NO180787B - Reagens og fremgangsmåte for å bestemme minst en leukocytt subpopulasjon - Google Patents
Reagens og fremgangsmåte for å bestemme minst en leukocytt subpopulasjonInfo
- Publication number
- NO180787B NO180787B NO904963A NO904963A NO180787B NO 180787 B NO180787 B NO 180787B NO 904963 A NO904963 A NO 904963A NO 904963 A NO904963 A NO 904963A NO 180787 B NO180787 B NO 180787B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- reagent
- per liter
- concentration
- sodium
- final ratio
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 7
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- -1 alkylene glycol Chemical compound 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Natural products O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000003866 tertiary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 3
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003509 tertiary alcohols Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- NZYOAGBNMCVQIV-UHFFFAOYSA-N sodium;chloro-(4-methylphenyl)sulfonylazanide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 NZYOAGBNMCVQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 19
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 8
- ATFARZXNCCWOKJ-MGDYUOCISA-N Nc1ccc(\N=N\c2ccc(cc2)-c2ccc(cc2)\N=N\c2c(N)c3c(O)c(\N=N\c4ccccc4)c(cc3cc2S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)c(N)c1 Chemical compound Nc1ccc(\N=N\c2ccc(cc2)-c2ccc(cc2)\N=N\c2c(N)c3c(O)c(\N=N\c4ccccc4)c(cc3cc2S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)c(N)c1 ATFARZXNCCWOKJ-MGDYUOCISA-N 0.000 abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- DEXKHGVSCDMMLD-UHFFFAOYSA-N [ClH]1N=CC=C1 Chemical compound [ClH]1N=CC=C1 DEXKHGVSCDMMLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 2-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C(Cl)C=CC2=C1 WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-O Methylammonium ion Chemical compound [NH3+]C BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000003842 bromide salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 150000004694 iodide salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- XIVJNRXPRQKFRZ-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-yl butanoate Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)CCC)=CC=CC2=C1 XIVJNRXPRQKFRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 125000000075 primary alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011309 routine diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/101666—Particle count or volume standard or control [e.g., platelet count standards, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører reagens og fremgangsmåte for bestemmelse av minst én leukocyttsubpopulasjon ved anvendelse av flow-cytometri.
Disse og ytterligere trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravene.
Viktigheten av å bestemme nøyaktig de forskjellige leukocytt-populasjoner i forbindelse med å stille diagnoser, har lenge vært kjent. Tilfeller av abnormale leukocytt-forhold er forbundet med visse sykdommer (immunresponser, inflammatoriske reaksjoner, tilstedeværelse av neoplasma eller leukemi, osv.).
De tradisjonelle metoder for manuell analyse, omfattende fysisk separering av erytrocytter (ved sedimentering eller aggregering) og med påfølgende differensialfarging av cytoplasma og kjerner i leukocyttene og observering av deres morfologi under mikroskopet, har allerede gjort det mulig å identifisere alle typer leukocytter, dvs. granulocyttene (basofiler, eosinofiler og neutrofiler) og agranulocyttene (monocytt og lymfocytt). Disse metoder gir pålitelige resultater, men de er omstendelige, noe som gjør at de sjeldent kan overføres for anvendelse ved bestemmelser utført i automatisk apparatur, eller bare vanskelig kan anvendes slik.
Forskjellig appartur som gir automatisk telling av leukocytt-populasjoner er allerede på markedet, og forskjellige reagenser og fargestoffer er utviklet og tilpasset slik apparatur.
Det er f.eks. mulig å måle størrelsen på cellene (etter differensiell lyse av deres cytoplasma), enten ved å måle varia-sjoner i resistivitet eller ved å måle optisk diffraksjon. Det er også mulig å gjennomføre spesifikk farging (enzymatisk eller annen) av de forskjellige celletyper og måle størrelser og optisk tetthet for cellene ved forskjellige bølgelengder.
