că mAb15 şi ABTIM3 se pot lega la TIM-3 simultan (Exemplul 12). Pe baza locaţiei de epitop a 15086, 20293, şi 20131, se antipează că fiecare anticorp este capabil să blocheze legarea liganzilor TIM3 (fosfatidilserina, CEACAM-1 şi HMGB-1.
Tabelul 22: Rezumatul epitopilor de legare identificaţi pentru anticorpii anti-TIM-3 testaţi
Anticorp Blocare a ligandului (PS) Bin de epitopi Epitop liniar Reziduurile de contact 15086 Da 4 62 - 67 P50, V60, F61, E62, G64, R69 1117, M118, D120 20293 Da 4 62 - 67 F61, R69 1117 20131 Da 5 114 - 117 P50, F61, E62, I117, M118, D120 18654 (ABTIM3) ND 3 22 - 28 107 - 114 123 - 128 R69, D120, E121 21563 (mAb15) ND 1 62 - 67 74 - 80, 78 - 85 83 - 89 P50, R69
Tabelul 23: Secvenţe de proteine TIM-3
Proteină Secvenţa de aminoacizi TIM-3 uman UniProt Q8TDQ0 (SECV ID NR: 236) TIM-3 de cynomolgus UniProt G7P6Q7 (SECV ID NR: 237) TIM-3 de şoarece UniProt Q8VIM0 SECV ID NR: 238 TIM-3 de şobolan UniProt P0C0K5 SECV ID NR: 239
Tabelul 24: Secvenţe de anticorpi anti-TIM-3
Ab ADN Proteină H-CDR1 H-CDR2 H-CDR3 L-CDR1 L-CDR2 L-CDR3 VH VL VH VL 15086,15086 1 2 3 4 7 8 9 10 11 12 15086,16837/ 15086,17145/ 15086,17144 13 14 15 20131 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 20293 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 15105 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 15107 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 15109 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 15174 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 15175 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 15260 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 15284 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 15299 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 15353 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 15354 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 17244 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 17245 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 19324 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 19416 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 19568 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 20185 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 20300 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 20362 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 20621 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235
Tabelul 25: Regiunea constantă şi secvenţele TIM-3
SECV ID NR. Secvenţă 5 Secvenţă de proteină de regiune constantă a lanţului greu IgG1 6 Secvenţă de proteină de regiune constantă a lanţului uşor Kappa IgG1 16 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG1-LALO excluzând intronii 17 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG1-LALO incluzând intronii 18 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG4 (S228P) excluzând intronii 19 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG4 (S228P) incluzând intronii 20 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG2 excluzând intronii 21 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului greu IgG2 incluzând intronii 22 Secvenţă de ADN de regiune constantă a lanţului uşor Kappa 23 Secvenţă de proteină de regiune constantă a lanţului greu IgG1-LALA 24 Secvenţă de proteină de regiune constantă a lanţului greu IgG4 (S228P) 25 Secvenţă de proteină de regiune constantă a lanţului greu IgG2 236 TIM-3 uman 237 TIM-3 de cynomolgus 238 TIM-3 de şoarece 239 TIM-3 de şobolan
LISTA DE SECVENŢE
<110> SYMPHOGEN A/S
<120> ANTICORPI ANTI-TIM-3 ŞI COMPOZIŢII
<130> SPG17972PCT
<140>
<141>
<150> 62/321,476
<151> 2016-04-12
<160> 240
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 360
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 1
<210> 2
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 2
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 3
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 4
<210> 5
<211> 330
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 5
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 6
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 7
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 8
<210> 9
<211> 14
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 9
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 10
<210> 11
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 11
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 12
<210> 13
<211> 360
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 13
<210> 14
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 14
<210> 15
<211> 120
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 15
<210> 16
<211> 990
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 16
<210> 17
<211> 1596
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 17
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1500
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1560
tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaa 1596
<210> 18
<211> 981
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 18
<210> 19
<211> 1588
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 19
<210> 20
<211> 978
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 20
<210> 21
<211> 1585
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 21
<210> 22
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 22
<210> 23
<211> 330
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 23
<210> 24
<211> 327
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 24
<210> 25
<211> 326
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 25
<210> 26
<211> 354
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 26
<210> 27
<211> 339
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 27
<210> 28
<211> 118
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 28
<210> 29
<211> 113
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 29
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 30
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 31
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 32
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 33
<210> 34
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 34
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 35
<210> 36
<211> 377
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 36
<210> 37
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 37
<210> 38
<211> 120
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 38
<210> 39
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 39
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 40
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 41
<210> 42
<211> 14
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 42
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 43
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 44
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 45
<210> 46
<211> 345
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 46
<210> 47
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 47
<210> 48
<211> 115
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 48
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 49
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 50
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 51
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 52
<210> 53
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 53
<210> 54
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 54
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 55
<210> 56
<211> 345
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 56
<210> 57
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 57
<210> 58
<211> 115
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 58
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 59
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 60
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 61
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 62
<210> 63
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 63
<210> 64
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 64
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 65
<210> 66
<211> 351
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 66
<210> 67
<211> 318
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 67
<210> 68
<211> 117
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 68
<210> 69
<211> 106
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 69
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 70
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 71
<210> 72
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 72
<210> 73
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 73
<210> 74
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 74
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 75
<210> 76
<211> 360
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 76
<210> 77
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 77
<210> 78
<211> 120
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 78
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 79
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 80
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 81
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 82
<210> 83
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 83
<210> 84
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 84
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 85
<210> 86
<211> 375
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 86
<210> 87
<211> 327
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 87
<210> 88
<211> 125
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 88
<210> 89
<211> 109
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 89
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 90
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 91
<210> 92
<211> 20
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 92
<210> 93
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 93
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 94
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 95
<210> 96
<211> 372
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 96
