TW201930304A - 作為jak激酶抑制劑之嘧啶化合物 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其為JAK激酶之抑制劑。本發明亦提供包含此類化合物之醫藥組合物、結晶形式、使用此類化合物治療發炎性皮膚病及其他疾病之方法以及適用於製備此類化合物之方法及中間物。

Description

作為JAK激酶抑制劑之嘧啶化合物

本發明係關於嘧啶化合物，其適用作JAK激酶抑制劑。本發明亦係關於包含此類化合物之醫藥組合物、此類化合物之結晶形式、使用此類化合物治療發炎性及自體免疫疾病之方法以及適用於製備此類化合物之方法及中間物。

對JAK酶之家族之抑制可抑制許多重要的促炎性細胞介素之信號傳導。因此，JAK抑制劑可能適用於治療異位性皮膚炎及其他發炎性皮膚病、過敏性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)以及其他肺部發炎性疾病、潰瘍性結腸炎及其他胃腸道炎症，以及眼部發炎性疾病。

異位性皮炎(AD)為僅在美國就影響估計一千四百萬人之常見慢性發炎性皮膚病。據估計，AD影響發達國家中10至20%兒童及1至3%成年人(Bao等人,JAK - STAT ,2013 ,2 , e24137)且發病率逐漸提高。已發現依賴於JAK-STAT路徑之促炎性細胞介素(特定言之，IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、IL-13、IFNγ及TSLP)之升高與AD相關聯(Bao等人, Leung等人,The Journal of Clinical Investigation ,2004 ,113 , 651-657)。此外，已證實IL-31 (另一種經由JAK配對進行信號傳導之細胞介素)之上調在與AD之慢性狀態相關聯之搔癢病中發揮作用(Sonkoly等人,Journal of Allergy and Clinical Immunology ,2006 ,117 , 411-417)。

歸因於JAK/STAT路徑對免疫系統之調節作用，全身性暴露於JAK抑制劑可能具有不利的全身性免疫抑制作用。因此，需要提供新型JAK抑制劑，其在作用位點起作用，但無顯著全身性作用。特定言之，對於發炎性皮膚病，諸如異位性皮膚炎之治療，將需要提供新型JAK抑制劑，其可局部投與且在皮膚中實現治療學上相關暴露，該暴露可快速清除以最小化全身性暴露。

在一個態樣中，本發明提供一種化合物，其具有作為JAK激酶抑制劑之活性。

因此，本發明提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦提供化合物(I)之結晶形式。

本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含化合物(I)及醫藥學上可接受之載劑。

本發明亦提供治療哺乳動物中之皮膚之發炎性及自體免疫疾病，特定言之，異位性皮膚炎及斑禿之方法，該方法包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦提供本文中所描述之合成方法及中間物，其適用於製備化合物(I)。

本發明亦提供如本文中所描述之化合物(I)，其係用於治療發炎性疾病或病症。

相關申請案之交叉參考
本申請案主張2017年10月27日申請之美國臨時申請案第62/577,852號之權利，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。

在其他態樣中，本發明提供式(I)之JAK激酶抑制劑、其醫藥學上可接受之鹽及用於製備其之中間物。

如ChemDraw軟體(PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA)中所實施，本文中根據IUPAC公約命名化學結構。舉例而言，化合物(I)：

稱為(2-(((1R,3s,5S)-9-(乙磺醯基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬-3-基)(甲基)胺基)-5-氟-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-基)甲醇。

(1R ,3s ,5S )標記描述相對於9-氮雜雙環-[3.3.1]壬烷基團，嘧啶基胺基之外定向。

此外，化合物(I)以及本文中所揭示之其他化合物之吡唑基部分以互變異構形式存在。應理解，儘管特定結構以特定形式展示或命名，但本發明亦包括其互變異構體。

本發明之化合物含有一或多個對掌性中心且因此，此類化合物(及其中間物)可以外消旋混合物、純立體異構體(亦即，對映異構體或非對映異構體)、立體異構體增濃之混合物及其類似物之形式存在。除非另外指示，否則本文中展示或命名之在對掌性中心不具有確定立體化學之對掌性化合物意欲包括在未確定之立構中心的任何或所有可能的立體異構體變化形式。除非另外指示，否則特定立體異構體的描述或命名意謂所指示的立構中心具有指定的立體化學，同時應理解為亦可存在少量其他立體異構體，限制條件為所描繪或所命名的化合物之效用不因存在另一種立體異構體而消除。

化合物(I)可以游離形式或各種鹽形式存在，諸如單質子化鹽形式、二質子化鹽形式、三質子化鹽形式或其混合物。除非另有指示，否則所有此類形式包括於本發明之範疇內。

本發明亦包括本發明之化合物，包括化合物(I)之經同位素標記之版本，其中一個原子已由具有相同原子數，但與在自然界中通常發現之原子質量不同的原子質量之原子置換或增濃。可併入式(I)化合物中之同位素的實例包括(但不限於)² H、³ H、¹¹ C、¹³ C、¹⁴ C、¹³ N、¹⁵ N、¹⁵ O、¹⁷ O、¹⁸ O、³⁵ S及¹⁸ F。尤其關注富含氚或碳14之式(I)化合物，該等化合物可用於例如組織分佈研究中。亦尤其關注尤其在代謝位點富含氘之式(I)化合物，該等化合物預期具有較高代謝穩定性。此外，尤其關注富含諸如¹¹ C、¹⁸ F、¹⁵ O及¹³ N之正電子發射同位素之式(I)化合物，該等化合物可用於例如正電子發射斷層攝影法(PET)研究。

定義
除非另有指示，否則當描述本發明(包括其各種態樣及實施例)時，以下術語具有以下含義。

術語「烷基」意謂單價飽和烴基，其可為直鏈或分支鏈或其組合。除非另外定義，否則此類烷基通常含有1至10個碳原子。代表性烷基包括例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或(nPr)、異丙基(i-Pr)或(iPr)、正丁基(n-Bu)或(nBu)、第二丁基、異丁基、第三丁基(t-Bu)或(tBu)、正戊基、正己基、2,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-乙基丁基、2,2-二甲基戊基、2-丙基戊基及其類似物。

當特定數目的碳原子意欲用於特定術語時，碳原子數目在術語前展示。舉例而言，術語「C_{1 - 3} 烷基」意謂具有1至3個碳原子之烷基，其中碳原子呈任何化學上可接受之組態，包括直鏈或分支鏈組態。

術語「烷氧基」意謂單價基團-O-烷基，其中烷基如上文所定義。代表性烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基及其類似物。

術語「環烷基」意謂單價飽和碳環基，其可為單環或多環。除非另外定義，否則此類環烷基通常含有3至10個碳原子。代表性環烷基包括例如環丙基(cPr)、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、金剛烷基及其類似物。

術語「鹵素」意謂氟、氯、溴或碘。

術語「雜環基(heterocyclyl)」、「雜環(heterocycle)」、「雜環的(heterocyclic)」或「雜環(heterocyclic ring)」意謂總共具有3至10個環原子之單價飽和或部分不飽和環狀非芳族基團，其中環含有2至9個碳環原子及1至4個選自氮、氧及硫之環雜原子。雜環基可為單環或多環(亦即，稠合或橋連)的。代表性雜環基包括例如吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、咪唑啶基、嗎啉基、硫嗎啉基、吲哚啉-3-基、2-咪唑啉基、四氫哌喃基、1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基、奎寧環基、7-氮雜降莰烷基、降托烷基及其類似物，其中連接點在任何可用之碳或氮環原子處。在雜環基之連接點顯而易見之情況下，此類基團可替代地稱為無價(non-valent)物質，亦即吡咯啶、哌啶、哌嗪、咪唑、四氫哌喃等。

術語「治療有效量」意謂當投與至需要治療之患者時足以實現治療的量。

如本文中所使用之術語「治療」意謂對諸如哺乳動物(特定言之，人類)之患者之疾病、病症或醫學病狀(諸如胃腸發炎性疾病)的治療，其包括以下中之一或多者：
(a) 預防疾病、病症或醫學病狀出現，亦即預防疾病或醫學病狀復發，或預防性治療預先易患疾病或醫學病狀的患者；
(b) 改善疾病、病症或醫學病狀，亦即消除患者之疾病、病症或醫學病狀或引起其消退，包括抵消其他治療劑之作用；
(c) 抑制疾病、病症或醫學病狀，亦即減緩或阻止患者之疾病、病症或醫學病狀的發展；或
(d) 緩解患者之疾病、病症或醫學病狀之症狀。

術語「醫藥學上可接受之鹽」意謂可接受用於向患者或哺乳動物(諸如人類)投與之鹽(例如，對於既定劑量療法具有可接受之哺乳動物安全性之鹽)。代表性醫藥學上可接受之鹽包括以下之鹽：乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、乙二磺酸、反丁烯二酸、龍膽酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、馬尿酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、順丁烯二酸、蘋果酸、杏仁酸、甲烷磺酸、黏液酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸、菸鹼酸、硝酸、乳清酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸及羥萘甲酸及其類似物。

術語「其鹽」意謂當酸之氫由陽離子(諸如金屬陽離子或有機陽離子及其類似物)置換時所形成之化合物。舉例而言，陽離子可為式(I)化合物之質子化形式，亦即其中一或多個胺基由酸質子化之形式。通常，該鹽為醫藥學上可接受之鹽，但此對於不意欲用於向患者投與之中間化合物之鹽而言並非必要的。

術語「胺基保護基」意謂適用於防止在胺基氮處之不合需要的反應之保護基。代表性胺基保護基包括(但不限於)甲醯基；醯基，例如烷醯基，諸如乙醯基及三氟乙醯基；烷氧羰基，諸如第三丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，諸如苯甲氧羰基(Cbz)和9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)；芳基甲基，諸如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)及1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；矽烷基，諸如三甲基矽烷基(TMS)、三異丙基矽烷基(TIPS)、第三丁基二甲基矽烷基(TBS或TBDMS)、[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基(SEM)；及類似基團。許多保護基及其引入及移除描述於T. W. Greene及P. G. M. Wuts,Protecting Groups in Organic Synthesis , 第三版, Wiley, New York中。

一般合成程序
化合物(I)及其中間物可使用市售或常規製備之起始物質及試劑，根據以下一般方法及程序製備。除非另有指示，否則以下流程中使用之取代基及變數(例如，R及X)具有與本文中其他地方所定義相同之含義。此外，除非另有指示，否則可使用具有酸性或鹼性原子或官能基之化合物或其可以鹽形式產生(在一些情況下，在特定反應中使用鹽將需要在進行反應之前使用常規程序將鹽轉化成非鹽形式，例如游離鹼)。

儘管可在以下程序中展示或描述本發明之特定實施例，但熟習此項技術者將認識到，本發明之其他實施例或態樣亦可使用此類程序或藉由使用熟習此項技術者已知之其他方法、試劑及起始物質來製備。特定言之，應瞭解，可藉由多種方法途徑製備化合物(I)，其中以不同順序併入反應物以提供用於產生最終產物之不同中間物及途經。

製備化合物(I)之一般方法說明於流程1及2中。

流程 1

起始物質2-1可藉由在酸存在下與醇反應而轉化成酯(V)，其中R為烷基。在一些實施例中，R為C_{1 - 12} 烷基。在一些實施例中，醇為乙醇。可將化合物(V)轉化成二-鹵基化合物(IV)。在一些實施例中，(IV)為二-氯類似物。在一些實施例中，試劑為POCl₃ 。化合物(IV)可藉由在鹼存在下與2-4反應而轉化成(III)。可藉由使(III)與1-9在鹼存在下反應來形成化合物(II)。最終，可在還原劑存在下使(II)還原成(I)。在一些實施例中，還原劑為氫化鋰或氫化鈉源。在一些實施例中，還原劑為LiAlH₄ 、NaBH₄ 或LiBH₄ 。在一些實施例中，R為乙基。視情況地，可形成(I)之醫藥學上可接受之鹽。

對於此一般方法，在一些實施例中，R為C_{1 - 12} 烷基。在一些實施例中，R為C_{1 - 6} 烷基。在一些實施例中，R為C_{1 - 3} 烷基。在一些實施例中，R為乙基。在一些實施例中，X為F、Cl或Br。在一些實施例中，X為Cl。在一些實施例中，R為乙基且X為Cl。

流程 2

或者，可使化合物(III)與化合物(VI)在鹼(諸如DIPEA)存在下反應，其中PG為胺基保護基，得到化合物(VII)。可用還原劑使化合物(VII)還原成相應的醇(VIII)。在一些實施例中，還原劑為氫化鋰或氫化鈉源。在一些實施例中，還原劑為LiAlH₄ 、NaBH₄ 或LiBH₄ 。可脫除化合物(VIII)之保護基，得到化合物(IX)。當PG為Boc時，去保護可在強酸(諸如TFA或HCl)存在下進行。最終，可使化合物(IX)與乙磺醯基源(諸如乙磺醯氯)反應。

對於此一般方法，在一些實施例中，PG為第三丁氧基羰基(Boc)。在一些實施例中，R為C_{1 - 12} 烷基。在一些實施例中，R為C_{1 - 6} 烷基。在一些實施例中，R為C_{1 - 3} 烷基。在一些實施例中，R為乙基。在一些實施例中，X為F、Cl或Br。在一些實施例中，X為Cl。在一些實施例中，R為乙基且X為Cl。

結晶形式 I
在另一態樣中，本發明提供化合物(I)之結晶形式(形式I)
。

在一個態樣中，結晶形式由包含11.19±0.20、11.73±0.20、18.80±0.20及19.29±0.20之2θ值處的繞射峰之粉末x射線繞射表徵。在另一態樣中，結晶形式由具有6.75±0.20之2θ值處的另一繞射峰進一步表徵。在另一態樣中，結晶形式由具有選自5.91±0.20、6.28±0.20、8.08±0.20、16.68±0.20、17.62±0.20、20.53±0.20及22.16±0.20之2θ值處的兩個或更多個其他繞射峰進一步表徵。

如粉末x射線繞射之領域中所熟知，與相對峰高度相比，PXRD圖案之峰位置對實驗細節(諸如樣品製備及儀器幾何結構之細節)相對更不敏感。因此，在一個態樣中，結晶形式I由其中峰位置與圖1所展示之圖案之峰位置實質上一致的粉末X射線繞射圖案表徵。

在另一態樣中，結晶形式I由其暴露於高溫時之狀態表徵。如圖2中說明，在10℃/分鐘之加熱速率下記錄之差示掃描熱量測定(DSC)跡線呈現吸熱流中之峰，鑑別為熔融過渡，其展示在250.9℃±2℃之溫度下的吸熱流中之最大值。在另一態樣中，形式I由與圖2中所展示實質上一致之差示掃描熱量測定跡線表徵。

圖3之熱解重量分析(TGA)跡線呈現在N₂ 吹掃下，在22℃與125℃之間的約0.70%之重量減輕。化合物在約250℃之起始溫度下分解。

如製備過程2中所描述，可藉由使化合物(I)在加熱時溶解於乙醇中來製備形式I。接著，使所得溶液冷卻至約25℃。可藉由過濾來分離形式I。

在另一態樣中，本發明提供用於製備結晶形式I之方法，該方法包含：(a)使化合物(I)溶解於稀釋劑(諸如乙醇)中且視情況進行加熱以形成反應混合物；(b)在視情況進行之攪拌下使溶液冷卻至約25℃；及(c)自反應混合物分離結晶形式I，例如藉由過濾。

結晶形式 II
在另一態樣中，本發明提供化合物(I)之結晶形式(形式II)：

其為游離鹼無水結晶形式。

在一個態樣中，結晶形式由包含11.4±0.2、16.2±0.2、16.6±0.2、17.7±0.2及21.9±0.2之2θ值處的繞射峰之粉末x射線繞射表徵。

在另一態樣中，結晶形式由具有8.9±0.2、9.5±0.2及10.2±0.2之2θ值處的其他繞射峰進一步表徵。

在另一態樣中，結晶形式由具有選自14.4±0.2、19.0±0.2、19.2±0.2、19.8±0.2、20.1±0.2、20.4±0.2、20.6±0.2、20.8±0.2、21.3±0.2、25.9±0.2、30.1±0.2、30.5±0.2、30.9±0.2、32.6±0.2及33.8±0.2之2θ值處的兩個或更多個其他繞射峰進一步表徵。

如粉末x射線繞射之領域中所熟知，與相對峰高度相比，PXRD圖案之峰位置對實驗細節(諸如樣品製備及儀器幾何結構之細節)相對更不敏感。因此，在一個態樣中，結晶形式II由其中峰位置與圖5中展示之圖案的峰位置實質上一致之粉末X射線繞射圖案表徵。

在另一態樣中，結晶形式I由其暴露於高溫時之狀態表徵。如圖6中說明，在10℃/分鐘之加熱速率下記錄之差示掃描熱量測定(DSC)跡線呈現吸熱流中之峰，鑑別為熔融過渡，其展示在238.1℃±2℃之溫度下的吸熱流中之最大值。在另一態樣中，形式II由與圖6中所展示實質上一致之差示掃描熱量測定跡線表徵。

在222℃之後，圖7之熱解重量分析(TGA)跡線呈現與分解相關聯之重量減輕。

形式II之代表性DMS跡線展示於圖8中。在5與90% RH之間的總吸濕度為約0.02%。形式II為非吸濕性的。

如製備過程20中所描述，可藉由使化合物2 - 6 懸浮於冷卻至5℃之EtOH及THF之混合物中來製備形式II。可向此懸浮液中添加LiBH₄ 。在添加之後，可使溫度升高至10℃且可攪拌反應混合物2小時。反應物可用溶解於水中之氯化銨之混合物淬滅。在加熱至45℃之後，可緩慢添加水以產生晶體。所得漿料可在45℃下保持數小時，接著在15℃下攪拌且過濾。結晶形式II可用EtOH及水沖洗且接著乾燥，得到中間物級形式II。