Et av problemene som opptrer i forbindelse med automatisering er muligheten for sammenblanding av erytrocytter og visse små leukocytter, noe som ikke skjer ved anvendelse av mikroskopi. Total lyse av erytrocyttene må således sikres før blodprøven føres gjennom apparatet, mens man samtidig beholder leukocyttenes integritet. I tillegg må reaksjonsblandingen omfatte ett eller flere reagenser som forenkler diskrimineringen mellom de forskjellige typer av leukocytter og deres grupper-ing i helt adskilte soner i et histogram.
WO 8505684 (Coulter Electronics Inc.) beskriver således en reagensgruppe som sikrer, i to trinn, den spesifikke lyse av erytrocyttene ved hjelp av saponin, med påfølgende fiksering (og derved beskyttelse) av leukocyttene ved hjelp av glutaraldehyd. I tillegg understøttes diskrimineringen mellom de forskjellige typer leukocytter ved tilsetning av et reagens som fenoksy-2-etanol. Visse populasjoner kan også farges spesifikt og identifiseres ved hjelp av fluorescens. Denne effektive, pålitelige, men omstendelige prosedyre er særlig passende for et apparat av typen Coulter Counter, som beskrevet i US patent 3,502,974.
Andre metoder som f.eks. beskrevet i US patent 3,740,143, som særlig er passende for apparater fra Technicon, omfatter gjennomføring av en rekke parallelle reaksjoner hvor hver påviser en celletype, idet en erytrocytt-lysebehandling og en eventuell leukocytt-fikseringsbehandling går forut for eller følger etter disse spesifikke reaksjoner. Disse reaksjoner omfatter konvensjonell histologisk farging (som "nøytral rød" for basofile celler) og enzymatisk farging (som påvisning av peroksydaseinnholdet i de eosinifile og neutrofile celler ved anvendelse av klornaftol eller lipaseinnholdet i monocyttene ved anvendelse av naftolbutyrat).
Generelt kan bare detaljerte, pålitelige analyser gjennomføres ved anvendelse av meget innviklet apparatur og metoder som omfatter en rekke forskjellige trinn, og ved anvendelse av forskjellige reagenser. På grunn av deres kompleksitet, er omkostningene i forbindelse med slike analyser svært høye, og når det gjelder rutine-diagnose, er det alltid ønskelig å forenkle prosedyrene, mens samme grad av diskriminering og pålitelighet beholdes.
Man har nå utviklet et reagens som, i én enkel reaksjon, gir lyse av erytrocyttene, beskyttende fiksering av leukocyttene og farging av de eosinofile celler, såvel som en svært effektiv separasjon av de forskjellige leukocytt-subpopula-sjoner på et histogram. Fremgangsmåten for anvendelse av reagenset i henhold til oppfinnelsen er meget rask og er passende for enhver type av automatiske telleapparater.
Foreliggende oppfinnelse vedrører således et reagens for bestemmelse av minst én leukocytt subpopulasjon i en automatisk flow-cytometri analysator, som er kjennetegnet ved at det omfatter følgende bestanddeler: minst ett erytrocytt-lysemiddel valgt fra saponinene og
natriumdodesylsulfat, alene eller i kombinasjon, idet saponinkonsentrasjonen er mellom 100 og 700 mg pr. liter reagens og/eller natriumdodesylsulfatkonsentrasjonen er
mellom 100 og 400 mg pr. liter reagens,
klorazol-sort i en konsentrasjonen på mellom 50 og 650 mg pr. liter reagens, og særlig mindre enn 100 mg pr. liter
reagens,
minst ett fysiologisk salt valgt fra natriumklorid,
natriumsulfat og natriumkarbonat, alene eller i blanding, for å holde pH mellom 7,0 og 12,0, idet konsentrasjonen av natriumklorid er mellom 1,3 og 9,5 g pr. liter reagens, konsentrasjonen av natriumsulfat er mellom 15 og 20 g pr. liter reagens og/eller konsentrasjonen av
natriumkarbonat er mellom 400 og 700 mg pr. liter
reagens,
minst ett tertiært eller kvaternært ammoniumsalt i et
sluttforhold fra 0,03 til 0,10 volum% av reagenset,
en alkohol valgt fra de primære, sekundære og tertiære alkoholer i et sluttforhold fra 2 til 13 volum% av reagenset,
et overflateaktivt middel som en polyoksyetylensorbitan-ester i vandig oppløsning i et sluttforhold fra 0,2 til 2
volum% av reagenset,
et konserveringsmiddel valgt fra glutaraldehyd og for-ma ldehyd i en vandig oppløsning i et sluttforhold fra 0,1
til 0,8 vekt% av reagenset,
en alkylenglykol valgt fra etylenglykol og propylenglykol
i et sluttforhold fra 2 til 13 vekt% av reagenset.