<210> 97
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 97
<210> 98
<211> 124
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 98
<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 99
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 100
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 101
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 102
<210> 103
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 103
<210> 104
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 104
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 105
<210> 106
<211> 369
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 106
<210> 107
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 107
<210> 108
<211> 123
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 108
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 109
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 110
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 111
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 112
<210> 113
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 113
<210> 114
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 114
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 115
<210> 116
<211> 351
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 116
<210> 117
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 117
<210> 118
<211> 117
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 118
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 119
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 120
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 121
<210> 122
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 122
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 123
<210> 124
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 124
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 125
<210> 126
<211> 366
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 126
<210> 127
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 127
<210> 128
<211> 122
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 128
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 129
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 130
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 131
<210> 132
<211> 16
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 132
<210> 133
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 133
<210> 134
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 134
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 135
<210> 136
<211> 372
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 136
<210> 137
<211> 324
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 137
<210> 138
<211> 124
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 138
<210> 139
<211> 108
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 139
<210> 140
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 140
<210> 141
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 141
<210> 142
<211> 19
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 142
<210> 143
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 143
<210> 144
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 144
<210> 145
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 145
<210> 146
<211> 357
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 146
<210> 147
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 147
<210> 148
<211> 119
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 148
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 149
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 150
<210> 151
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 151
<210> 152
<211> 14
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 152
<210> 153
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 153
<210> 154
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 154
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 155
<210> 156
<211> 351
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 156
<210> 157
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 157
<210> 158
<211> 117
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 158
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 159
<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 160
<210> 161
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 161
<210> 162
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 162
<210> 163
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 163
<210> 164
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 164
<210> 165
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 165
<210> 166
<211> 354
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 166
<210> 167
<211> 339
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 167
<210> 168
<211> 118
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 168
<210> 169
<211> 113
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 169
<210> 170
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 170
<210> 171
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 171
<210> 172
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 172
<210> 173
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 173
<210> 174
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 174
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 175
<210> 176
<211> 366
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 176
<210> 177
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 177
<210> 178
<211> 122
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 178
<210> 179
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 179
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 180
<210> 181
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 181
<210> 182
<211> 16
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 182
<210> 183
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 183
<210> 184
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 184
<210> 185
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 185
<210> 186
<211> 363
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 186
<210> 187
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 187
<210> 188
<211> 121
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 188
<210> 189
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 189
<210> 190
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 190
<210> 191
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 191
<210> 192
<211> 15
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 192
<210> 193
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 193
<210> 194
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 194
<210> 195
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 195
<210> 196
<211> 354
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 196
<210> 197
<211> 339
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 197
<210> 198
<211> 118
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 198
<210> 199
<211> 113
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 199
<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 200
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 201
<210> 202
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 202
<210> 203
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 203
<210> 204
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 204
<210> 205
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 205
<210> 206
<211> 354
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 206
<210> 207
<211> 339
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 207
<210> 208
<211> 118
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 208
<210> 209
<211> 113
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 209
<210> 210
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 210
<210> 211
<211> 8
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 211
<210> 212
<211> 13
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 212
<210> 213
<211> 12
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 213
<210> 214
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 214
<210> 215
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 215
<210> 216
<211> 369
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 216
<210> 217
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 217
<210> 218
<211> 123
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 218
<210> 219
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 219
<210> 220
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 220
<210> 221
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 221
<210> 222
<211> 17
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 222
<210> 223
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 223
<210> 224
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 224
<210> 225
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 225
<210> 226
<211> 369
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 226
<210> 227
<211> 321
<212> ADN
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polinucleotidă sintetică»
<400> 227
<210> 228
<211> 123
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 228
<210> 229
<211> 107
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Polipeptidă sintetică"
<400> 229
<210> 230
<211> 10
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 230
<210> 231
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 231
<210> 232
<211> 17
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 232
<210> 233
<211> 6
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 233
<210> 234
<211> 3
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 234
<210> 235
<211> 11
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 235
<210> 236
<211> 301
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 236
<210> 237
<211> 302
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 237
<210> 238
<211> 281
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 238
<210> 239
<211> 282
<212> PRT
<213> Rattus norvegicus
<400> 239
<210> 240
<211> 15
<212> PRT
<213> Secvenţă Artificială
<220>
<221> sursă
<223> /notă="Descrierea secvenţei artificiale: Peptidă sintetică"
<400> 240