可使此中間物級物質在加熱下溶解於DMSO中，接著緩慢添加n-PrOH同時保持內部溫度為約86℃。在約92℃下攪拌混合物約4小時。接著，使所得混合物緩慢冷卻至約20℃且在約20℃下攪拌數小時。接著，可藉由過濾來分離形式II。結晶形式II可用nPrOH及乙醇洗滌，接著過濾。

在另一態樣中，本發明提供純化中間物級結晶形式II之方法，該方法包含：(a)使中間物級形式II溶解於稀釋劑(諸如DMSO)中且對混合物進行加熱；(b)緩慢添加n-PrOH；(c)在約90℃下加熱混合物；(d)使溶液冷卻至約20℃；及(e)自反應混合物分離結晶形式II，例如藉由過濾。

醫藥組合物
化合物(I)及其醫藥學上可接受之鹽通常以醫藥組合物或調配物形式使用。化合物(I)可呈結晶形式，諸如形式I或形式II。可藉由任何可接受之投藥途徑向患者投與此類醫藥組合物，包括(但不限於)口服、局部(包括經皮)、經直腸、經鼻、吸入及非經腸投藥模式。

因此，在本發明之一個組合物態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。在另一組合物態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽之結晶形式，例如形式I或形式II。視情況地，此等醫藥組合物可視需要含有其他治療劑及/或調配劑。當論述組合物及其用途時，「本發明之化合物」在本文中亦可稱為「活性劑」。

本發明之醫藥組合物通常含有治療有效量之化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。然而，熟習此項技術者將認識到，醫藥組合物可含有超過治療有效量，亦即主體組合物，或小於治療有效量，亦即經設計以用於多重投藥從而實現治療有效量之個別單位劑量。

通常，此類醫藥組合物將含有約0.1至約95重量%之活性劑；包括約5至約70重量%之活性劑。

任何習知載劑或賦形劑皆可用於本發明之醫藥組合物中。特定載劑或賦形劑或載劑或賦形劑之組合的選擇將取決於正用於治療特定患者之投藥模式或醫學病狀或疾病病況之類型。在此方面，製備適用於特定投藥模式之醫藥組合物良好地在熟習醫藥學技術者之範疇內。此外，本發明之醫藥組合物中所使用之載劑或賦形劑係可商購的。作為進一步說明，習知調配技術描述於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000)；及H.C. Ansel等人, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第7版, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999)中。

可充當醫藥學上可接受之載劑的材料之代表性實例包括(但不限於)以下：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素，諸如微晶纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原質水；等張生理食鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；及醫藥組合物中使用之其他無毒性相容物質。

通常藉由將活性劑與醫藥學上可接受之載劑及一或多種視情況選用之成分充分且緊密地混合或摻合來製備醫藥組合物。接著，可使用習知程序及設備將所得經均勻摻合之混合物成形為錠劑、膠囊、丸劑及其類似物或裝載至其中。

本發明之醫藥組合物可以單位劑型形式封裝。術語「單位劑型」係指適用於投與患者之物理離散單元，亦即，各單元含有預定量之經計算以產生所需治療作用之活性劑(單獨或與一或多個其他單元組合)。舉例而言，此類單位劑型可為膠囊、錠劑、丸劑及其類似物，或適用於非經腸投藥之單位封裝。

在一個實施例中，本發明之醫藥組合物適用於口服投藥。適用於口服投藥之醫藥組合物可呈膠囊、錠劑、丸劑、口含錠、扁囊劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒形式；或呈於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或呈水包油或油包水液體乳液形式；或呈酏劑或糖漿形式；及其類似形式；各自含有預定量之本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為活性成分。

當意欲以固體劑型形式(亦即，以膠囊、錠劑、丸劑及其類似物形式)用於口服投藥時，本發明之醫藥組合物將通常包含活性劑或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑。視情況地，此類固體劑型可包含：填充劑或延長劑，諸如澱粉、微晶纖維素、乳糖、磷酸二鈣、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及/或矽酸；黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯膠；保濕劑，諸如甘油；崩解劑，諸如交聯羧甲基纖維素鈉、瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽及/或碳酸鈉；溶液阻滯劑，諸如石蠟；吸收促進劑，諸如四級銨化合物；濕潤劑，諸如十六醇及/或丙三醇單硬脂酸酯；吸附劑，諸如高嶺土及/或膨潤土；潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及/或其混合物；著色劑；及緩衝劑。

釋放劑、濕潤劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於本發明之醫藥組合物中。醫藥學上可接受之抗氧化劑之實例包括：水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸鈉、亞硫酸鈉及其類似物；油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基大茴香醚、丁基化羥基甲苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。用於錠劑、膠囊、丸劑及其類似物之包衣劑包括用於腸溶包衣之包衣劑，諸如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三甲酸乙酸纖維素、羧甲基乙基纖維素、丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素及其類似物。

本發明之醫藥組合物亦可使用例如不同比例之羥丙基甲基纖維素；或其他聚合物基質、脂質體及/或微粒調配，以提供活性劑之緩慢或控制釋放。此外，本發明之醫藥組合物可視情況含有乳濁劑且可經調配使得其在胃腸道之某一部分中僅或優先釋放(視情況以延遲方式)活性成分。可使用之包埋組合物之實例包括聚合物質及蠟。活性劑亦可呈(若適宜)具有以上所描述之賦形劑中之一或多者之微囊封形式。

作為說明，適用於口服投藥之液體劑型包括醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。液體劑型通常包含活性劑及惰性稀釋劑(諸如水)或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、油酸、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇之脂肪酸酯，及其混合物。或者，某些液體調配物可例如藉由噴霧乾燥而轉化成粉末，該粉末用於藉由習知程序製備固體劑型。

除活性成分或其醫藥學上可接受之鹽以外，懸浮液亦可含有懸浮劑，諸如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂及黃蓍及其混合物。

亦可非經腸(例如，藉由靜脈內、皮下、肌肉內或腹膜內注射)投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。對於非經腸投藥，活性劑或其醫藥學上可接受之鹽通常與適用於非經腸投藥之媒劑摻合，作為實例，該媒劑包括無菌水溶液、生理食鹽水、低分子量醇(諸如丙二醇、聚乙二醇)、植物油、明膠、脂肪酸酯(諸如油酸乙酯)及其類似物。非經腸調配物亦可含有一或多種抗氧化劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、緩衝劑或分散劑。可藉由使用無菌可注射介質、滅菌劑、過濾、照射或加熱來使此等調配物無菌。

或者，本發明之醫藥組合物經調配以用於藉由吸入來投藥。適用於藉由吸入來投藥之醫藥組合物將通常呈氣溶膠或粉末形式。通常使用熟知遞送裝置投與此類組合物，諸如定量給藥吸入器、乾粉吸入器、噴霧器或類似遞送裝置。

當使用加壓容器藉由吸入來投與時，本發明之醫藥組合物將通常包含活性成分或其醫藥學上可接受之鹽及適合的推進劑，諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合的氣體。此外，醫藥組合物可呈膠囊或濾筒(例如由明膠製得)形式，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及適用於粉末吸入器之粉末。適合的粉末基質包括例如乳糖或澱粉。

局部調配物
為了治療皮膚病狀，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽較佳經調配以用於向皮膚局部投藥。局部組合物包含流體或半固體媒劑，其可包括(但不限於)聚合物、增稠劑、緩衝劑、中和劑、螯合劑、防腐劑、界面活性劑或乳化劑、抗氧化劑、蠟或油、潤膚劑、防曬劑及溶劑或混合溶劑系統。可將適用於本發明之局部組合物製成廣泛多種產品類型。此等類型包括(但不限於)洗劑、乳膏、凝膠、黏著劑、噴霧劑、軟膏、漿料、發泡體、慕斯及清潔劑。此等產品類型可包含若干類型之載劑系統，包括(但不限於)粒子、奈米粒子及脂質體。若需要，則可添加崩解劑，諸如交聯聚乙烯吡咯啶酮、瓊脂或褐藻酸或其鹽，諸如褐藻酸鈉。用於調配及投藥之技術可見於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版(Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995)中。可選擇調配物以最大化對體內所需目標位點之遞送。

洗劑，其為施用於皮膚或毛髮表面而無摩擦之製劑，通常為液體或半液體製劑，其中分散有細粉狀固體、蠟質或液體。洗劑將通常含有懸浮劑以產生更好的分散液以及化合物，其適用於定位活性劑且保持活性劑與皮膚或毛髮接觸，例如甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉或其類似物。

含有本發明之用於遞送之活性劑或其醫藥學上可接受之鹽之乳膏為黏性液體或半固體乳液(水包油或油包水)。乳膏基質可為可水洗的，且含有油相、乳化劑及水相。油相通常包含礦脂或脂肪醇，諸如十六醇或十八醇；水相通常(但未必)在體積上超過油相，且通常含有保濕劑。乳膏調配物中之乳化劑，如Remington: The Science and Practice of Pharmacy中所說明，通常為非離子性、陰離子性、陽離子性或兩性界面活性劑。乳膏調配物之組分可包括：油性基質，諸如礦脂、礦物油、植物油及動物油；及三酸甘油酯；乳膏基質，諸如羊毛蠟醇、硬脂酸及鯨蠟硬脂醇；凝膠基質，諸如聚乙烯醇；溶劑，諸如丙二醇及聚乙二醇；乳化劑，諸如聚山梨醇酯；硬脂酸酯，諸如硬脂酸甘油酯、辛基羥基硬脂酸酯、硬脂酸聚乙二醇酯、PEG硬脂醯基醚、棕櫚異丙酸酯及脫水山梨糖醇單硬脂酸酯；穩定劑，諸如多醣及亞硫酸鈉；潤膚劑(亦即，保濕劑)，諸如中鏈三酸甘油酯、十四烷酸異丙酯及二甲聚矽氧烷；硬化劑，諸如十六醇及十八醇；抗微生物劑，諸如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯氧基乙醇、山梨酸、重氮利定脲及丁基化羥基大茴香醚；滲透增強劑，諸如N-甲基吡咯啶酮、丙二醇、單月桂酸聚乙二醇酯及其類似物；及螯合劑，諸如乙二胺四乙酸二鈉。

凝膠調配物亦可與本發明結合使用。如局部藥物調配物領域中之工作人員將瞭解，凝膠為半固體。單相凝膠含有在整個載劑液體(其通常為水性)中實質上均勻分佈之有機大分子，但亦可為溶劑或溶劑摻合物。

軟膏，其為半固體製劑，通常係基於礦脂或其他石油衍生物。如一般熟習此項技術者將瞭解，所使用之特定軟膏基質為可提供關於既定調配物所選擇的活性劑之最佳遞送之基質，且較佳亦提供其他所需特徵，例如潤滑性或其類似性質。與其他載劑或媒劑相同，軟膏基質應為惰性、穩定、無刺激性及不敏感的。如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版(Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995), 第1399-1404頁中所說明，軟膏鹼基可按四個等級分組：油性基質；可乳化基質；乳液基質；及水溶性基質。油性軟膏基質包括例如植物油、自動物獲得之脂肪及自石油獲得之半固體烴。可乳化軟膏基質，亦稱為吸收性軟膏基質，含有極少水或不含水，且包括例如羥基硬脂硫酸酯、無水羊毛脂及親水性礦脂。乳液軟膏基質為油包水(W/O)乳液或水包油(O/W)乳液，且包括例如十六醇、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂及硬脂酸。水溶性軟膏基質可由具有不同分子量之聚乙二醇製備；又，關於其他資訊，可參考Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 見上文。用於軟膏調配物之適合的油性材料包括礦脂(石油膏)、蜂蠟、可可脂、牛油樹脂及十六醇。軟膏可視情況額外包括滲透增強劑(若需要)。

適用的本發明之調配物亦涵蓋噴霧劑。噴霧劑通常提供呈水性及/或醇溶液形式之活性劑，其可噴至皮膚或毛髮上以用於遞送。此類噴霧劑包括經調配以在遞送之後，在投藥位點處提供一定濃度之活性劑溶液之噴霧劑，例如噴霧溶液可主要由乙醇或其中可溶解藥物或活性劑之其他類似揮發性液體構成。在遞送至皮膚或毛髮之後，載劑蒸發，在投藥位點留下經濃縮之活性劑。

局部醫藥組合物亦可包含適合的固體或凝膠相載劑。此類載劑之實例包括(但不限於)碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、澱粉、纖維素衍生物、明膠及聚合物，諸如聚乙二醇。

局部醫藥組合物亦可包含適合的乳化劑，其係指增強或促進混合及懸浮水包油或油包水之試劑。本文中使用之乳化劑可由單一乳化劑組成，或可為非離子性、陰離子性、陽離子性或兩性界面活性劑或兩種或更多種此類界面活性劑之摻合物；本文中較佳使用非離子性或陰離子性乳化劑。此類表面活性劑描述於由McCutcheon Division, MC Publishing Company, 175 Rock Road, Glen Rock, NJ. 07452, USA出版之"McCutcheon's Detergent and Emulsifiers," North American Edition, 1980 Annual中。

可使用高分子量醇，諸如十六醇十八醇、十六醇、十八醇、乳化蠟、單硬脂酸甘油酯。其他實例為二硬脂酸乙二醇酯、三硬酯酸脫水山梨糖醇酯、單硬脂酸丙二醇酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯(SPAN 60)、單月桂酸二乙二醇酯、單棕櫚酸脫水山梨糖醇酯、蔗糖二油酸酯、蔗糖硬脂酸酯(CRODESTA F-160)、聚氧乙烯十二烷醚(BRIJ 30)、聚氧乙烯(2)十八烷醯醚(BRIJ 72)、聚氧乙烯(21)十八烷醯醚(BRIJ 721)、聚氧乙烯單硬脂酸酯(Myrj 45)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單硬脂酸酯(TWEEN 60)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯(TWEEN 80)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯(TWEEN 20)及油酸鈉。亦可在外用乳液中使用膽固醇及膽固醇衍生物。

適合的非離子性乳化劑之實例由Paul L. Lindner, "Emulsions and Emulsion", Kenneth Lissant編, 由Dekker, New York, N. Y.出版, 1974描述。可使用之非離子性乳化劑之實例包括(但不限於)BRIJ產品，諸如BRIJ 2 (聚氧乙烯(2)十八烷醯醚)、BRIJ S20 (聚氧乙烯(20)十八烷醯醚)、BRIJ 72 (聚氧乙烯(2)十八烷醯醚，其HLB為4.9)、BRIJ 721 (聚氧乙烯(21)十八烷醯醚，其HLB為15.5)、Brij 30 (聚氧乙烯十二烷基醚，其HLB為9.7)、Polawax (乳化蠟，其HLB為8.0)、Span 60 (單硬脂酸脫水山梨糖醇酯，其HLB為4.7)、Crodesta F-160 (蔗糖硬脂酸酯，其HLB為14.5)。

局部醫藥組合物亦可包含適合的潤膚劑。潤膚劑為用於預防或緩解乾燥，以及用於保護皮膚或毛髮之物質。適用的潤膚劑包括(但不限於)十六醇、十四酸異丙酯、十八醇及其類似物。已知廣泛多種適合的潤膚劑且可用於本文中。參見例如Sagarin, Cosmetics, Science and Technology, 第2版, 第1卷, 第32-43頁(1972)，及1990年4月24日頒佈之頒予Deckner等人之美國專利案第4,919,934號，其皆以全文引用之方式併入本文中。

局部醫藥組合物亦可包含適合的抗氧化劑，已知可抑制氧化之物質。適合根據本發明使用之抗氧化劑包括(但不限於)丁基化羥基甲苯、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、抗壞血酸鈣、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基大茴香醚、2,4,5-三羥苯丁酮、4-羥基甲基-2,6-二-第三丁基苯酚、異抗壞血酸、癒創木樹脂、沒食子酸丙酯、硫二丙酸、硫代二丙酸二月桂酯、第三丁基對苯二酚及生育酚(諸如維生素E)及其類似物，包括此等化合物之醫藥學上可接受之鹽及酯。較佳地，抗氧化劑為丁基化羥基甲苯、丁基化羥基大茴香醚、沒食子酸丙酯、抗壞血酸、其醫藥學上可接受之鹽或酯，或其混合物。最佳地，抗氧化劑為丁基化羥基甲苯。

局部醫藥組合物亦可包含適合的防腐劑。防腐劑為添加至醫藥調配物中以充當抗微生物劑之化合物。在此項技術中已知在非經腸調配物中有效及可接受的防腐劑包括苯紮氯銨(benzalkonium chloride)、苯乙銨(benzethonium)、氯己定(chlorohexidine)、苯酚、間甲酚、苯甲醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯丁醇、鄰甲酚、對甲酚、氯甲酚、硝酸苯汞、硫柳汞、苯甲酸及其各種混合物。參見例如Wallhausser, K.-H., Develop. Biol. Standard, 24:9-28 (1974) (S. Krager, Basel)。

局部醫藥組合物亦可包含適合的螯合劑以與不跨越脂質雙層之金屬陽離子形成錯合物。適合的螯合劑之實例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇-雙(β-胺基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)及8-胺基-2-[(2-胺基-5-甲基苯氧基)甲基]-6-甲氧基喹啉-N,N,N',N'-四乙酸，四鉀鹽(QUIN-2)。較佳螯合劑為EDTA及檸檬酸。

局部醫藥組合物亦可包含適合的中和劑，其係用於調節調配物之pH值使其處於醫藥學上可接受之範圍內。中和劑之實例包括(但不限於)三乙醇胺、緩血酸胺、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸及乙酸。

局部醫藥組合物亦可包含適合的增黏劑。此等組分為能夠經由試劑與聚合物之相互相用來提高含有聚合物之溶液的黏度之可擴散化合物。可使用Carbopol Ultrez 10作為增黏劑。

液體形式，諸如適用於局部投藥之洗劑，可包括適合的水性或非水性媒劑以及緩衝劑、懸浮劑及施配劑、增稠劑、滲透增強劑及其類似物。固體形式，諸如乳膏或漿料或其類似物，可包括例如以下成分中之任一者：作為基底之水、油、醇或油脂以及界面活性劑、聚合物(諸如聚乙二醇)、增稠劑、固體及其類似物。液體或固體調配物可包括增強型遞送技術，諸如脂質體、微粒體、微海綿及其類似物。此外，可使用持續釋放系統來遞送化合物，諸如含有治療劑之固體疏水性聚合物之半滲透基質。已形成各種持續釋放型物質且為熟習此項技術者所熟知。