Reagenset i henhold til oppfinnelsen omfatter således på den ene side minst ett erytrocytt-lysemiddel valgt fra saponinene og natriumdodesylsulfat (SDS), og på den annen side, et middel som kan farge de forskjellige leukocyttpopulasjonene differensielt, som klorazol-sort i en konsentrasjon mellom 50 og 650 mg/l. De andre bestanddelene i reagenset som er utformet til å bibeholde cellenes naturlige integritet og morfologi og forbedre diskriminering av cellene ved optisk påvisning, omfatter således minst ett fysiologisk salt for å holde pH mellom 7,0 og 12,0, minst ett tertiært eller kvaternært ammoniumsalt, en primær, sekundær eller tertiær alkohol, et overflateaktivt middel, et middel som opprett-holder cellestrukturen og en alkylenglykol.
Klorazol-sort (også kjent som "Erie-black" eller "formic-black") er et vanlig reagens som siden 1937 er anvendt i forbindelse med planter (Cannon, H.G., Nature, 139,549) og det anvendes for spesifikk farging av eosinofile celler i forbindelse med mikroskopi. (Dette reagens og dets anvendelse er beskrevet av M. Piette, Ann. Biol. Clin. 1961, 19, 729-734 og K. Lawrence, Am. J. Clin. Pathol. 1981, 76, 810-812).
De vanlige betingelser for anvendelse av klorazol-sort
(650 mg/l) er overhodet ikke passende for påvisning med et automatisk fotodiode-apparat, da de eosinofile celler blir alt for sorte og de andre celler blir fullstendig gjennomsiktige. Nye betingelser for anvendelse er utviklet, hvor man samtidig reduserer reagenskonsentrasjonen ogøker temperaturen hvorved reaksjonen gjennomføres på blodprøven.
Reagenset i henhold til den foreliggende oppfinnelse inneholder således foretrukket en klorazol-sort konsentrasjon på mindre enn 100 mg/l. Man har under disse betingelser sett at eosinofile celler farges tydelig og videre at andre granulo-cytter fikseres og diskrimineres tydelig. Det forekommer en lett farging av alle leukocytt-populasjonene, men den forsvinner dersom varigheten av reaksjonen forlenges.
Idet man søker den beste balanse mellom de forskjellige bestanddeler av reagenset, har man merket seg at tilsetning av glutaraldehyd i en vandig oppløsning forbedret diskrimineringen mellom cellestørrelsene, når måling gjennomføres ved hjelp av resistivitet. Glutaraldehyd øker imidlertid størrelsen på stroma resulterende fra lysen av erytrocyttene. Dette kan fordelaktig korrigeres ved tilsetning av SDS, som akselererer nedbrytningen av erytrocyttene, i konsentrasjoner som ikke ødelegger leukocyttenes morfologi. Videre vil tilsetningen av et tertiært eller kvaternært ammoniumsalt ytterligere forbedre diskrimineringen mellom celle-subpopulasjonene og også bidra til nedbrytningen av erytrocytt-stroma. Dodesyltrimetyl-ammoniumklorid kan fordelaktig anvendes. Ekvivalente resultater oppnås med bromider og jodider, og likeledes kan det anvendes tertiære eller kvaternære salter, idet de fore-trukne er C12og C14alkylradikaler. Et dodesyldi (eller tri)metylammoniumhalogen (Cl, Br eller I) eller et tetra-desyldi(eller tri)metylammonium, alene eller sammen, vil således velges.
Reagenset ifølge den foreliggende oppfinnelse inneholder også et overflateaktivt middel som velges fra gruppen av polyoksy-etylensorbitanestere, og mer spesielt polyoksyetylensorbitan-monolaurat (Tween 20) og polyoksyetylensorbitanmonooleat (Tween 80).