Claims (15)

1. Anticorp anti-TIM-3 sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, caracterizat prin aceea că respectivul anticorp cuprinde secvenţele de aminoacizi H-CDR1-3 şi L-CDR1-3 din SECV ID NR: 7-12, respectiv, şi unde respectivul anticorp sau respectiva porţiune de legare la antigen creşte secreţia de IFN-γ şi TNF-α într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă unidirecţională.
2. Anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că respectivul anticorp cuprinde un HC şi un LC ale căror domenii variabile au secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi 4, respectiv.
3. Anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că respectivul HC şi respectivul LC cuprind suplimentar secvenţele de aminoacizi din:
i) SECV ID NR: 5 şi 6, respectiv; sau
ii) SECV ID NR: 25 şi 6, respectiv.
4. Anticorp anti-TIM-3 conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că respectivul anticorp cuprinde un HC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 15 şi 25 şi un LC care cuprinde secvenţele de aminoacizi din SECV ID NR: 4 şi 6.
5. Anticorp anti-TIM-3 conform revendicării 1 sau 2, caracterizat prin aceea că anticorpul cuprinde cel puţin o mutaţie în regiunea FC, unde mutaţia este opţional în una sau mai multe dintre poziţiile de aminoacizi ale lanţului greu 228, 233, 234 şi 235, care sunt numerotate în conformitate cu schema de numerotare IMGT, şi unde unul sau ambele dintre reziduurile de aminoacizi la poziţiile 234 şi 235 suferă, opţional, mutaţie la Ala, şi/sau unde reziduul de aminoacid de la poziţia 228 suferă, opţional, mutaţie la Pro.
6. Anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen conform oricăreia dintre revendicările 1-5, caracterizat prin aceea că anticorpul sau porţiunea are cel puţin una dintre următoarele proprietăţi:
a) se leagă la TIM-3 uman cu o KD de 23 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă;
b) se leagă la TIM-3 de cynomolgus cu o KD de 22 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă;
c) se leagă la TIM-3 uman cu o EC50 de 1,2 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin ELISA;
d) se leagă la TIM-3 de cynomolgus cu o EC50 de 46 nM sau mai mică, aşa cum este măsurată prin ELISA;
e) creşte secreţia de IFN-γ într-o analiză de reacţie limfocitară mixtă bidirecţională;
f) creşte secreţia de TNF-α din celulele dendritice; şi
g) inhibă interacţiunea TIM-3 cu fosfatidilserina.
7. Moleculă de acid nucleic izolată care cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia şi o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia din anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen conform oricăreia dintre revendicările 1-6.
8. Vector care cuprinde molecula de acid nucleic izolată conform revendicării 7, caracterizat prin aceea că respectivul vector cuprinde suplimentar o secvenţă de control al exprimării.
9. Celulă gazdă care cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul greu sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, şi o secvenţă de nucleotide care codifică lanţul uşor sau o porţiune de legare la antigen a acestuia, din anticorpul anti-TIM-3 sau porţiunea de legare la antigen conform oricăreia dintre revendicările 1-6.
10. Metodă pentru producerea unui anticorp anti-TIM-3 sau a unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, care cuprinde furnizarea unei celule gazdă conform revendicării 9, cultivarea respectivei celule gazdă în condiţii adecvate pentru exprimarea anticorpului sau porţiunii, şi izolarea anticorpului rezultat sau porţiunii rezultate.
11. Moleculă de legare bispecifică având o porţiune de legare la antigen a unui anticorp anti-TIM-3 conform oricăreia dintre revendicările 1-6 şi o porţiune de legare la antigen a altui anticorp distinct.
12. Anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen conform oricăreia dintre revendicările 1-6, sau o moleculă de legare bispecifică conform revendicării 11, pentru utilizare la creşterea imunităţii la un pacient care are nevoie de acest lucru.
13. Anticorp anti-TIM-3 sau porţiune de legare la antigen conform oricăreia dintre revendicările 1-6, sau o moleculă de legare bispecifică conform revendicării 11, pentru utilizare în tratarea cancerului la un pacient care are nevoie de acest lucru.
14. Anticorp, porţiune de legare la antigen, sau moleculă de legare bispecifică pentru utilizare conform revendicării 13, unde pacientul are un cancer care are originea în piele, plămân, intestin, ovar, creier, prostată, rinichi, ţesuturi moi, sistemul hematopoietic, cap şi gât, ficat, vezică urinară, sân, stomac, uter, sau pancreas.
15. Anticorp, porţiune de legare la antigen, sau moleculă de legare bispecifică pentru utilizare conform revendicării 13, unde pacientul are leucemie, limfom Hodgkin, limfom non-Hodgkin, o tumoră solidă, melanom, cancer pulmonar fără celule mici, cancer colorectal, sau carcinom cu celule renale.
MDE20190216T 2016-04-12 2017-04-11 Anticorpi anti-TIM-3 și compoziții MD3443009T2 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662321476P 2016-04-12 2016-04-12
PCT/EP2017/058696 WO2017178493A1 (en) 2016-04-12 2017-04-11 Anti-tim-3 antibodies and compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD3443009T2 true MD3443009T2 (ro) 2022-02-28