當經調配以用於局部施用時，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可以0.1至50重量%存在。在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.1至25重量%存在。在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.1至10重量%存在。在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.25至5重量%存在。在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.25至2重量%存在。在一些實施例中，，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.25至1重量%存在。在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.05至0.5重量%存在。

在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.25、3.5、3.75、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10重量%存在。

在一些實施例中，包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽之醫藥組合物進一步包含一或多種其他治療劑。在一些實施例中，該一或多種其他治療劑適用於治療自體免疫性皮膚病。在一些實施例中，該一或多種其他治療劑適用於治療發炎性皮膚病。在一些實施例中，該一或多種其他治療劑適用於治療異位性皮炎。在一些實施例中，該一或多種其他治療劑適用於治療斑禿。可與化合物(I)一起併入醫藥組合物中之化合物之特定類別或特定化合物例示於以下段落中。

以下非限制性實例說明本發明之代表性醫藥組合物。

錠劑口服固體劑型
化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及交聯羧甲纖維素鈉以4:5:1:1之比率乾式摻合且壓縮成錠劑，以提供例如每錠劑5 mg、20 mg或40 mg活性劑之單位劑量。

膠囊口服固體劑型
化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及交聯羧甲基纖維素鈉以4:5:1:1之比率藉由濕式造粒組合且裝載至明膠或羥丙基甲基纖維素膠囊中，以提供例如每膠囊5 mg、20 mg或40 mg活性劑之單位劑量。

液體調配物
藉由向水及抗壞血酸之混合物中添加本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽來形成包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽(0.1%)、水(98.9%)及抗壞血酸(1.0%)之液體調配物。

包覆腸溶包衣之口服劑型
使化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽溶解於含有聚乙烯吡咯啶酮之水性溶液中且以1:5 w/w活性劑:珠粒之比率噴霧塗佈至微晶+纖維素或糖珠粒上，且接著以增加約5%重量之方式塗覆腸溶包衣，其包含丙烯酸共聚物(例如可以商標名Eudragit-L®及Eudragit-S®獲得之丙烯酸共聚物之組合)或丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素。將包覆腸溶包衣之珠粒裝載至明膠或羥丙基甲基纖維素膠囊中，以提供例如每膠囊30 mg活性劑之單位劑量。

包覆腸溶包衣之口服劑型
將包含Eudragit-L®及Eudragit-S®之組合或丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素之腸溶包衣施用於上文所描述之錠劑口服劑型或膠囊口服劑型。

用於局部投藥之軟膏調配物
將化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與礦脂、C₈ -C₁₀ 三酸甘油酯、辛基羥基硬脂酸酯及N -甲基吡咯啶酮以某一 比率組合，以提供含有0.05重量%至5重量%之活性劑之組合物。

用於局部投藥之軟膏調配物
將化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與礦脂、C₈ -C₁₀ 三酸甘油酯、辛基羥基硬脂酸酯、苯甲醇及N -甲基吡咯啶酮以某一比率組合，以提供含有0.05重量%至5重量%之活性劑之組合物。

用於局部投藥之軟膏調配物
將化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與白礦脂、丙二醇、單甘油酯及二甘油酯、石蠟、丁基化羥基甲苯及乙二胺四乙酸鈣二鈉以某一比率組合，以提供含有0.05重量%至5重量%之活性劑之組合物。

用於局部投藥之軟膏調配物
將化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽與礦物油、石蠟、碳酸伸丙酯、白礦脂及白蠟組合，以提供含有0.05重量%至5重量%之活性劑之組合物。

用於局部投藥之乳膏調配物
將礦物油與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽、丙二醇、棕櫚酸異丙酯、聚山梨醇酯60、十六醇、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯、聚乙二醇40硬脂酸酯、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯組合以形成油相，其藉由剪切摻合與純化水組合，以提供含有0.05重量%至5重量%之活性劑之組合物。

用於局部投藥之乳膏調配物
包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽、苯甲醇、十六醇、無水檸檬酸、單甘油酯及二甘油酯、油醇、丙二醇、十六基十八基硫酸鈉、氫氧化鈉、十八醇、三酸甘油酯及水之乳膏調配物含有0.05重量%至5重量%之活性劑。

用於局部投藥之乳膏調配物
包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽、鯨蠟硬脂醇、十四酸異丙酯、丙二醇、聚西托醇1000 (cetomacrogol 1000)、二甲聚矽氧烷360 (dimethicone 360)、檸檬酸、檸檬酸鈉及純化水以及作為防腐劑之咪唑啶基脲、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯之乳膏調配物含有0.05重量%至5重量%之活性劑。

用於局部投藥之乳膏調配物
包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽、硬脂酸、鯨蠟硬脂醇、棕櫚酸異丙酯、辛基羥基硬脂酸酯、布里傑S2 (PEG 2 Stearyl Ether)、BRIJ S20 (PEG 20 Stearyl Ether)、N-甲基吡咯啶、PEG及水之乳膏調配物含有0.05重量%至5重量%之活性劑。

用於局部投藥之乳膏調配物
包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽、硬脂酸、鯨蠟硬脂醇、棕櫚酸異丙酯、辛基羥基硬脂酸酯、BRIJ S2 (PEG 2 Stearyl Ether)、BRIJ S20 (PEG 20 Stearyl Ether)、N-甲基吡咯啶、PEG400及水之乳膏調配物含有0.05重量%至5重量%之活性劑。

效用
已證實化合物(I)為JAK酶家族之強效抑制劑：JAK1、JAK2、JAK3及TYK2。對JAK酶家族之抑制可抑制許多重要促炎性細胞介素之信號傳導。因此，預期化合物(I)適用於治療發炎性疾病，諸如胃腸道發炎性疾病、發炎性及瘙癢性皮膚病、發炎性眼部疾病及發炎性呼吸道疾病。

發炎性皮膚病
異位性皮炎與依賴於JAK-STAT路徑之促炎性細胞介素，尤其IL-4、IL-5、IL-10、IL-13及IFNγ之提高相關。因為化合物(I)對所有四種JAK酶呈現強效抑制，因此預期其可有效抑制異位性皮膚炎及其他發炎性皮膚病之促炎性細胞介素特徵。本文中亦證實，在分析法4中，對於抑制TSLP誘導之TARC，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為7.8。

在分析法2中所描述之細胞分析中，對於抑制IL-13誘導之STAT6磷酸化，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為8.5。在分析法13中，對於抑制正常人類表皮角質細胞中IL-13誘導之STAT6磷酸化，化合物(I)亦呈現pIC₅₀ 值為8.3。此外，在小型豬中，分析法6中之化合物(I)之模型乳膏及軟膏調配物顯示表皮層及真皮層中之顯著化合物暴露而無可偵測之血漿暴露。在使用人類新近切除之皮膚之離體藥效學分析法中，證實化合物(I)可抑制CXCL10及CCL2基因表現。證實化合物(I)在人類皮膚分析法中呈現良好滲透性。在分析法9中之活體內模型中，化合物(I)亦抑制IL-31誘導之pSTAT3產生之產量達80%。最終，在分析法10中之小鼠中，化合物(I)在TPA誘導之刺激性接觸性皮炎模型中呈現劑量依賴性作用。

亦證實化合物(I)在分析法11中描述之細胞分析中，對於抑制IL-2誘導之STAT5磷酸化，呈現pIC₅₀ 值為8.4；在分析法12中，對於抑制人類CD3+ T細胞中IL-12誘導之STAT4磷酸化，呈現pIC₅₀ 值為7.2；在分析法14中，對於抑制正常人類表皮角質細胞中IL-22誘導之STAT3磷酸化，呈現pIC₅₀ 值為8.4。最終，在＜1 µM之濃度下觀測到化合物(I)使介白素-22 (IL-22)抑制之絲聚蛋白(Filaggrin)表現恢復。IL-12、IL-22及IL-23為與牛皮癬相關之細胞介素(Baliwag等人,Cytokine ,2015 , 73(2), 342-350 2015)。此等細胞介素經由JAK2及Tyk2酶進行信號傳導(Ishizaki等人,J. Immunol .,2011 , 187, 181-189)。靶向此等細胞介素之抗體療法已顯示針對牛皮癬之臨床效用(Schadler等人,Disease-a-Month ,2018 , 1-40)。預期可阻斷此等細胞介素之局部JAK抑制劑將在此疾病中有效。因為此等細胞介素經由Tyk2及JAK2進行信號傳導，因此預期化合物(I)在此疾病中具有活性。

預期在不存在顯著全身性含量下，JAK抑制劑之持續經皮含量將在皮膚中產生有效局部消炎及止癢活性，而無全身驅動之不良作用。預期此類化合物在多種皮膚發炎性或瘙癢性病狀中有益，該等病狀包括(但不限於)異位性皮炎、白斑病、皮膚T細胞淋巴瘤及亞型(塞紮萊症候群(Sezary syndrome)、蕈樣黴菌病(mycosis fungoides)、佩吉特樣網狀細胞增多症(pagetoid reticulosis)、肉芽腫性皮膚鬆弛、淋巴瘤樣丘疹病、慢性苔癬樣糠疹、急性苔蘚痘瘡樣糠疹、CD30+皮膚T細胞淋巴瘤、繼發性皮膚CD30+大細胞淋巴瘤、非蕈樣黴菌病型CD30皮膚大型T細胞淋巴瘤、多形性T細胞淋巴瘤、倫納特淋巴瘤(Lennert lymphoma)、皮下T細胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤)、結節性癢疹、扁平苔癬、接觸性皮炎、汗皰、濕疹、錢幣狀皮炎、脂溢性皮炎、停滯性皮炎、原發性局部皮膚澱粉樣變性、大皰性類天疱瘡、移植物抗宿主疾病之皮膚表現、類天疱瘡、盤狀狼瘡、環狀肉芽腫、慢性單純性苔癬、搔癢病、外陰/陰囊/肛周搔癢病、硬化性苔癬、帶狀疱疹後遺神經痛、毛髮扁平苔癬、牛皮癬及脫髮性毛囊炎。特定言之，以下疾病由經由JAK活化進行信號傳導之某些細胞介素之升高表徵：異位性皮炎(Bao等人,JAK - STAT ,2013 ,2 , e24137)；斑禿(Xing等人,Nat Med .2014 ,20 , 1043-1049)，包括亞型，諸如單眼斑禿、多眼斑禿、匐行性脫髮、全身斑禿、全面斑禿及斑禿脫髮；白斑病(Craiglow等人,JAMA Dermatol .2015 ,151 , 1110-1112)；皮膚T細胞淋巴瘤(Netchiporouk等人,Cell Cycle .2014 ;13 , 3331-3335)；結節性癢疹(Sonkoly等人,J Allergy Clin Immunol . 2006 ,117 , 411-417)；扁平苔癬(Welz-Kubiak等人,J Immunol Res .2015 , ID:854747)；原發性局部皮膚澱粉樣變性(Tanaka等人,Br J Dermatol .2009 ,161 , 1217-1224)；大皰性類天疱瘡(Feliciani等人,Int J Immunopathol Pharmacol .1999 ,12 , 55-61)；及移植物抗宿主疾病之皮膚表現(Okiyama等人,J Invest Dermatol . 2014 ,134 , 992-1000)。因此，化合物(I)可能能夠緩解此等細胞介素所引發之相關皮膚炎症或搔癢病。特定言之，預期化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽適用於治療異位性皮炎及其他發炎性皮膚病。

如表13中所說明，已證實化合物(I)在人類微粒體中具有高清除率。因此，其具有快速清除之優點，從而最小化全身性暴露及降低副作用風險。

如表13中所說明，化合物(I)亦具有高滲透性，其對於皮膚適應症為有利的，因為其似乎與在皮膚中之較佳滲透相關。

因此，在一些實施例中，本發明提供用於治療哺乳動物中之發炎性或自體免疫性皮膚病之方法，其包含向哺乳動物之皮膚施用包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學載劑之醫藥組合物。

在一些實施例中，本發明提供用於治療哺乳動物(例如人類)中之發炎性或自體免疫性皮膚病之方法，其包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，發炎性皮膚病為異位性皮炎。在一些實施例中，異位性皮炎為輕度至中度。在一些實施例中，異位性皮炎為中度至重度。

在一些實施例中，自體免疫性皮膚病為斑禿。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可與一或多種適用於治療發炎性皮膚病之化合物組合使用。在一些實施例中，該一或多種化合物為類固醇、皮質類固醇、抗生素、組胺H1受體拮抗劑、鈣調神經磷酸酶抑制劑、IL-13拮抗劑、PDE 4抑制劑、G蛋白偶合受體-44拮抗劑、IL-4拮抗劑、5-HT 1a受體拮抗劑、5-HT 2b受體拮抗劑、α2腎上腺素受體促效劑、類大麻酚CB1受體拮抗劑、CCR3趨化因子、拮抗劑、膠原蛋白酶抑制劑、胞漿磷脂酶A2抑制劑、伊紅趨素(eotaxin)配位體抑制劑、GATA 3轉錄因子抑制劑、組胺H4受體拮抗劑、IL-10拮抗劑、IL-12拮抗劑、IL-17拮抗劑、IL-2拮抗劑、IL-23拮抗劑、IL-4受體調節劑、IL-15拮抗劑、IL-6拮抗劑、IL-8拮抗劑、IL-9拮抗劑、IL-5拮抗劑、免疫球蛋白E拮抗劑、免疫球蛋白E調節劑、干擾素γ受體拮抗劑、干擾素γ配位體、介白素33配位體抑制劑、介白素-31受體拮抗劑、白三烯拮抗劑、肝X受體促效劑、肝X受體β促效劑、核因子κB抑制劑、OX-40受體拮抗劑、PGD2拮抗劑、磷脂酶A2抑制劑、SH2結構域肌醇磷酸酶1刺激劑、胸腺基質淋巴蛋白配位體抑制劑、TLR調節劑、TNFα配位體調節劑、TLR9基因刺激劑、細胞毒性T淋巴球蛋白質-4刺激劑、類鴉片受體κ促效劑、半乳糖凝集素-3抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶-1抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶-2抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶-3抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶-6抑制劑、組蛋白脫乙醯基酶抑制劑、糖皮質激素促效劑、Syk酪胺酸激酶抑制劑、TrkA受體拮抗劑、整合素α-4/β-1拮抗劑、類介白素1受體拮抗劑、介白素-1轉化酶抑制劑、介白素-31受體拮抗劑、KCNA電壓閘控鉀通道-3抑制劑、PDE4B基因抑制劑、激肽釋放酶2抑制劑、神經鞘胺醇-1-磷酸受體-1促效劑、視網膜色素上皮蛋白質刺激劑、T細胞表面醣蛋白CD28抑制劑、TGFβ拮抗劑或香草精類VR1拮抗劑。

在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽係與以下組合投與：倍他米松(betamethasone)、夫西地酸(fucidic acid)、GR-MD-02、度匹魯單抗(dupilumab)、乙酸洛斯普特(rosiptor acetate)、AS-101、環孢菌素、IMD-0354、塞庫金單抗(secukinumab)、阿克姆(Actimmune)、雷布瑞奇單抗(lebrikizumab)、CMP-001、美泊利單抗(mepolizumab)、皮特尼布(pegcantratinib)、特澤派單抗(tezepelumab)、MM-36、克里博羅(crisaborole)、ALX-101、柏替木單抗(bertilimumab)、FB-825、AX-1602、BNZ-1、阿巴西普(abatacept)、他克莫司(tacrolimus)、ANB-020、JTE-052、ZPL-389、優特克單抗(ustekinumab)、GBR-830、GSK-3772847、ASN-002、雷米斯特(remetinostat)、阿普司特(apremilast)、替馬蘭特(timapiprant)、MOR-106、阿斯特普(asivatrep)、尼立珠單抗(nemolizumab)、非維蘭特(fevipiprant)、多西環素(doxycycline)、MDPK-67b、地氯雷他定(desloratadine)、塔羅金單抗(tralokinumab)、菲索芬那定(fexofenadine)、吡美莫司(pimecrolimus)、貝他斯汀(bepotastine)、納呋拉啡(nalfurafine)、VTP-38543、Q-301、利蓋利珠單抗(ligelizumab)、RVT-201、DMT-210、KPI-150、AKP-11、E-6005、AMG-0101、AVX-001、PG-102、ZPL-521、MEDI-9314、AM-1030、WOL-071007、MT-0814、戊酸倍他米松(betamethasone valerate)、SB-011、依匹斯汀(epinastine)、他克莫司(tacrolimus)、曲尼司特(tranilast)或維洛米德(viromed)或其任何組合。

在一些實施例中，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽係與類固醇、抗生素及保濕劑組合投與(Lakhani等人,Pediatric Dermatology ,2017 , 34, 3, 322-325)。在一些實施例中，該一或多種化合物為革蘭氏陽性抗生素(gram positive antibiotic)，諸如莫匹羅星(mupirocin)或梭鏈孢酸(fusidic acid)。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可與革蘭氏陽性抗生素(諸如莫匹羅星及梭鏈孢酸)組合用於治療發炎性皮膚病。因此，在一個態樣中，本發明提供用於治療哺乳動物中之發炎性皮膚病之方法，該方法包含向哺乳動物之皮膚施用本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及革蘭氏陽性抗生素。在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、革蘭氏陽性抗生素及醫藥學上可接受之載劑。

因此，在另一態樣中，本發明提供一種用於治療皮膚發炎性病症之治療組合，該組合包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種適用於治療皮膚發炎性病症之其他治療劑。當包括時，第二藥劑係以治療有效量存在，亦即以任何在與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽共同投與時可產生治療學上之有利作用的量存在。

因此，亦提供一種醫藥組合物，其包含化合物(I)或其醫藥學上之鹽及一或多種適用於治療皮膚發炎性病症之其他治療劑。

此外，在方法態樣中，本發明提供用於治療皮膚發炎性病症之方法，該方法包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽,一或多種適用於治療皮膚發炎性病症之其他治療劑。

