MD3672965T2 - Compusi ai pirimidinei ca inhibitori ai kinazei JAK - Google Patents

Compusi ai pirimidinei ca inhibitori ai kinazei JAK Download PDF

Info

Publication number
MD3672965T2
MD3672965T2 MDE20200681T MDE20200681T MD3672965T2 MD 3672965 T2 MD3672965 T2 MD 3672965T2 MD E20200681 T MDE20200681 T MD E20200681T MD E20200681 T MDE20200681 T MD E20200681T MD 3672965 T2 MD3672965 T2 MD 3672965T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
compound
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
crystalline form
formula
Prior art date
Application number
MDE20200681T
Other languages
English (en)
Inventor
Jennifer Kozak
Ryan Hudson
Gary E L Brandt
Robert Murray Mckinnell
Marta Dabros
Jerry Nzerem
Original Assignee
Theravance Biopharma R&D Ip Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Theravance Biopharma R&D Ip Llc filed Critical Theravance Biopharma R&D Ip Llc
Publication of MD3672965T2 publication Critical patent/MD3672965T2/ro

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/14—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing 9-azabicyclo [3.3.1] nonane ring systems, e.g. granatane, 2-aza-adamantane; Cyclic acetals thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/02—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/04—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof with hetero atoms directly attached in position 3 of the 8-azabicyclo [3.2.1] octane or in position 7 of the 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Dental Preparations (AREA)

Abstract

Invenţia furnizează un compus cu formula (I):sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, care este un inhibitor al kinazei JAK. Invenţia furnizează, de asemenea, compoziţii farmaceutice care cuprind un asemenea compus, o formă cristalină, metode de folosire a unui asemenea compus pentru a trata bolile inflamatorii ale pielii şi alte boli, şi procedee şi intermediari utili pentru prepararea unui asemenea compus.