Family

ID=58547516

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20190216T MD3443009T2 (ro) 2016-04-12 2017-04-11 Anticorpi anti-TIM-3 și compoziții

Country Status (35)

Country Link
US (2) US11390674B2 (ro)
EP (2) EP3978531A1 (ro)
JP (2) JP7123804B2 (ro)
KR (1) KR102473028B1 (ro)
CN (2) CN116693685A (ro)
AU (1) AU2017251250B2 (ro)
CA (1) CA3020647A1 (ro)
CL (1) CL2018002878A1 (ro)
CO (1) CO2018010458A2 (ro)
CY (1) CY1125440T1 (ro)
DK (1) DK3443009T3 (ro)
EA (1) EA039020B1 (ro)
ES (1) ES2900381T3 (ro)
HR (1) HRP20211820T1 (ro)
HU (1) HUE056677T2 (ro)
IL (1) IL262176B2 (ro)
LT (1) LT3443009T (ro)
MA (1) MA44659B1 (ro)
MD (1) MD3443009T2 (ro)
MX (1) MX2018012076A (ro)
MY (1) MY199098A (ro)
NZ (1) NZ746755A (ro)
PE (1) PE20181805A1 (ro)
PH (1) PH12018502112B1 (ro)
PL (1) PL3443009T3 (ro)
PT (1) PT3443009T (ro)
RS (1) RS62736B1 (ro)
SA (1) SA518400222B1 (ro)
SG (2) SG11201808724SA (ro)
SI (1) SI3443009T1 (ro)
TN (1) TN2018000333A1 (ro)
TW (1) TWI752950B (ro)
UA (1) UA126854C2 (ro)
WO (1) WO2017178493A1 (ro)
ZA (1) ZA201806429B (ro)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3274370T (pt) 2015-03-23 2020-01-30 Bayer Pharma AG Anticorpos anti-ceacam6 e utilizações dos mesmos
MY200602A (en) 2016-07-14 2024-01-04 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
EA201992350A1 (ru) 2017-04-05 2020-03-23 Симфоген А/С Комбинированные лекарственные средства, нацеленные на pd-1, tim-3 и lag-3
EP3676616A1 (en) 2017-08-28 2020-07-08 Bristol-Myers Squibb Company Tim-3 antagonists for the treatment and diagnosis of cancers
KR20250078626A (ko) * 2018-01-12 2025-06-02 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tim3에 대한 항체 및 그의 용도
US12202894B2 (en) 2018-03-20 2025-01-21 WuXi Biologics Ireland Limited Anti-TIM-3 antibodies
PE20210665A1 (es) 2018-03-23 2021-03-31 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra mica y/o micb y sus usos
CN111989341B (zh) * 2018-04-12 2023-06-02 南京维立志博生物科技有限公司 结合tim-3的抗体及其用途
JP7328324B2 (ja) * 2018-04-24 2023-08-16 アンプソース・バイオファーマ・シャンハイ・インコーポレイテッド Ｔｉｍ－３に対する抗体およびその使用
US12134645B2 (en) * 2018-08-21 2024-11-05 Albert Einstein College Of Medicine Monoclonal antibodies against human tim-3
CN111253485A (zh) * 2018-11-30 2020-06-09 上海开拓者生物医药有限公司 抗人tim-3单克隆抗体及其应用
JP7521163B2 (ja) 2018-12-19 2024-07-24 ドイチェス クレープスフォルシュングスツェントルム シュティフトゥング デス エッフェントリッヒェン レヒツ 抗ｃｅａｃａｍ６及びｔｉｍ３抗体の医薬組み合わせ