胃腸道發炎性疾病
歸因於對JAK酶之家族之抑制，預期化合物(I)適用於多種胃腸道發炎性適應症，其包括(但不限於)潰瘍性結腸炎(直腸乙狀結腸炎、全結腸炎、潰瘍性直腸炎及左側結腸炎)、克羅恩氏病(Crohn's disease)、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎、白塞氏病(Behcet's disease)、乳糜瀉、免疫檢查點抑制劑誘導之結腸炎、迴腸炎、嗜酸性食道炎、移植物抗宿主疾病相關結腸炎及感染性結腸炎。以下疾病由某些促炎性細胞介素含量升高來表徵：潰瘍性結腸炎(Reimund等人,J Clin Immunology , 1996 ,16 , 144-150)、克羅恩氏病(Woywodt等人,Eur J Gastroenterology Hepatology ,1999 ,11 , 267-276)、膠原性結腸炎(Kumawat等人,Mol Immunology ,2013 ,55 , 355-364)、淋巴球性結腸炎(Kumawat等人,2013 )、嗜酸性食道炎(Weinbrand-Goichberg等人,Immunol Res ,2013 ,56 , 249-260)、移植物抗宿主疾病相關結腸炎(Coghill等人,Blood ,2001 ,117 , 3268-3276)、感染性結腸炎(Stallmach等人,Int J Colorectal Dis ,2004 ,19 , 308-315)、白塞氏病(Zhou等人,Autoimmun Rev ,2012 ,11 , 699-704)、乳糜瀉(de Nitto等人,World J Gastroenterol ,2009 ,15 , 4609-4614)、免疫檢查點抑制劑誘導之結腸炎(例如CTLA-4抑制劑誘導之結腸炎(Yano等人,J Translation Med ,2014 ,12 , 191)、PD-1或PD-L1抑制劑誘導之結腸炎)及迴腸炎(Yamamoto等人,Dig Liver Dis ,2008 ,40 , 253-259)。因為許多促炎性細胞介素經由JAK活化進行信號傳導，因此本申請案中所描述之化合物可能能夠緩解炎症且提供症狀減輕。

因此，在一些實施例中，本發明提供用於治療哺乳動物(例如人類)中之胃腸道發炎性疾病之方法，其包含向哺乳動物投與醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑及化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，本發明提供用於治療哺乳動物(例如人類)中之胃腸道發炎性疾病之方法，其包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

本發明亦提供用於治療哺乳動物中之潰瘍性結腸炎之方法，該方法包含向哺乳動物投與本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑及本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

當用於治療潰瘍性結腸炎時，本發明之化合物將通常以單一日劑量或每日多劑量經口投與，但可使用其他投藥形式。每次給藥所投與之活性劑之量或每日投與之總量將通常由醫師根據相關情形決定，該等情形包括所治療之病狀、所選擇之投藥途徑、實際投與之化合物及其相對活性、個別患者之年齡、體重及反應、患者症狀之嚴重程度及其類似因素。

對於平均70 kg人類，預期用於治療潰瘍性結腸炎及其他腸胃道發炎病症之適合劑量在約1至約400毫克/天之活性劑範圍內，包括約5至約300毫克/天及約20至約70毫克/天之活性劑。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可與一或多種藥劑組合使用，該一或多種藥劑藉由相同機制或藉由不同機制起作用以實現腸胃道發炎病症之治療。適用於組合療法之藥劑類別包括(但不限於)胺基水楊酸鹽、類固醇、全身性免疫抑制劑、抗TNFα抗體、抗VLA-4抗體、抗整合素α₄ β₇ 抗體、抗細菌劑及抗腹瀉藥品。

可與化合物(I)組合使用之胺基水楊酸鹽包括(但不限於)美塞拉明(mesalamine)、奧沙拉嗪(osalazine)及柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)。類固醇之實例包括(但不限於)潑尼松(prednisone)、潑尼龍(prednisolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、倍氯米松(beclomethasone)及氟替卡松(fluticasone)。適用於治療發炎性病症之全身性免疫抑止劑包括(但不限於)環孢靈(cyclosporine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、甲胺喋呤、6-巰基嘌呤及他克莫司(tacrolimus)。此外，在組合療法中可使用抗TNFα抗體，包括(但不限於)英利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab)、戈利木單抗(golimumab)及賽妥珠單抗(certolizumab)。藉由其他機制起作用之適用化合物包括抗VLA-4抗體，諸如那他珠單抗(natalizumab)；抗整合素α₄ β₇ 抗體，諸如維多珠單抗(vedolizumab)；抗細菌劑，諸如利福昔明(rifaximin)及抗腹瀉藥品，諸如洛哌丁胺(loperamide)(Mozaffari等人Expert Opin. Biol. Ther. 2014 ,14 , 583-600；Danese,Gut ,2012 ,61 , 918-932；Lam等人,Immunotherapy, 2014 , 6 , 963-971)。

因此，在另一態樣中，本發明提供用於治療腸胃道發炎病症之治療組合，該組合包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種適用於治療腸胃道發炎病症之其他治療劑。舉例而言，本發明提供一種組合，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種選自以下之藥劑：胺基水楊酸鹽、類固醇、全身性免疫抑制劑、抗TNFα抗體、抗VLA-4抗體、抗整合素α₄ β₇ 抗體、抗細菌劑及止瀉藥。第二藥劑(當包括時)係以治療有效量存在，亦即，以在與本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽共同投與時產生治療學上之有利作用之任何量存在。

因此，亦提供一種醫藥組合物，其包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種適用於治療腸胃道發炎病症之其他治療劑。

此外，在方法態樣中，本發明提供一種用於治療腸胃道發炎病症之方法，該方法包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種適用於治療腸胃道發炎病症之其他治療劑。

呼吸道疾病
經由JAK-STAT路徑進行傳導信號之細胞介素，尤其IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、IL-23、IL-31、IL-27、胸腺基質淋巴生成素(TSLP)、干擾素-γ (IFNγ)及粒細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)與哮喘炎症及其他發炎性呼吸道疾病相關。如上文所描述，已證實化合物(I)為JAK激酶之強效抑制劑且在細胞分析法中顯示對IL-13促炎性細胞介素之強效抑制。

已在哮喘之臨床前模型中穩定表明JAK抑制劑之消炎活性(Malaviya等人,Int Immunopharmacol, 2010, 10 , 829,-836；Matsunaga等人,Biochem and Biophys Res Commun, 2011, 404 , 261-267；Kudlacz等人,Eur J Pharmacol ,2008 ,582 , 154-161)。因此，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療發炎性呼吸道病症，諸如哮喘。肺部之炎症及纖維化為除哮喘以外之其他呼吸道疾病之特徵，諸如慢性阻塞性肺病(COPD)、囊腫性纖維化(CF)、肺炎、間質性肺病(包括特發性肺纖維化)、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、支氣管炎、肺氣腫及阻塞性細支氣管炎。因此，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療慢性阻塞性肺病、囊腫性纖維化、肺炎、間質性肺病(包括特發性肺纖維化)、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、支氣管炎、肺氣腫、阻塞性細支氣管炎、慢性肺同種異體移植功能障礙(CLAD)、肺移植排斥反應及類肉瘤病。

因此，在一個態樣中，本發明提供一種用於治療哺乳動物(例如人類)中之呼吸道疾病之方法，其包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

在一個態樣中，呼吸道疾病為哮喘、慢性阻塞性肺病、囊腫性纖維化、肺炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊腫性纖維化(CF)、肺炎、間質性肺病(包括特發性肺纖維化)、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、支氣管炎、肺氣腫、阻塞性細支氣管炎、過敏性鼻炎或類肉瘤病。在另一態樣中，呼吸道疾病為哮喘或慢性阻塞性肺病。

在另一態樣中，呼吸道疾病為肺部感染、蠕蟲感染、肺動脈高血壓、類肉瘤病、肺淋巴管平滑肌增生症、支氣管擴張或浸潤性肺病。在另一態樣中，呼吸道疾病為藥物誘發之肺炎、真菌誘發之肺炎、過敏性支氣管肺麴菌病、過敏性肺炎、嗜伊紅血球肉芽腫伴多血管炎、特發性急性嗜伊紅血球肺炎、特發性慢性嗜伊紅血球肺炎、嗜伊紅白血球增多症候群、呂弗勒症候群(Löffler syndrome)、阻塞性細支氣管炎伴機化性肺炎或免疫檢查點抑制劑誘發之肺炎。

本發明亦提供用於治療呼吸道疾病之方法，該方法包含向哺乳動物投與醫藥組合物，其包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可與一或多種適用於呼吸道疾病之化合物組合使用。

眼部疾病
許多眼部疾病與依賴於JAK-STAT路徑之促炎性細胞介素升高相關。

因此，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療多種眼部疾病，包括(但不限於)葡萄膜炎、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、年齡相關性黃斑變性及異位性角膜結膜炎。

特定言之，以下疾病由經由JAK-STAT路徑進行信號傳導之某些促炎性細胞介素升高表徵：葡萄膜炎(Horai及Caspi,J Interferon Cytokine Res ,2011 ,31 , 733-744)、糖尿病性視網膜病變(Abcouwer,J Clin Cell Immunol ,2013 , 增刊1 , 1-12)、糖尿病性黃斑水腫(Sohn等人,American Journal of Opthamology ,2011 , 152 , 686-694)、乾眼病(Stevenson等人,Arch Ophthalmol , 2012 ,130 , 90-100)、視網膜靜脈栓塞(Shchuko等人,Indian Journal of Ophthalmology ,2015 , 63(12), 905-911)及年齡相關性黃斑變性(Knickelbein等人,Int Ophthalmol Clin ,2015 ,55 ( 3 ) , 63-78)。因此，化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可能能夠緩解相關眼部炎症及逆轉疾病進程或提供症狀減輕。

因此，在一個態樣中，本發明提供用於治療哺乳動物中之眼部疾病之方法，其包含向哺乳動物之眼部投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽或包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學載劑之醫藥組合物。在一個態樣中，眼部疾病為葡萄膜炎、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、年齡相關性黃斑變性或異位性角膜結膜炎。在一個態樣中，該方法包含藉由玻璃體內注射來投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可與一或多種適用於眼部疾病之化合物組合使用。

其他疾病
化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽亦可適用於治療其他疾病，諸如其他發炎性疾病、自體免疫疾病或癌症。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療口腔、口腔黏膜炎及復發性口瘡性口炎。

化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療以下中之一或多者：關節炎、類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、移植排斥反應、乾眼症、牛皮癬性關節炎、糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、運動神經元疾病、骨髓發育不良症候群、疼痛、肌肉減少症、惡病質、敗血性休克、全身性紅斑性狼瘡症、白血病、慢性淋巴細胞性白血病，慢性骨髓細胞性白血病、急性淋巴母細胞白血病、急性骨髓性白血病、僵直性脊椎炎、骨髓纖維化、B細胞淋巴瘤、肝細胞癌、霍奇金氏病(Hodgkins disease)、乳癌、多發性骨髓瘤、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小細胞肺癌、卵巢透明細胞癌、卵巢腫瘤、胰臟腫瘤、真性紅血球增多症、休格連症候群(Sjoegrens syndrome)、軟組織肉瘤、肉瘤、脾腫大、T細胞淋巴瘤及重度地中海貧血。

因此，本發明提供用於治療哺乳動物中之此等疾病之方法，其包含向哺乳動物投與化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽或包含化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學載劑之醫藥組合物。

在前述段落中，當用於組合療法中時，藥劑可在單一醫藥組合物中調配，如上文所揭示，或藥劑可在藉由相同或不同投藥途徑同時或在不同時間投與之單獨的組合物中提供。當分開投與時，藥劑之投與在時間上足夠接近以便提供所需治療作用。此類組合物可分開地封裝或可作為套組封裝在一起。套組中之兩種或更多種治療劑可藉由相同投藥途徑或藉由不同投藥途徑投與。

實例
提供以下合成及生物學實例以說明本發明，且不以任何方式解釋為限制本發明之範疇。除非另有指示，否則在以下實例中，以下縮寫具有以下含義。未在下文中定義之縮寫具有其一般可接受之含義。
ACN = 乙腈
Bn = 苯甲基
Boc = 第三丁氧基羰基
d = 天
DIPEA =N , N - 二異丙基乙胺
DMF =N , N - 二甲基甲醯胺
DMSO = 二甲亞碸
EtOAc = 乙酸乙酯
EtOH= 乙醇
h = 小時
HATU = 六氟磷酸N , N , N ', N '- 四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)
IPA = 異丙醇
MeOH = 甲醇
min = 分鐘
NMP =N -甲基吡咯啶酮
RT = 室溫
TEA = 三乙胺
THF = 四氫呋喃
TFA = 三氟乙酸

試劑及溶劑係購自商業供應商(Aldrich、Fluka、Sigma等)且未經進一步純化即使用。藉由薄層層析(TLC)、分析型高效液相層析(分析型HPLC)及/或質譜分析來監測反應混合物之進展。如在各反應中特定描述來處理反應混合物；通常藉由萃取及其他純化方法(諸如溫度依賴性及溶劑依賴性結晶及沈澱)來純化反應混合物。此外，藉由管柱層析或藉由製備型HPLC，典型地使用C18或BDS管柱填充物及習知溶離劑來常規純化反應混合物。下文描述典型的製備型HPLC條件。

藉由質譜及¹ H-NMR光譜測定法常規地進行反應產物之表徵。對於NMR分析，使樣品溶解於氘化溶劑(諸如CD₃ OD、CDCl₃ 或d₆ -DMSO)中，且在標準觀測條件下用Varian Gemini 2000儀器(400 MHz)獲得¹ H-NMR譜圖。藉由電噴霧電離法(ESMS)，用耦接至自動純化系統之Applied Biosystems (Foster City, CA)型號API 150 EX儀器或Waters (Milford, MA) 3100儀器來進行化合物之質譜鑑定。

除非另有指示，否則使用以下條件進行製備型HPLC純化。
管柱： C18，5 µm 21.2×150 mm或C18，5 µm 21×250 mm或C14，5 µm 21×150 mm
管柱溫度： 室溫
流動速率： 20.0 mL/min
移動相： A = 水 + 0.05% TFA
B = ACN + 0.05% TFA，
注射體積： (100-1500 µL)
偵測波長： 214 nm

使粗化合物以約50 mg/mL溶解於1:1 水:乙酸中。使用2.1×50 mm C18管柱進行4分鐘分析規模之測試操作，接著使用100 µL注射液，使用基於分析規模之測試操作的B滯留%，進行15或20分鐘製備型規模操作。確切梯度依賴於樣品。用21×250 mm C18管柱及/或21×150 mm C14管柱檢驗具有緊密操作雜質之樣品以進行最佳分離。藉由質譜分析來鑑定含有所需產物之溶離份。

分析型 HPLC 條件
方法 A
管柱： LUNA C18 (2)，150×4.60 mm，3 µm
管柱溫度： 37℃
流動速率： 1.0 mL/min
注射體積： 5 µL
樣品製備 溶解於1:1 ACN:水中
移動相： A = 水:ACN:TFA (98:2:0.05)
B = 水:ACN:TFA (2:98:0.05)
偵測波長 250 nm
梯度： 總共32分鐘(時間(分鐘)/%B)：0/2、10/20、24/90、29/90、30/2、32/2

方法 B
管柱： LUNA C18 (2)，150×4.60 mm，3 µm
管柱溫度： 37℃
流動速率： 1.0 mL/min
注射體積： 10 µL
樣品製備： 溶解於1:1 ACN:水中
移動相： A = 水:ACN:TFA (98:2:0.05)
B = 水:ACN:TFA (10:90:0.05)
偵測波長： 254 nm
梯度： 總共35分鐘(時間(分鐘)/%B)：0/2、20/25、23/90、26/90、27/2、35/2

方法 C
管柱： Poroshell 120 SB-Aq，150 mm×4.6 mm，2.7微米 零件號683975-914
管柱溫度： 35℃
流動速率： 1.0 mL/min
注射體積： 5 µL
樣品製備： 溶解於50:MPB:50MPA中
移動相： A = 乙腈:水:三氟乙酸(1:99:0.20)
B = 乙腈:水:三氟乙酸(90:10:0.20)
梯度：

製備過程 1 : (( 1R , 3s , 5S )- 9 -( 乙磺醯基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基甲酸第三丁酯

步驟 1 ：平行進行五個反應。在10℃下，向化合物1 - 1 (2.00 kg，13.7 mol，1.00當量)於二噁烷(5.00 L)及水(20.0 L)中之溶液中逐滴添加戊二醛(2.06 kg，20.5 mol，1.5當量)及苯基甲胺(1.54 kg，14.4 mol，1.05當量)。在添加之後，在20℃下攪拌反應混合物16小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=5:1，產物R_f =0.40)及LCMS指示反應完成。在20℃下，用濃HCl (12 N)將反應混合物之pH值調節至2。在添加之後，將反應混合物加熱至60℃且攪拌1小時。在冷卻至10℃之後，向混合物中添加乙酸乙酯(10.0 L)。接著，在10℃下，藉由添加氫氧化鈉水溶液(12 N)將混合物之pH值調節至10。攪拌混合物10分鐘。分離有機層。用乙酸乙酯(3.00 L)萃取水層。合併之有機層用鹽水(4.00 L)洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。合併五個平行反應之有機層且濃縮。The residue was purified by column chromatography (SiO₂ , petroleum ether : ethyl acetate= 30 : 1 - 2 :1) to give compound1-2 (10.0 kg, 51.5% yield, 97% purity). (m/z ): [M+H]⁺ calcd for C₁₅ H₁₉ NO 230.15 found 230.0.¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 7.24-7.41 (m, 5H), 3.88 (s, 2H), 3.20-3.21 (m, 2H), 2.73-2.79 (m, 2H), 2.07 (d,J = 16.4 Hz, 2H), 1.75-1.84 (m, 2H), 1.45-1.50 (m, 3H), 1.24-1.36 (m, 1H)。