Description

CONTEXTUL INVENŢIEI
Domeniul invenţiei
Invenţia este directionată către un compus al pirimidinei util ca inhibitor al kinazei JAK. Invenţia este îndreptată, de asemenea, către compoziţii farmaceutice care cuprind un asemenea compus, formele cristaline ale unor asemenea compuşi şi procedeele şi intermediarii utili pentru prepararea unui asemenea compus.
Stadiul tehnicii
Inhibarea familiei de enzime JAK poate inhiba semnalizarea multor citokine proinflamatorii cheie. Astfel, inhibitorii JAK sunt probabil utili în tratamentul dermatitei atopice şi al altor boli inflamatorii ale pielii, rinitei alergice, astmului, bolii pulmonare obstructive cronice (BPOC) şi altor boli inflamatorii pulmonare, colitei ulcerative şi altor boli inflamatorii gastrointestinale, precum şi boli oculare inflamatorii . WO2016/191524, US2016/052930 şi WO2015/094803 sunt documente de brevet direcţionate către compuşi pentru utilizare ca inhibitori ai kinazei JAK.
Dermatita atopică (DA) este o boală inflamatorie cronică obişnuită a pielii care afectează aproximativ 14 milioane de oameni numai în Statele Unite. Se estimează că AD afectează 10 până la 20% dintre copii şi 1 până la 3% dintre adulţi din ţările dezvoltate (Bao şi colab., JAK-STAT, 2013, 2, e24137), şi prevalenţa este în creştere. Creşterea citokinelor proinflamatorii care se bazează pe calea JAK-STAT, în special, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IFNγ şi TSLP a fost asociată cu AD (Bao şi colab. , Leung şi colab., The Journal of Clinical Investigation, 2004, 113, 651-657). În plus, reglarea în aval a IL-31, o altă citokină care semnalează printr-o împerechere JAK, s-a dovedit a avea un rol în pruritul asociat cu starea cronică a AD (Sonkoly şi colab., Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2006, 117, 411-417).
Datorită efectului modulator al căii JAK/STAT asupra sistemului imunitar, expunerea sistemică la inhibitorii JAK poate avea un efect imunosupresor sistemic advers. Prin urmare, ar fi de dorit să se furnizeze un nou inhibitor JAK care să-şi aibă efectul la locul de acţiune fără efecte sistemice semnificative. În special, pentru tratamentul bolilor inflamatorii ale pielii, cum ar fi dermatita atopică, ar fi de dorit să se furnizeze un nou inhibitor JAK care să poată fi administrat local şi să realizeze o expunere relevantă din punct de vedere terapeutic în piele, care este îndepărtată rapid pentru a minimiza expunerea sistemică.
SUMARUL INVENŢIEI
Scopul invenţiei este definit de revendicări.
Oricare din referinţele din descriere la metodele de tratament se referă la compuşi, compoziţii farmaceutice şi medicamente din prezenta invenţie pentru utilizare într-o metoda de tratament pentru om (sau corpul animal prin terapie (sau pentru diagnostic).
Intr-un aspect, invenţia furnizează un compus având activitate ca un inhibitor al kinazei JAK.
În conformitate, invenţia furnizează un compus cu formula (I):
sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
Invenţia furnizează, de asemenea, o formă cristalină a compusului (I).
Invenţia furnizează, de asemenea, o compoziţie farmaceutică care cuprinde compusului (I) şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
Invenţia furnizează, de asemenea, un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea bolilor inflamatorii şi autoimmune ale pielii, în particular a dermatitei atopice şi a alopeciei aerate, la un mamifer, metoda cuprinzând administrarea compusului (I), sau a unei săruri a acestuia acceptabile din punct de vedere farmaceutic , la un mamifer.
Invenţia furnizează, de asemenea, procedeele de sinteză şi intermediarii descrişi aici, care sunt utili pentru prepararea compusului (I).
SCURTĂ DESCRIERE A DESENELOR
Diferitele aspecte ale prezentei invenţii sunt ilustrate prin referinţă cu desenele însoţitoare.
Figura 1 prezintă un model de difracţie cu raze X pe pulbere (PXRD) al Formei I cristaline a compusului (I) (denumită în continuare Forma I).
Figura 2 prezintă o termogramă cu calorimetrie cu scanare diferenţială (DSC) a Formei I cristaline.
Figura 3 prezintă un grafic al analizei gravimetrice termice (TGA) a Formei I cristaline.
Figura 4 arată izoterma dinamică de sorbţie a umidităţii Formei I cristaline.
Figura 5 prezintă un model de difracţie cu raze X pe pulbere (PXRD) al Formei II cristaline a compusului (I) (denumită în continuare Forma II).
Figura 6 prezintă o termogramă cu calorimetrie cu scanare diferenţială (DSC) a Formei cristaline II.
Figura 7 prezintă un grafic al analizei gravimetrice termice (TGA) a Formei cristaline II.
Figura 8 prezintă izoterma dinamică de sorbţie a umidităţii a Formei cristaline II.
DESCRIEREA DETALIATĂ A INVENŢIEI
Printre alte aspecte, invenţia furnizează un inhibitor al kinazei JAK cu formula (I), săruri ale acestuia acceptabile farmaceutic şi intermediari pentru prepararea acestuia. \tabStructurile chimice sunt denumite aici conform convenţiilor IUPAC aşa cum sunt implementate în software-ul ChemDraw (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). De exemplu, compusul (I):
este desemnat ca (2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)-amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol.
Notaţia (1R,3s,5S) descrie orientarea exo a grupării pirimidinilamino faţă de gruparea 9-azabiciclo[3.3.1]nonan.
Mai mult, fragmentul pirazolil al compusului (I) ca şi alţi compuşi dezvăluiţi aici există în formă tautomeră. Se va înţelege că, deşi structurile specifice sunt prezentate, sau denumite, într-o formă particulară, invenţia include, de asemenea, tautomerul acesteia.
Compuşii din dezvăluire conţin unul sau mai mulţi centri chirali şi, prin urmare, asemenea compuşi (şi intermediari ai acestora) pot exista ca amestecuri racemice; stereoizomeri puri (adică, enantiomeri sau diastereomeri); amestecuri îmbogăţite în stereoizomeri şi altele asemenea. Compuşii chirali prezentaţi sau numiţi aici fără o stereochimie definită la un centru chiral sunt menţionaţi a include oricare sau toate variaţiile stereoizomerului posibil la stereocentrul nedefinit, dacă nu se indică altfel. Reprezentarea sau denumirea unui anumit stereoizomer înseamnă că stereocentrul indicat are stereochimia desemnată, înţelegând că pot fi prezente şi cantităţi minore de alţi stereoizomeri, dacă nu se indică altfel, cu condiţia ca utilitatea compusului descris sau numit să nu fie eliminată prin prezenţa altui stereoizomer.
Compusul (I) poate exista sub formă liberă sau sub diferite forme de sare, cum ar fi o formă de sare mono-protonată, o formă de sare di-protonată, o formă de sare tri-protonată sau amestecuri ale acestora. Toate aceste forme sunt incluse în scopul acestei invenţii, dacă nu se indică altfel.
Această invenţie include, de asemenea, versiuni marcate izotopic ale compuşilor din dezvăluire, inclusiv compusul (I), în care un atom a fost înlocuit sau îmbogăţit cu un atom având acelaşi număr atomic, dar o masă atomică diferită de masa atomică care predomină în natură. Exemple de izotopi care pot fi încorporaţi într-un compus cu formula (I) includ, dar nu se limitează la, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 35S, şi 18F. De interes deosebit sunt compuşii cu formula (I) îmbogăţiţi în tritiu sau carbon-14, compuşi care pot fi utilizaţi, de exemplu, în studiile de distribuţie tisulară. De asemenea, de interes deosebit sunt compuşii cu formula (I) îmbogăţiţi în deuteriu în special la un loc de metabolism, compuşi care sunt de aşteptat să aibă o stabilitate metabolică mai mare. În plus, de interes deosebit sunt compuşii cu formula (I) îmbogăţiţi într-un izotop emiţător de pozitroni, cum ar fi 11C, 18F, 15O şi 13N, compuşi care pot fi folosiţi, de exemplu, in studii de tomografie cu emisie de pozitroni (PET).
Definiţii
Când se descrie această invenţie, incluzând diferitele sale aspecte şi exemple de realizare, următorii termeni au următoarele semnificaţii, dacă nu se indică altfel. \tabTermenul "alchil" înseamnă o grupare hidrocarbură monovalentă saturată care poate fi liniară sau ramificată sau combinaţii ale acestora. Dacă nu este definit altfel, asemenea grupări alchil conţin tipic de la 1 la 10 atomi de carbon. Grupări alchil reprezentative includ, de exemplu, metil (Me), etil (Et), n-propil (n-Pr) sau (nPr), izopropil (i-Pr) sau (iPr), n-butil (n-Bu) sau (nBu), sec-butil , izobutil , tert-butil (t-Bu) sau (tBu), n-pentil, n-hexil, 2,2-dimetilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, 2-etilbutil, 2,2-dimetilpentil, 2-propil pentil, şi asemănător. Când un anumit număr de atomi de carbon este destinat unui anumit termen, numărul de atomi de carbon este afişat înainte de termen. De exemplu, termenul "alchil C1-3" înseamnă o grupare alchil având de la 1 la 3 atomi de carbon în care atomii de carbon sunt în orice configuraţie acceptabilă din punct de vedere chimic, inclusiv configuraţii liniare sau ramificate. Termenul "alcoxi" înseamnă o grupare -O-alchil monovalentă, unde alchilul este definit ca mai sus. Grupările alcoxi reprezentative includ, de exemplu, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, şi asemănător. Termenul "cicloalchil" înseamnă o grupare carbociclică saturată monovalentă care poate fi monociclică sau multiciclică. Dacă nu este definit altfel, ca grupările cicloalchil conţin tipic de la 3 la 10 atomi de carbon. Grupări cicloalchil reprezentative includ, de exemplu, ciclopropil (cPr), ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclooctil, adamantil şi asemănător. Termenul "halogen" înseamnă fluor, clor, bromo sau iod. Termenul "heterociclil", "heterociclu", "heterociclic" sau "ciclu heterociclic" înseamnă o grupare nearomatică ciclică monovalentă saturată sau parţial nesaturată, având de la 3 până la 10 atomi în ciclu total, în care ciclul conţine de la 2 până la 9 atomi de carbon în ciclu şi de la 1 la 4 heteroatomi în ciclu selectaţi dintre azot, oxigen şi sulf. Grupările heterociclice pot fi monociclice sau multiciclice (adică, condensate sau în punte). Grupările heterociclice reprezentative includ, de exemplu, pirolidinil, piperidinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil, tiomorfolil, indolin-3-il, 2-imidazolinil, tetrahidropiranil, 1,2,3,4-tetrahidroizochinolin-2-il, chinuclidinil, 7-azanorbomanil, nortropanil, şi asemănător, unde punctual de ataşament este la orice atom de carbon sau azot disponibil din inel. Unde contextul face ca punctul de ataşament ale grupării heterociclice sa fie evident, asemenea grupări pot fi menţionate alternative ca o secpie non-valentă adică pirolidina, piperidina, piperazina, imidazol, tetrahidropiran etc. Termenul "cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic" înseamnă o cantitate suficientă pentru a efectua tratamentul atunci când este administrată unui pacient care are nevoie de tratament. Termenul "tratament" aşa cum este utilizat aici înseamnă tratamentul unei boli, tulburări sau afecţiuni medicale (cum ar fi o boală inflamatorie gastrointestinală), la un pacient, cum ar fi un mamifer (în particular un om), care include unul sau mai multe dintre următoarele:
(a) prevenirea apariţiei bolii, tulburării sau stării medicale, adică prevenirea reapariţiei bolii sau stării medicale sau a tratamentului profilactic al unui pacient care este predispus la boala sau starea medicală;
(b) ameliorarea bolii, tulburării sau stării medicale, adică eliminarea sau provocarea regresiei bolii, tulburării sau stării medicale la un pacient, inclusiv contracararea efectelor altor agenţi terapeutici;
(c) suprimarea bolii, tulburării sau stării medicale, adică încetinirea sau oprirea dezvoltării bolii, tulburării sau stării medicale la un pacient; sau
(d) atenuarea simptomelor bolii, tulburării sau stării medicale la un pacient.
Termenul "sare acceptabilă farmaceutic" înseamnă o sare care este acceptabilă pentru administrare la un pacient sau un mamifer, cum ar fi un om (de exemplu, săruri care au o siguranţă acceptabilă la mamifere pentru un anumit regim de dozare). Sărurile reprezentative acceptabile din punct de vedere farmaceutic includ săruri ale acidului acetic, ascorbic, benzensulfonic, benzoic, camforsulfonic, citric, etansulfonic, edisilic, fumaric, gentisic, gluconic, glucoronic, glutamic, hipuric, bromhidric, clorhidric, isetionic, lactic, lactobionic, maleic, malic, mandelic, metansulfonic, mucic, naftalensulfonic, naftalen-1,5-disulfonic, naftalen-2,6-disulfonic, nicotinic, nitric, orotic, pamoic, pantotenic, fosforic, succinic, sulfuric, tartaric, p-toluensulfonic şi xinafoic şi asemănător.
Termenul „sare a acestuia» înseamnă un compus format atunci când hidrogenul unui acid este înlocuit cu un cation, cum ar fi un cation metalic sau un cation organic şi asemănător. De exemplu, cationul poate fi o formă protonată a unui compus cu formula ( I), adică o formă în care una sau mai multe grupări amino au fost protonate de un acid. În mod obişnuit, sarea este o sare acceptabilă farmaceutic, deşi acest lucru nu este necesar pentru sărurile compuşilor intermediari care nu sunt destinate administrării unui pacient.
Termenul „grupare protectoare amino» înseamnă o grupare protectoare adecvată pentru prevenirea reacţiilor nedorite la un azot amino. Grupările reprezentative amino-protectoare includ, dar nu sunt limitate la, formil; grupări acil, de exemplu grupări alcanoil, cum ar fi acetil şi tri-fluoracetil; grupări alcoxicarbonil, cum ar fi terţ-butoxicarbonil (Boc); grupări arilmetoxicarbonil, cum ar fi benziloxicarbonil (Cbz) şi 9-fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc); grupări arilmetil, cum ar fi benzil (Bn), tritil (Tr) şi 1,1-di-(4'-metoxifenil)metil; grupări silil, cum ar fi trimetilsilil (TMS), triizopropil siliil (TIPS), terţ-butil dimetilsilil (TBS sau TBDMS), [2-(trimetilsilil)-etoxi]metil (SEM); şi asemănător. Numeroase grupări protectoare şi introducerea şi îndepărtarea lor sunt descrise în T. W. Greene şi P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York
Proceduri generale de sinteză
Compusul (I) şi intermediarii acestuia pot fi preparaţi conform următoarelor metode şi proceduri generale utilizând materii prime şi reactivi disponibili comercial sau preparaţi în mod obişnuit. Substituenţii şi variabilele (de exemplu, R şi X) utilizaţi în următoarele scheme au aceleaşi semnificaţii ca cele definite în altă parte aici, dacă nu se indică altfel. În plus, compuşii având un atom acid sau bazic sau o grupare funcţională pot fi utilizaţi sau pot fi produşi ca sare, dacă nu se indică altfel (în unele cazuri, utilizarea unei sări într-o anumită reacţie va necesita conversia sării într-o formă de non-sare, de exemplu, o bază liberă, folosind proceduri de rutină înainte de a efectua reacţia).
Deşi un exemplu de realizare particular al prezentei invenţii poate fi prezentat sau descris în procedurile care urmează, specialiştii în domeniu vor recunoaşte că alte exemple de realizare sau aspecte ale prezentei invenţii pot fi, de asemenea, preparate folosind astfel de proceduri sau prin utilizarea altor metode, reactivi şi materii prime cunoscute specialiştilor în domeniu. În particular, se va aprecia că compusul (I) poate fi preparat printr-o varietate de căi de proces în care reactanţii sunt combinaţi în ordine diferită pentru a furniza diferiţi intermediari pe calea spre producerea produsului final.
Metodele generale de preparare a compusului (I) sunt ilustrate în schemele 1 şi 2.
Materia primă 2-1 poate fi transformată în ester (V), prin reacţia cu un alcool în prezenţa unui acid, unde R este o grupare alchil. În unele exemple de realizare, R este o grupare alchil C1-12. În unele exemple de realizare, alcoolul este etanol. Compusul (V) poate fi transformat în compusul di-halo (IV). În unele exemple de realizare, (IV) este un analog di-cloro. În unele exemple de realizare, reactivul este POCI3. Compusul (IV) poate fi transformat în (III) prin reacţia cu 2-4 în prezenţa unei baze. Compusul (II) poate fi format prin reacţia (III) cu 1-9 în prezenţa unei baze. În final, (II) poate fi redus la (I) în prezenţa unui agent reducător. În unele exemple de realizare, agentul reducător este o sursă de hidrură de litiu sau de sodiu. În unele exemple de realizare, agentul de reducere este LiAlH4, NaBH4 sau LiBH4. În unele exemple de realizare, R este etil. Opţional, poate fi formată o sare acceptabilă farmaceutic a lui (I).
Pentru această metodă generală, în unele exemple de realizare, R este un C1-12 alchil. În unele exemple de realizare, R este un C1-6 alchil. În unele exemple de realizare, R este un C1-3 alchil. În unele exemple de realizare, R este etil. În unele exemple de realizare, X este F, CI sau Br. În unele exemple de realizare, X este CI. În unele exemple de realizare, R este etil şi X este CI.
Alternativ, compusul (III) poate fi reacţionat cu compusul (VI) în care PG este o grupare protectoare amino, în prezenţa unei baze, cum ar fi DIPEA, pentru a da compusul (VII). Compusul (VII) poate fi redus la alcoolul corespunzător (VIII) cu un agent reducător. În unele exemple de realizare, agentul reducător este o sursă de hidrură de litiu sau de sodiu. În unele exemple de realizare, agentul reducător este LiAlH4, NaBH4 sau LiBH4. Compusul (VIII) poate fi deprotejat pentru a da compusul (IX). Când PG este Boc, deprotejarea poate fi efectuată în prezenţa unui acid puternic, cum ar fi TFA sau HCI. În cele din urmă, compusul (IX) poate fi reacţionat cu o sursă de etansulfonil, cum ar fi clorura de etansulfonil.
Pentru această metodă generală, în unele exemple de realizare, PG este terţ-butoxicarbonil (Boc). În unele exemple de realizare, R este un C1-12 alchil. În unele exemple de realizare, R este un C1-6 alchil. În unele exemple de realizare, R este un C1-3 alchil. În unele exemple de realizare, R este etil. În unele exemple de realizare, X este F, CI sau Br. În unele exemple de realizare, X este CI. În unele exemple de realizare, R este etil şi X este CI.
Forma cristalină I
Intr-un alt aspect, dezvăluirea furnizează o formă cristalină (Forma I) a compusului (I)
Într-un aspect, forma cristalină este caracterizată printr-o difracţie de raze X în pulbere cuprinzând vârfuri de difracţie la valori 2θ de 11.19±0.20, 11.73±0.20, 18.80±0.20 şi 19.29±0.20. Într-un alt aspect, forma cristalină este caracterizată suplimentar prin faptul că are un vârf de difracţie suplimentar la o valoare 2θ de 6.75±0.20. Într-un alt aspect, forma cristalină este caracterizată în plus prin faptul că are două sau mai multe vârfuri de difracţie suplimentare la valori 2θ selectate dintre 5.91±0.20, 6.28±0.20, 8.08±0.20, 16.68±0.20, 17.62±0.20, 20.53±0.20, şi 22.16±0.20.
Aşa cum este bine cunoscut în domeniul difracţiei cu raze X pe pulbere, poziţiile vârfurilor modelelor PXRD sunt relativ mai puţin sensibile la detaliile experimentale, cum ar fi detaliile de preparare a probei şi geometria instrumentului, decât sunt înălţimile relative ale vârfurilor. Astfel, într-un aspect, Forma cristalină I este caracterizată printr-un model de difracţie cu raze X în pulbere în care poziţiile vârfurilor sunt în mod substanţial în conformitate cu poziţiile vârfurilor modelului prezentat în Figura 1.
Într-un alt aspect, Forma cristalină I este caracterizată prin comportamentul său atunci când este expusă la temperaturi ridicate. După cum se demonstrează în Figura 2, calorimetria de scanare diferenţială (DSC) înregistrată la o viteză de încălzire de 10 °C pe minut prezintă un vârf al fluxului de căldură endotermic, identificat ca o tranziţie la topire, care arată un maxim al fluxului de căldură endotermic la o temperatură. de 250,9 °C ± 2 °C. Într-un alt aspect, Forma I este caracterizată printr-o calorimetrie cu scanare diferenţială în mod substanţial în conformitate cu cea prezentată în Figura 2.
Analiza gravimetrică termică (TGA) din Figura 3 prezintă o pierdere în greutate de aproximativ 0,70 % între 22 °C şi 125 °C, sub purjare cu N2. Compusul se descompune la o temperatură de debut de aproximativ 250 °C.
Aşa cum este descris în Preparatul 2, Forma I poate fi preparată prin dizolvarea compusului (I) în etanol la încălzire. Soluţia rezultată este apoi răcită la aproximativ 25 °C. Forma I poate fi izolată prin filtrare.
Într-un alt aspect, invenţia furnizează o metodă de preparare a Formei cristaline I, metoda cuprinzând: (a) dizolvarea compusului (I) într-un diluant cum ar fi etanol şi, opţional, aplicarea încălzirii pentru a forma un amestec de reacţie; (b) răcirea soluţiei la aproximativ 25 °C cu agitare opţională; şi (c) izolarea Formei I cristaline din amestecul de reacţie, de exemplu prin filtrare.
Forma cristalină II
Într-un alt aspect, invenţia furnizează o formă cristalină (Forma II) a compusului (I):
care este o formă cristalină anhidră a bazei libere.
Într-un aspect, forma cristalină este caracterizată printr-o difracţie de raze X în pulbere cuprinzând vârfuri de difracţie la valorile 2θ de 11.4±0.2, 16.2±0.2, 16.6±0.2, 17.7±0.2, şi 21.9±0.2.
Într-un alt aspect, forma cristalină este caracterizată în plus prin faptul că are vârfuri de difracţie suplimentare la valorile 2θ de 8.9±0.2, 9.5±0.2, şi 10.2±0.2.
Într-un alt aspect, forma cristalină este caracterizată în plus prin faptul că are două sau mai multe vârfuri de difracţie suplimentare la valori 2θ selectate dintre 14.4±0.2, 19.0±0.2, 19.2±0.2, 19.8±0.2, 20.1±0.2, 20.4±0.2, 20.6±0.2, 20.8±0.2, 21.3±0.2, 25.9±0.2, 30.1±0.2, 30.5±0.2, 30.9±0.2, 32.6±0.2, şi 33.8±0.2.
După cum este bine cunoscut în domeniul difracţiei cu raze X pe pulbere, poziţiile vârfurilor modelelor PXRD sunt relativ mai puţin sensibile la detalii experimentale, cum ar fi detaliile preparării probei şi geometria instrumentului, decât sunt înălţimile relative ale vârfurilor. Astfel, într-un aspect, Forma cristalină II este caracterizată printr-un model de difracţie cu raze X în pulbere în care poziţiile vârfurilor sunt în mod substanţial în concordanţă cu poziţiile vârfurilor modelului prezentat în Figura 5.
Într-un alt aspect, Forma II cristalină se caracterizează prin comportamentul său atunci când este expusă la temperaturi ridicate. După cum se demonstrează în Figura 6, calorimetria de scanare diferenţială (DSC) înregistrată la o viteză de încălzire de 10 °C pe minut prezintă un vârf al fluxului de căldură endotermic, identificat ca o tranziţie la topire, care arată un maxim al fluxului de căldură endotermic la o temperatură de 238,1 °C ± 2 °C. Într-un alt aspect forma II este caracterizată printr-o calorimetrie cu scanare diferenţială în mod substanţial în conformitate cu cea prezentată în Figura 6.
Urma analizei gravimetrice termice (TGA) din Figura 7 prezintă o pierdere în greutate asociată cu descompunerea după 222 °C.
O urmă reprezentativă DMS pentru Forma II este prezentată în Figura 8. Absorbţia totală de umiditate între 5 şi 90% RH a fost de aproximativ 0,02%. Forma II este nehigroscopică.
Aşa cum este descris în Preparatul 20, Forma II poate fi preparată prin suspendarea compusului 2-6 într-un amestec de EtOH şi THF, răcit la 5°C. La această suspensie se poate adăuga LiBH4. După adăugare, temperatura poate fi crescută la 10 °C, şi amestecul de reacţie poate fi agitat timp de 2 ore. Reacţia poate fi stinsă cu un amestec de clorură de amoniu dizolvată în apă. După încălzire la 45 °C, apa poate fi adăugată încet pentru a genera cristale. Suspensia rezultată poate fi menţinută la 45 °C timp de câteva ore, apoi poate fi agitată la 15 °C şi filtrată. Forma cristalină Forma II poate fi clătită cu EtOH şi apă şi apoi uscată pentru a da forma II de grad intermediar.
Această intermediar poate fi dizolvat în DMSO la încălzire urmată de adăugarea lentă de n-PrOH menţinând în acelaşi timp temperatura internă la aproximativ 86°C. Amestecul este agitat la aproximativ 92°C timp de aproximativ 4 ore. Amestecul rezultat este apoi răcit lent la aproximativ 20°C şi agitat la aproximativ 20°C timp de câteva ore. Forma II poate fi apoi izolată prin filtrare. Forma cristalină II poate fi spălată cu nPrOH şi etanol urmat de filtrare.
Într-un alt aspect, descrierea furnizează o metodă de purificare a Formei cristaline II de grad intermediar, metoda cuprinzând: (a) dizolvarea Formei II cu grad intermediar într-un diluant cum ar fi DMSO şi aplicarea încălzirii amestecului; (b) adăugarea lentă de n-PrOH; (c) încălzirea amestecului la aproximativ 90 °C; (d) răcirea soluţiei la aproximativ 20 °C; şi (e) izolarea formei cristaline II din amestecul de reacţie, de exemplu prin filtrare.
Compoziţii farmaceutice
Compusul (I) şi sărurile acceptabile farmaceutic ale acestuia sunt utilizate în mod obişnuit sub forma unei compoziţii sau formulări farmaceutice. Compusul (I) poate fi prezent ca o formă cristalină, cum ar fi Forma I sau Forma II. Astfel de compoziţii farmaceutice pot fi administrate unui pacient prin orice cale acceptabilă de administrare incluzând, dar fără a se limita la, modurile de administrare orală, topică (inclusiv transdermică), rectală, nazală, inhalabilă şi parenterală.
În consecinţă, într-unul dintre aspectele sale legate de compoziţie, invenţia se referă la o compoziţie farmaceutică care cuprinde un purtător sau excipient acceptabil farmaceutic şi compus (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic. Într-un alt aspect al compoziţiei, invenţia se referă la o compoziţie farmaceutică care cuprinde un purtător sau excipient acceptabil farmaceutic şi o formă cristalină a compusului (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, de exemplu Forma I sau Forma II. Opţional, astfel de compoziţii farmaceutice pot conţine alţi agenţi terapeutici şi/sau de formulare dacă se doreşte. Când se discută despre compoziţii şi utilizări ale acestora, „compusul invenţiei» poate fi denumit aici şi „agent activ».
Compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire conţin în mod obişnuit o cantitate eficientă terapeutic de compus (I), sau să fie o astfel de acceptabilă din punct de vedere farmaceutic. Specialiştii în domeniu vor recunoaşte, totuşi, că o compoziţie farmaceutică poate conţine mai mult decât o cantitate eficientă terapeutic, adică compoziţii în vrac, sau mai puţin decât o cantitate eficientă terapeutic, adică doze unitare individuale concepute pentru administrare multiplă pentru a obţine o cantitate eficientă terapeutic.
De obicei, astfel de compoziţii farmaceutice vor conţine de la aproximativ 0,1 până la aproximativ 95% în greutate agent activ; incluzând de la aproximativ 5 până la aproximativ 70% în greutate agent activ.
Orice purtător sau excipient convenţional poate fi utilizat în compoziţiile farmaceutice ale invenţiei. Alegerea unui anumit purtător sau excipient, sau combinaţii de purtători sau excipienţi, va depinde de modul de administrare utilizat pentru a trata un anumit pacient sau tip de stare medicală sau stare de boală. în această privinţă, prepararea unei compoziţii farmaceutice adecvate pentru un mod particular de administrare este bine în domeniul de aplicare al specialiştilor în domeniul farmaceutic. în plus, purtătorii sau excipienţii utilizaţi în compoziţiile farmaceutice ale acestei invenţii sunt disponibili comercial. Cu titlu de exemplu suplimentar, tehnicile convenţionale de formulare sunt descrise în Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Ediţia a 20-a, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); şi H.C. Ansel şi colab., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery, ediţia a 7-a, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Exemplele reprezentative de materiale care pot servi ca purtători acceptabili farmaceutic includ, dar nu se limitează la, următoarele: zaharuri, cum ar fi lactoza, glucoza şi zaharoza; amidon, cum ar fi amidon de porumb şi amidon de cartofi; celuloza, cum ar fi celuloza microcristalină, şi derivaţii săi, cum ar fi carboximetil celuloza de sodiu, etil celuloza şi acetatul de celuloză; tragacant pulbere; malţ; gelatină; talc; excipienţi, cum ar fi unt de cacao şi ceară pentru supozitoare; uleiuri, cum ar fi ulei de arahide, ulei de seminţe de bumbac, ulei de şofrăn, ulei de susan, ulei de măsline, ulei de porumb şi ulei de soia; glicoli, cum ar fi propilen glicol; polioli, cum ar fi glicerină, sorbitol, manitol şi polietilen glicol; esteri, cum ar fi oleatul de etil şi lauratul de etil; agar agar; agenţi de tamponare, cum ar fi hidroxid de magneziu şi hidroxid de aluminiu; acid alginic; apă apirogenă; soluţie salină izotonică; soluţia Ringer; alcool etil; soluţii tampon fosfat; şi alte substanţe compatibile netoxice utilizate în compoziţiile farmaceutice.
Compoziţiile farmaceutice sunt preparate în mod obişnuit prin amestecarea completă şi intima sau amestecarea agentului activ cu un purtător acceptabil farmaceutic şi unul sau mai multe ingrediente opţionale. Amestecul amestecat uniform rezultat poate fi apoi modelat sau încărcat în tablete, capsule, pastile şi asemănător folosind proceduri şi echipamente convenţionale.
Compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire pot fi ambalate într-o formă de dozare unitară. Termenul "formă de dozare unitară" se referă la o unitate fizic discretă adecvată pentru dozarea unui pacient, adică fiecare unitate conţinând o cantitate predeterminată de agent activ calculată pentru a produce efectul terapeutic dorit fie singură, fie în combinaţie cu una sau mai multe unităţi suplimentare. De exemplu, astfel de forme de dozare unitară pot fi capsule, tablete, pilule, şi asemănător, sau pachete unitare adecvate pentru administrare parenterală.
Într-un exemplu de realizare, compoziţiile farmaceutice ale invenţiei sunt potrivite pentru administrare orală. Compoziţiile farmaceutice potrivite pentru administrare orală pot fi sub formă de capsule, comprimate, pilule, pastile, caşete, drajeuri, pulberi, granule; sau ca o soluţie sau o suspensie într-un lichid apos sau neapos; sau ca o emulsie lichidă ulei-în-apă sau apă-în-ulei; sau ca elixir sau sirop; şi asemănător; fiecare conţinând o cantitate predeterminată dintr-un compus din această dezvăluire, sau să fie aceasta acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, ca ingredient activ.
Atunci când sunt destinate administrării orale într-o formă solidă de dozare (adică sub formă de capsule, tablete, pastile şi asemănător), compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire vor cuprinde în mod obişnuit agentul activ sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia şi unul sau mai mulţi purtători acceptabili farmaceutic. Opţional, astfel de forme de dozare solide pot cuprinde: materiale de umplutură sau diluanţi, cum ar fi amidon, celuloză microcristalină, lactoză, fosfat dicalcic, zaharoză, glucoză, manitol şi/sau acid silicic; lianţi, cum ar fi carboximetilceluloză, alginaţi, gelatină, polivinil pirolidonă, zaharoză şi/sau acacia; umectanţi, cum ar fi glicerolul; agenţi de dezintegrare, cum ar fi crosscarmeloza de sodiu, agar-agar, carbonat de calciu, amidon de cartofi sau de tapioca, acid alginic, anumiţi silicaţi şi/sau carbonat de sodiu; agenţi de întârziere a soluţiei, cum ar fi parafina; acceleratori de absorbţie, cum ar fi compuşi de amoniu cuaternar; agenţi de umectare, cum ar fi alcool cetilic şi/sau monostearat de glicerol; absorbanţi, cum ar fi caolin şi/sau argilă bentonită; lubrifianţi, cum ar fi talc, stearat de calciu, stearat de magneziu, polietilen glicoli solizi, laurii sulfat de sodiu şi/sau amestecuri ale acestora; agenţi de colorare; şi agenţi de tamponare.
Agenţii de eliberare, agenţi de umectare, agenţi de acoperire, agenţi de îndulcire, de aromatizare şi de parfumare, conservanţi şi antioxidanţi pot fi de asemenea prezenţi în compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire. Exemple de antioxidanţi acceptabili farmaceutic includ: antioxidanţi solubili în apă, cum ar fi acid ascorbic, clorhidrat de cisteină, bisulfat de sodiu, metabisulfat de sodiu, sulfit de sodiu şi asemănător; antioxidanţi solubili în ulei, cum ar fi palmitatul de ascorbil, hidroxianisolul butilat, hidroxitoluenul butilatul, lecitina, galatul de propil, alfa-tocoferol şi asemănător; şi agenţi de chelare a metalelor, cum ar fi acidul citric, acidul etilendiamină tetraacetic, sorbitolul, acidul tartric, acidul fosforic şi asemănător. Agenţii de acoperire pentru comprimate, capsule, pilule şi altele asemenea, includ pe cei utilizaţi pentru acoperiri enterice, cum ar fi ftalatul de acetat de celuloză, ftalatul de acetat de polivinil, ftalatul de hidroxipropil metilceluloză, acidul metacrilic, copolimerii de ester al acidului metacrilic, trimelitatul de acetat de celuloză, trimelitatul de celuloză, hidroxipropililatul de celuloză, succinat de acetat de celuloză, şi asemănător.
Compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire pot fi, de asemenea, formulate pentru a asigura eliberarea lentă sau controlată a agentului activ utilizând, de exemplu, hidroxipropil metilceluloză în proporţii variate; sau alte matrici polimerice, lipozomi şi/sau microsfere. în plus, compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire pot conţine opţional agenţi de opacizare şi pot fi formulate astfel încât să elibereze ingredientul activ numai, sau preferenţial, într-o anumită porţiune a tractului gastrointestinal, opţional, într-o manieră întârziată. Exemple de compoziţii de înglobare care pot fi utilizate includ substanţe polimerice şi ceruri. Agentul activ poate fi, de asemenea, sub formă micro-încapsulată, dacă este cazul, cu unul sau mai mulţi dintre excipienţii descrişi mai sus.
