MD4251C1 - Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14 - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la microbiologie şi fitopatologie, în particular la un mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14 - producătoare de biopreparat care poate fi utilizat pentru protecţia biologică şi în calitate de stimulator de creştere a plantelor.Mediul nutritiv, conform invenţiei, conţine, în g/l: melasă din sfeclă de zahăr - 20,0; zaharoză - 10,0; KH2PO4 - 2,0; MgSO4x7H2O - 1,0; NaNO3 - 2,0; CaCO3 - 2,0 şi apă potabilă - restul, cu pH 5,5…6,0.

Description

Invenţia se referă la microbiologie şi fitopatologie, în particular la un mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14 - producătoare de biopreparat care poate fi utilizat pentru protecţia biologică şi în calitate de stimulator de creştere a plantelor.

Este cunoscut mediul nutritiv de cultivare submersă a tulpinii de fungi Trichoderma lignorum F-5 - producătoare de Trihodermin, utilizată pentru combaterea agenţilor patogeni din genul Fusarium. Componenţa mediului (g/l): peptonă - 3; zaharoză - 5; extract de porumb - 10; NaNO3 - 2, apă curentă până la 1 litru, durata de cultivare constituie 6 zile [1].

Dezavantajele acestui mediu sunt preţul înalt al peptonei, durata îndelungată de cultivare, cât şi faptul că preparatul obţinut conţine miceliu granular, care este greu de utilizat.

Se cunoaşte, de asemenea, mediul nutritiv de cultivare a tulpinii de fungi Trichoderma sp. МГ - 97 - producătoare de Trihodermin, cu compoziţia (g/l): zaharoză - 25,4; extract de porumb - 31,8; KH2PO4 - 3,14; MgSO4x7H2O - 0,645, agar-agar - 20, apă până la 1 litru. Cultivarea se efectuează pe mediu solid timp de 15 zile, la temperatura de 28°C, până la obţinerea unei pelicule miceliale, care apoi se usucă şi se mărunţeşte sub formă de praf [2].

Dezavantajele acestui mediu sunt perioada îndelungată de cultivare, numărul impunător de etape şi lucrul anevoios de obţinere a preparatului.

În calitate de cea mai apropiată soluţie se consideră mediul Waksman, care se optimizează în dependenţă de particularităţile fiziologo-biochimice ale tulpinii, cu următoarea componenţă (g/l): peptonă - 5,0; glucoză - 10,0; KH2PO4 - 1,0; MgSO4x7H2O - 0,5; apă potabilă până la 1litru; pH - 5,5…6,0 [3].

În urma cultivării submerse a tulpinii Trichoderma lignorum CNMN-FD-14 pe mediul menţionat, timp de 6 zile la temperatura de 28…30°C, în condiţii de agitare continuă, se obţine un biopreparat care manifestă activitate antifungică faţă de speciile Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium sporotrichiela şi Botrytis cinerea, diametrul zonei de inhibiţie constituind 26,7…33,3 mm, această proprietate conducând la stimularea creşterii plantulelor de floarea-soarelui cu 38%.

Dezavantajul celei mai apropiate soluţii constă în faptul că pe mediul Waksman tulpina nu-şi realizează potenţialul antifungic maxim.

Problema tehnică pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui mediu nutritiv de cultivare submersă a tulpinii Trichoderma lignorum CNMN-FD-14, care să asigure obţinerea unui biopreparat cu proprietăţi antifungice şi de stimulare a creşterii plantelor, de asemenea să ducă la reducerea duratei de cultivare.

Esenţa invenţiei constă în faptul că se propune un mediu nutritiv optimizat pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14, componentele fiind luate în următorul raport (g/l): melasă din sfeclă de zahăr - 20,0; zaharoză - 10,0; KH2PO4 - 2,0; MgSO4x7H2O - 1,0; NaNO3 - 2,0; CaCO3 - 2,0; apă potabilă până la 1 litru; pH 5,5 … 6,0.

Rezultatul tehnic al invenţiei constă în reducerea duratei de cultivare a tulpinii de fungi cu 2 zile şi în obţinerea unui biopreparat cu proprietăţi antifungice şi stimulatorii mai pronunţate faţă de cea mai apropiată soluţie.

Datele prezentate sunt media a 10 probe.