Videre har tilsetningen av en alkylenglykol, som også har en bevarende virkning på cellestrukturene, fremfor alt en meget gunstig virkning i forbindelse med optisk avlesning, da den begrenser diffraksjonen av mediet.
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte for å bestemme minst én leukocytt subpopulasjon i en automatisk flow-cytometri analysator, som er kjennetegnet ved at den omfatter at: en blodprøve bringes i kontakt med det ovennevnte reagens
i et termostatstyrt kammer ved en temperatur mellom 2 0 og
80°C,
påvisning og diskriminering mellom leukocyttene gjennom-føres ved å måle variasjonene i resistivitet eller absorbans, eller ved en kombinasjon av begge,
disse målinger registeres i form av matrikser eller histogrammer som gir en visuell fremstilling av konturene som er representative for fordelingen av leukocytt subpopulasj onene.
Blodprøven som skal undersøkes bringes således i kontakt med reagenset i et termostatisk styrt kammer ved den ovennevnte temperatur, og foretrukket mellom 40 og 65°C, i en periode på mindre enn 20 sekunder.
For påvisningen og diskrimineringen mellom leukocytter ved målingen av variasjonene i absorbans eller resistivitet, eller en kombinasjon av begge, anvendes en passende analysator.
Figur 1 er et representativt histogram som er oppnådd ved å gjennomføre fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen med en prøve av normalt blod. På det nedre histogram (som er identisk med det øvre histogram) er sonene som tilsvarer de forskjellige populasjoner avgrenset: 1 - bakgrunnsstøy (stroma, plater, nedbrutt substans)
2 - lymfocytter
3 - basofile polynukleære celler
4 - monocytter
5 - neutrofile polynukleære celler
6 - eosinofile polynukleære celler
(OD = optisk tetthet, DC = likestrøms-resistivitet)
Det etterfølgende eksempel viser en utførelsesform av oppfinnelsen.
Eksempel
De etterfølgende konsentrasjoner for de forskjellige bestanddeler beregnes for fremstilling av en liter reagens:
Reagenset anvendes f.eks. i en analysator som den som er beskrevet i søkernes egen franske patentsøknad nr. 89.14120, men det kan anvendes på samme måte i enhver type av innretning for automatisk telling av leukocytt-populasjoner.
Apparatet innstilles til å bringe en prøve på 25 \ ll fullblod og 1 ml reagens i kontakt. Denne blanding dannes i et termostatstyrt kammer ved en temperatur mellom 40 og 65°C.
Et histogram som representerer en normal blodprøve er vist i figur 1.
Claims (3)
1. Reagens for bestemmelse av minst én leukocytt subpopulasjon i en automatisk flow-cytometri analysator, karakterisert ved at det omfatter følgende bestanddeler:
minst ett erytrocytt-lysemiddel valgt fra saponinene og
natriumdodesylsulfat, alene eller i kombinasjon, idet saponinkonsentrasjonen er mellom 100 og 700 mg pr. liter reagens og/eller natriumdodesylsulfatkonsentrasjonen er mellom 100 og 400 mg pr. liter reagens,
klorazol-sort i en konsentrasjonen på mellom 50 og 650 mg
pr. liter reagens, og særlig mindre enn 100 mg pr. liter reagens,
minst ett fysiologisk salt valgt fra natriumklorid,
natriumsulfat og natriumkarbonat, alene eller i blanding, for å holde pH mellom 7,0 og 12,0, idet konsentrasjonen av natriumklorid er mellom 1,3 og 9,5 g pr. liter reagens, konsentrasjonen av natriumsulfat er mellom 15 og 20 g pr. liter reagens og/eller konsentrasjonen av natriumkarbonat er mellom 400 og 700 mg pr. liter reagens,
minst ett tertiært eller kvaternært ammoniumsalt i et
sluttforhold fra 0,03 til 0,10 volum% av reagenset,
en alkohol valgt fra de primære, sekundære og tertiære
alkoholer i et sluttforhold fra 2 til 13 volum% av reagenset,
et overflateaktivt middel som en polyoksyetylensorbitan-
ester i vandig oppløsning i et sluttforhold fra 0,2 til 2 volum% av reagenset,
et konserveringsmiddel valgt fra glutaraldehyd og for-
maldehyd i en vandig oppløsning i et sluttforhold fra 0,1 til 0,8 vekt% av reagenset,
en alkylenglykol valgt fra etylenglykol og propylenglykol
i et sluttforhold fra 2 til 13 vekt% av reagenset.