Formele de dozare lichide adecvate pentru administrare orală includ, cu titlu ilustrativ, emulsii, microemulsii, soluţii, suspensii, siropuri şi elixiruri acceptabile farmaceutic. Formele de dozare lichide cuprind, în mod obişnuit, agentul activ şi un diluant inert, cum ar fi, de exemplu, apă sau alţi solvenţi, agenţi de solubilizare şi emulgatori, cum ar fi alcool etilic, alcool izopropilic, carbonat de etil, acetat de etil, alcool benzilic, benzoat de benzil, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, uleiuri (în special uleiuri din seminţe de bumbac, arahide, porumb, germeni, măsline, ricin şi susan), acid oleic, glicerol, alcool tetrahidrofurilic, polietilen glicoli şi esteri ai acizilor graşi ai sorbitanului şi amestecuri ale acestora. Alternativ, anumite formulări lichide pot fi transformate, de exemplu, prin uscare prin pulverizare, într-o pulbere, care este utilizată pentru a prepara forme de dozare solide prin proceduri convenţionale.
Suspensiile, în plus faţă de ingredientul activ, sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, pot conţine agenţi de suspendare, cum ar fi, de exemplu, alcooli izostearilici etoxilaţi, polioxietilen sorbitol şi esteri de sorbitan, celuloză microcristalină, metahidroxid de aluminiu, bentonită, agar-agar. şi tragacanth şi amestecuri ale acestora.
Compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, poate fi, de asemenea, administrat parenteral (de exemplu, prin injecţie intravenoasă, subcutanată, intramusculară sau intraperitoneală). Pentru administrare parenterală, agentul activ, sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, este în mod obişnuit amestecat cu un vehicul adecvat pentru administrare parenterală incluzând, de exemplu, soluţii apoase sterile, soluţie salină, alcooli cu greutate moleculară mică, cum ar fi propilen glicol, polietilen glicol, uleiuri vegetale, gelatină, esteri ai acizilor graşi precum oleatul de etil, şi asemănător. Formulările parenterale pot conţine, de asemenea, unul sau mai mulţi antioxidanţi, solubilizanţi, stabilizatori, conservanţi, agenţi de umectare, emulgatori, agenţi de tamponare sau agenţi de dispersie. Aceste formulări pot fi sterilizate prin utilizarea unui mediu injectabil steril, a unui agent de sterilizare, filtrare, iradiere sau căldură.
Alternativ, compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire sunt formulate pentru administrare prin inhalare. Compoziţiile farmaceutice adecvate pentru administrare prin inhalare vor fi de obicei sub formă de aerosol sau pulbere. Astfel de compoziţii sunt în general administrate utilizând dispozitive de eliberare binecunoscute, cum ar fi un inhalator cu doză măsurată, un inhalator cu pulbere uscată, un nebulizator sau un dispozitiv de eliberare similar.
Atunci când sunt administrate prin inhalare folosind un recipient sub presiune, compoziţiile farmaceutice din această dezvăluire vor cuprinde în mod obişnuit ingredientul activ sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia şi un propulsor adecvat, cum ar fi diclorodifluormetan, triclorfluormetan, diclorotetrafluoretan, dioxid de carbon sau alt diclorotetrafluoretan gaz potrivit. În plus, compoziţia farmaceutică poate fi sub formă de capsulă sau cartuş (fabricat, de exemplu, din gelatină) cuprinzând un compus al invenţiei, sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi o pulbere adecvată pentru utilizare într-un inhalator de pulbere. Bazele pulbere adecvate includ, de exemplu, lactoza sau amidonul.
Formulări topice
Pentru a trata afecţiunile pielii, compusul din invenţie, sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este de preferinţă formulat pentru administrare topică pe piele. Compoziţiile topice cuprind vehicule fluide sau semi-solide care pot include, dar nu se limitează la, polimeri, agenţi de îngroşare, tampoane, neutralizatori, agenţi de chelare, conservanţi, agenţi tensioactivi sau emulgatori, antioxidanţi, ceară sau uleiuri, emolienţi, creme de protecţie solară şi un solvent sau un sistem de amestec de solvent. Compoziţiile topice utile în prezenta invenţie pot fi făcute într-o mare varietate de tipuri de produse. Acestea includ, dar nu se limitează la, loţiuni, creme, geluri, bastoane, spray-uri, unguente, paste, spume, spume şi produse de curăţare. Aceste tipuri de produse pot cuprinde mai multe tipuri de sisteme purtători incluzând, dar fără a se limita la particule, nanoparticule şi lipozomi. Dacă se doreşte, pot fi adăugaţi agenţi de dezintegrare, cum ar fi polivinil pirolidona reticulată, agar sau acid alginic sau o sare a acestuia, cum ar fi alginatul de sodiu. Tehnici de formulare şi administrare pot fi găsite în Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed. (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995), Formularea poate fi selectată pentru a maximiza livrarea la un loc ţintă dorit în organism.
Loţiunile, care sunt preparate care urmează să fie aplicate pe piele sau pe suprafaţa părului fără frecare, sunt în mod obişnuit preparate lichide sau semi-lichide în care sunt dispersate solide, ceruri sau lichide fin divizate. Loţiunile vor conţine în mod obişnuit agenţi de suspendare pentru a produce dispersii mai bune, precum şi compuşi utili pentru localizarea şi menţinerea agentului activ în contact cu pielea sau părul, de exemplu, metilceluloză, carboximetilceluloză de sodiu sau altele asemenea.
Cremele care conţin agentul activ, sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, pentru livrare conform prezentei dezvăluiri sunt emulsii lichide sau semisolide vâscoase, fie ulei-în-apă, fie apă-în-ulei. Bazele de cremă sunt lavabile cu apă şi conţin o fază uleioasă, un emulgator şi o fază apoasă. Faza uleioasă este în general compusă din petrolatum sau un alcool gras, cum ar fi alcoolul cetilic sau stearilic; faza apoasă de obicei, deşi nu neapărat, depăşeşte faza uleioasă în volum şi, conţine, în general, un umectant. Emulgatorul dintr-o formulare de cremă, aşa cum este explicat în Remington: The Science and Practice of Pharmacy, este în general un surfactant neionic, anionic, cationic sau amfoter. Componentele formulărilor de cremă pot include: baze uleioase, cum ar fi petrolatum, uleiuri minerale, uleiuri vegetale şi animale şi trigliceride; baze de cremă, cum ar fi alcooli de lanolină, acid stearic şi alcool cetostearilic; o bază de gel, cum ar fi alcoolul polivinilic; solvenţi, cum ar fi, propilen glicol şi polietilen glicol; emulgatori, cum ar fi polisorbaţi, stearaţi, cum ar fi stearat de gliceril, octilhidroxistearat, stearat de polioxil, eteri stearil PEG, palmitat de izopropil şi monostearat de sorbitan; stabilizatori, cum ar fi polizaharide şi sulfit de sodiu; emolienţi (adică substanţe hidratante), cum ar fi trigliceride cu lanţ mediu, miristat de izopropil şi dimeticonă; agenţi de rigidizare, cum ar fi alcoolul cetilic şi alcoolul stearilic; agenţi antimicrobieni, cum ar fi metilparaben, propil paraben, fenoxietanol, acid sorbic, diazolidinil uree şi hidroxianisol butilat; intensificatori de penetrare, cum ar fi N-metilpirolidona, propilenglicol, monolaurat de polietilenglicol, şi asemănător; şi agenţi de chelare, cum ar fi edetat disodic.
Formulările de gel pot fi de asemenea utilizate în legătură cu prezenta invenţie. După cum va fi apreciat de cei care lucrează în domeniul formulării topice de medicamente, gelurile sunt semisolide. Gelurile monofazice conţin macromolecule organice distribuite în mod substanţial uniform în lichidul purtător, care este în mod obişnuit apos, dar poate fi şi un solvent sau un amestec de solvenţi.
Unguentele, care sunt preparate semisolide, se bazează în mod obişnuit pe petrolatum sau alţi derivaţi ai petrolului. După cum va fi apreciat de către un specialist în domeniu, baza de unguent specifică care trebuie utilizată este una care asigură o administrare optimă a agentului activ ales pentru o formulare dată şi, de preferinţă, asigură şi alte caracteristici dorite, de exemplu, emolienţă sau altele asemenea. Ca şi în cazul altor vehicule sau vehicule, o bază de unguent trebuie să fie inertă, stabilă, neiritantă şi nesensibilizantă. După cum se explică în Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Ed. 19. (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995), la paginile 1399-1404, bazele unguent pot fi grupate în patru clase: baze oleaginoase; baze emulsionabile; baze emulsie; şi baze solubile în apă. Bazele unguente oleaginoase includ, de exemplu, uleiuri vegetale, grăsimi obţinute de la animale şi hidrocarburi semisolide obţinute din petrol. Bazele de unguent emulsionabile, cunoscute şi ca baze de unguent absorbante, conţin puţină apă sau deloc şi includ, de exemplu, hidroxistearin sulfat, lanolină anhidră şi petrolatum hidrofil. Bazele emulsiilor de unguent sunt fie emulsii apă-în-ulei (W/O), fie emulsii ulei-în-apă (O/W) şi includ, de exemplu, alcool cetilic, monostearat de gliceril, lanolină şi acid stearic. Bazele de unguent solubile în apă pot fi preparate din polietilen glicoli cu greutate moleculară diferită; din nou, se poate face referire la Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra, pentru mai multe informaţii. Materialele uleioase adecvate pentru utilizare în formulările de unguente includ vaselina (petrolatum), ceara de albine, untul de cacao, untul de shea şi alcoolul cetilic. Unguentele pot include, în mod opţional, în plus, amplificatori de penetrare, dacă se doreşte.
Formulările utile ale invenţiei includ, de asemenea, spray-uri. Spray-urile furnizează, în general, agentul activ într-o soluţie apoasă şi/sau alcoolică care poate fi pulverizată pe piele sau păr pentru livrare. Astfel de spray-uri le includ pe cele formulate pentru a asigura concentraţia soluţiei de agent activ la locul de administrare după livrare, de exemplu, soluţia de pulverizare poate fi compusă în principal din alcool sau alt lichid volatil asemănător în care medicamentul sau agentul activ poate fi dizolvat. La livrarea pe piele sau păr, purtătorul se evaporă, lăsând agentul activ concentrat la locul de administrare.
Compoziţiile farmaceutice topice pot cuprinde, de asemenea, purtători adecvaţi în fază solidă sau gel. Exemple de astfel de purtători includ, dar nu sunt limitate la acestea, carbonat de calciu, fosfat de calciu, diferite zaharuri, amidonuri, derivaţi de celuloză, gelatină şi polimeri cum ar fi polietilen glicoli.
Compoziţiile farmaceutice topice pot cuprinde, de asemenea, un emulgator adecvat care se referă la un agent care îmbunătăţeşte sau facilitează amestecarea şi suspendarea ulei-în-apă sau apă-în-ulei. Agentul de emulsionare utilizat aici poate consta dintr-un singur agent de emulsionare sau poate fi un surfactant neionic, anionic, cationic sau amfoter sau un amestec de doi sau mai mulţi astfel de agenţi activi de suprafaţă; preferaţi pentru utilizare aici sunt emulgatorii neionici sau anionici. Asemenea agenţi activi de suprafaţă sunt descrişi în „McCutcheon's Detergent and Emulsifiers,» North American Edition, 1980 Annual publicat de McCutcheon Division, MC Publishing Company, 175 Rock Road, Glen Rock, NJ. 07452, SUA.
Pot fi utilizaţi alcooli cu greutate moleculară mare, cum ar fi alcoolul cetearilic, alcoolul cetilic, alcoolul stearilic, ceara emulsionantă, monostearat de gliceril. Alte exemple sunt distearat de etilen glicol, tristearat de sorbitan, monostearat de propilen glicol, monooleat de sorbitan, monostearat de sorbitan (SPAN 60), monolaurat de dietilen glicol, monopalmitat de sorbitan, dioleat de zaharoză, stearat de zaharoză (CRODESTA F- 160), polioxietilen lauril eter (BRIJ 30), polioxietilen (2) stearil eter (BRIJ 72), polioxietilen (21) stearil eter (BRIJ 721), monostearat de polioxietilen (Myrj 45), monostearat de polioxietilen sorbitan (TWEEN 60), monooleat de polioxietilen sorbitan (TWEEN 80), monolaurat de polioxietilen sorbitan (TWEEN 20) şi oleat de sodiu. Colesterolul şi derivaţii de colesterol pot fi, de asemenea, utilizaţi în emulsii utilizate extern.
Exemple de agenţi de emulsionare neionici adecvaţi sunt descrise de Paul L. Lindner în „Emulsions and Emulsion», editat de Kenneth Lissant, publicat de Dekker, New York, N. Y., 1974. Exemple de emulgatori neionici care pot fi utilizaţi includ, dar sunt nu se limitează la produse BRIJ, cum ar fi BRIJ 2 (un polioxietilen (2) stearil eter), BRIJ S20 (un polioxietilen (20) stearil eter), BRIJ 72 (un polioxietilen (2) stearil eter având un HLB de 4.9), BRIJ 721 (un polioxietilen (21) stearilic eter având un HLB de 15.5), Brij 30 (un polioxietilen lauril eter având un HLB de 9,7), Polawax (ceară emulsionantă având un HLB de 8.0), Span 60 (monostearat de sorbitan având un HLB de 9.7). ), Crodesta F-160 (stearat de zaharoză" având un HLB de 14,5). Compoziţiile farmaceutice topice pot conţine, de asemenea, emolienţi adecvaţi. Emolienţii sunt materiale folosite pentru prevenirea sau ameliorarea uscăciunii, precum şi pentru protecţia pielii sau a părului. Emolienţii utili includ, dar nu se limitează la, alcoolul cetilic, miristatul de izopropil, alcoolul stearilic şi asemănător. O mare varietate de emolienţi adecvaţi sunt cunoscuţi şi pot fi utilizaţi aici. Vezi, de exemplu, Sagarin, Cosmetics, Science and Technology, Ediţia a II-a, Vol. 1, pp. 32-43 (1972), şi brevetul U.S. 4.919.934, al lui Deckner şi colab., eliberat la 24 aprilie 1990, ambele fiind încorporate aici ca referinţă în întregime. Compoziţiile farmaceutice topice pot conţine, de asemenea, antioxidanţi adecvaţi, substanţe cunoscute că inhibă oxidarea. Antioxidanţii adecvaţi pentru utilizare în conformitate cu prezenta invenţie includ, dar nu se limitează la, hidroxitoluen butilat, acid ascorbic, ascorbat de sodiu, ascorbat de calciu, palmitat ascorbic, hidroxianisol butilat, 2,4,5-trihidroxibutirofenonă, 4-hidroximetil- 2,6-di-tert-butil fenol, acid eritorbic, gumă guaiac, propil galat, acid tiodipropionic, dilauril tiodipropionat, tert-butil hidrochinonă şi tocoferoli precum vitamina E, şi asemănător, inclusiv sărurile şi esterii acceptabili farmaceutic ai acestor compuşi. De preferinţă, antioxidantul este hidroxitoluen butilat, hidroxianisol butilat, galat de propil, acid ascorbic, săruri sau esteri ai acestora acceptabili farmaceutic sau amestecuri ale acestora. Cel mai preferabil, antioxidantul este hidroxitoluen butilat. Compoziţiile farmaceutice topice pot conţine, de asemenea, conservanţi adecvaţi. Conservanţii sunt compuşi adăugaţi la o formulare farmaceutică pentru a acţiona ca un agent antimicrobian. Printre conservanţii cunoscuţi în domeniu ca fiind eficienţi şi acceptabili în formulările parenterale sunt clorură de benzalconiu, benzetoniu, clorhexidină, fenol, m-crezol, alcool benzilic, metilparaben, propil paraben, clorbutanol, o-crezol, p-crezol, clorocrezol, nitrat fenilmercuric. , timerosal, acid benzoic şi diverse amestecuri ale acestora. Vezi, de exemplu, Wallhausser, K.-H., Develop. Biol. Standard, 24:9-28 (1974) (S. Krager, Basel). Compoziţiile farmaceutice topice pot cuprinde, de asemenea, agenţi de chelare adecvaţi pentru a forma complecşi cu cationi metalici care nu traversează un strat dublu lipidic. Exemple de agenţi de chelare adecvaţi includ acid etilen diamin tetraacetic (EDTA), acid etilen glicol-bis(beta-aminoetil eter)-N,N,N',N'-tetraacetic (EGTA) şi acid 8-amino-2-[(2)-amino-5-metilfenoxi)metil]-6-metoxichinolin-N,N,N',N'-tetraacetic, sare tetrapotasică (QUIN-2).Preferabil, agenţii de chelare sunt EDTA şi acid citric. \tabCompoziţiile farmaceutice topice pot cuprinde, de asemenea, agenţi de neutralizare adecvaţi utilizaţi pentru a ajusta pH-ul formulării într-un interval acceptabil farmaceutic. Exemple de agenţi de neutralizare includ, dar nu se limitează la, trolamină, trometamina, hidroxid de sodiu, acid clorhidric, acid citric şi acid acetic. Compoziţiile farmaceutice topice pot conţine, de asemenea, agenţi de creştere a vâscozităţii adecvaţi. Aceste componente sunt compuşi difuzibili capabili să crească vâscozitatea unei soluţii care conţine polimer prin interacţiunea agentului cu polimerul. Carbopol Ultrez 10 poate fi utilizat ca agent de creştere a vâscozităţii. Formele lichide, cum ar fi loţiunile adecvate pentru administrare topică, pot include un vehicul apos sau neapos adecvat cu tampoane, agenţi de suspendare şi distribuire, agenţi de îngroşare, amplificatori de penetrare, şi asemănător. Formele solide precum creme sau paste sau altele asemenea pot include, de exemplu, oricare dintre următoarele ingrediente, apă, ulei, alcool sau grăsime ca substrat cu surfactant, polimeri precum polietilen glicol, agenţi de îngroşare, solide şi asemănător. Formulările lichide sau solide pot include tehnologii de livrare îmbunătăţite, cum ar fi lipozomi, microzomi, microbureţi şi asemănător. În plus, compuşii pot fi eliberaţi utilizând un sistem cu eliberare susţinută, cum ar fi matrici semipermeabile de polimeri hidrofobi solizi care conţin agentul terapeutic. Au fost stabilite diverse materiale cu eliberare susţinută şi sunt bine cunoscute de specialiştii în domeniu. Atunci când este formulat pentru aplicare topică, compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, poate fi prezent între 0,1 şi 50% în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,1 şi 25 % în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,1 şi 10 % în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,25 şi 5 % în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,25 şi 2 % în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,25 şi 1 % în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent între 0,05 şi 0,5% în greutate. În unele exemple de realizare, compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este prezent la aproximativ 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 sau 10 % în greutate. În unele exemple de realizare, compoziţia farmaceutică care cuprinde compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, mai cuprinde unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari. În unele exemple de realizare, unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari sunt utili pentru a trata o boală autoimună a pielii. în unele exemple de realizare, unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari sunt utili pentru a trata o boală inflamatorie a pielii. În unele exemple de realizare, unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari sunt utili pentru tratarea dermatitei atopice. În unele exemple de realizare, unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari sunt utili pentru a trata alopecia areata. Clasa specifică de compuşi sau compuşi specifici care pot fi combinaţi cu compusul (I) într-o compoziţie farmaceutică sunt exemplificate în paragrafele ulterioare. Următoarele exemple nelimitative ilustrează compoziţiile farmaceutice reprezentative ale prezentei invenţii.
Formă de dozare comprimat oral solid
Compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este amestecat uscat cu celuloză microcristalină, polivinil pirolidonă şi croscarmeloză de sodiu într-un raport de 4:5:1:1 şi comprimat în tablete pentru a oferi o doză unitară, de exemplu, 5 mg, 20 mg sau 40 mg agent activ per comprimat.
Formă de dozare capsulă orală solidă
Compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este combinat cu celuloză microcristalină, polivinil pirolidonă şi crosscarmeloză de sodiu într-un raport de 4:5:1:1 prin granulare umedă şi încărcat în capsule de gelatină sau hidroxipropil metilceluloză pentru a furniza o doză unitară de, de exemplu, 5 mg, 20 mg sau 40 mg agent activ per capsulă.
Formulare lichidă
O formulare lichidă cuprinzând compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic (0,1 %), apă (98,9 %) şi acid ascorbic (1,0 %) se formează prin adăugarea unui compus conform invenţiei, sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, la un amestec de apă şi acid ascorbic.
Formă de dozare orală acoperită enteric
Compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, este dizolvat într-o soluţie apoasă care conţine polivinil pirolidonă şi acoperit prin pulverizare pe microcristalină +celuloză sau granule de zahăr într-un raport de 1:5 g/g agent activ: granule şi apoi o creştere de aproximativ 5 % în greutate a unei acoperiri enterice care cuprinde un copolimer acrilic, de exemplu o combinaţie de copolimeri acrilici disponibili sub denumirile comerciale Eudragit-L® şi Eudragit-S®, sau succinat de acetat de hidroxipropil metilceluloză. Granulele acoperite enteric sunt încărcate în capsule de gelatină sau hidroxipropil metilceluloză pentru a furniza o unitate de dozare de, de exemplu, 30 mg de agent activ per capsulă.
Formă de dozare orală acoperită enteric
O acoperire enterică care cuprinde o combinaţie de Eudragit-L® şi Eudragit-S® sau succinat de acetat de hidroxipropil metilceluloză este aplicată pe o formă de dozare comprimat oral sau o formă de dozare capsule orale descrisă mai sus.
Formulare de unguent pentru administrare topică
Compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este combinat cu petrolatum, trigliceridă C8-C10, octilhidroxistearat şi N-metilpirolidonă într-un raport pentru a furniza o compoziţie care conţine 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare de unguent pentru administrare topică
Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este combinat cu petrolatum, trigliceridă C8-C10, octilhidroxistearat, alcool benzilic şi N-metilpirolidonă într-un raport pentru a oferi o compoziţie care conţine 0,05 % până la 5 % din agent activ în greutate.
Formulare de unguent pentru administrare topică
Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este combinat cu petrolatum alb, propilen glicol, mono- şi di-gliceride, parafină, hidroxitoluen butilat şi edetat de calciu disodic într-un raport care să asigure o compoziţie care conţine 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare de unguent pentru administrare topică
Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic este combinat cu ulei mineral, parafină, carbonat de propilenă, vaselină albă şi ceară albă pentru a furniza o compoziţie care conţine 0,05% până la 5% agent activ în greutate.
Formulare cremă pentru administrare topică
Uleiul mineral este combinat cu Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, propilen glicol, palmitat de izopropil, polisorbat 60, alcool cetilic, monostearat de sorbitan, stearat de polioxil 40, acid sorbic, metilparaben şi propil paraben pentru a forma o fază uleioasă, care este combinată cu apă purificată prin amestecare prin forfecare pentru a furniza o compoziţie care conţine 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare cremă pentru administrare topică
O formulare de cremă cuprinzând Compusul (I) sau sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, alcool benzilic, alcool cetilic, acid citric anhidru, mono şi di-gliceride, alcool oleilic, propilen glicol, cetostearil sulfat de sodiu, hidroxid de sodiu, alcool stearilic, trigliceride şi apă conţin 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare cremă pentru administrare topică
O formulare de cremă cuprinzând compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, alcool cetostearilic, miristat de izopropil, propilenglicol, cetomacrogol 1000, dimeticonă 360, acid citric, citrat de sodiu şi apă purificată, cu imidureea, metilparabenul şi propil parabenul, ca conservanţi, conţin 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare cremă pentru administrare topică
O formulare de cremă care cuprinde Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, acid stearic, alcool cetostearilic, palmitat de izopropil, octilhidroxistearat, BRIJ S2 (PEG 2 Stearil Eter), BRIJ S20 (PEG 20 Stearil Eter). ), N-Metilpirolidină, PEG şi apă conţine 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Formulare cremă pentru administrare topică
O formulare de cremă care cuprinde Compusul (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, acid stearic, alcool cetostearilic, palmitat de izopropil, octilhidroxistearat, BRIJ S2 (PEG 2 Stearil Eter), BRIJ S20 (PEG 20 Stearil Eter). ), N-Metilpirolidină, PEG400 şi apă conţin 0,05 % până la 5 % agent activ în greutate.
Utilitate
Compusul (I) s-a dovedit a fi un inhibitor puternic al familiei de enzime JAK: JAK1, JAK2, JAK3 şi TYK2. Inhibarea familiei de enzime JAK ar putea inhiba semnalizarea multor citokine proinflamatorii cheie. Astfel, este de aşteptat ca compusul (I) să fie util în tratamentul bolilor inflamatorii cum ar fi bolile inflamatorii gastrointestinale, bolile inflamatorii şi pruriginoase ale pielii, bolile inflamatorii oculare şi bolile respiratorii inflamatorii.
Boala inflamatorie a pielii
Dermatita atopică a fost asociată cu creşterea citokinelor proinflamatorii care se bazează pe calea JAK-STAT, în special IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 şi IFNy. Deoarece compusul (I) prezintă o inhibare puternică la toate cele patru enzime JAK, este de aşteptat să inhibe puternic citokinele proinflamatorii caracteristice dermatitei atopice şi altor boli inflamatorii ale pielii. Compusul (I) a arătat, de asemenea, aici că prezintă o valoare pIC50 de 7,8 pentru inhibarea TARC indusă de TSLP în testul 4. Compusul (I) a prezentat o valoare pIC50 de 8,5 pentru inhibarea fosforilării STAT6 induse de IL-13 în testele celulare descrise în Testul 2. Compusul (I) a prezentat, de asemenea, o valoare pIC50 de 8,3 pentru inhibarea fosforilării STAT6 induse de IL-13 în cheratinocite epidermice umane normale în Testul 13. În plus, formulările model de cremă şi unguent ale compusului (I) din Testul 6 au demonstrat semnificativ expunere a compusului în straturile epidermei şi dermei la miniporci fără expunere detectabilă cu plasmă. Într-un test farmacodinamic ex vivo folosind pielea umană proaspăt excizată, s-a demonstrat că compusul (I) inhibă expresia genei CXCL10 şi CCL2. Compusul (I) s-a arătat că prezintă o bună permeabilitate într-un test pe piele umană. Compusul (I) a inhibat, de asemenea, producţia de pSTAT3 indusă de IL-31 cu 80% într-un model in vivo din Testul 9. În final, compusul (I) a prezentat un efect dependent de doză într-un model de dermatită de contact iritantă indusă de TPA la şoareci în testul 10.
S-a demonstrat, de asemenea, că compusul (I) prezintă o valoare pIC50 de 8,4 pentru inhibarea fosforilării STAT5 induse de IL-2 în testele celulare descrise în Testul 11, o valoare pIC50 de 7,2 pentru inhibarea fosforilării STAT4 induse de IL-12. În celulele T CD3+ umane din Testul 12, o valoare pIC50 de 8,4 pentru inhibarea fosforilării STAT3 induse de IL-22 în cheratinocite epidermice umane normale în Testul 14. În cele din urmă, recuperarea compusului (I) pentru interleukina-22 (IL-22) a suprimat Expresia filagrinei a fost observată la o concentraţie < 1 µM. IL-12, IL-22 şi IL-23 sunt citokine implicate în psoriazis (Baliwag şi colab., Cytokine, 2015, 73(2), 342-350 2015). Aceste citokine semnalizează prin enzimele JAK2 şi Tyk2 (Ishizaki şi colab., J. Immunol., 2011, 187, 181-189). Terapiile cu anticorpi care vizează aceste citokine au demonstrat utilitatea clinică în psoriazis (Schadler şi colab., Disease-a-Month, 2018, 1-40). Un inhibitor topic de JAK care poate bloca aceste citokine ar fi de aşteptat să fie eficient în această boală. Deoarece aceste citokine semnalizează prin Tyk2 şi JAK2, este de aşteptat ca compusul (I) să aibă activitate în această boală.
Este de aşteptat ca nivelurile dermice susţinute ale inhibitorilor JAK în absenţa unor niveluri sistemice semnificative să aibă ca rezultat o activitate antiinflamatoare şi antipruriginică locală puternică în piele, fără efecte adverse determinate de sistem. Se aşteaptă ca astfel de compuşi să fie benefici într-un număr de afecţiuni inflamatorii sau pruriginoase dermice care includ, dar nu se limitează la, dermatită atopică, vitiligo, limfom cutanat cu celule T şi subtipuri (sindromul Sezary, micoza fungoide, reticuloza pagetoidă, piele moale granulomatoasă, limfomatoid papuloză, pitiriazis lichenoid cronic, pitiriazis lichenoid şi varioliformis acuta, limfom cutanat CD30+ cu celule T, limfom cutanat secundar CD30+ cu celule mari, fungoide non-micoză CD30- limfom cutanat cu celule T mari, limfom T pleomorf, limfom Lennert, limfom subcutanat cu cellule T, limfom angiocentric, limfom blastic cu celule NK), prurigo nodularis, lichen plan, dermatită de contact, eczemă dishidrotică, eczemă, dermatită numulară, dermatită seboreică, dermatită de stază, amiloidoză cutanată primară localizată, manifestări cutanate ale bolii grefă versus gazdă, pemidozei. boala gazdei, pemfigoid, lupus discoid, granulom inelar, lichen simplex cronic, prurit, prurit vulvar/scrotal/perianal, lichen scleros, mâncărime post nevralgie herpetică, lichen planopilar, psoriazis şi foliculită decalvană. În particular, dermatita atopică (Bao şi colab., JAK-STAT, 2013, 2, e24137), alopecia areata (Xing şi colab., Nat Med. 2014, 20, 1043-1049) care include subtipuri precum alopecia areata monolocularis, alopecia areata multilocularis, ophiasis, alopecia areata universalis, alopecia areata totalis şi alopecia areata barbae, vitiligo (Craiglow şi colab., JAMA Dermatol. 2015, 151, 1110-1112), limfom cutanat cu celule T (Netchiporouk şi colab., Cell2014 Cycle. 13, 3331-3335), prurigo nodularis (Sonkoly şi colab., J Allergy Clin Immunol. 2006, 117, 411-417), lichen plan (Welz-Kubiak şi colab., J ImmunolRes. 2015, ID:8547), amiloidoza cutanată primară localizată (Tanaka şi colab., Br J Dermatol. 2009, 161, 1217-1224), pemfigoid bulos (Feliciani şi colab., Int JImmunopathol Pharmacol. 1999, 12, 55-61) şi manifestări dermice ale bolii grefă versus gazdă (Okiyama şi colab., J Invest Dermatol. 2014, 134, 992-1000) sunt caracterizate prin creşterea anumitor citokine care semnalează prin activarea JAK. În consecinţă, compusul (I) poate fi capabil să atenueze inflamaţia dermică asociată sau pruritul determinat de aceste citokine. În particular, compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, este de aşteptat să fie util pentru tratamentul dermatitei atopice şi a altor boli inflamatorii ale pielii.
Aşa cum este ilustrat în Tabelul 13, s-a arătat că compusul (I) are clearance mare în microzomii umani. Ca atare, are avantajul de a fi eliminat rapid, ceea ce minimizează expunerea sistemică şi reduce riscul de efecte adverse.
Aşa cum este ilustrat în Tabelul 13, compusul (I) posedă de asemenea o permeabilitate ridicată, care este benefică pentru indicaţiile pielii, deoarece pare a fi conectat cu o mai bună penetrare în piele.
Prin urmare, în unele exemple de realizare, invenţia furnizează un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea unei boli inflamatorii sau autoimune a pielii la un mamifer (de exemplu, un om), cuprinzând aplicarea unei compoziţii farmaceutice care cuprinde compusul (I) sau un sare acceptabilă farmaceutic a acestuia şi un purtător farmaceutic pentru pielea mamiferului.
În unele exemple de realizare, boala inflamatorie a pielii este dermatita atopică. În unele exemple de realizare, dermatita atopică este uşoară până la moderată. În unele exemple de realizare, dermatita atopică este moderată până la severă.
În unele exemple de realizare, boala autoimună a pielii este alopecia areata.
Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi de asemenea utilizat în combinaţie cu unul sau mai mulţi compuşi utili pentru tratarea bolilor inflamatorii ale pielii. În unele exemple de realizare, unul sau mai mulţi compuşi sunt un steroid, corticosteroid, antibiotic, antagonist al receptorului histamină HI, inhibitor al calcineurinei, antagonist IL-13, inhibitor PDE4, antagonist al receptorului 44 cuplat cu proteina G, antagonist IL-4, antagonistul receptorului al 5-HT 1a, antagonist al receptorului 5-HT 2b, agonist al receptorului alfa 2, antagonist al receptorului canabinoid CB1, antagonistul receptorului canabinoid CB1, chemokină CCR3, antagonist, inhibitor al colagenazei, inhibitor al fosfolipazei citosolice A2, , inhibitor al ligandului eotaxina, inhibitor al factorului de transcriptie GATA 3, antagonist receptorului Histamina H4, antagonist IL-10, antagonist IL-12, antagonist IL-17, antagonist IL-2, antagonist IL-23, modulator al receptorului IL-4, antagonist IL-15, antagonist IL-6, antagonist IL-8, antagonist IL-9, antagonist IL-5, antagonist al imunoglobulinei E, modulator al imunoglobulinei E, inhibitor al receptorului eotaxină ligandistamină, inhibitor al factorului HATA 3 al transcripţiei HATA 3 antagonist IL-10, antagonist IL-12, antagonist IL-17, antagonist IL-2, antagonist IL-23, modulator al receptorului IL-4, antagonist IL-15, antagonist IL-6, antagonist IL-8, antagonist IL-9 , antagonist IL-5, antagonist al imunoglobulinei E, modulator al imunoglobulinei E, antagonist al receptorului interferon gama, ligand interferon gama, inhibitor al ligandului interleukinei 33, antagonist al receptorului interleukinei-31, antagonist al leucotrienelor, agonist al receptorului hepatic X, receptor beta agonist al receptorului hepatic X, inhibitor al factorului nuclear kapa B, antagonist al receptorului OX-40, antagonist PGD2, inhibitor al fosfolipazei A2, stimulator al inozitol fosfatazei 1 în domeniul SH2, inhibitor al ligandului limfoproteinei stromale timice, modulator TLR, modulator al ligandului alfa TNF, stimulator al genei TLR9, stimulator citotoxic al proteinei limfocitelor T-4, agonist al receptorului opioid kappa, inhibitor al galectin-3, inhibitor al histon deacetilază-1, inhibitor al histon deacetilază-2, inhibitor al histon deacetilază-3, inhibitor al histon deacetilază-6, inhibitor al histon deacetilază, agonist glucocorticoid, inhibitor al tirozin kinazei Syk, antagonist al receptorului TrkA, antagonist al integrinei alfa-4/beta-1, antagonist al receptorului interleukina 1,inhibitor al enzimei de conversie a interleukinei-1, antagonist al receptorului interleukina-31, inhibitor al genei KCNA din canalului de potasiu 3, inhibitor al genei PDE4B, Inhibitor al kalicreinei 2, agonist al receptorului-1 al sfingozin-1-fosfat, stimulator al proteinei epiteliului pigmentar retinian, inhibitor al glicoproteinei CD28 de suprafaţă a celulelor T, antagonist beta TGF sau antagonist VR1 vaniloid.
