NO164844B - Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr. - Google Patents

Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr. Download PDF

Info

Publication number
NO164844B
NO164844B NO884721A NO884721A NO164844B NO 164844 B NO164844 B NO 164844B NO 884721 A NO884721 A NO 884721A NO 884721 A NO884721 A NO 884721A NO 164844 B NO164844 B NO 164844B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
procedure
concentration
extract
enzymes
accordance
Prior art date
Application number
NO884721A
Other languages
English (en)
Other versions
NO884721D0 (no
NO164844C (no
NO884721L (no
Inventor
Even Stenberg
Ragnar Olsen
Erling Sandsdalen
Karl A Almaas
Original Assignee
Norsk Hydro As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Norsk Hydro As filed Critical Norsk Hydro As
Priority to NO884721A priority Critical patent/NO164844C/no
Publication of NO884721D0 publication Critical patent/NO884721D0/no
Priority to ZA897677A priority patent/ZA897677B/xx
Priority to EP19890310311 priority patent/EP0366296A3/en
Priority to US07/420,001 priority patent/US5061627A/en
Priority to NZ230985A priority patent/NZ230985A/xx
Priority to AU42982/89A priority patent/AU637584B2/en
Priority to CA002001242A priority patent/CA2001242A1/en
Priority to SU894742338A priority patent/RU1838406C/ru
Priority to DK524489A priority patent/DK524489A/da
Priority to IS3514A priority patent/IS3514A7/is
Priority to JP1273899A priority patent/JPH02171185A/ja
Priority to FI895025A priority patent/FI895025A7/fi
Publication of NO884721L publication Critical patent/NO884721L/no
Publication of NO164844B publication Critical patent/NO164844B/no
Publication of NO164844C publication Critical patent/NO164844C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

Fremgangsmåte ved utvinning av verdifulle bioaktive komponenter som f.eks. enzymene alkalisk fosfatase, hyaluronidase og chitinase fra krepsdyr, særlig reker, ved å ekstrahere disse med et vannbasert ekstraksjonsmedium og å underkaste ekstraksjonslaken følgende arbeidstrinn: rensing ved sentrifugering eller filtrering, oppkonsentrering, utfelling og fjerning av uønskede substanser, samt isolering av de ønskede komponenter.

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte ved utvinning av enzymer, som alkalisk fosfatase, fra krepsdyr (crustacea av Phylum Arthropoder), særlig reker.
Enzymer anvendes i høyren form ved forskning og analyse innen biokjemi og klinisk kjemi. Det foreligger et stadig økende -behov for enzymer i høyren form som utviser høy enzymaktivitet .
Det er kjent fra bl.a. DD-PS 246686 A, JP 78030784 B og JP 74043153 B å utvinne enzymer, slik som alkalisk fosfatase fra indre organer som kalvemage, tarmer og placenta, samt fra innmaten av kalvetarmer. Disse kjente fremgangsmåter krever kompliserte arbeidstrinn samt anvendelsen av relativt store mengder organiske løsningsmidler for å overføre enzymene i en vannoppløselig form. Dette gjør fremgangsmåtene kostnadsin-tensive og krever dessuten ytterligere arbeidstrinn for å rense brukte løsningsmidler slik at de kan resirkuleres.
Det er nå funnet at det på meget enkel og rimelig måte kan utvinnes høyrene enzymer fra krepsdyr, særlig reker, med tilsvarende god enzymaktivitet som kommersielt tilgjengelige produkter. Dette baserer seg på at det er funnet overraskende høye enzymkonsentrasjoner av f.eks. alkalisk fosfatase, hyaluronidase og chitinase i laker som fremkommer ved ekstraksjon av krepsdyr. Det er funnet konsentrasjoner i stør-relsesorden 1,5-3,0 mg protein/ml lake i en lake som fremkommer ved vanlig tining av blokkfrosne ferske reker før videre-prosessering.
En fordel ved fremgangsmåten i hht. oppfinnelsen er at enzymene kan hentes ut av råmaterialet, dvs. krepsdyr ved enkel ekstraksjon med et ekstraksjonsmiddel som i det vesentlige er vann, slik at enzymene foreligger i oppløst form hvilket medfører at de kan isoleres på enkel og rimelig måte ved oppkonsentrering, utfelling og frafiltrering av uønskede substanser.
En annen fordel med fremgangsmåten i hht. oppfinnelsen er at det er mulig å arbeide med et meget lavt aktivitetstap for enzymene, slik at hovedmengden av enzymene som finnes i ekstraksjonslaken lar seg isolere ved denne fremgangsmåten.
En ytterligere fordel med fremgangsmåten i hht. oppfinnelsen er at det mulig å utvinne kommersielt verdifulle produkter fra et avfallsprodukt som eventuelt ellers måtte underkastes rensetrinn for å unngå en miljøforurensning.
En ytterligere fordel ved foreliggende oppfinnelse er at krepsedyrenes næringsverdi på ingen måte forringes.
Ved fremgangsmåten i hht. oppfinnelsen ekstraheres enzymene med i hovedsak vann fra ferskt eller konservert råstoff bestående av hele krepsdyr, særlig reker, eller hele deler derav. I hht. foreliggende fremgangsmåte underkastes ekstraksjonslaken et eller flere av de følgende arbeidstrinn en eller flere ganger i uavhengig rekkefølge: rensing, oppkonsentrering, utfelling og/eller fjerning av uønskede substanser samt isolering og eventuelt standarisering og stabilisering av de rensede enzymer. Ytterligere trekk ved foreliggende oppfinnelse vil fremgå av de vedlagte krav.
Det konserverte råstoff kan foreligge i frossen form (i blokk eller enkeltvis), kjemisk konservert f.eks.-, i saltlake, konservert ved fermentering, ensilering, tørking, bestråling
eller tilsetting av konserveringsmidler.
Fremgangsmåten i hht. oppfinnelsen kan utføres med et ekstraksjonsmiddel som i det vesentlige består av rent vann i 1-12 timer, i et temperaturområde fra 1-35°C. Det er foretruk-ket å arbeide i temperatur intervallet 10-25°C, særlig ved ca. 15°C.
Rensetrinnene omfatter grovrensing av den første ekstraksjonslaken for å fjerne uoppløst partikulært materiale f.eks. ved filtrering eller sentrifugering under dannelse av et råekstrakt, og finrensing av enzymene ved hjelp av kromato-grafiske teknikker som ionebytterkromatografi, affinitets-kromatografi, gelfiltrering eller liknende. Valg av benyttet metode vil avhenge av de enkelte enzymers biologiske og fysikalsk-kjemiske karakteristika.
Kolloidalt materiale kan fjernes fra råekstraktet ved tilsetning av filterhjelpemiddel, som f.eks. polyakrylamidbas-erte polykationer eller polyanioner, og ved utfelling og/ eller frafiltrering under dannelse av et klargjort ekstrakt.
Oppkonsentrering omfatter i hht. oppfinnelsen oppkonsentrering både av råekstrakt og klargjort ekstrakt og kan gjen-nomføres f.eks. ved membranfiltrering (cross flow filtering) eller inndamping ved redusert trykk. Det er hensiktsmessig å foreta oppkonsentrering flere ganger i løpet av utvinnings-prosessen og å gjennomføre en 1-50 gangers oppkonsentrering hver gang.
For å fremstille standariserte enzymer med ønsket konsentrasjon og aktivitet kan det klargjorte ekstrakt eksempelvis underkastes diafiltrering/ultrafiltrering og hvis nødvendig også et rekromatograferingstrinn.
Det endelige produkt kan foreligge i fastfeller flytende form. Stabilisering av de rensede enzymene-i flytende form kan skje ved nedfrysing eller ved tilsetting av f.eks salter, syrer og/eller baser (for pH-justering) eller andre vanlige stabiliserende stoffer. Produktet kan overføres i fast form ved hjelp av vanlige tørkemetoder som eksempelvis frysetørk-ing.
For å fremstille et produkt med ønsket aktivitet pr. gram tørrstoff, tilsettes vanlig brukte fortynnere eller bærere.
Det skal i det følgende beskrives en foretrukken utførelses-form under henvisning til den vedlagte figur. Blokkfrosne ferske reker ekstraheres (1) i minst 8 timer med vann (temperatur 15°C). Det dannede ekstrakt underkastes en grovfiltrering (2) f.eks. på en roterende sil med poreåpning 0,5mm. Filtratet oppkonsentreres (3) 10 ganger.-i:et cross-flow-filtreringssystem. Hvis ønsket eller nødvendig fryses eller frysetørkes ekstraktet for mellomlagring-'(4) , og det må da tines eller oppløses og tempereres (5) før det kan videre-behandles. Partikulært materiale flokkuleres i en tank (6) under tilsetning av flokkuleringshjelpemiddel, eksempelvis polyakrylamidbasert polykation i en konsentrasjon på 0,1 g/liter ekstrakt, og det frafiltreres (7) deretter på filterpresse. Det klargjorte filtrat oppkonsentreres (8) igjen 10 ganger i et cross flow-filtreringssystem. Enzymene bindes til 10 liter Q-Sepharose i en kolonne (9) med et overflateareal på 500cm<2> med en hastighet på 8 l/time. Kolonnen er ekvilibrert med tris-HCl buffer (pH 7,2 , 1 mM MgCl2) . De ønskede enzymer elueres ned fra kolonnen med tris-HCl buffer tilsatt 0,1-0,5 M NaCl.
I det følgende skal oppfinnelsen belyses nærmere ved hjelp av noen eksempler:
Eksempel 1. Alkalisk fosfatase fra reke ( Pandalus borealis) 12 tonn reker ekstraheres med 2500 liter vann, temperatur 15°C i 8 timer. Det samlede proteininnhold i ekstraktet utgjør ca. 2,5 mg protein/ml. Innholdet av alkalisk fosfatase i dette ekstraktet er ca. 2,0 Units pr. mg. protein. Måle-metode er i hht. standardmetode der prinsippet er hydrolyse-hastigheten av p-nitrofenylfosfat i dietanolaminbuffer ved 37°C. (Ref. Mossner et al., Hoppe-Seyler Z. Physiol. Chem., 361.543 (1980)).
Ekstraktet grovfiltreres gjennom en roterende sil (Rotosieve) med poreåpning 0,5mm.
Filtratet konsentreres 10 ganger ved ultrafiltrering i et cross flow filtreringssystem med hollow fiber polysulfon cartridge med en molekylær cut off på 10 000 dalton. Denne oppkonsentrering foregår uten vesentlig aktivitetstap (mindre enn 10%). Sluttvolumet etter denne oppkonsentrering er ca. 250 liter.
Kolloidale partikler fjernes fra det konsentrerte ekstraktet ved direkte filtrering etter tilsats av et polyakrylamidbasert polykation. Det anvendes ca. 0,1 gram polykation/liter ekstrakt. Etter flokkulering og frafiltrering av de flokkulerte partikler på et rammefilter konsentreres det klargjorte ekstrakt ytterligere opp. En oppkonsentrering på 10 ganger i cross flow filtreringssystem med hollow fiber polysulfon cartridge med molekylær cut off på 10 000 dalton anvendes. Sluttvolumet etter denne oppkonsentrering er ca. 2 0 liter.
Alkalisk fosfatase bindes til 10 liter Q-Sepharose (fast flow) i en kolonne med overflateareal på ca. 500 cm<2> med en hastighet på 8 liter/time. Kolonnen er på forhånd ekvilibrert med tris-HCl buffer (pH 7,2 , ImM MgCl2) . Fremmedprotein elueres med tris-HCl buffer (pH 7,2 , ImM MgCl2) tilsatt 0,25M NaCl. Alkalisk fosfatase elueres med.<5> tilsvarende buffer tilsatt 0,4M NaCl. Eluatet inneholdene alkalisk fosfatase konsentreres til ønsket sluttkonsentrasjon og diafUt-reres deretter mot en 0,03M trietanolaminbuffer (pH 7,6, 3M NaCl, 0,001M ZnCl2) .
Eksempel 2. H<y>aluronidase fra reke ( Pandalus borealis)
12 tonn reker ekstraheres med 2500 liter vann med temperatur 15°C i 8 timer. Det samlede proteininnhold i ekstraktet er ca. 2,5mg/ml. Innholdet av hyaluronidase i dette ekstraktet er ca. 2,5 units/mg protein. Hyaluronidaseaktiviteten måles som reduksjon i turbiditet ved innkubering med hyaluronsyre og påfølgende tilsats av albumin. (Ref. Tolksdorf et.al., J.Lab.Clin.Med, 34, 74 (149)).
Ekstraktet grovfiltreres over en roterende sil med poreåpning 0,5mm. Filtratet konsentreres ca. 10 ganger ved ultrafiltrering i et cross flow filtreringssystem med hollow fiber polysulfon cartridge med en molekylær cut off på 10 000 dalton. Det skjer ikke vesentlig aktivitetstap over dette konsentreringstrinnet. Sluttvolumet etter oppkonsentreringen er 250 liter.
Kolloidale partikler fjernes fra det konsentrerte ekstraktet ved direkte filtrering etter tilsats av et polyakrylamidbasert polykation. Det anvendes ca. 0,1 gram filtreringshjel-pemiddel pr. liter ekstrakt. Etter flokkulering og frafiltrering av partiklene på filterpresse, konsentreres filtratet ytterligere 10 ganger i et cross flow filtreringssystem med hollow fiber polysulfon cartridge med en molekylær cut off på ca. 10 000 dalton. Sluttvolumet etter denne oppkonsentreringen er ca. 20 liter.
Hyaluronidase bindes til ca. 10 liter Q-Sepharose (fast flow) i en kolonne med et overflateareal på 500 cm<2> med en hastighet på 8 liter/time. Kolonnen er på forhånd ekvilibrert med tris-HCl buffer (pH 7,2, ImM MgCl2) .
Hyaluronidase elueres med tris-HCl buffer (pH 7,2, ImM MgCl2) tilsatt 0,2 5M NaCl. Eluatet som inneholder hyaluronidase oppkonsentreres til ønsket sluttkonsentrasjon og frysetørkes deretter.
Eksempel 3. Chitinase fra reke ( Pandalus borealis).
12 tonn reker ekstraheres med 2500 liter vann med temp. 15°C i 8 timer. Det samlede proteininnhold utgjør ca. 2,5mg
protein/ml ekstrakt. Innholdet av chitinase i dette ekstrakt er ca. 6-8 units/mg protein. Chitinase blir målt som frigjort N-acetyl-glucosamin etter spaltning av kolloidalt chitin med chitinase og N-acetyl-glucosaminidase (Ref. Kono et al., Bull. of the Jap. Soc.of Sci.Fish., 53 (1) 131-136 (1987)).
Ekstraktet grovfiltreres igjennom en roterende sil med poreåpning 0,5mm. Filtratet konsentreres ca. 10 ganger ved ultrafiltrering med en hollow fiber polysulfon cartridge med en molekylær cut off på 10 000 dalton. Det skjer ikke vesentlig aktivitetstap over oppkonsentreringstrinnet. Sluttvolumet etter oppkonsentrering er på ca. 250 liter.
Kolloidale partikler fjernes fra det konsentrete ekstraktet ved direkte filtrering etter tilsats av et polyakrylamidbasert polykation. Det anvendes 0,1 gram filtrerhjelpemiddel pr. liter konsentrat. Etter flokkulering og frafiltrering av de flokkulerte partikler i en filterpresse, oppkonsentreres det klargjorte konsentrat ytterligere, ca. 10 ganger i et cross flow filtreringssystem med hollow fiber polysulfon cartridge med en molekylær cut off på ca. 10 000 dalton.
Sluttvolumet etter denne oppkonsentrering er på ca 2 0 liter.
Chitinase bindes til 10 liter Q-Sepharose (fast flow) i en kolonne med overflateareal pa ca. 500 cm med en hastighet på 8 liter/time. Kolonnen er på forhånd evilibrert med tris-HCl buffer (pH 7,2, ImM MgCl2) . Chitinase elueres med tris-HCl buffer (pH 7,2, ImM MgCl2) over en saltgradient fra 0,1-0,5M NaCl. Eluatet som innholder chitinase konsentreres til ønsket sluttkonsentrasjon og frysetørkes.

Claims (8)

1. Fremgangsmåte ved utvinning av enzymer, karakterisert ved å ekstrahere et ferskt eller konservert råstoff bestående av hele krepsdyr (crustacea av phylum arthropoder), og/eller hele deler derav i 1-12 timer med et ekstraksjonsmedium som i det vesentlige består av vann, ved en temperatur i området 1-35°C, særlig 10-25°C, og å underkaste den derved dannede ekstraksjonslake et eller flere av de følgende arbeidstrinn en eller flere ganger i uavhengig rekkefølge: rensing ved filtrering, sentrifugering eller kromatografi, oppkonsentrering, utfelling og/eller fjerning av uønskede substanser, isolering, standarisering og stabilisering av de rensede enzymer.
2 . Fremgangsmåte i hht. krav 1, karakterisert ved å ekstrahere reker.
3. Fremgangsmåte i hht. krav 1 eller 2, karakterisert ved å ekstrahere blokkfrosne, ferske reker slik at disse tines.
4 . Fremgangsmåte i hht. krav 3, karakterisert ved å gjennomføre ekstraksjonen i 8 timer, med vann som har en en temperatur på 15°C.
5 . Fremgangsmåte i hht. krav 4, karakterisert ved å underkaste ekstraktet som kan ha vært frysetørket eller frossent for mellomlagring, de følgende arbeidstrinn i denne rekkefølge: grovfiltrering på roterende sil med pore-størrelse 0,5mm, oppkonsentrering 1-20 ganger, særlig 10 ganger, i et cross flow filtreringssystem, tilsetning av filtrerhjelpemiddel, særlig polyakrylamidbasert polykation i en størrelsesorden på 0,05-0,15 gram/liter ekstakt, særlig 0,1 gram/liter ekstrakt, filtrering på en filterpresse, oppkonsentrering 1-50 ganger, særlig 10 ganger, i et cross flow filtreringssystem, kolonnekromatografisk isolering av de bioaktive komponenter.
6. Fremgangsmåte i hht. et av kravene 1-5, karakterisert ved at enzymet alkalisk fosfatase utvinnes.
7. Fremgangsmåte i hht et av kravene 1-6, karakterisert ved at enzymet hyaluronidase utvinnes.
8. Fremgangsmåte i hht et av kravene 1-6, karakterisert ved at enzymet chitinase utvinnes.
NO884721A 1988-10-24 1988-10-24 Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr. NO164844C (no)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO884721A NO164844C (no) 1988-10-24 1988-10-24 Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr.
ZA897677A ZA897677B (en) 1988-10-24 1989-10-09 Method for the preparation of a biologically active substance
EP19890310311 EP0366296A3 (en) 1988-10-24 1989-10-09 Method for the preparation of a biologically active substance
US07/420,001 US5061627A (en) 1988-10-24 1989-10-11 Method for preparing enzymes from crustaceans
NZ230985A NZ230985A (en) 1988-10-24 1989-10-12 Extracting biologically active compounds from crustacea
AU42982/89A AU637584B2 (en) 1988-10-24 1989-10-18 Method for the preparation of a biologically active substance
FI895025A FI895025A7 (fi) 1988-10-24 1989-10-23 Menetelmä biologisesti aktiivisen aineen valmistamiseksi
CA002001242A CA2001242A1 (en) 1988-10-24 1989-10-23 Method for the preparation of a biologically active substance
SU894742338A RU1838406C (ru) 1988-10-24 1989-10-23 Способ получени биологически активных компонентов
DK524489A DK524489A (da) 1988-10-24 1989-10-23 Fremgangsmaade til fremstilling af biologisk aktive forbindelser, specielt enzymer
IS3514A IS3514A7 (is) 1988-10-24 1989-10-23 Aðferð til að vinna líffræðilega virk efni
JP1273899A JPH02171185A (ja) 1988-10-24 1989-10-23 生理活性物質の調製方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO884721A NO164844C (no) 1988-10-24 1988-10-24 Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr.

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO884721D0 NO884721D0 (no) 1988-10-24
NO884721L NO884721L (no) 1990-04-25
NO164844B true NO164844B (no) 1990-08-13
NO164844C NO164844C (no) 1990-11-21

Family

ID=19891357

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO884721A NO164844C (no) 1988-10-24 1988-10-24 Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr.

Country Status (12)

Country Link
US (1) US5061627A (no)
EP (1) EP0366296A3 (no)
JP (1) JPH02171185A (no)
AU (1) AU637584B2 (no)
CA (1) CA2001242A1 (no)
DK (1) DK524489A (no)
FI (1) FI895025A7 (no)
IS (1) IS3514A7 (no)
NO (1) NO164844C (no)
NZ (1) NZ230985A (no)
RU (1) RU1838406C (no)
ZA (1) ZA897677B (no)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0691819B2 (ja) * 1991-05-27 1994-11-16 工業技術院長 デアセチラーゼの製造方法
CA2180826A1 (en) 1994-01-13 1995-07-20 Richard J. Ii Stoner Organic disease control system
GB2293824B (en) * 1994-10-04 1998-11-18 Ashok Meluttukez Krishnapillai Extraction and purification of hyaluronidase from crustacean waste
US5866120A (en) * 1995-11-22 1999-02-02 Advanced Corneal Systems, Inc. Method for accelerating clearance of hemorrhagic blood from the vitreous humor with hyaluronidase
US6610292B2 (en) 1995-11-22 2003-08-26 Ista Pharmaceuticals, Inc. Use of hyaluronidase in the manufacture of an ophthalmic preparation for liquefying vitreous humor in the treatment of eye disorders
US5998173A (en) * 1996-02-20 1999-12-07 The University Of Bristish Columbia Process for producing N-acetyl-D-glucosamine
AU3180499A (en) * 1998-02-17 1999-08-30 Trustees Of Tufts University Natural products from terrestrial and marine sources, and drug discovery based thereon
JP2002506013A (ja) 1998-03-09 2002-02-26 イスタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 酵素角膜矯正術における角膜硬化剤の使用
MXPA03011987A (es) 2003-12-19 2005-06-23 Osio Sancho Alberto Metodo para el tratamiento de la presbicia induciendo cambios en el poder y fisiologia corneal.
ES2994608T3 (en) 2012-08-10 2025-01-27 Osio Corp D/B/A Yolia Health Contact lens use in the treatment of an ophthalmologic condition

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3075886A (en) * 1960-09-19 1963-01-29 Baxter Laboratories Inc Purification of enzymes
JPS59501908A (ja) * 1982-10-25 1984-11-15 ヘルグレン・ラルス・グスタ−ヴ・インゲ クリーニング用酵素組成物
SE454566B (sv) * 1984-04-24 1988-05-16 Lars G I Hellgren Farmaceutisk komposition innehallande en verksam mengd av vattenlosliga proteinaser som extraherats fran ett vattenlevande djur valt av ordningen euphausiaceae eller slektet mallotus
SE456245B (sv) * 1986-07-09 1988-09-19 Pharmacia Ab Enzympreparation innehallande krillhyaluronidas

Also Published As

Publication number Publication date
AU637584B2 (en) 1993-06-03
EP0366296A2 (en) 1990-05-02
FI895025A7 (fi) 1990-04-25
ZA897677B (en) 1990-07-25
NO884721D0 (no) 1988-10-24
NO164844C (no) 1990-11-21
NZ230985A (en) 1991-09-25
RU1838406C (ru) 1993-08-30
DK524489D0 (da) 1989-10-23
JPH02171185A (ja) 1990-07-02
NO884721L (no) 1990-04-25
CA2001242A1 (en) 1990-04-24
EP0366296A3 (en) 1991-09-11
US5061627A (en) 1991-10-29
FI895025A0 (fi) 1989-10-23
IS3514A7 (is) 1990-04-25
AU4298289A (en) 1990-04-26
DK524489A (da) 1990-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2198317C (en) Method for preparing pancreatin which contains low amounts of residual organic solvent and product thereof
US4623723A (en) Process for separating ribonucleic acids from a solution containing deoxyribonucleic acids
US5061627A (en) Method for preparing enzymes from crustaceans
US20060014256A1 (en) Sodium chondroitin sulfate, chondroitin-sulfate-containing material and processes for producing the same
Kučera Fungal mycelium—the source of chitosan for chromatography
US2808362A (en) Preparation of hyaluronidase
EP0273076A1 (en) Process for preparing L-rhamnose
US4552845A (en) Method for separating lysozyme from egg-white
KR102580940B1 (ko) 연어과 어류의 살로부터 고순도 디엔에이의 추출 방법
US6080844A (en) Process for the recovery and purification of a recombinant protein from a cell
US12325868B2 (en) Purified fish proteases with high specific activities and its process of production
CA1221046A (en) Method for separating lysozyme from egg-white
US4315923A (en) Process for the production of organ extracts with high herparin content
CN116439360A (zh) 一种延绳钓金枪鱼血合肉多功能营养素的提取方法
RU2280076C1 (ru) Ферментный препарат из гепатопанкреаса промысловых видов крабов и способ его получения
US3623955A (en) Purification and recovery of alkaline protease using cationic-exchange resin
DE1927517A1 (de) Verfahren zur Gewinnung und Reinigung von L-Asparaginase
US2954321A (en) Process for preparing heparin
RU2067868C1 (ru) Способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота
RU2265052C2 (ru) Способ получения препарата коллагеназы
JP2003092996A (ja) イミダゾールジペプチド類含有組成物の製造方法
JPH02286082A (ja) キチン分解酵素の分離精製方法
JPS61181394A (ja) リボ核酸の単離取得方法
SU843915A1 (ru) Способ получени суммарного гистонаиз жиВОТНОгО СыРь
RU2269913C1 (ru) Способ получения хитина