KR20220016155A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역-종양학 (i-o) 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법
JP2022534967A (ja) 2019-05-30 2022-08-04 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 多腫瘍遺伝子シグネチャーおよびその使用
EP3977132A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
CN114423786A (zh) * 2019-09-16 2022-04-29 诺华股份有限公司 高亲和力的、配体阻断性、人源化的抗T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3（TIM-3）IgG4抗体用于治疗骨髓纤维化的用途
KR102536302B1 (ko) * 2020-02-25 2023-05-26 국립암센터 Tim-3 에 특이적으로 결합하는 단일클론항체 및 이의 용도
AR121441A1 (es) * 2020-02-28 2022-06-08 Symphogen As Anticuerpos anti-axl y composiciones
CN114057874B (zh) * 2020-07-31 2023-05-05 北京市神经外科研究所 抗cd44的单链抗体及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途
CN113214396B (zh) * 2020-07-31 2022-04-19 北京市神经外科研究所 抗tim3的单链抗体及其在制备治疗肿瘤的药物中的用途
AU2021334361A1 (en) 2020-08-31 2023-05-11 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
SMT202500208T1 (it) 2020-12-28 2025-07-22 Bristol Myers Squibb Co Composizioni anticorpali e metodi per il loro uso
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
CN117377692A (zh) 2021-04-23 2024-01-09 苏州逻晟生物医药有限公司 Tim-3-靶向抗体及其用途
CA3222040A1 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Les Laboratoires Servier Anti-nkg2a antibodies and compositions
US20240391997A1 (en) * 2021-07-16 2024-11-28 Brightpath Biotherapeutics Co., Ltd. Anti-tim-3 antigen antibody or antibody derivative, and use thereof
US20240368280A1 (en) 2021-09-02 2024-11-07 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Anti-cecam6 antibodies with reduced side-effects
JP7822466B2 (ja) 2021-09-03 2026-03-02 オンコワン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング 低減された凝集能及び低減された疎水性を有する、改善されたＦｃサイレンシングされた抗ｏｘＭＩＦ抗体
EP4493575A1 (en) 2022-03-18 2025-01-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
EP4531916A1 (en) 2022-06-02 2025-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
GB2644480A (en) 2023-04-24 2026-04-15 King Abdullah Univ Of Science Of Technology Compositions, systems and methods for multiplex detection of target biomarkers in a sample
CN121712571A (zh) 2023-08-15 2026-03-20 百时美施贵宝公司 陶瓷羟基磷灰石色谱流通法
WO2025145207A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg-depleting agent
CN118373913B (zh) * 2024-05-08 2024-11-01 上海百英生物科技股份有限公司 一种抗人Tim-3单克隆抗体及其制备方法
CN118165111B (zh) * 2024-05-15 2024-08-13 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对Tim-3的抗体