În unele exemple de realizare, compusul (I) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia este administrat în combinaţie cu betametazonă, acid fucidic, GR-MD-02, dupilumab, acetat de rosiptor, AS-101, ciclosporină, IMD-0354, secukinumab, Actimmune, lebrikizumab, CMP-001, mepolizumab, pegcantratinib, tezepelumab, MM-36, crisaborol, ALX-101, bertilimumab, FB-825, AX-1602, BNZ-1, abatacept, tacrolimus,
ANB-020, JTE-052, ZPL-389, ustekinumab, GBR-830, GSK-3772847, ASN-002, remetinostat, apremilast, timapiprant, MOR-106, asivatrep, nemolizumab, fevipiprant, doxiciclina, MDPK-67b, desloratadine, tralokinumab, fexofenadina, pimecrolimus, bepotastina, nalfurafina, VTP-38543, Q-301, ligelizumab, RVT-201, DMT-210, KPI-150, AKP-11, E-6005, AMG-0101, AVX-001, PG-102, ZPL-521, MEDI-9314, AM-1030, WOL-071007, MT-0814, valerat de betametazona, SB-011, epinastina, tacrolimus, tranilast, sau viromed, sau orice combinaţie a acestora.
În unele exemple de realizare, compusul (I) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia este administrat în combinaţie cu un steroid, un antibiotic şi un hidratant (Lakhani şi colab., Pediatric Dermatology, 2017, 34, 3, 322-325). În unele exemple de realizări, unul sau mai mulţi compuşi sunt un antibiotic gram pozitiv, cum ar fi mupirocina sau acidul fusidic.
Compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, poate fi, de asemenea, utilizat în combinaţie cu antibiotice gram pozitive, cum ar fi mupirocina şi acidul fusidic, pentru a trata bolile inflamatorii ale pielii. Într-un aspect, prin urmare, invenţia furnizează o metodă de tratare a unei boli inflamatorii de piele la un mamifer, metoda cuprinzând aplicarea unui compus conform invenţiei, sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, şi a unui antibiotic gram pozitiv pe pielea mamiferului. Într-un alt aspect, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde un compus al invenţiei, sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, un antibiotic gram pozitiv şi un purtător acceptabil farmaceutic.
Într-un alt aspect, aşadar, invenţia furnizează combinaţie terapeutică pentru utilizare în tratamentul afecţiunilor inflamatorii ale pielii, combinaţia cuprinzând compusul (I) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia şi unul sau mai mulţi alţi agenţi terapeutici utili pentru tratarea tulburărilor inflamaţiei pielii. Agenţii secundari, atunci când sunt incluşi, sunt prezenţi într-o cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic, adică în orice cantitate care produce un efect benefic din punct de vedere terapeutic atunci când este administrat concomitent cu compusul (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
Prin urmare, este furnizată, de asemenea, o compoziţie farmaceutică care cuprinde compusul (I) sau o sare farmaceutică a acestuia şi unul sau mai mulţi alţi agenţi terapeutici utili pentru tratarea tulburărilor inflamatorii ale pielii.
În plus, într-un aspect al metodei, invenţia furnizează un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea afecţiunilor inflamatorii ale pielii, utilizarea cuprinzând administrarea la mamifer a Compusului (I) sau a unei sări acceptabile farmaceutic a acestuia, şi a unuia sau a mai multor alţi agenţi terapeutici utili pentru tratarea afecţiunilor inflamatorii ale pielii.
Boală inflamatorie gastrointestinală
Datorită inhibării familiei de enzime JAK, este de aşteptat ca compusul (I) să fie util pentru o varietate de indicaţii inflamatorii gastrointestinale care includ, dar nu se limitează la, colita ulceroasă (proctosigmoidita, pancolită, proctită ulcerativă, colita lateral stângă), boala Crohn, colita colagenă, colita limfocitară, boala Behcet, boala celiacă, colita indusă de inhibitori ai punctelor de control imun, ileita, esofagită eozinofilă, colita legată de boala grefă versus gazdă şi colita infecţioasă. Colita ulcerativă (Reimund şi colab., J Clin Immunology, 1996, 16, 144-150), boala Crohn (Woywodt şi colab., Eur J Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), colita colagenoasă (Kumawat şi colab. , Mol Immunology, 2013, 55, 355-364), colita limfocitară (Kumawat şi colab., 2013), esofagita eozinofilă (Weinbrand-Goichberg şi colab., Immunol Res, 2013, 56, 249-260), colita asociată bolii grefă versus gazdă (Coghill şi colab., Blood, 2001, 117, 3268-3276), colita infecţioasă (Stallmach şi colab., Int J Colorectal Dis, 2004, 19, 308-315), boala Behcet (Zhou şi colab., Autoimmun Rev, 2012, 11, 699-704), boala celiacă (de Nitto şi colab., World J Gastroenterol, 2009, 15, 4609-4614), colită indusă de inhibitor al punctului de control imun (de exemplu, colită indusă de inhibitor CTLA-4); (Yano şi colab., J Translation Med, 2014, 12, 191), colita indusă de inhibitori PD-1 sau PD-L1) şi ileita (Yamamoto şi colab., Dig Liver Dis, 2008, 40, 253-259) sunt caracterizate prin creşterea anumitor niveluri de citokine proinflamatorii. Deoarece multe citokine proinflamatorii semnalează prin activarea JAK, compuşii descrişi în această cerere pot fi capabili să atenueze inflamaţia şi să ofere ameliorarea simptomelor.
Prin urmare, în unele exemple de realizare, dezvăluirea furnizează un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea unei boli inflamatorii gastrointestinale la un mamifer (de exemplu, un om), cuprinzând administrarea la mamifer a unei compoziţii farmaceutice care cuprinde un purtător acceptabil farmaceutic şi un compus (I) sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
În unele exemple de realizare, dezvăluirea furnizează un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea unei boli inflamatorii gastrointestinale la un mamifer (de exemplu, un om), cuprinzând administrarea compusului (I) la mamifer sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic.
Invenţia furnizează în plus un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea colitei ulceroase la un mamifer, metoda cuprinzând administrarea la mamifer a unui compus conform invenţiei, sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, sau o compoziţie farmaceutică care cuprinde un purtător acceptabil farmaceutic şi un compus al invenţiei, sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
Când este utilizat pentru a trata colita ulceroasă, compusul conform invenţiei va fi administrat în mod tipic oral într-o singură doză zilnică sau în doze multiple zilnice, deşi pot fi utilizate alte forme de administrare. Cantitatea de agent activ administrată per doză sau cantitatea totală administrată pe zi va fi determinată în mod obişnuit de către un medic, în lumina circumstanţelor relevante, inclusiv a afecţiunii care trebuie tratată, calea de administrare aleasă, compusul administrat efectiv şi activitatea relativă a acestuia, vârsta, greutatea şi răspunsul individual al pacientului, severitatea simptomelor pacientului şi asemănător.
Se aşteaptă ca dozele adecvate pentru tratarea colitei ulcerative şi a altor afecţiuni inflamatorii gastrointestinale să varieze de la aproximativ 1 la aproximativ 400 mg/zi de agent activ, inclusiv de la aproximativ 5 la aproximativ 300 mg/zi şi de la aproximativ 20 la aproximativ 70 mg per zi de agent activ pentru un om mediu de 70 kg.
Compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, poate fi, de asemenea, utilizat în combinaţie cu unul sau mai mulţi agenţi care acţionează prin acelaşi mecanism sau prin mecanisme diferite pentru a efectua tratamentul tulburărilor inflamatorii gastrointestinale. Clasele utile de agenţi pentru terapia combinată includ, dar nu se limitează la, aminosalicilaţi, steroizi, imunosupresoare sistemice, anticorpi anti-TNFa, anticorpi anti-VLA-4, anticorpi anti-integrină α4β7, agenţi antibacterieni şi medicamente anti-diareice.
Aminosalicilaţii care pot fi utilizaţi în combinaţie cu compusul (I) includ, dar nu sunt limitaţi la, mesalamină, osalazină şi sulfasalazină. Exemplele de steroizi includ, dar nu se limitează la, prednison, prednisolon, hidrocortizon, budesonid, beclometazonă şi fluticazonă. Imunosupresoarele sistemice utile pentru tratamentul tulburărilor inflamatorii includ, dar nu se limitează la, ciclosporină, azatioprină, metotrexat, 6-mercaptopurină şi tacrolimus. Mai mult, anticorpii anti-TNFa, care includ, dar nu se limitează la, infliximab, adalimumab, golimumab şi certolizumab, pot fi utilizaţi în terapia combinată. Compuşii utili care acţionează prin alte mecanisme includ anticorpi anti-VLA-4, cum ar fi natalizumab, anticorpi anti-integrină α4β7, cum ar fi vedolizumab, agenţi anti-bacterieni, cum ar fi rifaximina şi medicamente anti-diareice, cum ar fi loperamida. (Mozaffari et al. Expert Opin. Biol. Ther.2014, 14, 583-600; Danese, Gut, 2012, 61, 918-932; Lam şi colab., Immunotherapy, 2014, 6, 963-971).
Într-un alt aspect, aşadar, invenţia furnizează o combinaţie terapeutică pentru utilizare în tratamentul afecţiunilor inflamatorii gastrointestinale, combinaţia cuprinzând un compus al invenţiei, sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi unul sau mai mulţi alţii agenţi terapeutici utili pentru tratarea tulburărilor inflamatorii gastrointestinale. De exemplu, invenţia furnizează o combinaţie cuprinzând un compus al invenţiei, sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic, şi unul sau mai mulţi agenţi selectaţi dintre aminosalicilaţi, steroizi, imunosupresoare sistemice, anticorpi anti-TNFa, anticorpi anti-VLA-4, anticorpi anti-integrină α4β7, agenţi antibacterieni şi medicamente anti-diareice. Agentul/Agenţii secundari, atunci când este/sunt incluşi, sunt prezenţi într-o cantitate eficientă din punct de vedere terapeutic, adică în orice cantitate care produce un efect benefic din punct de vedere terapeutic atunci când este co-administrat cu un compus al invenţiei, sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
De asemenea, este furnizată, prin urmare, o compoziţie farmaceutică cuprinzând compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi unul sau mai mulţi alţi agenţi terapeutici utili pentru tratarea tulburărilor inflamatorii gastrointestinale.
Afectiuni respiratorii
Citokine care semnalizează prin calea JAK-STAT, în special IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-13, IL-23 , IL-31, IL-27, limfopoietina stromală timică (TSLP), interferon-y (IFNy) şi factorul de stimulare a coloniilor granulocite-macrofage (GM-CSF) au fost implicate în inflamaţia astmului şi în alte boli respiratorii inflamatorii. Aşa cum s-a descris mai sus, s-a demonstrat că Compusul (I) este un inhibitor puternic al kinazelor JAK şi a demonstrat o inhibare puternică a citokinelor proinflamatorii IL-13 în testele celulare.
Activitatea antiinflamatoare a inhibitorilor JAK a fost puternic demonstrată în modelele preclinice de astm bronşic (Malaviya şi colab., Int Immunopharmacol, 2010, 10, 829,-836; Matsunaga şi colab., Biochem şi Biophys Res Commun, 2011). , 404, 261-267; Kudlacz şi colab., Eur J Pharmacol, 2008, 582, 154-161.) În consecinţă, compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, poate fi utilă pentru tratamentul tulburărilor respiratorii inflamatorii precum astmul. Inflamaţia şi fibroza plămânului sunt caracteristice altor boli respiratorii, în plus faţă de astm, cum ar fi boala pulmonară obstructivă cronică (BPOC), fibroza chistică (FC), pneumonia, bolile pulmonare interstiţiale (inclusiv fibroza pulmonară idiopatică), leziunea pulmonară acută, leziunea respiratorie acută, sindrom de detresă respiratoiey acută, bronşită, emfizem şi bronşiolită obliterantă. Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, prin urmare, poate fi util pentru tratamentul bolii pulmonare obstructive cronice, fibrozei chistice, pneumoniei, bolilor pulmonare interstiţiale (inclusiv fibroza pulmonară idiopatică), leziunii pulmonare acute, sindromului de detresă respiratorie acută, bronşitei, emfizemului, bronşiolitei obliterante, disfuncţiei cronice de alogrefă pulmonară (CLAD), respingerii transplantului pulmonar şi sarcoidozei.
Într-un aspect, prin urmare, dezvăluirea furnizează o metodă de tratare a unei boli respiratorii la un mamifer (de exemplu, un om) cuprinzând administrarea la mamifer de compus (I), sau sarea acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
Într-un aspect, boala respiratorie este astmul, boala pulmonară obstructivă cronică, fibroza chistică, pneumonita, boala pulmonară obstructivă cronică (BPOC), fibroza chistică (FC), pneumonita, bolile pulmonare interstiţiale (inclusiv fibroza pulmonară idiopatică), leziune pulmonară acută, sindrom de detresă respiratorie acută, bronşită, emfizem, bronşiolită obliterantă, rinită alergică sau sarcoidoză. Într-un alt aspect, boala respiratorie este astmul sau boala pulmonară obstructivă cronică.
Într-un alt aspect, boala respiratorie este o infecţie pulmonară, o infecţie helmintică, hipertensiune arterială pulmonară, sarcoidoză, limfangioleiomiomatoză, bronşiectazie sau o boală pulmonară infiltrativă. În încă un alt aspect, boala respiratorie este pneumonita indusă de medicamente, pneumonia indusă fungic, aspergiloza bronhopulmonară alergică, pneumonia de hipersensibilitate, granulomatoza eozinofilă cu poliangeită, pneumonia eozinofilă acută idiopatică, pneumonia eozinofilă cronică idiopatică, sindromul hipereozinofilic, sindromul Löffler, bronşiolită obliterantă cu pneumonie organizatoare sau pneumonită indusă de un inhibitor imun al punctului de control.
Invenţia furnizează în plus un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea unei boli respiratorii, metoda cuprinzând administrarea la mamifer a unei compoziţii farmaceutice cuprinzând compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi un purtător acceptabil farmaceutic.
Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi, de asemenea, utilizat în combinaţie cu unul sau mai mulţi compuşi utili pentru bolile respiratorii.
Boli oculare
Multe boli oculare au fost asociate cu creşteri ale citokinelor proinflamatorii care se bazează pe calea JAK-STAT.
Prin urmare, compusul (I) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia poate fi util pentru tratamentul unui număr de boli oculare care includ, dar nu se limitează la, uveită, retinopatie diabetică, edem macular diabetic, boala ochiului uscat, degenerescenta maculara legata de varsta si keratoconjunctivita atopica.
În particular, uveită (Horai şi Caspi, J Interferon Cytokine Res, 2011, 31, 733-744), retinopatie diabetică (Abcouwer, J Clin Cell Immunol, 2013, Suppl 1, 1-12), edem macular diabetic ( Sohn şi colab., American Journal of Opthamology, 2011, 152, 686-694), boala ochiului uscat (Stevenson şi colab., Arch Ophthalmol, 2012, 130, 90-100), ocluzia venei retiniene (Shchuko şi colab., Indian Journal of Ophthalmology, 2015, 63(12), 905-911) şi degenerescenţa maculară legată de vârstă (Knickelbein şi colab., Int Ophthalmol Clin, 2015, 55(3), 63-78) sunt caracterizate prin creşterea anumitor citokine proinflamatorii care sunt semnalizate prin calea JAK-STAT. În consecinţă, compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi capabil să atenueze inflamaţia oculară asociată şi să inverseze progresia bolii sau să ofere ameliorarea simptomelor.
Într-un aspect, prin urmare, invenţia furnizează un compus cu formula (I) pentru utilizare în tratarea unei boli oculare la un mamifer cuprinzând administrarea compusului (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau a unei compoziţii farmaceutice care cuprinde compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi un purtător farmaceutic la ochiul mamiferului. Într-un aspect, boala oculară este uveita, retinopatia diabetică, edemul macular diabetic, boala ochiului uscat, degenerescenţa maculară legată de vârstă, sau keratoconjunctivita atopică. Într-un aspect, metoda cuprinde administrarea compusului (I) sau a unei sări acceptabile farmaceutic a acestuia prin injectare intravitreală.
Compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, poate fi de asemenea utilizat în combinaţie cu unul sau mai mulţi compuşi utili pentru bolile oculare.
Alte boli
Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi, de asemenea, util pentru tratarea altor boli, cum ar fi alte boli inflamatorii, boli autoimune sau cancere.
Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi util pentru tratarea cavităţilor bucale, a mucozitei bucale şi a stomatitei aftoase recurente.
Compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, poate fi util pentru a trata una sau mai multe dintre artrita, artrita reumatoidă, artrita reumatoidă juvenilă, respingerea transplantului, xeroftalmia, artrita psoriazică, diabetul, diabetul dependent de insulină, boala neuronului motor,
sindrom mielodisplazic, durere, sarcopenie, caşexie, şoc septic, lupus eritematos sistemic, leucemie, leucemie limfocitară cronică, leucemie mielocitară cronică, leucemie limfoblastică acută, leucemie mielogenă acută, spondilită anchilozantă, mielofibroză, limfom cu celule B, carcinoma hepatocelular, boala Hodgkins, cancer de sân, mielom multiplu, melanom, limfom non-Hodgkin, cancer de plămân cu celule non-mici, carcinom ovarian cu celule clare, tumoră ovariană, tumoră pancreasului, policitemie vera, sindrom Sjoegrens, sarcom de ţesut moale, sarcom, splenomegalie, limfom cu celule T şi talasemie majoră.
Dezvăluirea furnizează o astfel de metodă de tratare a acestor boli la un mamifer care cuprinde administrarea compusului (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau o compoziţie farmaceutică care cuprinde compusul (I), sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic şi un purtător acceptabil farmaceutic la mamifer.
În paragrafele anterioare, atunci când sunt utilizaţi în terapia combinată, agenţii pot fi formulaţi într-o singură compoziţie farmaceutică, aşa cum s-a dezvăluit mai sus, sau agenţii pot fi furnizaţi în compoziţii separate care sunt administrate simultan sau la momente separate, în timp prin aceiaşi sau prin diferite căi de administrare. Când sunt administraţi separat, agenţii sunt administraţi suficient de aproape în timp pentru a asigura efectul terapeutic dorit. Astfel de compoziţii pot fi ambalate separat sau pot fi ambalate împreună ca un kit. Cei doi sau mai mulţi agenţi terapeutici din kit pot fi administraţi pe aceeaşi cale de administrare sau pe căi diferite de administrare.
EXEMPLE
Următoarele exemple sintetice şi biologice sunt oferite pentru a ilustra invenţia şi nu trebuie interpretate în niciun fel ca limitând domeniul de aplicare al invenţiei. În exemplele de mai jos, următoarele abrevieri au următoarele semnificaţii, dacă nu se indică altfel. Abrevierile care nu sunt definite mai jos au semnificaţiile lor general acceptate.
ACN = acetonitril
Bn = benzil
Boc = tert-Butil oxicarbonil
d = zi(zile)
DIPEA= N,N-diizopropil etilamina
DMF = N,N-dimetilformamida
DMSO= dimetil sulfoxid
EtOAc = acetat de etil
EtOH= alcool etilic
h = oră(ore)
HATU= hexafluorofosfat de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uroniu
IPA = alcool izopropilic
MeOH = metanol
min = minut(minute)
NMP = N-metilpirolidona
RT = temperatura camerei
TEA = trietilamina
THF = tetrahidrofuran
TFA = acid trifluoroacetic
Reactivii şi solvenţii au fost achiziţionaţi de la furnizori comerciali (Aldrich, Fluka, Sigma etc.) şi utilizaţi fără purificare suplimentară. Progresul amestecurilor de reacţie a fost monitorizat prin cromatografie în strat subţire (TLC), cromatografie lichidă analitică de înaltă performanţă (anal. HPLC) şi/sau spectrometrie de masă. Amestecuri de reacţie au fost prelucrate aşa cum este descris în mod specific în fiecare reacţie; în mod obişnuit, acestea au fost purificate prin extracţie şi alte metode de purificare, cum ar fi cristalizarea şi precipitarea dependentă de temperatură şi solvent. În plus, amestecurile de reacţie au fost purificate în mod obişnuit prin cromatografie pe coloană sau prin HPLC preparativă, utilizând în mod obişnuit coloane C18 sau BDS împachetate şi eluanţi convenţionali. Condiţiile HPLC preparative tipice sunt descrise mai jos.
Caracterizarea produşilor de reacţie a fost efectuată în mod obişnuit prin spectrometrie de masă şi 1H-RMN. Pentru analiza RMN, probele au fost dizolvate în solvent deuterat (cum ar fi CD3OD, CDCl3, sau d6-DMSO), şi spectrele 1H-RMN au fost obţinute cu un instrument Varian Gemini 2000 (400 MHz) în condiţii standard de observare. Identificarea spectrometrică de masă a compuşilor a fost efectuată printr-o metodă de ionizare prin electrospray (ESMS) cu un instrument Applied Biosystems (Foster City, CA) model API 150 EX sau un instrument Waters (Milford, MA) 3100, cuplat la sisteme de autopurificare.
Dacă nu se indică altfel, s-au folosit următoarele condiţii pentru purificări HPLC preparativă.
Coloană: C18, 5 µm 21.2 × 150 mm sau C18, 5 µm 21 × 250 mm sau C14, 5 µm 21×150 mm Temperatura coloanei: Temperatura camerei Vikteza de curgere 20,0 mL/min Faza mobilă: A = apă + 0,05 % TFA B = ACN + 0,05 % TFA, Volumul injecţiei: (100-1500 µL) Lungimea de undă a detectorului: 214 nm
Compuşii bruti au fost dizolvaţi în apă:acid acetic 1:1 la aproximativ 50 mg/mL. A fost efectuată o rulare de testare la scară analitică de 4 minute utilizând o coloană C18 de 2,1 × 50 mm urmată de o rulare la scară preparativă de 15 sau 20 de minute folosind injecţie de 100 µL cu gradient bazat pe retenţia % B a testului la scară analitică. Gradienţii exacti au fost dependenţi de eşantion. Probele cu impurităţi cu timpi de eluare apropiaţi au fost verificate cu o coloană C18 de 21 × 250 mm şi/sau o coloană C14 de 21 × 150 mm pentru o separare optimă. Fracţiile care conţin produsul dorit au fost identificate prin analiză spectrometrică de masă.
Condiţiile analizei HPLC
Metoda A
Coloană: LUNA C18 (2), 150 × 4.60 mm, 3 µm Temperatura coloanei: 37 °C Viteza de curgere: 1,0 mL/min Volumul injecţiei: 5 µL Prepararea probei: Dizolvat în 1:1 ACN:apă Faza mobilă: A = Apă:ACN:TFA (98:2:0.05) B = Apă:ACN:TFA (2:98:0.05) Lungimea de unda a detectorului: 250 nm Gradient: 32 min total (timp (min)/ % B): 0/2, 10/20, 24/90, 29/90, 30/2, 32/2
Metoda B
Coloană:LUNA C18 (2), 150 × 4,60 mm, 3 µm Temperatura coloanei: 37 °C Viteza de curgere: 1,0 mL/min Volumul injecţiei: 10 µL Prepararea probei: Dizolvat în 1:1 ACN:apă Faza mobilă: A = Apă:ACN:TFA (98:2:0,05) B = Apă: ACN:TFA (10:90:0,05) Lungimea de unda a detectorului: 254 nm Gradient: 35 min total (timp (min)/ % B): 0/2, 20/25, 23/90, 26/90, 27/2, 35/2
Metoda C
Coloană: Poroshell 120 SB-Aq, 150mm pe 4,6mm, 2,7 micron parte #683975-914 Temperatura coloanei: 35 °C Viteza de curgere: 1,0 mL/min Volumul injecţiei: 5 µL Prepararea probei: Dizolvat în 50:MPB:50MPA Faza mobilă: A = Acetonitril:apă: acid Trifluoroacetic (1:99:0.20) B = Acetonitril:apă: acid Trifluoroacetic (90:10:0.20)
Gradient:
Timp, min %A %B 0,0 98,0 2,0 16,0 40,0 60,0 22,0 0,0 100,0 25,0 0,0 100,0 25,1 98,0 2,0 30,0 98,0 2,0
Preparatul 1: ((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)-carbamat de tert-butil
Etapa 1: Cinci reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-1 (2,00 kg, 13,7 mol, 1,00 echiv.) în dioxan (5,00 L) şi apă (20,0 L) s-a adăugat glutaraldehidă (2,06 kg, 20,5 mol, 1,5 echiv.) şi fenilmetanamină (1,54 kg, 14,4 mol, 1,05 echiv) prin picurare la 10 °C. După adăugare, amestecul de reacţie a fost agitat la 20°C timp de 16 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 5 : 1, produs Rf = 0,40) şi LCMS au indicat că reacţia a fost completă. Valoarea pH-ului amestecului de reacţie a fost ajustată la 2 cu HCI concentrat (12 N) la 20°C. După adăugare, amestecul de reacţie a fost încălzit la 60 °C şi agitat timp de 1 oră. După răcire la 10°C, la amestec s-a adăugat acetat de etil (10,0 L). Apoi valoarea pH-ului amestecului a fost ajustată la 10 prin adăugarea unei soluţii apoase de hidroxid de sodiu (12 N) la 10 °C. Amestecul a fost agitat timp de 10 min. Stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (3,00 L). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură (4,00 L), uscate pe sulfat de sodiu şi filtrate. Stratul organic pentru cele cinci reacţii paralele a fost combinat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie coloană (SiO2, eter de petrol : acetat de etil = 30 : 1 - 2 : 1) pentru a da compusul 1-2 (10,0 kg, 51,5% randament, 97% puritate). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C15H19NO 230,15 găsit 230,0. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 δ 7,24-7,41 (m, 5H), 3,88 (s, 2H), 3,20-3,21 (m, 2H), 2,73-2,79 (m, 2H), 2,07 (d, J = 16,4 Hz, 2H), 1,75-1,84 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 3H), 1,24-1,36 (m, 1H).
Etapa 2: Au fost efectuate trei reacţii în paralel. La o soluţie de compus 1-2 (3,00 kg, 13,1 mol, 1,0 echiv.) în acetat de etil (24,0 L) şi apă (9,00 L) s-a adăugat CH3COOK (2,05 kg, 20,9 mol, 1,6 echiv) şi NH2OH-HCI (1,82 kg, 26,2 mol, 2,0 echiv.) la 20 °C. Suspensia a fost încălzită la 45°C şi agitată timp de 16 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 2 : 1, produs Rf = 0,30) şi LCMS au indicat că reacţia a fost completă. Valoarea pH-ului suspensiei a fost ajustată la 8 cu soluţie saturată de bicarbonat de sodiu, apoi a fost diluată cu apă (15,0 L) şi acetat de etil (10,0 L). Stratul organic a fost separat. Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (10,0 L × 3). Stratul organic a celor trei reacţii a fost combinat, uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat. Produsul brut a fost diluat cu n-heptan (12,0 L) şi agitat timp de 12 ore. Solidul a fost colectat prin filtrare pentru a da compusul 1-3 (8,00 kg, randament 83,4%). (m/z): [M+H]+ calculat pentru C15H20N2O 245,16 găsit 245,1. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 10,16 (s, 1H), 7,22-7,38 (m, 5H), 3,83 (s, 2H), 2,97 (br s, 2H), 2,87 (d, J = 16,0 Hz, 1H) , 2,60-2,62 (m, 1 H), 2,20-2,25 (m, 1 H), 2,09-2,13 (m, 1 H), 1,72-1,85 (m, 3H), 1,39-1,49 (m, 3H).
Etapa 4: Patruzeci şi cinci de reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-3 (160 g, 655 mmol, 1,0 echiv.) în n-PrOH (3,20 L) la 110 °C s-a adăugat Na (181 g, 7,86 mol, 12 echiv.) în porţii timp de 3 ore. Amestecul a fost agitat la 110 °C timp de 2 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 2 : 1, SM Rf = 0,40) a indicat că reacţia a fost completă. Amestecul a fost răcit la 70 °C, turnat în apă cu gheaţă (4,00 L). Stratul apos a fost extras cu acetat de etil (1,00 L × 2). Stratul organic combinat al celor patruzeci şi cinci de reacţii a fost spălat cu saramură (20,0 L), uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost diluat cu n-hexan (12,0 L), agitat timp de 12 ore. Suspensia a fost filtrată pentru a obţine filtrat. Filtratul a fost concentrat pentru a da compusul 1-4 (6,00 kg, 88,4% randament) sub formă de ulei galben. 1H RMN 400 MHz DMSO-d6: 5 7,18-7,35 (m, 5H), 3,76 (s, 2H), 3,26-3,35 (m, 1H), 2,76 (s, 2H), 1,86-1,90 (m, 2H), 1,67-1,73 (m, 2H), 1,54-1,59 (m, 5H), 1,41-1,45 (m, 3H).
Etapa 5: Două reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-4 (2,10 kg, 9,12 mol, 1,1 echiv.) în dioxan (12,6 L) şi apă (1,26 L) s-a adăugat Et3N (1,01 kg, 10,0 mol, 1,1 echiv) şi (Boc)2O (2,19) kg, 10,0 mol, 1,1 echiv) prin picurare la 0 °C, cu temperatura sub 20 °C. Amestecul a fost încălzit la 40°C şi agitat timp de 10 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 2 : 1, produs Rf = 0,40) a arătat că reacţia a fost completă. Amestecul a fost răcit la 10 °C, filtrat pentru a obţine turtă de filtrare. Filtratul a fost concentrat. Turta de filtrare a fost spălată cu n-hexan (3,00 L) pentru a da compusul 1-5 (4,00 kg, randament 66,4%) ca un solid alb. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6: 5 7,28-7,33 (m, 4H), 7,19-7,22 (m, 1H), 6,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,10-4,17 (m, 1H), 3,77 (s, 2H), 2,77 (s, 2H), 1,88-1,90 (m, 2H), 1,72-1,75 (m, 3H), 1,57-1,61 (m, 3H), 1,43-1,48 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).
Etapa 6: Patru reacţii au fost efectuate în paralel. La o suspensie de compus 1-5 (1,50 kg, 4,54 mol, 1,0 echiv.) în DMF (13,5 L) s-a adăugat NaH (272 g, 6,81 moli, puritate 60%, 1,5 echiv.) în porţiuni la 0°C sub N2 . Suspensia a fost încălzită în mod natural la 25 °C şi agitată timp de 30 de minute. După ce s-a răcit la 0°C, Mel (773 g, 5,45 mol, 1,2 echiv.) a fost adăugat în picătură la suspensie. Amestecul de reacţie a fost încălzit în mod natural la 25 °C şi agitat timp de 12 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 5 : 1, produs Rf = 0,50) şi LCMS au arătat că reacţia a fost completă. Amestecul a fost turnat în apă cu gheaţă (30,0 L), extras cu acetat de etil (9,00 L, 3,00 L). Stratul organic combinat al celor patru reacţii a fost spălat cu apă cu gheaţă (20,0 L), saramură (10,0 L), uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat pentru a da compusul 1-6 (6,00 kg, brut) sub forma unui ulei galben. Produsul brut a fost utilizat pentru etapa următoare. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 7,21-7,37 (m, 5H), 4,87 (br s, 1 H), 3,80 (s, 2H), 2,86 (s, 2H), 2,68 (s, 3H), 1,64-1,99 (m, 6H), 1,40-1,49 (m, 13H). (m/z): [M+H]+ calculat pentru C21H32N2O2 344,25 găsit 345,2.
Etapa 7: Treizeci şi nouă de reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-6 (150 g, 435 mmol, 1,0 echiv.) în IPA (500 mL) şi THF (500 mL) s-a adăugat Pd(OH)2/C (70 g, puritate 40%). Suspensia a fost degazată sub vid şi purjată cu H2 de mai multe ori. Amestecul a fost agitat sub H2 (50 psi) la 25°C timp de 16 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 5 : 1, SM Rf = 0,50) şi LCMS au indicat că reacţia a fost completă. Cele treizeci şi nouă de reacţii au fost combinate. Amestecul a fost filtrat pentru a obţine filtrat. Turta de filtru a fost spălată cu IPA/THF (1:1, 25,0 L). Filtratul combinat a fost concentrat pentru a da compusul 1-7 (3,85 kg, brut) sub forma unui ulei galben deschis. Produsul brut a fost utilizat direct pentru etapa următoare. (m/z): [M+H]+ calculat pentru C14H26N2O2 255,20 găsit 255,1. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 4,88 (br s, 1 H), 3,08 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,73-1,76 (m, 5H), 1,51-1,61 (m, 5H), 1,39 (s, 9H). \tabEtapa 8: Patru reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-7 (750 g, 2,95 mol, 1,0 echiv.) în 2-metil tetrahidrofuran (3,00 L) s-a adăugat piridină (466 g, 5,90 mol, 2,0 echiv) şi clorură de etansulfonil (398 g, 3,10 mol, 1,05 echiv.) prin picurare la 0 °C sub N2. Amestecul a fost încălzit la 25°C şi agitat timp de 3 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 2 : 1, produs Rf = 0,50) a indicat că reacţia a fost completă. Cele patru reacţii au fost combinate. Amestecul a fost stins cu apă cu gheaţă (10,0 L). Stratul organic a fost separat, spălat cu HCI 0,5 N (3,00 L x 2). Stratul apos combinat a fost extras cu acetat de etil (3,00 L), stratul organic a fost spălat din nou cu HCI 0,5 N (500 ml). Stratul organic combinat a fost spălat cu saramură (5,00 L), uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat pentru a da compusul 1-8 (2,20 kg, brut) sub forma unui ulei galben. Produsul brut a fost utilizat în etapa următoare. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 4,94 (br s, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,10 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,58 (s, 3H), 1,83-1,91 (m, 5H) ), 1,56-1,71 (m, 5H), 1,40 (s, 9H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H). \tabEtapa 9: Patru reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 1-8 (550 g, 1,59 mol, 1,0 echiv.) în EtOAc (2,75 L) s-a adăugat HCI/EtOAc (4 M, 3,0 echiv.) prin picurare la 25°C. Amestecul a fost agitat la 25°C timp de 12 ore. TLC (eter de petrol : acetat de etil = 2 : 1, SM Rf = 0,50) a arătat că reacţia a fost completă. Cele patru reacţii au fost combinate. Amestecul a fost filtrat pentru a obţine turta de filtrare pentru a da compusul 1-9 (1,25 kg, brut, HCI) ca un solid galben. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 9,04 (s, 1 H), 4,02 (s, 2H), 3,88-3,94 (m, 1 H), 3,09 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,09-2,14 (m, 2H), 1,61-1,84 (m, 8H), 1,19 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Preparatul 2: (2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)-amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol (I)
Etapa 1: O soluţie de compus 2-1 (1,00 kg, 5,74 mol, 1,0 echiv.) în etanol (15,0 L) cu HCI saturat (1,40 kg, 38,4 mol) a fost agitată la 90 °C timp de 60 ore. HPLC a arătat că a fost detectat un vârf principal. Amestecul de reacţie a fost filtrat. Turta de filtrare a fost colectată pentru a da compusul 2-2 (1,00 kg, randament 81,8%, puritate 98,8%) ca un solid alb. 1 H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 11,82 (br s, 1 H), 10,82 (brs, 1 H), 4,31 (q, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,27 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
Etapa 2: Cinci reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 2-2 (560 g, 2,77 mol, 1,0 echiv.) în POCI3 (1,68 L) s-a adăugat N,N-dietilanilină (289 g, 1,94 mol, 0,7 echiv). Amestecul a fost agitat la 140°C timp de 12 ore. TLC (eter de petrol: acetat de etil = 10 : 1, produs Rf = 0,50) a indicat că compusul 2-2 a fost consumat complet. Cele cinci reacţii au fost combinate. Amestecul de reacţie a fost concentrat sub presiune redusă pentru a da un reziduu. Reziduul a fost diluat cu acetat de etil (25,0 L). Soluţia a fost turnată în gheaţă pisată (25,0 L). Faza apoasă a fost extrasă cu acetat de etil (25,0 L). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată de carbonat de sodiu (10,0 L x 2), uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da un reziduu. Reziduul a fost purificat prin cromatografie coloană (SiO2, eter de petrol: acetat de etil = 1 : 0 - 50 : 1) pentru a da compusul 2-3 (2,00 kg) ca un lichid maro. 1H RMN: 400 MHz CDCI3 5 4,51 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,44 (t, J= 7,2 Hz, 3H).
