NL2000532C2

NL2000532C2 - Chromaanderivaten.

Info

Publication number: NL2000532C2
Application number: NL2000532A
Authority: NL
Inventors: Yukari Matsumoto; Hirohisa Shimokawa; Tatsuya Yamagishi
Original assignee: Pfizer
Priority date: 2006-03-17
Filing date: 2007-03-12
Publication date: 2008-02-05
Also published as: BRPI0708808A2; EP1996589A1; CA2645007A1; MX2008011044A; UY30205A1; NL2000532A1; RU2008137145A; WO2007107827A1; GT200700022A; JP2009530262A; PE20071313A1; TW200804380A; KR20080108129A; AR059903A1; US20070219237A1

Description

Chromaanderivaten Achtergrond van de uitvinding 5 De onderhavige uitvinding heeft betrekking op chromaanderivaten. Deze verbindingen hebben een selectieve zuurpompremmende activiteit. De onderhavige uitvinding heeft tevens betrekking op een farmaceutische samenstelling, op een methode voor de behandeling en de toepassing, welke de bovenstaande derivaten voor de behandeling van door een zuurpompmodulerende activiteit gemedieerde ziektetoestanden , in het bij-10 zonder een zuurpompremmende activiteit omvat.

In het algemeen wordt aanvaard dat protonpompinhibitoren (PPIs) voor -geneesmiddelen zijn die een door middel van een zuur gekatalyseerde chemische omlegging ondergaan, die hen in staat stelt de H+/K+-ATPase activiteit te remmen door aan zijn cysteine residuen covalent te binden (Sachs, G. et al., Digestive Diseases and Sciences, 15 1995, 40, 3S-23S, Sachs, et al., Annu Rev Pharmacol Toxicol, 1995, 35, 277-305).

Echter anders dan PPIs remmen zuurpompantagonisten de zure secretie via een omkeerbare kalium-competitieve inhibitie van fT/K+-ATPase. SCH28080 is een van deze omkeerbare inhibitoren en is uitgebreid onderzocht. Andere nieuwe middelen (revapra-zan, soraprazan, AZD-0865 en CS-526) zijn opgenomen in klinische proeven die hun 20 doeltreffendheid bij de mens bevestigen (Pope, A.; Parsons, M, Trends in Pharmacological Sciences, 1993, 14, 325-5; Vakil, N., Alimentary Pharmacology and Therapeutics, 2004, 19, 1041-1049). In het algemeen blijken zuurpompantagonisten nuttig te zijn voor de behandeling van een verscheidenheid van ziekten waaronder maagdarmziekte, maagslokdarmziekte, maagslokdarmreflux-ziekte (GERD), laryngofaryngeale reflux-25 ziekte, peptische zweer, maagzweer, twaalfvingerige darmzweer, door niet-steroïdaal anti-ontstekingsgeneesmiddel (NSAID)-geïnduceerde zweren, gastritis, infectie van Helicobacter pylori, dyspepsia, functionele dyspepsia, Zollinger-EUison syndroom, niet-erosieve reflux-ziekte (NERD), viscerale pijn, kanker, branderige maag, misselijkheid, esofagitis, dysfagia, hypersalivatie, aandoening van de luchtwegen of astma 30 (hierna aangeduid met “APA-ziekten”, Kiljander, Toni O, American Journal of Medi cine, 2003, 115 (Suppl. 3A), 65S-71S; Ki-Baik Hahm et al., J. Clin. Biochem. Nutr., 2006, 38(1), 1-8).

2 0 0 053 2 2 WO 99/55705, WO 99/55706 en WO 04/046144 beschrijven verbindingen die als zuurpompantagonisten beschreven zijn. Zij hebben betrekking op bepaalde verbindingen met een imidazool[l,2-a]pyridinestructuur.

Er is behoefte aan het verschaffen van nieuwe zuurpompantagonisten die goede 5 geneesmiddelkandidaten zijn en die op bestaande behoeften gericht zijn door middel van PPIs voor de behandeling van ziekten. In het bijzonder dienen voorkeursverbindingen aan de zuurpomp sterk te binden terwijl zij weinig affiniteit voor andere receptoren vertonen en een functionele activiteit als inhibitoren van de zuurafscheiding in de maag vertonen. Zij dienen goed uit het maagdarmkanaal geabsorbeerd te worden, metabo-10 lisch stabiel te zijn en gunstige farmacokinetische eigenschappen te hebben. Zij dienen niet toxisch te zijn. Verder zal de ideale geneesmiddelkandidaat in een fysische vorm bestaan die stabiel, niet hygroscopisch en gemakkelijk geformuleerd is.

Samenvatting van de uitvinding 15

In de onderhavige uitvinding werd nu gevonden dat de nieuwe klasse van verbindingen met een chromaangroep en een imidazool[l,2-a]pyridinestructuur gesubstitueerd door (een hydroxylgroep of een groep die in vivo omzetbaar is in een hydroxyl-groep)-methylgroep op de 3-positie een zuurpompremmende activiteit en gunstige ei-20 genschappen als geneesmiddelkandidaten vertoonde en dus nuttig zijn voor de behandeling van ziektetoestanden die door een zuurpompremmende activiteit zoals APA-ziekten gemedieerd zijn.

De onderhavige uitvinding verschaft een verbinding met de volgende algemene formule (I): 25 3 0 R1 r1n-V-n-\_b2 a· y^r* (l)

BvJvR5

Re'y^'Re R7 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout ervan waarin: 5 -A-B- -O-CH2- of -CH2-O- is; R1 een hydroxylgroep of een in een hydroxylgroep in vivo omzetbare groep voorstelt; R2 een Ci-Cö-alkylgroep voorstelt; R3 en R4 onafhankelijk van elkaar CpCö-alkylgroep of een C3-C7-cycloalkyl-10 groep voorstellen waarbij de Ci-Cö-alkylgroep en de C3-C7-cycloalkylgroep al dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 substituenten die onafhankelijk van elkaar gekozen zijn uit de groep bestaande uit een halogeenatoom, een hydroxylgroep, een C1 -Cè-alkoxygroep en een C3-C7-cycloalkylgroep dan wel vormen R3 en R4 tezamen met het stikstofatoom waarmee zij verbonden zijn een heterocyclische 15 groep met 4 tot 7 leden die al dan niet gesubstitueerd is met 1 tot 3 substituenten gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een Ci-Ce-alkylgroep, een Ci-Cö-alkoxygroep en een hydroxy-Ci-C6-alkylgroep en R , R , R en R onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeenatoom of een Ci-C6-alkylgroep voorstellen.

20 Tevens verschaft de onderhavige uitvinding een farmaceutische samenstelling die een verbinding met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan omvat 4 telkens zoals in de beschrijving beschreven is, tezamen met een farmaceutisch aanvaardbare drager voor deze verbinding.

Tevens verschaft de onderhavige uitvinding een farmaceutische samenstelling die een verbinding met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan telkens 5 zoals in de beschrijving beschreven is, die verder een of meer farmacologische actieve middelen omvat.

Tevens verschaft de onderhavige uitvinding een methode voor de behandeling van een ziektetoestand gemedieerd door een zuurpompmodulerende activiteit in een zoogdierpatiënt waaronder een mens, welke omvat het toedienen aan een zoogdier dat 10 aan een dergelijke behandeling behoefte heeft, van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een verbinding met de formule (I) of van een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan zoals zij in de beschrijving beschreven zijn.

Voorbeelden van ziektetoestanden die gemedieerd zijn door een zuurpompmodulerende activiteit omvatten maar zijn niet beperkt tot APA-ziekten 15 Verder verschaft de onderhavige uitvinding de toepassing van een verbinding met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan zoals zij telkens in de beschrijving beschreven zijn voor de productie van een geneesmiddel voor de behandeling van een ziektetoestand die door een zuurpompremmende activiteit gemedieerd is.

Verder verschaft de onderhavige uitvinding een verbinding met formule (I) of een 20 farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan die in de geneeskunde toepasbaar zijn.

Bij voorkeur verschaft de onderhavige uitvinding tevens de toepassing van een verbinding met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan, telkens zoals beschreven in de beschrijving, voor de productie van een geneesmiddel voor de behandeling van ziekten gekozen uit APA-ziekten.

25 De verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen een goede zuurpomprem mende activiteit, een lagere toxiciteit, een goede absorptie, een goede verdeling, een goede oplosbaarheid, een verlaagde eiwitbindende affiniteit anders dan de zuurpomp, een verminderde geneesmiddel-geneesmiddelinteractie en een goede metabolische stabiliteit vertonen.

30 5

Gedetailleerde beschrijving van de uitvinding

In de verbindingen van de onderhavige uitvinding:

Daar waar R2, R3, R4, R5, R6, R7 en R8 de CpCö-alkylgroep zijn, kan deze Ci-Cö-5 alkylgroep een al dan niet vertakte groep zijn met 1 tot 6 koolstofatomen en voorbeelden omvatten maar zijn niet beperkt tot methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, 1-ethylpropyl en hexyl. Hieruit is CpC2-alkyl meer geprefereerd; methyl is meer geprefereerd.

Daar waar R3 en R4 de C3-C7-cycloalkylgroep zijn betekent deze de cycloalkyl-10 groep met 3 tot 7 koolstofatomen en voorbeelden omvatten cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl en cycloheptyl. Hieruit verdient C3-Cs-cycloalkylgroep de voorkeur; cyclopropyl is nog meer geprefereerd.

Daar waar de substituent van R3 en R4 de C i-Cö-alkoxygroep zijn, betekent deze groep een zuurstofatoom gesubstitueerd met deze Ci-Ce-alkylgroep en voorbeelden 15 omvatten maar zijn niet beperkt tot methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy en hexyloxy. Hieruit verdient Ci-Cpal-koxy de voorkeur; Ci-C2-alkoxy verdient de voorkeur; methoxy verdient nog meer de voorkeur.

Daar R3 en R4 tezamen met het stikstofatoom waarmee zijn gebonden zijn een 20 heterocyclische ring met 4 tot 7 leden vormen stelt deze heterocyclische groep met 4 tot 7 leden een verzadigde heterocyclische groep voor met drie tot zes ringatomen gekozen uit een koolstofatoom, stikstofatoom, zwavelatoom en zuurstofatoom anders dan het stikstofatoom, voorbeelden omvatten maar zijn niet beperkt tot azetidinyl, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, piperidyl, piperazinyl, hexahydroazepinyl, hexahydro-25 diazepinyl, morfolino, thiomorfolino en homomorfolino. Hieruit verdienen azetidinyl, pyrrolidinyl, morfolino en homomorfolino de voorkeur; morfolino is nog meer geprefereerd.

Daar waar de substituent van de heterocyclische groep met 4 tot 7 leden een hy-droxy-Ci-Cé-alkylgroep is ,stelt deze de CpCö-alkylgroep voor die met een hydroxyl-30 groep gesubstitueerd is en voorbeelden omvatten maar zijn niet beperkt tot hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, 1-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl, 2-hydroxypropyl, 2-hy-droxy-l-methylethyl, 4-hydroxybutyl, 3-hydroxybutyl, 2-hydroxybutyl, 3-hydroxy-2-methyl-propyl, 3-hydroxy-l-methylpropyl, 5-hydroxypentyI en 6-hydroxy hexyl. Hier- 6 uit verdient hydroxy-Ci-C3-alkyl de voorkeur; hydroxymethyl is nog meer geprefereerd.

Daar waar R5, R6, R7 en R8 halogeenatomen zijn kan het atoom een fluor, chloor, broom of joodatoom zijn. Hieruit verdienen een fluoratoom en een chlooratoom de 5 voorkeur.

De in een hydroxylgroep in vivo omzetbare groep is een groep die in vivo omzet-baar is door middel van hydrolyse en/of door middel van een enzym bijvoorbeeld een esterase, in een hydroxylgroep. Voorbeelden van de groep omvatten maar zijn niet beperkt tot ester en ethergroepen die in vivo gemakkelijk hydrolyseerbaar zijn. Deze 10 groepen zijn de deskundige bekend als “progroepen” zoals beschreven bijvoorbeeld in “Design of Prodrugs” door H. Bundgaard (Elsevier, 1985). Geprefereerde in vivo in een hydroxylgroep omzetbare groepen zijn bijvoorbeeld een Ci-Cö-alkoxygroep een C i-Cö-alkylcarbonyloxygroep en een C|-C6-alkylcarbonyloxymethyloxygroep.

Daar waar -A-B- -O-CH2- is komt -A- overeen met -O- en -B- komt overeen met 15 -CH2-.

Daar waar -A-B- -CH2-O- is komt -A- overeen met -CH2- en -B- komt overeen met -O-.

De term “behandelen” of “behandeling” zoals deze in de beschrijving wordt gebruikt heeft betrekking op genezende, palliatieve en profylactische behandeling waar-20 onder omkering, verlichting, remming van de progressie of preventie van de aandoening of ziektetoestand waarop deze termen van toepassing is dan wel een of meer symptomen van deze aandoening of ziektetoestanden.

Voorkeurklassen van verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn die verbindingen met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan, die elk in de 25 beschrijving beschreven zijn, waarin: (a) -A-B- -O-CH2- of-CH2-O- is; (b) -A-B- -CH2-O- is; (c) R1 een hydroxylgroep, een C1 -Q-alkoxygroep of een C1 -Có-alkylcarbony- 30 loxygroep is ; (d) R1 een hydroxygroep is; (e) R2 een Ci-Cö-alkylgroep is; (f) R2 een Ci-C2-alkylgroep is; 7 Λ (g) R een methylgroep is; (h) R3 een C, -Cö-alkylgroep is; (i) R3 een Ci-C2-alkylgroep is; (j) R3 een methylgroep is; 5 (k) R4 een Ci-Cö-alkylgroep is; die al dan niet gesubstitueerd is met een substitu ent gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxyl groep en een Ci-Cé-alkoxy-groep; (1) R4 is een Ci-C2-alkylgroep die al dan niet gesubstitueerd is met een substituent gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep en een Ci-C4-alkoxygroep; 10 (m) R4 is een Ci-C2-alkylgroep die al dan niet met een hydroxylgroep gesubstitu eerd is; (n) R4 een methylgroep, een ethylgroep of een 2-hydroxyethylgroep is; (o) R3 en R4 vormen tezamen met het stikstofatoom waaraan zij gebonden zijn een azetidinylgroep een pyrrolidinylgroep een morfolinegroep of een homomor- 15 folinegroep waarbij de azetidinylgroep de pyrrolidinylgroep en de morfoline groep en de homomorfolinegroep al dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 sub-stituenten gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een C i-Chalky 1 groep, een Ci-Cö-alkoxy groep en een hydroxy-Ci-Cö-alkylgroep; (p) R3 en R4 vormen tezamen met het stikstofatoom waaraan zij gebonden zijn 20 een pyrrolidinylgroep, een morfolinegroep, een homomorfolinegroep waarbij de pyrrolidinylgroep, de morfolinegroep en de homomorfolinegroep al dan niet gesubstitueerd zijn met een substituent gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een Ci-C6-alkylgroep, een C i -Cö-alkoxy groep en een hydroxy-C|-Cö-alkylgroep; 25 (q) R5, R6, R7 en R8 zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halo- geenatoom of een Ci-Cö-alkylgroep; (r) R5, R6, R7 en R8 zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halo-geenatoom of een C|-C2-alkylgroep; (s) R5, R6, R7 en R8 zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een flu- 30 oratoom, een chlooratoom of een methylgroep; (t) Rs, R6, R7 en R8 zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, fluoratoom of een methylgroep; (u) R5 een waterstofatoom, een fluoratoom of een methylgroep is; 8 (v) R6 een waterstofatoom is; (w) R7 een waterstofatoom of een fluoratoom is; en (x) R8 een waterstofatoom is;

Uit deze klassen van verbindingen verdient elke combinatie van (a) tot (x) tevens 5 de voorkeur.

Voorkeursverbindingen van de onderhavige uitvinding zijn die verbindingen met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan die telkens in de beschrijving beschreven zijn waarin: 10 (A) -A-B- -O-CH2- of -CH2-O- is; R1 een hydroxyl groep, Cj-Cö-alkoxygroep of

Ci-Có-alkylcarbonyloxygroep is; R een Q-Cö-alky lgroep is; R en R onafhankelijk van elkaar een Ci-Cö-alkylgroep of een C3-C7-cycloalkylgroep zijn waarbij de Ci-C6-alkylgroep en de C3-C7-cycloalkylgroep al dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 substituenten die onafhankelijk van elkaar gekozen zijn uit de groep 15 bestaande uit een halogeenatoom, een hydroxygroep, een Ci-C6-alkoxygroep en een C3-C7-cycloalkyl-groep dan wel vormen R3 en R4 tezamen met een stikstofatoom waaraan zij gebonden zijn een azetidinylgroep, een pyrrolidinylgroep een morfolinegroep of een homomorfolinegroep waarbij de azetidinylgroep, de pyrrolidinylgroep, de morfolinegroep en de homomorfolinegroep al dan niet gesub-20 stitueerd zijn met 1 tot 3 substituenten die gekozen zijn uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een CpCö-alky lgroep, een Ci-C6-alkoxygroep en een hy-droxy-Ci-Cé-alkylgroep en R5, R6, R7 en R8 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeenatoom of een C1 -Ce-alkylgroep zijn; (B) -A-B- -O-CH2- of -CH2-O- is; R1 een hydroxylgroep is; R2, R3 en R4 onaf-25 hankelijk van elkaar een C1 -Ce-alkylgroep zijn dan wel vormen R3 en R4 tezamen met het stikstofatoom waarmee zij verbonden zijn een morfolinegroep; R5 en R6 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeenatoom of een Ci-C6- c o alkylgroep zijn en R en R onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of een halogeenatoom zijn; 30 (C) -A-B- -CH2-O is; R1 een hydroxylgroep is; R2, R3 en R4 onafhankelijk van elkaar een Ci-Cö-alkylgroep zijn; R5 en R7 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeenatoom of een C1 -Cé-alkylgroep zijn en R6 en R8 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of een halogeenatoom zijn en 9 (D) -A-B- -CH2-O- is; R1 een hydroxylgroep is; R2, R3 en R4 zijn telkens een methylgroep; R5 en R7 zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een flu- / n oratoom of een methylgroep en R en R zijn onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of een fluoratoom.

5 De verbindingen met formule (I) die een of meer asymmetrische atomen bevatten kunnen als twee of meer stereoisomeren voorkomen.

Binnen de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding vallen alle stereoisomeren en geometrische isomeren van de verbindingen met formule (I) waaronder verbindingen die meer dan een type isomerisme vertonen en mengsels van een of meer 10 hiervan. Tevens zijn inbegrepen zuuradditiezouten waarbij het tegenion optisch actief is bijvoorbeeld D-lactaat of L-lysine of een racemaat, DL-tartraat of DL-arginine.

Een uitvoeringsvorm van de uitvinding verschaft een verbinding gekozen uit de groep bestaande uit (S)-(-)-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-15 yl)amino[imidazo [ 1,2-a]pyridine-6-carboxamide; (+)-8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethyl-imi-dazo[ 1,2-a]pyridine-6-carboxamide; (S)-(-)-8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxamide; en 20 (-)-8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-tri-methylimidazo[ 1,2-a]pyridine-6-carboxamide; of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan.

Farmaceutisch aanvaardbare zouten van een verbinding met formule (I) omvatten de zuuradditiezouten (met inbegrip van dizouten )hiervan.

25 Geschikte zuuradditiezouten worden gevormd uitgaande van zuren die niet-toxi- sche zouten vormen. Voorbeelden omvatten het acetaat, adipaat, aspartaat, benzoaat, besylaat, bicarbonaat/carbonaat, bisulfaat/sulfaat, boraat, camsylaat, citraat, cyclamaat, edisylaat, esylaat, formaat, fumaraat, gluceptaat, gluconaat, glucuronaat, hexafluorfos-faat, hibenzaat, hydrochloride/chloride, hydrobromide/bromide, hydrojodide/jodide, 30 isethionaat, lactaat, malaat, maleaat, malonaat, mesylaat, methylsulfaat, naftylaat, 2-napsylaat, nicotinaat, nitraat, orotaat, oxalaat, palmitaat, pamoaat, fos-faat/waterstoffosfaat/diwaterstoffosfaat, pyroglutamaat, saccharaat, stearaat, succinaat, tannaat, tartraat, tosylaat, trifluoracetaat en xinofoatzouten.

10

Voor een overzicht van geschikte zouten zie “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use” door Stahl en Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Duitsland, 2002). Een farmaceutisch aanvaardbaar zout van een verbinding met formule (I) kan gemakkelijk worden bereid door mengen van oplossingen van verbindin-5 gen met formule (I) en het gewenste zuur of base desvereist. Het zout kan precipiteren uit de oplossing en door filtratie worden verzameld dan wel door verdamping van het oplosmiddel worden teruggewonnen. De ionisatiegraad in het zout kan variëren van volledig geïoniseerd tot nagenoeg niet geïoniseerd.

Farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbinding volgens de uitvinding om-10 vat zowel niet gesolvateerde als gesolvateerde vormen. De term “solvaat” wordt in de beschrijving gebruikt om een moleculair complex te omschrijven dat een verbinding volgens de uitvinding en een of meer farmaceutisch aanvaardbare oplosmiddelmolecu-len bijvoorbeeld ethanol omvat. De term “hydraat” wordt gebruikt wanneer het oplosmiddel water is.

15 Farmaceutisch aanvaardbare sol vaten volgens de uitvinding omvatten hydraten en solvaten waarbij het oplosmiddel van kristallisatie met een isotoop gesubstitueerd kan zijn zoals bijvoorbeeld D2O, d$-aceton, d^-DMSO.

Binnen de beschermingsomvang van de uitvinding vallen alle complexen zoals clatraten, geneesmiddel-gastheerinclusiecomplexen waarbij in tegenstelling tot de bo-20 ven vermelde solvaten het geneesmiddel en gastheer in stoichiometrische of niet stoi-chiometrische hoeveelheden aanwezig zijn. Tevens zijn inbegrepen complexen van het geneesmiddel die twee of meer organische en/of anorganische componenten bevatten die in stoichiometrische of niet stoichiometrische hoeveelheden aanwezig zijn. De verkregen complexen kunnen geïoniseerd, ten dele geïoniseerd of niet geïoniseerd zijn. 25 Voor een overzicht van deze complexen zie J. Pharm. Sci., 64(8), 1269-1288 door Ha-leblian (augustus 1975).

De verbindingen met formule (I) kunnen in een of meer kristallijne vormen voorkomen. Deze polymorfe waaronder mengsels hiervan vallen eveneens binnen de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding.

30 De verbindingen met formule (I) die een of meer asymmetrische koolstofatomen bevatten,kunnen als twee of meer stereoisomeren voorkomen.

11

Binnen de omvang van de uitvinding vallen alle stereoisomeren van de verbindingen met formule (I) waaronder verbindingen die meer dan een type isomerisme en mengsels van een of meer hiervan.

De onderhavige uitvinding omvat alle farmaceutisch aanvaardbare met een iso-5 toop gelabelde verbindingen met formule (I) waarbij een of meer atomen vervangen zijn door atomen met hetzelfde atoomnummer maar een atoommassa of massagetal dat verschilt van de atoommassa of massagetal dat gewoonlijk in de natuur wordt gevonden.

Voorbeelden van isotopen die geschikt zijn voor opname in de verbindingen vol-10 gens de uitvinding omvat isotopen van waterstof zoals H2 en H3 koolstof, zoals Cn, C13 en C14 chloor zoals Cl36, fluor zoals F18, jood zoals I123 en I125, stikstof zoals N13 en N15, zuurstof O15,017 en O18, fosfor zoals P32 en zwavel zoals S35.

Bepaalde ,met een isotoop gelabelde verbindingen met formule, bijvoorbeeld die waarin een radioactief isotoop is opgenomen, zijn geschikt in geneesmiddel- en/of sub-15 straatweefsel verdeling onderzoekingen. De radioactieve isotoop tritium bijvoorbeeld H3 en koolstof-14 ofwel C14 zijn bijzonder nuttig voor dit doel met het oog op het gemak van opname en beschikbare detectiemiddelen.