Exemple de realizare a invenţiei

Exemplul 1

Tulpina Trichoderma lignorum CNMN-FD-14 se cultivă în baloane Erlenmayer de 0,75 l în care se introduc câte 200 ml de mediu din cadrul celei mai apropiate soluţii, cu compoziţia (g/l): peptonă - 5,0; glucoză - 10,0; KH2PO4 - 1,0; MgSO4x7H2O - 0,5; apă potabilă până la 1 litru; pH- 5,5…6,0 şi paralel 200 ml de mediu optimizat ce conţine (g/l): melasă din sfeclă de zahăr - 20,0; zaharoză - 10,0; KH2PO4 - 2,0; MgSO4x7H2O - 1,0; NaNO3 - 2,0; CaCO3 - 2,0; apă potabilă până la 1 litru; pH-ul 5,5 … 6,0, în condiţii de agitare continuă (200 rpm), la temperatura de 28…30°C, timp de 7 zile.

Activitatea antifungică a biopreparatelor obţinute se determină în dinamică începând cu ziua a 4-a, conform metodei de difuzie. Fitopatogenii Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium sporotrichiela şi Botrytis cinerea se însămânţează în cutii Petri cu mediu malţ-agar, apoi în fiecare cutie se face câte un godeu în care se întroduce câte 1ml biopreparat. Difuzia biopreparatului durează 24 ore, la temperatura de 4ºC, apoi se inoculează fitopatogenii, care se cultivă timp de 3…4 zile, la temperatura de 28…30°C. Activitatea antifungică se determină conform diametrului zonei de inhibiţie a fitopatogenilor.

Maximumul activităţii antifungice faţă de Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium sporotrichiela şi Botrytis cinerea a biopreparatului obţinut pe mediul proxim a fost înregistrat după 6 zile de cultivare (diametrul zonelor de inhibiţie - 33,3; 26,0 şi 26,7 mm, respectiv), iar pe mediul propus după 4 zile de cultivare (diametrul zonelor de inhibiţie - 60,7; 40,0 şi 35,7 mm, respectiv).

Tabelul 1

Activitatea antifungică a biopreparatului în dependenţă de durata şi mediul de cultivare

a tulpinii Trichoderma lignorum CNMN-FD-14

Culturile-Test Durata de cultivare, zile. Diametrul zonei de inhibiţie, mm Mediul proxim Mediul optimizat 4 5 6 4 Sclerotinia sclerotiorum 18,70±2,36 26,30±1,31 33,30±2,36 60,70±2,36 Fusarium sporotrichiela 14,00±1,13 20,30±0,65 26,00±1,13 40,00±1,31 Botrytis cinerea 13,30±1,31 19,70±1,73 26,70±0,65 35,70±1,73

Exemplul 2

Pentru verificarea prin comparaţie a efectului stimulator al biopreparatului obţinut pe mediul proxim, cât şi pe cel optimizat au fost montate experimente vegetative de laborator. În calitate de material semincer s-au folosit boabe de floarea-soarelui (soiul Rodnicioc).

Experimentele s-au efectuat în condiţii de cameră, la temperatura de 20… 24ºC, în sol steril, cu umiditatea de 60…80% şi iluminarea de zi. Durata experimentului a constituit 10 zile.

Seminţele de floarea-soarelui au fost prelucrate cu biopreparatul obţinut pe mediul proxim după 6 zile de cultivare, iar cu preparatul obţinut pe mediul optimizat după 4 zile de cultivare.

Rezultatele obţinute în experimentele de laborator au arătat că biopreparatul obţinut pe mediul optimizat în comparaţie cu biopreparatul proxim este mai efectiv.

Tabelul 2

Activitarea stimulatoare a biopreparatului pentru floarea-soarelui în dependenţă

de mediul de cultivare a tulpinii Trihoderma lignorum CNMN-FD-14

Indicii de biomasă, M±m Tratarea seminţelor cu biopreparat proxim Tratarea seminţelor cu biopreparat optimizat Lungimea plantulei, cm 7,10±0,30 9,80±0,28 Masa a 100 de plantule, g 74,20±4,50 86,80±3,20 Masa rădăcinilor la 100 plantule, g 9,10±0,40 11,60±0,45

Masa a 100 de plantule şi masa rădăcinilor la 100 plantule de floarea-soarelui sub influenţa biopreparatului obţinut pe mediul optimizat a sporit cu 17% şi 27,5% respectiv, iar lungimea plantulelor - cu 38% faţă de proxim.

1. RU 2121793 C1 1998.11.20

2. RU 2171580 C1 2001.08.10

3. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под ред. Егорова М.С. Москва, МГУ, 1995, 224 с.

Claims (1)

1. Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma lignorum CNMN-FD-14, care conţine melasă din sfeclă de zahăr, zaharoză, KH2PO4, MgSO4x7H2O, NaNO3, CaCO3 şi apă potabilă, cu pH 5,5…6,0, componentele fiind luate în următorul raport, g/l:

   melasă din sfeclă de zahăr 20,0 zaharoză 10,0 KH2PO4 2,0 MgSO4x7H2O 1,0 NaNO3 2,0 CaCO3 2,0 apă potabilă restul.