Etapa 3: Patru reacţii au fost efectuate în paralel. Un amestec de compus 2-3 (480 g, 2,01 mol, 1,0 echiv), compus 2-4 (224 g, 2,31 mol, 1,15 echiv), DIPEA (519 g, 4,02 mol, 2,0 echiv) în etanol (2,60 L) a fost degazat şi purjat cu N2 de 3 ori şi apoi amestecul a fost agitat la 25 °C timp de 4 ore sub atmosferă de N2. TLC (eter de petrol: acetat de etil = 10:1) a indicat că compusul 2-3 a fost consumat complet. TLC (eter de petrol: acetat de etil = 1 : 1, produs Rf = 0,40) a indicat formarea unei nou punct. Cele patru reacţii au fost combinate. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi turta de filtrare a fost colectată. Filtratul a fost concentrat sub presiune redusă pentru a da un reziduu. Reziduul a fost triturat cu apă (38,0 L) şi filtrat. Turta de filtrare (300 g) a fost triturată cu etanol (600 ml) şi filtrată. Cele două turte de filtrare au fost combinate pentru a da compusul 2-5 (1,50 kg, randament 62,2%) ca un solid galben. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 12,31 (s, 1 H), 10,76 (s, 1 H), 6,38 (s, 1 H), 4,35 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 4: Patru reacţii au fost efectuate în paralel. O soluţie de compus 2-5 (254 g, 848 mmol, 1,0 echiv), compus 1-9 (300 g, 1,06 moli, HCI, 1,25 echiv) şi DIPEA (548 g, 4,24 moli, 5,0 echiv) în DMSO (600) mL) s-a agitat la 130 °C timp de 16 ore. TLC (acetat de etil: eter de petrol = 2 : 1, Rf = 0,30) şi LCMS au arătat că a rămas aproximativ 9% din materia primă. Amestecul a fost răcit la 25°C. Cele patru reacţii au fost combinate, turnate în apă cu gheaţă (12,0 L). S-a format un precipitat galben. Solidul a fost colectat prin filtrare pentru a da compusul 2-6 (1,50 kg, ~76% puritate) sub forma unui solid galben. (m/z): [M+H]+ calculat pentru C22H32FN7O4S 510,22 găsit 510,2. \tabO suspensie de compus 2-6 (440 g, 656 mmol, ~76% puritate) în etanol (1,10 L) a fost încălzită la 95 °C până când solidul a fost dizolvat. Soluţia a fost răcită la 25 °C şi agitată timp de 12 ore. HPLC a arătat o puritate de ~96,9%. Cele trei reacţii au fost combinate. Suspensia a fost filtrată pentru a obţine turta de filtrare pentru a da compusul 2-6 (~570 g, puritate 96,9%) ca un solid galben deschis. Produsul a fost utilizat direct pentru etapa următoare. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 12,12 (s, 1 H), 9,73 (s, 1 H), 6,35 (s, 1 H), 5,59 (br s, 1 H), 4,32 (m, 2H), 4,02 (s, 2H). ), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,64-1,73 (m, 5H), 1,76-1,87 (m, 3H), 5H), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Etapa 5: Cinci reacţii au fost efectuate în paralel. La o soluţie de compus 2-6 (130 g, 255 mmol, 1,0 echiv.) în tetrohidrofuran (3,25 L) şi etanol (3,25 L) s-a adăugat NaBH4 (77,2 g, 2,04 mol, 8,0 echiv) şi CaCl2 (113 g, 1,02). mol, 4,0 echiv.) în porţiuni la 0°C. Amestecul a fost încălzit la 10 °C şi agitat timp de 2 ore. TLC (acetat de etil : eter de petrol = 3 : 1, produs Rf = 0,20) a arătat că reacţia a fost completă. Cele cinci reacţii au fost combinate. Amestecul a fost stins cu soluţie saturată de carbonat de sodiu (6,00 L), diluat cu acetat de etil (15,0 L) şi agitat timp de 0,5 ore. Suspensia a fost filtrată pentru a obţine filtratul. Stratul organic a fost separate şi stratul apos a fost extras cu acetat de etil (5,00 L × 2). Stratul organic combinat a fost spălat cu saramură (5,00 L), uscat pe sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat pentru a da (I) (500 g, brut) ca un solid galben deschis. Puriificare: Cinci reacţii au fost efectuate în paralel. O suspensie de I (100 g, 210 mmol) în etanol (3,00 L) a fost încălzită la 95 °C până când solidul a fost dizolvat. Soluţia a fost răcită la 25 °C şi agitată timp de 12 ore, s-a format mult precipitat. HPLC a arătat o puritate de 100%. Cele cinci reacţii au fost combinate. Solidul a fost colectat prin filtrare pentru a da un total de 330 g de compus I (puritate 99,3%) sub formă de solid galben deschis (Forma I cristalină). (m/z): [M+H]+ calculat pentru C20H30FN7O3S 468,21 găsit 468,3. 1H RMN: 400 MHz DMSO-d6 5 12,02 (s, 1 H), 9,29 (s, 1 H), 6,34 (s, 1 H), 5,61 (br s, 1 H), 5,02 (t, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,33 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,02 (s, 2H), 3,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,82-2,01 (m) , 3H), 1,63-1,74 (m, 5H), 1,21 (t, J= 7,2 Hz, 3H).
Preparatul 3: 5-fluoro-2,6-dihidroxipirimidin-4-carboxilat de etil
O soluţie de acid 5-fluor-2,6-dihidroxipirimidin-4-carboxilic (20,4 g, 120 mmol) în DMF (200 mL) a fost tratată cu DBU (18,7 g, 123 mmol) şi a fost agitată timp de 0,5 ore la 25 ° C. Apoi s-a adăugat EtI (19,2 g, 123 mmol) şi soluţia rezultată a fost încălzită la 60 °C timp de 3 ore. La amestec s-a adăugat H2O (1000 mL) şi precipitatul rezultat a fost colectat prin filtrare, spălat cu H2O (200 mL) şi uscat pentru a da 5-fluor-2,6-dihidroxipirimidin-4-carboxilatul de etil (19 g, randament 80 %).
Preparatul 4: 2,6-dichloro-5-fluoropirimidin-4-carboxilat de etil
Un amestec de 5-fluoro-2,6-dihidroxipirimidin-4-carboxilat de etil (5 g, 24,8 mmol), PhNEt2 (2,58 g, 17,3 mmol), POCl3 (130 g, 855,9 mmol) a fost încălzit la 100 °C pentru 4 ore. Apoi amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei şi turnat pe apă cu gheaţă (500 mL). Stratul apos a fost extras cu EtOAc (1000 mL) şi stratul organic a fost spălat cu NaHCO3 sat. (200 mL), saramură (200 mL), uscat peste Na2SO4, filtrat, şi concentrat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană (80 g coloană; 0-50% EtOAc în hexani) pentru a se obţine 2,6-dicloro-5-fluoropirimidin-4-carboxilatul de etil ca un ulei galben (3,8 g, 65 %).
Preparatul 5: 2-cloro-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de etil
Un amestec de 2,6-dicloro-5-fluoropirimidin-4-carboxilat de etil (3,8 g, 16 mmol), 5-metil-1H-pirazol-3-amina (1,86 g, 19 mmol), şi DIPEA (4 g, 32 mmol) în EtOH (100 mL) a fost agitat la r.t. pentru 2 h. Amestecul de reacţie a fost concentrat sub vid. Apoi, a fost adăugată apa (500 mL) şi amestecul de reacţie a fost filtrat şi turta de filtrare a fost spălată cu 100 mL de H2O, şi uscată în vid pentru a se obţine 2-cloro-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de etil (3,8 g 80 % randament).
Preparatul 6: (1R,3s,5S)-3-((4-(etoxicarbonil)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil
Un amestec de 2-cloro-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de etil (1,7 g, 5,684 mmol), (1R,3s,5s)-3-(metilamino)-9-azabiciclo-[3.3.1]-nonan-9-carboxilat de tert-butil (2,17 g, 8,527 mmol), şi DIPEA (1,47 g, 11,368 mmol) în DMSO (50 mL) a fost încălzit la 110°C pentru 18 h. Amestecul de reacţie a fost turnat în apă (200 mL) şi amestecul de reacţie a fost filtrat şi turta de filtrare a fost spălată cu 200 mL de H2O şi uscată în vid pentru a se obţine (1R,3s,5S)-3-((4-(etoxicarbonil)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]-nonan-9-carboxilatul de tert-butil brut (3,5 g, brut). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C25H37FN7O4 518,29 găsit 518,2.
Preparatul 7: (1R,3s,5S)-3-((5-fluoro-4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabicclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil
Un amestec de (1R,3s,5S)-3-((4-(etoxicarbonil)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (3,5 g, 7 mmol), NaBH4 (2,1 g, 56 mmol), şi CaCl2 (3,1 g, 28 mmol) intr-un amestec de EtOH (50 mL) şi THF (50 mL) a fost agitat peste noapte la 25 °C. Amestecul de reacţie a fost stins cu Na2CO3 (aq) (80 mL) şi H2O (80 mL), stratul apos a fost extras cu EtOAc (100 mL × 3) şi straturile organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate peste Na2SO4, şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin prep-HPLC pentru a se obţine (1R,3s,5S)-3-((5-fluoro-4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (1,4 g, 44 %).
(m/z): [M+H]+ calc. pentru C23H35FN7O3 476,28 găsit 476,3.
Preparatul 8: (2-(((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol
O soluţie de (1R,3s,5S)-3-((5-fluoro-4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (1,4 g, 2,95 mmol) în HCl/dioxan (50 mL) a fost agitată la 25 °C pentru 4 h. Amestecul de reacţie a fost filtrat şi turta de filtrare a fost spălată cu 100 mL de EtOAc şi a fost uscat în vid pentru a se obţine (2-(((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol (1,4 g, 100 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C18H27FN7O 376,23 găsit 376,2.
Preparatul 9: (2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)-amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol
(2-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il(metil)amino)-5-fluoro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanolul (95 mg, 0,253 mmol) a fost dizolvat în Piridina (4,0 ml) şi tratat cu clorură de etansulfonil (0,024 ml, 0,253 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat pentru 2 ore şi concentrat ulterior în vid. Reziduul brut a fost dizolvat în 3 mL de amestec 1:1 de acid acetic /apă, filtrat pentru a îndepărta particulele şi purificat prin HPLC preparativă (Agilent Dynamax 250 x 21,4 mm 10 µm, 15 mL/min, 2-50 % ACN + 0,05 % TFA/ACN) folosind un gradient de 2-50% de ACN în apă cu 0,05% TFA). Fracţiile pure au fost combinate şi liofilizate pentru a furniza sarea TFA a compusului din titlu (12,92 mg, 8,8 % randament, 99,9 % puritate). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C20H31FN7O3S 468,22 găsit 468.
Preparatul 10: 2-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de metil
Un amestec de 5-metil-1H-pirazol-3-amina (5,6 g, 58 mmol), 2,6-dicloropirimidin-4-carboxilat de metil (12,0 g, 58 mmol), şi DIPEA (15,0 g, 116 mmol) în DMSO (120 ml) a fost agitat la 25 °C pentru 12 ore. H2O (500 mL) a fost adăugată şi precipitatul solid a fost colectat prin filtrare pentru a se obţine intermediarul din titlu (15 g, 97 %) ca un solid galben. (m/z): [M+H]+ calc. pentru C10H11ClN5O2 268,05 găsit 268,1.
Preparatul 11: (1R,3s,5S)-3-((4-(metoxicarbonil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil
Un amestec de 2-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de metil (12,0 g, 45 mmol), (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (13,7 g, 54 mmol), şi DIPEA (12,0 g, 90 mmol) în NMP (120 ml) a fost agitat la 120°C pentru 16 ore. Reacţia a fost turnată în H2O (2000 mL), precipitatul solid a fost colectat prin filtrare pentru a se obţine intermediarul din titlu (15 g, 68 %) ca un solid alb. (m/z): [M+H]+ calc. pentru C24H36N7O4 486,28 găsit 486,3.
Preparatul 12: (1R,3s,5S)-3-((4-carbamoil-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil
(1R,3s,5S)-3-((4-(metoxicarbonil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (3 loturi de 2 g, 4,12 mmol) a fost adăugat NH3/MeOH (3 aliocoţi de 60 mL) într-un tub sigilat de 100 mL, amestecul de reacţie a fost agitat la 25 °C pentru 12 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrate în vid pentru a permite obţinerea intermediarului din titlu (3,7 g, 64 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C23H35N8O3 471,28 găsit 471,3.
Preparatul 13: 2-(((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)amino)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxamida
La un amestec de (1R,3s,5S)-3-((4-carbamoil-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-carboxilat de tert-butil (3,7 g, 7,9 mmol) în dioxan (185 mL) a fost adăugat HCl/Dioxan (37 mL). Reacţia a fost agitată la 25°C pentru 3 ore. TLC a arătat că nu a rămas materie primă. Solventul a fost îndepărtat şi produsul brut a fost spălat cu acetat de etil /MeOH (100:1) pentru a se obţine intermediarul din titlu ca o sare de HCl (4,0 g, 95 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C18H27N8O 371,23 găsit 371,1.
Preparatul 14: 2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il)(metil)-amino)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxamida (C-1)
2-((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-3-il(metil)amino)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxamida (40 mg, 0,108 mmol) şi DIPEA (0,057 ml, 0,324 mmol) au fost dizolvate în DMF (1,50 ml) şi răcite la 0 °C. A fost adăugată clorura de etan sulfonil şi amestecul de reacţie a fost lăsat să se încălzească la temperatura camerei şi a fost agitat pentru 72 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrat in vid şi produsul brut a fost purificat prin HPLC preparativă în fază inversă (Agilent Dynamax 250 x 21,4 mm 10 um, 15 mL/min, 2-70 % ACN + 0,1 % TFA/ACN) pentru a furniza sarea TFA a compusului din titlu (4,5 mg, 9,01 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C20H31N8O3S 463,22 găsit 463,2.
Preparatul 15: 2-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de metil
Un amestec de 5-metil-1H-pirazol-3-amina (5,6 g, 58 mmol), 2,6-dicloropirimidin-4-carboxilat de metil (12,0 g, 58 mmol), şi DIPEA (15,0 g, 116 mmol) în DMSO (120 ml) a fost agitat la 25 °C pentru 12 ore. A fost adăugată H2O (500 mL) şi precipitatul solid a fost colectat prin filtrare pentru a se obţine compusul din titlu (15 g, 97%). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C10H11ClN5O2 268,05 găsit 268,1.
Preparatul 16: (1R,3s,5S)-3-((4-(metoxicarbonil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1] octan-8-carboxilat de tert-butil
Un amestec de 2-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-carboxilat de metil (8,3 g, 31,0 mmol), (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilat de tert-butil (8,2 g, 34,1 mmol), şi DIPEA (10,8 mL, 62,0 mmol) în DMSO (85 ml) a fost agitat la 120°C pentru 16 ore. Amestecul a fost turnat în 2 L de apă, agitat viguros şi apoi filtrat pentru a permite obţinerea compusului din titlu (11,1 g, 76 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C23H34N7O4 472,27 găsit 472,3.
Preparatul 17: (1R,3s,5S)-3-((4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilat de tert-butil
La un amestec de NaBH4 (8 g, 212 mmol) în MeOH (100 mL) a fost adăugat (1R,3s,5S)-3-((4-(metoxicarbonil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)(metil)-amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-carboxilat de tert-butil (10 g, 21,2 mmol) în THF (100 mL) la 0°C. Amestecul de reacţie a fost apoi încălzit la reflux pentru 1 h. Reacţia a fost stinsă cu apă (500 mL), şi amestecul a fost extras cu acetat de etil (3 X 200 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură (1 X 100 mL), uscate peste Na2SO4 anhidru şi concentrate in vid. Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie rapidă pe silicagel (eter de petrol: acetat de etil =4:1) pentru a permite obţinerea compusului din titlu (7 g, 68 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C22H34N7O3 444,27 găsit 444,3.
Preparatul 18: (2-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-4-il)metanol
Un amestec de (1R,3s,5S)-3-((4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1|octan-8-carboxilat de tert-butil (6,5 g, 14,7 mmol) în HCl/dioxan (100 mL) a fost agitat la r.t. pentru 1 h. Amestecul a fost concentrate in vid pentru a permite obţinerea sării de HCl a intermediarului din titlu (4,8 g, 100 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C17H26N7O 344,22 găsit 344,1.
Preparatul 19: 3-((1R,3s,5S)-3-((4-(hidroximetil)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-pirimidin-2-il)(metil)amino)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)propannitril (C-2)
(2-(((1R,3s,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)(metil)amino)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidin-4-il)metanolul (50 mg, 0,146 mmol) şi DIPEA (0,076 ml, 0,437 mmol) au fost dizolvate în MeOH (1,50 ml). A fost adăugat acrilonitrilul (0,014 ml, 0,218 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei pentru 90 min. Amestecul de reacţie a fost apoi concentrat în vid şi reziduul brut a fost purificat prin HPLC preparativă în fază inversă (Agilent Dynamax 250 x 21,4 mm 10 um, 15 mL/min, 2-60 % ACN + 0,1 % TFA/ACN) pentru a furniza sarea TFA a compusului din titlu (14 mg, 19 %). (m/z): [M+H]+ calc. pentru C20H29N8O 397,25 găsit 397,1.
Exemplul 1: Difracţia de raze X pe pulbere a formei cristaline I
Difracţia cu raze X pe pulbere de formă cristalină I
Modelele de difracţie de raze X pe pulbere din figura 1 au fost obţinute cu un difractometru de raze X Bruker D8-Advance utilizând radiaţie Cu-Ka (λ = 1,54051 Å) cu o tensiune de ieşire de 45 kV şi un curent de 40 mA. Instrumentul a fost operat în geometria Bragg-Brentano cu fante incidente, divergenţă şi împrăştiere setate pentru a maximiza intensitatea la probă. Pentru măsurare, o cantitate mică de pulbere (5-25 mg) a fost presată uşor pe un suport de probă pentru a forma o suprafaţă netedă şi supusă expunerii la raze X. Eşantionul a fost scanat în modul 2θ-2θ de la 2° la 35° în 2θ cu o dimensiune a etapei de 0,02° şi o viteză de scanare de 0,30°secunde pe etapă. Achiziţia datelor a fost controlată de software-ul de măsurare Bruker DiffracSuite şi analizată de software-ul Jade (versiunea 7.5.1). Instrumentul a fost calibrat cu un standard de corindon, cu un unghi de ±0,02° doi tetha. Poziţiile de vârf PXRD 2θ observate şi spaţiile d sunt prezentate în Tabelul 1 pentru Forma I cristalină.
Tabelul 1: Datele PXRD pentru forma cristalină I
2-Theta d(Å) Suprafaţă A% 5,91 14,94 10324 6,1 6,28 14,06 25530 15 6,75 13,08 27629 16,2 8,08 10,94 3161 1,9 11,19 7,90 70185 41,3 11,73 7,54 170124 100 12,48 7,09 9018 5,3 13,52 6,55 12923 7,6 14,25 6,21 31558 18,5 14,64 6,05 30799 18,1 15,02 5,89 5121 3 15,68 5,65 4744 2,8 16,68 5,31 9857 5,8 17,62 5,03 32112 18,9 18,10 4,90 15613 9,2 18,80 4,72 109849 64,6 19,29 4,60 135137 79,4 20,53 4,32 49854 29,3 21,53 4,12 2321 1,4 22,16 4,01 9590 5,6 24,24 3,67 1915 1,1 25,52 3,49 8578 5 28,93 3,08 3263 1,9 29,89 2,99 10836 6,4 30,44 2,93 3804 2,2
Exemplul 2: Analiza formei I
Calorimetria diferenţială de scanare (DSC) a fost efectuată utilizând un modul TA Instruments Model Q-100 cu un controler Thermal Analyst. Datele au fost colectate şi analizate folosind software-ul TA Instruments Thermal Analysis. O probă din forma cristalină a fost cântărită cu precizie într-o tavă de aluminiu acoperită. După o perioadă de echilibrare izotermă de 5 minute la 5 °C, proba a fost încălzită folosind o rampă de încălzire liniară de 10 °C/min de la 0 °C la 300 °C. O termogramă reprezentativă DSC a formei cristaline I este prezentată în Figura 2. Termograma prezintă o endotermă de topire cu un debut la aproximativ 248,5 °C şi un vârf la aproximativ 250,9 °C. Au fost observate evenimente termice endotermice minore înainte de topire la ~40 °C şi ~190 °C.
Măsurătorile analizei termogravimetrice (TGA) au fost efectuate folosind un modul TA Instruments Model Q-50 echipat cu capacitate de înaltă rezoluţie. Datele au fost colectate folosind controlerul TA Instruments Thermal Analyst şi analizate folosind software-ul TA Instruments Universal Analysis. O probă cântărită a fost plasată pe o tavă de platină şi scanată cu o viteză de încălzire de 10 °C de la temperatura ambiantă la 300 °C. Balanţa şi camerele cuptorului au fost purjate cu flux de azot în timpul utilizării. O urmă reprezentativă de TGA a formei cristaline I a invenţiei este prezentată în Figura 3. Profilul TGA prezintă o pierdere în greutate de aproximativ 0,70 % între 22 °C - 125 °C, sub purjare cu N2, şi descompunere la o temperatură de debut de aproximativ 250 °C.
Măsurarea sorbţiei dinamice a umidităţii (DMS) a fost efectuată utilizând un microbalans atmosferic VTI, sistem SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). A fost utilizată o probă cântărită şi umiditatea a fost cea mai mică valoare posibilă (aproape de 0% RH) la începutul analizei. Analiza DMS a constat într-o etapă iniţială de uscare (0 % RH) timp de 120 de minute, urmată de două cicluri de sorbţie şi desorbţie cu o rată de scanare de 5 % RH/etapa în intervalul de umiditate de la 5 % RH până la 90 % RH. Executarea DMS a fost efectuată izotermic la 25 °C. O urmă reprezentativă DMS pentru Forma I este prezentată în Figura 4. Absorbţia totală de umiditate între 5 şi 90% RH a fost de 1,96%.
Analiza Karl Fisher a Formei I a arătat că aceasta conţine 1,6% g/g apă.
Preparatul 20: Preparatul Forma II
28 g de compus 2-6 a fost suspendat într-un amestec de 70 mL EtOH şi 154 mL THF, apoi a fost răcit la 5 °C. La această suspensie s-au adăugat 82 mL de LiBH4 (2,0 M în THF) timp de 1 oră. După adăugare, temperatura a fost crescută la 10 °C şi s-a agitat pentru 2 ore, după care materia primă nu a fost detectată prin analiza HPLC. Reacţia a fost apoi stinsă cu un amestec de 16,8 g clorură de amoniu dizolvată în 77 mL apă. După încălzirea la 45 °C, s-au încărcat 467 ml de apă în 3 ore. Odată ce s-au adăugat 370 mL din această încărcătură de apă, s-a observat formarea de cristale. Când încărcarea cu apă a fost completă, suspensia a fost menţinută la 45 °C pentru 5 ore, apoi a crescut la 15 °C peste 3 ore. După menţinerea suspensiei la 15 °C timp de 7,5 ore, produsul un fost filtrat şi clătit înainte cu 140 mL EtOH urmat de două clătiri înainte de 140 mL cu apă. Solidul a fost uscat sub vid la 45 °C cu azot peste noapte pentru a obţine 22,6 g de Forma II (87% randament, 98,6% puritate).
21 g de grad intermediar Forma II de compus (I), obţinut în etapa anterioară, în 63 ml de DMSO a fost încălzit la 90 °C. S-au adăugat 420 mL de n-PrOH timp de 40 de minute menţinând temperatura amestecului peste 86 °C. Au fost observate cristale de refracţie foarte fine în timpul ultimei treimi a adăugării nPrOH. Amestecul a fost agitat pentru 4 ore la 92 °C. Amestecul a fost răcit până la 20 °C peste 8 ore şi agitat la 20 °C peste noapte. Produsul a fost filtrat şi spălat cu 52,5 ml de nPrOH, urmat de 52,5 ml de etanol de două ori. Solidul a fost uscat sub vid cu o scurgere de azot la 55 °C pentru a se obţine 19,24 g de Forma II (92% randament, 99,6% puritate).
Exemplul 3: Difracţia cu raze X pe pulbere a formei cristaline II
Modelele de difracţie cu raze X pe pulbere din figura 5 au fost obţinute în aceleaşi condiţii ca şi pentru Forma I. Poziţiile de vârf PXRD 20 observate şi distanţe d sunt prezentate în următorul tabel.
Tabelul: Datele PXRD pentru forma cristalină Forma II
2-Theta d(Å) Suprafaţă A% 8,9 10,0 35511 9,8 9,5 9,3 63058 17,4 10,2 8,7 91113 25,2 11,4 7,7 361711 100 14,4 6,1 29371 8,1 16,2 5,5 160020 44,2 16,6 5,3 173568 48 17,7 5,0 153041 42,3 19,0 4,7 112788 31,2 19,2 4,6 93782 25,9 19,8 4,5 54560 15,1 20,1 4,4 93452 25,8 20,4 4,3 111287 30,8 20,6 4,3 49977 13,8 20,8 4,3 58656 16,2 21,3 4,2 27118 7,5 21,9 4,1 289766 80,1 25,9 3,4 35768 9,9 30,1 3,0 26278 7,3 30,5 2,9 23740 6,6 30,9 2,9 51901 14,3 32,6 2,7 22443 6,2 33,8 2,7 23525 6,5
Exemplul 4: Analiza Formei II
Forma II a fost testată în condiţii similare cu Forma I.
O termogramă reprezentativă DSC a formei cristaline II din invenţie este prezentată în Figura 6. Termograma prezintă un vârf al fluxului de căldură endotermic, identificat ca o tranziţie la topire, care arată un maxim al fluxului de căldură endotermic la o temperatură de 238,1 °C ± 2 °C.
O urmă reprezentativă TGA a formei cristaline II din invenţie este prezentată în figura 7. Profilul TGA arată o pierdere în greutate asociată cu descompunerea după 222°C.
Analiza DMS a constat într-o etapă iniţială de uscare (0 % RH) timp de 120 de minute, urmată de două cicluri de sorbţie şi desorbţie cu o rată de scanare de 5 % RH/etapa în intervalul de umiditate de la 5 % RH până la 90 %. RH. Executarea DMS a fost efectuată izotermic la 25 °C. O urmă reprezentativă DMS pentru Forma II este prezentată în Figura 8. Absorbţia totală de umiditate între 5 şi 90% RH a fost de aproximativ 0,02%.
Exemplul 5: Difracţia cu raze X pe un singur cristal de Forma II
Datele au fost colectate pe un difractometru Rigaku Oxford Diffraction Supernova Dual Source, Cu at Zero, Atlas CCD echipat cu un dispozitiv de răcire Oxford Cryosystems Cobra. Datele au fost colectate folosind radiaţia Cu Kα. Structura a fost rezolvată şi rafinată folosind software-ul cristalografic Bruker AXS SHELXTL suite. Detaliile complete pot fi găsite în CIF. Dacă nu se specifică altfel, atomii de hidrogen ataşaţi de carbon au fost plasaţi geometric şi lăsaţi să se rafineze un parametru de deplasare izotropă. Atomii de hidrogen ataşaţi la heteroatomi au fost localizaţi într-o hartă Fourier diferenţială şi au fost lăsaţi să se rafineze liber cu un parametru de deplasare izotropă.
Tabelul: Date din analiza de difracţie cu raze X cu un singur cristal de Forma II
Formula empirică C20H30FN7O3S Greutatea moleculară 467.57 Dimensiunea cristalului 0.10 × 0.10 × 0.02 mm3 Temperatura la colectarea a datelor 293(2) K Lungimea de undă utilizată pentru colectarea datelor 1.54178 Å Sistemul cristalin Monoclinic Grupul spatial P21/n Dimensiunile unităţii celulei a = 12.4330(8) Å b = 12.2675(9) Å c = 14.5337(8) Å α = 90° β = 96.996(6)° γ = 90° Volumul unitaţii celulei 2200.2(2) Å3 Z (Numarul de molecule în unitatea celulei) 4 Densitate (calculat) 1.412 g / cm3 Intervalul Theta pentru colectarea datelor 4.422 to 75.445° Indexul intervalelor -15 ≤ h ≤ 15 -12 ≤ k ≤ 15 -18 ≤ l ≤ 18 Reflectiile colectate 21349 Reflecţiile independente 4442 [R(int) = 0.0762] Indicii R Final [F2 > 2sigma(F2)] R1 = 0.0568, wR2 = 0.1294 Indicii R (toate datele) R1 = 0.1028, wR2 = 0.1599
Teste biologice
Testul 1: Testele biochimice pentru kinazele JAK şi Tyk2
Un panou de patru teste biochimice LanthaScreen JAK (JAK1, 2, 3 şi Tyk2) au fost efectuate într-un tampon de reacţie obişnuit al kinazei (50 mM HEPES, pH 7,5, 0,01% Brij-35, 10 mM MgCl2 şi 1 mM EGTA). Enzimele JAK recombinante marcate cu GST şi un substrat peptidic STAT1 marcat cu GFP au fost obţinute de la Life Technologies.
Compuşii diluaţi în serie sau discret au fost pre-incubaţi cu fiecare dintre cele patru enzime JAK şi substratul în microplăci albe cu 384 de godeuri (Corning) la temperatura ambiantă timp de 1 oră. ATP a fost adăugat ulterior pentru a iniţia reacţiile kinazei în volum total de 10 µL, cu 1% DMSO. Concentraţiile finale de enzimă pentru JAK1, 2, 3 şi Tyk2 sunt 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM şi, respectiv, 0,25 nM; concentraţiile corespunzătoare de Km ATP utilizate sunt 25 µM, 3 µM, 1,6 µM şi 10 µM; în timp ce concentraţia de substrat este de 200 nM pentru toate cele patru teste. Reacţiile kinazei au fost lăsate să continue timp de 1 oră la temperatura ambiantă înainte ca un preparat de 10 µL de EDTA (concentraţie finală 10 mM) şi anticorp Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) (Life Technologies, concentraţie finală 2 nM) în tampon de diluţie TR-FRET (Life Tehnologii) a fost adăugat. Plăcile au fost lăsate să incubeze la temperatura ambiantă timp de 1 oră înainte de a fi citite pe cititorul EnVision (Perkin Elmer). Semnalele raportului de emisie (520 nm/495 nm) au fost înregistrate şi utilizate pentru a calcula valorile procentuale de inhibare pe baza DMSO şi controale de fond.
Pentru analiza doză-răspuns, datele procentuale de inhibare au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robustă cu 4 parametri cu software-ul Prism (Software GraphPad). Rezultatele au fost exprimate ca pIC50 (logaritmul negativ al IC50) şi ulterior convertite în pKi (logaritmul negativ al constantei de disociere, Ki) utilizând ecuaţia Cheng-Prusoff.
Tabelul 2: Valorile pKi ale Compusului (I)
JAK 1 (pKi) JAK 2 (pKi) JAK 3 (pKi) Tyk 2 (pKi) Compus (I) 10,2 10,2 9,1 9,9
Testul 2: Testul de potenţă celular JAK: inhibarea fosforilării STAT6 indusă de IL-13 în celulele BEAS-2B
Testul de potenţă celulară pentru inhibarea JAK a fost efectuat prin măsurarea fosforilării STAT6 induse de interleukina-13 (IL-13, R&D Systems) în celulele epiteliale pulmonare umane BEAS-2B (ATCC). Anticorpul anti-STAT6 (Cell Signaling Technologies) a fost conjugat cu bile acceptoare AlphaScreen (Perkin Elmer), în timp ce anticorpul anti-pSTAT6 (pTyr641) (Cell Signaling Technologies) a fost biotinilat folosind EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific) .
Celulele BEAS-2B au fost crescute la 37°C într-un incubator umidificat cu 5% CO2 în mediu 50% DMEM/50% F-12 (Life Technologies) suplimentat cu 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL penicilină, 100 µg/mL streptomicina (Life Technologies) şi 2 mM GlutaMAX (Life Technologies). În ziua 1 a testului, celulele au fost însămânţate la o densitate de 7500 celule/godeu în plăci albe cu 384 de godeuri acoperite cu poli-D-lizină (Corning) cu 25 µl mediu şi au fost lăsate să adere peste noapte în incubator. În ziua a 2-a a testului, mediul a fost îndepărtat şi înlocuit cu 12 µl tampon de analiză (soluţie de sare Hank's Balanced/HBSS, 25 mM HEPES şi 1 mg/ml albumină serică bovină/BSA) care conţine răspunsuri la doză de compuşi de testat. Compusul a fost diluat în serie în DMSO şi apoi diluat încă de 1000 de ori în mediu pentru a aduce concentraţia finală de DMSO la 0,1%. Celulele au fost incubate cu compuşi de testare la 37°C timp de 1 oră şi au fost urmate de adăugarea a 12 µl de IL-13 preîncălzit (80 ng/mL în tampon de testare) pentru stimulare. După incubare la 37°C timp de 30 de minute, tamponul de analiză (conţinând compus şi IL-13) a fost îndepărtat şi 10 µL de tampon de liză celulară (25 mM HEPES, 0,1 % SDS, 1 % NP-40, 5 mM MgCl2, 1,3 mM EDTA, 1 mM EGTA şi supliment cu inhibitori Complete Ultra mini protează şi PhosSTOP de la Roche Diagnostics). Plăcile au fost agitate la temperatura ambiantă timp de 30 de minute înainte de adăugarea de reactivi de detectare. Un amestec de perle acceptoare conjugate de biotină-anti-pSTAT6 şi anti-STAT6 a fost adăugat mai întâi şi incubat la temperatura ambiantă timp de 2 ore, urmat de adăugarea de granule donatoare conjugate cu streptavidină (Perkin Elmer). După cel puţin 2 ore de incubare, plăcile de analiză au fost citite pe cititorul de plăci EnVision. Semnalele de luminescenţă AlphaScreen au fost înregistrate şi utilizate pentru a calcula valorile procentuale de inhibiţie pe baza DMSO şi controale de fond.
Pentru analiza doză-răspuns, datele de inhibare procentuală au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus, şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robust cu 4 parametri cu software-ul Prism. Rezultatele pot fi, de asemenea, exprimate ca logaritm negativ al valorii IC50, pIC50. Compusul (I) a prezentat o valoare pIC50 de 8,5 în acest test.
Testul 3: Testul de citotoxicitate
Un test de viabilitate/citotoxicitate a celulelor luminiscente CellTiter-Glo a fost efectuat în celulele epiteliale pulmonare umane BEAS-2B (ATCC) în condiţii normale de creştere.
Celulele au fost crescute la 37°C într-un incubator umidificat cu 5% CO2 în mediu 50% DMEM/50% F-12 (Life Technologies) suplimentat cu 10% FBS (Hyclone), 100 U/mL penicilină, 100 µg/ mL streptomicina (Life Technologies) şi 2 mM GlutaMAX (Life Technologies). În ziua 1 a testului, celulele au fost însămânţate la o densitate de 500 celule/godeu în plăci albe de cultură de ţesut cu 384 de godeuri (Corning) cu 25 µL mediu şi au fost lăsate să adere peste noapte în incubator. În ziua 2 a testului, s-au adăugat 5 µl de mediu care conţine răspunsuri la doză de compuşi de testat şi s-au incubat la 37°C timp de 48 de ore. Ulterior, s-au adăugat 30 µL de soluţie de detectare CellTiter-Glo (Promega), s-au amestecat pe un agitator orbital timp de 5 minute şi s-au incubat timp de încă 10 minute înainte de a fi citit pe cititorul EnVision. Semnalele de luminescenţă au fost înregistrate şi au fost calculate valorile procentuale de control DMSO.
Pentru analiza doză-răspuns, procentele de date de control DMSO au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus pentru a deriva curbele doză-răspuns prin linia care conectează fiecare punct de date. Concentraţia la care fiecare curbă depăşeşte pragul de inhibare de 15 % este definită ca CC15. Rezultatele au fost exprimate ca logaritm negativ al valorii CC15, pCC15.
Este de aşteptat ca compuşii de testat care prezintă o valoare pCC15 mai mică în acest test să aibă o probabilitate mai mică de a provoca citotoxicitate. pCC15 pentru compusul (I) a fost 5,36.
Testul 4: Test TARC indus de TSLP in vitro în PBMC uman
Legarea TSLP la receptorul său induce o schimbare conformaţională care activează JAK1 şi JAK2 pentru a fosforila diverşi factori de transcripţie, inclusiv STAT3 şi STAT5. În celulele imune rezidente pe piele, acest lucru declanşează o cascadă de evenimente intracelulare care au ca rezultat proliferarea celulară, anti-apoptoză, migrarea celulelor dendritice şi producerea de citokine şi chemokine Th2. În timpul fazei acute a dermatitei atopice, pielea este invadată de limfocitele Th2. În celulele mononucleare primare din sângele periferic (PBMC), TSLP are un efect proinflamator prin activarea celulelor dendritice mieloide pentru a atrage şi stimula celulele T. Acest proces este mediat de timus şi chemokine reglate de activare (TARC/CCL17). TARC s-a dovedit a fi un biomarker clinic promiţător pentru dermatita atopică, cu niveluri serice ridicate indicând patogeneza accelerată a inflamaţiei cutanate.