步驟 2 ：平行進行三個反應。在20℃下，向化合物1 - 2 (3.00 kg，13.1 mol，1.0當量)於乙酸乙酯(24.0 L)及水(9.00 L)中之溶液中添加CH₃ COOK (2.05 kg，20.9 mol，1.6當量)及NH₂ OH-HCl (1.82 kg，26.2 mol，2.0當量)。將懸浮液加熱至45℃且攪拌16小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1，產物R_f =0.30)及LCMS指示反應完成。用飽和碳酸氫鈉溶液將懸浮液之pH值調節至8，接著用水(15.0 L)及乙酸乙酯(10.0 L)稀釋。分離有機層。用乙酸乙酯(10.0 L×3)萃取水層。合併三個反應之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗產物用正庚烷(12.0 L)稀釋且攪拌12小時。藉由過濾收集固體，得到化合物1 - 3 (8.00 kg，83.4%產率)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₅ H₂₀ N₂ O之計算值245.16，實驗值245.1。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ 10.16 (s, 1H), 7.22-7.38 (m, 5H), 3.83 (s, 2H), 2.97(br s, 2H), 2.87 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.60-2.62 (m, 1H), 2.20-2.25 (m, 1H), 2.09-2.13 (m, 1H), 1.72-1.85 (m, 3H), 1.39-1.49 (m, 3H)。

步驟 4 ：平行進行四十五個反應。在110℃下，經3小時向化合物1 - 3 (160 g，655 mmol，1.0當量)於n-PrOH (3.20 L)中之溶液中逐份添加Na (181 g，7.86 mol，12當量)。在110℃下攪拌混合物2小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1，SM R_f =0.40)指示反應完成。使混合物冷卻至70℃，倒在冰水(4.00 L)上。用乙酸乙酯(1.00 L×2)萃取水層。四十五個反應之合併之有機層用鹽水(20.0 L)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。殘餘物用正己烷(12.0 L)稀釋，攪拌12小時。過濾懸浮液，得到濾液。濃縮濾液，得到呈黃色油狀之化合物1 - 4 (6.00 kg，88.4%產率)。¹ H NMR 400 MHz DMSO-d_6: δ 7.18-7.35 (m, 5H), 3.76 (s, 2H), 3.26-3.35 (m, 1H), 2.76 (s, 2H), 1.86-1.90 (m, 2H), 1.67-1.73 (m, 2H), 1.54-1.59 (m, 5H), 1.41-1.45 (m, 3H)。

步驟 5 ：平行進行兩個反應。在0℃下，向化合物1 - 4 (2.10 kg，9.12 mol，1.1當量)於二噁烷(12.6 L)及水(1.26 L)中之溶液中逐滴添加Et₃ N (1.01 kg，10.0 mol，1.1當量)及(Boc)₂ O (2.19 kg，10.0 mol，1.1當量)，保持溫度低於20℃。將混合物加熱至40℃且攪拌10小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1，產物R_f =0.40)證實反應完成。使混合物冷卻至10℃，過濾，得到濾餅。濃縮濾液。用正己烷(3.00 L)洗滌濾餅，得到呈白色固體狀之化合物1 - 5 (4.00 kg，66.4%產率)。 ¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d_6: δ 7.28-7.33 (m, 4H), 7.19-7.22 (m, 1H), 6.64 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.10-4.17 (m, 1H), 3.77 (s, 2H), 2.77 (s, 2H), 1.88-1.90 (m, 2H), 1.72-1.75 (m, 3H), 1.57-1.61 (m, 3H), 1.43-1.48 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)。

步驟 6 ：平行進行四個反應 。在0℃下，在N₂ 下，向化合物1 - 5 (1.50 kg，4.54 mol，1.0當量)於DMF (13.5 L)中之懸浮液中逐份添加NaH (272 g，6.81 mol，60%純度，1.5當量)。使懸浮液自然升溫至25℃且攪拌30分鐘。在其冷卻至0℃之後，向懸浮液中逐滴添加MeI (773 g，5.45 mol，1.2當量)。使反應混合物自然升溫至25℃且攪拌12小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=5:1，產物R_f =0.50)及LCMS證實反應完成。將混合物倒入冰水(30.0 L)中，用乙酸乙酯(9.00 L，3.00 L)萃取。四個反應之合併之有機層用冰水(20.0 L)、鹽水(10.0 L)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之化合物1 - 6 (6.00 kg，粗物質)。粗產物用於下一步驟中。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 7.21-7.37 (m, 5H), 4.87 (br s, 1H), 3.80 (s, 2H), 2.86 (s, 2H), 2.68 (s, 3H), 1.64-1.99 (m, 6H), 1.40-1.49 (m, 13H)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₁ H₃₂ N₂ O₂ 之計算值344.25，實驗值345.2。

步驟 7 ：平行進行三十九個反應。向化合物1 - 6 (150 g，435 mmol，1.0當量)於IPA (500 mL)及THF (500 mL)中之溶液中添加Pd(OH)₂ /C (70 g，40%純度)。使懸浮液在真空中脫氣且用H₂ 吹掃若干次。在25℃下，在H₂ (50 psi)下攪拌混合物16小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=5:1，SM R_f =0.50)及LCMS指示反應完成。合併三十九個反應。過濾混合物，得到濾液。用IPA/THF (1:1，25.0 L)洗滌濾餅。濃縮經合併之濾液，得到呈淺黃色油狀之化合物1 - 7 (3.85 kg，粗物質)。粗產物直接用於下一步驟中。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₄ H₂₆ N₂ O₂ 之計算值255.20，實驗值255.1。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 4.88 (br s, 1H), 3.08 (s, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.73-1.76 (m, 5H), 1.51-1.61 (m, 5H), 1.39 (s, 9H)。

步驟 8 ：平行進行四個反應。在0℃下，在N₂ 下，向化合物1 - 7 (750 g，2.95 mol，1.0當量)於2-甲基四氫呋喃(3.00 L)中之溶液中逐滴添加吡啶(466 g，5.90 mol，2.0當量)及乙磺醯氯(398 g，3.10 mol，1.05當量)。使混合物升溫至25℃且攪拌3小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1，產物R_f =0.50)指示反應完成。合併四份反應物。用冰水(10.0 L)淬滅混合物。分離有機層，用0.5 N HCl (3.00 L×2)洗滌。合併之水層用乙酸乙酯(3.00 L)萃取，有機層再用0.5 N HCl (500 mL)洗滌。合併之有機層用鹽水(5.00 L)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之化合物1 - 8 (2.20 kg，粗物質)。粗產物用於下一步驟中。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 4.94 (br s, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.10 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H), 1.83-1.91 (m, 5H), 1.56-1.71 (m, 5H), 1.40 (s, 9H), 1.19 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

步驟 9 ：平行進行四個反應。在25℃下，向化合物1 - 8 (550 g，1.59 mol，1.0當量)於EtOAc (2.75 L)中之溶液中逐滴添加HCl/EtOAc (4 M，3.0當量)。在25℃下攪拌混合物12小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1，SM R_f =0.50)證實反應完成。合併四份反應物。過濾混合物以得到濾餅，得到呈黃色固體狀之化合物1 - 9 (1.25 kg，粗物質，HCl)。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 9.04 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.88-3.94 (m, 1H), 3.09 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.09-2.14 (m, 2H), 1.61-1.84 (m, 8H), 1.19 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

製備過程 2 ： ( 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 9 -( 乙磺醯基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 5 - 氟 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 基 ) 甲醇 ( I )

步驟 1 ：在90℃下攪拌化合物2 - 1 (1.00 kg，5.74 mol，1.0當量)於之乙醇(15.0 L)中之溶液及飽和HCl (1.40 kg，38.4 mol)60小時。HPLC證實偵測到一個主峰。過濾反應混合物。收集濾餅，得到呈白色固體狀之化合物2 - 2 (1.00 kg，81.8%產率，98.8%純度)。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 11.82 (br s, 1H), 10.82 (br s, 1H), 4.31 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 1.27 (t,J = 6.8 Hz, 3H)。

步驟 2 ：平行進行五個反應。向化合物2 - 2 (560 g，2.77 mol，1.0當量)於POCl₃ (1.68 L)中之溶液中添加N , N - 二乙基苯胺(289 g，1.94 mol，0.7當量)。在140℃下攪拌混合物12小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=10:1，產物R_f =0.50)指示化合物2 - 2 完全耗盡。合併五份反應物。在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。用乙酸乙酯(25.0 L)稀釋殘餘物。將溶液倒入碎冰(25.0 L)中。用乙酸乙酯( 25.0 L)萃取水相。合併之有機層用飽和碳酸鈉溶液(10.0 L×2)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物。藉由管柱層析(SiO₂ ，石油醚:乙酸乙酯=1:0-50:1)純化殘餘物，得到呈棕色液體狀之化合物2 - 3 (2.00 kg)。¹ H NMR: 400 MHz CDCl₃ δ 4.51 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 1.44 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

步驟 3 ：平行進行四個反應。使化合物2 - 3 (480 g，2.01 mol，1.0當量)、化合物2 - 4 (224 g，2.31 mol，1.15當量)、DIPEA (519 g，4.02 mol，2.0當量)於乙醇(2.60 L)中之混合物脫氣且用N₂ 吹掃3次，且接著在25℃下，在N₂ 氛圍下攪拌混合物4小時。TLC (石油醚:乙酸乙酯=10:1)指示化合物2 - 3 完全耗盡。TLC (石油醚:乙酸乙酯=1:1，產物R_f =0.40)指示形成一個新的斑點。合併四份反應物。過濾反應混合物且收集濾餅。在減壓下濃縮濾液，得到殘餘物。殘餘物用水(38.0 L)濕磨且過濾。濾餅(300 g)用乙醇(600 mL)濕磨且過濾。合併兩個濾餅，得到呈黃色固體狀之化合物2 - 5 (1.50 kg，62.2%產率)。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 12.31 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.35 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.30 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

步驟 4 ：平行進行四個反應。在130℃下攪拌化合物2 - 5 (254 g，848 mmol，1.0當量)、化合物1 - 9 (300 g，1.06 mol，HCl，1.25當量)及DIPEA (548 g，4.24 mol，5.0當量)於DMSO (600 mL)中之溶液16小時。TLC (乙酸乙酯:石油醚=2:1，R_f =0.30)及LCMS展示剩餘約9%的起始物質。使混合物冷卻至25℃。合併四份反應物，倒入冰水(12.0 L)中。形成黃色沈澱物。藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體狀之化合物2 - 6 (1.50 kg，約76%純度)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₂ H₃₂ FN₇ O₄ S之計算值510.22，實驗值510.2。

將化合物2 - 6 (440 g，656 mmol，約76%純度)於乙醇(1.10 L)中之懸浮液加熱至95℃直至固體溶解。使溶液冷卻至25℃且攪拌12小時。HPLC展示純度為約96.9%。合併三份反應物。過濾懸浮液以得到濾餅，得到呈淺黃色固體狀之化合物2 - 6 (約570公克，96.9%純度)。產物直接用於下一步驟中。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 12.12 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.59 (br s, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.02 (s , 2H), 3.13 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.64-1.73 (m, 5H), 1.76-1.87 (m, 5H), 1.29 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

步驟 5 ：平行進行五個反應。在0℃下，向化合物2 - 6 (130 g，255 mmol，1.0當量)於四氫呋喃(3.25 L)及乙醇(3.25 L)中之溶液中逐份添加NaBH₄ (77.2 g，2.04 mol，8.0當量)及CaCl₂ (113 g，1.02 mol，4.0當量)。使混合物升溫至10℃且攪拌2小時。TLC (乙酸乙酯:石油醚=3:1，產物R_f =0.20)證實反應完成。合併五份反應物。混合物用飽和碳酸鈉溶液(6.00 L)淬滅，用乙酸乙酯(15.0 L)稀釋且攪拌0.5小時。過濾懸浮液，得到濾液。分離有機層且用乙酸乙酯(5.00 L×2)萃取水層。合併之有機層用鹽水(5.00 L)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到呈淺黃色固體狀之(I) (500 g，粗物質)。

純化 ：平行進行五個反應 。將I (100 g，210 mmol)於乙醇(3.00 L)中之懸浮液加熱至95℃直至固體溶解。使溶液冷卻至25℃且攪拌12小時，形成大量沈澱物。HPLC證實100%純度。合併五份反應物。藉由過濾收集固體，得到總共330 g呈淺黃色固體狀之化合物I (99.3%純度)(結晶形式I)(m/z ): [M+H]⁺ C₂₀ H₃₀ FN₇ O₃ S之計算值468.21，實驗值468.3。¹ H NMR: 400 MHz DMSO-d₆ δ 12.02 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 5.61 (br s, 1H), 5.02 (t,J = 6.8 Hz, 1H), 4.33 (d,J = 4.0 Hz, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.12 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.82-2.01 (m, 3H), 1.63-1.74 (m, 5H), 1.21 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

製備過程 3 ： 5 - 氟 - 2 , 6 - 二羥基吡啶 - 4 - 甲酸乙酯

用DBU (18.7 g，123 mmol)處理5-氟-2,6-二羥基吡啶-4-甲酸(20.4 g，120 mmol)於DMF (200 mL)中之溶液且在25℃下攪拌0.5小時。接著，添加EtI (19.2 g，123 mmol)且將所得溶液加熱至60℃保持3小時。向混合物中添加H₂ O (1000 mL)且藉由過濾收集所得沈澱物，用H₂ O (200 mL)洗滌且乾燥，得到5-氟-2,6-二羥基吡啶-4-甲酸乙酯(19 g，80%產率)。

製備 過程 4 ： 2 , 6 - 二氯 - 5 - 氟嘧啶 - 4 - 甲酸乙酯

將5-氟-2,6-二羥基吡啶-4-甲酸乙酯(5 g，24.8 mmol)、PhNEt₂ (2.58 g，17.3 mmol)、POCl₃ (130 g，855.9 mmol)之混合物加熱至100℃保持4小時。接著，使反應混合物冷卻至室溫且倒入冰水(500 mL)中。水層用EtOAc (1000 mL)萃取且有機層用飽和NaHCO₃ (200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析(80 g管柱；0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之2,6-二氯-5-氟嘧啶-4-甲酸乙酯(3.8 g，65%)。

製備過程 5 ： 2 - 氯 - 5 - 氟 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 甲酸乙酯

在室溫下攪拌2,6-二氯-5-氟嘧啶-4-甲酸乙酯(3.8 g，16 mmol)、5-甲基-1H-吡唑-3-胺(1.86 g，19 mmol)及DIPEA (4 g，32 mmol)於EtOH (100 mL)中之混合物2小時。在真空中濃縮反應混合物。接著，添加水(500 mL)且過濾反應混合物，且濾餅用100 mL H₂ O洗滌且在真空中乾燥，得到2-氯-5-氟-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸乙酯(3.8 g，80%產率)。

製備過程 6 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 -( 乙氧羰基 )- 5 - 氟 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬烷 - 9 - 甲酸第三丁酯

將2-氯-5-氟-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸乙酯(1.7 g，5.684 mmol)、(1R ,3s ,5S )-3-(甲基胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(2.17 g，8.527 mmol)及DIPEA (1.47 g，11.368 mmol)於DMSO (50 mL)中之混合物加熱至110℃保持18小時。將反應混合物倒入水(200 mL)中且過濾反應混合物，且濾餅用200 mL H₂ O洗滌且在真空中乾燥，得到粗(1R ,3s ,5S )-3-((4-(乙氧羰基)-5-氟-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(3.5 g，粗物質)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₅ H₃₇ FN₇ O₄ 之計算值518.29，實驗值518.2。

製備過程 7 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 5 - 氟 - 4 -( 羥基甲基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬烷 - 9 - 甲酸第三丁酯

在25℃下，將(1R ,3s ,5S )-3-((4-(乙氧羰基)-5-氟-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(3.5 g，7 mmol)、NaBH₄ (2.1 g，56 mmol)及CaCl₂ (3.1 g，28 mmol)於EtOH(50 mL)及THF (50 mL)之混合物中之混合物攪拌隔夜。用Na₂ CO₃ (水溶液)(80 mL)及H₂ O (80 mL)淬滅反應混合物，用EtOAc (100 mL×3)萃取水層且合併之有機層用鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且在真空中濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到(1R ,3s ,5S )-3-((5-氟-4-(羥基甲基)-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(1.4 g，44%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₃ H₃₅ FN₇ O₃ 之計算值476.28，實驗值476.3。

製備過程 8 ： ( 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 5 - 氟 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 基 ) 甲醇

在25℃下攪拌(1R ,3s ,5S )-3-((5-氟-4-(羥基甲基)-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(1.4 g，2.95 mmol)於HCl/二噁烷(50 mL)中之溶液4小時。過濾反應混合物且濾餅用100 mL EtOAc洗滌且在真空中乾燥，得到(2-(((1R,3s,5S)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬-3-基)(甲基)胺基)-5-氟-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-基)甲醇(1.4 g，100%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₈ H₂₇ FN₇ O之計算值376.23，實驗值376.2。

製備過程 9 ： ( 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 9 -( 乙磺醯基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 5 - 氟 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 基 ) 甲醇

使(2-((1R,3s,5S)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬-3-基(甲基)胺基)-5-氟-6-((5-甲基-1H - 吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-基)甲醇(95 mg，0.253 mmol)溶解於吡啶(4.0 ml)中且用乙磺醯氯(0.024 ml，0.253 mmol)處理。攪拌反應混合物2小時且接著在真空中濃縮。使粗殘餘物溶解於3 mL乙酸/水之1:1混合物中，過濾以移除顆粒且使用具有0.05% TFA之ACN/水之2-50%梯度，藉由製備型HPLC (Agilent Dynamax 250×21.4 mm 10 µm，15 mL/min，2-50% ACN+0.05% TFA/ACN)純化。合併純溶離份且凍乾，得到標題化合物之三氟乙酸鹽(12.92 mg，8.8%產率，99.9%純度)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₀ H₃₁ FN₇ O₃ S之計算值468.22，實驗值468。

