MX2014005759A

MX2014005759A - Anticuerpos anti-il-36r.

Info

Publication number: MX2014005759A
Application number: MX2014005759A
Authority: MX
Inventors: Keith Canada; Su-Ellen Brown; Lukasz Chlewicki; Michael Howell; Joseph Robert Woska Jr; Detlev Mennerich
Original assignee: Boehringer Ingelheim Int
Priority date: 2011-11-16
Filing date: 2012-11-14
Publication date: 2014-09-08
Also published as: NL301233I1; US20200231684A1; AR089178A1; SI3536710T1; US20150203584A1; CN107007833B; TW201333037A; EP3536710B1; PL3536710T3; CN112812183B; RS59248B1; CL2014001123A1; NO2023024I1; PT3536710T; CO7020871A2; GEP20186816B; LTPA2023518I1; CY2023014I2; PH12014501108A1; SG11201402283PA

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de unión anti-IL-36R, en particular nuevos anticuerpos anti-IL-36R y métodos diagnósticos y terapéuticos y composiciones para utilizar los mismos.

Description

ANTICUERPOS ANT1-1L-36R CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención en general se refiere a anticuerpos anti-IL-36R para uso diagnóstico y terapéutico. Los anticuerpos pueden utilizarse en composiciones farmacéuticas y kits que comprenden dichos compuestos. Los anticuerpos son útiles en métodos para el tratamiento de diversas enfermedades 0 trastornos, por ejemplo enfermedades inmunológicas, inflamatorias, autoinmunes, fibróticas y respiratorias en seres humanos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La familia IL-1 de citoquinas está compuesta por 11 diferentes ligandos, a saber, IL-1a (también denominado IL-1 F1), IL-1 ß (IL-1 F2), Antagonista del receptor IL-1 (IL-1 Ra o IL-1 F3), IL-18 (IL-1 F4), IL-1 F5 a IL-1 F10, y IL-1 F1 1 (o IL-33). IL-1a y IL-1 ß son conocidos por inducir actividades proinflamatorias en la unión al tipo receptor I IL-1 (IL-1 Rl) y reclutamiento de la proteína accesoria (IL-1 RAcP) del receptor IL-1 del co-receptor común, mientras que IL-1 Ra actúa como un inhibidor competitivo de la unión de IL-1 unión a IL- 1 Rl, ejerciendo de ese modo actividad antiinflamatoria. Numerosos estudios informaron que IL-18 es una citoquina proinflamatoria que es un inductor de IFN-Y, mientras que IL-33 se describió como una citoquina inmunoreguladora involucrada en particular en el control de las respuestas de Th2. Nuevos miembros de la familia IL-1 , incluyendo IL-1 F5, IL-1 F6, IL-1 F8, y IL-1 F9, fueron identificados a través de búsquedas en bases de datos de ADN para homólogos de IL-1. En seres humanos y ratones, todos los genes que codifican estas citoquinas mapean a menos que 300 kb de cromosoma 2q, donde lindan con los genes IL1A, IL1B, y IL1RN. IL-1 F6, IL-1 F8, y IL-1 F9 comparten 21 % a 37% de homología de la secuencia de aminoácidos con IL-1 y IL-1 Ra, mientras que IL- 1 F5 muestra 52% de homología de la secuencia de aminoácidos con IL-1 Ra, sugiriendo que IL-1 F5 podría representar un antagonista del receptor endógeno. IL-1 F6, IL-1F8, y IL-1F9 se unen a IL-1 Rrp2, un receptor de la familia IL-1 R, y utilizan IL-1 RAcP como co-receptor para estimular las señales intracelulares similares a aquellas inducidas por IL-1 , mientras que IL-1 F5 se demostró que inhibe la activación de NF-?? inducida por IL- F9 en células T Jurkat que sobre-expresan IL-1 Rrp2. Como IL-1 ß, todos estos homólogos de IL-1 carecen de un péptido lector y no pueden ser liberados a través del mecanismo secretor, aunque los estudios sugieren que la liberación de los agonistas IL-1 Rrp2 pueden controlarse mediante los mecanismos diferentes de aquello que regulan la secreción de IL-1 ß. Para reconocer los efectos biológicos específicos de estas citoquinas y para reconocer que pueden unirse al mismo receptor, recientemente se ha propuesto modificar la nomenclatura de los homólogos de IL-1. De ese modo, IL-1 Rrp2 ahora se denomina IL-36R y sus ligandos se denominan IL-36a (IL-1 F6), ??-36ß (IL-1 F8), y IL-36y (IL-1 F9). Además, IL-1F5, que ha demostrado que ejerce actividades antagonistas del receptor, ha sido denominado nuevamente IL-36Ra.

Los ARNs mensajeros para IL-36a, ??-36ß, y IL-36y están altamente expresados en varios tejidos, particularmente en tejidos epiteliales internos, que están expuestos a patógenos y en la piel. En forma interesante, la expresión de IL-36Ra y IL-36a está significativamente sobreregulada en queratinocitos humanos estimulados con IL-i /TNF-a, y IL-36Ra y IL-36y ARNm están altamente incrementados en la piel con psoriasis lesional. Además, la producción de proteína IL-36y es potenciada en los queratinocitos humanos después de la estimulación de TNF-a y IFN-?. La expresión elevada de la proteína y ARNm de IL-36a se informó también en la enfermedad crónica del riñon.

Los ratones transgénicos que sobreexpresan IL-36a en queratinocitos exhiben lesiones inflamatorias de piel que comparten algunas características con la psoriasis. Este fenotipo era más severo cuando los ratones transgénicos se cruzaron con ratones deficientes en IL-36Ra, soportando una función reguladora de IL-36Ra in vivo. La afección inflamatoria de la piel en IL-36a transgénico específico de los queratinocitos es aún más similar a la psoriasis humana si los ratones son tratados con 12-O-tetradecanoilforbol 13-acetato, semejando la enfermedad humana histológicamente, molecularmente, y en su respuesta a los productos terapéuticos. Además, la piel lesional psorásica humana transplantada en ratones inmunodeficientes se normaliza cuando los ratones son tratados con anticuerpo anti-IL-36R, argumentando que se requiere que el eje IL-36 mantenga el fenotipo lesional en la piel psorásica humana. En combinación, estos datos indican que los ligandos IL-36R, incluyendo IL-36a, IL-36ß, y IL-36y, ejercen efectos proinflamatorios in vitro e in vivo y que IL-36Ra actúa como un antagonista natural, imitando de ese modo el sistema de IL-1/IL-1 Ra.

Por ello existe evidencia que los ligandos de IL-36R están involucrados en un número de condicione de enfermedades, y existe una necesidad de nuevos agentes terapéuticos que se dirijan a esta vía, en particular para el uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

LA INVENCIÓN La presente invención trata la necesidad anterior proporcionando productos bioterapéuticos, en particular anticuerpos, que se unen a IL-36R. En un aspecto, los anticuerpos de la presente invención bloquean la señalización mediada por el ligando IL36 (a, ß y/o y). En un aspecto los anticuerpos de la presente invención son útiles, por ejemplo para el tratamiento de fibrosis/inflamación mediada-epitelial en enfermedades tales como psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, esclerodermia, COPD, y enfermedad crónica del riñon.

En un aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que tiene una o más de las propiedades de más abajo.

En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene alta potencia de unión molecular/celular. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención se une a IL-36R humano en un KD < 0.1 nM. En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención, en particular un anticuerpo anti-IL-36R humanizado, se une a IL-36R humano en un KD < 50 pM. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-3GR de la presente invención se une a IL-36R que expresa células en un EC90 < 5 nM.

En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene alta potencia de bloqueo funcional basado en células. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención bloquea todo los tres Ligandos agonistas IL-36R (a, ß, y) en un IC90 < 5 nM, en células primarias y líneas celulares relevantes de la enfermedad.

En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene la potencia de unión molecular/celular y la potencia de bloqueo funcional basado en las células expuestas más arriba.

En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene alta selectividad por ejemplo mayor que 1000 veces la selectividad contra líneas celulares IL-1R1 o IL-36R negativas humanas. En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención no se une a as celulares IL-1 R1 o IL-36R negativas humanas.

En la realización uno, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une a IL-36R humano en un KD igual a o < 0.1 nM.

En la realización dos, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno es un anticuerpo monoclonal o fragmento de unión al antígeno del mismo.

En la realización tres, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno o dos, en donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno es un anticuerpo humanizado o fragmento de unión al antígeno del mismo.

En la realización cuatro, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización tres, que se une a IL-36R humano en un KD igual a o < 50 pM.

En la realización cinco, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones uno a cuatro, que no se une a IL-1 R1 humano.

En la realización seis, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 35, 102, 103, 104, 105 106 o 140 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización siete, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 102 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización ocho, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 103 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización nueve, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 104 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización diez, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 105 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización once, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 106 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización doce, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización seis, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 140 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización trece, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82 o 83; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 o 95.

En la realización catorce, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización trece, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 87; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 88; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 89.

En la realización quince, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 87; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 88; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 89.

En la realización dieciséis, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L- CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H- CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 o 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

En la realización diecisiete, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 84, 85 o 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 96, 97, 98, 99, 100 o 101.

En la realización dieciocho, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización diecisiete, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 85; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 100; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 85; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 101.

En la realización diecinueve, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización diecisiete, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 100; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 101.

En la realización veinte, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 1 14, 1 15, 116, 1 17, 1 18, 1 19, 120 o 121 ; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131 , 132 o 133.

En la realización veintiuno, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 15; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125.

En la realización veintidós, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 115; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126.

En la realización veintitrés, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 115; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27.

En la realización veinticuatro, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125.

En la realización veinticinco, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126.

En la realización veintiséis, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veinte, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 127.

En la realización veintisiete, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 122, 123 o 124; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 134, 135, 136, 137, 138 o 139.

En la realización veintiocho, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veintisiete, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138.

En la realización veintinueve, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la realización veintisiete, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 139.

En la realización treinta, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con veintisiete, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 124; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138.

En la realización treinta y uno, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 103 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización treinta y dos, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 104(L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

En la realización treinta y tres, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

En la realización treinta y cuatro, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la realización uno, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36(L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

En una realización, un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones uno a treinta y cuatro es un anticuerpo monoclonal. En una realización, un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones uno a treinta y cuatro es un anticuerpo humanizado. En una realización, un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones uno a treinta y cuatro es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En la realización treinta y cinco, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 21 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 30 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 39 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 48 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 57 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 67 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 22 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 31 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 40 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 49 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 58 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 68 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 23 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 32 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 41 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 50 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 59 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 69 (H-CDR3); O una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 24 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 33 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 42 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 51 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 60 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 70 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 25 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 34 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 43 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 52 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 61 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 71 (H-CDR3); ° una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 35 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L- CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 28 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 37 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 46 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 55 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 65 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 74 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 29 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 38 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 47 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 56 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 66 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 75 (H-CDR3).

En la realización treinta y seis, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 ; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 11; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 12; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 3; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 13; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 4; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 14; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 5; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 15; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 6; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 16; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 7; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 17; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 8; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 18; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 9; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 19; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 10; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 20.

En otra realización treinta y siete, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones previas y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

En otra realización treinta y ocho, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones previas, para su uso en medicina.

En otra realización treinta y nueve, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1-37, en donde el uso es el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, de una enfermedad autoinmune, de una enfermedad respiratoria, de un trastorno metabólico, de un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis o de cáncer.

En otra realización cuarenta, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1-37, en donde el uso es para el tratamiento de psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica o espondilitis anquilosante.

En otra realización cuarenta y uno, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1-37, en donde el uso es para el tratamiento de enfermedad inflamatoria de los intestinos.

En aún otra realización cuarenta y dos, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con la realización 41 , en donde la enfermedad es enfermedad de Crohn.

En otra realización cuarenta y tres, la presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad que comprende administrar el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1-37, a un paciente que necesita el mismo, en donde la enfermedad se selecciona de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad respiratoria, un trastorno metabólico, un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis y cáncer.

En otra realización cuarenta y cuatro, la presente invención proporciona un método de acuerdo con la realización 43 en donde la enfermedad se selecciona de psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica y espondilitis anquilosante.

En aún otra realización cuarenta y cinco, la presente invención proporciona un método para tratar la enfermedad de Crohn.

Otras realizaciones de la invención contemplan: Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia que codifica un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con la invención, preferentemente una secuencia de ADN o ARN; un polinucleótido aislado de acuerdo con la invención, que codifica una secuencia según lo definido por uno o más de SEC ID NOs. 1 a 140; un vector que comprende un polinucleótido de acuerdo con la invención, preferentemente un vector de expresión, más preferente un vector que comprende el polinucleótido de acuerdo con la invención en asociación funcional con una secuencia de control de expresión; una célula huésped que comprende un polinucleótido de acuerdo con la invención y/o un vector de acuerdo con la invención; un método para la producción de un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con la invención, preferentemente un método de producción recombinante que comprende el uso de un polinucleótido de acuerdo con la invención, y/o de un vector de acuerdo con la invención y/o de una célula huésped de acuerdo con la invención; dicho método preferentemente comprende los pasos (a) cultivar la célula huésped en condiciones que permiten la expresión del anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno y (b) recuperar el anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno; un kit diagnóstico o método diagnóstico que comprende un anticuerpo anti-IL-36R o fragmentó de unión al antígeno de acuerdo con la invención, o el uso del mismo; un kit diagnóstico o método diagnóstico de acuerdo con la invención, para el diagnóstico de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad respiratoria, un trastorno metabólico, un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis, cáncer, psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica, espondilitis anquilosante, o enfermedad de Crohn.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1 : Los ligandos de antagonista IL-36 (IL-36RA/IL1 F5, IL-38/ILF10) inhiben la cascada de señalización.

Figuras 2A-2C: Los análisis de chip génico demuestran que los ligandos IL-36R son sobreregulados en la piel psorásica (IL-36 RA, IL-36 a y IL-36 Y).

Figuras 3A-3B: Perfil de expresión que utiliza secciones de piel humana. Parafina fija a formalina embebida con trituraciones de anticuerpo utilizando anticuerpo 33D10 Figura 4: Método para evaluar el espesor epidérmico de las secciones de piel humana.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a anticuerpos anti-IL-36R. En un aspecto, los anticuerpos de la presente invención son para uso diagnóstico y terapéutico, por ejemplo en seres humanos.

La presente invención proporciona anticuerpos que se unen a IL-36R, en particular IL-36R humano. La presente invención también se refiere a anticuerpos humanizado que se unen a IL-36R. En realizaciones específicas, la secuencia de estos anticuerpos humanizados se ha identificado en base a las secuencias de ciertos anticuerpos candidatos de ratón.

Sin ceñirnos a esta teoría se cree que los anticuerpos anti-IL-36R o fragmentos de unión al antígeno del mismo se unen a IL-36R humano y de ese modo interfieren con la unión de los agonistas IL-36, y al hacer esto bloquean al menos parcialmente la cascada de señalización del IL-36R a los mediadores inflamatorios. Esto es ilustrado por la Figura 1.

En un aspecto, los anticuerpos de la presente invención son para el uso en modelos de enfermedad humana. IL-36R también es conocido como IL- 1 RL2 y IL-1 Rrp2. Se ha informado que los ligandos agonistas IL-36 (a, ß, o ?) inician la cascada de señalización uniendo el receptor IL-36 que entonces forma un heterodímero con la proteína accesoria del receptor IL-1 (IL-1 RAcP). Los ligandos antagonistas IL-36 (IL-36RA/IL1 F5, IL-38/ILF10) inhiben la cascada de señalización (véase la Figura 1).

En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene alta potencia de unión molecular/celular. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención se une a IL-36R humano en un KD < 0.1 nM. En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención, en particular un anticuerpo anti-IL-36R humanizado, se une a IL-36R humano en un KD < 50 pM. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención se une a células que expresan IL-36R en un EC90 < 5 nM.

En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención tiene alta potencia de bloqueo funcional basado en células. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención bloquea todos los tres ligandos agonistas IL-36R (a, ß, ?) en un ICgo= 5 nM, en células primarias y líneas celulares relevantes de la enfermedad.

En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención es un anticuerpo humanizado. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención es un anticuerpo monoclonal. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención es un anticuerpo de longitud completa. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R de la presente invención es un anticuerpo monoclonal humanizado, por ejemplo un anticuerpo monoclonal humanizado de longitud completa.

Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo de la presente invención reconoce el "epítopo del antígeno IL-36R" o " epítopo IL-36R" específico. Tal como se utiliza en la presente estos términos se refieren a una molécula (por ejemplo, un péptido) o un fragmento de una molécula capaz de inmunoreactividad con un anticuerpo anti-IL-36R.

Los epítopos son mucho más comúnmente proteínas, oligopéptidos cortos, imitaciones de oligopéptidos (es decir, compuesto orgánicos que imitan las propiedades de unión del anticuerpo del antígeno IL-36R), o combinaciones de los mismos. El tamaño mínimo de un epítopo de péptido o polipéptido para un anticuerpo se piensa que es aproximadamente cuatro a cinco aminoácidos. Los epítopos de péptido o polipéptido contienen por ejemplo al menos siete aminoácidos o por ejemplo al menos nueve aminoácidos o por ejemplo entre aproximadamente 15 a aproximadamente 20 aminoácidos. Debido a que un anticuerpo puede reconocer un péptido o polipéptido antigénico en su forma terciaria, los aminoácidos que comprenden un epítopo necesitan ser contiguos, y en algunos casos, aún no pueden estar en la misma cadena peptídica. Los epítopos pueden determinarse mediante varias técnicas conocidas en el arte, tales como cristalografía de rayos X, espectrometría de masa de intercambio de Hidrógeno/Deuterio (HXMS), mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis de barrido de alanina, y métodos de detección de péptidos.

La estructura generalizada de los anticuerpos o inmunoglobulina es bien conocida para aquello con experiencia en el arte. Estas moléculas son glicoproteinas heterotetramericas, típicamente de aproximadamente 150.000 daltons, compuestas de dos cadenas livianas idénticas (L) y dos cadena pesadas idénticas (H) y típicamente son denominadas como anticuerpos de longitud completa. Cada cadena liviana está covalentemente unida a una cadena pesada por un enlace disulfuro para formar un heterodímero, y la molécula heterotramerica es formada a través de una unión de disulfuro covalente entre las dos cadenas pesadas idénticas de los heterodímeros. Aunque las cadenas liviana y cadena pesada están unidas junta por un enlace disulfuro, el número de uniones disulfuro entre la dos cadenas pesadas varía en el isotipo de inmunoglobulina. Cada cadena pesada y liviana también tiene puentes de disulfuro de intracadena regularmente espaciados. Cada cadena pesada tiene en el término amino un dominio variable (VH), seguido por tres o cuatro dominio constantes (Cm, CH2, CH3, y CH4), así como una región bisagra entre CHi y CH2-Cada cadena liviana tiene dos dominios, un dominio variable con terminal amino (VL) y un dominio constante con terminal carboxi (CL). El dominio VL se asocia no covalentemente al dominio VH, mientras que el dominio CL comúnmente está covalentemente unido al dominio Cm a través de un enlace disulfuro Se piensa que los residuos de aminoácido particulares forman una interfaz entre los dominios variables de cadena liviana y pesada (Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663). Los dominios variables también se denominan en la presente como regiones variables.

Ciertos dominios dentro de los dominios variables difieren extensamente entre los diferentes anticuerpos es decir, son "hipervariables." Estos dominios hipervariables contienen residuos que están directamente involucrados en la unión y especificidad de cada anticuerpo particular para su determinante antigénico específico. La hipervariabilidad, tanto en los dominios variables de cadena liviana como de cadena pesada, está concentrada en tres segmentos conocidos como regiones determinantes de complementariedad (CDRs) o bucles hipervariables (HVLs). Las CDRs están definidas por la comparación de secuencia en Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5° Edición Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., mientra que las HVLs (también denominadas en la presente como CDRs) están definidas estructuralmente de acuerdo con la estructura de tres dimensiones del dominio variable, según lo descrito por Chothia y Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917. Estos dos métodos resultan en identificaciones levemente diferentes de una CDR. Según lo definido por Kabat, CDR-L1 está posicionada en aproximadamente los residuos 24-34, CDR-L2, en aproximadamente los residuos 50-56, y CDR-L3, en aproximadamente los residuos 89-97 en el dominio variable de cadena liviana; CDR-H1 está posicionada en aproximadamente los residuos 31-35, CDR-H2 en aproximadamente los residuos 50-65, y CDR-H3 en aproximadamente los residuos 95-102 en el dominio variable de cadena pesada. Los números de residuo exactos que contemplan una CDR particular variarán dependiendo de la secuencia y tamaño de la CDR. Aquellos expertos en el arte pueden determinar en forma rutinaria que residuos comprenden una CDR particular dada la secuencia de aminoácidos de la región variable del anticuerpo. La CDR1 , CDR2, CDR3 de las cadenas liviana y pesada por ello definen la propiedades únicas y funcionales específicas para un anticuerpo dado.

Las tres CDRs dentro de cada una de las cadenas pesada y liviana está separadas por regiones marco (FR), que contienen secuencias que tienden a ser menos variables. Del término amino al término carboxi de lo dominio variable de cadena pesada y liviana, las FRs y CDRs están dispuestas en el orden: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, y FR4. La configuración mayormente de hoja ß de las FRs lleva las CDRs dentro de cada una de las cadenas en cercana proximidad entre sí así como a las CDRs de la otra cadena. La conformación resultante contribuye con el sitio de unión al antígeno (véase Kabat et al., 1991 , NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, páginas 647-669), aunque no todos los residuos de CDR están necesariamente directamente involucrado en la unión al antígeno.

Los residuos de FR y dominio constantes de Ig no están directamente involucrados en la unión al antígeno, sino que contribuyen con la unión al antígeno y/o media la función efectora del anticuerpo. Se cree que algunos residuos de FR tienen un efecto significativo en la unión al antígeno en al menos tres modos: mediante la unión no covalente directamente a un epítopo, mediante la interacción con uno o más residuos de CDR, y afectando la interfaz entre la cadena liviana y pesada. Los dominios constantes no están directamente involucrados en la unión al antígeno sino que median diversas funciones efectoras de Ig, tales como la participación del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC), citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y fagocitosis celular dependiente del anticuerpo (ADCP).