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
AU584417B2 (en) 1985-04-01 1989-05-25 Lonza Group Ag Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6517529B1 (en) 1999-11-24 2003-02-11 Radius International Limited Partnership Hemodialysis catheter
US20110059106A1 (en) 2008-01-29 2011-03-10 Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for modulating a population of myeloid-derived suppressor cells and uses thereof
WO2010084999A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protegene, Inc. Immunosuppressive agents and prophylactic and therapeutic agents for autoimmune diseases
ES2571235T3 (es) 2009-04-10 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para el tratamiento de un tumor sanguíneo que utiliza el anticuerpo anti-TIM-3
WO2011155607A1 (ja) * 2010-06-11 2011-12-15 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ－３抗体
JP2013532153A (ja) 2010-06-18 2013-08-15 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 慢性免疫病に対する免疫治療のためのｔｉｍ−３およびｐｄ−１に対する二重特異性抗体
US8841418B2 (en) 2011-07-01 2014-09-23 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to TIM3
SG10201706148WA (en) 2013-02-01 2017-08-30 Santa Maria Biotherapeutics Inc Administration of an anti-activin-a compound to a subject
US10570204B2 (en) 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
CN103936853B (zh) 2014-01-26 2016-08-17 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种检测tim-3试剂盒及其使用方法
EP3099717B1 (en) * 2014-01-31 2019-03-27 Novartis AG Antibody molecules to tim-3 and uses thereof
AU2015228372B2 (en) 2014-03-12 2018-05-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
JP2017515841A (ja) 2014-05-13 2017-06-15 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ 腫瘍抗原を発現するポックスウイルス及びｔｉｍ−３に対するモノクローナル抗体を用いた癌治療のための併用療法
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
CA2978892A1 (en) * 2015-03-06 2016-09-15 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind tim3
EP3878465A1 (en) 2015-07-29 2021-09-15 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
EP3337826A1 (en) 2015-08-20 2018-06-27 Sutro Biopharma, Inc. Anti-tim-3 antibodies, compositions comprising anti-tim-3 antibodies and methods of making and using anti-tim-3 antibodies
NZ739090A (en) 2015-10-02 2025-06-27 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
MY200602A (en) 2016-07-14 2024-01-04 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
JOP20190013A1 (ar) 2016-08-25 2019-01-31 Lilly Co Eli أجسام مضادة لـ (تي آي ام -3)
JOP20190133A1 (ar) 2016-12-08 2019-06-02 Innovent Biologics Suzhou Co Ltd أجسام مضادة لـ Tim-3 لمزجها بأجسام مضادة لـ PD-1
EA201992350A1 (ru) 2017-04-05 2020-03-23 Симфоген А/С Комбинированные лекарственные средства, нацеленные на pd-1, tim-3 и lag-3
JOP20190222A1 (ar) 2017-04-11 2019-09-24 Zymeworks Inc الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لـ pd-l1 والمضادة لـ tim-3