製備過程 10 ： 2 - 氯 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 甲酸甲酯

在25℃下攪拌5-甲基-1H-吡唑-3-胺(5.6 g，58 mmol)、2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(12.0 g，58 mmol)及DIPEA (15.0 g，116 mmol)於DMSO (120 ml)中之混合物12小時。添加H₂ O (500 mL)且藉由過濾收集沈澱之固體，得到呈黃色固體狀之標題中間物(15 g，97%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₀ H₁₁ ClN₅ O₂ 之計算值268.05，實驗值268.1。

製備過程 11 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 -( 甲氧羰基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬烷 - 9 - 甲酸第三丁酯

在120℃下攪拌2-氯-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(12.0 g，45 mmol)、(1R ,3s ,5S )-3-(甲基胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(13.7 g，54 mmol)及DIPEA (12.0 g，90 mmol)於NMP (120 ml)中之混合物16小時。將反應物倒入H₂ O (2000 mL)中，藉由過濾收集沈澱之固體，得到呈白色固體狀之標題中間物(15 g，68%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₄ H₃₆ N₇ O₄ 之計算值486.28，實驗值486.3。

製備過程 12 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 - 胺甲醯基 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 ) - 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬烷 - 9 - 甲酸第三丁酯

在100 ml密封試管中，向(1R ,3s ,5S )-3-((4-(甲氧羰基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(3批，2 g，4.12 mmol)中添加NH₃ /MeOH (3份等分試樣，60 ml)，在25℃下攪拌反應混合物12小時。在真空中濃縮反應混合物，得到標題中間物(3.7 g，64%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₃ H₃₅ N₈ O₃ 之計算值471.28，實驗值471.3。

製備過程 13 ： 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 甲醯胺

向(1R ,3s ,5S )-3-((4-胺甲醯基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-9-氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁酯(3.7 g，7.9 mmol)於二噁烷(185 mL)中之混合物中添加HCl/二噁烷(37 mL)。在25℃下攪拌反應物3小時。TLC證實不存在殘餘起始物質。移除溶劑且用乙酸乙酯/MeOH (100:1)洗滌粗產物，得到呈鹽酸鹽形式之標題中間物(4.0 g，95%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₈ H₂₇ N₈ O之計算值371.23，實驗值371.1。

製備過程 14 ： 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 9 -( 乙磺醯基 )- 9 - 氮雜雙環 [ 3 . 3 . 1 ] 壬 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 甲醯胺 ( C - 1 )

使2-((1R ,3s ,5S )-9-氮雜雙環[3.3.1]壬-3-基(甲基)胺基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲醯胺(40 mg，0.108 mmol)及DIPEA (0.057 ml，0.324 mmol)溶解於DMF (1.50 ml)中且冷卻至0℃。添加乙烷磺醯氯且使反應混合物升溫至室溫，且攪拌72小時。在真空中濃縮反應混合物且藉由製備型逆相HPLC (Agilent Dynamax 250×21.4 mm 10 µm，15 mL/min，2-70% ACN+0.1% TFA/ACN)純化粗產物，得到標題化合物之三氟乙酸鹽(4.5 mg，9.01%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₀ H₃₁ N₈ O₃ S之計算值463.22，實驗值463.2。

製備過程 15 ： 2 - 氯 - 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 甲酸甲酯

在25℃下攪拌5-甲基-1H-吡唑-3-胺(5.6 g，58 mmol)、2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(12.0 g，58 mmol)及DIPEA (15.0 g，116 mmol)於DMSO (120 ml)中之混合物12小時。添加H₂ O (500 mL)且藉由過濾收集沈澱之固體，得到標題化合物(15 g，97%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₀ H₁₁ ClN₅ O₂ 之計算值268.05，實驗值268.1。

製備過程 16 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 -( 甲氧羰基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 8 - 氮雜雙環 [ 3 . 2 . 1 ] 辛烷 - 8 - 甲酸第三丁酯

在120℃下攪拌2-氯-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(8.3 g，31.0 mmol)、(1R ,3s ,5S )-3-(甲基胺基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(8.2 g，34.1 mmol)及DIPEA (10.8 mL，62.0 mmol)於DMSO (85 ml)中之混合物16小時。將混合物倒入2 L水中，劇烈攪拌且接著過濾，得到標題化合物(11.1 g，76%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₃ H₃₄ N₇ O₄ 之計算值472.27，實驗值472.3。

製備過程 17 ： ( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 -( 羥基甲基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 8 - 氮雜雙環 [ 3 . 2 . 1 ] 辛烷 - 8 - 甲酸第三丁酯

在0℃下，向NaBH₄ (8 g，212 mmol)於MeOH (100 mL)中之混合物中添加含(1R ,3s ,5S )-3-((4-(甲氧羰基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(10 g，21.2 mmol)之THF (100 mL)。接著，將反應混合物加熱至回流保持1小時。用水(500 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(3×200 mL)萃取混合物。合併之有機層用鹽水(1×100 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且在真空中濃縮。藉由矽膠急驟層析(石油醚:乙酸乙酯=4:1)純化粗殘餘物，得到標題化合物(7 g，68%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₂ H₃₄ N₇ O₃ 之計算值444.27，實驗值444.3。

製備過程 18 ： ( 2 -((( 1R , 3s , 5S )- 8 - 氮雜雙環 [ 3 . 2 . 1 ] 辛 - 3 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 4 - 基 ) 甲醇

在室溫下攪拌(1R ,3s ,5S )-3-((4-(羥基甲基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(6.5 g，14.7 mmol)於HCl/二噁烷(100 mL)中之混合物1小時。在真空中濃縮混合物，得到標題中間物之鹽酸鹽(4.8 g，100%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₁₇ H₂₆ N₇ O之計算值344.22，實驗值344.1。

製備過程 19 ： 3 -(( 1R , 3s , 5S )- 3 -(( 4 -( 羥基甲基 )- 6 -(( 5 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基 ) 胺基 ) 嘧啶 - 2 - 基 )( 甲基 ) 胺基 )- 8 - 氮雜雙環 [ 3 . 2 . 1 ] 辛 - 8 - 基 ) 丙腈 ( C - 2 )

使(2-(((1R ,3s ,5S )-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)(甲基)胺基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-基)甲醇(50 mg，0.146 mmol)及DIPEA (0.076 ml，0.437 mmol)溶解於MeOH (1.50 ml)中。添加丙烯腈(0.014 ml，0.218 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物90分鐘。接著，在真空中濃縮反應混合物且藉由製備型逆相HPLC (Agilent Dynamax 250×21.4 mm 10 µm，15 mL/min，2-60% ACN+0.1% TFA/ACN)純化粗殘餘物，得到標題化合物之三氟乙酸鹽(14 mg，19%)。(m/z ): [M+H]⁺ C₂₀ H₂₉ N₈ O之計算值397.25，實驗值397.1。

實例 1 ：結晶形式 I 粉末 X 射線繞射
用Bruker D8-Advance X射線繞射儀，使用Cu-Kα輻射(λ=1.54051 Å)，在45 kV之輸出電壓及40 mA之電流下，獲得圖1之粉末X射線繞射圖。以Bragg-Brentano幾何模式操作儀器，其中設定入射、發散度及散射狹縫以使樣品處之強度最大化。對於量測，將少量粉末(5-25 mg)輕緩地按壓於樣品固持器上以形成光滑表面，且經歷X射線暴露。自2°至35° 2θ以2θ-2θ模式掃描樣品，其中步長為0.02°且掃描速度為0.30°秒/步。藉由Bruker DiffracSuite量測軟體控制資料獲取且藉由Jade軟體(7.5.1版)進行分析。用剛玉標準物在±0.02° 2θ角內校準儀器。結晶形式I之所觀測之PXRD 2θ峰位置及d - 間隔展示於表1中。
表 1 ：結晶形式 I 之 PXRD 資料

實例 2 ：形式 I 之分析
使用具有Thermal Analyst控制器之TA Instruments型號Q-100模組進行差示掃描熱量測定(DSC)。收集資料且使用TA Instruments Thermal Analysis軟體進行分析。將結晶形式之樣品精確稱重至帶蓋鋁盤中。在5℃下之5分鐘等溫平衡期之後，使用10℃/分鐘之線性勻變加熱將樣品自0℃加熱至300℃。結晶形式I之代表性DSC熱分析圖展示於圖2中。熱分析圖展示熔融吸熱，其中在約248.5℃下開始且在約250.9℃下達到峰值。在約40℃及約190℃下觀測到小型熔融前吸熱事件。

使用配備有高解析度能力之TA Instruments型號Q-50模組進行熱解重量分析(TGA)量測。使用TA Instruments Thermal Analyst控制器收集資料且使用TA Instruments Universal Analysis軟體進行分析。將稱量之樣品置於鉑盤上且以10℃之加熱速率自環境溫度至300℃進行掃描。在使用期間，用氮氣流吹掃其餘部分及熔爐室。圖3中展示本發明之結晶形式I之代表性TGA跡線。TGA概況展示在N₂ 吹掃下，在22℃-125℃之間的約0.70%之重量減輕，及在約250℃之起始溫度下之分解。

使用VTI 常壓微量天平SGA-100系統(VTI Corp., Hialeah, FL 33016)進行動態吸濕(DMS)量測。使用稱量之樣品且在開始分析時濕度為最低可能值(接近0% RH)。DMS分析由以下組成：進行初始乾燥步驟(約0% RH) 120分鐘，接著在5% RH/步驟之掃描速率下，在5% RH至90% RH之濕度範圍內進行吸附及解吸附之兩個循環。在25℃下以等溫方式進行DMS操作。形式I之代表性DMS跡線展示於圖4中。在5與90% RH之間的總吸濕度為1.96%。

形式I之卡爾費雪(Karl Fisher)分析證實其含有1.6% w/w之水。

製備過程 20 ：製備形式 II
使28 g化合物2 - 6 懸浮於70 mL EtOH及154 mL THF之混合物中，接著冷卻至5℃。經1小時向此懸浮液中添加82 mL LiBH₄ (2.0 M於THF中)。在添加之後，使溫度升高至10℃且攪拌2小時，隨後藉由HPLC分析未偵測到起始物質。接著，用16.8 g氯化銨溶解於77 mL水中之混合物淬滅反應物。在加熱至45℃之後，經3小時裝填467 mL水。在添加370 mL此水填料之後，觀測到形成晶體。當水裝填完成時，漿料在45℃下保持5小時，接著經3小時逐漸升至15℃。漿料在15℃下保持7.5小時之後，過濾產物且用140 mL EtOH正向沖洗，接著使用水進行兩次140 mL正向沖洗。在45℃下，在真空中伴隨氮氣排放來乾燥固體隔夜，得到22.6 g形式II (87%產率，98.6%純度)。

將含先前步驟中獲得之21 g化合物(I)之中間物級形式II之63 mL DMSO加熱至90℃。經40分鐘添加420 mL n-PrOH，同時保持混合物之溫度高於86℃。在最終第三次添加nPrOH期間觀測到極細微的折射性晶體。在92℃下攪拌混合物4小時。經8小時使混合物冷卻至20℃且在20℃下攪拌隔夜。過濾產物且用52.5 mL nPrOH洗滌，接著用52.5 mL乙醇洗滌兩次。在55℃下，在真空中伴隨氮氣排放來乾燥固體，得到19.24 g形式II (92%產率，99.6%純度)。

實例 3 ： 結晶形式 II 粉末 X 射線繞射
在與形式I相同之條件下獲得圖5之粉末X射線繞射圖。所觀測之PXRD 2θ峰位置及d - 間隔展示於下表中。
表：結晶形式 II 之 PXRD 資料

實例 4 ： 形式 II 之分析
在與形式I類似之條件下測試形式II。

本發明之結晶形式II之代表性 DSC熱分析圖展示於圖6中。熱分析圖展示吸熱流中之峰值，鑑別為熔融過渡，其展示在238.1℃±2℃之溫度下吸熱流中之最大值。

圖7中展示本發明 之結晶形式II之代表性TGA跡線。TGA概況展示與222℃之後的分解相關之重量減輕。

DMS分析由以下組成：進行初始乾燥步驟(約0% RH) 120分鐘，接著在5% RH/步驟之掃描速率下，在5% RH至90% RH之濕度範圍內進行吸附及解吸附之兩個循環。在25℃下以等溫方式進行DMS操作。形式II之代表性DMS跡線展示於圖8中。在5與90% RH之間的總吸濕度為約0.02%。

實例 5 ：形式 II 之單晶 X 射線繞射
用配備有Oxford Cryosystems Cobra冷卻裝置之Rigaku Oxford Diffraction Supernova Dual Source, Cu at Zero, Atlas CCD繞射儀收集資料。使用Cu Kα輻射收集資料。結構溶解且使用Bruker AXS SHELXTL程式組結晶軟體優化。全部細節可見於CIF中。除非另有說明，否則連接至碳之氫原子以幾何形式置放且以安放各向同性置換參數優化。連接至雜原子之氫原子位於差異傅里葉圖(difference Fourier map)中且用各向同性置換參數自由優化。
表 ： 來自形式 II 之單晶 X 射線 繞射分析之資料

生物分析法
分析法 1 ： 生物化學 JAK 及 Tyk2 激酶分析法
將四種LanthaScreen JAK生物化學分析法之組(JAK1、2、3及Tyk2)裝載於常用激酶反應緩衝液(50 mM HEPES，pH 7.5，0.01% Brij-35，10 mM MgCl₂ ，及1 mM EGTA)中。自Life Technologies獲得重組型GST標記之JAK酶及GFP標記之STAT1肽受質。

在白色384孔微量培養盤(Corning )中，在環境溫度下，使連續或分開稀釋之化合物與四種JAK酶中之每一者及受質一起預培育1小時。隨後添加具有1% DMSO之10 μL總體積之ATP以起始激酶反應。JAK1、2、3及Tyk2之最終酶濃度分別為4.2 nM、0.1 nM、1 nM及0.25 nM；所使用之相應Km ATP濃度為25 μM、3 μM、1.6 μM及10 μM；而對於所有四種分析法，受質濃度為200 nM。使激酶反應在環境溫度下進行1小時，隨後添加10 μl之EDTA (10 mM最終濃度)及Tb-抗pSTAT1 (pTyr701)抗體(Life Technologies，2 nM最終濃度)於TR-FRET稀釋緩衝液(Life Technologies)中之製劑。將盤在環境溫度下培育1小時，隨後用EnVision讀取器(Perkin Elmer)進行讀取。記錄且使用發射比信號(520 nm/495 nm)，以基於DMSO及背景對照來計算抑制百分比值。

對於劑量反應分析，相較於化合物 濃度繪製抑制百分比資料，且用Prism軟體(GraphPad Software)自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。結果表示為pIC₅₀ (IC₅₀ 之負對數)，且隨後使用Cheng-Prusoff等式轉換成pKi (解離常數Ki之負對數)。
表 2 ： 化合物 ( I ) 之 pKi 值

分析法 2 ： 細胞 JAK 效能分析法 ： BEAS - 2B 細胞中 IL - 13 誘導之 STAT6 磷酸化之抑制
藉由量測BEAS-2B人類肺上皮細胞(ATCC)中介白素-13 (IL-13，R&D Systems)誘導之STAT6磷酸化來進行JAKI抑制之細胞效能分析法。使抗STAT6抗體(Cell Signaling Technologies)結合至AlphaScreen受體珠粒(Perkin Elmer)，而使用EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific)對抗pSTAT6 (pTyr641)抗體(Cell Signaling Technologies)進行生物素標記。

BEAS-2B細胞在5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在37℃下，在補充有10% FBS(Hyclone)、100 U/mL之青黴素、100 µg/mL之鏈黴素(Life Technologies)及2 mM GlutaMAX (Life Technologies)之50% DMEM/50% F-12培養基(Life Technologies)中生長。在分析法之第1天，在具有25 μL培養基之白色經聚-D-離胺酸塗佈之384孔培養盤(Corning)中，以7,500個細胞/孔之密度接種細胞，且在培育箱中使其黏附隔夜。在分析法之第2天，移除培養基且用含有測試化合物之劑量反應之12 μL分析緩衝液(漢克氏平衡鹽溶液(Hank's Balanced Salt Solution)/HBSS，25 mM HEPES，及1 mg/ml之牛血清白蛋白/BSA)置換。化合物在DMSO中連續稀釋，且接著在培養基中再稀釋1000倍，以使最終DMSO濃度達到0.1%。在37℃下，使細胞與測試化合物一起培育1小時，且接著添加12 μL預溫熱之IL-13 (80 ng/ml於分析緩衝液中)以用於刺激。在37℃下培育30分鐘後，移除分析緩衝液(含有化合物及IL-13)，及10 μL細胞溶解緩衝液(25 mM HEPES、0.1% SDS、1% NP-40、5 mM MgCl₂ 、1.3 mM EDTA、1 mM EGTA，且補充有Complete Ultra mini蛋白酶抑制劑及來自Roche Diagnostics之PhosSTOP)。在環境溫度下振盪培養盤30分鐘，隨後添加偵測試劑。首先添加生物素-抗pSTAT6及抗STAT6結合之受體珠粒之混合物且在環境溫度下培育2小時，隨後添加抗生蛋白鏈菌素結合之供體珠粒(Perkin Elmer)。在培育最少2小時之後，用EnVision盤讀取器讀取分析盤。記錄且利用AlphaScreen發光信號，以基於DMSO及背景對照來計算抑制百分比值。

對於劑量反應分析，相較於化合物 濃度繪製抑制百分比資料，且用Prism軟體自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。結果亦可表示為IC₅₀ 值之負對數，pIC₅₀ 。在此分析法中，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為8.5。