În acest test, s-a arătat că stimularea TSLP induce eliberarea TARC din PBMC-uri şi că acest răspuns este atenuat într-o manieră dependentă de doză după tratamentul cu compusul (I). PBMC-urile (izolate anterior din sânge integral şi congelate în părţi alicote la -80°C) de la 3 donatori au fost dezgheţate, placate şi lăsate să se odihnească la 37°C timp de 1 oră. Celulele au fost pre-tratate timp de 1 oră cu o serie de diluţii de 3,7X variind de la 33,3 µM până la 0,95 nM de compus (I). Celulele au fost apoi stimulate cu 10 ng/mL TSLP sau au primit un volum echivalent de mediu simplu ca control bazal. După 48 de ore, supernatanţii celulari au fost colectaţi şi TARC a fost măsurat utilizând Kitul ELISA CCL17/TARC Quantikine uman.
Pentru analiza doză-răspuns, datele de inhibare procentuală au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus, şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robustă cu 4 parametri cu software-ul GraphPad Prism. Rezultatele pot fi, de asemenea, exprimate ca logaritm negativ al valorii IC50, pIC50. Compusul (I) a prezentat o valoare pIC50 de 7,8 în acest test.
Testul 5: Test farmacocinetic la şobolan
Obiectivul acestui studiu a fost de a evalua farmacocinetica compusului (I) în plasmă după administrarea orală unică (PO, n=3) sau intravenoasă (IV, n=2) la şobolani Sprague Dawley masculi.
La trei şobolani masculi Sprague Dawley s-a administrat o singură doză IV de compus (I) (1,0 mg/kg în 5% DMSO + 20 mM tampon citrat pH4) printr-un cateter venos jugular sau o singură doză PO de 5 mg/kg prin gavaj oral (5,0 mg/kg în 1% HPMC cu 0,1% Tween80). La 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6 şi 24 de ore după administrarea dozei, probele de sânge au fost extrase prin cateter de venă jugulară în tuburi EDTA şi menţinute la rece pe gheaţă înainte de centrifugare (12.000 rpm, 4 min, 4°C). Alicote de plasmă au fost transferate în tuburi cluster şi depozitate congelate (-80°C) înainte de bioanalize.
Probele de plasmă au fost agitate în vortex înainte de transferul unei alicote de 50 µl de probă pe o placă cu 96 de godeuri şi extrase cu 200 µl de acetonitril conţinând un standard intern. După extracţie, probele au fost centrifugate timp de 10 minute la 3700 RPM (2809 x g). Supernatantul a fost transferat pe o nouă placă cu 96 de godeuri şi apoi diluat în acid formic 0,2% în apă (diluţie de trei ori). Pentru toate probele, s-au injectat 10 µL pe o coloană Waters Xbridge (C18 30 x 2,1 mm) cu o viteză de curgere de 0,80 mL/min. Faza mobilă A a constat din acid formic 0,2% în apă şi faza mobilă B 0,2% acid formic în acetonitril. Nivelurile plasmatice ale compusului (I) au fost determinate prin analiză LC-MS-MS. Parametrii PK standard au fost determinaţi utilizând Phoenix WinNonlin, (Certara Inc.).
Tabelul 3: Parametri farmacocinetici
IV (1 mg/kg) PO (5 mg/kg) T1/2 (hr) 1,34 ND Cmax (µg/ml) 0,907 0,077 AUC (0-t) (µg.hr/ml) 0,291 0,112 CL (L/hr/kg) 3,54 ND Vdss (L/Kg) 1,1 ND F% ND 7,7 ND, nedeterminat
Testul 6: Farmacocinetica cutanată în pielea de mini-porc Hanford
Obiectivul acestui studiu a fost acela de a determina farmacocinetica epidermică, dermică şi plasmatică a compusului (I) după o expunere de 24 de ore la pielea intactă de mini-porc Hanford. Compusul (I) a fost formulat la 0,5 % (g/g) în cremă sau unguent aşa cum este descris, ca Formulare A şi, respectiv, Formulare B, în Tabelul 4.
Tabelul 4: Formulări ale compusului I
Formularea A (cremă) Formularea B (unguent) Compusul (I) 0,5% Compus (I) 0,5% Acid Stearic 5% Octilhidroxistearat 5% Alcool Cetostearilic 5% C8-C10 Trigliceride 5% Palmitat de Izopropil 4% Vaselina (Petrolatum) 79,5% Octilhidroxistearat 2% N-Metilpirolidona 10% BRIJ S2 (PEG 2 Stearil Eter) 1,08% BRIJ S20 (PEG 20 Stearil Eter) 6,92% N-Metilpirolidina 10% PEG400 10% RO Apa 55,5%
Douăzeci şi patru de ore înainte de dozare, părul a fost ras de pe spatele unor miniporci Hanford de 10-15 kg, expunând o suprafaţă de cel puţin 700 cm2 (aproximativ 10 % din suprafaţa corpului). La momentul zero, compusul (I) a fost aplicat pe spatele mini-porcilor la o doză de 25 µL/cm2. Pielea a fost acoperită cu un înveliş adeziv pentru a preveni pierderea compusului în cuşcă sau aşternut. După o expunere de 24 de ore, spatele a fost spălat uşor cu apă şi săpun pentru a îndepărta medicamentul neabsorbit şi uscat. Imediat după această spălare, s-a extras sânge prin puncţie venoasă de la miniporci. Pielea exterioară (stratul cornos) a fost apoi îndepărtată prin îndepărtarea benzii adezive. La expunerea epidermei a fost luată o biopsie cu puncţie de 0,5 cm. Epiderma şi derma au fost separate rapid, cântărite şi congelate rapid. Probele similare au fost prelevate la 94 de ore şi la 168 de ore (7 zile) după dozare la mini-porci. Probele de epidermă şi dermă au fost omogenizate în apă 1:10 (g/v) folosind un omogenizator cu ultrasunete Covaris. Probele au fost extrase în 3 volume de acetonitril şi cuantificate în raport cu o curbă standard prin analiză LC-MS. După cum evidenţiază parametrii farmacocinetici (Tabelul 5), expunerea semnificativă la compus a fost prezentă în straturile epidermei şi dermei, în timp ce expunerea în plasmă a fost sub limita de cuantificare (0,001µg/ml), indicând o absorbţie foarte limitată a compusului în circulaţia sistemică.
Tabelul 5. Parametrii farmacocinetici obţinuţi pentru ambele formulări ale compusului (I)
Formularea A Formularea B Plasma Cmax (µg/ml) <0,001 <0,001 Plasma AUCo-t (µg*hr/ml) <0,001 <0,001 Epidermă Cmax (µg/g) 10,9 35,8 Epidermă AUCo-t (µg*hr/g) 395 1320 Dermă Cmax (µg/g) 0,47 1,52 Dermă AUCo-t (µg*hr/g) 17,8 64,8
Testul 7: Testul farmacodinamic (PD) JAK ex vivo utilizând piele umană proaspăt excizată
Un test farmacodinamic JAK (PD) ex vivo a fost efectuat utilizând ţesut de piele uman izolat. Testul PD a folosit piele umană proaspătă (dermatom de 750 µm grosime) care a fost montată în celule Franz statice cu o suprafaţă de ~0,5 cm2. Camerele receptoare ale celulelor Franz au fost umplute cu mediu de cornificare cald (37 °C) şi plasate într-un incubator la 37 °C. Pielea a fost dozată local cu 10 uL (~18 µL/cm2) de compus (I) sau vehicul şi a fost lăsată în repaus peste noapte (~24 ore). A doua zi, fără re-aplicare a compusului sau vehiculului de testat, mediul a fost înlocuit cu un cocktail de stimulare declinat Th1 constând din TNFa, IFNy şi IL-12. Pielea a fost lăsată în repaus pentru încă 16 ore, apoi recoltată şi procesată pentru extracţia ARN şi qPCR a biomarkerilor: CXCL10, CCL2. GAPDH a fost folosit ca standard intern. Compusul (I) a fost formulat într-o formulare de unguent la o concentraţie de 0,5%. Compoziţia vehiculului unguent este listată în Tabelul 6. Au fost utilizaţi un total de trei donatori de piele (testaţi în patru exemplare/probă/tratament). Efectul tratamentului a fost calculat ca procent de creştere sau scădere a stimulării în comparaţie cu grupul de vehicul.
Tabelul 6. Compoziţia vehiculului unguent
Octilhidroxistearat 5% C8-C10 Triglicerida 5% Vaseline (Petrolatum) 79.5% N-Metilpirolidona 5% Alcooll Benzilic 5%
Rezultatele testului PD pe pielea umană ex vivo
Datele sunt prezentate în Tabelul 7. Expresia genei CXCL10, care codifică proteina 10 indusă de interferon-y (IP-10), a fost inhibată de compusul (I) cu 90,1% comparativ cu grupul de control TH1/vehicul. În ceea ce priveşte gena CCL2, care codifică proteina chemoatractantă monocitară 1 (MCP-1), compusul (I) a inhibat răspunsul cu 61,3%. În plus, cu ambele formulări, au fost detectate concentraţii mari de compus atât în stratul epidermic, cât şi în cel dermic al pielii.
Tabelul 7. Efectul farmacodinamic şi depunerea epidermică şi dermică a formulării de unguent 0,5% a compusului (I) după aproximativ 40 de ore de expunere continuă pe pielea umană proaspăt excizată
Compus (I) PD- % Inhibare (media ± SD) PK- Concentraţia ţesutului (µM, media ± SD) CXCL10 CCL2 Epidermă Dermă 0,5% unguent 90,1 ± 15,1 61,3 ± 39,6 116,5 ± 91,9 6,1 ± 5.3
Datele sunt prezentate ca media ± Std dev, n= 12 (3 donori, 4 probe/donor).
Testul 8: Testul de permeabilitate a pielii umane
Obiectivul acestui experiment a fost de a evalua absorbţia percutanată a compuşilor de testat prin pielea umană după aplicarea topică. Modelul foloseşte piele umană excizată montată în camere de difuzie special concepute (statice sau cu flux) care permit menţinerea pielii la o temperatură şi umiditate care se potrivesc condiţiilor reale de utilizare. Formularea a fost aplicată pe suprafaţa pielii şi penetrarea medicamentului este măsurată prin monitorizarea ratei sale de apariţie în soluţia de receptor care curge sub probele de piele. Acest sistem in vitro permite controlul atent al multor variabile potenţiale implicate în aplicarea topică, cum ar fi volumele de dozare, umiditatea, temperatura, stabilitatea medicamentului şi grosimea pielii.
Acest experiment a folosit un sistem cu difuzie a celulelor cu flux (MedFlux-HTTM) care utilizează o cale de curgere atent proiectată, cu volume mici de goluri pentru condiţii optime de absorbţie şi s-a dovedit că oferă spaţiu local sub pielea dermatomata pentru a genera profile de flux mai precise şi mai detaliate prin colectare automată şi fluidică optimizată. Acest sistem a fost dezvoltat pentru a minimiza în mod specific suprafaţă de dozare în timpul experimentelor in vitro, permiţând astfel mai multe replicari de dozare în suprafaţa limitată a pielii umane ex vivo.
Celulele de difuzie au fost plasate în suporturi de încălzire celulară şi încălzite folosind o baie de apă circulantă pentru a menţine temperatura suprafeţei pielii la cca. 32°C. Celulele au fost conectate la pompe peristaltice cu mai multe canale şi menţinute la un debit de aproximativ 10 µL/min (600 µL/h) pentru un flux continuu de fluid receptor direct sub piele. După eşantionarea continuă timp de 24 de ore, probele au fost testate pentru nivelurile de compus de testat prin LC-MS/MS. Compusul de testat a fost detectat în fluidul receptor de la 20-28 ore după aplicarea formulării de unguent de testat (n=5). Unguentul utilizat este dezvăluit în Testul 7. Fluidul receptor a fost PBS cu 0,1% Brij.
Tabelul 8. Fluxul compusului (I) care pătrunde prin 1 cm2 de piele umană
MedFlux Permeabilitatea (ng/cm2/sec) N Media Std Dev Compus (I) (0,5% Unguent) 5 39,1 10,9
După cum se arată în Tabelul 8, compusul (I) a prezentat o permeabilitate adecvată.
Testul 9: Testul de angajare a ţintei JAK in vivo IL-31-pSTAT3 la şoareci
Un model in vivo de producţie indusă de IL-31 de traductor de semnal fosforilat şi activator al transcripţiei 3 (pSTAT3) la şoareci a fost utilizat pentru a evalua angajarea ţintei locale pe pielea şoarecelui.
Calea de semnalizare JAK/STAT (janus kinaza/transductor de semnal şi activator al transcripţiei) este un element cheie în comunicarea dintre celulele imune şi este activată în principal prin receptorii citokine. Legarea citokinei IL-31 duce la activarea şi fosforilarea tirozin kinazelor JAK1/JAK2 care, la rândul său, duce la fosforilarea STAT3 (pSTAT3). STAT activat se translocă apoi în nucleu şi reglează direct transcrierea genelor sensibile la citokine. În aceste studii, şoarecii Balb/c au fost dozaţi cu o formulare de unguent a compusului (I). Vehicul de unguent (Tabelul 9) sau compusul (I) formulat în vehiculul de unguent a fost aplicat local pe pielea rasă (25 µl/cm2) cu 30 de minute înainte de injectarea intradermică (50 µl / 1 x 1 cm2 loc) de IL-31 (1 µg/ml) la o zonă de piele rasă de 1×1 cm2 pe spatele dintre urechi. La o oră după IL-31, au fost colectate biopsii de piele. Probele de ţesut au fost congelate rapid şi analizate pentru pSTAT3 prin ELISA şi concentraţia compusului. Compusul (I) a inhibat producţia de pSTAT3 cu 80% şi concentraţia de ţesut cutanat a compusului (I) a fost de 62 µM.
Tabelul 9. Compoziţia vehiculului unguent
Octilhidroxistearat 5% C8-C10 Triglicerida 5% Vaselina (Petrolatum) 79.5% N-Metilpirolidona 5% Alcool Benzilic 5%
Testul 10: Model in vivo de dermatită acută indusă de TPA la şoareci
Obiectivul acestui test este de a evalua efectul antiinflamator al compusului (I), într-un model de dermatită acută studiat pentru afecţiuni inflamatorii cutanate, cum ar fi dermatita atopică (Dong şi colab., J Pharmacol Exp Ther, 2013). , 344, 436-446).
Aplicarea topică dermică a esterului de forbol TPA la şoareci determină un răspuns inflamator care este caracterizat prin edem şi influx de neutrofile în faza incipientă (2-24 ore) şi prin proliferarea celulelor epidermice în faza ulterioară (24-48 ore) ( Griffiths şi colab., Agents and Actions, 1988, 25, 344-351). În acest model, şoarecilor femele Balb/c le-a fost administrat local 20 µl/ureche fie de vehicul sau TPA (2,5 µg). Pentru formularea soluţiei, vehiculul (1:7 DMSO:Acetonă) sau compusul de testat a fost aplicat local cu 30 de minute înainte şi 15 minute după administrarea TPA. Pentru formularea de unguent, vehiculul sau compusul (I) (0,5% concentraţie) a fost aplicat cu 30 de minute înainte de TPA. Compoziţia vehiculului unguent este enumerată în Tabelul 10. Gradul de inflamaţie a fost evaluat ca modificarea grosimii urechii la 6 ore după aplicarea TPA.
Rezultatele sunt rezumate în tabelele 11 şi 12. Când este dozat ca soluţie, compusul (I) (3-1000 µg/ureche) a inhibat creşterea indusă de TPA a grosimii urechii într-o manieră dependentă de doză. Cea mai mare doză testată a inhibat răspunsul TPA cu 54,8%. Când a fost formulat ca un unguent la 0,5%, compusul (I) a inhibat răspunsul TPA cu 34,9%.
Tabelul 10. Compoziţia vehiculului unguent
Octilhidroxistearat5% C8-C10 Triglicerida 5% Vaselina (Petrolatum) 79,5% N-Metilpirolidona 5% Alcool Benzilic 5%
Tabel 11. Efectul formulării soluţiei topice de compus (I) asupra creşterii induse de TPA a grosimii urechii la şoareci
Doza de compus (I) (µg/doza ureche ca soluţie) Inhibarea creşterii induse de TPA a grosimii urechii (media % inh ± SEM (n)) 30 6,6% ± 1,1% (12) 100 2,4% ± 0,7% (12) 300 35,5% ± 3,1% (12) 1000 54,8 ± 2,6% (12)
Tabelul 12. Efectul topic al formulării de unguent a compusului (I) asupra creşterii induse de TPA a grosimii urechii la şoareci
Doza de Compus (I) (20 µl/ureche) Inhibarea creşterii induse de TPA a grosimii urechii (media % inh ± SEM (n)) 0,5% Unguent 34,9% ± 3,3% (12)
Testul 11: Inhibarea pSTAT5 stimulată cu IL-2 în celulele T Tall-1
Potenţa compuşilor de testat pentru inhibarea fosforilării STAT5 stimulată de interleukină-2 (IL-2) a fost măsurată în linia de celule T umane Tall-1 (DSMZ) utilizând AlphaLisa. Deoarece IL-2 semnalează prin JAK1/3, acest test oferă o măsură a potenţei celulare JAK1/3.
STAT5 fosforilat a fost măsurat prin trusa AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT5 (Tyr694/699) (PerkinElmer).
Celulele T umane din linia de celule Tall-1 au fost cultivate într-un incubator umidificat la 37°C, 5% CO2 în RPMI (Life Technologies) suplimentat cu 15% ser fetal bovin inactivat cu căldură (FBS, Life Technologies), 2 mM Glutamax (Life Technologies), 25mM HEPES (Life Technologies) şi IX Pen/Strep (Life Technologies). Compuşii au fost diluaţi în serie în DMSO şi distribuiţi acustic în godeurile goale. Mediul de testare (DMEM fără roşu de fenol (Life Technologies) suplimentat cu 10% FBS (ATCC)) a fost distribuit (4 µL/godeu) şi plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 10 minute. Celulele au fost însămânţate la 45.000 celule/godeu în mediu de testare (4 µL/godeu) şi incubate la 37°C, 5% CO2 timp de 1 oră, urmată de adăugarea de IL-2 (R&D Systems; concentraţia finală 300 ng/mL) în mediu de testare preîncălzit (4 uL) timp de 30 de minute. După stimularea cu citokine, celulele au fost lizate cu 6 µl de tampon de liză AlphaLisa 3x (PerkinElmer) care conţine 1 x tablete PhosStop şi Complete (Roche). Lizatul a fost agitat la 900 rpm timp de 10 minute la temperatura camerei (RT). STAT5 fosforilat a fost măsurat prin trusa pSTAT5 AlphaLisa (PerkinElmer). Amestecul de perle acceptoare proaspăt preparat a fost distribuit pe lizat (5 uL) sub filtrat verde < 100 lux de lumină. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, rotite scurt în jos şi incubate timp de 2 ore la RT în întuneric. Bilele donatoare au fost distribuite (5 µL) sub filtru de lumină verde < 100 lux. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, scurtate în jos şi incubate peste noapte la temperatura camerei în întuneric. Luminescenţa a fost măsurată cu excitaţie la 689 nm şi emisie la 570 nm folosind un cititor de plăci EnVision (PerkinElmer) sub filtru de lumină verde <100 lux.
Pentru a determina potenţa inhibitoare a compuşilor de testat ca răspuns la IL-2, intensitatea medie de emisie a granulelor legate la pSTAT5 a fost măsurată într-o linie de celule T umane. Valorile IC50 au fost determinate din analiza curbelor de inhibare a intensităţii semnalului în funcţie de concentraţia compusului. Datele sunt exprimate ca valori pIC50 (logaritm decadic negativ IC50) (media ± abaterea standard). Compusul (I) a prezentat o valoare pIC50 de 8,4 în acest test.
Testul 12: Inhibarea fosforilării STAT4 indusă de IL-12 în celulele T CD3+ umane
Acest test de potenţă celulară pentru inhibarea JAK a fost efectuat prin măsurarea fosforilării STAT4 induse de interleukina-12 (IL-12, R&D Systems) în celulele T CD3+ umane. Anticorpul CD3 (Becton Dickinson (BD) Biosciences) a fost conjugat la R-Ficoeritrina (R-PE). Anticorpul pSTAT4 (pTyr641, BD Biosciences) a fost conjugat cu Alexa Fluor 647.
Celulele mononucleare din sângele periferic uman au fost cultivate la 37°C într-un incubator umidificat cu 5% CO2 în mediu RPMI (Life Technologies) suplimentat cu 10% FBS (Life Technologies), 100 U/mL penicilină, 100 µg/mL streptomicină ( Life Technologies), 2 mM GlutaMAX (Life Technologies), anti CD3 legat de placă (5 µg/mL, UCHT1, BD Biosciences) şi anti-CD28 solubil (1 µg/mL, CD28.2, BD Biosciences) timp de 3 zile. Celulele au fost apoi resuspendate în mediu RPMI (Life Technologies) suplimentat cu 10% FBS (Life Technologies), 100 U/mL penicilină, 100 µg/mL streptomicina (Life Technologies), 2 mM GlutaMAX (Life Technologies) şi 10 ng/mL interleukină-2 (IL-2, sisteme de cercetare şi dezvoltare) pentru încă 3 zile. În ziua testului, celulele au fost spălate în tampon de analiză (RPMI suplimentat cu 0,1% albumină serică bovină (BSA, Sigma), 100 U/mL penicilină, 100 µg/mL streptomicina (Life Technologies) şi 2 mM GlutaMAX (Life Technologies) )) şi resuspendate la 1,25 x 106 celule per ml în tampon de testare. Celulele au fost însămânţate la 250.000 de celule per 100 µl per godeu într-o placă cu fund rotund de polipropilenă, adâncime de 96 de godeuri (Coming) şi au fost lăsate să cultive timp de 1 oră. Mediul a fost îndepărtat şi înlocuit cu 50 µL de tampon de analiză care conţine răspunsuri la doză de compuşi de testat. Compuşii au fost preparaţi ca soluţii stoc 10 mM în DMSO. S-au efectuat diluţii în serie pentru a genera 11 concentraţii de compus de testat la de 1000 de ori concentraţia finală de testare în DMSO 100%. Acestea au fost diluate de 25 de ori şi apoi de 20 de ori în medii de testare pentru a genera stocuri la 2X peste concentraţia de testare finală în 0,2% DMSO. Celulele au fost incubate cu compuşi de testare la 37°C timp de 1 oră, urmată de adăugarea a 50 µL de tampon de testare preîncălzit care conţine IL-12 (20 ng/mL, sisteme R&D) Concentraţia finală de IL-12 este de 10 ng /mL. După incubare la 37°C timp de 30 de minute, celulele au fost fixate cu 100 µL de tampon citofix preîncălzit (BD Biosciences) şi incubate timp de 10 minute la 37°C. Celulele au fost apoi centrifugate timp de 5 minute la 322xg, supernatantul a fost aruncat şi celulele au fost spălate cu 500 µL de tampon de colorare (1% BSA în soluţie salină tamponată cu fosfat (PBS)). Celulele au fost apoi centrifugate timp de 5 minute la 322xg, supernatantul eliminat şi celulele au fost incubate timp de 30 de minute pe gheaţă cu 500 µL de tampon Perm III pre-răcit (BD Biosciences) pentru a permeabiliza celulele. Apoi, celulele au fost centrifugate timp de 5 minute la 322xg, supernatantul a fost aruncat, spălat cu 1 ml de tampon de colorare, centrifugat încă o dată şi granula de celule finală resuspendată în 100 µL de tampon de colorare care conţine anti-CD3 R-PE (diluţie 1:10) şi anti-STAT4 AlexaFluor 647 (diluţie 1:50) pentru a colora suprafaţa celulei şi markerii intracelulari. Celulele au fost incubate timp de 45 minute la temperatura camerei în întuneric. După colorarea cu anticorpi, celulele au fost centrifugate timp de 5 minute la 322xg, supernatantul a fost eliminat şi celulele au fost spălate cu 500 µL de tampon de colorare. Celulele au fost spălate încă o dată înainte ca conţinutul godeului să fie transferat de pe placa de analiză cu godeu adânc pe o placă cu 96 de godeuri cu fund în U de polipropilenă în 200 µL tampon de colorare pentru analiza citometriei în flux. Pentru analiza doză-răspuns, valorile medii ale intensităţii fluorescenţei au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus, şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robustă cu 4 parametri cu software-ul Prism. Compusul (I) a prezentat o valoare pIC50 de 7,2 în acest test.
Testul 13: Inhibarea pSTAT6 stimulată cu IL-13 în cheratinocite epidermice umane normale
Potenţa compuşilor de testat pentru inhibarea fosforilării STAT6 stimulată de interleukină-13 (IL-13) a fost măsurată în cheratinocite epidermice umane normale (ATCC) utilizând AlphaLisa. STAT6 fosforilat a fost măsurat prin trusa AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT6 (Tyr641) (PerkinElmer).
Keratinocitele epidermice primare au fost cultivate într-un incubator umidificat la 37°C, 5% CO2, în mediu bazal de celule dermice (ATCC) suplimentat cu kit de creştere a keratinocitelor (ATCC) şi IX Pen/Strep (Life Technologies). Celulele au fost însămânţate la 20.000 celule/godeu în plăci albe cu 384 de godeuri acoperite cu poli-D-lizină (Corning) cu 50 µl şi incubate la 37°C, 5% CO2 peste noapte. În ziua a 2-a a testului, mediul a fost îndepărtat şi înlocuit cu 15 uL de mediu care conţine răspunsul compuşilor de testat. Compuşii au fost diluaţi în serie în DMSO şi apoi diluaţi încă de 1000 de ori în mediu pentru a aduce concentraţia finală de DMSO la 0,1%. Celulele au fost incubate cu compuşi de testat la 37°C timp de 1 oră şi urmate de adăugarea de IL-13 (R&D Systems; concentraţie finală 50 ng/mL) în mediu de testare preîncălzit (5 µL) pentru 30 minute.
După stimularea cu citokine, celulele au fost lizate cu 5 µl de tampon de liză AlphaLisa 5x (PerkinElmer) conţinând 1x tablete PhosStop şi Complete (Roche). Lizatul a fost agitat la 900 rpm timp de 10 minute la temperatura camerei (RT). STAT6 fosforilat a fost măsurat prin trusa pSTAT6 AlphaLisa (PerkinElmer). Amestecul de bile acceptoare proaspăt preparat a fost distribuit pe lizat (10 uL) sub filtrat verde < 100 lux lumină. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, rotite scurt în jos şi incubate timp de 2 ore la RT în întuneric. Bilele donatoare au fost distribuite (10 uL) sub filtrat verde < 100 lux de lumină. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, scuturate în jos şi incubate peste noapte la temperatura camerei în întuneric. Luminescenţa a fost măsurată cu excitaţie la 689 nm şi emisie la 570 nm folosind un cititor de plăci EnVision (PerkinElmer) sub lumină verde filtrat <100 lux.
Semnalele de luminescenţă au fost înregistrate şi utilizate pentru a calcula valorile procentuale de inhibare pe baza DMSO şi martori. Pentru analiza doză-răspuns, datele de inhibare procentuală au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus, şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robust cu 4 parametri cu software-ul Prism. pIC50 al compusului (I) a fost 8,3 în acest test.
Testul 14: Inhibarea pSTAT3 stimulată cu IL-22 în cheratinocite epidermice umane normale
Potenţa compuşilor de testat pentru inhibarea fosforilării STAT3 stimulată de interleukină-22 (IL-22) a fost măsurată în cheratinocite epidermice umane normale (ATCC) utilizând AlphaLisa. STAT3 fosforilat a fost măsurat prin trusa AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT3 (Tyr705) (PerkinElmer).
Keratinocitele epidermice primare au fost cultivate într-un incubator umidificat la 37°C, 5% CO2, în mediu bazal de celule dermale (ATCC) suplimentat cu kit de creştere a keratinocitelor (ATCC) şi IX Pen/Strep (Life Technologies). Celulele au fost însămânţate la 20.000 celule/godeu în plăci albe cu 384 de godeuri acoperite cu poli-D-lizină (Corning) cu 50 µl şi incubate la 37°C, 5% CO2 peste noapte. În ziua a 2-a a testului, mediul a fost îndepărtat şi înlocuit cu 15 µL de mediu care conţine răspunsul la doză a compuşilor de testat. Compuşii au fost diluaţi în serie în DMSO şi apoi diluaţi încă de 1000 de ori în mediu pentru a aduce concentraţia finală de DMSO la 0,1%. Celulele au fost incubate cu compuşi de testat la 37°C timp de 1 oră şi urmate de adăugarea de IL-22 (R&D Systems; concentraţie finală 50 ng/mL) în mediu de testare preîncălzit (5 µL) pentru 30 minute.
După stimularea cu citokine, celulele au fost lizate cu 5 ul de tampon de liză AlphaLisa 5x (PerkinElmer) conţinând 1x tablete PhosStop şi Complete (Roche). Lizatul a fost agitat la 900 rpm timp de 10 minute la temperatura camerei (RT). STAT3 fosforilat a fost măsurat prin trusa pSTAT3 AlphaLisa (PerkinElmer). Amestecul de bile acceptoare proaspăt preparat a fost distribuit pe lizat (10 uL) sub filtrat verde < 100 lux lumină. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, rotite scurt în jos şi incubate timp de 2 ore la RT în întuneric. Bilele donatoare au fost distribuite (10 µL) sub filtru de lumina verde < 100 lux. Plăcile au fost agitate la 900 rpm timp de 2 minute, scuturate în jos şi incubate peste noapte la temperatura camerei în întuneric. Luminescenţa a fost măsurată cu excitaţie la 689 nm şi emisie la 570 nm folosind un cititor de plăci EnVision (PerkinElmer) sub filtru de lumină verde <100 lux.
Semnalele de luminescenţă au fost înregistrate şi utilizate pentru a calcula valorile procentuale de inhibare pe baza DMSO şi martori. Pentru analiza doză-răspuns, datele de inhibare procentuală au fost reprezentate grafic faţă de concentraţiile de compus, şi valorile IC50 au fost determinate dintr-un model de potrivire robust cu 4 parametri cu software-ul Prism. pIC50 al compusului (I) a fost 8,4 în acest test.
Testul 15: Recuperarea filagrinei suprimate IL-22 în cheratinocite epidermice umane normale
Se ştie că IL-22 inhibă expresia genelor de diferenţiere terminală, cum ar fi Filagrina. Nivelul de recuperare al compusului de testat pentru expresia filagrinei suprimată a interleukinei-22 (IL-22) a fost măsurat în cheratinocitele epidermice umane normale (ATCC) utilizând PCR în timp real.
Keratinocitele epidermice primare au fost cultivate într-un incubator umidificat la 37°C, 5% CO2, în mediu bazal de celule dermice (ATCC) suplimentat cu kit de creştere a keratinocitelor (ATCC) şi IX Pen/Strep (Life Technologies). Celulele au fost însămânţate la 5.000 celule/godeu în plăci BioCoat cu 96 de godeuri (Corning) cu 100 µl şi incubate la 37°C, 5% CO2 timp de 3 până la 4 zile până la confluenţă de 100%. Apoi, mediul a fost îndepărtat şi înlocuit cu 150 µL de mediu care conţine răspunsul la compuşii de testat. Compuşii au fost diluaţi în serie în DMSO şi apoi diluaţi încă de 1000 de ori în mediu pentru a aduce concentraţia finală de DMSO la 0,1%. În ziua 1 a testului, celulele au fost incubate cu compuşii de testat la 37°C timp de 1 oră şi au fost urmate de adăugarea de IL-22 (R&D Systems; concentraţia finală 50 ng/mL) în mediu preîncălzit (50 µL) timp de 4 zile. Mediul cu compuşii de testat şi IL-22 a fost schimbat o dată în ziua 3. În ziua 5, celulele au fost spălate cu IX PBS (Gibco) şi lizate cu 50 µl de tampon de liză conţinând 0,5 µl Dnasel din Kitul TaqMan® Gene Expression Cells-to-Ct™ (Life Technologies). După incubarea la temperatura camerei (RT) timp de 5 minute, s-au adăugat 5 µl de soluţie Stop din kit şi apoi s-au incubat la RT timp de 2 minute. S-au amestecat 11,25 µl de lizat, 12,5 µl de tampon 2X RT şi 1,25 µl amestec de enzime 20X RT din kit. Reacţia de transcripţie inversă a fost efectuată prin incubarea amestecului la 37°C timp de 60 de minute şi apoi la 95°C timp de 5 minute pentru a genera cADN. Pentru a asambla cocktailul PCR, fiecare reacţie a conţinut 10 µl de 2X TaqMan® Gene Expression Mater Mix, 1 µl de 2X TaqMan® Filaggrin Gene Expression Assay (Life Technologies), 1 µl de 2X TaqMan® UBC Gene Expression Assay (Life Technologies), 4 µl de nuclează fără apă şi 4 µl de cADN. Reacţiile PCR au fost efectuate pe EtapaOnePlus™ (Life Technologies) cu condiţii ciclice de 50°C timp de 2 minute, 95°C timp de 10 minute urmate de 40 de cicluri de 95°C timp de 15 secunde şi 60°C timp de 1 minut. Semnalele de fluorescenţă au fost captate după fiecare ciclu. Metoda CT comparativă a fost utilizată pentru a cuantifica expresia genei cu celule fără IL-22 şi compuşi de testare ca control de bază.
Recuperarea compusului (I) pentru expresia filagrinei suprimată interleukina-22 (IL-22) a fost observată la o concentraţie < 1 µM.
Testul 16: Testul de permeabilitate Caco-2
Testul de permeabilitate Caco-2 a fost utilizat ca un indicator al permeabilităţii pielii. Testul măsoară viteza cu care compuşii de testat în soluţie pătrund într-un monostrat celular (proiectat să imite joncţiunea strânsă a monostraturilor umane intestinale subţiri).
Plăcile transwell cu 24 de godeuri CacoReady au fost obţinute de la ADMEcell (Alameda, CA). Compuşii au fost evaluaţi la o concentraţie de 5 µM din soluţii stoc de DMSO 10 mM în duplicat (n=2). Permeabilitatea pasivă a compuşilor testaţi a fost evaluată folosind monostraturi de celule Caco-2 împreună cu Verapamil (25 uM) pentru a inhiba proteinele de transport P-gp în direcţia apicală spre bazolaterală (A-B). Experimentul a fost efectuat într-un incubator la 37°C, 5% CO2. Mediul de cultură Caco-2 a constat din filtrat standard DMEM, FCS 10%, L-Glutamină 1% şi PenStrep 1%. Placa de analiză bazală a fost preparată prin adăugarea a 750 µL de tampon de transport la godeurile A-B. O placă CacoReady™ a fost preparată prin îndepărtarea mediului Caco-2 din godeurile apicale şi înlocuirea cu mediu de transport proaspăt (200 uL repetate pentru un total de 3 spălări). Mediul martor (200 µL) a fost apoi înlocuit cu compus diluat pentru godeurile A-B. Pentru a începe incubarea, placa bazală a fost îndepărtată din incubator şi a fost adăugată secţiunea apicală deasupra acesteia. Au fost colectate probe (40 uL) din compartimentele apicale şi bazale pentru timpul zero (t0). Probele au fost colectate din nou după 120 de minute (t120) din compartimentele apicale şi bazale. Toate probele au fost diluate şi pregătite pentru bioanaliza prin LC-MS/MS. Coeficientul de permeabilitate (Kp, medie A la B + Verapamil Papparent) în cm/sec a fost calculat ca dQ (flux)/(dt x Aria x concentraţie).
În acest test, un compus cu o valoare Kp mai mică de aproximativ 5 x 10-6 cm/sec este considerat a avea permeabilitate scăzută. Un compus având o valoare Kp mai mare de aproximativ 20 x 10-6 cm/sec este considerat a avea o permeabilitate ridicată.
Testul 17: Testul microzomului hepatic uman
Obiectivul acestei analize a fost de a evalua stabilitatea metabolică a compuşilor de testat într-o sub-fracţie hepatică umană in vitro. Microzomii hepatici umani obţinuţi de la Bioreclamation-IVT (Baltimore, MD) au fost dezgheţaţi pe gheaţă şi diluaţi în tampon fosfat de potasiu 0,1 M pH 7,4 până la concentraţii aleatoare ale proteinei de incubare finale de 0,1 mg/mL. Compuşii de testat (10 mM) au fost diluaţi în cofactor NADPH până la concentraţii finale aleatorii de incubare de compus de testat 0,1 µM şi NADPH ImM. Incubările au fost efectuate la o temperatură de 37°C şi au fost prelevate alicote de testare la punctele de timp 0, 5, 8, 15, 30 şi 45 de minute. Fiecare alicotă a fost prăbuşită în apă cu acid formic 3% şi standard intern 1 µM. Probele rezultate au fost injectate într-un sistem LC-MS/MS pentru analiză.
Pentru fiecare incubare, aria de vârf a analiţilor din fiecare alicotă t0 a fost setată la 100% şi zonele de vârf din alicotele de timp ulterioare au fost convertite în procentul de compus de bază rămas în raport cu t0. Procentul de compus de bază rămas a fost convertit la scară logaritmică naturală şi reprezentat grafic în funcţie de timp în minute. A fost efectuată o analiză de regresie liniară pentru declinul iniţial al profilului de dispariţie compusului de bază şi a fost determinată o formulă pentru linia cea mai potrivită. Panta liniei rezultate a fost normalizată la concentraţia de proteine ​​​​în mg/ml proteină sau numărul de celule/ml şi CLin a fost calculat după cum urmează pentru microzomii hepatici:
Valorile CLint de la 0-8 µl/min/mg reprezintă clearance-ul scăzut (adică < 30% din fluxul sanguin hepatic la om). Valorile CLint de la 9-49 µl/min/mg reprezintă clearance moderat (adică 30-70% din fluxul sanguin hepatic la om) şi valorile > 50 µl/min/mg reprezintă clearance-ul hepatic ridicat (adică >70% din fluxul sanguin hepatic la om).
Caracterizarea compusului (I) şi compuşii de comparaţie
Tabelul 13: Caracterizarea compuşilor de comparaţie
Compus # Structura Cacoverap Kp 10-6 cm/sec HLM Clint (µL/min/mg (I) 42,3 136 C-1 3,55 6 C-2 5,5 12
Compuşii comparativi C-1 şi C-2 au fost dezvăluiţi de către solicitant în unele prezentări făcute în Aprilie, Iunie şi August 2017 la conferinţe.
Compusul (I) este caracterizat printr-o permeabilitate mult mai mare (valoarea Cacoverap) şi clearance-ul microzomului hepatic uman (valoarea HLM Clint) decât C-1 şi C-2. Un clearance mai mare este benefic pentru a promova clearance-ul sistemic rapid şi pentru a preveni expunerea sistemică care poate fi asociată cu efecte secundare. O permeabilitate mai mare este benefică pentru indicaţiile pielii, deoarece pare să asigure o mai bună penetrare în piele.