Also Published As

Publication number Publication date
IL262176A (en) 2018-11-29
JP7123804B2 (ja) 2022-08-23
MA44659B1 (fr) 2021-12-31
KR20180133482A (ko) 2018-12-14
WO2017178493A1 (en) 2017-10-19
CO2018010458A2 (es) 2018-10-10
IL262176B (en) 2022-11-01
EP3978531A1 (en) 2022-04-06
IL262176B2 (en) 2023-03-01
TN2018000333A1 (en) 2020-01-16
CL2018002878A1 (es) 2019-04-26
HUE056677T2 (hu) 2022-02-28
NZ746755A (en) 2025-11-28
PH12018502112A1 (en) 2019-09-23
PL3443009T3 (pl) 2022-01-31
CN109451741A (zh) 2019-03-08
US20230105714A1 (en) 2023-04-06
JP2022172142A (ja) 2022-11-15
US20190276531A1 (en) 2019-09-12
TW201736397A (zh) 2017-10-16
PT3443009T (pt) 2021-12-10
TWI752950B (zh) 2022-01-21
AU2017251250B2 (en) 2024-03-21
SA518400222B1 (ar) 2022-03-14
MA44659A (fr) 2021-04-14
CN109451741B (zh) 2023-07-28
SG11201808724SA (en) 2018-11-29
DK3443009T3 (da) 2021-12-13
RS62736B1 (sr) 2022-01-31
US12577302B2 (en) 2026-03-17
MX2018012076A (es) 2019-02-20
UA126854C2 (uk) 2023-02-15
BR112018070919A2 (pt) 2019-01-29
CA3020647A1 (en) 2017-10-19
EP3443009B1 (en) 2021-09-08
PH12018502112B1 (en) 2024-03-27
KR102473028B1 (ko) 2022-11-30
CY1125440T1 (el) 2023-03-24
SI3443009T1 (sl) 2022-04-29
HRP20211820T1 (hr) 2022-03-04
EA201892294A1 (ru) 2019-04-30
EA039020B1 (ru) 2021-11-23
EP3443009A1 (en) 2019-02-20
SG10201912937SA (en) 2020-02-27
US11390674B2 (en) 2022-07-19
JP2019519199A (ja) 2019-07-11
AU2017251250A1 (en) 2018-10-18
CN116693685A (zh) 2023-09-05
MY199098A (en) 2023-10-12
LT3443009T (lt) 2021-12-27
ZA201806429B (en) 2023-02-22
PE20181805A1 (es) 2018-11-19
ES2900381T3 (es) 2022-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12577302B2 (en) Anti-TIM-3 antibodies and compositions
JP7488323B2 (ja) 抗ｌａｇ－３抗体および組成物
JP7178999B2 (ja) 抗ｐｄ－１抗体および組成物
CN114181310B (zh) 抗tigit抗体、其药物组合物及用途
KR20220057558A (ko) 항-cd73 항체
EP3368572A1 (en) Anti-pd-1 antibodies and compositions
HK40073034A (en) Anti-tim-3 antibodies and compositions
HK40000742B (en) Anti-tim-3 antibodies and compositions
CA3000564C (en) Anti-pd-1 antibodies and compositions
BR112018070919B1 (pt) Anticorpo anti-tim-3, seu método de produção, seus usos, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada e vetor

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Change of proprietorship (patent for invention)

Owner name: LES LABORATOIRES SERVIER, FR50 RUE CARNOT, 92284 SURESNES CEDEX, FRANTA

Free format text: PREVIOUS PROPRIETOR: SYMPHOGEN A/S, DKPEDERSTRUPVEJ 93, 2750 BALLERUP, DANEMARCA