分析法 3 ： 細胞毒性分析法
在BEAS-2B人類肺上皮細胞(ATCC)中，在普通生長條件下，進行CellTiter-Glo發光細胞活力/細胞毒性分析法。

細胞在5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在37℃下，在補充有10% FBS(Hyclone)、100 U/mL之青黴素、100 µg/mL之鏈黴素(Life Technologies)及2 mM GlutaMAX (Life Technologies)之50% DMEM/50% F-12培養基(Life Technologies)中生長。在分析法之第1天，在具有25 μL培養基之白色384孔組織培養盤(Corning)中，以500個細胞/孔之密度接種細胞，且在培育箱中使其黏附隔夜。在分析法之第2天，添加5 µL含有測試化合物之劑量反應之培養基，且在37℃下培育48小時。隨後添加30 μL CellTiter-Glo偵測溶液(Promega)，在定軌振盪器上混合5分鐘且再培育10分鐘，接著用EnVision讀取器進行讀取。記錄發光信號且計算DMSO對照百分比值。

對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製DMSO對照百分比資料，以藉由連接各資料點之線導出劑量反應曲線。將各曲線超過15%抑制臨限值之濃度定義為CC₁₅ 。結果表示為CC₁₅ 值之負對數，pCC₁₅ 。

吾人預期，在此分析法中呈現更低pCC₁₅ 值之測試化合物具有產生細胞毒性之更小的可能性。化合物(I)之pCC₁₅ 為5.36。

分析法 4 ： 人類 PBMC 中活體外 TSLP 誘導之 TARC 分析法
TSLP與其受體之結合可誘導構形變化，其活化JAK1及JAK2以磷酸化多種轉錄因子，包括STAT3及STAT5。在皮膚駐留免疫細胞中，此觸發細胞內事件之級聯，該等事件引起細胞增殖、抗凋亡、樹突狀細胞遷移以及產生Th2細胞介素及趨化因子。在異位性皮炎之急性期期間，皮膚受到Th2淋巴細胞侵襲。在初代外周血液單核細胞(PBMC)中，TSLP藉由活化骨髓樹突狀細胞以吸引及刺激T細胞來發揮促炎性作用。此過程由胸腺及活化調節之趨化因子(TARC/CCL17)介導。已證實TARC為有前景的用於異位性皮炎之臨床生物標記，其中高血清含量指示皮膚炎症之發病機制加快。

在此分析法中，證實TSLP刺激可誘導自PBMC釋放TARC，且此反應在用化合物(I)治療時以劑量依賴性方式衰退。將來自3個供體之PBMC (預先自全血分離且在-80℃下以等分試樣形式冷凍)，塗佈且使其在37℃下靜置1小時。細胞用在33.3 µM至0.95 nM化合物(I)之範圍內的3.7X稀釋系列預處理1小時。接著，細胞用10 ng/mL之TSLP刺激或向其提供等效體積之普通培養基作為基本對照物。在48小時之後，收集細胞上清液，且使用Human CCL17/TARC Quantikine ELISA套組量測TARC。

對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製抑制百分比資料，且用GraphPad Prism軟體自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。結果亦可表示為IC₅₀ 值之負對數，pIC₅₀ 。在此分析法中，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為7.8。

分析法 5 ： 大鼠藥物動力學分析法
此研究之目標為評估在對雄性史泊格多利大白鼠(Sprague Dawley rats)進行單次口服(PO，n=3)或靜脈內(IV，n=2)投藥之後，血漿中化合物(I)之藥物動力學。

向三隻雄性史泊格多利大白鼠經由頸靜脈導管 投與單次靜脈內劑量之化合物(I)(1.0 mg/kg於5% DMSO+20 mM檸檬酸鹽緩衝液(pH 4)中)或經由經口管飼投與5 mg/kg之單次口服劑量(5.0 mg/kg於具有0.1% Tween80之1% HPMC中)。在劑量投藥之後第0.25、0.5、1、2、4、6及24小時，經由頸靜脈導管將血液樣品抽取至EDTA試管中且在離心(12,000 rpm，4分鐘，4℃)之前保持在冰上冷凍。將血漿之等分試樣轉移至集束管中且在進行生物分析之前冷凍(-80℃)儲存。

將血漿樣品渦旋，隨後將樣品之50 µL等分試樣轉移至96孔盤中且用含有內標之200 µL乙腈萃取。在萃取之後，使樣品在3700 RPM (2809×g)下離心10分鐘。將上清液轉移至新的96孔盤中且接著在含0.2%甲酸之水中稀釋(3倍稀釋)。對於所有樣品，10 µL在0.80 mL/min之流動速率下注射至Waters Xbridge (C18 30×2.1 mm)管柱上。移動相A由含0.2%甲酸之水組成且移動相B由含0.2%甲酸之乙腈組成。藉由LC-MS-MS分析測定化合物(I)之血漿含量。使用Phoenix WinNonlin (Certara Inc.)測定標準PK參數。
表 3 ：藥物動力學參數
ND，未測定。

分析法 6 ： Hanford 小型豬皮膚中之皮膚藥物動力學
此研究之目標為測定在完整Hanford小型豬皮膚之24小時暴露之後，化合物(I)之表皮、真皮及血漿藥物動力學。如表4中所描述，將化合物(I)分別在乳膏或軟膏中調配成0.5% (w/w)調配物A及調配物B。
表 4 ：化合物 ( I ) 之調配物

在給藥之前二十四小時，刮去10-15 kg Hanford小型豬背部之毛髮，暴露至少700 cm² (體表之約10%)之區域。在時間零時，將化合物(I)以25 µL/cm² 之劑量施用於小型豬之背部。皮膚覆蓋有黏著劑覆蓋層以防止化合物流失至籠子或墊褥。在24小時暴露之後，輕輕地用肥皂及水洗滌背部以移除未吸收之藥物且拍乾。在此洗滌之後，立即藉由靜脈穿刺自小型豬抽取血液。接著，藉由膠帶剝離來移除外部皮膚(角質層)。在表層暴露後，獲取0.5 cm穿孔活檢。快速地分離表層及真皮，稱重且快速冷凍。在小型豬中，在給藥後第94小時及168小時(第7天)時採集類似樣品。使用Covaris超音波均質器使表層及真皮樣品於1:10 (w/v)水中均質化。樣品於3倍體積之乙腈中萃取且經由LC-MS分析針對標準曲線進行定量。如由藥物動力學參數(表5)證明，表皮及真皮層中呈現顯著化合物暴露，而血漿暴露低於定量極限(0.001 µg/ml)，表明極有限的化合物吸收至全身循環中。
表 5 . 所 獲得之化合物 ( I ) 之兩種調配物之藥物動力學參數

分析法 7 ： 使用人類新近切除之皮膚之離體 JAK 藥效學 ( PD ) 分析法
使用人類經分離之皮膚組織進行離體JAK藥效學(PD)分析法。在具有約0.5 cm² 之表面積之靜態Franz單元中進行使用新鮮人類皮膚(750 μm厚度之皮節)之PD分析法。用溫熱(37℃)的角化培養基填充Franz單元之接收室且在37℃下置放於培育箱中。向皮膚局部投與10 μL (約18 μL/cm² )化合物(I)或媒劑且保持不受干擾隔夜(約24小時)。第二天，在不再施用測試化合物或媒劑之情況下，用由TNFα、IFNγ及IL-12組成之Th1分佈不均勻之刺激混合物置換培養基。再保持皮膚不受干擾歷時16小時，且接著收集及處理以用於以下生物標記之RNA萃取及qPCR：CXCL10 、CCL2 。使用GAPDH作為內標。在軟膏調配物中，以0.5%強度調配化合物(I)。軟膏媒劑之組成列舉於表6中。使用總共三個皮膚供體(以一式四份/樣品/處理形式測試)。處理效果計算為與媒劑組相比之刺激增加或降低百分比。
表 6 . 軟膏媒劑之組成

離體人類皮膚 PD 分析法結果
資料概述於表7中。與TH1/媒劑對照物組相比，化合物(I)抑制CXCL10 基因表現(其編碼干擾素-γ誘導之蛋白質10 (IP-10))達90.1%。相對於CCL2 基因，其編碼單核球化學引誘劑蛋白質1 (MCP-1)，化合物(I)抑制反應達61.3%。此外，在兩種調配物情況下，在皮膚之表皮及真皮層中偵測到高濃度化合物。
表 7 . 新近切除之人類皮膚上 ， 在約 40 小時連續暴露之後 ， 化合物 ( I ) 之 0 . 5 % 軟膏調配物之藥效學作用以及表皮及真皮沈積
資料呈現為平均值±標準差，n=12 (3個供體，4份樣品/供體)。

分析法 8 ： 人類皮膚滲透性分析法
此實驗之目標為評估在局部施用後，測試化合物經由人類皮膚之經皮吸收。模型使用安置於經特殊設計之擴散室(靜態或流通式)中之經切除之人類皮膚，該等擴散室使皮膚能夠保持在符合真實使用條件之溫度及濕度下。將調配物施用於皮膚表面且藉由監測藥物在皮膚樣品下方流動之受體溶液中之出現率來量測藥物之滲透。此活體外系統使得能夠小心地控制局部施用中涉及之許多潛在變數，諸如給藥體積、濕度、溫度、藥物穩定性及皮膚厚度。

此實驗使用流通式擴散單元 系統(MedFlux-HTTM)，其利用經仔細設計之具有用於最佳沈降條件之小型空洞體積之流通路徑，且已證實可提供真皮下方之局部清除，從而經由自動收集及最佳化流體學產生更精確及詳細的通量概況。研發此系統以特定地最小化在活體外實驗期間之給藥區域，因此在離體人類皮膚之有限表面積內實現更多的劑量複製。

將擴散單元置放於單元加熱 支撐物中且使用循環水浴加熱，以保持皮膚表面溫度為約32℃。使單元連接至多通道蠕動泵且保持在約10 μL/min (600 μL/hr)之流動速率下，以實現直接在皮膚下之接收器流體之連續流動。在連續取樣超過24小時之後，藉由LC-MS/MS分析樣品之測試化合物含量。在施用測試軟膏調配物(n=5)之後，自20-28小時在接收器流體中偵測測試化合物。所使用之軟膏揭示於分析法7中。接收器流體為具有0.1% Brij之PBS。


表 8 . 滲透 通過 1 cm2 人類皮膚之化合物 ( I ) 之通量
如表8中所示，化合物(I)展示充足的滲透性。

分析法 9 ： 小鼠中之活體內 IL - 31 - pSTAT3 JAK 目標接合分析法
使用小鼠中IL-31誘導之磷酸化信號轉導與轉錄活化因子3(pSTAT3)產生之活體內模型來評估小鼠皮膚上之局部目標接合。

JAK/STAT (傑納斯激酶(janus kinase)/信號轉導與轉錄活化因子)信號傳導路徑為免疫細胞之間的通信中的重要元件，且主要經由細胞介素受體活化。細胞介素IL-31之結合可引起JAK1/JAK2酪胺酸激酶之活化及磷酸化，其又引起STAT3之磷酸化(pSTAT3)。接著，經活化之STAT易位至細胞核且直接調節細胞介素敏感性基因之轉錄。在此等研究中，向Balb/c小鼠投與化合物(I)之軟膏調配物。向經刮毛之皮膚局部施用軟膏媒劑(表9)或在軟膏媒劑中調配之化合物(I)(25 µl/cm² )，在30分鐘之後，在兩耳之間的背部皮膚之1×1 cm² 刮毛區域處於皮內注射(50 µl/1×1 cm² 位點)IL-31 (1 µg/ml)。在注射IL-31之後一小時，收集皮膚活檢。將組織樣品急驟冷凍且藉由ELISA及化合物濃度針對pSTAT3進行分析。化合物(I)抑制pSTAT3產生達80%且化合物(I)之皮膚組織濃度為62 µM。
表 9 . 軟膏媒劑之組成

分析法 10 ： 小鼠中活體內 TPA 誘導之急性皮炎模型
此分析法之目標為在研究皮膚發炎性病狀(諸如異位性皮炎)之急性皮炎模型中評估化合物(I)之消炎作用(Dong等人,J Pharmacol Exp Ther , 2013, 344, 436-446)。

在小鼠中局部真皮施用佛波醇酯TPA (phorbol ester TPA)可引起由早期水腫及嗜中性白血球侵入(2-24小時)及晚期表皮細胞增殖(24-48小時)表徵之發炎反應(Griffiths等人,Agents and Actions , 1988, 25, 344-351)。在此模型中，以20微升/耳向雌性Balb/c小鼠局部投與媒劑或TPA (2.5 μg)。對於溶液調配物，在TPA投藥之前30分鐘及之後15分鐘局部施用媒劑(1:7 DMSO:丙酮)或測試化合物。對於軟膏調配物，在TPA之前30分鐘施用媒劑或化合物(I)(0.5%強度)。軟膏媒劑之組成列舉於表10中。炎症程度評估為在TPA施用之後6小時的耳部厚度變化。

結果概述於表11及12中。當以溶液形式給藥時，化合物(I)(3-1000微克/耳)以劑量依賴性方式抑制TPA誘導之耳部厚度增加。所測試之最高劑量抑制TPA反應達54.8%。當在0.5%強度下以軟膏形式調配時，化合物(I)抑制TPA反應達34.9%。
表 10 . 軟膏媒劑之組成
表 11 . 小鼠中局部化合物 ( I ) 溶液調配物對 TPA 誘導之耳部厚度增加之作用
表 12 . 小鼠中局部化合物 ( I ) 軟膏調配物對 TPA 誘導之耳部厚度增加之作用

分析法 11 ： Tall - 1 T 細胞 中 IL - 2 刺激之 pSTAT5 之抑制
使用AlphaLisa在Tall-1人類T細胞株(DSMZ)中量測測試化合物抑制介白素-2 (IL-2)刺激之STAT5磷酸化之效能。因為IL-2經由JAK1/3進行信號傳導，此分析法提供JAK1/3細胞效能之量測。

經由AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT5 (Tyr694/699)套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT5。

來自Tall-1細胞株之人類T細胞在37℃、5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在補充有15%熱滅活胎牛血清(FBS，Life Technologies)、2 mM Glutamax(Life Technologies)、25 mM HEPES (Life Technologies)及1X Pen/Strep (Life Technologies)之RPMI (Life Technologies)中培養。化合物在DMSO中連續稀釋且以聲學方式分配至空的孔中。分配(4微升/孔)分析培養基(補充有10% FBS(ATCC)之不含酚紅之DMEM (Life Technologies))且在900 rpm下振盪盤10分鐘。細胞在分析培養基中以45,000個細胞/孔接種(4微升/孔)且在37℃，5% CO₂ 下培育1小時，接著經30分鐘添加含IL-2 (R&D Systems；最終濃度300 ng/mL)之預先溫熱之分析培養基(4 μL)。在細胞介素刺激之後，細胞用6 μl含有1x PhosStop及Complete錠劑(Roche)之3x AlphaLisa Lysis Buffer (PerkinElmer)溶解。溶解物在室溫(RT)下，在900 rpm下振盪10分鐘。經由pSTAT5 AlphaLisa套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT5。在濾除綠光之＜100 lux光下，將新近製備之受體珠粒混合物分配至溶解物(5 μL)上。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育2小時。在濾除綠光之＜100 lux光下分配供體珠粒(5 μL)。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育隔夜。在濾除綠光之＜100 lux光下，使用EnVision盤讀取器(PerkinElmer)在689 nm激發及570 nm發射下量測發光。

為了測定測試化合物回應於IL-2之抑制效能，在人類T細胞株中量測結合於pSTAT5之珠粒之平均發射強度。由相較於化合物濃度之信號強度的抑制曲線之分析來測定IC₅₀ 值。資料表示為pIC₅₀ (負十進制對數IC₅₀ )值(平均值±標準差)。在此分析法中，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為8.4。

分析法 12 ： 人類 CD3 + T 細胞 中 IL - 12 誘導之 STAT4 磷酸化之抑制
藉由在人類CD3⁺ T細胞中量測介白素-12 (IL-12，R&D Systems)誘導之STAT4磷酸化來進行此關於JAK抑制之細胞效能分析法。CD3抗體(Becton Dickinson (BD)Biosciences)與R-藻紅素(R-PE)結合。pSTAT4抗體(pTyr641，BD Biosciences)與Alexa Fluor 647結合。

人類外周血液單核細胞在37℃下，在5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在補充有10% FBS (Life Technologies)、100 U/mL之青黴素、100 μg/mL之鏈黴素(Life Technologies)、2 mM GlutaMAX (Life Technologies)、盤結合抗CD3 (5 µg/mL，UCHT1，BD Biosciences)及可溶性抗CD28 (1 µg/mL，CD28.2，BD Biosciences)之RPMI培養基(Life Technologies)中培養3天。接著，使細胞再懸浮於補充有10% FBS (Life Technologies)、100 U/mL之青黴素、100 μg/mL之鏈黴素(Life Technologies)、2 mM GlutaMAX (Life Technologies)及10 ng/mL之介白素-2 (IL-2，R&D Systems)之RPMI培養基(Life Technologies)中3天。在分析當天，在分析緩衝液(補充有0.1%牛血清白蛋白(BSA，Sigma)、100 U/mL之青黴素、100 μg/mL之鏈黴素(Life Technologies)及2 mM GlutaMAX (Life Technologies)之RPMI)中洗滌細胞，且在分析緩衝液中再懸浮至1.25×10⁶ 個細胞/毫升。細胞在聚丙烯、96深孔圓底盤(Corning)中以250,000個細胞/100微升/孔接種且培養1小時。移除培養基且用含有測試化合物之劑量反應之50 µL分析緩衝液置換。在DMSO中以10 mM儲備溶液形式製備化合物。在100% DMSO中以1000倍最終分析法測試濃度進行連續稀釋，以產生11種濃度之測試化合物。將此等化合物在分析培養基中稀釋25倍且接著稀釋20倍，以在0.2% DMSO中產生超過最終分析法測試濃度2倍之原料。細胞與測試化合物一起在37℃下培育1小時，接著添加50 μL含有IL-12 (20 ng/mL，R&D Systems)之預先溫熱之分析緩衝液。IL-12之最終濃度為10 ng/mL。在37℃下培育30分鐘之後，細胞用100 µL預先溫熱之cytofix緩衝液(BD Biosciences)固定且在37℃下培育10分鐘。接著，細胞在322×g下離心5分鐘，丟棄上清液且用500 µL染色緩衝液(含1% BSA之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS))洗滌細胞。接著，細胞在322×g下離心5分鐘，丟棄上清液且細胞與500 µL預先冷卻之Perm III緩衝液(BD Biosciences)一起在冰上培育30分鐘以滲透細胞。接著，細胞在322×g下離心5分鐘，丟棄上清液，用1 mL染色緩衝液洗滌，再次離心且使最終細胞小球再懸浮於100 µL含有抗CD3 R-PE (1:10稀釋)及抗STAT4 AlexaFluor 647 (1:50稀釋)之染色緩衝液中以將細胞表面及細胞內標記染色。細胞在黑暗中，在室溫下培育45分鐘。在抗體染色之後，細胞在322×g下離心5分鐘，丟棄上清液且用500 µL染色緩衝液洗滌細胞。再洗滌細胞一次，隨後將孔內含物在200 µL染色緩衝液中自深孔分析盤轉移至聚丙烯U形底96孔盤中以用於流式細胞測量術分析。對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製平均螢光強度值，且用Prism軟體自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。在此分析法中，化合物(I)呈現pIC₅₀ 值為7.2。