Claims (29)

1. Un compus cu formula (I):
sau o sare a acestuia acceptabilă din punct de vedere farmaceutic.
2. Forma liberă a compusului din revendicarea 1.
3. O formă cristalină a compusului cu formula (I):
unde forma cristalină este caracterizată de un model de difracţie cu raze X în pulbere care cuprinde vârfuri de difracţie la valori de 2θ de 11.4±0.2, 16.2±0.2, 16.6±0.2, 17.7±0.2, şi 21.9±0.2.
4. Formă cristalină din revendicarea 3, unde modelul de difracţie cu raze X în pulbere este caracterizat în plus prin faptul că are vârfuri de difracţie suplimentare la valori de 2θ ale 8.9±0.2, 9.5±0.2, şi 10.2±0.2.
5. Forma cristalină conform revendicării 4, în care modelul de difracţie cu raze X în pulbere este caracterizat în plus prin faptul că are două sau mai multe vârfuri de difracţie suplimentare la valori 2θ selectate dintre 14.4±0.2, 19.0±0.2, 19.2±0.2, 19.8±0.2, 20.1±0.2, 20.4±0.2, 20.6±0.2, 20.8±0.2, 21.3±0.2, 25.9±0.2, 30.1±0.2, 30.5±0.2, 30.9±0.2, 32.6±0.2, şi 33.8±0.2.
6. Forma cristalină conform revendicării 3, în care forma cristalină este caracterizată printr-o calorimetrie cu scanare diferenţială înregistrată la o viteză de încălzire de 10 °C pe minut care arată un flux de căldură endotermic maxim cu un vârf la 238.1 °C ± 2 °C.
7. Compoziţie farmaceutică cuprinzând un compus conform oricăreia dintre revendicările 1 sau 2 şi un purtător acceptabil farmaceutic.
8. Compoziţie farmaceutică cuprinzând o formă cristalină conform oricăreia dintre revendicările 3 până la 6 şi un purtător acceptabil farmaceutic.
9. Compoziţie farmaceutică conform revendicării 7, care mai cuprinde unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari.
10. Compoziţie farmaceutică conform revendicării 7, în care compoziţia farmaceutică este un unguent sau o cremă.
11. Compoziţie farmaceutică conform revendicării 7, în care compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, este prezent între 0,1 şi 10 % în greutate.
12. Compoziţie farmaceutică conform revendicării 7, în care compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, este prezent între 0,25 şi 5% în greutate.
13. Compoziţie farmaceutică conform revendicării 7, în care compusul (I), sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia, este prezent între 0,05 şi 0,5% în greutate.
14. Compus conform revendicării 1 sau 2, pentru utilizare în tratamentul unei boli inflamatorii sau autoimune a pielii la un mamifer.
15. Compus conform revendicării 14, pentru utilizare în tratamentul unei boli inflamatorii de piele la un mamifer.
16. Compus conform revendicării 15, pentru utilizare în tratamentul dermatitei atopice.
17. Compus conform revendicării 16, în care dermatita atopică este dermatită atopică moderată până la severă.
18. Compus conform revendicării 16, în care dermatita atopică este dermatită atopică uşoară până la moderată.
19. Compus conform revendicării 14, pentru utilizare în tratamentul alopeciei areata.
20. Compus conform revendicării 14, pentru utilizare în tratamentul unei boli inflamatorii sau autoimune ale pielii selectate din grupul constând din: vitiligo, prurigo nodularis, lichen plan, dermatită de contact, manifestări cutanate ale bolii grefă versus gazdă, pemfigoid, lupus discoid, lichen sclerosus, lichen planopilar, psoriazis şi foliculita decalvanta.
21. Compus conform revendicării 14, pentru utilizare în tratamentul psoriazisului.
22. Un procedeu pentru prepararea unui compus cu formula (I):
sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, care cuprinde: (a) reactia unui compus cu formula (II):
unde R este o grupare C1-12 alchil cu un agent reducător şi (b) opţional formarea unei săruri acceptabile farmaceutic pentru a furniza un compus cu formula (I), sau o sare a acesuia acceptabilă farmaceutic.
23. Procedeu din revendicarea 22, unde agentul reducător este selectat din grupul constând din LiAlH4, NaBH4, şi LiBH4.
24. Procedeu din revendicarea 22, unde R este etil.
25. Procedeu din revendicarea 22, unde compusul cu formula (II) este obţinut prin cuplarea unui compus cu formula (III)
unde X este un halogen, cu un compus cu formula 1-9
26. Compus cu formula (II):
sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, unde R este o grupare C1-12 alchil.
27. Compusul din revendicarea 26, unde R este etil.
28. Compus cu formula (III):
sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic, unde R este o grupare C1-12 alchil şi X este halogen.
29. Compus din revendicarea 28, unde R este etil şi X este cloro.
MDE20200681T 2017-10-27 2018-10-26 Compusi ai pirimidinei ca inhibitori ai kinazei JAK MD3672965T2 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762577852P 2017-10-27 2017-10-27
PCT/US2018/057682 WO2019084383A1 (en) 2017-10-27 2018-10-26 PYRIMIDINE COMPOUNDS AS JAK KINASE INHIBITORS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD3672965T2 true MD3672965T2 (ro) 2022-12-31