Las cadenas livianas de las inmunoglobulinas de los vertebrados son asignadas a una o más clases claramente diferentes, kappa (?) y lambda (?), en base a la secuencia de aminoácidos del dominio constante. Por comparación, las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas de mamíferos están asignadas a uno de cinco clases principales, de acuerdo con la secuencia de los dominios constantes: IgA, IgD, IgE, IgG, y IgM. IgG y IgA además se dividen en subclases (isotipos), por ejemplo, IgGi, lgG2, lgG3, lgG4l IgAi, y lgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que correspondes a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan a, d, e, ?, y µ, respectivamente. Las estructuras de subunidad y configuraciones en tres dimensiones de las clases de inmunoglobulinas originales son bien conocidas.

Los términos, "anticuerpo", "anticuerpo anti-IL-36R", "anticuerpo anti-IL-36R humanizado", "anticuerpo IL-36R anti-epítopo humanizado ", y "anticuerpo IL-36R anti-epítopo humanizado variante" específicamente contemplan los anticuerpos monoclonales (incluyendo anticuerpos monoclonales de longitud completa), anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos b ¡específicos), y fragmentos de anticuerpo tales como dominios variables y otra porciones de anticuerpos que exhiben una actividad biológica deseada, por ejemplo, unión a IL-36R. El término "anticuerpo monoclonal" (mAb) se refiere a un anticuerpo que es altamente específico, que es dirigido contra un determinante antigéníco simple, un "epítopo". Por ello, el modificador "monoclonal" es indicativo de anticuerpos dirigido al epítopo idéntico y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier método particular. Debe entenderse que los anticuerpos monoclonales pueden realizarse mediante cualquier técnica o metodología conocida en el arte; incluyendo por ejemplo, el método de hibridomas ( Kohler et al., 1975, Nature 256:495), o métodos de ADN recombinante conocido en el arte (véase, por ejemplo, Patente Estadounidense N° 4.816.567), o métodos de aislamiento de monoclonales producidos en forma recombinante utilizando bibliotecas de anticuerpos de fagos, utilizando técnicas descritas en Clackson et al., 1991 , Nature 352: 624-628, y Marks et al., 1991 , J. Mol. Biol. 222: 581-597.

El término "monómero" se refiere a una forma homogénea de un anticuerpo. Por ejemplo, para un anticuerpo de longitud completa, monómero significa un anticuerpo monomérico que tiene dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas livianas idénticas.

Los anticuerpos quiméricos consisten en regiones variables de cadena liviana y pesada de un anticuerpo de una especie (por ejemplo, un mamífero no humano tal como un ratón) y regiones constantes de cadena liviana y pesada de anticuerpo de otras especies (por ejemplo, ser humano) y pueden obtenerse uniendo las secuencias de ADN que codifican las regiones variables del anticuerpo de la primer especie (por ejemplo, ratón) a las secuencias de ADN para las regiones constantes del anticuerpo de la segunda especie (por ejemplo ser humano) y transformando un huésped con un vector de expresión que contiene las secuencias unidas para permitir que el mismo produzca un anticuerpo quimérico Alternativamente, el anticuerpo quimérico también podría ser uno en el que una o más regiones o dominios de la cadena liviana y/o pesada es idéntica con, homologa a, o una variante de la correspondiente secuencia en un anticuerpo monoclonal de otra clase de inmunoglobulina o isotipo o de una secuencia de línea germinal o consensual. Los anticuerpos quimérico pueden incluir fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que el fragmento de anticuerpo exhiba la actividad biológica deseada de su anticuerpo progenitor, por ejemplo unión al mismo epítopo (véase, por ejemplo, la Patente Estadounidense N° 4.816.567; y Morrison et al., 1984, Proc. Nati. Acad. Sci. EEUU 81 : 6851-6855).

Los términos, "fragmento de anticuerpo", "fragmento de anticuerpo anti-IL-36R ", " fragmento de anticuerpo epítopo anti-IL-36R ", "fragmento anticuerpo anti-IL-36R humanizado", " fragmento de anticuerpo epítopo anti-IL-36R humanizado", " fragmento de anticuerpo epítopo anti-IL-36R humanizado de variante " se refieren a una porción de un anticuerpo anti-IL-36R de longitud completa, en el que una región variable o una capacidad funcional es retenida, por ejemplo, unión al epítopo IL-36R específico. Los ejemplos de fragmento de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, un fragmento Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, Fvsc y FvsoFc, un diacuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo de cadena simple, un minicuerpo, un diacuerpo formado del fragmento de anticuerpos, y anticuerpos multiespecífico formados de fragmentos de anticuerpos.

Los anticuerpos de longitud completa pueden tratarse con enzimas tales como papaina o pepsina para generar fragmentos de anticuerpos útiles. La digestión de la papaina se utiliza para producir dos fragmentos de anticuerpos de unión ai antígeno idénticos denominados fragmentos "Fab", cada uno con un sitio de unión al antígeno simple, y un fragmento residual "Fe". El fragmento Fab también contiene el dominio constante de la cadena liviana y el dominio Cm de la cadena pesada. El tratamiento con pepsina produce un fragmento F(ab')2 que tiene dos sitios de unión al antígeno y aún es capaz de reticular el antígeno.

Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por la presencia de residuos adicionales incluyendo una o más cisteína de la región bisagra del anticuerpo en el término C del dominio CHI- Los fragmentos de anticuerpos F(ab')2 son pares de fragmentos Fab' unidos por residuos de cisteína en la región bisagra. Otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos también son conocidos.

El fragmento "Fv" contiene un sitio de unión y reconocimiento del antígeno completo que consiste en un dímero de un dominio variable de una cadena liviana y una pesada en asociación estrecha, no covalente. En esta configuración, las tres CDRs de cada dominio variable interactúa para definir un sitio de unión al antígeno en la superficie del dímero VH-Vl. Colectivamente, las seis CDRs confieren especificidad de unión al antígeno al anticuerpo.

Un fragmento de anticuerpo "Fv de cadena simple" o "Fvsc" es una variante Fv de cadena simple que comprende los dominios VH y VL de un anticuerpo donde los dominios están presentes en una cadena de polipéptidos simple. El Fv de cadena simple es capaz de reconocer y unirse al antígeno. El polipéptido Fvsc opcionalmente también puede contener un conector al polipéptido posicionado entre los dominios VH y VL para facilitar la formación de una estructura de tres dimensiones deseada para la unión al antígeno por el Fvsc (véase, por ejemplo, Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal antibodies, Volumen 113, Rosenburg y Moore eds., Springer-Verlag, New York, páginas 269-315).

Un "diacuerpo" se refiere a fragmentos de anticuerpos pequeños con do sitio de unión al antígeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (V.sub.H) conectado a un dominio variable de cadena liviana (V.sub.L) en la misma cadena de polipéptidos (V.sub.H-V.sub.L o V.sub.L- V.sub.H). Los diacuerpos se describen más completamente en, por ejemplo, Holliger et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. EEUU 90: 6444-6448.

Otros fragmentos de anticuerpos reconocidos incluyen aquellos que comprenden un par de segmentos de Fd tándem (VH-CHI-VH-CHI) para formar un par de regiones de unión al antígeno. Estos "anticuerpos lineales" pueden ser biespecificos o monoespecíficos según lo que se describe en, por ejemplo, Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062.

Un "anticuerpo humanizado" o un "fragmento de anticuerpo humanizado" es un tipo especifico del anticuerpo quimérico que incluye una variante de secuencia de aminoácidos de ¡nmunoglobulina, o fragmento de la misma, que es capaz de unión a un antígeno predeterminado y que, comprende uno o más FRs que tienen sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una ¡nmunoglobulina humana y una o más CDRs que tienen sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una ¡nmunoglobulina no humana. Esta secuencia de aminoácidos no humana a menudo puede denominarse una secuencia de "importación" es típicamente tomada de un dominio de anticuerpo de "importación", particularmente un dominio variable. En general, un anticuerpo humanizado incluye al menos las CDRs o HVLs de un anticuerpo no humano, insertado entre los FRs de un dominio variable de cadena liviana o cadena pesada. La presente invención describe anticuerpos anti-IL-36R humanizados específicos que contienen CDRs obtenidas de anticuerpos monoclonales de ratón o CDRs humanizadas insertadas entre los FRs de los dominios variables de cadena liviana y pesada de secuencia de línea germinal humana. Se entenderá que ciertos residuos de FR de ratón pueden ser importantes para la función de los anticuerpos humanizados y por ello ciertos residuo de dominio variables de cadena liviana y pesada de la secuencia de línea germinal humana son modificados para que sean iguale a aquellos de la secuencia correspondiente de ratón.

En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R humanizado comprende sustancialmente todo de al menos uno, y típicamente dos, dominios variables (tales como contenidos, por ejemplo, en los fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, y Fv) en los que todas, o sustancialmente todas, las CDRs corresponden a aquellas de una inmunoglobulina no humana, y específicamente en la presente, todas las CDRs son secuencias de ratón o humanizadas según lo detallado en la presente más abajo y todos, o sustancialmente todos, los FRs son aquellos de una secuencia de línea germinal o consensual de inmunoglobulina humana. En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R humanizado también incluye al menos una porción de una región Fe de inmunoglobulina, típicamente aquella de una inmunoglobulina humana. En forma ordinaria, el anticuerpo contendrá tanto la cadena liviana así como al menos el dominio variable de una cadena pesada. El anticuerpo también puede incluir una o más de las regiones bisagra Cm, CH2, CH3, y/o CH4 de la cadena pesada, según corresponda.

Un anticuerpo anti-IL-36R humanizado puede seleccionarse de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA y IgE, y cualquier isotipo, incluyendo IgGi, lgG2, lgG3, lgG4, IgAi y lgA2. Por ejemplo, el dominio constante puede ser un dominio constante de fijación al complemento donde se desea que el anticuerpo humanizado exhiba actividad citotóxica, y el isotipo es típicamente IgGi. Donde dicha actividad citotóxica no es deseable, el dominio constante puede ser de otro isotipo, por ejemplo, lgG2. Un anticuerpo anti-IL-36R humanizado alternativo puede comprender secuencias de más de una clase o ¡sotipo de ¡nmunoglobulina, y seleccionar dominios constantes particulares para optimizar las funciones efectoras deseadas está dentro de la experiencia común en el arte. En realizaciones específicas, la presente invención proporciona anticuerpos que son anticuerpos lgG1 y más particularmente, son anticuerpos lgG1 en los que hay un knock-out de funciones efectoras.

Los FRs y CDRs, o HVLs, de un anticuerpo anti-IL-36R humanizado no necesitan corresponderse precisamente con las secuencias progenitoras. Por ejemplo, uno o más residuos en la CDR de importación, o HVL, o la secuencia de FR de línea germinal o consensual puede alterarse (por ejemplo, mutagenizarse) por sustitución, inserción o eliminación de manera tal que el residuo de aminoácidos resultante ya no es idéntico al residuo original en la posición correspondiente en la secuencia progenitora pero el anticuerpo ¡n embargo retiene la función de unión a IL-36R. Dicha alteración típicamente no será extensiva y serán alteraciones conservadoras. Habitualmente, al menos el 75% de los residuos de anticuerpo humanizado corresponderá a aquello de las secuencias CDR de importación y FR de línea germinal o consensual progenitora, más a menudo al menos el 90%, y mucho más frecuentemente mayor que el 95%, o mayor que el 98% o mayor que el 99%.

Los residuos de ¡nmunoglobulina que afectan la ¡nterfaz entre las regiones variables de cadena liviana y pesada ("la ¡nterfaz VL-VH") son aquellos que afectan la proximidad u orientación de las dos cadenas respecto una de la otra. Ciertos residuos que pueden estar involucrados en las interacciones intercadena incluyen residuos VL 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96, y 98 y residuos VH 35, 37, 39, 45, 47, 91 , 93, 95, 100, y 103 (utilizando el sistema de numeración expuesto en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987)). La Patente Estadounidense N° 6.407.213 también debate que los residuos tales como residuos V|_ 43 y 85, y residuos VH 43 y 60 también pueden estar involucrados en esta interacción. Mientras estos residuos están indicados para IgG humana solamente, los mismos son aplicables en todas las especies. Los residuos de anticuerpos importantes que se espera razonablemente que estén involucrados en las interacciones intercadena se seleccionan para la sustitución en la secuencia consensual.

Los términos "secuencia consensual" y "anticuerpo consensual" se refieren a una secuencia de aminoácidos que comprende el residuo de aminoácido que aparece más frecuentemente en cada ubicación en todas las inmunoglobulinas de cualquier clase particular, isotipo, o estructura de subunidad, por ejemplo, un dominio variable de inmunoglobulina humana. La secuencia consensual puede basarse en inmunoglobulinas de una especie particular o de muchas especies. Una secuencia, estructura, o anticuerpo "consensual" se entiende que contempla una secuencia humana consensual según lo que se describe en ciertas realizaciones, y se refiere a una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos que aparecen más frecuentemente en cada ubicación en todas las inmunoglobulinas humanas de cualquier clase particular, isotipo, o estructura de subunidad. De ese modo, la secuencia consensual contiene una secuencia de aminoácidos que tiene en cada posición un aminoácido que está presente en una o más inmunoglobulinas conocidas, pero que no puede duplicar exactamente la secuencia de aminoácidos completa de cualquier inmunoglobulina simple. La secuencia consensual de región variable no se obtiene de cualquier anticuerpo o inmunoglobulina producidos naturalmente. Kabat et al., 1991 , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5o edición Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., y variantes del mismo.

Las secuencias de línea germinal humana se encuentran naturalmente en la población humana. Una combinación de aquello genes de línea germinal genera diversidad de anticuerpos. Las secuencias de anticuerpos de línea germinal para la cadena liviana del anticuerpo provienen de genes v y genes j kappa o lambda de línea germinal humana conservada. En forma similar las secuencias de cadena pesada provienen de genes v, d y j de línea germinal (LeFranc, M-P, y LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001).

Tal como se utiliza en la presente, "vahante", "variante anti-IL-36R", " variante anti-IL-36R humanizada", o "anti-IL-36R humanizado variante" cada uno se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R humanizado que tiene al menos una CDR murina variable de cadena liviana. Las variantes incluyen aquellas que tienen uno o más cambio de aminoácidos en uno o ambos dominios variables de cadena liviana o cadena pesada, siempre que el cambio de aminoácido no deteriore sustancialmente la unión del anticuerpo al IL-36R.

Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido identificado y separado de un componente de su medio natural. Los componentes contaminantes del medio natural del anticuerpo son aquellos materiales que pueden interferir con los usos terapéuticos y diagnósticos del anticuerpo, y pueden ser enzimas, hormonas, u otros solutos proteináceos o no proteináceos. En un aspecto, el anticuerpo estará purificado hasta al menos más del 95% de aislamiento en peso del anticuerpo.

Un anticuerpo aislado incluye un anticuerpo in situ dentro de células recombinantes en las que se produce, debido a que al menos un componente del medio natural del anticuerpo no estará presente. Sin embargo comúnmente, un anticuerpo aislado será preparado en al menos un paso de purificación en el que el material celular recombinante es eliminado.

El término "desempeño del anticuerpo" se refiere a factores que contribuyen con el reconocimiento del anticuerpo del antígeno o la efectividad de un anticuerpo in vivo. Los cambios en la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo pueden afectar propiedades del anticuerpo tales como plegado, y pueden influenciar factores físicos tales como la tasa inicial de unión del anticuerpo al antígeno (ka), constante de disociación del anticuerpo del antígeno (kd), constante de afinidad del anticuerpo para el antígeno (Kd), conformación del anticuerpo, estabilidad de proteína, y vida útil del anticuerpo.

El término "epítopo etiquetado" cuando se utiliza en la presente, se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R fusionado a una "etiqueta de epítopo". Una "etiqueta de epítopo" es un polipéptido que tiene un número suficiente de aminoácidos para proporcionar un epítopo para la producción de anticuerpos, aún es diseñado de manera tal que no interfiere con la actividad deseada del anticuerpo anti-IL-36R humanizado. La etiqueta de epítopo es habitualmente suficientemente única de manera tal que un anticuerpo elevado contra la etiqueta de epítopo no reacciona en forma sustancialmente cruzada con otros epítopos.

Los polipéptidos con etiqueta apropiada en general contienen al menos 6 residuos de aminoácidos y habitualmente contienen aproximadamente 8 a 50 residuos de aminoácidos, o aproximadamente 9 a 30 residuos. Los ejemplos de etiqueta de epítopos y el anticuerpo que se une al epítopo incluyen polipéptido con etiqueta flu HA y su anticuerpo 12CA5 (Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165; etiqueta c-myc y 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 y 9E10 anticuerpos del mismo (Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616; y etiqueta D (gD) de glicoproteína del virus simple Herpes y su anticuerpo (Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553). En ciertas realizaciones, la etiqueta de epítopo es un "epítopo de unión al receptor salvaje". Tal como se utiliza en la presente, el término "epítopo de unión al receptor salvaje " se refiere a un epítopo de la región Fe región de una molécula IgG (tal como IgGL lgG2, lgG3, o lgG4) que es responsable de incrementar la vida media sérica in vivo de la molécula IgG.

En algunas realizaciones, los anticuerpos de la presente invención pueden conjugarse con un agente citotóxico. Esta es cualquier sustancia que inhibe o previene la función de células y/o provoca la destrucción de las células. El término pretende incluir isótopos radioactivos (tales como I131, I125, Y90, y Re186), agentes quimioterapéuticos, y toxinas tales como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, micótico, vegetal, o animal, y fragmentes de las mismas. Dichos agentes citotóxicos pueden acoplarse a anticuerpos humanizados de la presente invención utilizando procedimientos estándar, y se utilizan, por ejemplo, para tratar un paciente al que se le indica la terapia con el anticuerpo.

Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico de utilidad en el tratamiento del cáncer. Existen numerosos ejemplos de agentes quimioterapéuticos que podrían conjugarse con los anticuerpos terapéuticos de la presente invención. Los ejemplos de dichos agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes tal como tiotepa y ciclosfosfamidea; ulfonatos de alquilo tales como busulfan, improsulfan, y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa, y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenefosforamida, trietilenetiofosforamida, y trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona); camptotecina (incluyendo el topotecan análogo sintético); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (en particular criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; auristatinas (incluyendo los analosos monometil-auristatina E y monometil-auristatina F); duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW-2189 y CBI-TMI); eleuterobina; pancratistatina; sarcodictina; espongistatina; mostazas nitrogenadas tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, hidrocloruro del óxido de mecloretamina, melfalán, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos tales como los antibióticos tipo enodiino (p. ej. caliqueamicina, en especial caliqueamicina gammal l y caliqueamicina phiM , véase, p. ej., Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33:183186; dinemicina, incluyendo dinemicina A; bisfosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; así como cromóforo neocarzinostatina y cromóforos antibióticos de tipo cromoproteínas enodiino), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubiciná, 6-diazo-5oxo-L-norleucina, doxorrubicina (Adriamycin™) (incluyendo morfolinodoxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenérgicos tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; restablecedor de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; glicósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicuona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinán; lonidamina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofirán; espirogermanio; ácido tenuazónico; triazicuona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (en especial, toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, p. ej. paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) y doxetaxel (TAXOTERE®, Rhóne-Poulenc Rorer, Antony, Francia); clorambucilo; gemcitabina (Gemzar™); 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; platino; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (Navelbine™); novantrona; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11 ; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; capecitabina; y sales, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores, farmacéuticamente aceptables. También están incluidos en esta definición los agentes antihormonales que actúan para regular o inhibir la acción hormonal en tumores, tales como antiestrógenos y moduladores selectivos del receptor de estrogenos (SERM), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo Nolvadex™), raloxifeno, droloxifeno, 4hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, y toremifeno (Fareston™); inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, la cual regula la producción de estrogenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol (Megace™), exemestano, formestano, fadrozol, vorozol (Rivisor™), letrozol (Femara™), y anastrozol (Arimidex™); y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, y goserelina; y sales ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores, farmacéuticamente aceptables. Cualquiera uno o más de estos agentes pueden conjugarse con los anticuerpos humanizados de la presente invención para proporcionar un agente terapéutico útil para el tratamiento de diversos trastornos.

Los anticuerpos también pueden conjugarse con profármacos. Un "profármaco" es un precursor o forma derivada de una sustancia farmacéuticamente activa que es menos citotóxica para la célula tumoral en comparación con el profármaco progenitor y es capaz de ser activada enzimáticamente o convertirse en la forma más activa. Véase, por ejemplo, Wilman, 1986, "Prodrugs ¡n Cáncer Chemotherapy", ln Biochemical Society Transactions, 14, páginas 375-382, 615th Meeting Belfast y Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), páginas 247-267, Human Press. Los profármacos útiles incluyen, pero no se limitan a, profármacos que contienen fosfatos, profármacos que contienen tiofosfatos, profármacos que contienen sulfatosm, profármacos que contienen péptidos, profármaco modificados con aminoácidos D, profármacos glicosilados, profármacos que contienen ß-lactamo, profármacos que contienen fenoxiacetamida opcionalmente sustituido, y profármacos que contienen fenilacetamida opcionalmente sustituido, 5-fluorocitosina y otros profármacos de 5-fluorouridina que pueden convertirse en el profármaco libre citotóxico más activo. Los ejemplos de fármacos citotóxicos que pueden derivarse en una forma de profármaco incluyen, pero no se limitan a, aquellos agentes quimioterapéuticos descritos más arriba.

Para fines de diagnóstico así como monitoreo terapéutico, los anticuerpos de la invención también pueden conjugarse con una etiqueta, una etiqueta ola o una etiqueta y un segundo agente adicional (profármaco, agentes quimioterapéuticos y similares). Una etiqueta, según lo distinguido de los otros segundos agentes se refiere a un agente que es un compuesto o composición detectable y puede conjugarse directamente o indirectamente con un anticuerpo humanizado de la presente invención. La etiqueta puede ser detectable por sí misma (por ejemplo, etiquetas de radioisótopos o etiquetas fluorescentes) o, en el caso de una etiqueta enzimática, puede catalizar la alteración química de un compuesto o composición de sustrato que es detectable. El anticuerpo anti-IL-36R humanizado etiquetado puede prepararse y utilizarse en diversas aplicaciones incluyendo diagnóstico in vitro y ¡n vivo.

Los anticuerpos de la presente invención pueden formularse como parte de una preparación liposomal a fin de afectar la administración de los mismos in vivo. Un "liposoma" es una vesícula pequeña compuesta de diversos tipos de lípidos, fosfolípidos, y/o tensioactivo. Los liposomas son útiles para la administración a un mamífero de un compuesto o formulación, tal como un anticuerpo anti-IL-36R humanizado divulgado en la presente, opcionalmente, acoplado a o en combinación con uno o más agentes farmacéuticamente activos y/o etiquetas. Los componentes del liposoma están comúnmente dispuesto en formación de bicapa, similar a la disposición de lípidos de membranas biológicas. Ciertos aspectos de la presente invención relacionados con los ácidos nucleicos aislados que codifican uno o más dominios de los anticuerpos humanizados de la presente invención. Una molécula de ácido nucleico "aislada" es una molécula de ácido nucleico que es identificada y separada de al menos una molécula de ácido nucleico contaminante con la que está ordinariamente asociada en la fuente natural del ácido nucleico del anticuerpo. Una molécula de ácido nucleico aislada se distingue de la molécula de ácido nucleico tal como existe en las células naturales.

En diversos aspectos de la presente invención uno o más dominios de los anticuerpos humanizados se expresará en forma recombinante. Dicha expresión recombinante puede emplear una o más secuencias de control, es decir, secuencias de polinucleótidos necesarias para la expresión de una secuencia codificante operativamente unida en un organismo huésped particular. Las secuencias de control apropiadas para su uso en células procarióticas incluyen, por ejemplo, promotor, operador, y secuencias de sitio de unión a ribosomas. Las secuencias de control eucarióticas incluyen, pero no se limitan a, promotoras, señales poliadenilación, y potenciadores. Estas secuencias de control pueden utilizarse para la expresión y producción de anticuerpo anti-IL-36R humanizado en células huésped procarióticas y eucarióticas.

La secuencia de ácidos nucleicos está "operativamente unida" cuando se coloca en una relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, una presecuencia de ácido nucleico o líder secretor está operativamente unido a un ácido nucleico que codifica un polipéptido si el mismo está expresado como una preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o potenciador está operativamente unido a una secuencia codificante si el mismo afecta la transcripción de la secuencia; o un sitio de unión a ribosomas está operativamente unido a una secuencia codificante su está colocado para facilitar la traducción. Generalmente, "operativamente unido" significa que las secuencias de ADN que están unidas son contiguas, y, en el caso de un líder secretor, contiguo y en marco de lectura. Sin embargo, los potenciadores están opcionalmente contiguos. La unión puede lograrse por ligación en sitios de restricción convenientes. Si dichos sitios no existen, pueden utilizarse adaptadores o conectores de oligonucleótidos sintéticos.

Tal como se utiliza en la presente, las expresiones "célula", "línea celular", y "cultivo celular" se utilizan en forma intercambiable y todas dichas designaciones incluyen la progenie de las mismas. De ese modo, los "transformantes" y "célula transformadas" incluyen la célula y cultivos del sujeto primarias obtenidas del mismos sin importar el número de trasferencias.

El término "mamífero" para los fines del tratamiento se refiere a cualquier animal clasificado como mamífero, incluyendo seres humanos, domesticados y animales de granja, y animales de zoológico, de deportes, o mascotas, tales como perros, caballos, gatos, vacas, y similares. Preferentemente, el mamífero es el ser humano.

Un "trastorno", tal como se utiliza en la presente, es cualquier afección que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo anti-IL-36R humanizado descrito en la presente. Esto incluye trastornos o enfermedades crónicas y agudas incluyendo aquellas afecciones patológicas que predisponen al mamífero al trastorno en cuestión. Los ejemplos o trastornos no restrictivos que deben ser tratados en la presente incluyen trastornos inflamatorios, angiogénicos, autoimmunes y inmunológicos, trastornos respiratorios, cáncer, malignidades hematológicas, tumores benigno y malignos, leucemias y malignidade linfoides. Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen la afección fisiológica en mamíferos que típicamente se caracteriza por el crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, blastema, sarcoma, y leucemia.

Un trastorno asociado a IL-36R incluye enfermedades y trastornos del sistema inmune, tales como trastornos autoinmunes y trastorno inflamatorios. Dicha afecciones incluyen, pero no se limitan a, artritis reumatoidea (RA), lupus eritomatoso sistémico (SLE), esclerodermia, síndrome de Sjogren, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis psoriásica, enfermedad inflamatoria de los intestinos (por ejemplo, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn), inflamación pulmonar, asma, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) trastornos inflamatorio epiteliales, fibrosis y espondilitis anquilosante.

El término "infusión intravenosa" se refiere a la introducción de un agente en la vena de un paciente animal o humano durante un período de tiempo mayor que aproximadamente 15 minutos, generalmente entre aproximadamente 30 a 90 minutos.

El término "bolo intravenoso" o "pulso intravenoso" se refiere a la administración farmacológica en una vena de un animal o ser humano de manera tal que el cuerpo recibe el fármaco en aproximadamente 15 minutos o menos, generalmente 5 minutos o menos.

El término "administración subcutánea" se refiere a la introducción de un agente bajo la piel de un paciente animal o humano, preferible dentro de un bolsillo entre la piel y el tejido subyacente, mediante la administración relativamente lenta, sostenida desde un receptáculo de fármaco. Perforar o extraer la piel hacia arriba lejos del tejido subyacente puede crear el bolsillo.

El término "infusión subcutánea" a la introducción de un agente bajo la piel de un paciente animal o humano, preferible dentro de un bolsillo entre la piel y el tejido subyacente, mediante la administración relativamente lenta, sostenida desde un receptáculo de fármaco durante un período de tiempo incluyendo, pero sin limitarse a, 30 minutos o menos, o 90 minutos o menos. Opcionalmente, la infusión puede realizarse por implante subcutáneo de una bomba de administración de fármaco implantada debajo de la piel del paciente animal o humano, en donde la bomba administra una cantidad predeterminada de fármaco durante un período predeterminado de tiempo, tal como 30 minutos, 90 minutos, o un período de tiempo que dura la longitud del régimen de tratamiento.

El término "bolo subcutáneo" se refiere a la administración del fármaco debajo de la piel un paciente animal o humano, donde la administración de fármaco en bolo es menor que aproximadamente 15 minutos; en otro aspecto, menor que 5 minutos, y en aún otro aspecto, menor que 60 segundos. En aún otro aspecto, la administración está dentro de un bolillo entre la piel y el tejido subyacente, donde el bolsillo puede cerrarse perforando o extrayendo la piel hacia arriba y lejos del tejido subyacente.

El término "cantidad terapéuticamente efectiva" se utiliza para referirse a una cantidad de un agente activo que alivia o reduce uno o más de los síntomas del trastorno que está siendo tratado. En otro aspecto, la cantidad terapéuticamente efectiva se refiere a una concentración sérica blanco que ha demostrado ser efectiva en, por ejemplo, hacer más lento el avance de la enfermedad. La eficacia puede medirse en formas convencionales, dependiendo de la afección a ser tratada.

Los términos "tratamiento" y "terapia" y similares, tal como se utiliza en la presente, quieren incluir medidas terapéuticas así como profilácticas, o supresoras para una enfermedad o trastorno que llevan a cualquier efecto beneficioso o clínicamente deseable, incluyendo pero sin limitarse a reducción o alivio de uno o más síntomas, regresión, reducción de velocidad o cese del avance de la enfermedad o trastorno. De ese modo, por ejemplo, el término tratamiento incluye la administración de un agente previo a o después de la aparición de un síntoma de una enfermedad o trastorno previniendo o eliminando de ese modo uno o más signos de la enfermedad o trastorno. Como otro ejemplo, el término incluye la administración de un agente después de la manifestación clínica de la enfermedad para combatir los síntomas de la enfermedad. Además, la administración de un agente después de la aparición y después de que los síntomas clínicos se han desarrollado donde la administración afecta los parámetro clínicos de la enfermedad o trastorno, tal como el grado de lesión de tejido o la cantidad o medida de metástasis, si el tratamiento lleva o no a la reducción de la enfermedad, comprende "tratamiento" o "terapia" tal como se utiliza en la presente. Además, siempre que las composiciones de la invención solas o en combinación con otro agente terapéutico alivian o reducen al menos un síntoma de un trastorno que es tratado en comparación con aquel síntoma en ausencia del uso de la composición del anticuerpo anti-IL-36R humanizado, el resultado debe considerarse un tratamiento efectivo del trastorno subyacente sin importar si todos los síntomas del trastorno son reducidos o no.

El término "prospecto" se utiliza para referirse a las instrucciones incluidas en los envases comerciales de los productos terapéuticos, que contienen información aproximadamente las indicaciones, uso, administración, contraindicaciones y/o advertencias con respecto al uso de dichos productos terapéuticos.

Anticuerpos En un aspecto, se describen y divulgan en la presente anticuerpos anti-IL-36R, en particular anticuerpos anti-IL-36R humanizados, y composiciones y artículos de fabricación que comprenden uno o más anticuerpo anti-IL-36R, en particular uno o más anticuerpo anti-IL-36R humanizado de la presente invención. También se describen agentes de unión que incluyen un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo anti-IL-36, en particular un anticuerpo anti-IL-36R humanizado.

Más abajo se describen regiones variables y CDRs de anticuerpos representativos de la presente invención: Secuencias de anticuerpos anti-IL-36R de ratón Secuencias de aminoácidos de región variable de cadena liviana (VK) Secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada (VH) > Proteína 33D10B12vH (anticuerpo 33D10) QVQLQQSGTELLKPGASVKLSC ASGNTVTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEILPSTGR TNYNENFKGKAMLTVDKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCTIVYFGNPWFAYWGQGTLV TVSA (SEC ID NO: 11) Secuencias de aminoácidos de cadena liviana CDR-1 (L-CDR1) >33D10G1 L-CDR1 TASSSVSSSYLH (SEC ID NO: 21 ) >172C8B12 L-CDR1 LASQTIGTWLA (SEC ID NO: 22) >67E7E8 L-CDR1 LASQTIGT LG (SEC ID NO: 23) >78C8D1 L-CDR1 RSSQNIVHSNGNTYLQ (SEC ID NO: 24) >81A1 D1 L-CDR1 RASQDIYKYLN (SEC ID NO: 25) >81 B4E11 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >73C5C10 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEC ID NO: 27) >73F6F8 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEC ID NO: 27) >76E10E8 L-CDR1 KASQNVGRAVA (SEC ID NO: 28) >89A12B8 L-CDR1 LASQTIGTWLG (SEC ID NO: 29) Secuencias de aminoácidos de cadena liviana CDR-2 (L-CDR2) >33D10B12 L-CDR2 STSNLAS (SEC ID NO: 30) >172C8B12 L-CDR2 AATSLAD ( SEC ID NO: 31) >67E7E8 L-CDR2 RSTTLAD (SEC ID NO: 32) >78C8D1 L-CDR2 KVSNRFS (SEC ID NO: 33) >81A1 D1 L-CDR2 YTSGLHS (SEC ID NO: 34) >81 B4E1 L-CDR2 RTSNLAS (SEC ID NO: 35) >73C5C10 L-CDR2 SASYRHS (SEC ID NO: 36) >73F6F8 L-CDR2 SASYRHS (SEC ID NO: 36) >76E10E8 L-CDR2 SASNRYT (SEC ID NO: 37) >89A12B8 L-CDR2 RATSLAD (SEC ID NO: 38) Secuencias de aminoácidos de cadena liviana CDR-3 (L-CDR3) >33D10B12 L-CDR3 HQHHRSPVT (SEC ID NO: 39) >172C8B12 L-CDR3 QQVYTTPLT (SEC ID NO: 40) >67E7E8 L-CDR3 QQLYSAPYT (SEC ID NO: 41) >78C8D1 L-CDR3 FQGSHVPFT (SEC ID NO: 42) >81A1 D1 L-CDR3 QQDSKFPWT (SEC ID NO: 43) >81 B4E11 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >73C5C10 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEC ID NO: 45) >73F6F8 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEC ID NO: 45) >76E10E8 L-CDR3 QQYSSYPLT (SEC ID NO: 46) >89A12B8 L-CDR3 QQLYSGPYT (SEC ID NO: 47) Secuencias de aminoácidos de cadena pesada CDR-1 (H-CDR1) >33D10B12 H-CDR1 GNTVTSYWMH (SEC ID NO: 48) >172C8B12 H-CDR1 GYTFTDNYMN (SEC ID NO: 49) >67E7E8 H-CDR1 GFNIKDDYIH (SEC ID NO: 50) >78C8D1 H-CDR1 GFSLTKFGVH (SEC ID NO: 51) >81A1 D1 H-CDR1 GFSLSSYEIN (SEC ID NO: 52) >81 B4E11 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >73C5C10 H-CDR1 GFSLTNYAVH (SEC ID NO: 54) >73F6F8 H-CDR1 GFSLTNYAVH (SEC ID NO: 54) >76E10E8 H-CDR1 GFSLTNYGVH (SEC ID NO: 55) >89A12B8 H-CDR1 GFNIKDDYIH (SEC ID NO: 56) Secuencias de aminoácidos de cadena pesada CDR-2 (H-CDR2) >33D10B12 H-CDR2 EILPSTGRTNYNENFKG (SEC ID NO: 57) >172C8B12 H-CDR2 RVNPSNGDTKYNQNFKG (SEC ID NO: 58) >67E7E8 H-CDR2 RIDPANGNTKYAPKFQD (SEC ID NO: 59) >78C8D1 H-CDR2 VIWAGGPTNYNSALMS (SEC ID NO: 60) >81A1 D1 H-CDR2 VIWTGITTNYNSALIS (SEC ID NO: 61) >81 B4E11 H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEC ID NO: 62) >73C5C10 H-CDR2 VIWSDGSTDFNAPFKS (SEC ID NO: 63) >73F6F8 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) >76E10E8 H-CDR2 VIWPVGSTNYNSALMS (SEC ID NO: 65) >89A12B8 H-CDR2 RIDPANGNTKYDPRFQD (SEC ID NO: 66) Secuencias de aminoácidos de cadena pesada CDR-3 (H-CDR3) >33D10B12 H-CDR3 VYFGNPWFAY (SEC ID NO: 67) >172C8B12 H-CDR3 TKNFYSSYSYDDAMDY (SEC ID NO: 68) >67E7E8 H-CDR3 SFPNNYYSYDDAFAY (SEC ID NO: 69) >78C8D1 H-CDR3 QIYYSTLVDY (SEC ID NO: 70) >81A1 D1 H-CDR3 GTGTG F YYAM D Y (SEC ID NO: 71) >81 B4E1 1 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >73C5C10 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73F6F8 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >76E10E8 H-CDR3 MDWDDFFDY (SEC ID NO: 74) >89A12B8 H-CDR3 SFPDNYYSYDDAFAY (SEC ID NO: 75) Secuencias CDR anti-IL-36R de ratón Secuencias de anticuerpo anti-IL-36R humanizado Las secuencias marco humanas se seleccionan para los candidatos de ratón en base a la homología marco, estructura CDR, residuos canónicos conservados, residuos de empaquetamiento de interfaz conservados y otros parámetros.

Más abajo se muestran regiones variables representativas obtenidas de anticuerpos 81 B4 y 73C5.

Secuencias de aminoácidos de región variable de cadena liviana (VK) > Proteína 81 B4vK32_3 vK EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSTLASGIP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIK (SEC ID NO: 76) > Proteína 81 B4vK32_105 vK EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSILASGVP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCHQFHRSPLTFGQGT LEIK (SEC ID NO: 77) > Proteína 73C5vK39_2 vK EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP DRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAEYFCQQYSRYPLTFGQGTKLEIK (SEC ID NO: 84) > Proteína 73C5vK39_7 vK EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP DRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYSRYPLTFGQGTKLEIK (SEC ID NO: 85) > Proteína 73C5vK39_15 vK EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP ARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAEYYCQQYSRYPLTFGQGTKLEIK (SEC ID NO: 86) Secuencias de aminoácidos de región variable de cadena pesada (VH) Las secuencias CDR de regiones variables obtenidas de anticuerpos 81 B4 y 73C5 que se muestran más arriba se describen más abajo. Secuencias de aminoácidos L-CDR1 >81 B4vK32_3 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_105 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_1 16 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_127 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_138 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81B4vK32_140 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_141 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >81 B4vK32_147 L-CDR1 TASSSVSSSYFH (SEC ID NO: 26) >73C5vK39_2 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEC ID NO: 27) >73C5vK39_7 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEC ID NO: 27) >73C5vK39_15 L-CDR1 KASQDVGTNVL (SEC ID NO: 27) Secuencias de aminoácidos L-CDR2 >81 B4vK32_3 L-CDR2 (SEC ID 102) RTSTLAS >81 B4vK32_105 L-CDR2 (SEC ID 103) RTSILAS >81B4vK32_116 L-CDR2 (SEC ID 104) RTSRLAS >81B4vK32_127 L-CDR2 (SEC ID 104) RTSRLAS >81 B4vK32_ 38 L-CDR2 (SEC ID 104) RTSRLAS >81B4vK32_140 L-CDR2 (SEC ID 105) RTSQLAS >81B4vK32_141 L-CDR2 (SEC ID 106) RTSKLAS >81B4vK32_147 L-CDR2 (SEC ID 140) RTSHLAS >73C5vK39_2 L-CDR2 SASYRHS (SEC ID NO: 36) >73C5vK39_7 L-CDR2 SASYRHS (SEC ID NO: 36) >73C5vK39_ 5 L-CDR2 SASYRHS (SEC ID NO: 36) Secuencias de aminoácidos L-CDR3 >81B4vK32_3 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81B4vK32_105 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81B4vK32_116 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81B4vK32_127 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81 B4vK32_138 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81 B4vK32_140 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81 B4vK32_141 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >81 B4vK32_147 L-CDR3 HQFHRSPLT (SEC ID NO: 44) >73C5vK39_2 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEC ID NO: 45) >73C5vK39_7 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEC ID NO: 45) >73C5vK39_15 L-CDR3 QQYSRYPLT (SEC ID NO: 45) Secuencias de aminoácidos H-CDR1 >81B4vH33_49 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81B4vH33_85T H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81B4vH33_90 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81B4vH33_93 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81 B4vH50_22 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81 B4vH50_30 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81 B4vH51_13 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81 B4vH51_15 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >81 B4vH52_83 H-CDR1 GYSFTSSWIH (SEC ID NO: 53) >73C5vH46_4 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) >73C5vH46_19 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) >73C5vH46_40 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) >73C5vH47_65 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) >73C5vH47_77 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) >73C5vH58_91 H-CDR1 GFSLTDYAVH (SEC ID NO: 107) Secuencias de aminoácidos H-CDR2 >81B4vH33 49 H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEC ID NO: 62) >81 B4vH33_85T H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEC ID NO: 62) >81 B4vH33_90 H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEC ID NO: 62) >81 B4vH33_93 H-CDR2 EINPGNVRTNYNENF (SEC ID NO: 62) >81 B4vH50_22 H-CDR2 EILPGWRTNYNENF (SEC ID NO: 108) >81 B4vH50_30 H-CDR2 EI PGAVRTNY ENF (SEC ID NO: 109) >81 B4vH51_13 H-CDR2 EINPGLVRTNYNENF (SEC ID NO: 110) >81 B4vH51_15 H-CDR2 EINPGAVRTNYNENF (SEC ID NO: 109) >81 B4vH52_83 H-CDR2 EINPGSVRTNYNENF (SEC ID NO: 11 1) >73C5vH46_4 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) >73C5vH46_19 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) >73C5vH46_40 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) >73C5vH47_65 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) >73C5vH47_77 H-CDR2 VIWSDGSTDFNAPFKS (SEC ID NO: 63) >73C5vH58_91 H-CDR2 VIWSDGSTDYNAPFKS (SEC ID NO: 64) Secuencias de aminoácidos H-CDR3 >81B4vH33_49 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81B4vH33_85T H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81B4vH33_90 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81B4vH33_93 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81B4vH50_22 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81 B4vH50_30 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81 B4vH51_13 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81 B4vH51_15 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >81 B4vH52_83 H-CDR3 VFYGEPYFPY (SEC ID NO: 72) >73C5vH46_4 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73C5vH46_19 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73C5vH46_40 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73C5vH47_65 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73C5vH47_77 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) >73C5vH58_91 H-CDR3 KGGYSGSWFAY (SEC ID NO: 73) En un aspecto, una región variable de la presente invención está unida a una región constante. Por ejemplo, una región variable de la presente invención está unida a una región constante que se muestra más abajo para formar una cadena pesada o una cadena liviana de un anticuerpo.

Región constante de cadena pesada unida corriente abaio de una región pesada variable humanizada: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSNA TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 112) Región constante de cadena liviana unida corriente abaio de una región liviana variable humanizada: RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTE Más abajo se muestran secuencias de cadena liviana y cadena pesada representativas de la presente invención (regiones variables obtenidas de anticuerpos 81 B4 y 73C5 unidas a regiones constantes).

Secuencias de aminoácidos de cadena liviana > Cadena liviana 81 B4vK32_3 EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSTLASGIP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLS KAD YE KH KVYAC EVTH QG LSS PVTKS FN RG EC (SEC ID NO: 114) > Cadena liviana 81 B4vK32_ 05 EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSILASGVP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 115) > Cadena liviana 81 B4vK32_116 EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLWIYRTSRLASGV PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEI RTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 116) > Cadena liviana 81 B4vK32 127 EIVLTQSPGTLSLSPGERATMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSRLASGV PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 117) > Cadena liviana 81 B4vK32_138 QIVLTQSPGTLSLSPGERATMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLWIYRTSRLASG VPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGAGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 118) > Cadena liviana 81 B4vK32_140 QIVLTQSPGTLSLSPGERVTMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSQLASGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 119) > Cadena liviana 8 B4vK32_141 QIVLTQSPGTLSLSPGERATMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSKLASGV PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 120) > Cadena liviana 81 B4vK32 147 EIVLTQSPGTLSLSPGERATMSCTASSSVSSSYFHWYQQKPGQAPRLLIYRTSHLASGIP GRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAAVYYCHQFHRSPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 121) > Cadena liviana 73C5vK39_2 EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP DRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAEYFCQQYSRYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 122) > Cadena liviana 73C5vK39_7 EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP DRFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYSRYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 123) > Cadena liviana 73C5vK39_15 EIVMTQSPATLSVSPGVRATLSCKASQDVGTNVLWYQQKPGQAPRPLIYSASYRHSGIP ARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAEYYCQQYSRYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVADNLQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC ID NO: 124) Secuencias de aminoácidos de cadena pesada > Cadena pesada 81 B4vH33_49 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQAPGQGLEWIGEINPGNVRT NYNENFRNKATMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEC ID NO: 125) > Cadena pesada 81 B4vH33_85T QVQLVQSGAEVKKPGASV VSCKASGYSFTSSWIHWVRQRPGQGLEWIGEINPGNVR TNYNENFRNRVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCTWFYGEPYFPYWGQGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA PEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 126) > Cadena pesada 81 B4vH33_90 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVKQAPGQGLEWMGEINPGNVR TNYNENFRNKVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCTWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 127) > Cadena pesada 81 B4vH33_93 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQRPGQGLEWMGEINPGNVR TNYNENFRNRATLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVD SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 128) > Cadena pesada 81 B4vH50_22 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQRPGQGLEWMGEILPGWR TNYNENFRNKVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCTWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 129) > Cadena pesada 8 B4vH50_30 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQRPGQGLEWIGEINPGAVRT NYNENFRNRVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCTWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPG (SEC ID NO: 130) > Cadena pesada 81 B4vH51_13 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSSWIHWVRQAPGQGLEWIGEINPGLVRT NYNENFRNKVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGG PSVFLFPPKPKDTLM I SRTPEVTCWVDVSH EDPEVKFN WYVDGVEVH NAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 131) > Cadena pesada 81 B4vH51_15 Q VQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG YS FTSS Wl HWVRQAPGQG LEWI GEI N PGAVRT NYNENFRNKVTMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 132) > Cadena pesada 81 B4vH52_83 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG YSFTSS Wl HWVRQAPGQG LEWI G El N PGSVRT NYNENFRNKATMTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAWFYGEPYFPYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKS RWQQG N VFSCS VM H EAL H H YTQ KS LS LS PG K (SEC ID NO: 133) > Cadena pesada 73C5vH46_4 QVQLQESGPGLVKPSETLSITCTVSGFSLTDYAVHWIRQPPGKGLEWIGVIWSDGSTDY NAPFKSRVTINKDTSKSQVSFKMSSVQAADTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNG EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQG NVFSCSVM H EALHNHYTQKSLSLSPG K (SEC ID NO: 134) " > Cadena pesada 73C5vH46_19 QVQLQESGPGLVKPSETLSITCTVSGFSLTDYAVHWIRQPPGKGLEWIGVIWSDGSTDY NAPFKSRVTISKDTSKNQVSLKMNSLTTDDTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT P REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 135) > Cadena pesada 73C5vH46_40 QVQLQESGPGLVKPSETLSITCTVSGFSLTDYAVHWIRQPPGKGLEWIGVIWSDGSTDY NAPFKSRVTISKDNSKSQVSLKMNSVTVADTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 136) > Cadena pesada 73C5vH47_65 QVQLQESGPGLVKPSETLSITCTVSGFSLTDYAVHWVRQPPGKGLEWIGVIWSDGSTD YNAPFKSRVTISKDTSKNQVSFKLSSVTVDDTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD RVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLV GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 137) > Cadena pesada 73C5vH47_77 QVQLQESGPGLVAPSETLSLTCTVSGFSLTDYAVHWIRQFPGKGLEWIGVIWSDGSTDF NAPFKSRVTISKDTSKNQVSFKLSSVTTDDTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSS STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYT LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 138) > Cadena pesada 73C5vH58_91 QVQLQESGPGLVKPSETLSITCTVSGFSLTDYAVHWIRQPPGKGLEWIGVIWSDGSTDY NAPFKSRVTISKDNSKSQVSFKMSSVTADDTAVYYCARKGGYSGSWFAYWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP EAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC ID NO: 139) Las CDRs detalladas más arriba se definen utilizando el sistema de numeración Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948).

En un aspecto, un anticuerpo de la presente invención comprende 3 CDRs de cadena liviana y 3 CDRs de cadena pesada, por ejemplo según lo expuesto más arriba.

En un aspecto, un anticuerpo de la presente invención comprende una cadena liviana y una región variable de cadena pesada según lo expuesto más arriba. En un aspecto, una región variable de cadena liviana de la invención se fusiona a una región constante de cadena liviana, por ejemplo una región constante kappa o lambda. En un aspecto, una región variable de cadena pesada de la invención se fusiona a una región constante de cadena pesada, por ejemplo IgA, IgD, IgE, IgG o IgM, en particular, IgG^ lgG2, lgG3 o lgG4.

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 15; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125 (Anticuerpo B1).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 15; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B2).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 15; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 127 (Anticuerpo B3).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 18; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125 (Anticuerpo B4).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B5).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 127 Anticuerpo B6).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C3).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 139 (Anticuerpo C2).

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R que comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 124; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C1) Más abajo se muestran anticuerpos representativos de la presente invención.

Tabla A.

ID NO: 127) Tabla B Los anticuerpos de la presente invención son útiles en métodos para el tratamiento de diversas enfermedades o trastornos, por ejemplo enfermedades inmunológicas, inflamatorias, autoinmunes y respiratorias en seres humanos. Por ejemplo, los anticuerpos de la presente invención son útiles en métodos para el tratamiento de psoriasis, artritis reumatoidea, enfermedad inflamatoria de los intestinos o artritis psoriásica. Por ejemplo, los anticuerpos de la presente invención son útiles en métodos para el tratamiento de trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD) o asma. Por ejemplo, los anticuerpos de la presente invención son útiles en métodos para el tratamiento de esclerodermia, pustulosis palmoplantar, psoriasis pustular generalizada, nefropatía diabética, lupus nefritis, esclerodermia, espondilitis anquilosante, deficiencia en la enfermedad autoinmune del antagonista del receptor IL-36 (DITRA), enfermedad autoinmune de deficiencia en el antagonista del receptor IL-1 (DIRA) o síndromes periódicos asociados a la criopirina (CAPS).

En algunos aspectos, el anticuerpo humanizado muestra actividad de bloqueo, por lo que reduce la unión del ligando IL-36 al receptor IL-36 en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55%, en al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90%, o en al menos 95%. La capacidad de un anticuerpo de bloquear la unión del ligando IL-36 al receptor IL-36 puede medirse utilizando ensayos de unión conocidos en la técnica. Alternativamente, la actividad de bloqueo de un anticuerpo puede medirse evaluando los efectos biológicos de IL-36, tal como la producción de IL-8, IL-6, y GM-CSF para determinar si la señalización mediada por el receptor IL-36 es inhibida.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R humanizado que tiene propiedades biofísicas favorables. En un aspecto, un anticuerpo anti-IL-36R humanizado de la presente invención está presente en al menos 90% en forma de monómero, o en al menos 92% en forma de monómero, o en al menos 95% en forma de monómero en un tampón. En otro aspecto, un anticuerpo ant¡-IL-36R humanizado de la presente invención permanece en al menos 90% en forma de monómero, o en al menos 92% en forma de monómero, o en al menos 95% en forma de monómero en un tampón durante un me o durante cuatro meses.

En un aspecto, un anticuerpo humanizado de la presente invención es Anticuerpo B1 , Anticuerpo B2, Anticuerpo B3, Anticuerpo B4, Anticuerpo B5, Anticuerpo B6, Anticuerpo C1 , Anticuerpo C2, o Anticuerpo C3. Por consiguiente, en una realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 115 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 125 (Anticuerpo B1). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 1 15 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B2). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 1 15 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 127 (Anticuerpo B3). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 118 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 125 (Anticuerpo B4). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 1 18 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B5). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 118 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 127 (Anticuerpo B6). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 124 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C1). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 123 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 139 (Anticuerpo C2). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención comprende la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 123 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C3).

En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 15 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO:125 (Anticuerpo B1). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 115 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B2). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 115 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 127 (Anticuerpo B3). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 118 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 125 (Anticuerpo B4). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 118 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 126 (Anticuerpo B5). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 118 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 127 (Anticuerpo B6). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 124 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C1). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 123 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 139 (Anticuerpo C2). En otra realización, un anticuerpo humanizado de la presente invención consiste en la secuencia de cadena liviana de SEC ID NO: 123 y la secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 138 (Anticuerpo C3).

En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-IL-36R humanizados, incluyendo los fragmentos de unión al antígeno de los mismos, tal como regiones variables de cadena liviana y pesada, comprenden una secuencia de aminoácidos de los residuos obtenidos del Anticuerpo B1 , Anticuerpo B2, Anticuerpo B3, Anticuerpo B4, Anticuerpo B5, Anticuerpo B6, Anticuerpo C1 , Anticuerpo C2, o Anticuerpo C3.

En otra realización, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que competitivamente se une a IL-36R humano con un anticuerpo de la presente invención, por ejemplo Anticuerpo B1 , Anticuerpo B2, Anticuerpo B3, Anticuerpo B4, Anticuerpo B5, Anticuerpo B6, Anticuerpo C1 , Anticuerpo C2, o Anticuerpo C3 descritos en la presente. La capacidad de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de unirse competitivamente a IL-36R puede medirse utilizando ensayos de unión competitiva conocido en el arte.

Los anticuerpos anti-IL-36R humanizados opcionalmente incluyen sustituciones específicas de aminoácidos en las regiones marco de línea germinal o consensual. La sustitución específica de los residuos de aminoácidos en estas posiciones marco pueden mejorar diversos aspectos del desempeño del anticuerpo incluyendo la afinidad de unión y/o estabilidad, respecto de aquel demostrado en anticuerpos humanizado formados por "intercambio directo" de CDRs o HVLs en las regiones marco de línea germinal humana.

En algunas realizaciones, la presente invención describe otros anticuerpos monoclonales con una región variable de cadena liviana que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NO: 1-10. En algunas realizaciones, la presente invención describe otros anticuerpos monoclonales con una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NO: 11-20. Colocar dichas CDRs en FRs de los dominios variables de cadena liviana y pesada consensúales humanas variable producirá anticuerpos humanizados útiles de la presente invención.

En particular, la presente invención proporciona anticuerpos monoclonales con las combinaciones de regiones variables de cadena liviana y variables de cadena pesada de SEC ID NO: 1/11 , 2/12, 3/13, 4/14, 5/15, 6/16, 7/17, 8/18, 9/19, 10/20. Dichas regiones variables pueden combinarse con regiones constantes humanas.

En algunas realizaciones, la presente invención describe otros anticuerpos humanizados con secuencias de región variable de cadena liviana que tienen la secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NO: 76-86. En algunas realizaciones, la presente invención describe otros anticuerpos humanizados con secuencias de región variable de cadena pesada que tienen la secuencia de aminoácidos expuesta en una cualquiera de SEC ID NO: 87-101. En particular, la presente invención proporciona anticuerpos monoclonales con las combinaciones de regiones variables de cadena liviana y variables de cadena pesada de SEC ID NO: 77/89, 80/88, 80/89, 77/87, 77/88, 80/87, 86/100, 85/101 , 85/100. Dichas regiones variables pueden combinarse con regiones constantes humanas.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:77 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de las secuencias de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:77 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:89 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:89. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado. En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:80 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:80 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:88 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:88. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:80 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:80 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:89 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:89. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado. En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:77 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:77 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:87 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:87. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:77 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:77 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs of SEC ID NO:88 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:88. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:80 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:80 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:87 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:87. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:86 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:86 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO: 100 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO:100. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:85 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:85 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO: 101 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO: 101. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En otra realización, la presente invención se refiere a un anticuerpo ant¡-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena liviana humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO:85 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena liviana de dominio variable de SEC ID NO:85 y un dominio variable de cadena pesada humanizado que comprende las CDRs de SEC ID NO: 100 y regiones marco que tienen una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica, al menos 93% idéntica o al menos 95% idéntica a la secuencia de aminoácidos de las regiones marco de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de dominio variable de SEC ID NO: 100. En una realización, el anticuerpo anti-IL-36R es un anticuerpo monoclonal humanizado.

En algunas realizaciones específicas, los anticuerpos anti-IL-36R humanizados divulgados en la presente comprenden al menos un dominio variable de cadena liviana o pesada que comprende las CDRs o HVLs de los anticuerpos monoclonales murinos o anticuerpos humanizados según lo divulgado en la presente y las FRs de los dominio variables de cadena liviana y pesada de línea germinal humana.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende una secuencia de cadena liviana CDR1 (L-CDR1) de una cualquiera de SEC ID NO:21-29; una secuencia de cadena liviana CDR2 (L-CDR2) de una cualquiera de SEC ID NO:30-38; una secuencia de cadena liviana CDR3 (L-CDR3) de una cualquiera de SEC ID NO:39-47; una secuencia de cadena pesada CDR1 (H-CDR1) de una cualquiera de SEC ID NO:48-56; una secuencia de cadena pesada CDR2 (H-CDR2) de una cualquiera de SEC ID NO:57-66; y una secuencia de cadena pesada CDR3 (H-CDR3) de una cualquiera de SEC ID NO:67-75. En un aspecto, el anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende una L-CDR1 detallada más arriba, una L-CDR2 detallada más arriba y una L-CDR3 detallada más arriba, y una región variable de cadena pesada que comprende una H-CDR1 detallada más arriba, una H-CDR2 detallada más arriba y una H-CDR3 detallada más arriba.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende: a) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 21 , 30, 39, 48, 57 y 67, respectivamente; O b) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 22, 31 , 40, 49, 58 y 68, respectivamente; o c) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 23, 32, 41 , 50, 59 y 69, respectivamente; O d) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 24, 33, 42, 51 , 60 y 70, respectivamente; o e) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 25, 34, 43, 52, 61 y 71 , respectivamente; o f) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 26, 35, 44, 53, 62 y 72, respectivamente; O g) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 27, 36, 45, 54, 63 y 73, respectivamente; o h) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 27, 36, 45, 54, 64 y 74, respectivamente; o i) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 27, 36, 45, 54, 64 y 73, respectivamente; o j) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 28, 37, 46, 55, 65 y 74, respectivamente; o k) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 29, 38, 47, 56, 66 y 75, respectivamente.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo que comprende: a) una secuencia de L-CDR1 , una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1 , una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO:26, 103, 44, 53, 62 y 72, respectivamente; o b) una secuencia de L-CDR1, una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1, una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO:26, 104, 44, 53, 62 y 72, respectivamente; o c) una secuencia de L-CDR1, una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1, una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO:27, 36, 45, 107, 63 y 73, respectivamente; o d) una secuencia de L-CDR1, una L-CDR2, una L-CDR3, una H-CDR1, una H-CDR2 y una H-CDR3 de SEC ID NO: 27, 36, 45, 107, 64 o 73, respectivamente.

En un aspecto, el anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende una combinación de L-CDR1 , L-CDR2 y L-CDR3 detallada más arriba, y una región variable de cadena pesada que comprende una combinación de H-CDR1 , H-CDR2 y H-CDR3 detallada más arriba.

En realizaciones específicas, se contempla que los anticuerpos quiméricos con regiones CDR cambiadas (es decir, por ejemplo que cambia una o dos CDRs de uno de los anticuerpos de ratón o anticuerpo humanizado obtenido del mismo con la CDR análoga de otro anticuerpo de ratón o anticuerpo humanizado obtenido del mismo) entre estas inmunoglobulinas ejemplares puede producir anticuerpos útiles.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-36R humanizado es un fragmento de anticuerpo. Diversos fragmentos de anticuerpo en general se han debatido más arriba y existen técnicas que han sido desarrolladas para la producción de fragmentos de anticuerpo. Los fragmentos pueden obtenerse a través de la digestión proteolítica de anticuerpos intactos (véase, por ejemplo, Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical y Biophysical Methods 24:107-117; y Brennan et al., 1985, Science 229:81). Alternativamente, los fragmentos pueden producirse directamente en células huésped recombinantes. Por ejemplo, los fragmentos Fab'-SH pueden recuperarse directamente de E. coli y acoplarse químicamente para formar fragmentos F(ab')2 (véase, por ejemplo, Cárter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167). Mediante otra metodología, los fragmentos F(ab')2 pueden aislarse directamente del cultivo de células huésped recombinantes. Otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos serán evidentes para el practicante experimentado. Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona fragmentos de anticuerpos que comprenden las CDRs descritas en la presente, en particular una de las combinaciones de L-CDR1 , L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 descrita en la presente. En otro aspecto, la presente invención proporciona fragmentos de anticuerpos que comprenden las regiones variables descritas en la presente, por ejemplo una de las combinaciones de las regiones variables de cadena liviana y regiones variables de cadena pesada descritas en la presente. Ciertas realizaciones incluyen un fragmento F(ab')2 de un anticuerpo anti-IL-36R humanizado comprenden una secuencia de cadena liviana de cualquiera de SEC ID NO: 115 o 118 en combinación con una secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 125, 126 o 127. Dichas realizaciones pueden incluir un anticuerpo intacto que comprende dicho F(ab')2.

Ciertas realizaciones incluyen un fragmento F(ab')2 de un anticuerpo ant¡-IL-36R humanizado que comprende una secuencia de cadena liviana de cualquiera de SEC ID NO: 123 o 124 en combinación con una secuencia de cadena pesada de SEC ID NO: 138 o 139. Dichas realizaciones pueden incluir un anticuerpo intacto que comprende dicho F(ab')2.

En algunas realizaciones, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo incluye una región constante que media función efectora. La región constante puede proporcionar respuestas de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) y/o citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) contra una Célula blanco de expresión de IL-36. El dominio efector puede ser, por ejemplo, una región Fe de una molécula de Ig.

El dominio efector de un anticuerpo puede ser de cualquier especie animal vertebrada adecuada e isotipos. Los isotipos de diferentes especies animales difieren en las capacidades para mediar funciones efectoras. Por ejemplo, la capacidad de la inmunoglobulina humana para mediar CDC y ADCC/ADCP por lo general están en el orden de lgM=lgGi=lgG3>lgG2>lgG4 y lgGi=lgG3>lgG2/lgM/lgG4, respectivamente. Las inmunoglobulinas murinas que median CDC y ADCC/ADCP por lo general están en el orden de lgM«lgG3»lgG2b>lgG2a»lgGi murinas e lgG2b>lgG2a>lgG »lgG3, respectivamente. En otro ejemplo, la lgG2a murina media ADCC mientras que tanto la lgG2a murina como la IgM median CDC.

Modificaciones de Anticuerpos Los anticuerpos y agentes anti-IL-36R humanizados pueden incluir modificaciones del anticuerpo anti-IL-36R humanizado o fragmento de unión a antígeno del mismo. Por ejemplo, puede ser deseable modificar el anticuerpo con respecto a una función efectora, de manera tal que se potencie la efectividad del anticuerpo para tratar cáncer. Una modificación tal es la introducción de residuos de cisteína en la región Fe, para permitir de ese modo la formación de enlaces disulfuro intercatenarios en esta región. El anticuerpo homodimérico generado de ese modo puede haber mejorado la capacidad de internalización y/o haber aumentado la eliminación celular mediada por complementos y/o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Véase, por ejemplo, Carón et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195; y Shopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922. Los anticuerpos homodiméricos que tienen una actividad anti-tumor potenciada también se pueden preparar por el uso de reticuladores heterobifuncionales de acuerdo con lo descripto en Wolff et al., 1993, Cáncer Research 53: 2560-2565. En forma alternativa, un anticuerpo se puede manipular para contener regiones Fe duales, para potenciar la lisis de complementos y las capacidades de ADCC del anticuerpo. Véase Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230.

Los anticuerpos con capacidad mejorada para soportar ADCC se han generado por medio de la modificación del patrón de glicosilación de su región Fe. Esto es posible dado que la glicosilación de anticuerpos en el residuo de asparagina, N297, en el dominio CH2 está implicada en la interacción entre los prerrequisitos de receptores IgG y Fcy a ADCC. Las líneas celulares huéspedes se han manipulado para expresar anticuerpos con glicosilación alterada, tales como N-acetilglucosamina de bisección aumentada o fucosa reducida. La reducción de fucosa proporciona una mayor potenciación a la actividad ADCC que lo que aumenta la presencia de N-acetilglucosamina de bisección. Además, la potenciación de ADCC por medio de anticuerpos fucosa inferiores es independiente del polimorfismo FcYRIIIa V/F.

La modificación de la secuencia de aminoácido de la región Fe de anticuerpos es una alternativa a la manipulación de glicosilación para potenciar ADCC. El sitio de unión de IgGi humano para receptores FCY se ha determinado por medio de un análisis mutacional extensivo. Esto dio lugar a la generación de anticuerpos \gG^ humanizados con mutaciones Fe que aumentan la afinidad de unión a FcYRIIIa y potencian ADCC ¡n vitro. En forma adicional, las variantes Fe se han obtenido con muchas permutaciones diferentes de propiedades de unión, por ej., unión mejorada a receptores FCYR específico con unión no modificada o disminuida a otros receptores FcyR.

Otro aspecto incluye inmunoconjugados que comprenden el anticuerpo humanizado o fragmentos del mismo conjugados a un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico, una toxina (por ej., una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, fúngico, vegetal, o animal, o fragmentos del mismo), o un isótopo radioactivo (es decir, un radioconjugado). Los agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de tales inmunoconjugados se han descripto con anterioridad. Las toxinas enzimáticamente activas y fragmentos de las mismas que se pueden utilizar para formar inmunoconjugados útiles incluyen cadena de difteria A, fragmentos activos no de unión de toxina de difteria, cadena A de exotoxinas (de Pseudomonas aeruginosa), cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modecina, alfa-sarcina, proteínas Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S), inhibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina, los tricotecenos, y similares. Una variedad de radionucleidos están disponibles para la producción de anticuerpos anti-IL- 36R humanizados radioconjugadodos. Los ejemplos incluyen 212Bi, 1311, 131 In, 90Y, y 186Re.

Los conjugados del anticuerpo anti-IL-36R humanizado y agente citotóxico o quimioterapéutico se puede fabricar por medio de métodos conocidos, por el uso de una variedad de agentes de acoplamiento de proteínas bifuncionales tales como N-succinimidil-3-(2-piridilditiol) propionato (SPDP), iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCL), ésteres activos (tales como disuccinimidil suberato), aldehidos (tales como glutareldehído), compuestos bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil) hexanediamina), derivados de bis-diazonio (tales como bis-(p-diazoniumbenzoil)-etilenediamina), diisocianatos (tales como tolueno 2,6-diisocyanato), y compuestos de flúor bis-activos (tales como 1 ,5-difluoro-2,4-dinitrobenceno). Por ejemplo, una inmunotoxina de ricina se puede preparar de acuerdo con lo descripto en Vitetta et al., 1987, Science 238:1098. El ácido 1-isotiocianatobencil-3-metildietileno triaminopentaacético (MX-DTPA) marcado con carbono 14 es un agente quelante representativo para la conjugación de radionucléotidos para el anticuerpo. Los conjugados también se pueden formar con un conector escindible.

Los anticuerpos anti-IL-36R humanizados revelados en la presente también se pueden formular como inmunoliposomas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan por medio de métodos conocidos en la técnica, tales como los descriptos en Epstein et al., 1985, Proc. Nati. Acad. Sci. EEUU 82:3688; Hwang et al., 1980, Proc. Nati. Acad. Sci. EEUU 77:4030; y las Patentes Estadounidenses N° 4.485.045 y 4.544.545. Los liposomas que tienen un tiempo de circulación potenciados se revelan, por ejemplo, en la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.013.556.

Los liposomas útiles en particular se pueden generar por medio del método de evaporación en fase reversa con una composición de lípidos que comprenden fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE). Los liposomas se extrudan a través de filtros de tamaño de poros definidos para dar liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab' de un anticuerpo revelados en la presente se pueden conjugar a los liposomas de acuerdo con lo descripto en Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288 a través de una reacción de intercambio de disulfuro. Un agente quimioterapéutico (tal como doxorubicina) está contenido dentro del liposoma en forma opcional. Véase, por ej., Gabizon et al., 1989, J. National Cáncer Inst. 81(19):1484.

Los anticuerpos descriptos y revelados en la presente también se pueden utilizar en procedimientos ADEPT (Terapia con Profármacos de Enzimas Dirigidas a Anticuerpos) por medio de la conjugación del anticuerpo a una enzima activadora de profármacos que convierte un profármaco (por ej., un agente quimioterapéutico de peptidilo), a un fármaco anti-cáncer activo. Véase, por ejemplo, WO 81/01145, WO 88/07378, y la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.975.278. El componente de enzimas del inmunoconjugado útil para ADEPT es una enzima capaz de actuar en un profármaco de manera tal que se convierta a su forma citotóxica más activa. Las enzimas específicas que son útiles en ADEPT incluyen, pero sin limitación, fosfatasa alcalina para convertir profármacos que contienen fosfatos en fármacos libres; arilsulfatasa para convertir profármacos que contienen sulfato en fármacos libres; citosina deaminasa para convertir 5- fluorocitosina no tóxica en el fármaco anti-cáncer, 5-fluorouracilo; proteasas, tales como proteasa serratia, termolisina, subtilisina, carboxipeptidasas, y catepsinas (tales como catepsinas B y L), para convertir profármacos que contienen péptidos en fármacos libres; D-alanilcarboxipeptidasas, para convertir profármacos que contienen sustituyentes de D-aminoácido; enzimas de escisión de carbohidratos tales como ß-galactosidasa y neuraminidasa para convertir profármacos glicosilados en fármacos libres; ß-lactamasa para convertir fármacos derivados con ß-lactamas en fármacos libres; y amidasas de penicilina, tales como penicilina V amidasa o penicilina G amidasa, para convertir fármacos derivados en sus nitrógenos amina con grupos fenoxiacetilo o fenilacetilo, respectivamente, en fármacos libres. En forma alternativa, los anticuerpos que tienen actividad enzimática ("abzimas") se pueden utilizar para convertir los profármacos en fármacos activos libres (véase, por ejemplo, Massey, 1987, Nature 328: 457-458). Los conjugados de anticuerpo-abzima se pueden preparar por medio de métodos conocidos para la administración de la abzima a una población de células tumorales, por ejemplo, por medio de la unión covalente de la enzima al anticuerpo anti-IL-36R humanizado/reactivos de reticulación heterobifuncional discutidos con anterioridad. En forma alternativa, las proteínas de fusión que comprenden al menos la región de unión a antígeno a un anticuerpo revelado en la presente ligado a al menos una porción funcionalmente activa de una enzima de acuerdo con lo descripto con anterioridad se puede construir por el uso de técnicas de ADN recombinante (véase, por ej., Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608).

En ciertas realizaciones, puede ser deseable utilizar un fragmento de anticuerpo anti-IL-36R humanizado, en lugar de un anticuerpo intacto, para aumentar la penetración en los tejidos, por ejemplo. Puede ser deseable modificar el fragmento de anticuerpo con el fin de aumentar su vida media en suero. Esto se puede alcanzar, por ejemplo, por medio de la incorporación de un epítopo de unión a receptores salvajes en el fragmento de anticuerpo. En un método, la región apropiada del fragmento de anticuerpo se puede alterar (por ej., mutar), o el epítopo se puede incorporar en una etiqueta de péptido que luego se fusiona al fragmento de anticuerpo en cualquier extremo o en el medio, por ejemplo, por medio de síntesis de ADN o péptidos. Véase, por ej., WO 96/32478.

En otras realizaciones, también se incluyen modificaciones covalentes del anticuerpo anti-IL-36R humanizado. Las modificaciones covalentes incluyen modificación de residuos de cisteinilo, residuos de histidilo, residuos de lisinilo y de terminal amino, residuos de arginilo, residuos de tirosilo, grupos laterales de carboxilo (aspartilo o glutamilo), residuos de glutaminilo y asparaginilo, o residuos de serilo o treonilo. Otro tipo de modificación covalente implica el acoplamiento químico o enzimático de glicosidas al anticuerpo. Tales modificaciones se pueden llevar a cabo por medio de síntesis química o por medio de la escisión enzimática o química del anticuerpo, si aplica. Otros tipos de modificaciones covalentes del anticuerpo se pueden introducir en la molécula por medio de la reacción de residuos aminoácido dirigidos del anticuerpo con un agente de derivación orgánica que es capaz de reaccionar con cadenas laterales seleccionadas o los residuos de terminal amino o carboxi.

La eliminación de los restos de carbohidrato presentes en el anticuerpo se puede lograr en forma química o enzimática. La deglicosilación química se describe en Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 y en Edge et al., 1981 , Anal. Biochem., 118:131. La escisión enzimática de restos de carbohidrato en anticuerpos se puede lograr por el uso de una variedad de endo y exoglicosidasas de acuerdo con lo descripto en Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350.

Otra tipo de útiles modificación covalente comprende la vinculación del anticuerpo a uno de una variedad de polímeros no proteináceos, por ej., polietilenglicol, polipropilenglicol, o polioxialquilenos, de la manera expuesta en uno o más de la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.640.835, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.496.689, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.301.144, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.670.417, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.791.192 y la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.179.337.

Variantes de Secuencia de Humanización y Aminoácidos Las variantes de secuencia de aminoácido del anticuerpo anti-IL-36R se pueden preparar por medio de la introducción de cambios de nucleótidos apropiados en el ADN del anticuerpo anti-IL-36R, o por medio de síntesis de péptidos. Tales variantes incluyen, por ejemplo, supresiones de, y/o inserciones en y/o sustituciones de, residuos dentro de las secuencias de aminoácidos de los anticuerpos anti-IL-36R de los ejemplos en la presente. Cualquier combinación de supresiones, inserciones, y sustituciones se lleva a cabo para llegar a la construcción final, con la condición de que la construcción final posea las características deseadas. Los cambios en los aminoácidos también pueden alterar procesos post-traduccionales del anticuerpo ant¡-ÍL-36R humanizado o variante, tal como el cambio del número o posición de los sitios de glicosilación. Un método útil para la identificación de ciertos residuos o regiones del anticuerpo anti-IL-36R que son ubicaciones preferidas para la mutagénesis se denomina "mutagénesis de barrido de alanina", de acuerdo con lo descripto en Cunningham y Wells (Science, 244:1081-1085 (1989)). En la presente, un residuo o grupo de residuos blanco están identificados (por ej., residuos cargados tales como arg, asp, his, lis, y glu) y reemplazados por un aminoácido neutral o cargado negativamente (en forma típica alanina) para afectar la interacción de loa aminoácidos con antígeno IL-36R. Aquellas ubicaciones de aminoácido que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones luego se refinan por medio de la introducción de variantes adicionales o de otras en, o para, los sitios de sustitución. Por lo tanto, si bien el sitio para la introducción de una variación de secuencia de aminoácido está predeterminado, la naturaleza de la mutación per se no necesita estar predeterminada. Por ejemplo, para analizar el rendimiento de una mutación en un sitio dado, se lleva a cabo un barrido de alanina o mutagénesis aleatoria en el codón blanco o región y las variantes de anticuerpo anti-IL-36R expresadas se barren para la actividad deseada.

Las inserciones de secuencia de aminoácido incluyen fusiones de terminales amino y/o carboxilo que oscilan en longitud de un residuo a polipéptidos que contienen cien o más residuos, así como también inserciones de intrasecuencias de residuos de aminoácidos simples o múltiples. Los Ejemplos de inserciones de terminal incluyen un anticuerpo anti-IL-36R fusionado a una etiqueta de epítopo. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo anti-IL-36R incluyen una fusión a la terminal N o C del anticuerpo anti-IL-36R de una enzima o un polipéptido que aumenta la vida media en suero del anticuerpo. Otro tipo de variante es una variante de sustitución de aminoácido. Estas variantes tienen al menos un residuo de aminoácido en la molécula de anticuerpo anti-IL-36R eliminada y un residuo diferente insertado en su lugar. Los sitios de mayor interés para la mutagénesis sustitucional incluyen las regiones hipervariables, pero también están contempladas alteraciones FR. Las sustituciones conservativas se muestran en la Tabla 5 bajo el título de "sustituciones preferidas". Si tales sustituciones dan lugar a un cambio en la actividad biológica, entonces se pueden introducir más cambios sustanciales, denominados "sustituciones representativas", o de acuerdo con lo descripto con referencia a las clases de aminoácido, y barrer los productos.

TABLA C: Residuo Original Sustituciones Representativas Sustituciones Preferidas Ala (A) val; leu; ile val Arg (R) lis; gln; asn lis Asn (N) gln; his; asp, lis; arg gln Asp (D) glu; asn glu Cis (C) ser; ala ser Gln (Q) asn; glu asn Glu (E) asp; gln asp Gly (G) ala ala His (H) arg; asn; gln; lis; arg lie (1) leu; val; met; ala; fe; norleucina leu Leu (L) ile; norleucina; val; met; ala; fe ile Lis (K) arg; gln; asn arg Met (M) leu; fe; ile leu Fe (F) tir; leu; val; ile; ala; tir Pro (P) ala ala Ser (S) tr tr Tr (T) ser ser Trp (W) tir; fe tir Tir (Y) fe;trp; tr; ser fe Val (V) leu; ile; met; fe ala; norleucina; leu En la química de proteínas, por lo general está aceptado que las propiedades biológicas del anticuerpo se puede lograr por medio de la selección de sustituciones que difieren en forma significativa en su efecto para mantener (a) la estructura de la columna de polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación de lámina o de hélice, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio blanco, o (c) la mayor parte de la cadena lateral. Los residuos naturales se dividen en grupos con base en las propiedades de cadena lateral común: (1) hidrofóbica: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrofílica neutral: cis, ser, tr; (3) ácida: asp, glu; (4) básica: asn, gin, his, lis, arg; (5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: gli, pro; y (6) aromática: trp, tir, fe.

Las sustituciones no conservativas conllevarán el intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase.

También se puede sustituir cualquier residuo de cisteína no implican el mantenimiento de la conformación apropiada del anticuerpo anti-IL-36R humanizado o variante, por lo general con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula, prevenir una reticulación aberrante, o proporcionar puntos de conjugación establecidos a un compuesto citotóxico o citostático. Por el contrario, se pueden agregar enlaces cisteína al anticuerpo para mejorar su estabilidad (en particular donde el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tale como un fragmento Fv).

Un tipo de variante sustitucional implica la sustitución de uno o más residuos de región hipervariabie de un anticuerpo padre (por ej., un anticuerpo humanizado o humano). Por lo general, las variantes resultantes seleccionadas para un desarrollo adicional habrán mejorado las propiedades biológicas relativas al anticuerpo padre del cual se genera. Un modo conveniente para generar tales variantes sustitucionales es la maduración de afinidad por el uso de visualización de fago. En forma breve, se mutan varios sitios de región hipervariabie (por ej., 6 a 7 sitios) para generar todas las sustituciones amino posibles en cada sitio. Las variantes de anticuerpo generadas de ese modo se exhiben en una forma monovalente a partir de partículas de fago filamentosas como fusiones al producto de gen III de M13 envasado con cada partícula. Las variantes visualizadas por fago luego se barren por su actividad biológica (por ej., afinidad de unión). Con el fin de identificar sitios de región hipervariabie candidatos para la modificación, se puede llevar a cabo una mutagénesis de barrido de alanina para identificar los residuos de región hipervariabie que contribuyen en forma significativa a la unión a antígenos. En forma alternativa, o en adición, puede ser beneficioso analizar una estructura de cristal del complejo antígeno-anticuerpo para identificar los puntos de contacto entre el anticuerpo e IL-36R humanos. Tales residuos de contacto y residuos cercanos son candidatos para una sustitución de acuerdo con las técnicas elaboradas en la presente. Una vez que se generan tales variantes, el panel de variantes se somete a un barrido de acuerdo con lo descripto en la presente y los anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes se puede seleccionar para un desarrollo adicional.

Otro tipo de variante de aminoácido del anticuerpo altera el patrón de glicosilación original del anticuerpo. Por medio de "alteración" se pretende la supresión de uno o más restos de carbohidrato hallados en el anticuerpo, y/o la adición de uno o más sitios de glicosilación que no están presentes en el anticuerpo.

En algunas realizaciones, puede ser deseable modificar los anticuerpos de la invención para agregar sitios de glicosilaciones. La glicosilación de anticuerpos en forma típica está ligada a N o a O. Ligada a N se refiere al acoplamiento del resto carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias de tripéptido asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, y las secuencias de reconocimiento para el acoplamiento enzimático del resto carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Por lo tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias de tripéptido en un polipéptido crea un potencial sitio de glicosilación. La glicosilación ligada a O se refiere al acoplamiento de una de las azúcares N-aceilgalactosamina, galactosa, o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, si bien también se puede utilizar 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina. Por lo tanto, con el fin de glicosilar una proteína dada, por ej., un anticuerpo, la secuencia de aminoácido de la proteína se manipula para contener una o más de las secuencias de tripéptido descriptas con anterioridad (para sitios de glicosilación ligados a N). La alteración también se puede llevar a cabo por medio de la adición de, o sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia de anticuerpo original (para sitios de glicosilación ligados a O).

Las moléculas de ácido nucleico que codifican las variantes de secuencia de aminoácido del anticuerpo anti-IL-36R se preparan por medio de una variedad de métodos conocidos en la técnica. Estos métodos incluyen, pero sin limitación, aislación de una fuente natural (en el caso de variantes de secuencia de aminoácido) o preparación por medio de mutagénesis mediada por oligonucléotidos (o dirigida a sitios), mutagénesis PCR, y mutagénesis de cassette de una variante preparada con anterioridad o una versión no variante del anticuerpo anti-IL-36R.

Polinucleótidos, Vectores, Células Huésped, y Métodos Recombinantes Otras realizaciones abarcan polinucleótidos aislados que comprenden una secuencia que codifica un anticuerpo anti-IL-36R humanizado, vectores, y células huésped que comprenden los polinucleótidos, y técnicas recombinantes para la producción del anticuerpo humanizado. Los polinucleótidos aislados pueden codificar cualquier forma deseada del anticuerpo anti-IL-36R que incluyen, por ejemplo, anticuerpos monoclonales de longitud completa, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, y Fv, diacuerpos, anticuerpos lineales, moléculas de anticuerpo de cadena única, y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.

Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la región variable de cadena ligera de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de cualquiera de SEC ID NO: SEC ID NO: 1-10. Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la región variable de cadena pesada de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 11-20.

Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la región variable de cadena ligera de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de cualquiera de SEC ID NO: 76-86. Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la región variable de cadena pesada de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 87-101.

Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la cadena ligera de un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de cualquiera de SEC ID NO: 114-124. Algunas realizaciones incluyen polinucleótidos aislados que comprenden secuencias que codifican la cadena pesada de un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 125-139.

En un aspecto, las secuencias de polinucleótidos aislados codifica un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene una región variable de cadena ligera y una de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEC ID NO:115 y SEC ID NO:127, respectivamente; SEC ID NO:118 y SEC ID NO: 126, respectivamente; SEC ID NO:118 y SEC ID NO: 127, respectivamente; SEC ID NO:1 15 y SEC ID NO:125, respectivamente; SEC ID NO:1 15 y SEC ID NO:126, respectivamente; SEC ID NO:1 18 y SEC ID NO:125, respectivamente; SEC ID NO:124 y SEC ID NO:138, respectivamente; SEC ID NO:123 y SEC ID NO:139, respectivamente; SEC ID NO:123 y SEC ID NO:138, respectivamente.

Los polinucleótidos que comprenden una secuencia que codifica un anticuerpo anti-IL-36R humanizado o un fragmento o cadena del mismo se puede fusionar a una o más secuencias regulatorias o de control, de acuerdo con lo conocido en la técnica, y pueden estar contenidos en vectores de expresión adecuados o células huésped de acuerdo con lo conocido en la técnica. Cada una de las moléculas de polinucleótido que codifican los dominios variables de cadena pesada o ligera se pueden fusionar en forma independiente a una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio constante, tal como un dominio constante humano, lo que permite la producción de anticuerpos intactos.

En forma alternativa, los polinucleótidos, o porciones de los mismos, se pueden fusionar juntos, lo que proporciona una plantilla para la producción de un anticuerpo de cadena única.

Para la producción recombinante, un polinucleótido que codifica el anticuerpo está insertado en un vector replicable para la clonación (amplificación del ADN) o para expresión. Están disponibles varios vectores adecuados para la expresión de anticuerpos recombinantes. Los componentes del vector por lo general incluyen, pero sin limitación, uno o más de los siguientes: una secuencia de señal, un origen de replicación, uno o más genes marcadores, un elemento potenciador, un promotor, y una secuencia de terminación de transcripción.

Los anticuerpos anti-IL-36R humanizados también se pueden producir como polipéptidos de fusión, en los que el anticuerpo se fusiona con un polipéptido heterólogo, tal como una secuencia de señal u otro polipéptido que tiene un sitio de escisión específico en el terminal amino de la proteína o polipéptido madure. La secuencia de señal heteróloga seleccionada en forma típica es una que se reconoce y procesa (es decir, escindido por una peptidasa de señal) por medio de la célula huésped. Para células huésped procariotas que no reconoce y procesa la secuencia de señal de anticuerpo anti-IL-36R humanizado, la secuencia de señal se puede sustituir por medio de una secuencia de señal procariota. La secuencia de señal puede ser, por ejemplo, alcalina fosfatasa, penicilinasa, lipoproteína, líderes de enterotoxina II estable al calor, y similares. Para la secreción de levaduras, la secuencia de señal nativa se puede sustituir, por ejemplo, con una secuencia líder obtenida de alfa-factor de ¡nvertasa de levaduras (que incluyen líderes de a-factor Saccharomyces y Kluyveromyces), fosfatasa acida, glucoamilasa C. albícans, o la señal descripta en WO90/13646. En células de mamíferos, se pueden utilizar las secuencias de señal de mamíferos así como también los líderes secretores virales, por ejemplo, la señal de herpes simple gD. El ADN para tal región precursora está ligado en el marco de lectura al ADN que codifica el anticuerpo anti-IL-36R humanizado.

Los vectores de expresión y clonación contienen una secuencia de ácido nucleico que permite que el vector se replique en uno o más células huésped seleccionadas. Por lo general, en los vectores de clonación esta secuencia es una que permite que el vector se replique en forma independiente del ADN cromosómico huésped, e incluye orígenes de replicación o secuencias de replicación en forma autónoma. Tales secuencias son muy conocidas para una variedad de bacterias, levaduras, y virus. El origen de replicación del plásmido pBR322 es adecuado para la mayor parte de las bacterias Gram-negativas, el origen plásmido 2- ? es adecuado para levaduras, y varios orígenes virales (SV40, polioma, adenovirus, VSV, y BPV) son útiles para vectores de clonación en células de mamíferos. Por lo general, el origen del componente de replicación no se necesita para los vectores de expresión de mamíferos (el origen SV40 se puede utilizar en forma típica únicamente porque contiene el promotor temprano).

Los vectores de expresión y clonación pueden contener un gen que codifica un marcador selecciónatele para facilitar la identificación de expresión. Los genes de marcadores seleccionables típicos codifican proteínas que confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ej., ampicilina, neomicina, metotrexato, o tetraciclina, o en forma alternativa, son deficiencias auxotróficas complementarias, o en otras alternativas suministran nutrientes específicos que no están presentes en medios complejos, por ej., el gen que codifica D-alanina racemasa para Bacilli.

Un ejemplo de un esquema de selección utiliza un fármaco para detener el crecimiento de una célula huésped. Aquellas células que se transforman en forma exitosa con un gen heterólogo producen una proteína que confiere resistencia a fármacos y de ese modo sobrevive el régimen de selección. Los ejemplos de tal selección dominante utilizan los fármacos neomicina, ácido micofenólico, e higromicina. Los marcadores seleccionables comunes para las células de mamíferos son aquellos que permiten la identificación de células competentes para absorber un ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-IL-36R humanizado, tal como DHFR (dihidrofolato reductasa), timidina quinasa, metalotioneína-l y -II (tal como genes de metalotioneína de primates), adenosina deaminasa, ornitina decarboxilasa, y similares. Las células transformadas con el gen de selección DHFR primer se identifican por medio del cultivo de todos los transformantes en un medio de cultivo que contiene metotrexato (Mtx), un antagonista competitivo de DHFR. Una célula huésped apropiada cual se emplea DHFR de tipo salvaje es la línea celular de ovario de hámster chino (CHO) deficiente en actividad DHFR (por ej., DG44).

En forma alternativa, se pueden seleccionar células huésped (en particular huéspedes de tipo salvaje que contienen DHFR endógeno) transformadas o cotransformadas con secuencias de ADN que codifican anticuerpo anti-IL-36R, proteína DHFR de tipo salvaje, y otro marcador selecciónatele tal como aminoglicosida 3'-fosfotransferasa (APH), por medio de crecimiento celular en un medio que contiene un agente de selección para el marcador selecciónatele tal como un antibiótico aminoglicosídico, por ej., kanamicina, neomicina, o G418. Véase, por ej., la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.965.199.

Donde la producción recombinante se lleva a cabo en una célula de levadura como una célula huésped, se puede utilizar el gen TRP1 presente en plásmido YRp7 de levadura (Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39) como un marcador seleccionable. EL gen TRP1 proporciona un marcador de selección para una cepa muíante de levaduras que carece de la capacidad para crecer en triptofán, por ejemplo, ATCC No. 44076 o PEP4-1 (Jones, 1977, Genetics 85:12). La presencia de la lesión trp1 en el genoma de células huésped de levaduras luego proporciona un ambiente efectivo para detectar la transformación por medio del crecimiento en ausencia de triptofán. En forma similar, las cepas de levaduras deficientes en Leu2p tales como ATCC 20.622 y 38.626 están complementadas por plásmidos conocidos que portan el geni LEU2.

En adición, los vectores derivados del plásmido circular pKD1 de 1 ,6 pm se pueden utilizar para la transformación de levaduras Kluyveromyces. En forma alternativa, un sistema de expresión para la producción a gran escala de quimosina de ternero recombinante fue informado para K. lactis (Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135). También se han revelado vectores de expresión multicopia estables para la secreción de albúmina de suero humana recombinante madura por medio de cepas industriales de Kluyveromices (Fleer et al., 1991 , Bio/Technology 9:968-975).

Los vectores de expresión y clonación normalmente contienen un promotor que está reconocido por el organismo huésped y está ligado en forma operativa a la molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-IL-36R o cadena de polipéptido del mismo. Los promotores adecuados para su uso con los huéspedes procariotas incluyen promotor phoA, sistemas promotores de ß-lactamasa y lactosa, fosfatasa alcalina, sistema promotor de triptofán (trp), y promotores híbridos tales como el promotor tac. También son adecuados otros promotores bacterianos conocidos. Los promotores para el uso en sistemas bacterianos también contendrán una secuencia de Shine-Dalgarno (S.D.) ligada en forma operativa al ADN que codifica el anticuerpo anti-IL-36R humanizado.

Se conocen varias secuencias promotoras eucariotas. Virtualmente todos los genes eucariotas tienen una región rica en AT ubicada aproximadamente 25 a 30 bases corriente arriba del sitio donde se inicia la transcripción. Otra secuencia que halló 70 a 80 bases corriente arriba desde el comienzo de la transcripción de varios genes es una región CNCAAT donde N puede ser cualquier nucleótido. En el extremo 3' de la mayor parte de los genes eucariotas es una secuencia AATAAA que puede ser la señal para la adición de la cola poli A del extremo 3' de la secuencia de codificación. Todas estas secuencias están insertadas en forma adecuada en los vectores de expresión de eucariotas.

Los ejemplos de secuencias de promoción adecuadas para su uso con los huéspedes de levadura incluyen los promotores para 3-fosfoglicerato quinasa u otras enzimas glicolíticas, tales como enolasa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, hexoquinasa, piruvato decarboxilasa, fosfofructoquinasa, glucosa-6-fosfato isomerasa, 3-fosfoglicerato mutasa, piruvato quinasa, triosefosfato isomerasa, fosfoglucosa isomerasa, y glucoquinasa.

Los promotores inducibles tienen la ventaja adicional de la transcripción controlada por las condiciones de crecimiento. Estas incluyen las regiones promotoras de levadura para alcohol deshidrogenasa 2, isocitocromo C, fosfatasa ácida, enzimas derivadas asociadas al metabolismo del nitrógeno, metalotioneína, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, y enzimas responsables por la utilización de maltosa y galactosa. Los vectores y promotores adecuados para su uso en la expresión de levaduras se describen en forma adicional en EP 73.657. Los potenciadores de levaduras también se utilizan en forma ventajosa con promotores de levaduras.

La transcripción de anticuerpos anti-IL-36R humanizados a partir de vectores en células huésped de mamíferos está controlado, por ejemplo, por medio de promotores obtenidos de los genomas de virus tales como poliomavirus, el virus de la viruela aviar, adenovirus (tales como Adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus, un retrovirus, virus de la hepatitis B y Virus del Simio 40 (SV40), a partir de promotores de mamíferos heterólogos, por ej., el promotor de actina o un promotor de inmunoglobulinas, o de promotores de choque térmico, con la condición de que tales promotores sean compatibles con los sistemas de células huésped.

Los promotores tempranos y tardíos del virus SV40 se pueden obtener en forma conveniente como un fragmento de restricción a SV40 que también contiene el origen viral de replicación SV40. El promotor temprano inmediato del citomegalovirus humano se puede obtener en forma conveniente como un fragmento de restricción a Hindlll E. Un sistema para la expresión de ADN en huéspedes mamíferos por el uso del virus del papiloma bovino como un vector se revela en la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.419.446. Una modificación de este sistema se describe en la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.601.978. Véase también Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601 , que revela la expresión del ADNc p-interferón humano en células de ratón bajo el control de un promotor de timidina quinasa a partir del virus del herpes simple. En forma alternativa, se puede utilizar la repetición de terminal larga del virus del sarcoma de Rous como el promotor.

Otro elemento útil que se puede utilizar en un vector de expresión recombinante es una secuencia potenciadora, que se utiliza para aumentar la transcripción de un ADN que codifica un anticuerpo anti-IL-36R humanizado por medio de eucariotas mayores. Varias secuencias potenciadoras se conocen en la actualidad a partir de genes de mamíferos (por ej., globina, elastasa, albúmina, a-fetoproteína, e insulina). En forma típica, sin embargo, se utiliza un potenciador de un virus de célula eucariota. Los ejemplos incluyen el potenciador de SV40 en el lateral tardío del origen de replicación (bp 100-270), el potenciador del promotor temprano del citomegalovirus, el potenciador de polioma en el lateral tardío del origen de replicación, y potenciadores de adenovirus. Véase también Yaniv, 1982, Nature 297:17-18 para una descripción de elementos potenciadores para la activación de promotores de eucariotas. El potenciador se puede empalmar al vector en la posición 5' o 3' a la secuencia de codificación del anticuerpo anti-IL-36R humanizado, pero con preferencia está ubicado en un sitio 5' del promotor.

Los vectores de expresión utilizados en las células huésped eucariotas (células de levadura, hongos, insectos, plantas, animales, humanos, o células nucleadas de otros organismos multicelulares) también pueden contener secuencias necesarias para la terminación de transcripción y para estabilizar el ARNm. Tales secuencias están disponibles comúnmente de las regiones 5' y, en forma ocasional 3', no traducidas de eucariotas o ADN o ADNc virales. Estas regiones contienen segmentos de nucleótidos transcriptos como fragmentos poliadenilados en la porción no traducida del anticuerpo de codificación anti-IL-36R ARNm. Un componente de terminación de transcripción útil es la región de poliadenilación de hormonas de crecimiento bovino. Véase WO94/11026 y el vector de expresión revelado en la misma. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-IL-36R humanizados se pueden expresar por el uso del sistema CHEF. (Véase, por ej., la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.888.809; cuya revelación se incorpora como referencia en la presente).

Las células huésped adecuadas para la clonación o expresión del ADN en los vectores en la presente son las células procariotas, de levadura, o eucariotas superiores que se describen con anterioridad. Las procariotas adecuadas para este propósito incluyen eubacterias, tales como organismos Gram-negativos o Gram-positivos, por ejemplo, Enterobacteriaceae tales como Escherichia, por ej., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por ej., Salmonella typhimurium, Serratia, por ej., Serratia marcescans, y Shigella, así como también Bacilli tales como B. subtilis y B. ¡icheniformis (por ej., B. licheniformis 41 P revelada en DD 266,710 publicada el 12 de abril de 1989), Pseudomonas tales como P. aeruginosa, y Streptomyces. Un huésped de clonación de E. coli preferido es E. coli 294 (ATCC 31 ,446), si bien son adecuadas otras cepas tales como E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31 ,537), y E. coli W3110 (ATCC 27,325). Estos ejemplos son ilustrativos más que limitantes.

En adición a las procariotas, los microbios de eucariotas tales como hongos filamentosos o levaduras son huéspedes de clonación o expresión adecuados para los vectores que codifican el anticuerpo anti-IL-36R humanizado. Saccharomyces cerevisiae, o levadura de panadero común, es la más comúnmente utilizada entre los microorganismos huéspedes de eucariotas inferiores. Sin embargo, un número de otros géneros, especies, y cepas están comúnmente disponibles y son útiles en la presente, tales como huéspedes de Schizosaccharomyces pombe; Kluyveromyces tales como, por ej., K. lactis, K. fragilis (ATCC 12,424), K. bulgaricus (ATCC 16,045), K. wickeramii (ATCC 24,178), K. waltii (ATCC 56,500), K. drosophilarum (ATCC 36,906), K. thermotolerans, y K. marxianus; yarrowia (EP 402,226); Pichia pastors (EP 183,070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa; Schwanniomyces tales como Schwanniomyces occidentalis; y hongos filamentosos tales como, por ej., Neurospora, Penicillium, Tolypocladium, y huéspedes Aspergillus tales como A. nidulans y A. niger.

Las células huésped adecuadas para la expresión de anticuerpo anti-IL-36R humanizado glicosilado se derivan de organismos multicelulares. Los ejemplos de células de invertebrados incluyen células de plantas e insectos, que incluyen, por ej., numerosas cepas y variantes baculovirales y células huésped de insectos permisivas correspondientes de huéspedes tales como Spodoptera frugiperda (oruga), Aedes aegypti (mosquito), Aedes albopictus (mosquito), Drosofíla melanogaster (mosca de la fruta), and Bombyx mori (gusano de seda). Una variedad de cepas virales para transfección están a disposición del público, por ej., la vanante L-1 de Autographa californica NPV y la cepa Bm-5 de Bombyx mori NPV, y se pueden utilizar tales virus, en particular para la transfección de células Spodoptera frugiperda.

También se pueden utilizar cultivos de células de plantas de algodón, maíz, papa, soja, petunia, tomate, y tabaco como huéspedes.

En otro aspecto, la expresión de anti-IL-36R humanizado se lleva a cabo en células de vertebrados. La propagación de células de vertebrados en los cultivos (cultivos de tejidos) se ha tornado un procedimiento de rutina y las técnicas están ampliamente disponibles. Los ejemplos de útiles líneas celulares de huéspedes mamíferos son la línea CV1 de riñon de mono transformada por medio de SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651), la línea de riñon embrionario humano (293 o 293 células subclonadas para el crecimiento en un cultivo de suspensión, (Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59), células de riñon de hámster bebé (BHK, ATCC CCL 10), células de ovario de hámster chino células/-DHFR1 (CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77: 4216; por ej., DG44), células de sertoli de ratón (TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251), células de riñon de mono (CV1 ATCC CCL 70), células de riñon de mono verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587), células de carcinoma cervical humano (HELA, ATCC CCL 2), células de riñon de canino (MDCK, ATCC CCL 34), células de hígado de ratas búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442), células de pulmón humano (W138, ATCC CCL 75), células de hígado humano (Hep G2, HB 8065), tumor mamario de ratón (MMT 060562, ATCC CCL51 ), células TR1 (Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68), células MRC 5, células FS4, y línea de hepatoma humano (Hep G2).

Las células huésped se transforman con los vectores de expresión o clonación descriptos con anterioridad para la producción de anticuerpo anti-IL-36R humanizado y se cultivan en medios con nutrientes convencionales modificados de acuerdo con lo apropiado para la inducción de promotores, la selección de transformados, o la amplificación de genes que codifican las secuencias deseadas.

Las células huésped que se utilizan para producir un anticuerpo anti-IL-36R humanizado descripto en la presente se pueden cultivar en una variedad de medios. Los medios comercialmente disponibles tales como F10 de Ham (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mo.), Medio Mínimo Esencial ((MEM), (Sigma-Aldrich Co.), RPMI-1640 (Sigma-Aldrich Co.), Medio MEM modificado por Dulbecco ((DMEM), Sigma-Aldrich Co.) son adecuados para el cultivo de las células huésped. En adición, se pueden utilizar cualquiera de los medios que se describen en uno o más de Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.767.704, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.657.866, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.927.762, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.560.655, la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.122.469, WO 90/103430, y WO 87/00195 como medios de cultivo para las células huésped. Cualquiera de estos medios se puede suplementar de acuerdo con lo necesario con hormones y/o otros factores de crecimiento (tales como insulina, transferrina, o factor de crecimiento epidérmico), sales (tales como cloruro de sodio, calcio, magnesio, y fosfato), tampones (tales como HEPES), nucleótidos (tales como adehosina y timidina), antibióticos (tales como gentamicina), elementos traza (definidos como compuestos inorgánicos normalmente presentes en concentraciones finales a nivel micromolar), y glucosa o una fuente de energía equivalente. También se pueden incluir otros suplementos en concentraciones apropiadas que serán conocidas para aquellos con experiencia en la técnica. Las condiciones de cultivo, tales como temperatura, pH, y similares, son aquellas utilizadas previamente con la célula huésped seleccionada para la expresión, y serán evidentes para aquellos con experiencia.

Cuando se utilizan técnicas recombinantes, el anticuerpo se puede producir en forma intracelular, en el espacio periplásmico, o secretar directamente en el medio. Si el anticuerpo se produce en forma intracelular, las células se pueden trastocar para liberar proteínas como un primer paso. Los residuos de partículas, ya sean células huésped o fragmentos lisados, se pueden eliminar, por ejemplo, por medio de centrifugación o ultrafiltración. Cárter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167 describe un procedimiento para aislar anticuerpos que son secretados al espacio periplásmico de E. coli. En forma breve, la pasta celular se descongela en presencia de acetato de sodio (pH 3,5), EDTA, y fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF) durante aproximadamente 30 minutos. Los residuos de células se pueden eliminar por medio de centrifugación. Cuando el anticuerpo se secreta en el medio, los sobrenadantes de tales sistemas de expresión por lo general primero se concentran por el uso de un filtro de concentración de proteínas comercialmente disponible, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. Se puede incluir un inhibidor de proteasa tal como PMSF en cualquiera de los pasos precedentes para inhibir la proteólisis y se pueden incluir antibióticos para prevenir el crecimiento de contaminantes accidentales. Se puede utilizar una variedad de métodos para aislar el anticuerpo de la célula huésped.

La composición de anticuerpo preparada a partir de células se puede purificar por el uso de, por ejemplo, cromatografía de hidroxiapatita, electroforesis en gel, diálisis, o cromatografía de afinidad, siendo cromatografía de afinidad una técnica de purificación típica. La adecuabilidad de la proteína A como un ligando de afinidad depende de la especie y el isotipo de cualquier dominio de inmunoglobulina Fe que esté presente en el anticuerpo. Se puede utilizar proteína A para purificar anticuerpos que están basados en cadenas pesadas gammal , gamma2, o gamma4 humanas (véase, por ej., Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13). La proteína G está recomendada para todos los isotipos de ratón y para gamma3 humana (véase, por ej., Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575). Una matriz a la cual está acoplado un ligando de afinidad más a menudo es agarosa, pero están disponibles otras matrices. Las matrices mecánicamente estables tales como vidrio de poros controlados o poli(estirenodivinil)benceno permiten caudales de flujo más rápidos y tiempos de procesamiento más cortos que lo que se puede lograr con agarosa. Cuando el anticuerpo comprende un dominio CH3, la resina Bakerbond ABX™ (J. T. Baker, Philipsburg, N.J.) es útil para la purificación. Otras técnicas para la purificación de proteínas tales como fraccionamiento en una columna de intercambio de iones, precipitación de etanol, HPLC de fase reversa, cromatografía en sílice, cromatografía en heparina SEFAROSE™ cromatografía en una resina de intercambio de aniones o cationes (tal como a una columna de ácido poliaspártico), cromatoenfoque, SDS-PAGE, y precipitación de sulfato de amonio también están disponibles dependiendo del anticuerpo a recuperarse.

Luego de cualquier paso de purificación preliminar, la mezcla que comprende el anticuerpo de interés y contaminantes se puede someter a una cromatografía de interacción hidrofóbica de bajo pH por el uso de un tampón de elución en un pH entre aproximadamente 2.5 y 4.5, en forma típica se lleva a cabo a bajas concentraciones de sal (por ej., de aproximadamente 0 a 0.25M de sal).

También están incluidos ácidos nucleicos que se hibridan bajo condiciones de bajo, moderado, y alto rigor, de acuerdo con lo definido en la presente, para toda o una porción (por ej., la porción que codifica la región variable) de la secuencia de nucleótido representada por secuencias de polinucleótidos aisladas que codifican un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la presente invención. La porción de hibridación del ácido nucleico de hibridación en forma típica tiene al menos 15 (por ej., 20, 25, 30 o 50) nucleótidos de longitud. La porción de hibridación del ácido nucleico de hibridación es al menos 80%, por ej., al menos 90%, al menos 95%, o al menos 98%, idéntica a la secuencia de una porción de todo un ácido nucleico que codifica un polipéptido anti-IL-36R (por ej., una región variable de cadena pesada o cadena ligera), o su complemento. Los ácidos nucleicos de hibridación del tipo descripto en la presente se pueden utilizar, por ejemplo, como una sonda de clonación, un cebador, por ej., un cebador de PCR, o una sonda de diagnóstico.

Usos No Terapéuticos Los anticuerpos descriptos en la presente son útiles como agentes de purificación de afinidad. En este proceso, los anticuerpos están inmovilizados en una fase sólida tal como una resina de Proteína A, por el uso de métodos muy conocidos en la técnica. El anticuerpo inmovilizado se pone en contacto con una muestra que contiene la proteína IL-36R (o fragmento de la misma) para ser purificado, y a partir de ese entonces el soporte se lava con un solvente adecuado que eliminará sustancialmente todo el material en la muestra excepto la proteína IL-36R, que está unida al anticuerpo inmovilizado. Finalmente, el soporte se lava con otro solvente adecuado que liberará la proteína IL-36R del anticuerpo.

Los anticuerpos anti-IL-36R, por ejemplo los anticuerpos anti-IL-36R humanizados, también son útiles en ensayos de diagnóstico para detectar y/o cuantificar la proteína IL-36R, por ejemplo, para detectar la expresión de IL-36R en células específicas, tejidos, o suero. Los anticuerpos anti-IL-36R se pueden utilizar en forma de diagnóstico para monitorear, por ejemplo, el desarrollo o progresión de una enfermedad como parte del procedimiento de ensayos clínicos para, por ej., determinar la eficacia de un tratamiento y/o régimen de prevención dado. La detección se puede facilitar por medio del acoplamiento del anticuerpo anti-IL-36R. Los ejemplos de sustancias detectables incluyen varias enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscent.es, materiales radiactivos, metales emisores de positrones por el uso de varias tomografías de emisión de positrones, e iones metálicos paramagnéticos no radiactivos. Véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos Núm. 4.741.900 para iones metálicos que se pueden conjugar a anticuerpos para su uso como diagnósticos de acuerdo con la presente invención.

Los anticuerpos anti-IL-36R se pueden utilizar en métodos para el diagnóstico de un trastorno asociado a IL-36R (por ej., un trastorno caracterizado por una expresión anormal de IL-36R) o para determinar si un sujeto tiene un riesgo aumentado de desarrollar un trastorno asociado a IL-36R. Tales métodos incluyen poner en contacto una muestra biológica de un sujeto con un anticuerpo IL-36R y detectar la unión del anticuerpo a IL-36R. Por medio de "muestra biológica" se pretende cualquier muestra biológica obtenida de un individuo, línea celular, cultivo de tejido, u otra fuente de células que potencialmente expresa IL-36R. Los métodos para obtener biopsias de de tejido y fluidos corporales de mamíferos son muy conocidos en la técnica.

En algunas realizaciones, el método puede comprender además la comparación del nivel de IL-36R en una muestra de paciente con una muestra de control (por ej., un sujeto que no tiene un trastorno asociado a IL-36R) para determinar si el paciente tiene trastorno asociado a IL-36R o está en riesgo de desarrollar un trastorno asociado a IL-36R.

En algunas realizaciones será ventajoso, por ejemplo, para propósitos de diagnóstico etiquetar el anticuerpo con un resto detectable. Están disponibles numerosas etiquetas detectables, que incluyen radioisótopos, etiquetas fluorescentes, etiquetas de sustratos de enzimas y similares. La enzima puede estar conjugada en forma indirecta con el anticuerpo por el uso de varias técnicas conocidas. Por ejemplo, el anticuerpo se puede conjugar con biotina y cualquiera de las tres amplias categorías de etiquetas mencionadas con anterioridad se puede conjugar con avidina, o viceversa. La biotina se une en forma selectiva a avidina y por lo tanto, la etiqueta se puede conjugar con el anticuerpo en esta manera indirecta. En forma alternativa, para lograr una conjugación indirecta de la etiqueta con el anticuerpo, el anticuerpo se puede conjugar con un hapteno pequeño (tal como digoxina) y uno de los diferentes tipos de etiquetas mencionadas con anterioridad se conjuga con un anticuerpo anti-hapteno (por ej., un anticuerpo anti-digoxina). De ese modo, se puede lograr la conjugación indirecta de la etiqueta con el anticuerpo.

Las etiquetas de radioisótopos representativas incluyen 35S, 14C, 125l, 3H, e 1311. El anticuerpo se puede etiquetar con el radioisótopo, por el uso de las técnicas que se describen en, por ejemplo, Current Protocols in Immunology, Volúmenes 1 y 2, 1991 , Coligen et al., Ed. Wiley-lnterscience, New York, N.Y., Pubs. La radiactividad se puede medir, por ejemplo, por medio de recuento de escintilación.

Las etiquetas fluorescentes representativas incluyen etiquetas derivadas de quelatos terrosos raros (quelatos de europio) o fluoresceína y sus derivados, rodamina y sus derivados, dansilo, Lisamina, ficoeritrina, y Texas Red están disponibles. Las etiquetas fluorescentes se pueden conjugar al anticuerpo a través de técnicas conocidas, tales como aquellas reveladas en Current Protocols in Immunology, por ejemplo. La fluorescencia se puede cuantificar por el uso de un fluorímetro.

Existen diversas etiquetas de sustratos de enzimas bien caracterizadas conocidas en el arte (véase, por ejemplo, la Patente Estadounidense N° 4.275.149 para una revisión). La enzima en general cataliza una alteración química del sustrato cromogénico que puede medirse utilizando diversas técnicas. Por ejemplo, la alteración puede ser un cambio de color en un sustrato que puede medirse en forma espectrofotometrica. Alternativamente, la enzima puede alterar la fluorescencia o quimioluminiscencia del sustrato. Las técnicas para cuantificar un cambio en la fluorescencia se describen más arriba. El sustrato quimioluminiscente se vuelve electrónicamente excitado por una reacción química y después puede emitir luz que puede medirse, utilizando un quimioluminómetro, por ejemplo, o dona energía a un aceptor fluorescente.

Los ejemplos de etiquetas enzimáticas incluyen luciferasas tales como luciferasa de luciérnaga y luciferasa bactriana (Patente Estadounidense N° 4.737.456), luciferina, 2-3-dihidroftalazinadionas, malato deshidrogenasa, ureasa, peroxidasa tal como la peroxidasa de rábano (HRPO), fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, glucoamilasa, lisozima, oxidasas de sacáridos (tal como glucosa oxidasa, galactosa oxidasa, y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa), oxidasas heterociclicas (tal como uricasa y xantina oxidasa), la lactoperoxidasa, la microperoxidasa y similares. Las técnicas para la conjugación de enzimas con anticuerpos se describen, por ejemplo, den O'Sullivan et al., 1981 , Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166.

Los ejemplos de combinaciones de enzima y sustrato incluyen, por ejemplo: peroxidasa de rábano (HRPO) con peróxido de hidrogeno como sustrato, en donde el peróxido de oxigeno hidrogeno oxida una tintura precursora tal como ortofenilen diamina (OPD) o hidrocloruro de 3,3', 5,5'-tetrametil benzidina (TMB)); fosfatasa alcalina (AP) con para-Nitrofenil fosfato como sustrato cromogenico; y ß-D-galactosidasa (ß-D-Gal) con un sustrato cromogenico tal como p-nitrofenil- -D-galactosidasa o sustrato fluorogenico 4-metilumbeliferil- -D-galactosidasa.

Otras numerosas combinaciones enzima-sustrato se encuentran disponibles los expertos en la materia. Para una revisión general de estos, véanse la Patente Estadounidense N° 4.275.149 y Patente Estadounidense N° 4.318.980.

En otra realización, el anticuerpo anti-IL-36R humanizado se utiliza sin etiquetar y es detectado con un anticuerpo etiquetado que se une al anticuerpo anti-IL-36R humanizado.

Los anticuerpos descritos en la presente pueden empelarse en cualquier método de ensayo conocido, tal como ensayos de unión competitiva, ensayos sándwich directos e indirectos, y ensayos de inmunoprecipitación. Véase, por ejemplo, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, páginas 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).

El anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo pueden utilizarse para inhibir la unión del ligando al receptor IL-36. Dichos métodos comprenden administrar un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de los mismos a una célula (por ejemplo, una célula de mamífero) o medio celular, por el que la señalización mediada por el receptor IL-36 es inhibida. Estos métodos pueden realizarse \n vitro o in vivo. Por "medio celular" se quiere decir el tejido, medio, o matriz extracelular que rodea una célula. El anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo se administra al medio celular de una célula en tal manera que el anticuerpo o fragmento es capaz de la unión a las moléculas IL-36R fuera de y que rodean la célula, por ello, evitando la unión del ligando IL-36 a su receptor.

Kits de diagnóstico Un anticuerpo anti-IL-36R puede utilizarse en un kit de diagnóstico, es decir, una combinación empaquetada de reactivos en cantidades predeterminadas con instrucciones para llevar a cabo el ensayo de diagnóstico. Cuando el anticuerpo es etiquetado con una enzima, el kit puede incluir sustratos y cofactores requeridos por la enzima tal como un sustrato precursor que proporciona el cromóforo o fluoróforo detectable. Además, otro aditivos pueden incluirse tales como estabilizantes, tampones (por ejemplo un tampón de bloqueo o tampón de lisis), y similares. Las cantidades relativas de los diversos reactivos pueden variarse ampliamente para proporcionar concentraciones en solución de los reactivos que optimizan sustancialmente la sensibilidad del ensayo. Los reactivos pueden proporcionarse como polvos secos, habitualmente liofilizados, incluyendo excipientes que en disolución proporcionarán una solución de reactivo que tiene la concentración apropiada.

Usos terapéuticos En otra realización, un anticuerpo anti-IL-36R humanizado divulgado en la presente es útil en el tratamiento de diversos trastornos asociados a la expresión de IL-36R según lo que se describe en la presente. Los métodos para tratar un trastorno asociado a IL-36R comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-IL-36R humanizado a un sujeto que necesita la misma.

El anticuerpo anti-IL-36R humanizado o agente se administra mediante cualquier medio apropiado, incluyendo la administración parenteral, subcutánea, ¡ntraperitoneal, intrapulmonar, y intranasal, y, si se desea tratamiento inmunosupresor local, la administración intralesional (incluyendo perfusión o contacto de otra manera del injerto con el anticuerpo ante del transplante). El anticuerpo anti-IL-36R humanizado o agente puede administrarse, por ejemplo, como una infusión o como un bolo. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, ¡ntraperitoneal, o subcutánea. Además, el anticuerpo anti-IL-36R humanizado se administra apropiadamente por infusión por pulso, particularmente con dosis reductoras del anticuerpo. En un aspecto, la dosificación es proporcionada por inyecciones, mucho más preferentemente inyecciones intravenosas o subcutáneas, dependiendo en parte de si la administración es breve o crónica.

Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosificación apropiada del anticuerpo dependerá de una variedad de factores tal como el tipo de enfermedad a ser tratada, según lo definido más arriba, la severidad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo se administra para fines preventivos o terapéuticos, terapia previa, la historia clínica del paciente y la respuesta al anticuerpo, y el criterio del médico que atiende. El anticuerpo se administra apropiadamente al paciente en una vez o durante una serie de tratamientos.

Dependiendo del tipo y severidad de la enfermedad, aproximadamente 1 pg/kg a 20 mg/kg (por ejemplo, 0.1-15 mg/kg) del anticuerpo es una dosificación inicial candidata para la administración al paciente, si, por ejemplo, mediante una o más administraciones separadas, o por infusión continua. Una dosificación diaria típica puede variar de aproximadamente 1 pg/kg a 100 mg/kg o más, dependiendo de lo factores mencionados más arriba. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, el tratamiento es obtenido hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, otros regímenes de dosificación pueden ser útiles. El avance de esta terapia es fácilmente monitoreado por técnicas convencionales y ensayos. Un régimen de dosificación ejemplar es divulgado en el documento WO 94/04188.

El término "supresión" se utiliza en la presente en el mimo contexto que "reducción" y "alivio" para significar una disminución de una o más características de la enfermedad.

La composición del anticuerpo se formulará, dosificará, y administrará en una forma consistente con la buena práctica médica. Los factores para la consideración en este contexto incluyen el trastorno particular que está siendo tratado, el mamífero particular que está siendo tratado, la afección clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el método de administración, el cronograma de administración, y otro factores conocidos para los practicantes médicos. La "cantidad terapéuticamente efectiva" del anticuerpo que debe ser administrado estará regida por dichas consideraciones, y es la cantidad mínima necesaria para prevenir, reducir, o tratar el trastorno asociado a la expresión de IL-36R.

El anticuerpo no necesita ser, pero es opcionalmente, formulado con uno o más agentes actualmente utilizados para prevenir o tratar el trastorno en cuestión. La cantidad efectiva de ducho otros agentes depende de la cantidad de anticuerpo anti-IL-36R23p19 humanizado presente en la formulación, el tipo de trastorno o tratamiento, y otros factores debatidos más arriba. Estos en general se utilizan en las mismas dosificaciones y con vías de administración tal como se utilizan en la presente o aproximadamente de 1 a 99% de las dosificaciones empleadas hasta aquí.

Composiciones farmacéuticas y administración de las mismas Una composición que comprende un agente de unión a IL-36R (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-36R) puede administrarse a un sujeto que tiene o está en riesgo de tener un trastorno inmunológico, trastorno respiratorio o un cáncer. La invención además proporciona el uso de un agente de unión a IL-36R (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-36R) en la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de un cáncer, trastorno respiratorio o trastorno inmunológico. El término "sujeto" tal como se utiliza én la presente significa cualquier paciente mamífero al que se le puede administrarse un agente de unión a IL-36R, incluyendo, por ejemplo, seres humanos y mamíferos no humanos, tales como primates, roedores, y perros. Los sujetos específicamente previstos para el tratamiento utilizando los métodos descritos en la presente incluyen seres humanos. Los anticuerpos o agentes pueden administrarse solos o en combinación con otras composiciones en la prevención o tratamiento del trastorno inmunológico, trastorno respiratorio o cáncer. Dichas composiciones que pueden administrarse en combinación con los anticuerpos o agentes incluyen metotrexato (MTX) e inmunomoduladores, por ejemplo anticuerpos o moléculas pequeñas.

Los ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son aquellos que comprenden un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena liviana de cualquiera de SEC ID NO: 1-10. Los ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada de cualquiera de SEC ID NO: 11-20.

Otros ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena liviana de cualquiera de SEC ID NO: 76-86. Los anticuerpos preferentes para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada de cualquiera de SEC ID NO: 87-101.

Otros ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo que tiene la región variable de cadena liviana y región variable de cadena pesada de cualquiera de SEC ID NO: 77 y 89, SEC ID NO: 80 y 88, SEC ID NO: 80 y 89, SEC ID NO: 77 y 87, SEC ID NO: 77 y 88, SEC ID NO: 80 y 87, SEC ID NO: 86 y 100, SEC ID NO: 85 y 101 , o SEC ID NO: 85 y 10.

Otros ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden un anticuerpo humanizado que tiene la secuencia de aminoácidos de región de cadena liviana de cualquiera de SEC ID NO: 115, 118, 123 o 124. Los anticuerpos preferentes para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden anticuerpo humanizado que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada de cualquiera de SEC ID NO: 125, 126, 127, 138 o 139.

Otros ejemplos de anticuerpos para su uso en dichas composiciones farmacéuticas son también aquellos que comprenden Anticuerpo B1 , Anticuerpo B2, Anticuerpo B3, Anticuerpo B4, Anticuerpo B5, Anticuerpo B6, Anticuerpo C1 , Anticuerpo C2 o Anticuerpo C3.

Se conocen diversos sistemas de administración y pueden utilizarse para administrar el agente de unión a IL-36R. Los métodos de introducción incluyen pero no se limitan a la vías intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural, y oral. El agente de unión a IL-36R puede administrarse, por ejemplo por infusión, bolo o inyección, y pueden administrarse junto con otros agentes biológicamente activos tales como agentes quimioterapéuticos. La administración puede ser sistémica o local. En realizaciones preferentes, la administración es por inyección subcutánea. Las formulaciones dichas inyecciones pueden prepararse en por ejemplo jeringas prellenadas que pueden administrase una vez semana de por medio.

En realizaciones específicas, la composición del agente de unión a IL-36R se administra por inyección, por medio de un catéter, por medio de un supositorio, o por medio de un implante, el implante siendo un material poroso, no poroso, o gelatinoso, incluyendo una membrana, tal como una membrana elástica, o una fibra. Típicamente, al administrar la composición, se utilizan materiales en los que el anticuerpo anti-IL-36R o agente no se absorba.

En otras realizaciones, el anticuerpo antí-IL-36R o agente se administra en un sistema de liberación controlada. En una realización, puede utilizarse una bomba (véase, por ejemplo, Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crít. Ref. Biomed. Eng. 14:201 ; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321 :574). En otra realización, pueden utilizarse materiales poliméricos. (véase por ejemplo, Medical Applications of Controlled Reléase (Langer y Wise eds., CRC Press, Boca Ratón, Fia., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design y Performance (Smolen y Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger y Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61. Véase también Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351 ; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71 :105.) Otro sistema de liberación controlada se debaten, por ejemplo, en Langer, supra.

Un agente de unión a IL-36R (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-36R) puede administrarse como composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva del agente de unión y uno o más ingredientes compatibles para uso farmacéutico.

En realizaciones típicas, la composición farmacéutica se formula de acuerdo con procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para la administración intravenosa o subcutánea a seres humanos. Típicamente, las composiciones para la administración por inyección son soluciones en tampón acuoso isotónico estéril. Cuando es necesario, el producto farmacéutico también puede incluir un agente solubilizante y un anestésico local tal como lignocaina para reducir el dolor en el sitio de la inyección. En general, los ingredientes son suministrados en forma separada o mixta juntos en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado tal como una ampolla o sachette indicando la cantidad de agente activo. Cuando el producto farmacéutico debe administrarse por infusión, el mimo puede dispensarse con una botella de infusión que contiene solución salina o agua de grado farmacéutico estéril. Cuando el producto farmacéutico se administra por inyección, una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina puede proporcionarse de manera que los ingredientes puedan mezclarse previo a la administración.

Además, la composición farmacéutica puede proporcionarse como un kit farmacéutico que comprende (a) un recipiente que contiene un agente de unión a IL-36R (por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-36R) en forma liofilizada y (b) un segundo recipiente que contienen un diluyente aceptable para uso farmacéutico (por ejemplo, agua estéril) para inyección. El diluyente aceptable para uso farmacéutico puede utilizarse para la reconstitución o dilución del anticuerpo anti-IL-36R o agente liofilizado. Opcionalmente asociada a dicho/s recipiente/s puede haber una nota en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, uso o venta de los productos farmacéuticos o biológicos, cuya nota refleje la aprobación por la agencia de la fabricación, uso o venta para la administración humana.

La cantidad del agente de unión a IL-36R (por ejemplo, anticuerpo anti-IL-36R) que es efectiva en el tratamiento o prevención de un trastorno inmunológico o cáncer puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Además, los ensayos in vitro pueden empelarse opcionalmente para ayudar a identificar los intervalos de dosificación óptimos. La dosis precisa que debe ser empleada en la formulación también dependerá de la vía de administración, y el estadio del trastorno inmunológico o cáncer, y deben decidirse de acuerdo con el criterio del practicante y la circunstancias de cada paciente. Las dosis efectiva pueden extrapolarse de la curvas de respuesta a la dosis obtenidas de los sistemas de ensayos de modelo animal o in vitro.

En general, la dosificación de un anticuerpo anti-IL-36R o agente de unión a IL-36R administrado a un paciente con un trastorno inmunológico o cáncer que expresa IL-36R es típicamente aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg del peso corporal del sujeto. La dosificación administrada a un sujeto es aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 15 mg/kg, o aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del sujeto.

Las dosis ejemplares incluyen, pero no se limitan a, de 1 ng/kg a 100 mg/kg. En algunas realizaciones, una dosis es aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 4 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 6 mg/kg, aproximadamente 7 mg/kg, aproximadamente 8 mg/kg, aproximadamente 9 mg/kg, aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 11 mg/kg, aproximadamente 12 mg/kg, aproximadamente 13 mg/kg, aproximadamente 14 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg o aproximadamente 16 mg/kg. La dosis puede administrarse, por ejemplo, diariamente, una vez por semana (semanalmente), dos veces por semana, tres veces por semana, cuatro veces por semana, cinco veces por semana, seis veces por semana, bisemanalmente o mensualmente, cada dos meses, o cada tres meses. En realizaciones específicas, la dosis es aproximadamente 0.5 mg/kg/semana, aproximadamente 1 mg/kg/semana, aproximadamente 2 mg/kg/semana, aproximadamente 3 mg/kg/semana, aproximadamente 4 mg/kg/semana, aproximadamente 5 mg/kg/semana, aproximadamente 6 mg/kg/semana, aproximadamente 7 mg/kg/semana, aproximadamente 8 mg/kg/semana, aproximadamente 9 mg/kg/semana, aproximadamente 10 mg/kg/semana, aproximadamente 11 mg/kg/semana, aproximadamente 12 mg/kg/semana, aproximadamente 13 mg/kg/semana, aproximadamente 14 mg/kg/semana, aproximadamente 15 mg/kg/semana o aproximadamente 16 mg/kg/semana. En algunas realizaciones, la dosis varía de aproximadamente 1 mg/kg/semana a aproximadamente 15 mg/kg/semana.

En algunas realizaciones, la composición farmacéuticas que comprende el agente de unión a IL-36R además puede comprender un agente terapéutico, conjugado o no conjugado con el agente de unión. El anticuerpo anti-IL-36R o agente de unión a IL-36R puede coadministrarse en combinación con uno o más agentes terapéuticos para el tratamiento o prevención de trastornos inmunológicos o cánceres.

Dicha administración de terapia de combinación puede tener un efecto aditivo o sinérgico en los parámetros de enfermedad (por ejemplo, severidad de un síntoma, el número de síntomas, o frecuencia de recaída).

Con respecto a los regímenes terapéuticos para la administración combinatoria, en una realización especifica, un anticuerpo anti-IL-36R o agente de unión a IL-36R se administra concurrentemente con un agente terapéutico. En otra realización específica, el agente terapéutico se administra previo o posterior a la administración del anticuerpo anti-IL-36R o agente de unión a IL-36R, en al menos una hora y hasta varios meses, por ejemplo al menos una hora, cinco horas, 12 horas, un día, una semana, un mes, o tres meses, previo o posterior a la administración del anticuerpo anti-IL-36R o agente de unión a IL-36R.

Artículos de fabricación En otro aspecto, se incluye un artículo de fabricación que contiene materiales útiles para el tratamiento de los trastornos descritos más arriba. El artículo de fabricación comprende un recipiente y una etiqueta. Los recipientes apropiados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, y tubo de ensayo. Los recipientes pueden formarse de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente tiene una composición que es efectiva para tratar la afección y puede tener un puerto de acceso estéril. Por ejemplo, el recipiente puede tener una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica. El agente activo en la composición es el anticuerpo anti-IL-36R humanizado. La etiqueta en o asociada al recipiente indica que la composición es utilizada para tratar la afección de elección. El artículo de fabricación además puede comprender un segundo recipiente que comprende el uso farmacéutico, tal como solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer, y solución de dextrosa. Además puede incluir otros materiales deseable desde un punto de vista del usuario y comercial, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas, jeringas, y prospecto con instrucciones para su uso.

La invención además se describe en los siguientes ejemplos, que no tienen como objeto limitar el alcance de la invención.

Los anticuerpos de la presente invención además se describen en los Ejemplos más abajo.

Ejemplos Ejemplo 1 : Identificación de anticuerpos IL-36R anti-humanos Se inmunizaron múltiples cepas de ratón con proteína IL-36R humano producido en forma recombinante (ECD - dominio extracelular: aminoácidos 20-332 del Acceso al Genbank #NP_003845) y aquellos que generaron una fuerte respuesta a la titulación tomada en la generación de hibridoma tradicional. Los productos de fusión que producen una fuerte unión al IL-36R humano (ECD) aún no unión a L-1 R1 humano (el miembro de la familia IL-1 R más relacionado) se clonaron y seleccionaron nuevamente. Las múltiples hibridomas se identificaron para producir anticuerpos monoclonales que se unieron y neutralizaron la señalización de IL-36R (véanse los ejemplos 2, 3, y 4). Los dominios variables se clonaron de los hibridomas utilizando grupos de cebador PCR estándar. Los dominios variables y CDRs específicas de anticuerpos monoclonales representativos se describen más arriba. Todos los anticuerpos de ratón se convirtieron en anticuerpos quimérico que consistían en dominios variables de ratón en dominios constantes humanos (hu IgGI KO / kappa). El hu IgGI KO (knock out) tiene dos mutaciones de reemplazo (Leu234Ala y Leu235Ala) que eliminan la actividad de ADCC y CDC reduciendo funciones efectoras tales como FcyR y unión complementaria. Los dominios variables de los anticuerpos de ratón y quiméricos son idénticos. Los anticuerpos quiméricos son generados para confirmar la función del anticuerpo y para asegurar que se ha obtenido la secuencia de dominio variable correcta.

Ejemplo 2: Afinidades de unión molecular de anticuerpos IL-36R antihumanos identificados de ratón A) La cinética y afinidades de unión de anticuerpos anti-IL-36R que se unen a IL-36R humano recombinante se midieron utilizando el Proteon (Bio-Rad, Hercules, CA) utilizando material generado de hibridoma siguiendo la purificación de columna simple. Las afinidades de unión de todos los candidatos de ratón a IL-36R humano corrida en una concentración de recubrimiento superficial con IL-36R simple se estimó que eran <100pM. Las afinidades de unión de los anticuerpos de ratón a IL-36R humano corridas en 7 diferentes densidades superficiales (globalmente ajustadas) se muestran en la Tabla 1. La unión de IgGs anti-IL36R quiméricos es equivalente a los respectivos candidatos de ratón.

Tabla 1 : Afinidad de unión de anticuerpos IL-36R anti- humano de ratón.

B) Selectividad molecular sobre IL-36R de ratón y IL-1 R1 humano Los anticuerpos de ratón y quiméricos anti-IL-36R también se inyectaron sobre una superficie de IL-36R de ratón o IL-1 R1 humano en una concentración de 100 nM. La señal de unión a IL-36R de ratón y a IL-1 R1 humano para estos anticuerpos medida utilizando el Fortebio Octet (Fortebio, Menlo Park, CA) es cero, lo que indica que estos anticuerpos se unen electivamente al IL-36R humano. La unión de los anticuerpos anti-IL-36R a IL-36R humano también se analizó en presencia de 50% de suero humano y no se observó ningún efecto significativo de suero en la tasa de unión demostrando alta especificidad.