分析法 13 ： 正常人類表皮角質細胞中 IL - 13 刺激之 pSTAT6 之抑制
使用AlphaLisa在正常人類表皮角質細胞(ATCC)中量測測試化合物抑制介白素-13 (IL-13)刺激之STAT6磷酸化之效能。經由AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT6 (Tyr641)套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT6。

初代表皮角質細胞在37℃、5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在補充有角質細胞生長套組(ATCC)及1X Pen/Strep (Life Technologies)之真皮細胞基底培養基(ATCC)中培養。在白色經聚-D-離胺酸塗佈之384孔盤(Corning)中，以20,000個細胞/孔接種細胞(50 µl)且在37℃、5% CO₂ 下培育隔夜。在分析法之第2天，移除培養基且用含有測試化合物之劑量反應之15 µL培養基置換。化合物在DMSO中連續稀釋且接著在培養基中再稀釋1000倍，以使最終DMSO濃度達到0.1%。細胞與測試化合物一起在37℃下培育1小時且接著經30分鐘添加含IL-13 (R&D Systems；最終濃度50 ng/mL)之預先溫熱之分析培養基(5 μL)。

在細胞介素刺激之後，細胞用5 μl含有1x PhosStop及Complete錠劑(Roche)之5x AlphaLisa Lysis Buffer (PerkinElmer)溶解。溶解物在室溫(RT)下，在900 rpm下振盪10分鐘。經由pSTAT6 AlphaLisa套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT6。在濾除綠光之＜100 lux光下，將新近製備之受體珠粒混合物分配至溶解物(10 μL)上。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育2小時。在濾除綠光之＜100 lux光下分配供體珠粒(10 μL)。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育隔夜。在濾除綠光之＜100 lux光下，使用EnVision盤讀取器(PerkinElmer)在689 nm激發及570 nm發射下量測發光。

記錄發光信號且用於基於DMSO及對照物計算抑制百分比值。對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製抑制百分比資料，且用Prism軟體自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。在此分析法中，化合物(I)之pIC₅₀ 為8.3。

分析法 14 ： 正常人類表皮角質細胞中 IL - 22 刺激之 pSTAT3 之抑制
使用AlphaLisa在正常人類表皮角質細胞(ATCC)中量測測試化合物抑制介白素-22 (IL-22)刺激之STAT3磷酸化之效能。經由AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT3 (Tyr705)套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT3。

初代表皮角質細胞在37℃、5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在補充有角質細胞生長套組(ATCC)及1X Pen/Strep (Life Technologies)之真皮細胞基底培養基(ATCC)中培養。在白色經聚-D-離胺酸塗佈之384孔盤(Corning)中，以20,000個細胞/孔接種細胞(50 µl)且在37℃、5% CO₂ 下培育隔夜。在分析法之第2天，移除培養基且用含有測試化合物之劑量反應之15 µL培養基置換。化合物在DMSO中連續稀釋且接著在培養基中再稀釋1000倍，以使最終DMSO濃度達到0.1%。細胞與測試化合物一起在37℃下培育1小時且接著經30分鐘添加含IL-22 (R&D Systems；最終濃度50 ng/mL)之預先溫熱之分析培養基(5 μL)。

在細胞介素刺激之後，細胞用5 μl含有1x PhosStop及Complete錠劑(Roche)之5x AlphaLisa Lysis Buffer (PerkinElmer)溶解。溶解物在室溫(RT)下，在900 rpm下振盪10分鐘。經由pSTAT3 AlphaLisa套組(PerkinElmer)量測磷酸化STAT3。在濾除綠光之＜100 lux光下，將新近製備之受體珠粒混合物分配至溶解物(10 μL)上。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育2小時。在濾除綠光之＜100 lux光下分配供體珠粒(10 μL)。盤在900 rpm下振盪2分鐘，簡單快速離心且在黑暗中，在室溫下培育隔夜。在濾除綠光之＜100 lux光下，使用EnVision盤讀取器(PerkinElmer)在689 nm激發及570 nm發射下量測發光。

記錄發光信號且用於基於DMSO及對照物計算抑制百分比值。對於劑量反應分析，相較於化合物濃度繪製抑制百分比資料，且用Prism軟體自4參數穩固擬合模型測定IC₅₀ 值。在此分析法中，化合物(I)之pIC₅₀ 為8.4。

分析法 15 ： 正常人類表皮角質細胞中 IL - 22 抑制之絲聚蛋白之恢復
已知IL-22可抑制最後分化基因(諸如絲聚蛋白)之表現。使用即時PCR在正常人類表皮角質細胞(ATCC)中量測測試化合物實現的介白素-22 (IL-22)抑制之絲聚蛋白表現之恢復程度。

初代表皮角質細胞在37℃、5% CO₂ 含濕氣培育箱中，在補充有角質細胞生長套組(ATCC)及1X Pen/Strep (Life Technologies)之真皮細胞基底培養基(ATCC)中培養。細胞在生物塗佈 96孔板(Corning)中以5,000個細胞/孔接種(100 µl)且在37℃、5% CO₂ 下培育3至4天直至100%匯合。接著，移除培養基且用150 µL含有測試化合物之劑量反應之培養基置換。化合物在DMSO中連續稀釋且接著在培養基中再稀釋1000倍，以使最終DMSO濃度達到0.1%。在分析法之第1天，細胞與測試化合物一起在37℃下培育1小時且接著經4天添加含IL-22 (R&D Systems；最終濃度50 ng/mL)之預先溫熱之培養基(50 μL)。在第3天更換一次具有測試化合物及IL-22之培養基。在第5天，細胞用1X PBS (Gibco)洗滌且用來自TaqMan^® Gene Expression Cells-to-Ct^TM 套組(Life Technologies)之含有0.5 µl 去氧核糖核酸酶I之50 µl溶解緩衝液溶解。在室溫(RT)下培育5分鐘之後，添加來自套組之5 µl停止溶液且接著在室溫下培育2分鐘。混合11.25 µl溶解物、來自套組之12.5 µl 2X RT緩衝液及1.25 µl 20X RT酶混合物。藉由在37℃下培育混合物60分鐘且接著在95℃下培育5分鐘以產生cDNA來進行逆轉錄反應。為了組裝PCR混合物，各反應含有10 µl 2X TaqMan^® Gene Expression Gene Expression Mater Mix、1 µl 2X TaqMan^® Filaggrin Gene Expression Assay (Life Technologies)、1 µl 2X TaqMan^® UBC Gene Expression Assay (Life Technologies)、4 µl無核酸酶水及4 µl cDNA。在50℃保持2分鐘、95℃保持10分鐘接著40個95℃保持15秒及60℃保持1分鐘之循環之循環條件下，用StepOnePlus^TM (Life Technologies)進行PCR反應。在各循環之後捕捉螢光信號。使用比較性C_T 方法定量基因表現，其中不含IL-22及測試化合物之細胞作為基線對照。

最終，在＜1 µM之濃度下觀測到化合物(I)使介白素-22 (IL-22)抑制之絲聚蛋白(Filaggrin)表現恢復。

分析法 16 ： Caco - 2 滲透分析法
使用Caco-2滲透分析法作為皮膚滲透性之指示。該分析法量測溶液中之測試化合物滲透細胞單層(經設計以模擬人類小腸單層之緊密接合)之速率。

自ADMEcell (Alameda, CA)獲得CacoReady 24孔傳斯維爾盤(transwell plates)。自10 mM DMSO儲備溶液以5 μM之濃度一式兩份地評估化合物(n=2)。沿頂端至底外側(A-B)方向，使用Caco-2細胞單層及用於抑制P-gp運輸蛋白之維拉帕米(Verapamil)(25 µM)評估所測試之化合物之被動滲透性。在37℃、5% CO₂ 培育箱中進行實驗。Caco-2培養基由標準經過濾之DMEM、10% FCS、1% L-麩醯胺酸及1% PenStrep組成。藉由向A-B孔中添加750 µL運輸緩衝液來製備基底分析盤。藉由自頂端孔移除Caco-2培養基且用新鮮的運輸培養基(200 μL，重複總共3次洗滌)置換來製備CacoReady^TM 盤。接著，對於A-B孔，用經稀釋之化合物置換空白培養基(200 μL)。為了開始培育，自培育箱移出基底盤且在其頂部添加頂端部分。在時間零(t0)時自頂端及底部隔室收集樣品(40 μL)。在120分鐘之後(t120)，再自頂端及底部隔室收集樣品。稀釋所有樣品且準備用於藉由LC-MS/MS進行生物分析。滲透係數(K_p ，表觀平均A至B+維拉帕米)(cm/sec)計算為dQ(通量)/(dt×面積×濃度)。

在此分析法中，具有小於約5×10^{- 6} cm/sec之K_p 值之化合物視為具有低滲透性。具有超過約20×10^{- 6} cm/sec之K_p 值之化合物視為具有高滲透性。

分析法 17 ： 人類肝微粒體分析法
此分析法之目標為評估活體外人類肝子部分中測試化合物之代謝穩定性。自Bioreclamation-IVT (Baltimore, MD)獲得之人類肝微粒體在冰上解凍且在0.1 M磷酸鉀緩衝液(pH 7.4)中稀釋，使得最終培育蛋白質濃度為0.1 mg/mL。在NADPH輔因子中稀釋測試化合物(10 mM)，使得最終培育濃度為0.1 µM測試化合物及1 mM NADPH。在37℃溫度下進行培育且在時間點第0、5、8、15、30及45分鐘採集測試等分試樣。使各等分試樣分散於具有3%甲酸及1 µM內標之水中。將所得樣品注射至LC-MS/MS系統上以用於分析。

對於每次培育，各t0等分試樣中分析物之峰面積設定成100%且將來自後續時間點等分試樣之峰面積轉化成剩餘母化合物相對於t0之百分比。將剩餘母化合物之百分比轉化成自然對數標度且相較於時間(分鐘)進行標繪。針對母料消失概況之初始降低來進行線性回歸分析且測定用於最佳擬合線之方程式。所得線之斜率以蛋白質濃度(每毫升蛋白質毫克數)或每毫升細胞數目標準化且如下計算肝微粒體之CL_int ：
CL_int (µL×min^-1 ×mg^-1 ) =( 斜率 ×1000) /[蛋白質(mg/mL)]
CL_int 值為0-8 µl/min/mg表示低清除率(亦即＜30%人類中之肝血流)。CL_int 值為9-49 µl/min/mg表示中度清除率(亦即，30-70%人類中之肝血流)且值＞50 µl/min/mg表示高肝清除率(亦即，＞70%人類中之肝血流)。

化合物 ( I ) 及比較化合物之表徵


表 13 ： 比較化合物之表徵
比較性化合物C-1及C-2由申請人在2017年4月、6月及8月進行之會議中的一些演示中揭示。

化合物(I)之特徵在於比C-1及C-2高得多的滲透性(Caco_verap 值)及人類肝微粒體清除率(HLM Cl_int 值)。較高清除率有利於促進快速全身性清除及防止可能與副作用相關聯之全身性暴露。較高滲透性有利於皮膚適應症，因為其似乎提供在皮膚中更好的滲透。

儘管已參考本發明之特定態樣或實施例描述本發明，但一般熟習此項技術者應瞭解，可進行各種變化或可代入等效物，而不偏離本發明之真實精神及範疇。此外，在由適用之專利狀況及規定允許之程度上，本文中所引用之所有公開案、專利案及專利申請案以全文引用之方式併入本文中，該引用之程度如同將各文獻單獨地以引用之方式併入本文中一般。

藉由參考隨附圖式說明本發明之各種態樣。

圖1展示化合物(I)之結晶形式I (下文中稱為形式I)之粉末x射線繞射(PXRD)圖案。

圖2展示結晶形式I之差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。

圖3展示結晶形式I之熱解重量分析(TGA)圖。

圖4展示結晶形式I之動態吸濕等溫線。

圖5展示化合物(I)之結晶形式II (下文中稱為形式II)之粉末x射線繞射(PXRD)圖案。

圖6展示結晶形式II之差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。

圖7展示結晶形式II之熱解重量分析(TGA)圖。

圖8展示結晶形式II之動態吸濕等溫線。

Claims (38)

1. 一種式(I)化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽。
2. 一種式(I)化合物，。
3. 一種式(I)化合物之結晶形式， 其中該結晶形式由包含11.4±0.2、16.2±0.2、16.6±0.2、17.7±0.2及21.9±0.2之2θ值處的繞射峰之粉末X射線繞射圖案表徵。
4. 如請求項3之結晶形式，其中該粉末X射線繞射圖案由具有8.9±0.2、9.5±0.2及10.2±0.2之2θ值處的其他繞射峰進一步表徵。
5. 如請求項4之結晶形式，其中該粉末X射線繞射圖案由具有選自以下之2θ值處的兩個或更多個其他繞射峰進一步表徵：14.4±0.2、19.0±0.2、19.2±0.2、19.8±0.2、20.1±0.2、20.4±0.2、20.6±0.2、20.8±0.2、21.3±0.2、25.9±0.2、30.1±0.2、30.5±0.2、30.9±0.2、32.6±0.2及33.8±0.2。
6. 如請求項3之結晶形式，其中該結晶形式由其中峰位置與圖5中所展示之圖案的峰位置實質上一致之粉末X射線繞射圖案表徵。
7. 如請求項3之結晶形式，其中該結晶形式由在10℃/分鐘之加熱速率下記錄之差示掃描熱量測定跡線表徵，該跡線展示在238.1℃±2℃處具有峰之吸熱流之最大值。
8. 如請求項3之結晶形式，其中該結晶形式由與圖6中所展示實質上一致之差示掃描熱量測定跡線表徵。
9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1或2中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑。
10. 一種醫藥組合物，其包含如請求項3至9中任一項之結晶形式及醫藥學上可接受之載劑。
11. 如請求項9之藥物組合物，其進一步包含一或多種其他治療劑。
12. 如請求項9之藥物組合物，其中該醫藥組合物為軟膏或乳膏。
13. 如請求項9之藥物組合物，其中化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.1至10重量%存在。
14. 如請求項9之藥物組合物，其中化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.25至5重量%存在。
15. 如請求項9之藥物組合物，其中化合物(I)或其醫藥學上可接受之鹽以0.05至0.5重量%存在。
16. 如請求項1或2之化合物，其係用於治療哺乳動物中之發炎性或自體免疫性皮膚病。
17. 如請求項16之化合物，其係用於治療哺乳動物中之發炎性皮膚病。
18. 如請求項17之化合物，其係用於治療異位性皮炎。
19. 如請求項18之化合物，其中該異位性皮炎為中度至重度異位性皮炎。
20. 如請求項18之化合物，其中該異位性皮炎為輕度至中度異位性皮炎。
21. 如請求項16之化合物，其係用於治療斑禿。
22. 如請求項16之化合物，其係用於治療選自由以下組成之群之發炎性或自體免疫性皮膚病：白斑病、結節性癢疹、扁平苔癬、接觸性皮炎、移植物抗宿主疾病之皮膚表現、類天疱瘡、盤狀狼瘡、硬化性苔癬、毛髮扁平苔癬、牛皮癬及脫髮性毛囊炎。
23. 一種如請求項1或2之化合物之用途，其係用於製造用以治療哺乳動物中之發炎性或自體免疫性皮膚病之藥劑。
24. 如請求項23之用途，其係用於製造用以治療哺乳動物中之發炎性皮膚病之藥劑。
25. 如請求項24之用途，其中該發炎性皮膚病為異位性皮炎。
26. 如請求項25之用途，其中該異位性皮炎為中度至重度異位性皮炎。
27. 如請求項25之用途，其中該異位性皮炎為輕度至中度異位性皮炎。
28. 如請求項23之用途，其係用於製造用以治療哺乳動物中之自體免疫性皮膚病之藥劑。
29. 如請求項28之用途，其中該自體免疫性皮膚病為斑禿。
30. 如請求項23之用途，其中該發炎性或自體免疫性皮膚病係選自由以下組成之群：白斑病、結節性癢疹、扁平苔癬、接觸性皮炎、移植物抗宿主疾病之皮膚表現、類天疱瘡、盤狀狼瘡、硬化性苔癬、毛髮扁平苔癬、牛皮癬及脫髮性毛囊炎。
31. 一種用於製備式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之方法， 其包含： (a) 使式(II)化合物： 其中R為C_{1 - 12} 烷基，與還原劑反應，及 (b) 視情況形成醫藥學上可接受之鹽 以提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
32. 如請求項31之方法，其中該還原劑係選自由LiAlH₄ 、NaBH₄ 及LiBH₄ 組成之群。
33. 如請求項31之方法，其中R為乙基。
34. 如請求項31之方法，其中式(II)化合物係藉由使式(III)化合物 其中X為鹵素，與式1-9化合物偶合而獲得。
35. 一種式(II)化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中R為C_{1 - 12} 烷基。
36. 如請求項35之化合物，其中R為乙基。
37. 一種式(III)化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中R為C_{1 - 12} 烷基且X為鹵素。
38. 如請求項37之化合物，其中R為乙基且X為氯。