Substitutie met zwaardere isotopen zoals deuterium of H2 kan bepaalde therapeutische voordelen verschaffen resulterende van een grotere metabolische stabiliteit 20 ,bij voorbeeld een verhoogde in vivo halfwaardetijd of gereduceerde doseringsvereisten en derhalve kunnen zijn onder bepaalde omstandigheden de voorkeur verdienen.

Substitutie met positron emitterende isotopen zoals C , F , O en N kunnen geschikt zijn in positron emissietopografïe (PET) onderzoekingen voor het onderzoeken van substraatreceptor bezetting.

25 Met een isotoop gelabelde verbinding met formule (I) kunnen in het algemeen onder toepassing van conventionele technieken die de deskundige op dit gebied bekend zijn of door middel van processen die analoog zijn aan die beschreven in de begeleidende voorbeelden en bereidingen onder toepassing van een geschikt met een isotoop gelabeld reagen worden bereid in plaats van het niet gelabelde reagens dat eerder ge-30 bruikt is,worden bereid.

Alle verbindingen met formule (I) kunnen worden bereid door toepassing van procedures beschreven in de algemene methode die hieronder aangeboden worden of door middel van specifieke methoden beschreven in het hoofdstuk voorbeelden en het 12 hoofdstuk bereidingen dan wel door middel van routinemodifïcaties hiervan. De onderhavige uitvinding omvat tevens een of meer van deze processen voor de bereiding van de verbindingen met formule (I) naast een of meer nieuwe tussenproducten die hierbij gebruikt worden.

5

Algemene synthese

De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding kunnen door middel van een verscheidenheid van processen die bekend zijn voor de bereiding van verbindingen van 10 dit type bijvoorbeeld zoals weergegeven in de volgende methode A, worden bereid.

Tenzij anders wordt aangegeven zijn R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, A en B in de volgende methode zoals zij hierboven gedefinieerd zijn. Alle uitgangsmaterialen in de volgende algemene synthesen kunnen in de handel verkrijgbaar zijn dan wel onder toepassing van conventionele methoden zoals zij de deskundige bekend zijn,worden ver-15 kregen, zoals bijvoorbeeld WO 99/55706 en WO 02/20523 en de publicaties die daarin als referentie zijn opgenomen.

Methode A

20 Deze illustreert de bereiding van verbindingen met formule (Ia) waarin R1 OH is.

Reactieschema A

O

^ Trap Al ° 1^IQ,_R2 Trap A2 NH* DLr» éJLr» s ("> Jb* * * * W R7 m/\ K (UI) (*V) 13

hcho a-^,NH

paraformaldehyde ^

RiV^R6 of riV-r6 R7 (VI) 0^0 R7 (Λ)

V

In het reactieschema A is Ra een carboxybeschermende groep; Lv is een afsplits-bare groep en hetzelfde zal hierna van toepassing zijn.

5 De term “afsplitsbare groep” zoals deze in de beschrijving wordt gebruikt bete kent een groep die gesubstitueerd kan zijn door nucleofiele groepen zoals een hy-droxylgroep, aminen of carboanionen en voorbeelden van deze afsplitsbare groepen omvatten halogeenatomen, een alkylsulfonylgroep en een fenylsulfonylgroep. Hieruit verdienen een broomatoom, een chlooratoom, een joodatoom, een methylsulfonyl-10 groep, een trifluormethylsulfonylgroep en een 4-methylfenylsulfonylgroep de voorkeur.

Trap Al

In deze trap wordt de verbinding met formule (IV) bereid door nucleofiele 15 substitutie van de verbinding met formule (II), die in de handel verkrijgbaar is dan wel onder toepassing van methoden zoals in WO 99/55706 en WO 02/020523 beschreven zijn met de verbinding met formule (III) worden bereid, die commercieel beschikbaar zijn dan wel onder toepassing van methoden zoals zij in WO 2000/07851 beschreven zijn worden bereid.

20 De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmid del uitgevoerd. Er bestaat geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het te gebruiken oplosmiddel vooropgesteld dat er geen nadelige effecten op de reactie of de hierbij betrokken reagentia bestaat en dat het reagentia althans tot op zekere hoogte in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: ethers 25 zoals tetrahydrofuran (THF), ethyleenglycoldimethylether en dioxaan; amiden zoals 14 bijvoorbeeld Ν,Ν-dimethylformamide (DMF), Ν,Ν-dimethylaceetamide (DMA) en N-methyl-2-pyrrolidinon (NMP); nitrillen zoals bijvoorbeeld acetonitril; ketonen zoals aceton; alcoholen zoals 2-methyl-2-propanol, 1-butanol, 1-propanol, 2-propanol, ethanol en methanol; en sulfoxiden, zoals dimethylsulfoxide (DMSO). Deze oplosmiddelen 5 verdienen amiden, ketonen en alcoholen de voorkeur. Aceton verdient nog meer de voorkeur.

De reactie kan met of zonder een base worden uitgevoerd. Op dezelfde wijze is er geen bijzondere beperking ten aanzien van de gebruikte basen en elke base die gewoonlijk in reacties van dit type worden gebruikt,kunnen eveneens hier worden ge-10 bruikt. Voorbeelden van dergelijke basen omvatten: alkalimetaalalkoxiden, zoals natri-ummethoxide, natriumethoxide en kaliumtert-butoxide; alkalimetaalcarbonaten zoals lithiumcarbonaat, natriumcarbonaat (Na2C03), cesiumcarbonaat en kaliumcarbonaat (K2CO3); alkalimetaalwaterstofcarbonaten zoals natriumwaterstof-carbonaat (NaHC03) en kaliumwaterstofcarbonaat; en organische aminen zoals triethylamine, tripropyla-15 mine, tributylamine, dicyclohexylamine, Ν,Ν-diisopropyl-ethylamine, N-methylpiperi-dine, N-methylmorfoline, l,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-een (DBU) en 1,5-diazabicy-clo[4.3.0]non-5-een (DBN). Hieruit verdient kaliumcarbonaat de voorkeur.

De reactie kan met of zonder jodide worden uitgevoerd. Voorbeelden van dergelijke jodiden omvatten: natriumjodide, kaliumjodide en cesiumjodide. Hieruit verdie-20 nen natriumjodide en kaliumjodide de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is niet kritisch voor de uitvinding. De voorkeur reac-tietemperatuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter in het algemeen is het geschikt om de reactie uit te voeren bij 25 een temperatuur variërende van ongeveer 0 tot ongeveer 250°C. De tijd die nodig is voor de reactie kan eveneens binnen ruime grenzen variëren afhankelijk van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard van de toegepaste uitgangsmaterialen en oplosmiddelen. Echter vooropgesteld dat de reactie wordt uitgevoerd onder de hierboven vermelde geprefereerde omstandigheden zal een tijdsperiode van ongeveer 5 30 minuten tot ongeveer 72 uur gewoonlijk voldoende zijn.

15

Trap A2

In deze trap wordt de verbinding met formule (VI) bereid door (A2al) hydrolyse van de verbinding met formule (IV) bereid zoals beschreven in trap Al gevolgd door 5 (A2a2) een condensatiereactie met de verbinding met formule (V) dan wel (A2b) door een substitutiereactie van de verbinding met formule (IV) met de verbinding met formule (V) (A2al) hydrolyse.

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er bestaat geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het te 10 gebruiken oplosmiddel vooropgesteld dat dit geen nadelig effect heeft op de reactie of op de hierbij betrokken reagentia en dat het althans tot op zekere hoogte de reactiemid-delen in oplossing brengt. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten een ether zoals tetrahydrofuran en dioxaan, amiden zoals Ν,Ν-dimethylformamide, alcoholen zoals ethanol en methanol; en water; of gemengde oplosmiddelen hiervan. Uit 15 deze oplosmiddelen verdienen methanol, tetrahydrofuran en water de voorkeur.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een base uitgevoerd. Er bestaat eveneens geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van de toegepaste base en elke base die in dit type reactie gewoonlijk wordt gebruikt kan eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke basen omvatten: alkalimetaalhydroxiden, zoals lithiumhy-20 droxide (LiOH), natriumhydroxide (NaOH) en kaliumhydroxide (KOH). Hieruit is natriumhydroxide geprefereerd.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is niet kritisch voor de onderhavige uitvinding. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmid-25 del en de uitgangsmaterialen. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie bij een temperatuur uit te voeren die van ongeveer 0 tot ongeveer 100°C varieert. De tijd die nodig is voor de reactie kan afhankelijk van vele factoren met name de reactietemperatuur en de aard van de uitgangsmaterialen en het toegepaste oplosmiddel variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de geprefereerde omstandigheden die hierbo-30 ven beschreven zijn uitgevoerd wordt ,zal een tijdsperiode van ongeveer 5 minuten tot ongeveer 12 uur gewoonlijk voldoende zijn.

16 (A2a2) condensatiereactie

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te 5 passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect heeft op de reactie of op de hierbij betrokken reagentia en dat het althans tot op zekere hoogte de reactiemidde-len tot oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals dichloormethaan, chloroform en 1,2-dichlooret-haan; ethers zoals bijvoorbeeld tetrahydofuran en dioxaan; amiden zoals bijvoorbeeld 10 Ν,Ν-dimethylformammide en Ν,Ν-dimethylaceetamide en nitrillen zoals bijvoorbeeld acetonitril. Uit deze oplosmiddelen verdienen gehalogeneerde koolwaterstoffen en amiden de voorkeur. Dichloormethaan en Ν,Ν-dimethylformamide verdienen nog meer de voorkeur.

De reactie wordt uitgevoerd bij aanwezigheid van een condensatiemiddel. Dit is 15 eveneens geen bepaalde restrictie ten aanzien van de aard van de toegepaste condensa-tiemiddelen en alle condensatiemiddelen die gewoonlijk in reacties van dit type worden gebruikt kunnen eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke condensatiemiddelen omvatten: azodicarbonzuurdi-kleinalkylester-trifenyl-fosfmen zoals diethylazodicarboxylaattrifenylfosfine; 2-halogeen-1 -kleinalky 1-pyridiniumhalogeniden 20 zoals 2-chloor-l-methylpyridiniumjodide en 2-broom-l-ethylpyridiniumtetrafluorbo-raat (BEP); diarylfosforylaziden zoals difenylfosforylazide (DPPA); chloorformeaten zoals ethylchloorformeaat en isobutylchloorformeaat; fosforcyanidaat zoals bijvoorbeeld diethylfosforcyanidaat (DEPC); imidazoolderivaten zoals N,N’-carbonyldiimida-zool (CDI); carbodiimidederivaten zoals Ν,Ν’-dicyclo-hexylcarbodiimide (DCC) en 1-25 (3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide-hydrochloride (EDCI); iminiumzouten zoals bijvoorbeeld 2-(l H-benzotriazool-1 -yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfos-faat (HBTU) en tetramethylfluorform-amidiniumhexafluorfosfaat (TFFH); en fosfoni-umzouten zoals benzotriazool-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfaat (BOP) en broom-tris-pyrrolidinofos-foniumhexafluorfosfaat (PyBrop). Hier uit verdie-30 nen EDCI en HBTU de voorkeur.

Reactiemiddelen zoals 4-(N,N-dimethylamino)pyridine (DMAP), en N-hydroxy-benztriazool (HOBt), kunnen voor deze trappen worden toegepast. Hieruit verdient HOBt de voorkeur.

17

De reactie kan met of zonder een base worden uitgevoerd. Deze is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de toegepaste base en alle basen die gewoonlijk in reacties van dit type worden gebruikt kunnen eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke basen omvatten aminen zoals N-methylmorfoline, 5 triethylamine, diisopropylethylamine en methylpiperidine en pyridine worden gebruikt. Hieruit verdienen triethylamine en N-methylmorfoline de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige temperatuur is niet kritisch voor de onderhavige uitvinding. De voor-keursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel 10 en de uitgangsmaterialen. Echter in het algemeen is het geschikt om de reactie uit te voeren bij een temperatuur van ongeveer 0 tot ongeveer 80°C. De tijd die nodig is voor de reactie kan eveneens in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactie-temperatuur en de aard van de toegepaste uitgangsmaterialen een oplosmiddel in ruime mate variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie wordt uitgevoerd onder de hierboven 15 beschreven geprefereerde omstandigheden zal een periode van ongeveer 5 minuten tot ongeveer 24 uur gewoonlijk voldoende zijn.

(A2b) substitutiereactie 20 De reactie kan door verhitting van de reactiemiddelen in de zuivere aminoverbin- ding dan wel in een inert oplosmiddel onder standaard omstandigheden worden uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect heeft op de reactie of op de hierbij betrokken reactiemiddelen en dat het althans tot op zekere hoogte de oplosmiddelen 25 in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten ethers zoals ethyleenglycoldimethylether, tetrahydrofuran en dioxaan; amiden zoals bijvoorbeeld Ν,Ν-dimethylformamide en Ν,Ν-dimethylaceetamide, nitrillen zoals acetonitril en alcoholen zoals 2-methyl-2-propanol, 1-butanol, 1-propanol, 2-propanol, ethanol en methanol. Uit deze oplosmiddelen verdienen ethers en alcoholen de voorkeur. Tetrahy-30 drofüran verdient nog meer de voorkeur.

De reactie kan met of zonder katalysator worden uitgevoerd. Er is eveneens geen bijzondere beperking ten aanzien van de gebruikte katalysatoren en alle katalysatoren die in dit type reactie gewoonlijk worden gebruikt kunnen eveneens hier worden ge 18 bruikt. Voorbeelden van deze katalysatoren omvatten natriumcyanide of kaliumcya-nide. Hieruit verdient natriumcyanide de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is niet kritisch voor de uitvinding. De voorkeursreac-5 tietemperatuur zal van factoren zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen afhangen. Echter in het algemeen is het geschikt de reactie uit te voeren bij een temperatuur van ongeveer 40 tot ongeveer 200°C. De tijd die nodig is voor de reactie kan eveneens in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard van de toe te passen uitgangsmaterialen en oplosmiddelen binnen ruime 10 grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de geprefereerde hierboven beschreven omstandigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 30 minuten tot ongeveer 24 uur gewoonlijk voldoende zijn.

Trap A3 15

In deze trap wordt de gewenste verbinding met formule (Ia) bereid door hydroxy-methylering van de verbinding met formule (VI) bereid zoals beschreven in trap A2 met formaldehyde, paraformaldehyde of 1,3,5-trioxaan.

De reactie wordt in aanwezigheid of in afwezigheid van een oplosmiddel uitge-20 voerd. Dit is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen oplosmiddel vooropgesteld dat dit geen nadelig effect heeft op de reactie of op de hierbij betrokken reactiemiddelen en dat het tenminste tot op zekere hoogte de reagentia in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten alifatische koolwaterstoffen zoals bijvoorbeeld hexaan, heptaan en petroleumether, gehaloge-25 neerde koolwaterstoffen zoals bijvoorbeeld dichloormethaan, chloroform, koolstofte-trachloride en 1,2-dichloorethaan; ethers zoals bijvoorbeeld diethylether, diisopropy-lether, tetrahydrofuran en dioxaan; aromatische koolwaterstof zoals bijvoorbeeld benzeen, tolueen en nitrobenzeen; amiden zoals bijvoorbeeld formamide, N,N-dimethyl-formamide, Ν,Ν-dimethylaceetamide en hexamethylfosfor-zuurtriamide; aminen zoals 30 bijvoorbeeld N-methylmorfoline, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, diis-opropylethylamine, dicyclohexylamine, N-methylpiperidine, pyridine, 4-pyrrolidinepy-ridine, Ν,Ν-dimethylaniline en Ν,Ν-diethylaniline; alcoholen zoals bijvoorbeeld methanol, ethanol, propanol, 2-propanol en 1-butanol. Nitrillen zoals bijvoorbeeld aceto- 19 nitril en benzonitril, sulfoxiden zoals bijvoorbeeld dimethylsulfoxide en sulfolaan; en water. Uit deze oplosmiddelen verdienen acetonitril en water de voorkeur.

De reactie wordt in aanwezigheid van een reagens zoals bijvoorbeeld een zuur of een base uitgevoerd. Er is eveneens geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard 5 van de toe te passen zuren of basen en elk zuur of base dat gewoonlijk in reacties van dit type worden gebruikt kunnen hier eveneens worden gebruikt.

Voorbeelden van dergelijke zuren omvatten carbonzuren zoals azijnzuur en pro-pionzuur, anorganische zuren zoals chloorwaterstofzuur en zwavelzuur; organische zuren zoals p-tolueensulfonzuur en trifluorazijnzuur en Lewis-zuren zoals bijvoorbeeld 10 BF3, AICh, FeCl3, AgCl, Znl2, Fe(N03)3, CF3S03Si(CH3)3, Yb(CF3S03)3 en SnCL,. Hieruit verdient azijnzuur de voorkeur.

Voorbeelden van dergelijke basen omvatten: alkalimetaalacetaten zoals bijvoorbeeld lithiumacetaat, natriumacetaat, kaliumhydroxide en cesiumacetaat; alkalimetaal-hydroxiden zoals lithiumhydroxide en natriumhydroxide en kaliumhydroxide; alkali-15 metaalalkoxiden zoals natriummethoxide en natriumethoxide en kalium-tert-butoxide; alkalimetaalcarbonaten zoals lithiumcarbonaat, natriumcarbonaat en kaliumcarbonaat; alkalimetaalwaterstofcarbonaten zoals bijvoorbeeld lithiumwaterstofcarbonaat, natri-umwaterstofcarbonaat en kalium-waterstofcarbonaat en aminen zoals bijvoorbeeld N-methylmorfoline, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, diisopropylethylamine, 20 dicyclohexylamine, N-methylpiperidine, pyridine, 4-pyrroIidinonpyridine, picoline, 4-(N,N-dimethylamino)-pyridine, 2,6-di(tert-butyl)-4-methylpyridine, chinoline, N,N-dimethylaniline, Ν,Ν-diethylaniline, DBN, l,4-diazabicyclo[2.2.2]octaan (DABCO), imidazool en DBU. Hieruit verdient natriumacetaat de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperatuur plaatsvinden en de nauw-25 keurige reactietemperatuur is niet kritisch voor de uitvinding. De voorkeursreactietem-peratuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter in het algemeen is het geschikt om de reactie bij een temperatuur van 0 tot ongeveer 250°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren met name de reactietemperatuur en de aard van de toe 30 te passen uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de hierboven beschreven de voorkeur verdienende omstandigheden wordt uitgevoerd zal in het algemeen een tijdsperiode van ongeveer 5 minuten tot ongeveer 72 uur voldoende zijn.

20

De volgorde van trap A2 en A3 kan worden vervangen. Bijvoorbeeld de verbinding waarvan de 3-positie gesubstitueerd is met hydroxymethyl in de verbinding met formule (IV) (waarin de verbinding verbinding (IVa) wordt genoemd), wordt bereid door middel van hydroxymethylering van verbindingen met formule (IV) met formal-5 dehyde, paraformaldehyde of 1,3,5-trioxaan zoals in trap A3 beschreven is en vervolgens wordt de verbinding met formule (I) bereid door omzetting van de verbinding (IVa) met de verbindingen met formule (V) zoals beschreven in trap A2.

Methode B

10

Deze illustreert de bereiding van verbindingen met formule (Ia).

Reactieschema B

o 0 RVS^ TrapB1 <RVS^N TrapB2 RO~A^N-\jRz Trap B3 ^^NH2 T^nh2 q Hal N A-^YNM2 (VII) (VIII) Hal^AR2 (IX) (X) (XI)

R-"V"-C

Trap B4 ^4 TrapBS _

NH ./v.NM ------ * NH

VYR jlN óXrs 0HfCHO iX

pg-^Y^-R6 R3 R4 paraformaldehyd „ R' M M «’ ,vi, of orS» t (B’

15 V

In reactieschema B is Hal een halogeenatoom en hetzelfde zal hierna van toepassing zijn.

21

Trap BI

Trap B1 in deze trap wordt de verbinding met formule (VIII) door halogenering van een verbinding met formule (VII) die in de handel verkrijgbaar is dan wel onder 5 toepassing van de methode beschreven in Amerikaans octrooischrift 2.199.839 bereid.

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect heeft op de reactie dan wel op de hierbij betrokken reactiemiddelen en dat het de reactiemiddelen althans tot 10 op zekere hoogte in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals dichloormethaan, chloroform, kool-stoftetrachloride en 1,2-dichloorethaan; ethers zoals diethylether, diisopropylether, te-trahydrofuran, cyclopentylmethylether en dioxaan; aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen, tolueen en hydrobenzeen; amiden zoals bijvoorbeeld N,N-dimethylforma-15 mide, Ν,Ν-dimethylaceetamide en hexamethylfosforzuurtriamide; nitrillen zoals bijvoorbeeld acetonitril en benzonitril en carbonzuur zoals azijnzuur of gemengde oplosmiddelen hieruit. Hier verdient cyclopentylmethylether de voorkeur.

De reactie wordt in aanwezigheid van een halogeneringsmiddel uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de toe te passen haloge-20 neringsmiddelen en alle halogeneringsmiddelen die gewoonlijk in dit type reactie worden gebruikt kunnen hier eveneens worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke halogeneringsmiddelen omvatten chloor, broom, N-chloorsuccinimide, N-broomsuccini-mide, (NBS), tetra-n-butylammoniumtribromide en l,3-diobroom-5,5-dimethylhydan-toïne. Hieruit verdient N-broomsuccinimide de voorkeur.

25 De reactie kan binnen een ruim gebied van temperatuur plaatsvinden en de nauw keurige temperatuur is niet kritisch voor de onderhavige uitvinding. De voorkeursreac-tietemperatuur zal van factoren afhangen zoals bijvoorbeeld de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter is het in het algemeen geschikt de reactie bij een temperatuur van ongeveer 0 tot ongeveer 80°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor 30 de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren met name de temperatuur en de aard van de toe te passen uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de geprefereerde hierboven beschreven om- standigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 10 minuten tot onge veer 8 uur in het algemeen voldoende zijn.

22

Trap B2 5

In deze trap wordt de verbinding met formule (X) door cyclisering van een verbinding met formule (VIII) en de verbinding met formule (IX) die in de handel verkrijgbaar is, bereid.

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid of afwezigheid van 10 een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect op de reactie of op de hierbij betrokken reactiemiddelen heeft en dat het de reactiemiddelen het althans tot op zekere hoogte in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals dichloormethaan, chlo-15 roform, koolstoftetrachloride en 1,2-dichloorethaan; ethers zoals bijvoorbeeld diethy-lether, diisopropylether, tetrahydrofuran en dioxaan; aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen, tolueen en nitrobenzeen; amiden zoals bijvoorbeeld formamide, N,N-di-methylformamide, Ν,Ν-dimethylaceetamide en hexamethylfosfor-zuurtriamide; keto-nen zoals bijvoorbeeld aceton en 2-butanon; alcoholen zoals methanol en ethanol; car-20 bonzuren zoals bijvoorbeeld azijnzuur en nitrillen zoals acetonitril en propionitril of gemengde oplosmiddelen hiervan. Hieruit verdient propionitril de voorkeur.

De reactie kan bij aanwezigheid of bij afwezigheid van een reactiemiddel zoals bijvoorbeeld een zuur of een base worden uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de gebruikte zuren of basen en elk zuur of base 25 dat gewoonlijk in die type reactie wordt gebruikt kan eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke zuren omvatten: zuren zoals bijvoorbeeld chloorwaterstof-zuur, zwavelzuur, broomwaterstofzuur en p-tolueensulfonzuur. Hieronder verdient p-tolueensulfonzuur of de afwezigheid van zuur de voorkeur. Voorbeelden van dergelijke basen omvatten: alkalimetaalwaterstofcarbonaten zoals bijvoorbeeld natriumwaterstof-30 carbonaat en kaliumwaterstofcarbonaat; alkalimetaal-carbonaten zoals bijvoorbeeld natriumcarbonaat en kaliumcarbonaat; aminen zoals bijvoorbeeld triethylamine en diis-opropylethylamine. Hieronder verdient diisopropylethylamine of de afwezigheid van een base de voorkeur.

23

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is niet kritisch over de onderhavige uitvinding. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen afhangen. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie bij 5 een temperatuur van ongeveer 20 tot ongeveer 150°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard van de gebruikte uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de boven beschreven geprefereerde omstandigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 3 uur 10 tot ongeveer 120 uur gewoonlijk voldoende zijn.

Trap B3

In deze trap wordt de verbinding met formule (IV) bereid door kruiskoppeling 15 van de verbinding met formule (X) met de verbinding met formule (XI) die in de han del verkrijgbaar kan zijn dan wel onder toepassing van de in de volgende methode C beschreven methoden bereid kan worden. De reactie wordt onder dezelfde omstandigheden als beschreven in J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 7215 uitgevoerd.

De reactie wordt gewoonlijk bij aanwezigheid of afwezigheid van een oplosmid-20 del uitgevoerd. Een gebruikelijk oplosmiddel is een aromatische koolwaterstof zoals bijvoorbeeld benzeen en tolueen.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een base uitgevoerd. Een gebruikelijke base is natrium-t-butoxide, zoals hierboven in de aangegeven literatuur beschreven is.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een katalysator uitgevoerd. De katalysator 25 bestaat uit een palladiumbron zoals bijvoorbeeld tris(dibenzylideenaceton)dipalladium (Pd2(dba)3), en een ligand zoals bijvoorbeeld tri(o-tolyl)fosfine, 1,1’-binaftaleen-2,2’-diylbis(difenylfosfine) (BINAP) en l,r-bis(difenylfosfino)ferroceen (DPPF). Hieronder verdient een combinatie van Pd2(dba)3 en BINAP volgens de hierboven aangegeven literatuur de voorkeur.

30 De reactie vindt gewoonlijk binnen een gebied van 80°C en 100°C plaats. De tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van de reactietemperatuur en de aard van de toegepaste uitgangsmaterialen en katalysator binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de hierboven beschreven voorkeursomstan- digheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 1 uur tot 22 uur gewoon lijk voldoende zijn.

24

Trap B4 5

In deze trap wordt de verbinding met formule (VI) bereid door hydrolyse van de verbinding met formule (IV) die bereid is volgens een condensatiereactie met de verbinding met formule (V) of door middel van een substitutiereactie van de verbinding met formule (IV) met een verbinding met formule (V). De reactie kan onder dezelfde 10 omstandigheden als beschreven in trap A2 van methode A worden uitgevoerd.

Trap B5

In deze trap wordt de gewenste verbinding met formule (Ia) bereid door middel 15 van hydroxymethylering van een verbinding met formule (VI) die zoals beschreven in trap B2 met formaldehyde, paraformaldehyde of 1,3,5-trioxaan is bereid. De reactie wordt onder dezelfde omstandigheden als beschreven in trap A3 van methode A uitgevoerd.

De volgorde van trap B4 en trap B5 kan worden vervangen. Bijvoorbeeld wordt 20 de verbinding waarvan de 3-positie gesubstitueerd is met behulp van hydroxymethyl in een verbinding met formule (IV) (waarin de verbinding verbinding (IVa)) wordt genoemd bereid door middel van hydroxymethylering van de verbinding met formule (IV) met behulp van formaldehyde, paraformaldehyde of 1,3,5-trioxaan zoals beschreven in trap A3 van methode A en vervolgens wordt de verbinding met formule (Ia) be-25 reid door omzetting van de verbinding (IVa) met de verbindingen met formule (V) zoals beschreven in trap A2 van methode A.

De verbinding met formule (Ib) waarin R1 anders is dan OH kan onder toepassing van methoden die de deskundigen bekend zijn zoals beschreven in “Design of Pro-drugs” door H. Bundgaard (Elsevier, 1985) worden bereid.

30 25

Methode C

Deze illustreert de bereiding van verbindingen met formule (Xla) waarin A CH2 is.

5

Reactieschema C

IJ _, α „„ Trap C2 £ Τ^,Ο II II -- R" ΗΛ^Τ'χ·· κ/Λ* P7a Λ?« <x«) (XIII) (XJV) (XV) ργ οΓΧ^* Trap C4 TrapC5

Hal-^f^R68 HarT^R* rvto'^V^R60 r*· r*> « J7, I (XVII) (XVI) NHi (XVIII) (Xla) 10 In het reactieschema C zijn R5a, R68 en R7a een waterstofatoom een Ci-C3-alkyl- groep of een fluoratoom; R8a is een waterstofatoom of een fluoratoom.

Trap Cl 15 In deze trap wordt de verbinding met formule (XIV) door een additiereactie van de verbinding met formule (XII) die in de handel verkrijgbaar is met de verbinding met formule (XIII) die in de handel verkrijgbaar is , bereid.

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te 20 passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect heeft op de reactie dan wel op de hierbij betrokken reactiemiddelen en dat het althans tot op zekere hoogte de 26 reactiemiddelen in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals dichloormethaan, chloroform, kool-stoftetrachloride en 1,2-dichloorethaan; ethers zoals bijvoorbeeld diethylether, diis-opropylether, tetrahydrofuran en dioxaan; aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen; 5 tolueen en hydrobenzeen; amiden zoals formamide, Ν,Ν-dimethylformamide, N,N-di-methylaceetamide en hexamethylfosforzuurtriamide; aminen zoals bijvoorbeeld N-methylmorfoline, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, diisopropylethylamine, N-methylpiperidine, pyridine, 4-pyrrolidino-pyridine, Ν,Ν-dimethylaniline en N,N-diethylaniline; alcoholen zoals methanol, ethanol, propanol, 2-propanol en butanol; 10 nitrillen zoals acetonitril en benzonitril; sulfoxiden zoals dimethylsulfoxide en sulfo-laan en ketonen zoals aceton en diethylketon. Van deze oplosmiddelen verdienen acetonitril en tetrahydrofuran de voorkeur.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een base uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de toegepaste base en alle basen die gewoonlijk in 15 dit type reactie worden gebruikt kunnen eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke basen omvatten: alkalimetaalhydroxiden zoals lithiumhydroxide, natriumhydroxide en kaliumhydroxide; alkalimetaalhydriden zoals lithiumhydride, natrium-hydride en kaliumhydride; alkalimetaalalkoxiden zoals natriumethoxide en natriume-thoxy en kalium-t-butoxide; alkalimetaalcarbonaten zoals lithiumcarbonaat, natrium-20 carbonaat en kaliumcarbonaat; alkalimetaalwaterstofcarbonaten zoals lithiumwaterstof-carbonaat, natriumwaterstofcarbonaat en kaliumwaterstofcarbonaat; aminen zoals bijvoorbeeld N-methylmorfoline, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, diisopropylethylamine, N-methylpiperidine, pyridine, 4-(N,N-dimethylamino)pyridine en DBU; en tetraalkylammoniumfluoriden zoals tetra-n-butyl-ammoniumfluoride (TBAF). Hier-25 uit verdient TBAF de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige temperatuur is niet kritisch voor de onderhavige uitvinding. De voor-keursreactietemperaturen zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie bij een 30 temperatuur van ongeveer 0 tot ongeveer 100°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard de toegepaste uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de hierboven beschreven reactieom- standigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 5 minuten tot onge veer 72 uur gewoonlijk voldoende zijn.

27

Trap C2 5

In deze trap wordt de verbinding met formule (XV) bereid door hydrogenering van de verbinding met formule (XIV).

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van het toe te 10 passen oplosmiddel vooropgesteld dat dit geen nadelig effect heeft op de reactie of op de hierbij betrokken reactiemiddelen en dat het althans tot op zekere hoogte de reactie-middelen in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: aromatische koolwaterstoffen zoals tolueen; alcoholen zoals methanol en ethanol; en carbonzuren zoals azijnzuur. Uit deze oplosmiddelen verdienen alcoholen en car-15 bonzuren de voorkeur.

De reactie wordt onder waterstofatmosfeer en bij aanwezigheid van een katalysator uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de toegepaste katalysatoren en alle katalysatoren die gewoonlijk in dit type reactie worden uitgevoerd kunnen eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke kataly-20 satoren omvatten: palladium op koolstof, platina en Raney-nikkel. Uit deze katalysatoren verdient palladium op koolstof de voorkeur.

In het geval dat hydrodehalogenering (van substituent “Hal” in reactieschema C) een ernstig probleem is kan de reactie bij aanwezigheid van een additief worden uitgevoerd, die de activiteit van de toegepaste katalysator reduceert. Het additief wordt ge-25 kozen uit stoffen waarvan bekend is dat zij een giftig effect op de katalysator enigszins vertonen. Voorbeelden van dergelijke additieven omvatten: een halogenide-ion bron zoals bijvoorbeeld tetra-n-butylammoniumbromide en natriumbromide en sulfoxiden zoals dimethylsulfoxide. Hieruit verdient natriumbromide de voorkeur.

De reactie kan onder een ruim gebied van drukken plaatsvinden en de nauwkeu-30 rige druk is voor de onderhavige uitvinding niet kritisch. De voorkeursdruk zal van factoren afhangen zoals bijvoorbeeld de aard van de uitgangsmaterialen en het oplosmiddel. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie onder een druk van 1 tot ongeveer 10 atmosfeer uit te voeren. De reactie kan binnen een ruim gebied van tempe- 28 ratuur plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is voor de onderhavige uitvinding niet kritisch. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. In het algemeen is het geschikt om de reactie bij een temperatuur van ongeveer 0 tot ongeveer 50°C uit te voeren. De 5 tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren en met name de waterstofdruk, de reactietemperatuur en de aard van de toegepaste uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de hierboven beschreven geprefereerde omstandigheden wordt uitgevoerd zal een periode van ongeveer 30 minuten tot ongeveer 12 uur gewoonlijk voldoende zijn.

10

Trap C3

In deze trap wordt de verbinding met formule (XVI) door cyclisering van de verbinding met formule (XV) bereid.

15 De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een zuur uitge voerd, welk als oplosmiddel en reagens werkzaam is. Er is geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen zuur vooropgesteld dat dit geen nadelig effect heeft op de reactie en dat het tenminste tot op zekere hoogte het substraat in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte zuren omvatten: waterig zuur en trifluorme-20 thaansulfonzuur. Hieruit verdient trifluormethaansulfonzuur de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige temperatuur is voor de uitvinding niet kritisch. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals bijvoorbeeld de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie bij een tempe-25 ratuur van ongeveer 0 tot ongeveer 150°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan eveneens in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard van de gebruikte uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de geprefereerde hierboven beschreven omstandigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 30 30 minuten tot ongeveer 5 uur in het algemeen gewoonlijk voldoende zijn.

Trap C4 29

In deze trap wordt de verbinding met formule (XVIII) bereid door middel van een reducerende aminering van de verbinding met formule (XVI) met de verbinding met formule (XVII) die in de handel verkrijgbaar is. In het geval van het gebruik van een 5 optisch actieve verbinding met formule (XVII) kan de resulterende verbinding met formule (XVIII) als een optisch actieve verbinding worden verkregen.

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect op de reactie of op de 10 hierbij betrokken reactiemiddelen heeft en dat het de reactiemiddelen het althans tot op zekere hoogte in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals bijvoorbeeld dichloormethaan en 1,2-dichloorethaan; ethers zoals bijvoorbeeld diethylether, diisopropylether, tetrahydrofti-ran en dioxaan; aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen en tolueen; amiden zoals 15 bijvoorbeeld formamide, N,N-dimethylformamide, Ν,Ν-dimethylaceetamide en hexa-methylfosforzuurtriamide; aminen zoals N-methylmorfoline, triethylamine, tripropyla-mine, tributylamine, diisopropylethylamine, dicyclohexylamine, N-methylpiperidine, pyridine, 4-pyrrolidinopyridine, Ν,Ν-dimethylaniline en Ν,Ν-diethylaniline en alcoholen zoals methanol, ethanol, propanol, 2-propanol en butanol. Uit deze oplosmiddelen 20 verdient tetrahydrofuran de voorkeur.

De reactie wordt bij aanwezigheid of bij afwezigheid van een dehydrateringsmid-del uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de toegepaste dehydrateringsmiddelen en alle dehydrateringsmiddelen die gewoonlijk in dit type reactie worden gebruikt kunnen eveneens hier worden gebruikt, voorbeelden 25 van dergelijke dehydrateringsmiddelen omvatten: tita- nium(IV)isopropoxymagnesiumsulfaat en moleculaire zeven. Hieruit verdient tita-nium(IV)isopropoxide de voorkeur.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een reductiemiddel uitgevoerd. Er is eveneens geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van de toegepaste reductiemid-30 delen en elk reductiemiddel dat gewoonlijk in dit type reactie wordt gebruikt kan eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke reductiemiddelen omvatten: metaalboorhydriden zoals natirumboorhydride en natriumcyaanboorhydride; combinaties van een waterstofleverancier zoals waterstofgas en ammoniumformiaat, katalysato- 30 ren zoals palladium-koolstof, platina en Raney-nikkel; een combinatie van metalen zoals zink en ijzer; zuren zoals een chloorwaterstofzuur, azijnzuur en azijnzuur-ammo-niumchloridecomplex; hydrideverbindingen zoals lithiumaluminiumhydride, natrium-boorhydride en diisobutylaliuniniumhydride; en boraanreagentia zoals boraan-tetrahy-5 drofurancomplex, boraan-dimethylsulfidecomplex (BMS) en 9-borabicy-clo[3.3.1]nonaa (9-BBN). Hieruit verdient natriumboorhydride de voorkeur.

De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is voor de onderhavige uitvinding niet kritisch. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals bijvoorbeeld de aard van 10 het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie bij een temperatuur van ongeveer -40 tot ongeveer 20°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan eveneens in afhankelijkheid van vele factoren en met name de reactietemperatuur en de aard van de gebruikte uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de 15 geprefereerde hierboven beschreven omstandigheden wordt uitgevoerd zal een tijdsperiode van ongeveer 30 minuten tot ongeveer 24 uur in het algemeen gewoonlijk voldoende zijn.

Trap CS

20

In deze trap wordt de verbinding met formule (Xla) bereid door hydrogenolyse van de verbinding met formule (XVIII).

De reactie wordt gewoonlijk en bij voorkeur bij aanwezigheid van een oplosmiddel uitgevoerd. Er is geen bijzondere beperking ten aanzien van de aard van het toe te 25 passen oplosmiddel vooropgesteld dat het geen nadelig effect op de reactie of op de hierbij betrokken katalysator heeft en dat het de reagentia althans tot op zekere hoogte in oplossing kan brengen. Voorbeelden van geschikte oplosmiddelen omvatten: ethers zoals diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran en dioxaan; aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen en tolueen; alcoholen zoals methanol, ethanol, propanol, 2-30 propanol en butanol en carbonzuren zoals azijnzuur of gemengde oplosmiddelen hiervan. Uit deze oplosmiddelen verdient methanol de voorkeur.

De reactie wordt bij aanwezigheid van een waterstofleverancier en een katalysator uitgevoerd. Er is eveneens geen bepaalde beperking ten aanzien van de aard van de 31 waterstofleveranciers en de toegepaste katalysatoren en alle waterstofleveranciers en katalysatoren die gewoonlijk in dit type reactie worden gebruikt kunnen eveneens hier worden gebruikt. Voorbeelden van dergelijke waterstofleveranciers omvatten: waterstofgas en ammoniumformiaat. Hieruit verdient waterstofgas de voorkeur. Voorbeelden 5 van deze katalysatoren omvatten: palladium op koolstof, palladiumhydroxide en palla-diumchloride. Hieruit verdient palladium op koolstof de voorkeur.

De reactie kan onder een ruim gebied van drukken plaatsvinden en de nauwkeurige druk is voor de onderhavige uitvinding niet kritisch. De voorkeursdruk zal van factoren afhangen zoals bijvoorbeeld de aard van de uitgangsmaterialen en het oplos-10 middel. Echter is het in het algemeen geschikt om de reactie onder een druk van 1 tot ongeveer 10 atmosfeer uit te voeren. De reactie kan binnen een ruim gebied van temperaturen plaatsvinden en de nauwkeurige reactietemperatuur is voor de onderhavige uitvinding niet kritisch. De voorkeursreactietemperatuur zal van factoren afhangen zoals de aard van het oplosmiddel en de uitgangsmaterialen. In het algemeen is het geschikt 15 om de reactie bij een temperatuur van ongeveer 20 tot ongeveer 100°C uit te voeren. De tijd die nodig is voor de reactie kan in afhankelijkheid van vele factoren en met name de waterstofdruk, de reactietemperatuur en de aard van de toegepaste uitgangsmaterialen en oplosmiddel binnen ruime grenzen variëren. Echter vooropgesteld dat de reactie onder de hierboven beschreven geprefereerde omstandigheden wordt uitgevoerd zal een 20 tijdsperiode van ongeveer 30 minuten tot ongeveer 12 uur gewoonlijk voldoende zijn.

De bereiding isolatie van afzonderlijke enantiomeren kan onder toepassing van gebruikelijke technieken worden uitgevoerd zoals bijvoorbeeld de chirale synthese uitgaande van een geschikte optisch zuivere precursor die volgens methode C dan wel door scheiding van het racemaat (of het racemaat van een zout of derivaat) worden be-25 reid, onder toepassing van bijvoorbeeld chirale hoge druk vloeistofchromatografie (HPLC).

Op een andere wijze kan een methode van optische scheiding van een racemaat (of een racemische precursor) op geschikte wijze worden gekozen uit de conventionele procedures bijvoorbeeld preferentiële kristallisatie overschrijding van diastereomere 30 zouten tussen een basische groep van de verbinding met formule (I) en een geschikt optisch actief zuur zoals wijnsteenzuur.

32

De verbindingen met formule (I) en de tussenproducten in de boven vermelde bereidingsmethode kunnen worden geïsoleerd en gezuiverd door middel van conventionele procedures zoals destillatie, herkristallisatie of chromatografische zuivering.

Verbindingen volgens de uitvinding die bedoeld zijn voor farmaceutisch gebruik 5 kunnen als kristallijne of amorfe producten worden toegediend. Zij kunnen bijvoorbeeld worden verkregen als vaste pluggen, poeders of films door middel van methoden zoals bijvoorbeeld precipitatie, kristallisatie, vriesdrogen, sproeidrogen of drogen onder verdamping. Microgolfdrogen of drogen onder toepassing van radio-ffequentie kunnen voor dit doel worden toegepast.

10 Ze kunnen alleen of in combinatie met een of meer andere verbindingen volgens de uitvinding of een combinatie met een of meer andere geneesmiddelen (of als elke combinatie hieruit) worden toegediend. In het algemeen zullen zij als een farmaceutische samenstelling of formulering tezamen met een of meer farmaceutisch aanvaardbare dragers of toevoegsels worden toegediend. De term “drager” of “toevoeg- 15 sel/excipiënt” wordt in de beschrijving gebruikt om een of meer ingrediënten anders dan een of meer van de verbindingen volgens de uitvinding te omschrijven. De keuze van drager of toevoegsel zal in aanmerkelijke mate afhangen van factoren zoals de bijzondere wijze van toediening, het effect van het toevoegsel op de oplosbaarheid en stabiliteit en de aard van de doseringsvorm.

20 Farmaceutische samenstellingen die geschikt zijn voor de afgifte van verbindin gen volgens de uitvinding en methoden voor de bereiding hiervan zullen de deskundige duidelijk zijn. Dergelijke samenstellingen en methoden volgens de bereiding hiervan kunnen bijvoorbeeld in “Remington’s Pharmaceutical Sciences”, 19* editie (Mack Publishing Company, 1995) worden gevonden.

25

Orale toediening

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen oraal worden toegediend. Orale toediening kan het inslikken omvatten zodanig dat de verbinding het maagdarmkanaal 30 binnentreedt dan wel kan toediening via de mond of sublinguale toediening worden toegepast waardoor de verbinding rechtstreeks uit de mond de bloedcirculatie binnentreedt.

33

Formuleringen die geschikt zijn voor orale toediening omvatten vaste formuleringen zoals bijvoorbeeld tabletten, capsules die deeltjes bevatten, vloeistoffen of poeders, zuigtabletten (waaronder die welke met een vloeistof gevuld zijn), kauwtabletten, multi en nanodeeltjes, gels, een vaste oplossing, liposoom, films (waaronder films die aan de 5 slijmvlies hechten), pareltjes, sprays en vloeibare formuleringen.

Vloeibare formuleringen omvatten bijvoorbeeld suspensies, oplossingen, siropen en elixers. Dergelijke formuleringen kunnen als vulmiddelen in zachte of harde capsules worden gebruikt en omvatten een drager bijvoorbeeld water, ethanol, polyethyleen-glycol, propyleenglycol, methylcellulose of een geschikte olie en een of meer emul-10 geermiddelen en/of suspendeermiddelen omvatten. Vloeibare formuleringen kunnen eveneens door reconstitutie van een vaste stof bijvoorbeeld vanuit een zakje worden bereid.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen eveneens worden toegepast in snel oplosbare, snelle desintegrerende doseringsvormen zoals die beschreven in Expert 15 Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981 -986 door Liang en Chen (2001).

Voor doseringsvormen in de vorm van een tablet kan het geneesmiddel afhankelijk van de dosering van ongeveer 1 gew.% tot ongeveer 80 gew.% van de doseringsvormen meer gebruikelijk van ongeveer 5 tot ongeveer 60 gew.% van de doseringsvormen uitmaken. Behalve het geneesmiddel bevatten de tabletten in het algemeen een 20 desintegreermiddel. Voorbeelden van desintegreermiddelen omvatten natriumzetmeel-glycolaat, natriumcarboxymethylcellulose, calciumcarboxymethyl-cellulose, croscar-mellosenatrium, crospovidon, polyvinylpyrrolidon, methylcellulose, microkristallijne cellulose, met een kleinalkyl gesubstitueerd hydroxypropylcellulose, zetmeel, voorgelatiniseerd zetmeel en natriumalginaat. In het algemeen omvat het desintegreermiddel 25 van ongeveer 1 tot ongeveer 25 gew.%, bij voorkeur van ongeveer 5 tot ongeveer 20 gew.% van de doseringsvorm.

Bindmiddelen worden in het algemeen gebruikt voor het verlenen van cohesieve eigenschappen aan een tabletformulering. Geschikte bindmiddelen omvatten micro-kristallijne cellulose, gelatine, suikers, polyethyleenglycol, natuurlijke en synthetische 30 gommen, polyvinylpyrrolidon, voorgegelatiniseerd zetmeel, hydroxypropylcellulose en hydroxypropylmethylcellulose. Tabletten kunnen eveneens verdunningsmiddelen zoals lactose (monohydraat, gesproeidroogd monohydraat, watervrij en dergelijke), mannitol, 34 xylitol, dextrose, sucrose, sorbitol, microkristallijn cellulose, zetmeel en dibasisch cal-ciumfosfaatdihydraat bevatten.

Tabletten bevatten in het algemeen tevens lubrificeermiddelen zoals magnesi-umstearaat, calciumstearaat, zinkstearaat, natriumsteary 1 fumaraat en mengsels van 5 magnesiumstearaat, natriumlaurylsulfaat. Lubrificeermiddelen omvatten in het algemeen van ongeveer 0,25 gew.% tot ongeveer 10 gew.%, bij voorkeur van ongeveer 0,5 gew.% tot ongeveer 3 gew.% van de tablet.

Andere mogelijke ingrediënten omvatten antioxidantia, kleurstoffen, aroma’s, conserveermiddelen en de smaakmaskerende middelen.

10 Voorbeelden van tabletten bevatten ten hoogste ongeveer 80% geneesmiddel van ongeveer 10 gew.% tot ongeveer 90 gew.% bindmiddel, van ongeveer 0 gew.% tot ongeveer 85 gew.% verdunningsmiddel, van ongeveer 2 gew.% tot ongeveer 10 gew.% desintegreermiddel en van ongeveer 0,25 gew.% tot ongeveer 10 gew.% lubrifïceer-middel.

15 Tabletmengsels kunnen rechtstreeks worden samengeperst dan wel door middel van een cilinder worden samengeperst waarbij tabletten worden gevormd. Tabletmengsels of porties van mengsels kunnen op een andere wijze nat, droog of in de smelt gegranuleerd worden, in de smelt gegeleerd worden dan wel voorafgaande aan het tablet-teren geëxtrudeerd worden. De uiteindelijke formulering kan een of meer lagen om-20 vatten en kan al dan niet bekleed zijn; deze kan zelfs ingekapseld worden.

De formulering van tabletten is in “Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1”, door H. Lieberman en L. Lachman, Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X) besproken.

Vaste formuleringen voor orale toediening kunnen worden geformuleerd voor 25 onmiddelike en/ofgemodificeerde afgifte.Gemodifïceerde afgifte formuleringen omvatten vertraagde,duurzame,gepulseerde,gecontraheerde, doelgerichte en geprogrammeerde afgifte.

Geschike gemodificeerde afgifte formuleringen voor de doeleinden van de uitvinding zijn in amerikaansoctrooischrift 6106864 beschreven .Details van andere geschikte 30 afgifte afgifte technologieën zoals hoge energie dispersies en osmotische en beklede deeltjes zijn te vinden in Verma et al Pharmaceutical Technology on-line,25(2)l-14(200 l)de toepassing van kauwgum voor het bereiken van gecontraheerde afgifte is in WOOO/35298 beschreven.

35

PARENTERALE TOEDIENING

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen eveneens rechtstreeks in de bloedcirculatie ,in spier of in een inwendig orgaan worden toegediend. Geschikte middelen voor parenterale toediening omvatten intraveneuze,intraarteriele,intraperitoneale 5 ,intrathecale intraventriculaire ,intraurethrale,intrastemaie ,intracraniale,intramusculaire en subcutane toediening.geschikte apparatenvoor parenterale toediening omvatten naald(waaronder micronaald)injectoren,naaldvrije injectoren en infusie technieken. Parenterale formuleringen zijn gebruikelijke waterige oplossingen die exipienten kunnen bevatten zoals zoals zouten .koolhydraten,en beffermiddelen (bijvoorkeur tot een 10 pH van ongeveer 3 tot ongeveer 9) maar voor sommige formuleringen kunnen zij beter geformuleerd worden als als een steriele niet waterige oplossingof als gedroogde vorm toepasbaar tezamen met een geschikte drager zoals steriel ,pyrogeen vrij water.

De bereiding van parenterale formuleringen onder steriele omstandigheden ,bijvoorbeeld door lyophilisatie kan gemakkelijk totstand worden gebracht door toe-15 passing van standaard pharmaceutische technieken die de deskundigen bekend zijn .

De oplosbaarheid van verbindingen met formule (I) kunnen gebruikt worden in de bereiding van parenterale oplossing en kan worden verhoogd door de toepassing van geschikte formuleringstechnieken zoals het opnemen van middelen die de oplosbaarheid bevorderen.

20 Formuleringen voor parenterale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgifte. Gemodificeerde afgifteformuleringen omvatten vertraagde, duurzame, gepulseerde, gecontroleerde, gerichte en geprogrammeerde afgifte. De verbindingen volgens de uitvinding kunnen als een vaste, halfvaste, of thixotrope vloeistof voor toediening worden geformuleerd in de vorm van een geïm-25 planteerd depot dat een gemodificeerde afgifte van de actieve verbinding verschaft. Voorbeelden van dergelijke formuleringen omvatten met geneesmiddel beklede stents en PGLA microsferen.

Topische toediening

De verbinding volgens de uitvinding kunnen topisch op de huid of slijmvlies, dat wil zeggen dermaal of transdermaal worden toegediend. Gebruikelijke formuleringen voor dit doel bevatten gels, hydrogels, lotions, oplossingen, crèmes, zalven, vernevel- 30 36 bare poeders, dressings, schuim, films, huidpatches, wafers, implantaten, sponsjes, vezels, wikkelingen en micro-emulsies. Liposomen kunnen eveneens worden toegepast. Gebruikelijke dragers omvatten alcohol, water, minerale olie, vloeibaar petrolaten, witte petrolaten, glycerol, polyethyleenglycol en propyleenglycol omvatten. De pene-5 tratiebevorderende middelen kunnen worden opgenomen, zie bijvoorbeeld J. Pharm. Sci, 88 (10), 955-958 door Finnin en Morgan (oktober 1999).

Andere middelen van topische toediening omvatten afgifte door elektroporatie, iontoforese, fonoforese, sonoforese en micronaald of naaldvrije (bijvoorbeeld Powder-ject™, Bioject™, enz.) injecties.

10 Formuleringen voor topische toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgifte. Gemodificeerde afgifteformuleringen omvatten vertraagde, duurzame, gepulseerde, gecontroleerde, gerichte en geprogrammeerde afgifte.

15 Toediening door inhalatie en intranasale toediening

De verbinding volgens de uitvinding kunnen eveneens intranasaal of via inhalatie gewoonlijk in de vorm van een droog poeder (hetzij alleen hetzij in de vorm van een mengsel bijvoorbeeld in een droog mengsel met lactose of als een gemengd compo-20 nentdeeltje bijvoorbeeld gemengd met fosfolipiden zoals bijvoorbeeld fosfatidylcho-line) uit een droog poeder inhalator of als een aerosol prespray uit een onderdruk staande houder, een pomp, spray, vemevelaar (bij voorkeur een vemevelaar onder toepassing van elektrohydrodynamica voor het produceren van een fijne nevel) of een ver-nevelaar met of zonder de toepassing van een geschikt drijfmiddel zoals 1,1,1,2-tetraf-25 luorethaan of 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropaan, worden toegediend. Voor intranasaal gebruik kan het poeder een biohechtend middel bijvoorbeeld chitosan of cyclodextrine omvatten.

De onder druk staande houder, pomp, spray, vemevelaar of spuitbus bevat een oplossing of suspensie van een of meer verbindingen volgens de uitvinding die bij-30 voorbeeld ethanol, waterige ethanol of een geschikt alternatief middel voor het disper-geren, in oplossing brengen of voor het verlengen van de afgifte van het actieve middel, een of meer drijfmiddelen als oplosmiddel en eventueel een oppervlakte-actief middel zoals sorbitantrioleaat, oliezuur of een oligomelkzuur omvatten.

37

Voorafgaande aan het gebruik in een droog poeder of suspensieformulering wordt het geneesmiddelproduct gemicroniseerd tot een afmeting die geschikt is voor afgifte door inhalatie (gewoonlijk minder dan 5 microns). Dit kan tot stand worden gebracht door middel van elke geschikte methode voor het fïjnmalen zoals bijvoorbeeld fijnma-5 len met een spiraaljet, fïjnmalen door middel van een gefluïdiseerd bedjet, bewerking met behulp van een superkritische vloeistof voor het vormen van nanodeeltjes, hoge-druk homogenisatie of sproeidrogen.

Capsules (bijvoorbeeld vervaardigd uit gelatine of HPMC), doordrukverpakkin-gen en patronen voor gebruik in een inhalator in insufflator kunnen zodanig worden 10 geformuleerd dat zij een poedermengsel van een verbinding volgens de uitvinding, een geschikte poederbasis zoals lactose of zetmeel en een de prestatie modificerend middel zoals 1-leucine, mannitol of magnesiumstearaat bevatten. De lactose kan watervrij zijn dan wel in de vorm van het monohydraat, bij voorkeur laatstgenoemd zijn. Andere geschikte toevoegsels omvatten dextraan, glucose, maltose, sorbitol, xylitol, fructose, 15 sucrose en trehalose.

Een geschikte oplossingsformulering voor gebruik in een vemevelaar onder toepassing van elektrohydrodynamica voor het produceren van een fijne nevel kan van ongeveer 1 pg tot ongeveer 20 mg van de verbinding volgens de uitvinding per keer bevatten en het toegepaste volume kan van ongeveer 1 μΐ tot ongeveer 100 μΐ variëren. 20 Een gebruikelijke formulering kan een verbinding met formule (I), propyleenglycol, steriel water, ethanol en natriumchloride omvatten. Alternatieve oplosmiddelen die in plaats van propyleenglycol gebruikt kunnen worden omvatten glycerol en polyethy-leenglycol.

Geschikte aroma’s zoals menthol en levomenthol of zoetstof zoals sacharine of 25 sacharinenatrium kunnen aan deze formuleringen volgens de uitvinding worden toegevoegd die bedoeld zijn voor toediening via inhalatie of intranasaal. Formulering voor inhalatie of intranasale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgifte bijvoorbeeld onder toepassing van poly(DL-melkzuur-coglycolzuur (PGLA). Gemodificeerde afgifteformuleringen omvatten vertraagde, 30 duurzame, gepulseerde, gecontroleerde, gerichte en geprogrammeerde afgifte.

In het geval van droog poeder inhalators en aerosols, is de doseringseenheid bepaald door middel van een ventiel dat een afgemeten hoeveelheid afgeeft. Eenheden volgens de uitvinding zijn gewoonlijk zodanig gekozen dat zij een afgepaste hoeveel 38 heid of “puf’ toedienen die van ongeveer 1 tot ongeveer 100 pg van de verbinding met formule (I) bevat. De algemene dagelijkse doseringen zal gewoonlijk binnen het gebied van 50 pg tot ongeveer 20 mg liggen deze kan in een enkele dosis, meer gebruikelijk als verdeelde dosis over de gehele dag kan worden toegediend.

5

Rectale/intravaginale toediening

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen rectaal of vaginaal bijvoorbeeld in de vorm van een zetpil, pessarium of enema worden toegediend. Cacaoboter is een tra-10 ditionele suppositoriumbasis maar verscheidene alternatieven kunnen des vereist worden toegepast.

Formuleringen voor rectale/vaginale toediening kunnen worden geformuleerd voor onmiddellijke en/of gemodificeerde afgifte. Gemodificeerde afgifteformuleringen omvatten vertraagde, duurzame, gepulseerde, gecontroleerde, gerichte en geprogram-15 meerde afgifte.

Andere technologieën

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen met oplosbare macromoleculaire 20 entiteiten worden gecombineerd zoals bijvoorbeeld cyclodextrine en geschikte derivaten daarvan dan wel polyethyleenglycol bevattende polymeren teneinde hun oplosbaarheid, oplossnelheid, smaakmaskering, biobeschikbaarheid en/of stabiliteit voor gebruik in elke van de boven vermelde wijze van toediening te verbeteren.

Geneesmiddel-cyclodextrinecomplexen worden bijvoorbeeld beoordeeld als alge-25 meen toepasbaar voor de meeste doseringsvormen en toedieningsroutes. Zowel inclusie als niet inclusiecomplexen kunnen worden gebruikt. Als alternatief voor rechtstreekse complexering met het geneesmiddel kan het cyclodextrine als een hulpadditief worden gebruikt, dat wil zeggen als een drager, verdunningsmiddel of oplosbaar makend middel. Het meest gebruikt voor deze doeleinden zijn alfa, beta en gamma-cyclodextrinen, 30 voorbeelden waarvan in WO 91/11172, WO 94/02518 en WO 98/55148 kunnen worden gevonden.

39

Multicomponentenkit

Voorzover het wenselijk is om een combinatie van actieve verbindingen toe te dienen, bijvoorbeeld voor het doel van het behandelen van een bepaalde ziekte of 5 ziektetoestand valt het binnen de omvang van de onderhavige uitvinding dat twee of meer farmaceutische samenstellingen ten minste een waarvan een verbinding volgens de uitvinding bevat met voordeel gecombineerd wordt in de vorm van een kit die geschikt is voor medetoediening van de samenstellingen.

Dus omvat de kit volgens de uitvinding twee of meer afzonderlijke farmaceuti-10 sche samenstellingen waarvan ten minste een een verbinding met formule (I) volgens de uitvinding bevat en middelen voor het gescheiden houden van deze samenstellingen zoals bijvoorbeeld een houder, een fles met compartimenten of een folieverpakking met compartimenten. Een voorbeeld van een dergelijke kit is de vertrouwelijke doordruk-verpakking die gebruikt wordt voor de verpakking van tabletten, capsules en dergelijke. 15 De kit volgens de uitvinding is in het bijzonder geschikt voor het toedienen van verschillende doseringsvormen bijvoorbeeld orale en parenterale toediening voor het toedienen van de gescheiden samenstellingen op verschillende doseringsintervallen of voor het titreren van de gescheiden samenstellingen tegen elkaar. Voor het assisteren van het trouwe gebruik van het geneesmiddel omvat de kit gewoonlijk aanwijzingen 20 voor de toediening en kan voorzien zijn van een zogenoemd geheugensteuntje.

Dosering

Voor de toediening aan humane patiënten is de totale dagelijkse dosering van de 25 verbindingen volgens de uitvinding binnen het gebied van ongeveer 0,05 tot ongeveer 500 mg vanzelfsprekend afhankelijk van de wijze van toediening, bij voorkeur binnen het gebied van ongeveer 0,1 tot 400 mg en meer bij voorkeur binnen het gebied van ongeveer 0,5 tot ongeveer 300 mg. Bijvoorbeeld kan orale toediening een totale dagelijkse dosering van ongeveer 1 mg tot ongeveer 300 mg omvatten terwijl een intrave-30 neuze dosering slechts van ongeveer 0,5 mg tot ongeveer 100 mg kan vereisen. De totale dagelijkse dosering kan in een enkele of in verdeelde doseringen worden toegediend.

40

Deze doseringen zijn gebaseerd op een gemiddelde persoon met een gewicht van ongeveer 65 kg tot ongeveer 70 kg. De arts zal gemakkelijk in staat zijn om dosis te bepalen voor patiënten was van het gewicht buiten dit gebied valt zoals bijvoorbeeld kleuters en oudere mensel.

5

Combinaties

Zoals hierboven besproken is, vertoont een verbinding volgens de uitvinding een zuurpompremmende activiteit. Een zuurpompantagonist volgens de onderhavige uit-10 vinding kan met voordeel worden gecombineerd met een andere farmacologisch actieve verbinding of met twee of meer andere farmacologisch actieve verbindingen in het bijzonder bij de behandeling van maagslokdarmrefluxziekte. Bijvoorbeeld een zuurpompantagonist in het bijzonder een verbinding met formule (I) of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan zoals hierboven gedefinieerd kan simultaan, achter 15 elkaar of afzonderlijk in combinatie met een of meer middelen worden toegediend die gekozen zijn uit: (i) histamine H2-receptorantagonisten, bijvoorbeeld ranitidine, lafutidine, rizatidine, cimetidine, famotidine en roxatidine; 20 (ii) protonpompinhibitoren, bijvoorbeeld omeprazole, esomeprazole, pantopra- zole, rabeprazole tenatoprazole, ilaprazole en lansoprazole; (iii) oraal antizuurmengsels, bijvoorbeeld Maalox®, Aludrox® en Gaviscon®; (iv) slijmvlies beschermende middelen, bijvoorbeeld polaprezinc, ecabetna- trium, rebamipide, teprenone, cetraxate, sucralfate, chlooipylline-koper en 25 plaunotol; (v) antimaagzuurmiddelen, bijvoorbeeld Anti-gastrin vaccine, itriglumide en Z-360; (vi) 5-HT3 antagonisten, bijvoorbeeld dolasetron, palonosetron, alosetron, azasetron, ramoseteron, mitrazapine, granisetron, tropisetron, E-3620, on- 30 dansetron en indisetron; (vii) 5-HT4 agonisten, bijvoorbeeld tegaserod, modapride, cinitapride en oxtrip- tane; 41 (viii) laxeermiddelen, bijvoorbeeld Tifyba®, Fybogel®, Konsyl®, Isogel®, Regulan®, Celevac® en Normacol®; (ix) GABAb agonisten, bijvoorbeeld baclofen en AZD-3355; (x) GABAb antagonisten, bijvoorbeeld GAS-360 en SGS-742; 5 (xi) calciumkanaal blokkeringsmiddelen, bijvoorbeeld aranidpine, lacidipine, falodipine, azelnidipine, clinidipine, lomerzine, diltiazem, gallopamil, efo-nidipine, nisoldipine, amlodipine, lercanidipine, bevantolol, nicardipine, is-radipine, benidipine, verapamil, nitrendipine, bamidipine, propafenone, manidipine, bepridil, nifedipine, nilvadipine nimodipine en fasudil; 10 (xii) dopamine-antagonisten, bijvoorbeeld metoclopramide, domperidone en levosulpiride; (xiii) tachykinine (NK) antagonisten, in het bijzonder NK-3, NK-2 en NK.-1 antagonisten, bijvoorbeeld nepadutant, saredutant, talnetant, (aR,9R)-7-[3,5-bis(tri-fluormethyl)benzyl]-8,9,10,11 -tetrahydro-9-methyl-5-(4-me- 15 thylfenyl)-7H-[ 1,4]diazo-cino[2,1 -g][l ,7]naftiridine-6,13-dion (TAk-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(lR)-l-[3,5-bis(tri-fluormethyl)fenyl]ethoxy-3-(4-fluorfe-nyl)-4-morfolinyl]methyl]-1,2-dihydro-3H-1,2,4-triazool-3 -on (MK-869), lanepitant, dapitant en 3-[[2-methoxy-5-(trifluormethoxy)-fe-nyljmethylamino] -2-feny lpiperidine(2 S,3 S); 20 (xiv) Helicobacter pylori infectiemiddelen, bijvoorbeeld clarithromycin, rokitamycin, flurithromycin, telithromycin, amoxicillin, ampicillin, temo-cillin, bacampicillin, aspoxicillin, sultamicillin, piperacillin, lenampicillin, tetracycline, metronidiazole, bithmuthcitraat, en bithmuthsubsalicylaat; (xv) stikstofoxidesynthaseremmers, bijvoorbeeld GW-274150, tilarginine, P54, 25 guanidioethyldisulfide en nitroflurbiprofen; (xvi) vaniloïdereceptor 1 antagonisten, bijvoorbeeld AMG-517 en GW-705498; (xvii) muscarinine receptorantagonisten, bijvoorbeeld trospium, solifenacin, tolterodine, tiotropium, cimetropium, oxitropium, ipratropium, tiquizium, dalifenacin en imidafenacin; 30 (xviii) calmoduline antagonisten, bijvoorbeeld sualamine en DY-9760; (xix) kaliumkanaalagonisten, bijvoorbeeld pinacidil, tilisolol, nicorandil, NS-8 en retigabine; 42 (xx) beta-l-agonisten, bijvoorbeeld dobutamine, denopamine, xamoterol, denopamine, docarpamine en xamoterol; (xxi) beta-2-agonisten, bijvoorbeeld salbutamol, terbutaline, arfomoterol, melua-drine, mabuterol, ritodrine, fenoterol, clenbuteorl, formoterol, procaterol, 5 tulobuterol, pirbuterol, bambuterol, tulobuterol, dopexamine en levosalbu- tamol; (xxii) beta-agonisten, bijvoorbeeld isoproterenol en terbutaline; (xxiii) alfa-2-agonisten, bijvoorbeeld clonidine, medetomidine, lofexidine, moxonidine, tizanidine, guanfacine, guanabenz, talipexole en dexmedeto- 10 midine; (xxiv) endthelin A antagonisten, bijvoorbeeld bonsetan, atrasentan, ambrisentan, clazosentan, sitaxsentan, fandosentan en darusentan; (xxv) opioide μ agonisten, bijvoorbeeld morfine, fentanyl en loperamide; (xxvi) opioide μ antagonisten, bijvoorbeeld naloxone, buprenorfine en alvimopan; 15 (xxvii) motiline agonisten, bijvoorbeeld erythromycin, mitemcinal, SLV-305 en atilmotin; (xxviii) ghrelin agonisten, bijvoorbeeld capromorelin en TZP-101; (xxix) AchE afgiftestimuleermiddelen, bijvoorbeeld Z-338 en KW-5092; (xxx) CCK-B antagonisten, bijvoorbeeld itriglumide, YF-476 en S-0509; 20 (xxxi) glucagon antagonisten, bijvoorbeeld NN-2501 en A-770077; (xxxii) piperacillin, lenampicillin, tetracycline, metronidazole, bithmuth-citraat en buthmuth subsalicylaat; (xxxiii) Glucagonachtige peptide-1 (GLP-1) antagonisten, bijvoorbeeld PNU-126814; 25 (xxxiv) lage geleiding calcium geactiveerde kaliumkanaal 3 (SK-3) antagonisten, bijvoorbeeld apamine, dequalinium, atracurium, pancuronium en tubocura-rine; (xxxv) mGluR5 antagonisten, bijvoorbeeld ADX-10059 en AFQ-056; (χχχνΐ) 5-HT3 agonisten, bijvoorbeeld pumosetrag(DDP733); 30 (xxxvii) mGluR8 agonisten, bijvoorbeeld (S)-3,4-DCPG en mGluR8-A.

Methode voor de beoordeling van biologische activiteiten 43

De zuurpompremmende activiteiten en andere biologische activiteiten van de verbindingen volgens de uitvinding werd volgens de volgende procedures bepaald. Symbolen hebben hun gebruikelijke betekenissen: mL (milliliter(s)), pL (microliters)), 5 Kg (kilogram(men)), g (gram(men)), mg (milligram(men)), pg (microgram(men)), pmol (picomolair), mmol (millimol(s)), M (molaire massa (m3/mol)), mM (millimolaire massa), pM (micromolaire massa), quant, (kwantitatieve opbrengst), nm (nanometers)), min (minuut(ten)), Cat# (catalogusnummer), mV (millivolt(s)), ms (millise-conde(s)), i.p. (intraperitoneaal).

10

Bereiding van maagblaasjes uitgaande van verse varkensmagen

De varkensmaagblaasjes voor de varkensmaag H+/K+-ATPase remmingsproeven werden geprepareerd uitgaande van slijmvliesmembraan in verse varkensmagen door 15 homogenisatie met een dicht opgestelde polytetrafluorethyleen (Teflone® homogeni-sator in 0,25 M sucrose bij 4°C. De ongezuiverde pellet werd verwijderd door middel van centrifugeren bij 20.000 g gedurende 30 minuten. Vervolgens werd de supernatant bij 100.000 g gedurende 30 minuten gecentrifugeerd. De verkregen pellet werd opnieuw gesuspendeerd in 0,25 M sucrose en werd vervolgens onderworpen aan een 20 dichtheidsgradiënt centrifugatie bij 132.000 g gedurende 90 minuten. De maagblaasjes werden verzameld vanuit het grensvlak op 0,25 M sucrose laag die 7% Ficoll™ PM400 (Amersham Biosciences) bevatte. Deze procedure werd in een koude kamer uitgevoerd.

Ion-lekkende varkensmaag H+/K+-ATPase-remmine 25

Ion-lekkende varkensmaag H+/K+-ATPase-remming werd gemeten volgens de gemodificeerde methode beschreven in Biochemical Pharmacology, 1988, 37, 2231-2236.

De geïsoleerde blaasjes werden gelyofiliseerd en vervolgens in een diepvriezer 30 tot het gebruik opgeslagen. Voor een enzymtest werden gelyofiliseerde blaasjes met 3mM magnesiumsulfaat dat 40 mM bis-tris (pH 6,4 bij 37°C) bevatte, gereconstitueerd.

44

De enzymreactie werd uitgevoerd door het incuberen van 5 mM KC1, 3 mM NaaATP, 3 mM MgSCU en 1,0 μg van gereconstitueerde blaasjes gedurende 30 minuten bij 37°C in een eind 60 μΐ reactiemengsel (40 mM bis-tris, pH 6,4) met of zonder de testverbinding te incuberen. De enzymatische reactie werd gestopt door het toevoegen 5 van 10% natriumdodecylsulfaat (SDS). Afgegeven anorganische fosfaat uit ATP werd gedetecteerd door het incuberen met een mengsel van 1 deel 35 mM ammonium-mo-lybdaattetrahydraat in 15 mM zinkacetaathydraat en 4 delen 10%’s ascorbinezuur (pH 5,0) hetgeen resulteerde in fosfomolybdaat, met een optische dichtheid van 750 nm. Alle voorbeelden van verbindingen vertoonde een potente remmende activiteit.

10

Ion-dichte varkensmaae H*/K+-ATPase-remmine

Ion-dichte varkensmaag H+/K+-ATPase-remming werd volgens de in Biochemical Pharmacology, 1988, 37, 2231-2236 gemodificeerde methode gemeten.

15 De geïsoleerde blaasjes werden in een diepvriezer tot het gebruik opgeslagen.

Voor een enzymtest werden blaasjes verdund met 3mM magnesiumsulfaat dat 5 mM bis-tris (pH 7,4 bij 37°C) bevatte, verdund.

De enzymreactie werd uitgevoerd door 150 mM KC1, 3 mM Na2ATP, 3 mM MgSC>4, 15 μΜ valinomycine en 3,0 μg blaasjes gedurende 30 minuten bij 37°C in een 20 eind 60 μΐ reactiemengsel (5 mM tris, pH 7,4) met of zonder de testverbinding te incuberen. De enzymatische reactie werd gestopt door het toevoegen van 10% (SDS). Afgegeven anorganische fosfaat uit ATP werd gedetecteerd door het incuberen met een mengsel van 1 deel 35 mM ammonium-molybdaattetrahydraat in 15 mM zinkacetaathydraat en 4 delen 10%’s ascorbinezuur (pH 5,0) hetgeen resulteerde in fosfomolyb-25 daat, met een optische dichtheid van 750 nm.

De resultaten van de IC50-waarden van de remmende activiteit voor de verbindingen van de volgende voorbeelden zijn in tabel 1 samengevat.

45

Tabel 1

Voorbeeld nummer IC50 (μΜ) _ Tï 0,084 Tï 0,089 T\ 0,075

Tl 0,061 TT 0,067 __ Tï 0,037 Tï 0,041 Tï 0,029 Tï Ö,03Ö ~6-2 0,043 *6-3 0,061 Tï 0,140 Tï 0,096 Tï 0,110 13 0,055 "8-2 0,040 Tï 0,052

Tl 0,047 Tï 0,072 93 0,061

Alle geteste verbindingen vertoonde een zuurpomp-antagonistische activiteit.

46

Hondennier Na+/K+-ATPase-remming

De poedervormige hondennier Na/K+-ATPase (Sigma) werd met 3 mM magnesiumsulfaat dan 40 mM tris (pH 7,4, bij 37°C) bevatte, gereconstitueerd. Enzy-5 matische reactie werd uitgevoerd door het incuberen van 100 mM NaCl, 2 mM KC1, 3 mM NajATP, 3 mM magnesiumsulfaat en 12 pg enzym gedurende 30 minuten bij 37°C tot een uiteindelijke 60 μΐ van reactiemengsel (40 mM tris, pH 7,4) met of zonder de testverbinding te incuberen. De enzymatische reactie werd gestopt door het toevoegen van 10% SDS. Het uit ATP afgegeven anorganisch fosfaat werd gedetecteerd door het 10 incuberen met een mengsel van 1 deel 35 mM ammonium-molybdaattetrahydraat in 15 mM zinkacetaathydraat en 4 delen 10% ascorbinezuur (pH 5,0) hetgeen resulteerde in fosformolybdaat met een optische dichtheid van 750 nm.

Inhibitie van de zure secretie in de maaglumen-aan perfusie onderworpen rat 15

Zure secretie in de maaglumen - aan perfusie onderworpen rat werd volgens Wa-tanabe et al., [Watanabe K et al., J. Physiol. (Parijs) 2000; 94: 111-116] gemeten.

Mannelijke Spraque-Dawley rat, 8 weken oude ratten op vasten gezet gedurende 18 uur voorafgaande aan het experiment met vrije toegang tot water werden met uret-20 haan (1,4 g/kg, i.p.) verdoofd en de luchtpijp werd afgesneden. Na een middenmaagin-cisie werd een tweeledige polyethyleencannula in de voormaag er in gebracht en de maag werd aan perfusie onderworpen met zoutoplossing (37°C, pH 5,0) met een snelheid van 1 ml per minuut. De zure output in het perfusaat werd bepaald na een interval van 5 minuten door middel van titratie met 0,02 M NaOH tot pH 5,0. Na de bepaling 25 van de basale zure secretie gedurende 30 minuten werd de zure secretie gestimuleerd door middel van een continue intraveneuze infuus van pentagastrine (16 pg per kg per uur). De testverbindingen werden toegediend door middel van een intraveneuze bolusinjectie of intraduodenale toediening na de gestimuleerde zure secretie een plateaufase had bereikt. De zure secretie werd na de toediening gevolgd.

30 De activiteit werd geëvalueerd hetzij als inhibitie van totale zuursecretie van 0 uur tot 1,5 of 3,5 uur na toediening dan wel als de maximale inhibitie na toediening.

De verbinding van voorbeelden 1 tot 9 liet een goede remmende activiteit zien.

47

Inhibitie van maagiuursecretie in de Heidenhein pouch hond

Mannelijke Beagle honden met een gewicht van 7 tot 15 kg met een Heidenhein 5 pouch [Heidenhain R: Arch Ges Physiol. 1879; 19: 148-167] werden gebruikt. De dieren liet men van de chirurgische ingreep herstellen gedurende ten minste 3 weken voorafgaande aan de experimenten. De dieren werden afzonderlijk gehuisvest onder een 12 uur licht-donker ritme. Zij ontvingen standaardvoeder eenmaal daags om 11:00 uur voor de middag en kraanwater ad libitum en werden op vasten gezet gedurende een 10 nacht voorafgaande aan het experiment met vrije toegang tot water. Maagsapmonsters werden verzameld gedurende het gehele experiment door zwaartekrachtafvoer om de 15 minuten. De zuurgraad in het maagsap werd gemeten door titratie tot het eindpunt van pH 7,0. Zure secretie werd gestimuleerd door middel van een continue intraveneuze infuus van histamine 80 pg bij kg per uur. Orale of intraveneuze bolustoediening 15 van de testverbindingen werd uitgevoerd 90 minuten na het begin van de histamine-infusie. De zure secretie werd na de toediening gevolgd. De activiteit werd geëvalueerd door de maximale inhibitie vergeleken met de overeenkomstige controlewaarden.

Humane dofetilidebinding 20

Humane ether a-go-go gerelateerd gen (HERG) getransfecteerde HEK293S-ceI-len werden geprepareerd en binnen het pand gekweekt. Een celpasta van HEK-293-cellen die het HERG product tot expressie brengen kan gesuspendeerd worden in het tienvoudige volume van 50 mM tris-buffer ingesteld op pH 7,5 bij 25°C met behulp van 25 2 M HC1 dat 1 mmol magnesiumchloride, 10 mmol calciumchloride bevatte. De cellen werden gehomogeniseerd onder toepassing van een polytron homogenisator (bij het maximale vermogen gedurende 20 seconden) en werden bij 48.000 g gedurende 20 minuten bij 4°C gecentrifugeerd. De pellet werd opnieuw gesuspendeerd gehomogeniseerd en nogmaals op dezelfde wijze gecentrifugeerd. De resulterende supernatant werd 30 afgevoerd en de uiteindelijke pellet werd opnieuw gesuspendeerd (het 10-voudige volume van 50 mmol trisbuffer) en werd gehomogeniseerd bij het maximale vermogen gedurende 20 seconden. Het membraanhomogenaat werd in porties verdeeld en bij - 48

80°C tot het gebruik opgeslagen. Een portie werd gebruikt voor de proteïneconcentra-tiebepaling onder toepassing van een proteïnetest snelle kit (wako) en Spectra max plaataflezer (Wallac). De gehele manipulatie, stokoplossing en apparaat werden op ijs gedurende de gehele periode gehouden. Voor verzadigingstests werden experimenten 5 uitgevoerd in een totaal volume van 200 μΐ. Verzadiging werd bepaald door in het in-cuberen van 36 μΐ [H3]-dofetilide en 160 μΐ membraanhomogenaten (20-30 pg proteïne per putje) gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur bij afwezigheid of aanwezigheid van 10 μΜ dofetilide bij eindconcentraties (4 μΐ) voor totale of respectievelijk niet specifieke binding. Alle incubaties werden beëindigd door een snelle vacuümfïltratie op 10 met PEI geweekte glasvezelfïlterpapier onder toepassing van een Skatron-apparaat voor het oogsten van cellen gevolgd door twee wasbewerkingen met 50 mM trisbuffer (pH

7.4 bij 25°C). Aan receptor gebonden radioactiviteit werd gekwantificeerd door middel van vloeistofscintillatietelling gebruikmakend van een Packard LS teller.

Voor de competitietest werden verbindingen verdund in polypropyleenplaten met 15 96 putjes als 4-punt verdunningen in semilog format. Alle verdunningen werden uitge

voerd in DMSO eerst en vervolgens werden zij overgebracht in 50 mM trisbuffer (pH

7.4 bij 25°C) dat 1 mM magnesiumchloride, 10 mM kaliumchloride bevatte zodanig dat de uiteindelijke DMSO-concentratie gelijk aan 1% ligt. Verbindingen werden triplo op testplaat (4 μΐ) afgegeven. Totale binding en niet specifieke bindingputjes werden op- 20 gesteld in 6 putjes als drager en 10 μΜ dofetilide op de uiteindelijke concentratie. Het radioactief ligand werd bereid op 5,6 x de uiteindelijke concentratie en deze oplossing werd aan elk putje (36 μΐ) toegevoegd. De test werd geïnitieerd door de toevoeging van YSi poly-L-lyse SPA parels (50 μΐ, 1 mg/putje) en membranen (110 μΐ, 20 pg/putje). De incubatie werd gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur voortgezet. Platen wer-25 den geïncubeerd voor nog verder 3 uur bij kamertemperatuur om de pareltjes te laten zakken. Aan receptor gebonden radioactiviteit werd door telling met behulp van een Wallac MicroBeta plaatteller gekwantificeerd.

Caco-2 permeabiliteit

Caco-2 permeabiliteit werd volgens de methode beschreven in Shiyin Yee, Pharmaceutical Research, 763 (1997) gemeten.

30 49

Caco-2 cellen werden op filterdragers (Falcon HTS multiwell insert system) gedurende 14 dagen gekweekt. Cultuurmedium werd verwijderd uit zowel de apicale als basolaterale comparimenten en de monolagen werden vooraf geïncubeerd met vooraf opgewarmd 0,3 ml apicaalbuffer en 1,0 ml basolateraal buffer gedurende een 5 half uur bij 37°C in een schuddend waterbad bij 50 cycli per minuut. De apicale buffer bestond uit Hanks gebalanceerde zoutoplossing, 25 mM D-glucose monohydraat, 20 mM 2-morfolinoethaansulfonzuur (MES) biologische buffer, 1,25 mM calciumchloride en 0,5 mM magnesiumchloride (pH 6,5). De basolaterale buffer bestond uit Hanks gebalanceerde zoutoplossing, 25 mM D-glucose monohydraat, 20 mM 2-[4-(2-hydroxy-10 ethyl)-l-piperazinyl]ethaansulfonzuur (HEPES) biologische buffer, 1,25 mM calcium chloride en 0,5 mM magnesiumchloride (pH 7,4). Aan het einde van de pre-incubatie werd het medium verwijderd en de testverbindingoplossing (10 μΜ) in buffer werd aan het apicale compartiment toegevoegd. De inserten werden verplaatst naar putjes die verse basolaterale buffer op tijdstip 1 uur bevatte. Geneesmiddelconcentratie in de buf-15 fer werd door middel van LC/MS analyse gemeten.

De fluxsnelheid (F, massa/tijd) werd berekend uit de helling van de cumulatieve verschijning van substraat aan de ontvangerzijde en schijnbare permeabiliteitscoëfïiciënt (Papp) werd uit de volgende vergelijking berekend.

Papp(cm/sec) =(Fx VD)/(SA x MD).

20 Waar SA is het oppervlak voor transport (0,3 cm2), VD is het donorvolume (0,3 ml), MD is de totale hoeveelheid geneesmiddel aan de donorzijde op tijdstip t = 0. Alle data vertegenwoordigen het gemiddelde van 2 inserten. Monolaag integriteit werd door middel van lucifer geeltransport bepaald.

25 Halfwaardetiid in humane levermicrosomen (HLM)

Testverbindingen (1 μΜ) werden geïncubeerd met 3,3 mM magnesiumchloride en 0,78 mg/ml HLM (HL101) in 100 mM kaliumfosfaatbuffer (pH 7,4) bij 37°C op de plaat met 96 putjes. Het reactiemengsel werd gesplitst in twee groepen een niet-P450 30 en een P450-groep. NADPH werd slechts aan het reactiemengsel van de P450-groep toegevoegd. Een portie van monsters van de P450-groep werd verzameld na 0, 10, 30 en 60 minuten waarbij het tijdstip 0 minuten aangaf het tijdstip waarop NADPH aan het reactiemengsel van de P450-groep was toegevoegd. Een portie van de monsters van de 50 niet-P450-groep werd verzameld op tijdstip -10 en 65 minuten. Verzamelde porties werden met een acetonitriloplossing die een interne standaard bevatte geëxtraheerd. De geprecipiteerde proteïne werd in een centrifuge (2000 rpm, 15 min) gecentrifugeerd. De concentratie van de verbinding in de supernatant werd door middel van LC/MS/MS-5 systeem gemeten.

De halfwaardetijdwaarde werd verkregen door het uitzetten van de natuurlijke logaritme van de piek oppervlakverhouding van de verbindingen/inteme standaard tegen tijd. De helling van de best fit lijn door de punten leverde de metabolisme-snelheid (k) op. Deze werd in de halfwaardetijd gebruikmakend van de volgende vergelijkingen 10 omgezet:

Halfwaardetijd = In 2/k HErg patch klemtest 15

Ter bepaling van het potentiaal van verbindingen tot inhibitie van het hERG kanaal diende de gekloonde tegenpool van de snel inactiverende vertraagde correctie ka-liumstroom (IKr).

HEK293-cellen die het hERG-kalaan stabiel tot expressie brengen werden ge-20 bruikt in gehele celpatch klem elektrofysiologie onderzoekingen bij de omgevingstemperatuur (26,5°C tot 28,5°C). De methodologie voor stabiele transfectie van dit kanaal in HEK293-cellen kan elders worden gevonden (Zhou et al., 1998, Biopphysical Journal, 74, blz. 230-241). De oplossingen die gebruikt waren voor de proeven waren een standaard extra cellulaire oplossing van de volgende samenstelling (mM); NaCl, 137; 25 KC1, 4; CaCl2,1,8; MgCl2, 1; glucose, 10; HEPES, 10; pH 7,4 ± 0,05 met NaOH/HCl; en een standaard intracellulaire oplossing met de volgende samenstelling (mM); KC1, 130; MgCl2, 1; HEPES, 10; EGTA, 5; MgATP, 5; pH 7,2 ± 0,05 met KOH. Het toegepaste spanningsprotocol was ontworpen om het hERG-kanaal te activeren en de meting mogelijk te maken van het blokkeren van het kanaal door middel van het geneesmiddel 30 en is als volgt. Eerst werd het membraanpotentiaal verhoogd van een houdpotentiaal van -80 mV tot +30 mV gedurende 1 seconde. Dit werd gevolgd door een dalende voltageniveau met een snelheid van 0,5 mV per milliseconde terug naar het houdpotentiaal van -80 mV en de piek uitwendige stroom die waargenomen werd tijdens de herpolari- 51 satie helling werd gemeten. Dit protocol werd herhaaldelijk om de 4 seconden (0,25 Hz) uitgevoerd. Na het tot stand brengen van een stabiele basislijnperiode bij aanwezigheid van een drager (0,1% v/v DMSO) werden vier toenemende concentraties van de testverbinding vervolgens sequentieel toegepast (bath-applied) totdat de respons de 5 stabiele toestand bereikte of wel na 10 minuten (wat het eerste plaatsvond). 10 micro-mol per 1 dofetilide werd gebruikt aan het einde van elk experiment als een inwendige positieve controle en voor het definiëren van de maximale blokkering.

Biobeschikbaarheid bij de rat 10

Volwassen ratten van de Sprague-Dawley stam werden gebruikt. Een tot twee dagen voorafgaand aan de experimenten werden alle ratten geprepareerd door het can-nuleren van de rechter halsslagader onder verdoving. De canule werd aan de onderkant van de nek geëxterioniseerd. Bloedmonsters (0,2-0,3 ml) werden uit de halsslagader 15 getrokken op intervallen van ten hoogste 24 uur na intraveneuze of orale toedieningen van de testverbinding. De monsters werden tot testen van analyseren bevroren. Biobeschikbaarheid werd beoordeeld door berekening van het quotiënt tussen het oppervlak onder de plasmaconcentratiecurve (AUC) na orale toediening of intraveneuze toediening.

20

Biobeschikbaarheid bij de hond

Volwassen Beagle honden werden gebruikt. Bloedmonsters (0,2-0,5 ml) werden getrokken uit de hoofdader op intervallen van ten hoogste 24 uur na intraveneuze of 25 orale toedieningen van de testverbinding. De monsters werden tot het tijdstip van analyseren bevroren. Biobeschikbaarheid werd beoordeeld door berekening van het quotiënt tussen het oppervlak onder de plasmaconcentratie curve (AUC) na orale toediening of intraveneuze toediening.

52

Plasma proteïnebinding

Plasma proteïnebinding van de testverbinding (1 μΜ) werd door middel van de methode van evenwichtsdialyse onder toepassing van een uitrusting van het type plaat 5 met 96 putjes gemeten. Spectra-Por®, geregenereerde cellulosemembranen (moleculaire gewicht cut-off (limiet) 12.000 tot 14.000, 22 mm x 120 mm) werden gedurende een nacht in gedestilleerd water geweekt en vervolgens gedurende 20 minuten in 30% ethanol en ten slotte gedurende 15 minuten in dialysebuffer (Dulbecco’s fosfaat gebufferde zoutoplossing, pH 7,4). Menselijk bevroren plasma, Sprague-Dawley ratten en 10 Beagle honden werden gebruikt. De dialyse-uitrusting werd geassembleerd en hieraan werd 150 pL plasma waaraan de verbinding was toegevoegd aan een zijde van elk putje en 150 pL dialysebuffer aan de andere zijde van elk putje. Na 4 uur incuberen bij 37°C bij 150 omwentelingen per minuut werden porties van plasma en buffer als monsters afgenomen. De verbinding in plasma en buffer werden met 300 pL acetonitril die in-15 wendige standaardverbindingen voor analyse bevatten, geëxtraheerd. De concentratie van de verbinding werd onder toepassing van LC/MS/MS analyse bepaald.

De fractie van de niet gebonden verbinding werd aan de hand van de volgende vergelijking berekend: 20 fu = l-{([plasma]eq - [buffer]eq)/([plasma]eq)} waarin [plasma]eq en [buffer]eq de concentraties van de verbinding in plasma en buffers respectievelijk zijn.

25 Oplosbaarheid in water

Oplosbaarheid in water in de media (a)-(c) werd door toepassing van de volgende methode bepaald:

Whatman mini-Uni-Prep kamers (Clifton, NJ, USA) die meer dan 0,5 mg verbin-30 ding en 0,5 ml van elk medium bevatte werden gedurende de nacht (tijdsperiode van 8 uur) bij kamertemperatuur geschud. Alle monsters werden door een 0,45 pM polyviny- 53 lideendifluoride (PVDF) membraan in de Whatman mini-UniPrep plunger voorafgaande aan de analyse gefiltreerd. De Altraten werden door middel van HPLC geanalyseerd.

<medium>(a) gesimuleerd maagsap zonder enzym (SGN) bij pH 1,2: lost 2,0 g 5 NaCl in 7,0 ml 10 M HC1 en voldoende water tot het bereiken van 1000 ml, op; (b) fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS) bij pH 6,5: lost 6,35 g KH2PO4, 2,84 g Na2HPC>4 en 5,5 g NaCl in voldoende water op om 1000 ml te verkrijgen, stelt de pH op 6,5 in; (c) 3,94 mg natriumtaurocholaat (NaTC) en 1,06 mg l-palmitoyl-2-oleyl-L-fosfatidylcho-line (POPC) in 1 ml PBS (pH 6,5).

10

Beoordeling van de hepatische clearance onder toepassing van de metabolische stabiliteit in humane hepatocvten

De beproefde verbindingen (1 μΜ) werden statisch geïncubeerd met humane 15 hepatocyten bij 37°C in 95% lucht/5% CO2 met een targetceldichtheid van 0,5 x 106 cellen per ml en een totaal volume van 50 pL. Incubatie werd stopgezet op elk tijdstip door de toevoeging van ijskoud acetonitril (ACN). Porties van monsters werden gemengd met 10% ACN dat een inwendige standaard voor LC/MS/MS analyse bevatte. Nadat de monsters aan sonicatie gedurende 10 minuten waren onderworpen werden de 20 monsters bij 2000 rpm gedurende 15 minuten gecentrifugeerd en vervolgens werd de supernatant naar de andere platen voor analyse overgebracht. De concentraties van de verbinding in de supernatant werd door middel het LC/MS/MS systeem bepaald.

De verdwijningssnelheden van geteste verbindingen werden verkregen door het uitzetten van de gewone logaritme van de piekoppervlakverhouding van verbindin-25 gen/inwendige standaard tegen de tijd. De helling van de best fit lijn door de punten leverde de snelheid van metabolisme (ke) op. Deze waarde werd op schaal gezet om hepatocellulariteit, lever en lichaamsgewicht hierbij te betrekken waarbij een intrinsieke clearance waarde (CLuu) in ml/min/kg zoals geïllustreerd in vergelijking 1 te verkrijgen. De hepatische clearance (CLh) werd voorspeld uit de intrinsieke clearance 30 waarde onder toepassing van het parallelle buismodel zoals in vergelijking 2 is weergegeven. De voorspelde clearance gedeeld door de hepatische bloedstroom (Qh) leverde de extractieverhouding (Eh) (vergelijking 3) op.

54

Vergelijking 1: ke x (g lever/kg lichaamsgewicht) x (ml incubatie/aantal cellen in incubatie) x (cellen/g lever) 5 Vergelijking 2: CLh = Qh x {1 - exp (-CLüu/Qh)}

Vergelijking 3: Eh = CWQh waarin “g lever gewicht/kg lichaamsgewicht” is 21, “cellen/g lever” is 1,2 x 108, “ml 10 incubatie/aantal cellen in incubatie” is 2,0 x 10"6 en Qh is 20 ml/min/kg.

Aannemende dat hepatische metabolisme is de hoofdroute van geneesmiddeleliminering wordt de systematische blootstelling (AUCpo) na orale toediening onder toepassing van vergelijking 4 berekend: 15 Vergelijking 4: AUCp0 = dosis x (1 -Eh)/CLh.

Voorbeelden

De volgende voorbeelden worden slechts voor verdere illustratie verschaft en zijn 20 niet bedoeld om de geopenbaarde uitvinding te beperken. Tenzij in de volgende voorbeelden anders wordt aangegeven zijn de algemene experimentele omstandigheden als volgt: alle bewerkingen werden bij kamer of bij de omgevingstemperatuur uitgevoerd dat wil zeggen binnen het gebied van 18 tot 25°C; de verdamping van het oplosmiddel werd uitgevoerd onder toepassing van een rotatieverdamper onder verminderde druk bij 25 een badtemperatuur van ten hoogste 60°C; reacties werden gevolgd door middel van dunnelaagchromatografie (TLC) en de reactietijden zijn slechts ter illustratie gegeven; smeltpunten (mp) die gegeven zijn zijn niet gecorrigeerd (polymorfisme kan in verschillende smeltpunten verkregen worden); de structuur en zuiverheid van alle geïsoleerde verbindingen werden beoordeeld onder toepassing van ten minste een van de 30 volgende technieken: TLC (Merck silicagel 60 F254 vooraf beklede TLC platen of Merck NH2 gel (een met amine beklede silicagel) F254S vooraf beklede TLC platen), massaspectrometrie, kernmagnetische resonantiespectra (NMR), infrarode absorptie-spectra (IR) of microanalyse. Opbrengsten zijn slechts ter illustratie gegeven. Flash 55 kolomchromatograile werd uitgevoerd onder toepassing van Biotage KP-SIL (40-63 μΜ), Biotage KP-NH (een met amine beklede silicagel) (40-75 μΜ) of Wako silicagel 300HG (40-60 μΜ). Preparatieve TLC werd uitgevoerd onder toepassing van Merck silicagel 60 F254 vooraf beklede TCL platen (dikte 0,5 of 1,0 mm). Alle massadata wer-5 den verkregen in lage resolutie massaspectrale data (ESI) onder toepassing van ZMD of ZQ™ (Waters) en massaspectrometer. NMR-data werden bepaald bij 270 MHz (JEOL LNM-LA 270 spectrometer) of 300 MHz (JEOL JNM-LA300 spectrometer) onder toepassing van gedeutereerde chloroform (99,8%) of dimethylsulfoxide (99,9%) als oplosmiddel tenzij anders wordt aangegeven, met betrekking tot tetramethylsilaan 10 (TMS) als inwendige standaard in delen per miljoen (ppm); gebruikelijke afkortingen die gebruikt zijn zijn: s = singlet, d = doublet, m = multiplet, dd = doublet van doublet, sep = septet, br.s = breed singlet, br.d = breed doublet, etc. IR-spectra werden door middel van een Fourier transform infraroodspectrofotometer (Shimazu FTIR-8300) gemeten. Optische rotaties werden onder toepassing van een P-1020 Digital Polarime-15 ter (Japan Spectroscopie CO, Ltd.) gemeten. Het röntgenpoeder difïractiepatroon (PXRD) werd bepaald onder toepassing van een Rigaku RINT-TTR poeder röntgendif-fractometer voorzien van een automatische monsterwisselaar een 2 theta-theta goniometer, bundeldivergentiespleten, een tweede monochromator en een scintillatieteller. Het monster werd bereid voor analyse door een aluminiummonsterhouder met het poe-20 der te vullen. Het monster werd bij 60.000 rpm geroteerd en bij 4° per minuut bij kamertemperatuur met Cu-ka bestraling gescand.

Voorbeeld 1 25 3-(Hydroxymethyl VN.N-2-trimethvl-8-|ï 5 -methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4- vDaminojimidazor 1.2-alpvridine-6-carboxamide 56

Trap 1:4-Chloor-S-methylchromaan 5 Een oplossing van thionylchloride (81 ml, 1,1 mol) in diethylether (370 ml) werd aan een mengsel van 5-methylchromaan-4-ol (61 g, 370 mmol, Tetrahedron Asym., 1997, 8, 3059) en pyridine (1,4 ml) in diethylether (80 ml) en chloroform (200 ml) bij 0°C toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende 13 uur bij kamertemperatuur geroerd. Nadat het mengsel in vacuo werd afgedampt werd het residu op ijswater gegoten 10 en met ethylacetaat (2 x 500 ml) geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden met pekel gewassen op magnesiumsulfaat gedroogd en in vacuo geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding als een gele olie (68 g kwantitatieve opbrengst) werd verkregen.

1H NMR (CDCfe. 300 MHz) 8’ 7.21-7.04 (m, IK). 6.86-6.02 <m, 2H), 5.36-5.17 <m. 1H). 4.59-4.43 (m, 1H 4.43-4.30 (m, 1H), 2.41 (s. 3H).2.57-2,24 (m. 2H) ppm.

15

Trap 2: Isopropyl-8-amino-2-methylimidazo[l,2-aJpyridine-6-carboxylaat

Aan een oplossing van isopropyl-5,6-diaminocotinaat (65 g, 333 mmol) in cyclo-hexanon (500 ml) werd broomaceton (51 g, 333 mmol) bij kamertemperatuur toege-20 voegd. Het reactiemengsel werd bij 95°C gedurende 2 uur geroerd. Nadat dit mengsel tot 0°C was afgekoeld werd het verkregen precipitaat gefiltreerd en met n-hexaan (500 ml) en diisopropylether (500 ml) gewassen. De vaste stof werd in dichloormethaan (1000 ml) en een verzadigde natriumbicarbonaatoplossing (800 ml) opgelost. De organische laag werd gescheiden, op magnesiumsulfaat gedroogd en in vacuo geconcen-25 treerd. Het residu werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie op silicagel 57 (dichloormethaan/ethylacetaat = 1/1 als elutiemiddel) waarbij de in de titel genoemde verbinding als een bruine stroop werd verkregen (43 g, 55%).

’H NMR (CDCIs, 270 MHz)«: 830 (d, J ~ 1.3 Hz. 1H). 7,33 (s. 1H). 6.84 {<j, J - 1.3 Hz. 1H), 5.35-5.15 (m, 1H}, 4.60-4.39 {m, 2H). 2.45 {s. 3H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 6H) ppm.

MS (ES!) mtr. 234 58

Trap 3: isopropvl-2-methvl-8-r(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminol-imi-dazof 1.2-a1pvridine-6-carboxvlaat

Aan een mengsel van isopropyl-8-amino-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-car-5 boxylaat (43 g, 183 mmol, trap 2), natriumjodide (14 g, 91 mmol) en kaliumcarbonaat (88 g, 640 mmol) in aceton (480 ml) werd een oplossing van 4-chloor-5-methylchro-maan (50 g, 274 mmol, trap 1) in aceton (80 ml) bij 45°C toegevoegd en het mengsel werd bij 56°C gedurende 15 uur geroerd. Na koeling tot kamertemperatuur werd het mengsel met water (300 ml) geblust en met dichloormethaan (2 x 500 ml) geëxtra-10 heerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd met n-hexaan (300 ml), 2-propanol/diisopropyl-ether (20 ml/200 ml) en methanol (80 ml) gewassen waarbij de in de titel genoemde verbinding als een gele vaste stof (30 g, 43%) werd verkregen.

Ή NMR (CDCë, 300 MHz) δ: 8.26 (s. 1H). 7.31 (s. 1H). 7.12 (t. J = 8.1 Hz. 1H), 6.85-6.68 (m. 3H>, 5.36-5.21 (m. 2H), 4.78-4.67 (m, 1H), 4.33-4.15 (m, 2H). 2.39 (s, 3H). 2.35-2.00 (rt. SH). 1.40 (d, J = 5-9

Hz, 6H) ppm.

j 5 MS (ESI) mfz: 360 (M+H)*.

Trap 4: 2-methvl-8-|Y5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminolimidazoi 1,2-al-pvridine-6-carboxvlzuur 20 Een mengsel van isopropyl-2-methyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4- yl)amino]imidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxylaat (8,6 g, 23 mmol, trap 3) en 2M natri-umhydroxide-oplossing (34 ml) in methanol (15 ml) en tetrahydrofuran (15 ml) werd bij 60°C gedurende een half uur geroerd. Na koeling tot kamertemperatuur werd het mengsel met 2M chloorwaterstofzuur (34 ml) geneutraliseerd. Het verkregen precipi-25 taat werd door filtratie verzameld en werd gedroogd waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (7,5 g, 98%) werd verkregen.

1H NMR (DMSO-d*. 270 MHz) S’ 8.S2 <6, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.13 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6,83-6.66 (m, 3H), 5.71-5.62 (m, 1H), 4.86*4.75 (m, 1H), 4.304 06 (m, 2H}. 2.28 (s. 3H). 220-1,85 (m, 5H) ppm. (-COOH

werd niet waargenomen) MS (ESJ) mfz: 338 (M+H)*, 336 (M-H)\ 30 59

Trap 5: N.N-2-trimethvl-8-IY(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminolimi- dazol 1.2-alpvridine-6-carboxamide

Aan een geroerd mengsel van 2-methyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen- 5 4-yl)amino]imidazo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (7,5 g, 22 mmol, trap 4), N-methyl- methaanaminehydrochloride (2,7 g, 33 mmol), 1-hydroxybenzotriazoolhydraat (HOBt) (4,1 g, 27 mmol) en triethylamine (9,3 ml, 67 mmol) in dichloormethaan (110 ml) werd l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidehydrochloride (EDCI) (5,1 g, 27 mmol) bij 0°C toegevoegd en het reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 10 1 dag geroerd. Aan het reactiemengsel werd water toegevoegd en het mengsel werd met dichloormethaan geëxtraheerd. Het extract werd met pekel gewassen op natrium- sulfaat gedroogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd door middel van kolomchro- matografie op silicagel (dichloormethaan/ethylacetaat = 1/2 tot 1/3 als elutiemiddel) gezuiverd waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof werd ver- 15 kregen (8,1 g, kwantitatieve opbrengst).

Ή NMR (CDCIj, 300 MHz)«: 763 (S, 1H), 7.27 (S. 1H), 7.12 (t. J * 8.1 Hz, 1H). 6.76 (t, J · 8.1 Hz. 2H). 6.26 {s, 1H). 5.36 (d. J 66 Hz, 1H), 4.66-4.61 (ra. 1H). 4.31-4.17 (m. 2H). 3.13 (s. 6H). 2.38 (», 3H), 2.32-2.15 (m, 4H), 2.12-1.95 (m, 1H) ppm.

MS (ESI) rniz: 365 (M+Hf ,363{M-H).

Trap 6: 3-(hvdroxvmethvlVN.N-2-trimethvl-8-f(Y5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminolimidazor 1.2-ajpvridine-6-carboxamide (voorbeeld 1-Π 20

Een mengsel van N,N-2-trimethyl-8-[((5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]imidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxamide (8,1 g, 22 mmol, trap 5), formaldehyde 37 gew.% in water (18 g, 222 mmol), azijnzuur (3,2 ml, 56 mmol) en natri-umacetaat (4,6 g, 56 mmol) in acetonitril (220 ml) werd bij 80°C gedurende 1,3 uur 25 verhit. Na koeling tot kamertemperatuur werd een verzadigde oplossing van natriumbicarbonaat (200 ml) aan het reactiemengsel toegevoegd en het mengsel werd met ethylacetaat (2 x 200 ml) geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden met pekel gewassen, op natriumsulfaat en in vacuo afgedampt. Het residu werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie op silicagel (dichloormethaan/methanol = 20/1 als 30 elutiemiddel) waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (8,4 g, 95%) werd verkregen.

60 1H NMR (CDCk 300 MHz) δ: 7.77 (β. 1H), 7.12 (t,J = 8.1 Hz, 1H). 6.7S (t, J » 8.1 Hz. 2H). 6.35 (s, 1H).

5.38 <d. J = 8.6 Hz. 1H). 4.88 (a, 2H>. 4.72-4.62 (m, 1H). 4.33-4.16 (m. 2H), 3.13 (s. 6H). 2.37 (s. 3H), 2.31-214 (iri, 4H). 2.14-1.98 (m. 1H). 1.88*1.78 (m. 1H) ppm.

MS (ESI) mlz: 395 393 (M-H) .

Trap 7: (SyM-3-fhvdroxvmethvlVN.N-2-trimethvl-8-r(5-methvl-3.4-dihvdro-2H- 5 chromeen-4-vnaminn1imida7on.2-alpvridine-6-carboxamide (fractie-O en (RW+T3-ihvdroxvmethvl)-N.N-2-trimethvl-8-iï5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnamino1imida7n[1 2-a]pvridine-6-carboxamide (fractie-21

De fractie 1 (2,46 g) en de fractie 2 (2,39 g) werden uitgaande van racemisch -3-10 (hydroxymethyl)-N,N-2-trimethyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)- amino]imidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxamide (5,9 g) door middel van HPLC als volgt bereid:

Isolatie-omstandigheden 15

Kolom: CHIRALPAK® OD-H (20 mm I.D. x 250 mm; DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/ethanol/diethylamine (85/15/0,1)

Stroomsnelheid: 18,9ml/min.

20 fSW-V3-ihvdroxvmethvlTN.N-2-trimethvl-8-(Y5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminolimidazori.2-a1pvridine-6-carboxamide (fractie-Π (voorbeeld 1-2) NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]d22 = -5,3° (C = 1,03, methanol) 25 Retentietijd: 8 min.

(RV(+V3 -(hvdroxvmethviyN.N-2-trimethvl-8- [f5 -methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-y0amino1imidazofl.2-alpvridine-6-carboxamide (fractie-2) (voorbeeld 1-3) 30 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat

Optische rotatie: [a]/2 = -6,0° (C = 1,08, methanol) 61

Retentietijd: 14 min.

Voorbeeld 2 5 8-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlarnino)-3-(hvdroxvmethvlVN.N-2-trimethvlimi-dazof 1.2-a]pvridine-6-carboxamide % 10 Trap 1: isopropvl-8-t3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvlimidazo[l ,2-al-pvridine-6-carboxvlaat

De in de titel genoemde verbinding werd bereid met een opbrengst van 93% (10,2 g olie) uitgaande van 4-chloorchromaan (7,6 g, 45 mmol, Indian Journal of Chemistry, 15 sectie B, 1981, 20B(12), 1063) en isopropyl-8-amino-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine- 6-carboxylaat (7,0 g, 30 mmol, trap 2 van voorbeeld 1) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 1.

1H NMR (COCh, 300 MHz) δ: 826 (s, 1H). 7.37-7.17 (m, 3H). 8.98-6.82 (m, 2H). 6.77 (s, 1H), 5.47-5-38 {n 1H), 5.36-521 (m, 1H), 4.87-4.78 (m, 1H), 4.33-4.23 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.30-1.96 (m. 2H). 1.39 <d, J

5,9 Hz. 6H) ppm, MS (ESt) mftE; 386 20

Trap 2: isopropvl-8-(3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvlimidazo[1.2-al-pvridine-6-carboxvlaat

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 63% (7,0 g, witte 25 vaste stof) uitgaande van isopropyl-8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-2-me-thylimidazo[l,2-a]-pyridine-6-carboxylaat (10,2 g, 27,9 mmol, trap 1) op dezelfde wijze in trap 6 van voorbeeld 1 bereid.

62 NMP (CDCIj, 300 MHz) 8: 8.37 (β, 1H), 7.40-7.14 (m, 2H), 6 05-661 (m, 3H), 5.44-5.37 (m, 1H), 5.36-5.22 (m. 1H), 4.97 (d, J-5.1 Hz, 2H). 4 88-4.79 (m. 1H), 4.33-4.24 (m. 2H), 2.42 <s, 3H), 2.30-2.20 (m, 2H), 1.40 (d, J - 6.8 Hz, 6H) ppm. (OH werd niet waargenomen) MS (ESI) m/z; 396 (M+H)*.

Trap 3: 8-(3.4-dihvdro-2H-chTomeen-4-vlamino)-3-(hvdroxvmethvl)-2-methvl-imi- dazof 1.2-al-pvridine-6-carbonzuur 5

De in de titel genoemde verbinding werd in kwantitatieve opbrengst (4,8 g, een gele vaste stof) uitgaande van isopropyl-8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hydroxymethyl)-2-methylimidazo[l,2-a]-pyridine-6-carboxylaat (5,1 g, 12,9 mmol, trap 2) op dezelfde in trap 4 van voorbeeld 1 bereid.

1H NMR (OMSO-cfe. 300 MHz) 8: 13.2-12.9 (m, 1H). 8,35 (β, 1H), 7,31-7.07 Cm. 2H), 6.93-6.68 (m, 3H). 6.20-5.90 (m, 1H). 5.30-S.13 (m. 1H), 5.064.90 (m. 1H), 4.844.66 (m. 2H). 4.364.13 (m, 2 H), 2.32 (a. 3H), 2.24-2.01 (ra. 2H) ppm, 10 MS (ESI) mfe: 354 (M+Hf, 352 (M-H)'.

Trap 4: 8-(3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-3-(hvdroxvmethvl)-N.N-2-trimethvl-imidazon.2-a1-pvridine-6-carboxamide (voorbeeld 2-1) 15 Aan een geroerd mengsel van 8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hy- droxymethyl)-2-methyl-imidazo[l,2-a]-pyridine-6-carbonzuur (760 mg, trap 3) en N- methylmethaanamine-hydrochloride (370 mg, 4,5 mmol) en triethylamine (0,84 ml, 6,0 mmol) in dimethylformamide (15 ml) werd O-benzotriazool-1 -yl-N,N,N ’ ,N ’ -tetra-me- thyluroniumhexafluorfosfaat (HBTU) (1,1 g, 3,0 mmol) bij 0°C toegevoegd. Het reac- 20 tiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 3 uur geroerd. Aan het reactiemeng- sel werd water toegevoegd en het mengsel werd met ethylacetaat geëxtraheerd. Het extract werd met pekel gewassen, het werd op natriumsulfaat gedroogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd door middel van kolomchromatografie op silicagel (metha- nol/dichloormethaan = 1/20 als elutiemiddel) gezuiverd waarbij de in de titel genoemde 25 verbinding als een witte vaste stof (344 mg) werd verkregen.

Ή NMR (CDCh. 300 MHZ) δ: 7.75 (8.1H). 7.34-7.16 (m. 2H), 6.94-6.82 (m. 2H), 6J30 {s, 1H), 5.52 (d. J = 6.6 Hz. 1H), 4.934Λ2 (m, 2H). 4.814.72 (m, 1H), 4.334.22 (m. 2H). 3.10 (a. 6H), 2.48-2-10 (m. 5H) ppm.

(OH werd niet waargenomen) MS (ESI) mfe 381 (M+H)*, 379 (M-Hf.

63

Trap 5: ('+V8-(3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino~l-3-('hvdroxvmethvn-N.N-2-tri- methvlimidazofl.2-al-pvridine-6-carboxamide (fractie-Π en (-)-8-(3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-3-(hvdroxvmethvl)-N,N-2-trimethvl-imi-5 dazoi 1.2-a1-pvTÏdine-6-carboxamide (fractie 21

De fractie-1 (132 mg) en fractie-2 (130 mg) werd uitgaande van racemisch 8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethylimidazo-[l,2-a]-pyridine-6-carboxamide (335 mg) door middel van HPLC als volgt bereid: 10

Isolatie-omstandigheden:

Kolom: CHIRALPAK® OD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/ethanol/diethylamine (85/15/0,1) 15 Stroomsnelheid: 18,9 ml/min (+')-8-(,3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlaminoV3-(hvdroxvmethvl)-N.N-2-trimethvlimi-dazori.2-al-pvridine-6-carboxamide /ffactie-11 (voorbeeld 2-21 20 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat

Optische rotatie: [a]o22 = +12,3° (C = 0,20, methanol)

Retentietijd: 8 min.

M-8-(3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlaminoV3-('hvdroxvmethvn-N.N-2-trimethvlimi-25 dazol 1.2-al-pyridine-6-carboxamide (fractie-21 (voorbeeld 2-31 NMR: sp>ectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]D22 = -10,0° (C = 0,27, methanol)

Retentietijd: 13 min.

30 64

Voorbeeld 3 8-r(5.7-Difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminol-3-fhvdroxvniethvlVN.N-2-tri-methvlimidazojT .2-alpvridine-6-carboxamide 5 9 λ-οη

Trap 1: S.7-difluorchromaan-4-ol 10 Aan een geroerde oplossing van 5,7-difluor-2,3-dihydro-4H-chromeen-4-on (2,0 g, 11 mmol, Amerikaans octrooischrifl 2005038032) in methanol (30 ml) werd natri-umboorhydride (0,49 g, 13 mmol) bij 0°C toegevoegd en het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 20 uur geroerd. Nadat het mengsel in vacuo was afgedampt werd het residu met water (20 ml) behandeld en met ethylacetaat (2 x 30 ml) 15 geëxtraheerd. De combineerde extracten werden met pekel gewassen op magnesium-sulfaat gedroogd en in vacuo geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (2,0 g, 97%) werd verkregen.

1H NMR (CDCi* 270 MHz) 6: 650-6,33 2H), 5.07-4.95 (m, iH), 4 36-4.18 (m, 2H). 2-16-1.94 (m, 2H) ppm. (OH werd niet waargenomen).

20

Trap 2: 4-chloor-5.7-difluorchromaan

De in de titel genoemde verbinding werd in kwantitatieve opbrengst (2,1 g, gele olie) uitgaande van 5,7-difluorchromaan-4-ol (2,0 g, 11 mmol, trap 1) op dezelfde 25 wijze in trap 1 van voorbeeld 1 bereid.

’H NMR (CDOa. 300 MHz) 5:656-6.30 (m, 2H). 5.45-5.25 (m. 1H). 4.62-4.33 (m. 2H), 2.53-2.20 (m, 2H) ppm.

Trap 3: isopropyl-8-fYS.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-yOamino]-2-methvl-imi- dazof 1.2-alpyridine-6-carboxvlaat 65 5 De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 82% (2,8 g gele vaste stof) uitgaande van isopropyl-8-amino-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-car- boxylaat (1,6 g, 7,0 mmol, trap 2 van voorbeeld 1) en 4-chloor-5,7-difluorchromaan (2,1 g, 11 mmol, trap 2) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 1 bereid.

NMR {CDCfe, 300 MHz) δ: 8,28 (s. 1H). 7.32 (s. 1H), 8.78 (8,1H), 6.48-6 34 (m, 2H), 5.37-5.20 (m. 2H), 4.98-4.89 (m. 1H), 4.38-4,23 {m, 2H>. 2.41 (s, 3H). 2.36-2.24 (m, 1H>, 2.21-2.01 (m, 1H). 1,38 (d. J-6.6 Hz, 6H) ppm.

MS (ESI) m/z: 402 (M+H)\ 10

Trap 4: 8-f(5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vDamino]-2-methyl-imidazo|T,2-alpvridine-6-carbonzuur

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 64% (1,5 g, een 15 gele vaste stof) uitgaande van isopropyl-8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxylaat (2,8 g, 6,8 mmol, trap 3) op dezelfde wijze in trap 4 van voorbeeld 1 bereid.

Ή NMR (DMSO-<4 300 MHz) 4; 6 37 (8.1H). 7.66 (8.1H), 6,83-6.67 (m. 2H). 6.67-6 48 {m, 1H), 6.02 (6, J - 7.3 Hz. 1H), 4.99-4.86 (m. 1H). 4.37-4.15 (m, 2H), 2.27 (8.3H), 2.17-1.83 («η, 2H) ppm (COOH werd niet waargenomen) MS (ESI) m/z: 360 (M+Hf.

20

Trap 5: 8-fi5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-N.N-2-trimethvl-imi- dazof 1.2-a1pvridine-6-carboxamide

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 92% (0,79 g, een 25 witte vaste stof) uitgaande van 8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methyl-imidazo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (0,80 g, 2,2 mmol, trap 4) op dezelfde wijze in trap 5 van voorbeeld 1 bereid.

66 1H NMR (CDCJj, 300 MHz) & 7j64 (s. 1H). 7.27 (β. 1H). 6.50-6.33 (m. 2H), 6.26 (g, 1H). 6.35 (d, J= 5.8 Hz. 1H). 4.91-4.80 (m, 1H>. 4.36-4.25 (m, 2H>. 3.12 (s, 6H), 2.40 ($, 3H). 2.34-2.20 (m. 1H), 2.08-1.91 (m, 1H) ppm.

MS (ESI) mfe: 367 (M*Hf.

Trap 6: 8-f(5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-NJ^-2-trimethyl-imi- dazof 1.2-a]pvndine-6-carboxamide Γvoorbeeld 3-l~) 5

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 94% (0,79 g, een witte vaste stof) uitgaande van 8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-N,N-2-trimethylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxamide (0,79 g, 2,0 mmol, trap 5) op dezelfde wijze in trap 6 van voorbeeld 1 bereid.

1H NMR (CDOj. 270 MHz) δ: 7.76 (s, 1H), 6.52-6.25 (m, »1). 5.40 <d. J = 5.9 Hz. 1H), 4.97-4.76 (m, 3H), 4.41-4.18 (m, 2H), 3.12 (s. »1), 2.34 (s. 3H). Z32-2.12 (m. 2H), 2.11-1.91 (m, 1H) ppm.

2 o MS (ESI) mfe: 417 (M+H)*.

Trap 7: (R)-(+V8-r(5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-3-(hvdroxy- methvn-N.N-2-trimethvlimidazor 1,2-a]pyridine-6-carboxamide f fractie-1) en ('S)-f-V8-f('5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminol-3-(hvdroxvmethvl)-N.N-15 2-trimethvl-imi-dazof 1.2-alpvridine-6-carboxamide (fractie-2)

De fractie-1 (0,25 g) en fractie-2 (0,26 g) werden uitgaande van 8-[(5,7-difluor- 3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethylimidazo-[l,2-a]pyridine-6-carboxamide (0,78 g) door middel van HPLC als volgt bereid.

20

Isolatie-omstandigheden:

Kolom: CHIRALPAK® AD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/2-propanol/diethylamine (90/10/0,1) 25 Stroomsnelheid: 18,9 ml/min 67 (Ry(+y8-IY5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vBaminol-3-flwdroxvmethvlV Ν,Ν-2-trimethvl-imi-dazof 1 ,2-a]pvridine-6-carboxamide (fractie-Π (voorbeeld 3-2) NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat 5 Optische rotatie: [α]ο24 = +48,7° (C = 1,01, methanol)

Retentietijd: 13 minuten.

(SW-y8-iï5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vOaminol-3-fhvdroxvmethvlVN.N-2-trimethvlimidazon.2-alpvridine-6-carboxamide (fractie-2) (voorbeeld 3-3) 10 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]D24 = -49,9° (C = 1,01, methanol)

Retentietijd: 18 minuten.

Smp: 186°C

15 PXRD patroonhoek (2-Theta°): 10,6, 13,0, 14,4, 16,7, 19,7,22,6,26,5.

Voorbeeld 4 8-i(5-Fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-3-(hvdroxvmethvlVN.N-2-tri-me-20 thylimidazof 1.2-a1pvridine-6-carboxamide

Trap 1: 5-fluorchromaan-4-ol

De in de titel genoemde verbinding werd als een zwarte olie in kwantitatieve opbrengst uitgaande van 5-fluor-2,3-dihydro-4H-chromeen-4-on (GB 2.355.264) op dezelfde wijze als in trap 1 van voorbeeld 3 bereid.

25 68 1H NMR (CDCtj,300 MHz) δ: 7.25-7.11 (m, 1H). 6.75-6.60 (m. 2H), 5.13-5.02 (m, 1H). 4.4<W.18 (m, 2H). 2.25-1.95 (m,3H) ppm.

Trap 2: 4-ch]oor-5-fluorchromaan 5 De in de titel genoemde verbinding werd in kwantitatieve opbrengst (15 g, oranje olie) uitgaande van 5-fluorchromaan-4-ol (13 g, 77 mmol, trap 1) op dezelfde wijze in trap 1 van voorbeeld 1 bereid.

’H NMR (CDCts, 270 MHz) 5: 724-7.10 (m. 1H). 6.71-6.56 (m. 2H), 543-5.33 (m, 1M). 4.58-4.32 (m. 2H). 2.50-2.19 (m,2H)ppm.

10 Trap 3: isopropvl-8-[f5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chrorneen-4-vOamino]-2-methylimida-zo[ 1.2-alpvridine-6-carboxvlaat

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 61% (12 g, een gele vaste stof) uitgaande van 4-chloor-5-fluorchromaan (14 g, 777 mmol, trap 2 van 15 voorbeeld 4) en isopropyl-8-amino-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxylaat (2,2 g, 7,1 mmol, trap 2 van voorbeeld 1) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 1 bereid.

’H NMR (CDCI3,270 MHz) 6:627 (s. 1H), 7.31 (s. 1H). 724-7.10 (m. 1H). 6.80 (s, 1H). 6.74-6.57 (m. 2H>. 5.40-521 (m, 2H). 5.04-4.93 (m, 1H), 4.3&-4.2S (m. 2H), 2.40 (s, 3H), 2.36-223 lm, 1H>, 2.19-1.97 (m. 1H), 1,39 (d.J= 5.9 Hz, 6H)ppm.

MS (ESI) mte: 384 (M+H)’.

20 Trap 4: 8-r(5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)amino1-2-methvlimida-zori.2- alpvridine-6-carbonzuur

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 98% (9,5 g, een witte vaste stof) uitgaande van isopropyl-8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-25 yl)amino]-2-methylimida-zo[l,2-a]pyridine-6-carboxylaat (11 g, 28 mmol, trap 3) op dezelfde wijze in trap 4 van voorbeeld 1 bereid.

’H NMR (DMSO-da, 300 MHz) S: 8.51 (s, 1H). 7.72 (s. 1H). 7.32-7.16 {m, 1H). B.7^6.64 (m. 3H). 6.12 (d. J * 7.3 Hz, 1H). 5.06-4.94 (m, 1H), 4.35-4.15 (m, 2H), 2.29 (S. 3H). 2.16-1.93 (m, 2H) ppm.

(COOH werd niet weergegeven).

Trap 5: 8-f( 5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vDaminol-N,N-2-trimethylimida- ζοΓ 1 .2-a]pvridine-6-carboxamide 69 5 De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 99% (0,67 g, een witte vaste stof) uitgaande van 8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methylimida-zo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (0,64 g, 1,9 mmol, trap 4) op dezelfde wijze in trap 5 van voorbeeld 1 bereid.

Ή NMH (CDCij, 270 MHz} 6: 7.63 (s. 1H), 7.33-7.23 (m, 1H). 7.24-7.10 (m. 1H). 6.76-6.55 {m, 2H), 627 (s, 1M>, 5.43 (d. J = 5.8 Hz. 1H}. 4.97-1.84 (m. 1H). 4 36-4.23 (m, 2H). 3.12 (s. 6H), 2 39 (s. 3H). 2.32-2.22 (m, 1H), 2.11-1.93 (fn, 1H)ppm.

MS (ESI) πϋζ: 369 (M+H)*.

10

Trap 6: 8-i(5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vllamino1-N.N-2-trimethvlimida- zo[1.2-alpvridine-6-carboxamide (fractie-Π en (fractie-21

De fractie-1 (0,25 g) en fractie-2 (0,25 g) werden uitgaande van 8-[(5-fluor-3,4-15 dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-N,N-2-trimethylimida-zo[l,2-a]pyridine-6-carbox-amide (0,66 g) door HPLC als volgt bereid:

Isolatie-omstandigheden: 20 Kolom: CHIRALPAK® OD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/EtOH/diethylamine (80/20/0,1)

Stroomsnelheid: 20 m/min.

8-ff5-fluor-3.4-dihydro-2H-chromeen-4-vllamino]-N.N-2-trimethvlimidazon.2-a]-pv-25 ridine-6-carboxamide (fractie-11 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Retentietijd: 7 min MS (ESI) m/z: 369 (M+H)+.

30 70 8-f(5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)amino]-N.N-2-trimethvlimidazon.2-al-pv-ridine-6-carboxamide (fractie-2) NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat 5 Retentietijd: 11 min MS (ESI) m/z: 369 (M+H)+.

Trap 7: M-8-ff5-fluor-3,4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnamino]-3-(hvdroxvrnethvn-N.N-2-trimethvlimidazori.2-al-pvridine-6-carboxamide (voorbeeld 4-23 10

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 93% (0,13 g, een witte vaste stof) uitgaande van 8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-N,N-2-trimethylimidazo[l,2-a]-pyridine-6-carboxamide (0,13 g, 0,35 mmol, fractie-1 van trap 6) op dezelfde wijze in trap 6 van voorbeeld bereid.

NMR (CDCb. 300 MHz) δ: 7 78 (s. 1H). 7.25-7.12 (m. !H). 6.73-6.55 (m, 2H), 6.36 (». 1H), 5.42 (d. J= 5.8 Hz. 1H). 4.97-4.¾ (m, 3H),4.36-4.20 (m, 2H), 3-13 (s. 8H), 2.38 (s. 3H). 2,32-2.20 (m, 1H). 2.12-1.92 (m, 1H). 1.80-1.65 (m. 1H) ppm.

j5 MS (ESI) m/r- 399 (M+H)\ optische rotatie: [α]ο24 = -497° (c =1,01, methanol).

Trap 8: (+)-8-1( S-fluor-3.4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)aminol -3 -(hydroxvmethvl)- N.N-2-trimethvlimidazon.2-al-pvridine-6-carboxamide (voorbeeld 4-3) 20

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 94% (0,13 g, een witte vaste stof) uitgaande van 8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyI)-N,N-2-trimethylimidazo[l,2-a]-pyridine-6-carboxamide (0,13 g, 0,35 mmol, fractie-2 van trap 6) op dezelfde wijze in trap 6 van voorbeeld 1 bereid.

'H NMR (COCb. 300 MHz) & 778 (s. 1H), 7.24-7,10 (m, 1H). 8.73-8.56 (m, 2H), 6.36 (s, 1H>. 5-42 (d. J = 5.8 Hz, 1H), 4.97-4.83 (m, 3H).4 36^1.19 (m, 2H). 3.13 (s. 6H), 2.39 (s, 3H), 2.34-2.21 (m, 1H). 2.12-1.92 (m, 1H), 1.89-1.53 (m. 1H) pprr.

25 MS (ESI) m/z: 399

Optische rotatie: [<x]d24 = + 54,3° (c = 1,01, methanol).

71

Voorbeeld 5 (SV3-(hvdroxvmethvlVN.N-2-trimethvl-8-r(5-methvl-3.4-dihydro-2H-chromeen-4-vllaminolimidazor 1.2-a1pyridine-6-carboxamide 5

Trap 1: methvl-3-(2-chloor-5-methvlfenoxv)acrvlaat 10 Een oplossing van 2-chloor-5-methylfenol (10,0 g, 70,1 mmol) en methylpropio- laat (5,95 ml, 71,5 mmol) in acetonitril (30 ml) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van TBAF in THF (1,0 M in de handel verkrijgbare oplossing, 14 ml, 14 mmol) bij kamertemperatuur over een tijdsperiode van 1 uur. Na volledige toevoeging van de oplossing werd het roeren gedurende 1 uur voortgezet. Het reactiemengsel werd met 15 tolueen (50 ml) verdund en werd tweemaal met water (50 ml + 25 ml) gewassen. De afgescheiden organische laag werd onder verminderde druk geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding als een bruine olie (17,2 g, >99%, 6:4 mengsel van eisen trans-isomeren met ca. 10 gew.% tolueen) werd verkregen die in de volgende stap zonder verdere zuivering werd gebruikt.

Ή NMR (COCIs. 300 MHz,) 8: f.71 (d, J= 12.5 Hz, Q.4H), 7.30 (m, 1H), 6.98-6.93 (m, 2H). 6.74 (d. J » 7.3 2Q Hz, 0.6H). 5.47 <d. J « 12.5 Hz. 0.4H), 5.20 (d, J · 7.3 Hz. 0.6H). 2.77 <e, 1.8H), 3.73 (s. 1.3H). 2.34-2.33 (twee singlets, 3H) ppm.

Trap 2: methvl-3 -(2-chloor-5 -methvlfenoxvlpropanoaat 25 Een mengsel van 3-(2-chloor-5-methylfenoxy)acrylaat (1,00 g, 4,41 mmol, trap 1), natriumbromide (10 mg, 0,097 mmol) en 10% palladium op koolstof (50 mg) in methanol (5 ml) werd gedurende een nacht onder H2 (1 atmosfeer) bij kamertempera- 72 tuur geroerd. Het reactiemengsel werd door Celite®pad gefiltreerd en de katalysator werd met tolueen (10 ml) gespoeld. Het gecombineerde fïltraat werd met water (5 ml) gewassen en werd onder verminderde druk geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding (963 mg, 95%) als een oranje olie werd verkregen die in de vol-5 gende stap zonder verdere zuivering werd gebruikt.

Ή NMR (CDCIj, 300 MH2) 5:7.21 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.78 (br.S, 1H), 6.73 (Ör.d, J-8.8 Hz, 1H), 4.30 (t, J == 6.6 Hz, 2H), 3.74 (s. 3H). 2.86 (t, J ® 66 Hz. 2H). 2.32 (s, 3H) ppm.

Trap 3: 8-chloor-5-methvl-2.3-dihvdro-4H-chromeen-4-on 10 Een mengsel van methyl-3-(2-chloor-5-methylfenoxy)propanoaat (430 mg, 1,88 mmol, trap 2) en trifluormethaansulfonzuur (0,86 ml, 2 ml/g substraat) werd bij 80°C gedurende 40 minuten geroerd. Na koelen tot kamertemperatuur werd het reactiemengsel met water verdund en het product werd met tolueen geëxtraheerd. De organische laag werd achtereenvolgens gewassen met een waterige oplossing van K2CO3 en water 15 en werd onder verminderde druk geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding (355 mg, 96%) als een lichtbruine vaste stof werd verkregen die in de volgende stap zonder verdere zuivering werd gebruikt.

1H NMR (CDCIj, 300 MHz) & 7-41 (<J. J=BA Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.1 Hz. 1H). 4.61 (t, J - 6,6 Hz, 2H), 2.85 (t, J * 6.6 Hz. 2H)„ 2.61 {s, 3H) ppm.

20 Trap 4: (4SV8-chloor-5-methvl-N-rn SM-fenvlethvl]chromaan-4-amine-4-methvl- benzeensulfonaat

Aan een oplossing van 8-chloor-5-methyl-2,3-dihydro-4H-chromeen-4-on (1,97 g, 10 mmol, trap 3) in tetrahydrofuran (4 ml) werd (S)-l-fenylethylamine (1,64 ml, 13 25 mmol) en titanium(IV)isopropoxide (4,44 ml, 15 mmol) bij 22°C toegevoegd. De gele oplossing werd bij 22°C gedurende 18 uur geroerd. Na voltooiing van de reactie (gecontroleerd door middel van H’-NMR) werd het mengsel met methanol (20 ml) verdund en werd tot ongeveer -30°C gekoeld. Aan deze oplossing werd een 2,0 M oplossing van natriumboorhydride in triglyme (2,5 ml, 5 mmol) over een tijdsperiode van 30 30 minuten (inwendige temperatuur werd tussen -20 en -25°C stand gehouden) onder een stikstof toegevoegd. Het reactiemengsel werd bij -20°C gedurende 30 minuten geroerd 73 en vervolgens werd een 10 gew.% w/v waterige oplossing van natriumcitraat (35 ml) toegevoegd. Het gele mengsel werd flink bij 22°C gedurende 5 minuten geroerd en vervolgens werd ethylacetaat (60 ml) toegevoegd. Het verkregen mengsel werd bij 22°C gedurende 15 uur geroerd en twee lagen werden gescheiden. De organische laag werd 5 met 5% gewicht/volume waterige oplossing van natriumchloride (20 ml) gewassen en geconcentreerd. Ongezuiverd product (69,8% bepaald door middel van HPLC) werd in methanol (65 ml) opgelost en de oplossing werd tot 70°C (uitwendige temperatuur) opgewarmd. Aan deze gele oplossing werd druppelsgewijs een waterige oplossing van 4-methylbenzeensulfonzuurmonohydraat (2,47 g, 13 mmol in 15 ml water) over een 10 tijdsperiode van 10 minuten toegevoegd. Een verdere hoeveelheid water (45 ml) werd toegevoegd en het mengsel werd langzaam tot 22°C gekoeld en gedurende een nacht 12 uur bij 22°C geroerd. Na filtratie werd de witte vaste stof met ethylacetaat (20 ml) gewassen en werd vervolgens in een vacuümoven bij 50°C gedurende 2 uur gedroogd, waarbij de in de titel genoemde verbinding (2,82 g, 59%, 99,3% de) als een witte vaste 15 stof werd verkregen.

1H NMR (DMSO-dfc 300 MHz) ¢: 8.96 {br.s, 1H). 8.71 (bf.s. 1H). 7.65 (d. J = 6.6 Hz.2H). 7.49-7.46 <m, 5H).

7.39 {d, J= 8.1 Hz. 1H), 7.12 (c, J = 7.3 Hz, 2H), 6.87 (d, ^ - 8.1 H2.1H), 4.72-4.68 (m, 2H). 4.42-4.32 (m, 2H). 2.40 <s. 3H). 2.29 (s. 3H), 2.13-2.00 (m. 2H), 1.89 (d. J « 5.8 Hz. 3H) ppm.

Analytische omstandigheden (HPLC) 20 Kolom: Xterra MS Cl8 3,5 pm (2,1 mm I.D. x 150 mm, Waters).

Temperatuur: 40°C Detectie: UV (230 nm)

Mobiele fase: CH3CN (A), 10 mM CH3COONH4 (B). Gradiënt tabel wordt hieronder gegeven: 25

Tijd (min) %A %B Stroomsnelheid (ml/min) Öi 20 8Ö 0^3 25$ 95 5 Ö$ 30$ 95 Γ“ Ö3 74

Retentietijd:

Fractie 1: 21,8 min (ongewenst diastereomeer)

Fractie 2: 22,6 min (gewenst diastereomeer).

5

Trap 5: f4S)-5-methvlchromaan-4-aminehvdrochloride

Aan een suspensie van (4S)-8-chloor-5-methyl-N-[(lS)-l-fenylethyl]chromaan-4-amine-4-methylbenzeensulfonaat (2,37 g, 5,0 mmol, trap 4) in ethylacetaat (19 ml) 10 werd 1 M waterige oplossing van natriumhydroxide (10 ml) bij 22°C toegevoegd. De suspensie werd bij 22°C gedurende 10 minuten flink geroerd. De twee lagen werden gescheiden. De organische laag werd met water (5 ml) gewassen en werd geconcentreerd waarbij een vrij amine als een kleurloze olie werd verkregen. Het vrije amine werd in methanol (20 ml) opgelost en de oplossing werd bij aanwezigheid van 10% 15 palladium op koolstof (31 mg) bij 50°C gedurende 3 uur onder stikstof (1 atmosfeer) gehydrogenolyseerd. Nadat het reactiemengsel tot 22°C was afgekoeld werd de katalysator door een Celite®pad afgefiltreerd en met methanol gewassen. Het filtraat werd geconcentreerd waarbij de in de titel genoemde verbinding (1,00 g, 100%, 99,4% ee) als een witte vaste stof werd verkregen.

'H NMR {DMSCXfc. 300 MHz) i: 8.52 (br* 3H), 7.17 {t, J * 8.0 Hz. 1H), 6.79 (d, J * 7.0 Hz. 1H). 6.70 <4 J 8.0 Hz, 1H), 465 (s, 1H). 4.32 (d. J = 10.3 Hz, 2H). 2.39 (s, 3H). 2.30 (d. J » 14.7 Hz, 1H), 2.05-220 (m, 2q 1H)ppm.

Analytische omstandigheden:

Kolom: CHIRALPAK® AD-H 25 Temperatuur: 40°C

Detectie: UV (230 nm)

Mobiele fase: n-hexaan/ethanol/diethylamine (90/10/0,1)

Stroomsnelheid: l,0ml/min Retentietijd: 30

Fractie 1: 8,0 min (R-isomeer)

Fractie 2: 9,6 min (S-isomeer)

Trap 6: isopropvl-2-methvl-8-l|Y4SV5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl~|amino)- imidazof 1.2-alpvridine-6-carboxvlaat 75 5 Trap 6-1: isopropvl-6-amino-5-broomnicotinaat

Aan een 3-halsfles met een inhoud van 500 ml die een suspensie in isopropyl-6-aminonicotinaat (14,9 g, 82,5 mmol) in cyclopentylmethylether (CPME) (150 ml) bevatte werd NBS in zeven porties (2,93 gx 7, 116 mmol als een geheel) met intervallen 10 van 10 minuten bij 22°C toegevoegd. Na 15 minuten roeren werd het reactiemengsel met 3%’s waterige oplossing van natriumthiosulfaat (Na2S02C>3) (150 ml) en een 5%’s waterige oplossing van NaHCC>3 (150 ml) geblust. Aan dit mengsel werd tolueen (300 ml) toegevoegd en het mengsel werd gedurende 10 minuten geroerd. De gescheiden organische laag werd onder verminderde druk geconcentreerd en het oplosmiddel werd 15 met 2-propanol (2 x 90 ml) afgedampt en werd tot 75 ml ten dele geconcentreerd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 15 uur en vervolgens bij 0°C gedurende 5 uur geroerd. De verkregen vaste stof werd gefiltreerd en werd tweemaal met koude 2-propanol (30 ml) gewassen teneinde de in de titel genoemde verbinding (16,4 g, 63,3 mmol, 77%) als een geelbruine vaste stof te verkrijgen.

'H NMR (CDCIj, 300 MHz) 6:856 (s, 1H). 8.24 (s, 1H). 5.40 (br.s. 2H), 5.22 (sep. J- 6.6 Hz. 1H). 1.35 <d. 20 J = 6.6 Hz, 6H) ppm.

Trap 6-2: isopropvl-8-broom-2-methvlimidazo(1.2-alpyridine-6-carboxvlaat

Een mengsel van isopropyl-6-amino-5-broomnicotinaat (15,0 g, 57,9 mmol, trap 25 6-1), chlooraceton (14,0 ml, 174 mmol) en propionitril (150 ml) werd bij 100°C ge roerd. Na 71 uur roeren werd chlooraceton (4,7 ml, 58 mmol) toegevoegd en het roeren werd gedurende 24 uur op dezelfde temperatuur voortgezet. Een andere portie chlooraceton (4,7 ml, 58 mmol) en propionitril (60 ml) werden toegevoegd. Na roeren gedurende 9 uur werd het reactiemengsel tot kamertemperatuur gekoeld en werd ver-30 volgens met 0,5 M NaOH oplossing (116 ml) en water (34 ml) geblust. Aan dit mengsel werd tolueen (150 ml) toegevoegd en het mengsel werd gedurende 15 minuten geroerd. De gescheiden organische laag werd onder verminderde druk geconcentreerd en 76 het oplosmiddel werd met behulp van een gemengd oplosmiddel (heptaan:ethylacetaat = 1:1, 50 ml x 2) afgedampt. Het residu werd met een 1:1 mengsel van heptaan en ethylacetaat (300 ml) verdunt en silicagel (30 g) werd toegevoegd. Na roeren gedurende 10 minuten werd het mengsel gefiltreerd en met een 1:1 mengsel van heptaan en 5 ethylacetaat (150 ml x 2) gewassen. Het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het oplosmiddel werd met 2-propanol (150 ml x 2) afgedampt en werd tot ca. 20 ml ten dele geconcentreerd. Heptaan (70 ml) werd toegevoegd en het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 1 uur en vervolgens bij 0°C gedurende 3 uur geroerd. De verkregen vaste stof werd gefiltreerd en tweemaal gewassen met een 19:1 10 mengsel van heptaan en 2-propanol (30 ml) waarbij de in de titel genoemde verbinding (8,3 g, 28 mmol, 48%) als een lichte melkachtige bruine vaste stof werd verkregen.

Ή NMR ICOCis, 300 MHz) 6: 8 78 <d. J = 1.4 Hz, 1H), 7.98 (s. 1H), 7.50 (S, J= 8 Hz, 1H), 528 (sep. J » 5.8 Hz. 1H), 2.52 (s. 3H), 1.39 (d. J= 5.8 Hz. 6H) ppm.

Trap 6-3: isopropvl-2-methvl-8-flT4SV5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl- 15 aminol imidazof 1.2-a]pvridine-6-carboxvlaat

De tweehals rondbodemfles (20 ml) voorzien van een reflux condenser werd gevuld met Pd2(dba)3 (3,7 mg, 0,004 mmol) en BINAP (5,6 mg, 0,009 mmol) en werd met stikstof gespoeld. Tolueen (1 ml) werd toegevoegd en het mengsel werd bij 22°C 20 gedurende 5 minuten geroerd. Hetgeen resulteerde in een heterogene paarse oplossing.

(4S)-5-Methylchromaan-4-aminehydrochloride (80 mg, 0,4 mmol, trap 5), natrium-tert-butoxide (85 mg, 0,88 mmol) en tolueen (1 ml) werden toegevoegd en het mengsel werd bij 60°C gedurende 5 minuten geroerd. Isopropyl-8-broom-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carboxylaat (119 mg, 0,4 mmol, trap 6-2) en tolueen (1 ml) werden toege-25 voegd en het mengsel werd bij 80°C gedurende 5 uur geroerd. Het reactiemengsel werd tot 22°C gekoeld en het werd vervolgens met diisopropylether (3 ml) verdund. De verkregen oplossing werd door een Celite®pad gefiltreerd en het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Ongezuiverd product werd gezuiverd door middel van silicagel kolomchromatografie (heptaan:ethylacetaat = 4:1) waarbij de in de titel ge-30 noemde verbinding (118 mg, 78%) als een lichtroze poeder werd verkregen.

Ή NMR (CDCIj, 300 MHz) &: 826 (a. 1H). 732 (s, 1H), 7.12 (t, J = 8.1 Hz. 1H), 6.78-6.72 (m. 3H), 5.32-524 (m. 2H). 4.73 (br.. 1H). 4.27-4.19 (m. 2H), 2.39 (β. 3H), 2.29 (d, J « 15.0 Hz, 1H), 2.22 (s. 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.40 (d. J = 5.8 Hz. 6H) ppm.

Trap 7: 2-methvl-8-(l(4S)-5-methyl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl]aminolimidazo- 13,2-a1pvridine-6-carbonzuur 77 5 De in de titel genoemde verbinding werd uitgaande van isopropyl-2-methyl-8- {[(4S)-5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl]amino}imidazo[l,2-a]pyridine-6-car-boxylaat (trap 6-3) door op dezelfde wijze in trap 4 van voorbeeld 1 bereid.

Trap 8: N.N-2-trimethvl-8-([(4SV5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vllamino|-10 imidazof 1.2-a1pvridine-6-carboxamide

De in de titel genoemde verbinding werd uitgaande van 2-methyl-8- {[(4S)-5-me-thyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl]amino} imidazof 1,2-a]pyridine-6-carbonzuur (trap 7) op dezelfde wijze in trap 5 van voorbeeld 1 bereid.

15

Trap 9: 3-fhvdroxvmethvlTN.N-2-trimethvl-8-(IY4SV5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chro-meen-4-vllamino \ imidazof 1.2-alpvridine-6-carboxamide

De in de titel genoemde verbinding werd uitgaande van N,N-2-trimethyl-8-20 {[(4S)-5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl]amino} imidazof 1,2-a]pyridine-6-car- boxamide (trap 8) op dezelfde wijze in trap 6 van voorbeeld 1 bereid.

Voorbeeld 6 25 [2-Methvl-8-(Y5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl3aminol-6-imorfolin-4-vl-car-bonvliimidazof 1.2-a]pvridine-3-vl]methanol ï r™ &

Trap 1: 2-Methvl-N-('5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)-6-(morfolin-4-vl-car- bonyPimidazof 1.2-a1pvridine-8-amine 78 5 Aan een geroerd mengsel van 2-methyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen- 4-ylcarbonyl)imidazo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (0,60 g, 1,8 mmol, trap 4 van voorbeeld 1) en morfoline (0,31 g, 3,6 mmol) in dichloormethaan (8,0 ml) werd 1-hydroxy-benzotriazoolhydraat (HOBt) (0,36 g, 2,7 mmol) en l-(3-dimethylamino-propyl)-3-ethylcarbodiimidehydrochloride (EDCI) (0,51 g, 2,7 mmol) bij 0°C toegevoegd en het 10 reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 20 uur geroerd. Het reactiemeng-sel werd met een verzadigde natriumwaterstofcarbonaat-oplossing geblust en werd met dichloormethaan (2 x 30 ml) geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden met pekel gewassen op natriumsulfaat gedroogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd door middel van kolomchromatografie op silicagel (hexaan/ethylacetaat = 1/2 als elu-15 tiemiddel) gezuiverd teneinde de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (0,73 g kwantitatieve opbrengst) te verkrijgen.

NMR (CDCfa. 300 Wte) δ: 7M («, 1H). 7.28 (s. 1H), 7.18-7,07 (m. 1H). 6.80^.66 (m, 2H). 6.21 (s. 1H). S.41 (d. 5.8 Hz, 1H). 4.70-4.B0 {m, 1H). 4.34-4,17 (m, 2H), 3,81-3 61 (m. 8H), 2,38 (s, 3H), 222 (β, 3H), 2,31-1.95 (m. 2H) ppm.

MS (ESI) m/z: 407 (M+Hf.

Trap 2: 2-methvl-N-f5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlT6-(morfolin-4-vl-car-20 bonvl)imidazo[1.2-a]pvridine-8-amine (fractie-1 en fractie-2)

De fractie-1 (0,27 g) en fractie-2 (0,28 g) werden uitgaande van racemisch 2-me-thyl-N-(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)-6-(morfolin-4-yl-carbonyl)imi-dazo[l,2-a]pyridine-8-amine(0,72 g) door middel van HPLC als volgt bereid: 25

Isolatie-omstandigheden:

Kolom: CHIRALPAK® OJ-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexan/ethanol/diethylamine (65/35/0,1) 30 Stroomsnelheid: 20 ml/min.

79 2-Methvl-N-(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlV6-(morfolin-4-vl-carbonvl)imi-dazofl.2-alpvridine-8-amine (fractie Π NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat 5 MS (ESI) m/z: 407 (M+H)+.

Retentietijd: 8 min.

2-Methvl-N-(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vD-6-(morfolin-4-vl-carbonyl)imi-dazo[1.2-a]pvridine-8-amine (fractie 2) 10 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat MS (ESI) m/z: 407 (M+H)+.

Retentietijd: 14 min.

15 Trap 3: (-)-2-MethvI-8-i(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)amino]-6-(morfolin-4-vl-carbonvDimidazori.2-alpvridine-3-vllmethanol (voorbeeld 6-21

Een mengsel van 2-Methyl-N-(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)-6-(morfolin-4-yl-carbonyl)imidazo[l,2-a]pyridine-8-amine (0,22 g, 0,55 mmol, fractie-1 20 van trap 2), formaldehyde 37 gew.% in water (0,45 g, 5,5 mmol), azijnzuur (0,78 ml, 1,4 mmol) en natriumacetaat (0,11 g, 1,4 mmol) in acetonitril (5 ml) werd bij 70°C gedurende 3 uur verhit. Na koeling tot kamertemperatuur werd het reactiemengsel met 1 M natriumhydroxide-oplossing geblust en werd met ethylacetaat (2 x 20 ml) geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden met pekel gewassen op natriumsulfaat ge-25 droogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd gezuiverd door middel van kolom-chromatografïe op silicagel (dichloormethaan/methanol = 15/1 als elutiemiddel) en op NH-gel (ethylacetaat als elutiemiddel) waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (0,18 g, 76%) werd verkregen.

*H NMR (COO* 300 MHz) δ: 7.76 ($, 1H), 7.13 (U = 8.1 Hz, 1H), 6.81*6.69 (m, 2H>, 6.30 <8,1H), 5.46 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.91-4 78 (m, 2H), 4.70-4 60 (η, 1H), 4.33*4.17 (m, 2H), 3.87-3.60 (m, 8H). 2.40*2.36 {m, 1H). 2.33 (s. 3H), 2.21 (s, 3H), 2.29-2.15 («η. 1H), 2.16*1.97 (m, 1H) ppm.

MS (ES!) nVr 437 <M*H)*.

30

Optische rotatie: [a]D23 = -12,0° (c = 1,01, methanol) 80

Trap 4: (+V2-Methvl-8-r(5-methvl-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminol-6-('morfolin-4-vlcarbonYl)imirfa^f>[1 ^-alpvridine-3-vllmethanol (voorbeeld 6-3) 5 De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 73% (0,18 g, een witte vaste stof) uitgaande van 2-Methyl-N-(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4- yl)amino]-6-(morfolin-4-yl-carbonyl)imidazo[ 1,2-a]pyridine-8-amine (0,23 g, 0,56 mmol, fractie-2 van trap 2) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 6 bereid.

*H NMR (CDCIj, 300 MHz) 5: 776 (8,1H). 7.13 ft J= 8.1 Hr, 1H), 6.81-6.69 (m. 2H). 6.30 <s, 1H), 5.46 (d.

J = 6.6 Hz, 1H), 4.91-4.76 (m. 2H), 4 70-4.60 (m. 1H). 4.33-1.17 (m, 2H), 3.87-3.60 (m. 8H), 2.81-2.64 (m. 1H). 2.33 (8,3H), 2,21 (β. 3H), 2.29-2.15 (m, 1H). 2.15-1.97 (m. 1H) ppm.

MS (ESI) m/z: 437 (M+Hf.

10 Optische rotatie: [oc]d24 = +11,8° (c = 1,01, methanol)

Voorbeeld 7 r8-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbonvDimi-15 dazof 1.2-alpvridine-3-vllmethanol T)

Trap 1: Γ8-(3,4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlaminoV2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbo-20 nvnimidazori.2-alpvridine-3-vllmethanol (voorbeeld 7-1)

Aan een geroerde oplossing van 8-(3,4-Dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hy-droxymethyl)-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (2,4 g, 6,9 mmol, trap 3 van voorbeeld 2), morfoline (1,8 g, 21 mmol) en triethylamine (1,44 ml, 10 mmol) in 25 dimethylformamide (70 ml) werd 0-benztriazol-l-yl-N,N,N,,N,-tetramethyluronium-hexafluorfosfaat (HBTU) (3,9 g, 10 mmol) bij 0°C toegevoegd. Het reactiemengsel 81 werd bij kamertemperatuur gedurende 3 uur geroerd. Aan het reactiemengsel werd water toegevoegd en het mengsel werd met ethylacetaat geëxtraheerd. Het extract werd met pekel gewassen op natriumsulfaat gedroogd en in vacuo afgedampt. Het residu werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie op silicagel (ethylace-5 taat/methanol = 20/1 als elutiemmiddel) waarbij de in de titel genoemde verbinding als een witte vaste stof (1,6 g, 53%) werd verkregen.

1H NMR (CDCh.300 MHz) δ: 7.78 (s, 1H), 7,33-7.18 (m. 2H>, 8,94-6.82 (m, 2H). 6.25 (s. 1H). 5.57-5.50 (m, 1H), 4.94-4.86 2H), 4,80-4.70 (m. 1H), 4,32-4,23 (m, 2H), 3.80-3.60 (m. 8H), 2.40 (S, 3H). 2.30-2.15 (m.

2H)ppm (OH werd niet waargenomen) MS (ESI) m/z: 423 (Μ+ΗΓ.421 [M-Hf.

Trap 2: (-)-f8-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvl-6-(morfoline-4-vl-car-10 bonvPimidazol 1.2-alpvridine-3-vl]methanol /fractie-Π en /+)-18-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvl-6-( morfoline-4-vlcarbonvl)-imidazof 1.2-alpvridine-3-vllmethanol (fractie-2)

De fractie-1 (570 mg) en fractie-2 (570 mg) werden uitgaande van racemisch [8-15 (3,4-Dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-2-methyl-6-(morfoline-4-ylcarbonyl)imi- dazo[l,2-a]pyridine-3-yl]methanol (1,4 g) door middel van HPLC als volgt bereid:

Isolatie-omstandigheden: 20 Kolom: CHIRALPAK® AD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/2-propanol/diethylamine (85/15/0,1)

Stroomsnelheid: 18,9 ml/min (-)-18-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlamino)-2-methvl-6-(morfoline-4-vl-carbonvl)-25 imidazof 1,2-alpyridine-3-vllmethanol (fractie-1) (voorbeeld 7-2) NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]D24 = -3,21° (C = 1,00, methanol)

Retentietijd: 16 min.

30 82

(+Vf8-(3.4-Dihvdro-2H-chromeen-4-vlammoV2-methvl-6-(morfolme-4-vl-carbonvlV

imidazof 1.2-a1pvridine-3-vllmethanol (fractie-11 (voorbeeld 7-21 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat 5 Optische rotatie: [α]ο25 = +4,21° (C = 0,91, methanol)

Retentietijd: 19 min.

Voorbeeld 8 10 [8- Γ(5.7-Difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vlaminol-2-methvl-6-( morfoline-4-vl- carbonvllimidazof 1.2-ajpvridme-3-vllmethanol 15 Trap 1: r8-r(5.7-Difluor-3.4-dihydro-2H-chromeen-4-vlaminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vl-carbonvHimidazof 1.2-alpvridine-8-amine

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 75% (4,49 g, een witte vaste stof) uitgaande van [8-[(5,7-Difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-20 2-methylimidazo[l ,2-a]pyridine-6-carbonzuur (5,00 g, 13,9 mmol, trap 4 van voorbeeld 3) op dezelfde wijze in trap 1 van voorbeeld 6, bereid.

Ή KiMR ICDCI* 300 MHz) 6:7.64 (d, J = 1.3 Hz, 1H). 727 (8.1H). 6.47-6.36 (m, 2H). 6.22 (s, 1H). 5.40 (d, J * 6.6 Hz, 1H), 4.95 (m, 1H), 435-4.23 (m, 2H), 3.71 (m, 8H), 2.39 (s, 3H). 2.30-222 (m. 1H). 2.09-1.95 (m, lH)ppm.

MS (ESI) mfe: 429 (M+H)\

Trap 2: r8-[('5,7-Difluor-3,4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)amino1-2-methvI-6-(morfo- line-4-vl-carbonvnimidazo[1.2-alpvridine-3-vl]methanol (voorbeeld 8-1) 83

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 97% (4,68 g, een 5 witte vaste stof) uitgaande van N-(5,7-Difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)-2-me-thyl-6-(morfoline-4-ylcarbonyl)imidazo[l,2-a]pyridine-8-amine (4,49 g, 10,5 mmol, trap 1) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 6 bereid.

’H NMR (CDCb. 300 MHz) 8:776 (s, 1H), 6.45^.35 (m. 2H>, 6.30 (s, 1H), 5.46 (d. J m 6.6 Hz, 1H). 4.86 <6, 3H). 4.02-4.85 (m, 1H). 438-4.22 (m, 2H), 3.71 (m. 8H), 233 (s, 3H).2.33 (m. 1H). 2.10-1.95 (m, 1H} ppm MS (ESI) mte: 459 (M+Hf.

10 Trap 3: (+Vr8-[f5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-2-methvl-6-('morfoline-4-vlcarbonvnimidazo[1.2-alpvridine-3-vllmethanol (fractie-Π en (-Vr8-r5,7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbonyDimidazon .2-alpvridine-3-vl]methanol ffractie-2) 15

De fractie-1 (0,49 mg) en fractie-2 (0,48 mg) werden uitgaande van racemisch [8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methyl-6-(morfoline-4-ylcarbo-nyl)imidazo[l,2-a]pyridine-3-yl]methanol (1,50 g) door middel van HPLC als volgt bereid: 20

Isolatie-omstandigheden:

Kolom: CHIRALPAK® AD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n-hexaan/2-propanol/diethylamine (85/15/0,1) 25 Stroomsnelheid: 18,9ml/min (+)-f8-f(5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)amino]-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbonvDimidazo[1.2-alpvridine-3-vl1methanol (fractie-11 (voorbeeld 8-2) 30 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat

Optische rotatie: [a]o23 = +54,2° (C = 1,20, methanol) 84

Retentietijd: 11 min.

(-Vf8-[5.7-difluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vDaminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbonvl)imidazo[1.2-a|pvridine-3-vllmethanol (fractie-2) (voorbeeld 8-3) 5 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]D24 = -51,2° (C = 1,34, methanol)

Retentietijd: 18 min.

10 Voorbeeld 9 r8-[S-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vllaminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbo-nvDimidazon .2-a1pvridine-3-vllmethanol

O -—OH

15

Trap 1: N-r5-Fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vll-2-methvl-6-('morfoline-4-vlcarbonvlVimi-dazofl ,2-alpvridine-8-amine 20

De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 96% (4,5 g, een gele bruine vaste stof) uitgaande van 8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methylimidazo[l,2-a]pyridine-6-carbonzuur (3,9 g, 11 mmol, trap 4 in voorbeeld 4) op dezelfde wijze in trap 1 van voorbeeld 6 bereid.

*H NMR tCDCb, 300 MHz) 6:7,64 (s, 1H), 7.35-7.10 (m, 2H). 6.78-6.57 (m. 2H). 6.2« (s. 1H). 5.80-5.68 (m. 1H). 5.00-4.85 (m, 1H), 4.40-427 (ro, 2H). 3.88-3.61 (m, 8H), 2.39 (s. 3H). 2.33-1.64 (m, 2H> ppm.

25 MS (ESI) mte: 411 <M+H}\ i8-rf5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vnaminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vlcarbo- nvllimidazol 1.2-a]pyridine-3-vllmethanol (voorbeeld 9-1)

Trap 2: 85 5 De in de titel genoemde verbinding werd met een opbrengst van 93% (4,4 g, een witte vaste stof) uitgaande van N-(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)-2-methyl-6-(morfoline-4-yl)imidazo[l,2-a]pyridine-8-amine (4,5 g, 11 mmol, trap 1) op dezelfde wijze in trap 3 van voorbeeld 6 bereid.

1H NMR (CDCIj, 270 MHz) &: 7.77 (8.1H), 7.24-7.12 (m, 1H)T 6.72-6.57 (m. 2H). 6.32 (s. 1H). 5.50-5.45 (m, 1H). 4.94-4.84 (m, 3H), 4.37-422 (m. 2H), 3.81-3.61 {m, 8H). 2.35 (s. 3H). 2.30-2.20 (m, 1H). 2.12-1.98 (m.

10 1H) ppm. (OH werd niet waargenomen).

MS (ESI) m/z: 441 (M+H)+.

Trap 3: (+Vf8-iï5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vDaminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vl-15 carbonvllimidazof 1.2-a1pvridine-3-vllmethanol (fractie-11 en (-)- [8- Γ (5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vllaminol-2-methyl-6-(morfoline-4-vl-carbo-nvllimidazor 1.2-a1pvridine-3-vl)methanol (fractie-21

De fractie-1 (0,59 g) en fractie-2 (0,61 g) werden uitgaande van racemisch [8-[(5-20 fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-2-methyl-6-(morfoline-4-ylcarbonyl)-imidazo[l,2-a]pyridine-3-yl]methanol (1,5 g) door middel van HPLC als volgt bereid:

Isoiatie-omstandigheden: 25 Kolom: CHIRALPAK®AD-H (20 mm I.D. x 250 mm, DAICEL)

Mobiele fase: n/hexaan/2-propanol/diethylamine (80/20/0,1)

Stroomsnelheid: 20 ml/min.

(+l-r8-(ï5-fluor-3.4-dihydro-2H-chromeen-4-vDamino)-2-methyl-6-(morfoline-4-vl-30 carbonvr)imidazofl.2-a)pvridine-3-vl1methanol (fractie 11 (voorbeeld 9-21 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat 86

Optische rotatie: [α]ο24 = +51,7° (c = 1,04, methanol)

Retentietijd: 7 min.

M-f8-[(5-fluor-3.4-dihvdro-2H-chromeen-4-vl)aminol-2-methvl-6-(morfoline-4-vl-5 carbonvllimidazor 1.2-alpvridine-3-vllmethanol (fractie Π (voorbeeld 9-21 NMR: spectrum data waren identiek aan die van het racemaat Optische rotatie: [a]o24 = -53,1° (c = 1,04, methanol)

Retentietijd: 10 min.

10

Alle publicaties waaronder maar niet beperkt tot verleende octrooien, octrooiaanvrage en tijdschriftartikelen die in deze aanvrage geciteerd zijn, zijn elke in de aanvrage bij wijze van referentie geheel opgenomen.

Ofschoon de uitvinding met betrekking tot de geopenbaarde uitvoeringsvormen 15 beschreven zijn, zullen de deskundigen gemakkelijk begrijpen dat de specifieke experimenten die in detail beschreven zijn slechts ter illustratie van de uitvinding dienen. Begrepen dient te worden dat verscheidene modificaties zonder af te wijken van de geest van de uitvinding gemaakt kunnen worden.

2000532

Claims

1. Een verbinding met formule (I): o .—R1 *· ^NH (I) Re'Y^'R6 R7 5 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout ervan waarin: -A-B- -0-CH2- of-CH2-O- is;

10 R1 een hydroxylgroep of een in een hydroxylgroep in vivo omzetbare groep voor stelt; R2 een Ci-C6-alkylgroep voorstelt; R3 en R4 onafhankelijk van elkaar een Ci-Cé-alkylgroep of een C3-C?-cycloalkyl-groep voorstellen waarbij de Q-Cé-alkylgroep en de C3-C7-cycloalkylgroep al 15 dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 substituenten die onafhankelijk van elkaar gekozen zijn uit de groep bestaande uit een halogeenatoom, een hydroxylgroep, een Ci-Cé-alkoxy groep en een C3-C7-cycloalkylgroep dan wel vormen R3 en R4 tezamen met het stikstofatoom waarmee zij verbonden zijn een heterocyclische groep met 4 tot 7 leden die al dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 substituen-20 ten gekozen uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een Ci -Cö-alkylgroep, een C i -Cé-alkoxygroep en een hydroxy-C i -Ce-alkyl groep en 2 00 053 2 5 6 7 8 R , R , R' en R onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeena-toom of een Ci-Cé-alkylgroep voorstellen.

2. De verbinding of het farmaceutisch aanvaardbare zout volgens conclusie 1, 5 waarin: R1 een hydroxylgroep, Ci-Ce-alkoxy of Ci-Cö-alkylcarbonyloxygroep is; en R3 en R4 onafhankelijk van elkaar een Ci-Ce-alkylgroep of een C3-C7-cycloalkylgroep is waarbij de C i -C6-alkylgroep en de C3-C7-cycloalkylgroep al dan niet gesubstitueerd zijn met 1 tot 3 substituenten die onafhankelijk van elkaar gekozen zijn uit de groep 10 bestaande uit een halogeenatoom, een hydroxylgroep, een Ci-C6-alkoxygroep en een C3-C7-cycloalkylgroep dan wel vormen R3 en R4 tezamen met het stikstofatoom waaraan zij gebonden zijn een azetidinylgroep, een pyrrolidinylgroep, een morfolinogroep of een homomorfolinogroep, waarbij de azetidinylgroep, de pyrrolidinylgroep, de morfolinogroep en de homomorfolinogroep ongesubstitueerd zijn of met 1 tot 3 substitu-15 enten gesubstitueerd zijn die gekozen zijn uit de groep bestaande uit een hydroxylgroep, een Ci-C6-alkylgroep, een C i-C^-alkoxygroep en een hydroxy-C i -Ce-alkylgroep.

3. De verbinding of het farmaceutisch aanvaardbare zout volgens conclusie 1, waarin:

20 -A-B- -CH2-O- is R1 een hydroxylgroep is; R2,R3 en R4 onafhankelijk van elkaar een Ci-Cé-alkylgroep zijn; e m R en R onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom, een halogeenatoom of een Ci-Có-alkylgroep zijn; en r o 25. en R onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of een halogeenatoom zijn.

4. De verbinding volgens conclusie 1, die gekozen is uit (S)-(-)-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethyl-8-[(5-methyl-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-30 yl)amino[imidazo[l ,2-a]pyridine-6-carboxamide; (+)-8-(3,4-dihydro-2H-chromeen-4-ylamino)-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethyl-imi-dazo [ 1,2-a]pyridine-6-carboxamide; (S)-(-)-8-[(5,7-difluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-trimethylimidazo[l ,2-a]pyridine-6-carboxamide; en (-)-8-[(5-fluor-3,4-dihydro-2H-chromeen-4-yl)amino]-3-(hydroxymethyl)-N,N-2-tri-methylimidazo[ 1,2-a]pyridine-6-carboxamide; 5 of een farmaceutisch aanvaardbaar zout hiervan.

5. Een farmaceutische samenstelling die de verbinding of het farmaceutisch aanvaardbare zout hiervan volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-4 en een farmaceutisch aanvaardbare drager omvat. 10

6. De farmaceutische samenstelling volgens conclusie 5, die verder een of meer andere farmacologisch actieve middelen omvat.

7. Toepassing van een verbinding met formule (I) of het farmaceutische aan-15 vaardbaar zout hiervan volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-4, voor de productie van een geneesmiddel voor de behandeling van een ziektetoestand die door een zuurpompremmende activiteit gemedieerd is.

8. Toepassing volgens conclusie 9, waarbij de ziektetoestand een maagdarm-20 ziekte, een maagslokdarmziekte, een maagslokdarm refluxziekte (GERD), een la- ryngofaryngeale refluxziekte, peptische zweer, maagzweer, twaalfVingerige darm-zweer, door NSAID ofwel niet-steroïdaal antiontstekingsmiddel geïnduceerde maagzweren, gastritis, infectie van Helicobacter pylori, dyspepsie, functionele dyspepsie, syndroom van Zollinger-Ellison, niet erosieve refluxziekte (NERD), viscerale pijn, 25 kanker, maagzuur, misselijkheid, esofagitis, dysfagia, hypersalivatie, aandoeningen van de luchtwegen of astma. 2000532