Ejemplo 3: Potencia de anticuerpos anticuerpos IL-36R anti-humanos de ratón y quiméricos en ensayos funcionales humanos y de cynomolgus Protocolos: Ensayo de liberación de pNFKB/CitoQuina de células humanas NCI/ADR-RES Reactivos: R&D Systems: rh IL363 truncado R&D Systems: rh IL36y truncado R&D Systems: rh IL36a truncado: Kit de lisado celular completo MA6000 Fosfo- NF B (Ser536) Meso Scale Diagnostics, LLC Ensayo de 4 manchas de 96 pozos humano adaptado MSD ELISA custom Meso Scale Diagnostics, LLC Las células NCI/ADR-RES se colocaron en placas en 45000 células/pozo, en medio RPMI con suero al 0.25% en una placa de 96 pozos. Se utilizó una placa para el análisis de PNFKB y otra para la liberación de citoquina. Las placas después se incubaron durante toda la noche 37°C, 5% CO2. Los ligandos (IL36 a, ß o y) y anticuerpos se diluyeron en 4x la concentración deseada en medio privado de suero (SS). Los antagonistas (anticuerpos) se añadieron a las células previo al ligando. Para pNFKB: células NCI +/- ligando y antagonista se incubaron durante 1 hora 37°C, 5% C02. El medio después se aspiró y las células se lisaron en 100 µ?/???? Tampón de lisis completa en hielo 30 minutos. El lisado después se centrifugó a 2500RP , 20 minutos, 4°C, y se transfirió a una placa MSD ELISA y se ensayó en cuanto a PNF B según el protocolo del fabricante. Para la liberación de citoquina: 18-24 horas después de la estimulación, los sobrenadantes se transfirieron a una placa MSD ELISA y se ensayaron en cuanto a citoquina según el protocolo del fabricante.

Protocolo: DNFKB (S536) MSD ELISA para células IL-36R de cvnomolgus BaF/3 Las células IL-36R de cynomolgus BaF/3 se colocaron en placas en 90,000 células/pozo en medio SS en una placa de 96 pozos. 100 ul de medio se añadieron a los pozos de control. Los antagonistas (anticuerpos) se diluyeron en 4x la concentración deseada y se añadieron 50 µ? a cada pozo. Los ligandos (IL36 a, ß o y) se diluyeron en 4x la concentración deseada en medio SS y 50ul se añadieron a cada pozo (para el volumen final de 200 µ?). Las placas se incubaron durante 15 minutos, 37°C, 5% CO2. Las placas se centrifugaron brevemente, el medio se aspiró y las células se lisaron en 100 µ?/???? de tampón de lisis completa (véase protocolo MSD PNFKB) y se incubaron en hielo 30 minutos. Los lisados después se centrifugaron a 2500RPM, 20 minutos, 4°C y se transfirieron a placa MSD ELISA. Los lisados después se evaluaron en cuanto a la actividad de PNFKB utilizando el kit MSD según lo que se describe más arriba.

Resultados: los resultados de IC9o para los anticuerpos IL-36R anti-humanos de ratón en ensayos funcionales de seres humanos (pNFKB y liberación de citoquina) y un ensayo funcional de cynomologus (pNFkB) con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 2. Los resultados de IC90 para los anticuerpos IL-36R anti-humanos quiméricos en ensayos funcionales de seres humanos (pNFKB y liberación de citoquina) y un ensayo funcional en cynomologus (PNFKB) con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 3.

Tabla 2: Potencia de anticuerpos de ratón en ensayos de célula funcionales (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Tabla 3: Potencia de anticuerpos quiméricos en ensayo de células funcionales (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 4: Unión de anticuerpos IL-36R anti-humanos de ratón a célula que expresan IL-36R humano Protocolo para la unión de anticuerpos por citometría de flujo Las células HEK293 transfectadas con IL-36R humano de longitud completa o células NCI/ADR-RES se pasaron durante 24 horas previas al manchado. Las células se sacaron de los frascos enjuagando con 10 mi de 5 mM EDTA en PBS, y después se incubaron a 37°C durante 10 minuto con 10 mi adicionales de 5 mM EDTA y 2.5 mi de Accumax para desamontonar/dispersar las células. Los anticuerpos después se diluyeron hasta las concentraciones especificadas en PBS + 2% BSA, y la célula se incubaron durante 20 minutos a temperatura ambiente. El anticuerpo en exceso después se lavó añadiendo 200 µ? de PBS y después se centrifugó. El reactivo secundario después se añadió en 50 µ? por pozo y las células se incuban durante 15 minutos a temperatura ambiente y después se lavan como más arriba. Las células se re suspendieron en 200 µ? de PBS y se analizaron por citometría de flujo. Los EC5o de unión para la unión de los anticuerpos IL-36R anti-humanos de ratón a transfectantes HEK de IL-36R humano se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4 Ejemplo 5: Producción de anticuerpos IL-36R humanizados A fin de reducir la potencial inmunogenicidad después de la administración en el hombre los anticuerpos IL-36R anti-humanos de ratón monoclonales 81 B4 y 73C5 se humanizaron a través de un proceso de diseño y detección. Las secuencias marco humanas se seleccionaron para los candidatos de ratón en base a la homología marco, estructura CDR, residuos canónicos conservados, residuos de empaquetado de interfaz conservada y otros parámetros. La sustitución específica de residuos de aminoácidos en estas posiciones marco puede mejorar diversos aspectos del desempeño de anticuerpos incluyendo la afinidad de unión y/o estabilidad, respecto de aquel demostrado en anticuerpos humanizados formados por "intercambio directo" de las CDRs o HVLs en las regiones marco de línea germinal humana. Fabs que mostraron mejor o igual unión y una mejora en la expresión en comparación con el Fab progenitor quimérico se seleccionaron para la caracterización adicional. Las regiones variables humanizadas representativas para el anticuerpo 81 B4 y 73C5 se muestran en la sección de especificación. De esta manera, el Anticuerpo B1 al Anticuerpo B6 fueron anticuerpos humanizados obtenidos del anticuerpo 81 B4 de ratón (clonado en una estructura principal de KO (KO=knock-out)/kappa lgG1 humano. Los anticuerpos B1 a B6 se muestran en la Tabla A. El Anticuerpo C1 a Anticuerpo C3 eran anticuerpos humanizados obtenidos del anticuerpo 73C5 de ratón (clonado en una estructura principal de KO (KO=knock-out)/kappa lgG1 humano. Los Anticuerpos C1 a 03 se muestran en la Tabla C.

Ejemplo 6: Unión of anticuerpos IL-36R humanizados La cinética y afinidades de unión de la unión de anticuerpos anti-IL- 36R humanizados a IL-36R humano recombinante se midieron utilizando el Proteon (Bio-Rad, Hercules, CA). IL-36R humano se inmovilizo en 5 densidades superficiales diferentes y los resultados se analizaron utilizando ajuste global (véase la Tabla 5 que muestra los resultados de tres experimentos). La unión de los anticuerpos humanizados a células NCI/ADR-RES a través de la citometría de flujo se midió utilizando el protocolo descrito en el Ejemplo 4 (véase la Tabla 5 para los valores ECg0).

Tabla 5 -Afinidades celular y molecular de unión de anticuerpos IL-36R antihumanos humanizados.

Ejemplo 7: Potencia de anticuerpos IL-36R anti-humanos humanizados en ensayos humanos funcionales El bloqueo funcional de la señalización con las variantes de IL-36R humanizado desde las células NCI/ADR-RES humanas se ensayó según lo que se describe en el Ejemplo 3. Los resultados de ICgo para los anticuerpos IL-36R anti-humanos humanizados en los ensayos funcionales de seres humanos (PNF B y liberación de citoquina) con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 6.

Tabla 6: Potencia [IC90 (nM)] de anticuerpos humanizados en ensayo de células NCI/ADR-RES funcionales humanas (Promedios iguales de resultados de al menos 2 experimentos. Los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 8: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de queratinocitos primarios humanos funcionales Protocolos: Ensayos de Liberación de citoguina/pNFkB queratinocitos epidérmicos primarios humanos Las células se colocaron en placas en 30,000 células/pozo en medio de cultivo en placas de 96 pozos y se incubaron durante toda la noche a 37°C, 5% CO2. Los ensayos después se realizaron según lo que se describe en el Ejemplo 3.

Resultados: Los resultados de IC90 para anticuerpos anti-IL-36R de ratón, quiméricos, y humanizados en ensayos de queratinocitos primarios humanos (liberación de pNFkB y IL-8) estimulados con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 7, Tabla 8, y Tabla 9, respectivamente.

Tabla 7 (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Tabla 8: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R quiméricos en ensayos de queratinocitos humanos primarios (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Tabla 9: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R humanizados en ensayos de queratinocitos humanos primarios (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 9 Potencia de anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de células epiteliales intestinales primarias humanas funcionales Protocolos: ensayos de liberación de pNFkB/ citoquina de células epiteliales Las células se colocaron en placas en 30,000 células/pozo en medio de cultivo en placa de 96 pozos y se incubaron durante toda la noche a 37°C, 5% CO2 Los ensayos después se realizaron según lo que se describe en el Ejemplo 3.

Resultados: Los resultados de IC90 para anticuerpos anti-IL-36R de ratón en ensayos de células epiteliales intestinales primarias humanas (liberación de pNFkB y IL-8) estimuladas con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 10.

Tabla 10: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R de ratón en ensayos de células epiteliales intestinales primarias humanas (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 10: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de miofibroblastos intestinales primarios humanos funcionales Protocolos: ensayos de liberación de PNFKB/ citoguina de miofibroblastos intestinales primarios humanos Las células se colocaron en placas en 30,000 células/pozo en medio de cultivo en placa de 96 pozos y se incubaron a 37°C, 5% C02. Los ensayos después se realizaron según lo que se describe en el Ejemplo 3.

Resultados: Los resultados de IC90 para anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de miofibroblastos intestinales primarios humanos (liberación de pNFkB y IL-8) estimuladas con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 1 1 y Tabla 12.

Tabla 11 : Potencia de anticuerpos anti-IL-36R de ratón y quiméricos en ensayos de miofibroblastos intestinales primarios humanos (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Tabla 12: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R humanizados en ensayos de miofibroblastos intestinales primarios humanos (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 11 : Potencia de anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de fibroblastos dérmicos primarios humanos funcionales Protocolos: ensayos de liberación de PNFKB/ citoguina de fibroblastos dérmicos primarios humanos Las células se colocaron en placas en 30,000 células/pozo en medio de cultivo en placa de 96 pozos y se incubaron durante toda la noche a 37°C, 5% CO2. Los ensayos después se realizaron según lo que se describe en el Ejemplo 3.

Resultados: Los resultados de IC90 para anticuerpos anti-IL-36R en ensayos de fibroblastos dérmicos primarios humanos (liberación de pNFkB y IL-8) estimulados con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 13 y Tabla 14. Tabla 13: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R de ratón y quiméricos en ensayos de fibroblastos dérmicos primarios humanos (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Tabla 14: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R humanizados en ensayo de fibroblastos dérmicos primarios humanos (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 12: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R se ratón en ensayos de células tubulares proximales primarias humanas funcionales Protocolo: ensayos de liberación de pNFkB/ citoguina de células tubulares proximales primarías humanas Las células se colocaron en placas en 5,000 células/pozo en medio de cultivo en placa de 96 pozos y se incubaron durante toda la noche a 37°C, 5% CO2. Los ensayos después se realizaron según lo que se describe en el Ejemplo 3.

Resultados: Los resultados de IC90 para anticuerpos anti-IL-36R de ratón, quiméricos y humanizados en ensayos de células tubulares proximales primarias humanas (liberación de IL-8) estimuladas con ligandos IL-36 humanos se muestran en la Tabla 15.

Tabla 15: Potencia de anticuerpos anti-IL-36R de ratón y humanos en ensayos de células tubulares proximales primarias humanas (los controles isotipos demostraron ninguna inhibición de la actividad en la mayor concentración ensayada para las muestras) Ejemplo 13: Inhibición de la producción de IL-8 a partir de epidermis humana reconstruida estimulada con IL-36v Protocolo: epidermis reconstruida Los anticuerpos anti-IL-36R (1,5 pg/ml) se preincubaron con epidermis humana reconstruida y estimulada con IL-36y recombinante humano (20 ng/ml). IL-1 ß recombinante humano (20 ng/ml; R & D Systems) se utilizó como control positivo. Después de 24 horas en cultivo, los sobrenadantes celulares se recolectaron y se ensayaron en cuanto a IL-8 (los ensayos para IL-8 se describen en el Ejemplo 3). Las muestras se ensayaron por triplicado y el promedio pg/ml ± error estándar se muestra en la tabla más abajo (Tabla 16).

Tabla 16 Ejemplo 14: Inhibición de la expresión del gen S100A7 y S100A12 inducida por el ligando IL-36 en epidermis humana reconstruida La estimulación de la epidermis humana reconstruida con ligandos IL-36 agonísticos induce la expresión del gen S100A7 y S100A12. S100A7 y S100A12 son genes ubicados dentro del complejo de diferenciación epidérmica. Protocolo: La epidermis humana reconstruida se incubó con anticuerpos anti-IL-36R (1.5 pg/ml) y se estimuló con IL-36y recombinante humano (20 ng/ml). 1L-1 ß recombinante humano (20 ng/ml; R & D Systems) se utilizó como control positivo. Después de 24 horas en cultivo a 5% C02 y 37°C, los ARN se aislaron de la epidermis humana reconstruida y se ensayaron en cuanto a la expresión génica por reacción en cadena de transcriptasa-polimerasa inversa en tiempo real. La expresión relativa se calculó utilizando el método 2~&AC Las muestras se ensayaron por triplicado y el promedio de expresión ± error estándar se muestra en la tabla más abajo (Tabla 17).

Tabla 17 Ejemplo 15: Eficacia del anticuerpo anti-IL-36R en el modelo xenotransplante de psoriasis Protocolo: se obtuvieron las biopsias de piel sin lesión y sangre de 24 pacientes con psoriasis que fueron clínicamente diagnosticados por una dermatóloga. Las biopsias de piel se transplantaron en ratones NIH-lll inmunodeficientes y se permitió que sean injertado durante un período de cuatro a cinco semanas Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron de la sangre recolectada de cada donante en el momento de la biopsia para la inyección intradérmica en la piel injertada. Previo a la inyección, las PBMC se estimularon con 1 pg/ml de Staphylococcal Enterotoxin B (Toxin Technologies, Florida, EEUU) y 80 U/ml de IL-2 recombinante humano (Peprotech Inc., Oosterhout, los Países Bajos). Las PBMC autólogas se inyectaron por vía intradérmica con 7.5 x 10?5 de células en PBS para sincronizar la inducción de la inflamación de piel y el fenotipo de psoriasis. Tres emana después de la inyección de células, las biopsias se retiraron de los ratone y se analizaron por histología.

El manchado histológico se realizó en el tejido de piel crioconservado de todos los grupos. Las secciones transversales en diagonal (8 µ??), que cubrían todas las capas de la piel, se prepararon según lo que se describe en la Figura 4. Para la evaluación del espesor epidérmico, se seleccionaron en forma aleatoria dos secciones no seriales del centro de la biopsia y se mancharon con haematoxilina-eosina. Posteriormente, las secciones se evaluaron en una ampliación de 100 veces. Durante la longitud completa de la biopsia, las longitudes de los rebordes midieron en ambas secciones utilizando una cámara Olympus DP71 y software de obtención de imágenes CellAD (V2.7, Munster, Alemania).

La longitud de los rebordes se define como: la distancia entre el margen superior del estrato granuloso a la parte inferior del reborde. Las biopsias se clasificaron en forma aleatoria y ciega.

Lo resultados para el espesor epidérmico promedio y espesor epidérmico máximo para cada grupo de tratamiento se muestran en la Tabla 18. Los resultados para el cambio neto en el espesor epidérmico en cada grupo de tratamiento se muestran en la Tabla 19.

Tabla 18 Ejemplo 16: La inflamación pulmonar sub-crónica después de 3 semanas de exposición al humo de cigarrillo en 2 ratones knockout homocigotas similares al receptor de interleuquina-1 y de tipo salvaje Protocolo: 2 ratones similares al receptor de interleuquina-1 y de tipo salvaje se expusieron a humo de cigarrillo durante 3 semanas para inducir distrés pulmonar. Las semanas 1 y 2 consistieron en 5 días de exposición consecutiva, mientras que los ratones se expusieron durante 4 días consecutivos durante la semana 3. Las ratones se expusieron a 5 cigarrillos cada día con intervalos de 24 minutos de exposición al cigarrillo (16 minutos) y aire fresco (8 minutos). Dieciocho horas después de la exposición final, los ratones se lavaron con 2 x 0.8 mi de Solución de Sal de Hank (0.6mM EDTA). El sobrenadante y pélet celular se recolectaron del lavaje alveolar bronquial después de la centrifugación durante 10 minutos. Los recuentos de células neutrófila y macrófogas totales en el lavaje alveolar bronquial para cada grupo de exposición se muestran en la Tabla 20.

Tabla 20

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une a IL-36R humano en un KD igual a o < 0.1 nM.

2.- Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno es un anticuerpo monoclonal o fragmento de unión al antígeno del mismo.

3. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 y/o 2, en donde dicho anticuerpo o fragmento de unión al antígeno es un anticuerpo humanizado o fragmento de unión al antígeno del mismo.

4. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 3, que se une a IL-36R humano en un KD igual a o < 50 pM.

5. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 4, que no se une a IL-1R1 humano.

6. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 35, 102, 103, 104, 105 106 o 140 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

7. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 102 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

8. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 103 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

9. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 104 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

10.- Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 105 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

11.- Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 106 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

12.- Un anticuerpo ant¡-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 140 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62, 108, 109, 110 o 111 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

13. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82 o 83; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94 o 95.

14. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 87; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 88; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 77; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 89.

15. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 87; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 88; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 80; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 89.

16. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 o 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

17. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 84, 85 o 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 96, 97, 98, 99, 100 o 101.

18. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 85; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 100; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 85; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO:101.

19. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 100; o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 86; y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 101.

20. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120 o 121 ; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132 o 133.

21. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 115; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125.

22. - Un anticuerpo anti-IL-36Rde acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 115; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126.

23. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 15; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 127.

24. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 125.

25. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 18; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 126.

26. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el anticuerpo del mismo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 118; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 127.

27. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 122, 123 o 124; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID NO: 134, 135, 136, 137, 138 o 139.

28. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138.

29. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 123; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 139.

30. - Un anticuerpo anti-IL-36R de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el anticuerpo comprende una cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 124; y una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 138.

31. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 103 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

32. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 104(L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3).

33. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36(L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

34. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: a) una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 107 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3).

35. - Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende: una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 21 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 30 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 39 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 48 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 57 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 67 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 22 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 31 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 40 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 49 (H-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 58 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 68 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 23 (L-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 32 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 41 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 50 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 59 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 69 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 24 (L-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 33 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 42 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 51 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 60 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 70 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 25 (L-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 34 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 43 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 52 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 61 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 71 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 26 (L-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 35 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 44 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 53 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 62 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 72 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 63 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 27 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 36 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 45 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 54 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 64 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 73 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 28 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 37 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 46 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 55 (H-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 65 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 74 (H-CDR3); o una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 29 (L-CDR1); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 38 (L-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 47 (L-CDR3); y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 56 (H-CDR1 ); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 66 (H-CDR2); la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 75 (H-CDR3).

36.- Un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 11 ; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 2; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 12; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 3; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 3; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 4; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 14; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 5; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 15; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 6; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 16; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 7; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 17; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 8; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 18; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 9; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 19; o una proteína de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 10; y una proteína de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 20.

37. - Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36 y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

38. - Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36 o composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 37, para su uso en medicina.

39. - Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 38, en donde el uso en medicina es el uso en un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, de una enfermedad autoinmune, de una enfermedad respiratoria, de un trastorno metabólico, de un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis o de cáncer.

40. - Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 38 o 39, en donde el uso en medicina es el uso en un método para el tratamiento de psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica o espondilitis anquilosante.

41. - Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 38 a 40, en donde el uso en medicina es el uso en un método para el tratamiento de enfermedad inflamatoria de los intestinos.

42. - Un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno o composición farmacéutica de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 38 a 41 , en donde el uso en medicina es el uso en un método para el tratamiento de enfermedad de Crohn.

43. - Un método para tratar una enfermedad que comprende administrar el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 38, a un paciente que necesita el mismo, en donde la enfermedad se selecciona de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad respiratoria, un trastorno metabólico, un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis y cáncer.

44. - Un método de acuerdo con la reivindicación 43, en donde la enfermedad se selecciona de psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica y espondilitis anquilosante.

45. - Un método de acuerdo con la reivindicación 43 y/o 44, en donde la enfermedad es enfermedad de Crohn.

46. - Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia que codifica un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36, preferentemente una secuencia de ADN o ARN.

47. - Un polinucleótido aislado de acuerdo con la reivindicación 46, que codifica una secuencia según lo definido por una o más de SEC ID NOs. 1 a 140.

48. - Un vector que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 46 y/o 47, preferentemente un vector de expresión, más preferente un vector que comprende el polinucleótido de acuerdo con la invención en asociación funcional con una secuencia de control de expresión.

49. - Una célula huésped que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 46 y/o 47, y/o un vector de acuerdo con la reivindicación 48.

50. - Método para la producción de un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36, preferentemente un método de producción recombinante que comprende el uso de un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 46 y/o 47, y/o de un vector de acuerdo con la reivindicación 48 y/o de una célula huésped de acuerdo con la reivindicación 49.

51. - Método de acuerdo con la reivindicación 50, que comprende los pasos (a) cultivar la célula huésped en condiciones que permiten la expresión del anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno y (b) recuperar el anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno.

52. - Kit diagnóstico o método diagnóstico que comprende un anticuerpo anti-IL-36R o fragmento de unión al antígeno de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1 a 36, o el uso de los mismos.

53. - Kit diagnóstico o método diagnóstico de acuerdo con la reivindicación 52, para el diagnóstico de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una enfermedad respiratoria, un trastorno metabólico, un trastorno inflamatorio mediado epitelial, fibrosis, cáncer, psoriasis, enfermedad inflamatoria de los intestinos, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, artritis reumatoidea, COPD, asma crónica, espondilitis anquilosante, o enfermedad de Crohn.