Family

ID=64277858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20200681T MD3672965T2 (ro) 2017-10-27 2018-10-26 Compusi ai pirimidinei ca inhibitori ai kinazei JAK

Country Status (38)

Country Link
US (7) US10308646B2 (ro)
EP (1) EP3672965B1 (ro)
JP (1) JP7218364B2 (ro)
KR (1) KR102613503B1 (ro)
CN (1) CN111247142B (ro)
AR (1) AR113803A1 (ro)
AU (1) AU2018354370B2 (ro)
BR (1) BR112020008015A2 (ro)
CA (1) CA3074034A1 (ro)
CL (1) CL2020001090A1 (ro)
CR (1) CR20200180A (ro)
CU (1) CU24671B1 (ro)
DK (1) DK3672965T3 (ro)
DO (1) DOP2020000083A (ro)
EA (1) EA202091016A1 (ro)
EC (1) ECSP20023795A (ro)
ES (1) ES2932526T3 (ro)
GE (2) GEAP202115340A (ro)
HR (1) HRP20221221T1 (ro)
HU (1) HUE060401T2 (ro)
IL (1) IL274037B2 (ro)
LT (1) LT3672965T (ro)
MA (1) MA49956B1 (ro)
MD (1) MD3672965T2 (ro)
MX (1) MX2020004255A (ro)
NI (1) NI202000032A (ro)
PE (1) PE20201495A1 (ro)
PH (1) PH12020500528A1 (ro)
PL (1) PL3672965T3 (ro)
PT (1) PT3672965T (ro)
RS (1) RS63608B1 (ro)
SG (1) SG11202001706RA (ro)
SI (1) SI3672965T1 (ro)
SM (1) SMT202200409T1 (ro)
TW (1) TWI789446B (ro)
UA (1) UA125130C2 (ro)
WO (1) WO2019084383A1 (ro)
ZA (1) ZA202001641B (ro)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11202001706RA (en) * 2017-10-27 2020-03-30 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
WO2020108613A1 (zh) * 2018-11-30 2020-06-04 江苏豪森药业集团有限公司 杂芳类衍生物调节剂、其制备方法和应用
PL3958969T3 (pl) 2019-04-24 2024-05-20 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Estrowe i węglanowe związki pirymidynowe jako inhibitory kinaz
TW202106681A (zh) * 2019-04-24 2021-02-16 美商施萬生物製藥研發Ｉｐ有限責任公司 用於治療皮膚疾病之嘧啶jak抑制劑
WO2022027041A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Arcutis Biotherapeutics, Inc. Topical formulation containing jak inhibitor and laureth-4
CA3190539A1 (en) * 2020-08-26 2022-03-03 William Greenlee Modulators of myc family proto-oncogene protein
WO2022076771A1 (en) * 2020-10-08 2022-04-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions for treatment alopecia areata, biomarkers for treatment success, and methods of use thereof
TW202311256A (zh) * 2021-06-18 2023-03-16 美商基利科學股份有限公司 用於治療ｆｘｒ誘發之搔癢之ｉｌ－３１調節劑
EP4423086A1 (en) 2021-10-25 2024-09-04 Kymera Therapeutics, Inc. Tyk2 degraders and uses thereof
CA3240662A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Herbert R. Brinkman Stable formulations of shr0302
CN114246938A (zh) * 2022-01-25 2022-03-29 中山大学中山眼科中心 Il-4在制备用于治疗视网膜变性疾病药物中的应用
CN115487301B (zh) * 2022-11-08 2023-07-07 四川大学华西医院 Il-13抑制剂在制备延缓或治疗视网膜色素变性的药物中的用途

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4919934A (en) 1989-03-02 1990-04-24 Richardson-Vicks Inc. Cosmetic sticks
US6660731B2 (en) 2000-09-15 2003-12-09 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
WO2002022605A1 (en) 2000-09-15 2002-03-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
US6989385B2 (en) 2000-12-21 2006-01-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
JP2008525422A (ja) * 2004-12-23 2008-07-17 ファイザー・プロダクツ・インク 抗癌剤として有用な複素芳香族誘導体
US20070179125A1 (en) 2005-11-16 2007-08-02 Damien Fraysse Aminopyrimidines useful as kinase inhibitors
TW200817391A (en) 2006-06-30 2008-04-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
EP2043651A2 (en) 2006-07-05 2009-04-08 Exelixis, Inc. Methods of using igf1r and abl kinase modulators
CN104011050A (zh) 2011-12-22 2014-08-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 作为丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的2,4-二氨基-嘧啶衍生物
WO2015094803A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Calitor Sciences, Llc Substituted heteroaryl compounds and methods of use
NO2721710T3 (ro) * 2014-08-21 2018-03-31
JP2017535520A (ja) * 2014-09-30 2017-11-30 ハンミ・ファイン・ケミカル・カンパニー・リミテッドＨａｎｍｉ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 高純度の（ｒ）−９−［２−（ホスホノメトキシ）プロピル］アデニンの製造方法
ES2753159T3 (es) 2015-05-28 2020-04-07 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Compuestos de naftiridina como inhibidores de quinasa JAK
JP2018527362A (ja) * 2015-09-11 2018-09-20 サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッドＳｕｎｓｈｉｎｅ Ｌａｋｅ Ｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 置換されたヘテロアリール化合物および使用方法
CA3020506A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Pyrimidine compounds as jak kinase inhibitors
SG11202001706RA (en) 2017-10-27 2020-03-30 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
PL3958969T3 (pl) 2019-04-24 2024-05-20 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Estrowe i węglanowe związki pirymidynowe jako inhibitory kinaz
TW202106681A (zh) 2019-04-24 2021-02-16 美商施萬生物製藥研發Ｉｐ有限責任公司 用於治療皮膚疾病之嘧啶jak抑制劑

Also Published As

Publication number Publication date
ZA202001641B (en) 2021-04-28
MA49956B1 (fr) 2022-11-30
US20190127364A1 (en) 2019-05-02
PT3672965T (pt) 2022-09-29
EP3672965B1 (en) 2022-09-07
US20200369660A1 (en) 2020-11-26
US10988470B2 (en) 2021-04-27
PH12020500528A1 (en) 2021-06-07
AU2018354370A1 (en) 2020-04-09
CL2020001090A1 (es) 2020-08-21
IL274037B2 (en) 2023-11-01
HRP20221221T1 (hr) 2022-12-09
EA202091016A1 (ru) 2020-07-17
AR113803A1 (es) 2020-06-10
US20210214349A1 (en) 2021-07-15
CU20200053A7 (es) 2021-03-11
KR102613503B1 (ko) 2023-12-13
MX2020004255A (es) 2020-07-29
SI3672965T1 (sl) 2022-11-30
JP7218364B2 (ja) 2023-02-06
US20240158389A1 (en) 2024-05-16
CN111247142A (zh) 2020-06-05
CU24671B1 (es) 2023-07-12
GEAP202115340A (en) 2021-08-10
GEP20227344B (en) 2022-01-25
HUE060401T2 (hu) 2023-02-28
IL274037A (en) 2020-06-30
CR20200180A (es) 2020-08-12
DK3672965T3 (da) 2022-10-03
AU2018354370B2 (en) 2023-04-27
IL274037B1 (en) 2023-07-01
CN111247142B (zh) 2022-12-02
BR112020008015A2 (pt) 2020-10-27
ECSP20023795A (es) 2020-06-30
SG11202001706RA (en) 2020-03-30
PE20201495A1 (es) 2020-12-29
UA125130C2 (uk) 2022-01-12
LT3672965T (lt) 2022-10-10
ES2932526T3 (es) 2023-01-20
JP2021501151A (ja) 2021-01-14
US10774080B2 (en) 2020-09-15
MA49956A (fr) 2020-07-01
US20190241555A1 (en) 2019-08-08
US10562894B2 (en) 2020-02-18
US11814377B2 (en) 2023-11-14
EP3672965A1 (en) 2020-07-01
SMT202200409T1 (it) 2022-11-18
US10308646B2 (en) 2019-06-04
US11420965B2 (en) 2022-08-23
DOP2020000083A (es) 2020-08-15
TW201930304A (zh) 2019-08-01
US20220396573A1 (en) 2022-12-15
KR20200078517A (ko) 2020-07-01
NI202000032A (es) 2020-10-09
US20200140430A1 (en) 2020-05-07
CA3074034A1 (en) 2019-05-02
WO2019084383A1 (en) 2019-05-02
TWI789446B (zh) 2023-01-11
US12172994B2 (en) 2024-12-24
PL3672965T3 (pl) 2023-01-16
RS63608B1 (sr) 2022-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12172994B2 (en) Pyrimidine compound as JAK kinase inhibitor
US11845747B2 (en) Ester and carbonate pyrimidine compounds as JAK kinase inhibitors
IL270231B2 (en) Compressed imidazo-piperidine jak inhibitor compound
EP3959213B1 (en) Pyrimidine jak inhibitors for the treatment of skin diseases
HK40029509B (en) Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
HK40029509A (en) Pyrimidine compound as jak kinase inhibitor
OA19911A (en) Pyrimidine compound as JAK kinase inhibitor.
EA041115B1 (ru) Пиримидиновое соединение в качестве ингибитора jak киназы

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees