JPH02171185A - 生理活性物質の調製方法 - Google Patents
生理活性物質の調製方法Info
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- JPH02171185A JPH02171185A JP1273899A JP27389989A JPH02171185A JP H02171185 A JPH02171185 A JP H02171185A JP 1273899 A JP1273899 A JP 1273899A JP 27389989 A JP27389989 A JP 27389989A JP H02171185 A JPH02171185 A JP H02171185A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
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- C12N9/14—Hydrolases (3)
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
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- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生理活性物質例えば甲殼類（節足動物門の）、
特に子エビ類から抽出されたアルカリ性ホスファターゼ
のような酵素類の調製方法に関する。
特に子エビ類から抽出されたアルカリ性ホスファターゼ
のような酵素類の調製方法に関する。
最高純度の酵素類が生化学または臨床化学において研究
及び分析のために使用されている。すなわち、強い酵素
活性をもつ高純度の酵素の需要が急速に増加している。
及び分析のために使用されている。すなわち、強い酵素
活性をもつ高純度の酵素の需要が急速に増加している。
子牛の腹部、消化管及び胎盤から、及び子牛の腸の内容
物からアルカリ性ホスファターゼのような酵素を抽出す
ることはＤＤ−ＰＳ ５２４６６８６＾、特開昭５３−
３０７８４号及び特開昭４９−４３１５３号他から既知
である。前記特許明細書に記載された方法は非常に複雑
な操作及び酵素を水溶液へ移行させるために比較的多量
の有機溶媒を必要とする。これは上述の操作を高価なも
のにし且つ該溶媒を再循環するためには該有機溶媒を精
製するための付加的な作業を必要とする。
物からアルカリ性ホスファターゼのような酵素を抽出す
ることはＤＤ−ＰＳ ５２４６６８６＾、特開昭５３−
３０７８４号及び特開昭４９−４３１５３号他から既知
である。前記特許明細書に記載された方法は非常に複雑
な操作及び酵素を水溶液へ移行させるために比較的多量
の有機溶媒を必要とする。これは上述の操作を高価なも
のにし且つ該溶媒を再循環するためには該有機溶媒を精
製するための付加的な作業を必要とする。
高純度の酵素が甲殼類、特に子エビ類から簡単且つ安価
な操作により抽出することができ、商業的に入手できる
生成物類と同等の高酵素活性をもつ生成物類が得られる
ことを今般見出した。これは、例えばアルカリ性ホスフ
ァターゼ類、ヒアルロニダーゼ及びキチナーゼの非常に
高い酵素濃度が甲殼類の抽出から得られたブライン中に
観察されるという事実に基づくものである。ブラインｌ
ｌ１ｌ１当たり１．５〜３．０＋ｎｙの範囲の濃度が更
に処理する前の凍結子エビブロックの通常の溶融により
生ずるブライン中に観察される。
な操作により抽出することができ、商業的に入手できる
生成物類と同等の高酵素活性をもつ生成物類が得られる
ことを今般見出した。これは、例えばアルカリ性ホスフ
ァターゼ類、ヒアルロニダーゼ及びキチナーゼの非常に
高い酵素濃度が甲殼類の抽出から得られたブライン中に
観察されるという事実に基づくものである。ブラインｌ
ｌ１ｌ１当たり１．５〜３．０＋ｎｙの範囲の濃度が更
に処理する前の凍結子エビブロックの通常の溶融により
生ずるブライン中に観察される。
本発明方法による１つの利点は、生物活性化合物が原料
すなわち甲殼類から水性溶離液を使用する簡単な抽出に
より単離することができ、その結果、生物活性成分は溶
質状態で存在することができることにあり、すなわち該
成分は濃縮、抽出及び沢過した不純物を除去することに
より単離できることを暗示するものである。
すなわち甲殼類から水性溶離液を使用する簡単な抽出に
より単離することができ、その結果、生物活性成分は溶
質状態で存在することができることにあり、すなわち該
成分は濃縮、抽出及び沢過した不純物を除去することに
より単離できることを暗示するものである。
本発明方法の第２の利点は、生物活性成分について非常
に低い活性損失をもつ作業を可能にすることにあり、そ
の結果、生物活性成分の主要量をブラインから単離する
ことができる。
に低い活性損失をもつ作業を可能にすることにあり、そ
の結果、生物活性成分の主要量をブラインから単離する
ことができる。
本発明方法の更なる利点は、廃棄物から商業的に価値の
ある生成物を抽出できることにあり、さもなければ該廃
棄物は最後には環境汚染を回避するために処理しなけれ
ばならない。
ある生成物を抽出できることにあり、さもなければ該廃
棄物は最後には環境汚染を回避するために処理しなけれ
ばならない。
池の利点は、甲殼類の栄養価を維持できることにある。
有用な物質は、甲殻網、主として子エビ類の新鮮な原料
または保存されている原料並びにそれらの１部または製
品から水性溶離液を使用して抽出することによる本発明
により単離される。抽出物ブラインは本発明による下記
の工程の１種または数種により１回または数回にわたり
自由な順番で処理することができる：精製工程、ｆｉ縮
工程、抽出工程及び／または所望でない物質の除去工程
及び単離工程、及び可能であれば精製済生物活性物質の
標定及び安定化。本発明の他の特徴は特許請求の範囲の
記載から明らかであろう。
または保存されている原料並びにそれらの１部または製
品から水性溶離液を使用して抽出することによる本発明
により単離される。抽出物ブラインは本発明による下記
の工程の１種または数種により１回または数回にわたり
自由な順番で処理することができる：精製工程、ｆｉ縮
工程、抽出工程及び／または所望でない物質の除去工程
及び単離工程、及び可能であれば精製済生物活性物質の
標定及び安定化。本発明の他の特徴は特許請求の範囲の
記載から明らかであろう。
保存されている原料はブロック状またはばら状で入手可
能な凍結物、例えばブライン中で化学的に保存されたも
の、発酵法、嫌気性発酵貯蔵法（ｅｎｓｉｌａＬｉｏｎ
）、乾燥法、照射法または保存剤の添加により保存され
たものであることができる。
能な凍結物、例えばブライン中で化学的に保存されたも
の、発酵法、嫌気性発酵貯蔵法（ｅｎｓｉｌａＬｉｏｎ
）、乾燥法、照射法または保存剤の添加により保存され
たものであることができる。
本発明による抽出は、単離される生成物により０〜１０
０℃の温度範囲及び１〜１４のｐＨ範囲の水性溶媒、特
に清浄な水を使用して行うことができる。最適な温度及
びｐＨは１５℃及びｐＨ８，１である。
０℃の温度範囲及び１〜１４のｐＨ範囲の水性溶媒、特
に清浄な水を使用して行うことができる。最適な温度及
びｐＨは１５℃及びｐＨ８，１である。
精製工程は、粗抽出物を得るために例えば濾過または遠
心分離により不溶性粒子を除去するための第１抽出済ブ
ラインの第１の粗い濾過工程、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティクロマトグラフィー、ゲル濾過ク
ロマトグラフィー等のようなりロフトグラフ法を使用す
ることによる生物活性成分の第２の精密精製工程よりな
る。遭択される方法は個々の巨大分子の特異的な生物学
的特性及び生理化学的特性に依存するであろう。
心分離により不溶性粒子を除去するための第１抽出済ブ
ラインの第１の粗い濾過工程、イオン交換クロマトグラ
フィー、アフィニティクロマトグラフィー、ゲル濾過ク
ロマトグラフィー等のようなりロフトグラフ法を使用す
ることによる生物活性成分の第２の精密精製工程よりな
る。遭択される方法は個々の巨大分子の特異的な生物学
的特性及び生理化学的特性に依存するであろう。
コロイド状物質はポリアクリルアミドを主体とするポリ
カチオン類またはポリアニオン類のような濾過助剤を添
加し、抽出及び／または濾過することにより原料から除
去することにより最終抽出物が得られる。
カチオン類またはポリアニオン類のような濾過助剤を添
加し、抽出及び／または濾過することにより原料から除
去することにより最終抽出物が得られる。
本発明方法による処理工程は、例えばＷＡ濾過（十字流
濾過）による行うことができる粗抽出物及び最終抽出物
の濃縮または減圧下での濃縮よりなる。
濾過）による行うことができる粗抽出物及び最終抽出物
の濃縮または減圧下での濃縮よりなる。
単離操作中に数回にわたり濃縮工程を反復し且つ各工程
において生物活性物質を１〜５０倍濃縮することが有用
である。
において生物活性物質を１〜５０倍濃縮することが有用
である。
所望の濃度及び活性の標定済生物活性生成物を遺るため
に、最終抽出物は例えばダイヤ−過（ｄｉａｆｉｌｔｒ
ａｔｉｏｎ）／限外濾過により処理することができ、ま
た、必要であれば更にクロマトグラフ工程により処理す
ることができる。
に、最終抽出物は例えばダイヤ−過（ｄｉａｆｉｌｔｒ
ａｔｉｏｎ）／限外濾過により処理することができ、ま
た、必要であれば更にクロマトグラフ工程により処理す
ることができる。
最終生成物は固体または液体として利用することができ
る。液体の精製済生物活性生成物の安定化は凍結するか
、または例えば塩類、酸類及び／または塩基（ｐＨを調
節するため）または他の通常使用されている安定化剤を
添加することにより行うことができる。生成物は例えば
凍結乾燥のような通常使用されている乾燥操作により固
体状官へ移行させることができる。
る。液体の精製済生物活性生成物の安定化は凍結するか
、または例えば塩類、酸類及び／または塩基（ｐＨを調
節するため）または他の通常使用されている安定化剤を
添加することにより行うことができる。生成物は例えば
凍結乾燥のような通常使用されている乾燥操作により固
体状官へ移行させることができる。
固体１ｇ当たり所望の活性をもつ生成物を製造するため
に、通常使用されるタイプのシンナーまたはキャリアを
添加する。
に、通常使用されるタイプのシンナーまたはキャリアを
添加する。
本発明の好適な実施態様を添付第１図を使用して更・に
詳細に説明する。ブロック状の凍結した新鮮な子エビ類
を水（ｐＨ８，１、温度１５℃）を用いて少なくとも８
時間抽出する（１）。形成された抽出液を粗い濾過例え
ば０．５ｍｍの開口部をもつ回転ストレーナにより処理
する（２）。該抽出液を十字流濾過システムにおいて１
０倍に濃縮する（３）。必要であるか、または所望の場
合には、抽出液を中間貯蔵（４）のために凍結または凍
結乾燥することができる。抽出物を凍結する場合には、
更に処理する前に抽出物を溶解し且つ調質しなければな
らない（５）。凝集剤例えば抽出物１ｌ当たり０．１ｇ
の濃度でポリアクリルアミドを主体とするポリカチオン
を添加することによりタンク（６）中に粒子を凝集させ
、フィルタープレスを使用することによりろ過する（７
）、透明な炉液を十字流Ｖ過システム中で１０倍に濃縮
する（８）。酵素を５００ ｃｍ”の表面積と８１７時
間の速度をもつカラム（９）において１０リットルＱ−
セファロースへ固定する。カラムはトリス−ＨＣ１ｍｍ
液液ｐＨ７，２，１ミリモルＭｇＣＺｚ）により平衡化
されている。所望の酵素を０．１〜０，５モルのＮａＣ
ｅを添加したトリス−ＨＣｌを用いてカラムから溶離す
る。
詳細に説明する。ブロック状の凍結した新鮮な子エビ類
を水（ｐＨ８，１、温度１５℃）を用いて少なくとも８
時間抽出する（１）。形成された抽出液を粗い濾過例え
ば０．５ｍｍの開口部をもつ回転ストレーナにより処理
する（２）。該抽出液を十字流濾過システムにおいて１
０倍に濃縮する（３）。必要であるか、または所望の場
合には、抽出液を中間貯蔵（４）のために凍結または凍
結乾燥することができる。抽出物を凍結する場合には、
更に処理する前に抽出物を溶解し且つ調質しなければな
らない（５）。凝集剤例えば抽出物１ｌ当たり０．１ｇ
の濃度でポリアクリルアミドを主体とするポリカチオン
を添加することによりタンク（６）中に粒子を凝集させ
、フィルタープレスを使用することによりろ過する（７
）、透明な炉液を十字流Ｖ過システム中で１０倍に濃縮
する（８）。酵素を５００ ｃｍ”の表面積と８１７時
間の速度をもつカラム（９）において１０リットルＱ−
セファロースへ固定する。カラムはトリス−ＨＣ１ｍｍ
液液ｐＨ７，２，１ミリモルＭｇＣＺｚ）により平衡化
されている。所望の酵素を０．１〜０，５モルのＮａＣ
ｅを添加したトリス−ＨＣｌを用いてカラムから溶離す
る。
以下、実施例により本発明を更に説明する。
実施例１
子エビ類１２トンをｐＨ８，１、温度１５℃で８時間に
わたり水２５００１を用いて抽出する。
わたり水２５００１を用いて抽出する。
抽出液中の合計蛋白質含量は約２．５ｍｇ蛋白質／Ｉ１
ｌである。この抽出液中のアルカリ性ホスファターゼの
レベルは蛋白質１＋ｕ当たり約２．０単位である。ｉ定
法は、３７℃でジェタノールアミン緩衝液中でのｐ−ニ
トロフェニルホスフェートの加水分解速度を測定するこ
とからなる標準法によるものである［参考文献：モスナ
ー（Ｍｏｓｓｎｅｒ）らの１ｌｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ
２． Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、３６１．５
４３（１９８０）］。
ｌである。この抽出液中のアルカリ性ホスファターゼの
レベルは蛋白質１＋ｕ当たり約２．０単位である。ｉ定
法は、３７℃でジェタノールアミン緩衝液中でのｐ−ニ
トロフェニルホスフェートの加水分解速度を測定するこ
とからなる標準法によるものである［参考文献：モスナ
ー（Ｍｏｓｓｎｅｒ）らの１ｌｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ
２． Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、３６１．５
４３（１９８０）］。
抽出液は０．５＋ｌｌ＋＊の開口をもつ回転ふるい［口
１−シーブ（ＲｏＬｏｓｉｅｖｅ）］を使用して粗い濾
過を行った。
１−シーブ（ＲｏＬｏｓｉｅｖｅ）］を使用して粗い濾
過を行った。
Ｐ液を１００００ダルトンの分子分画能をもつポリスル
ホンＩＰ筒の中空繊維を備える十字流濾過システム中で
の限外濾過により１０倍濃縮する。この濃縮は活性の重
大な損失なしに（１０％以下）ｆ３られる。前記濃縮後
の体積は約２５０１である。
ホンＩＰ筒の中空繊維を備える十字流濾過システム中で
の限外濾過により１０倍濃縮する。この濃縮は活性の重
大な損失なしに（１０％以下）ｆ３られる。前記濃縮後
の体積は約２５０１である。
ポリアクリルアミドを主体とするポリカチオンを添加し
た後、直接濾過により濃縮済抽出液からコロイド粒子を
除去する。抽出物１２当たり約０．１ｇのポリカチオン
を使用する。フレームフィルターを使用することによる
凝集済粒子の凝集及び−過の後、最終抽出液を更に：ａ
縮する。１００００ダルトンの分子分画能をもつ中空繊
維ポリスルホンＰｍを備えてなる十字流濾過システム中
で１０倍に第２ｆ！４縮を行う。この最終濃縮の後の本
漬は約２０１である。
た後、直接濾過により濃縮済抽出液からコロイド粒子を
除去する。抽出物１２当たり約０．１ｇのポリカチオン
を使用する。フレームフィルターを使用することによる
凝集済粒子の凝集及び−過の後、最終抽出液を更に：ａ
縮する。１００００ダルトンの分子分画能をもつ中空繊
維ポリスルホンＰｍを備えてなる十字流濾過システム中
で１０倍に第２ｆ！４縮を行う。この最終濃縮の後の本
漬は約２０１である。
アルカリ性ホスファターゼを約５０００ａＡ２の表面積
と８１／時間の速度をもつカラム中で１０１のＱ−セフ
ァロース（連続流）へ固定する。カラムはトＩＪス−Ｈ
Ｃ１［ＷＩ液（ｐ Ｈ７，２、Ｍ ｇＣ（１２１ミリモ
ル添加）により平衡化されている。０．２５モルＮａＣ
１を添加したトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７，２，１ミ
リモルＭｇＣ４’２）で所望でない蛋白質を溶離する。
と８１／時間の速度をもつカラム中で１０１のＱ−セフ
ァロース（連続流）へ固定する。カラムはトＩＪス−Ｈ
Ｃ１［ＷＩ液（ｐ Ｈ７，２、Ｍ ｇＣ（１２１ミリモ
ル添加）により平衡化されている。０．２５モルＮａＣ
１を添加したトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７，２，１ミ
リモルＭｇＣ４’２）で所望でない蛋白質を溶離する。
アルカリ性ホスファターゼを０．４モルのＮａＣ１を添
加した前記緩衝液により溶離する。アルカリ性ホスファ
ターゼ含有溶離液を所定の最終濃度へ濃縮し、次に、０
，０３モルのトリエタノールアミンＭｌ液（ｐＨ７，６
，３モルＮａＣ１，０，００１モルＺ ｎＣ／２）を使
用することによりダイヤ濾過を行う。
加した前記緩衝液により溶離する。アルカリ性ホスファ
ターゼ含有溶離液を所定の最終濃度へ濃縮し、次に、０
，０３モルのトリエタノールアミンＭｌ液（ｐＨ７，６
，３モルＮａＣ１，０，００１モルＺ ｎＣ／２）を使
用することによりダイヤ濾過を行う。
実施例２
子エビ１２１・ンをｐＨ８，１及び１５℃の温度で８時
間にわたり水２５００ｔ’で抽出する。この抽出液中の
全蛋白質含量は約２．５ｍｙ／１であり、この抽出液中
のヒアルロニダーゼのレベルは蛋白質１ｍｇ当たり約２
．５単位である。ヒアルロニダーゼのレベルは、アルブ
ミンを添加したヒアルロン酸を用いる培養による混濁度
の低下割合として測定した［参考文献：ホロクスドロフ
（Ｆｏｌｋｓｄｏｒｒ）らのＪ、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ
、 Ｍｅｄ、 ２４．７４（１４９）］。抽出液を０、
’ｚｎ＋ｎの開口をもつ回転ふるい上で■くＰ通した。
間にわたり水２５００ｔ’で抽出する。この抽出液中の
全蛋白質含量は約２．５ｍｙ／１であり、この抽出液中
のヒアルロニダーゼのレベルは蛋白質１ｍｇ当たり約２
．５単位である。ヒアルロニダーゼのレベルは、アルブ
ミンを添加したヒアルロン酸を用いる培養による混濁度
の低下割合として測定した［参考文献：ホロクスドロフ
（Ｆｏｌｋｓｄｏｒｒ）らのＪ、 Ｌａｂ、 Ｃｌ１ｎ
、 Ｍｅｄ、 ２４．７４（１４９）］。抽出液を０、
’ｚｎ＋ｎの開口をもつ回転ふるい上で■くＰ通した。
Ｐ液をｔｏｏｏｏダルトンの分子分画能を備えるポリス
ルホン洲筒の中空線ｔ、ｒｔを備えてなる十字流濾過シ
ステム中で限外濾過することにより約１０倍濃縮する。
ルホン洲筒の中空線ｔ、ｒｔを備えてなる十字流濾過シ
ステム中で限外濾過することにより約１０倍濃縮する。
この″ａ縮工程の後、活性の有意の低下はない。この工
程での生成物の最終体積は２５ＯＮである。
程での生成物の最終体積は２５ＯＮである。
ポリアクリルアミドを主体とするポリカチオンを添加し
た後、直接濾過により濃縮済抽出液からコロイド粒子を
除去する。抽出物１ｌ当たり約０．１ｌ１のｒ適用薬剤
を使用する。フィルタープレスによる粒子の′ａ集及び
除去の後、Ｐ？？！を約１００００ダルトンの分子分画
能をもつ中空繊維のポリスルホン洲筒を備えてなる十字
流濾過システム中で更に１０倍濃縮する。この濃縮工程
の後の最終体積は約２０１である。
た後、直接濾過により濃縮済抽出液からコロイド粒子を
除去する。抽出物１ｌ当たり約０．１ｌ１のｒ適用薬剤
を使用する。フィルタープレスによる粒子の′ａ集及び
除去の後、Ｐ？？！を約１００００ダルトンの分子分画
能をもつ中空繊維のポリスルホン洲筒を備えてなる十字
流濾過システム中で更に１０倍濃縮する。この濃縮工程
の後の最終体積は約２０１である。
ヒアルロニダーゼを５００ｍ２の表面積とｌ／時間の速
度をもつカラム中で約１０１のＱ−セファロースへ固定
する。カラムはトリス−ＨＣＩＭ、ｍ液（ｐＨ７，２，
１ミリモルＭ ｇｅ ｔ！２）により平衡化する。ヒア
ルロニダーゼは、０．２５モルＮａＣｅを添加したトリ
ス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７，２，１ミリモルＭｇＣ１２
）を用いて溶離する。
度をもつカラム中で約１０１のＱ−セファロースへ固定
する。カラムはトリス−ＨＣＩＭ、ｍ液（ｐＨ７，２，
１ミリモルＭ ｇｅ ｔ！２）により平衡化する。ヒア
ルロニダーゼは、０．２５モルＮａＣｅを添加したトリ
ス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７，２，１ミリモルＭｇＣ１２
）を用いて溶離する。
ヒアルロニダーゼを含有してなる溶離液を所定の最終濃
度へ濃縮し、次に、凍結乾燥する。
度へ濃縮し、次に、凍結乾燥する。
実施例３
子エビ類１２トンをｐＨ８，１及び１５℃の温度で水２
５００１中で抽出する。この抽出液中の合計蛋白質含量
は約２．５Ｂ蛋白質／ｍｅである。
５００１中で抽出する。この抽出液中の合計蛋白質含量
は約２．５Ｂ蛋白質／ｍｅである。
この抽出液中のキチナーゼのレベルは蛋白質１ｍｇ当た
りおよそ６〜８単位である。キチナーゼはコロイドキチ
ンをキチナーゼ及びＮ−アセチル−グルコサミニダーゼ
により分解した後に遊離したＮ−アセチルグルコサミン
として測定する［参考文献：コーン（Ｋｏｎ）らのＢｕ
ｌｌ、 ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐ、 Ｓｏｃ、 ｏｒＳｃ
ｉ、Ｆｉｓｈ、、５３（１）１３１〜１３６（１９８７
）］。
りおよそ６〜８単位である。キチナーゼはコロイドキチ
ンをキチナーゼ及びＮ−アセチル−グルコサミニダーゼ
により分解した後に遊離したＮ−アセチルグルコサミン
として測定する［参考文献：コーン（Ｋｏｎ）らのＢｕ
ｌｌ、 ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐ、 Ｓｏｃ、 ｏｒＳｃ
ｉ、Ｆｉｓｈ、、５３（１）１３１〜１３６（１９８７
）］。
抽出液を０．５ｍｍの開口をもつ回転ふるい上でＮ＜濾
過する。ｐ液を１００００ダルトンの分子分画能をもつ
中空繊維のポリスルホン洲筒での限外濾過により約１０
倍に濃縮する。このろ過工程中の活性の損失は低い。前
記濃縮工程の後の体積は約２５０ｒである。
過する。ｐ液を１００００ダルトンの分子分画能をもつ
中空繊維のポリスルホン洲筒での限外濾過により約１０
倍に濃縮する。このろ過工程中の活性の損失は低い。前
記濃縮工程の後の体積は約２５０ｒである。
ポリアクリルアミドを主体とするポリカチオンを添加し
た後、直接濾過により’ｔａ＝ｗＵ済抽出液からコロイ
ド粒子を除去する。
た後、直接濾過により’ｔａ＝ｗＵ済抽出液からコロイ
ド粒子を除去する。
抽出液１ｌ当たり０．１３の「過助剤を使用する。
凝集及びフィルタープレスによる粒子の除去後、Ｐ液を
十字流濾過システム中の約１ｏｏｏｏダルトンの分子分
画能をもつ中空繊維のポリスルホン炉筒で更に１０倍濃
縮する。前記濃縮後の最終木精は約２０１である。
十字流濾過システム中の約１ｏｏｏｏダルトンの分子分
画能をもつ中空繊維のポリスルホン炉筒で更に１０倍濃
縮する。前記濃縮後の最終木精は約２０１である。
キチナーゼを、５００Ｉｌ１２の表面積及び８１／時間
の速度をもつカラム中で１０１のＱ−セファロースへ固
定する。カラムはトリス−Ｉ−ＩＣＩＩＩ街液（ｐＨ７
，２，１ミリモルＭｇＣ１２）により平衡化する。キチ
ナーゼを０．１〜０．５モルＮａＣ１の範囲内の塩勾配
を使用することによるトリス−ＨＣ１緩所液（ｐＨ７，
２，１ミリモルＭｇＣ４’２）を用いて溶離する。キチ
ナーゼを含有してなる溶離液を所定の最終濃度へ濃縮し
、次に、′Ｗ、結乾燥する。
の速度をもつカラム中で１０１のＱ−セファロースへ固
定する。カラムはトリス−Ｉ−ＩＣＩＩＩ街液（ｐＨ７
，２，１ミリモルＭｇＣ１２）により平衡化する。キチ
ナーゼを０．１〜０．５モルＮａＣ１の範囲内の塩勾配
を使用することによるトリス−ＨＣ１緩所液（ｐＨ７，
２，１ミリモルＭｇＣ４’２）を用いて溶離する。キチ
ナーゼを含有してなる溶離液を所定の最終濃度へ濃縮し
、次に、′Ｗ、結乾燥する。
第１図は本発明の好適な実施態様を示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、生理活性成分類、主として酵素類の抽出方法におい
て、節足動物門の甲殼類よりなる新鮮な原料または保存
された原料、それらの１部及び／または生成物を水性抽
出剤により抽出し、上述のようにして形成された抽出ブ
ラインを、所望でない物質のろ過、遠心分離またはクロ
マトグラフによる精製、濃縮、抽出及び／または除去、
濃縮された生物活性成分類の単離、標定及び安定化より
なる１種または２種以上の操作により任意の順番で１回
または２回以上処理することを特徴とする生理活性成分
類、主として酵素類の抽出方法。 ２、子エビ類を抽出することからなる請求項１記載の方
法。 ３、抽出がブロック状の凍結した新鮮な子エビ類を溶解
することからなる請求項２記載の方法。 ４、１〜１２時間、好適には８時間にわたり、ｐＨ７〜
９、好適にはｐＨ８．１で、１０〜２５℃の温度、好適
には１５℃の温度で抽出を行い、凍結乾燥または凍結状
態で中間貯蔵してあってもよい抽出液を０．５ｍｍの開
口部をもつ回転ふるいで粗く濾過し、十字流ろ過システ
ム中で１〜２０倍、好適には１０倍濃縮し、ろ過助剤好
適には抽出物１ｌ当たり０．０５〜０．１５ｇ、好適に
は０．１ｇの濃度のポリアクリルアミドを主体とするポ
リカチオンを添加し、フィルタープレスを使用すること
によりろ過し、十字流ろ過システムにおいて１〜５０倍
、好適には１０倍濃縮し、生物活性成分類をカラムクロ
マトグラフにより単離することからなる請求項３記載の
方法。 ５、酵素アルカリ性ホスファターゼを抽出する請求項１
ないし４のいずれか１項記載の方法。 ６、酵素ヒアルロニダーゼを抽出する請求項１ないし４
のいずれか１項記載の方法。 ７、酵素キチナーゼを抽出する請求項１ないし４のいず
れか１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
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| NO884721 | 1988-10-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02171185A true JPH02171185A (ja) | 1990-07-02 |
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ID=19891357
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|---|---|---|---|
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| JP (1) | JPH02171185A (ja) |
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- 1989-10-09 ZA ZA897677A patent/ZA897677B/xx unknown
- 1989-10-11 US US07/420,001 patent/US5061627A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-10-12 NZ NZ230985A patent/NZ230985A/xx unknown
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