2. Fremgangsmåte for å bestemme minst én leukocytt subpopulasjon i en automatisk flow-cytometri analysator, karakterisert ved at den omfatter at:
en blodprøve bringes i kontakt med reagenset som angitt i
krav 1 i et termostatstyrt kammer ved en temperatur mellom 2 0 og 80°C,
påvisning og diskriminering mellom leukocyttene gjennom-
føres ved å måle variasjonene i resistivitet eller absorbans, eller ved en kombinasjon av begge,
disse målinger registeres i form av matrikser eller
histogrammer som gir en visuell fremstilling av konturene som er representative for fordelingen av leukocytt subpopula-sjonene.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 2, karakterisert ved at blodet bringes i kontakt med reagenset i en periode på mindre enn 2 0 sekunder.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8915166A FR2654744B1 (fr) | 1989-11-20 | 1989-11-20 | Reactif et methode d'utilisation de celui-ci pour la determination automatique en cytometrie de flux d'au moins une sous-population leucocytaire a partir du sang total. |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO904963D0 NO904963D0 (no) | 1990-11-15 |
| NO904963L NO904963L (no) | 1991-05-21 |
| NO180787B true NO180787B (no) | 1997-03-10 |
| NO180787C NO180787C (no) | 1997-06-18 |
Family
ID=9387538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO904963A NO180787C (no) | 1989-11-20 | 1990-11-15 | Reagens og fremgangsmåte for å bestemme minst en leukocytt subpopulasjon |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5232857A (no) |
| EP (1) | EP0430750B1 (no) |
| JP (1) | JP2920690B2 (no) |
| KR (1) | KR100194407B1 (no) |
| AT (1) | ATE117803T1 (no) |
| AU (1) | AU634600B2 (no) |
| CA (1) | CA2030381C (no) |
| DE (1) | DE69016377T2 (no) |
| DK (1) | DK0430750T3 (no) |
| ES (1) | ES2078327T3 (no) |
| FI (1) | FI93658C (no) |
| FR (1) | FR2654744B1 (no) |
| GR (1) | GR3015847T3 (no) |
| IE (1) | IE65785B1 (no) |
| NO (1) | NO180787C (no) |
| PT (1) | PT95928B (no) |
| ZA (1) | ZA909212B (no) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2685482B1 (fr) * | 1991-12-24 | 1994-07-29 | Melet Francois | Procede de numeration des hematies ou des thrombocytes et dispositif de mise en óoeuvre. |
| AU2095992A (en) * | 1992-08-11 | 1994-03-24 | Abbott Laboratories | Flow cytometry sheath reagent for elimination of red cells with preservation of nucleated cells |
| DE69327775T2 (de) * | 1992-11-19 | 2000-06-21 | Sysmex Corp., Kobe | Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse |
| EP0685994B1 (en) * | 1993-02-25 | 2007-03-21 | Abbott Laboratories | Multipurpose reagent system for rapid lysis of whole blood samples |
| JP3320869B2 (ja) * | 1993-12-22 | 2002-09-03 | シスメックス株式会社 | 白血球分析用試薬 |
| JP3467310B2 (ja) * | 1994-04-21 | 2003-11-17 | シスメックス株式会社 | 白血球分析用試薬及び白血球の分類方法 |
| JP3355038B2 (ja) * | 1994-08-03 | 2002-12-09 | シスメックス株式会社 | 白血球分類方法 |
| US5639630A (en) * | 1995-05-16 | 1997-06-17 | Bayer Corporation | Method and reagent composition for performing leukocyte differential counts on fresh and aged whole blood samples, based on intrinsic peroxidase activity of leukocytes |
| US5786224A (en) * | 1995-06-29 | 1998-07-28 | Coulter Corporation | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood |
| US5817518A (en) * | 1995-12-18 | 1998-10-06 | Coulter International Corp. | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood |
| US6667177B1 (en) * | 1997-11-11 | 2003-12-23 | Kowa Company, Ltd. | Method for counting leukocytes and apparatus for counting leukocytes |
| FR2782166B1 (fr) * | 1998-08-04 | 2000-10-06 | Abx Sa | Reactif pour la mesure de l'hemoglobine et la determination des leucocytes dans un echantillon de sang |
| FR2821428B1 (fr) * | 2001-02-23 | 2004-08-06 | Abx Sa | Reactif et procede pour l'identification et le comptage de cellules biologiques |
| US7745219B2 (en) * | 2003-07-21 | 2010-06-29 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Reagent composition for the analysis of residual white blood cells in leuko-reduced blood banking products |
| US7648676B2 (en) * | 2004-04-20 | 2010-01-19 | Rti Biologics, Inc. | Process and apparatus for treating implants comprising soft tissue |
| US20060228252A1 (en) * | 2004-04-20 | 2006-10-12 | Mills C R | Process and apparatus for treating implants comprising soft tissue |
| FR2883972B1 (fr) * | 2005-03-31 | 2007-11-16 | C2 Diagnostics Sa | Procede pour l'analyse d'un echantillon de sang et appareil et reactif pour sa mise en oeuvre |
| CN101349644B (zh) * | 2007-07-20 | 2012-06-27 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种白细胞分类试剂和其使用方法 |
| US8102161B2 (en) * | 2007-09-25 | 2012-01-24 | Tdk Corporation | Stable output in a switching power supply by smoothing the output of the secondary coil |
| CN101475754A (zh) * | 2008-01-04 | 2009-07-08 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 不对称菁类荧光染料,组合物及在生物样品染色中的用途 |
| EP2278331A4 (en) * | 2008-05-02 | 2013-03-13 | Arkray Inc | LEUKOCYTE ANALYSIS METHOD AND ANALYSIS REAGENT FOR USE IN THE PROCESS |
| CN101602762B (zh) * | 2008-06-10 | 2013-10-16 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 不对称菁类化合物、其制备方法及应用 |
| CN101726579B (zh) * | 2008-10-17 | 2014-06-18 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 血液检测试剂和方法 |
| CN101750274B (zh) * | 2008-12-17 | 2014-06-25 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 白细胞分类计数试剂、试剂盒以及白细胞分类计数的方法 |
| CN101988082B (zh) * | 2009-07-31 | 2015-04-08 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法 |
| JP6177009B2 (ja) * | 2013-06-03 | 2017-08-09 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 血球破壊試薬及びそれを用いる血球破壊方法 |
| JP6738652B2 (ja) * | 2016-05-26 | 2020-08-12 | シスメックス株式会社 | 試料分析方法、試料分析装置および試薬 |
| JP7143678B2 (ja) * | 2018-08-24 | 2022-09-29 | 東ソー株式会社 | 標的細胞を検出する方法 |
| CN109735484B (zh) * | 2018-12-12 | 2022-07-12 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种细胞保护剂、一种试剂及试剂的用途 |
| CN109655607B (zh) * | 2019-01-25 | 2021-02-23 | 广东菲鹏生物有限公司 | 红细胞裂解试剂及其应用 |
| CN113068683B (zh) * | 2021-03-03 | 2022-04-01 | 北京诚智光辉科技有限公司 | 一种液基细胞检查用细胞保存液及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4286963A (en) * | 1979-11-23 | 1981-09-01 | Coulter Electronics, Inc. | Differential lymphoid-myeloid determination of leukocytes in whole blood |
| US4346018A (en) * | 1980-06-16 | 1982-08-24 | Coulter Electronics, Inc. | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes |
| US4529705A (en) * | 1983-06-06 | 1985-07-16 | Coulter Electronics, Inc. | Reagent for combined diluting and lysing whole blood |
| US4751179A (en) * | 1984-05-31 | 1988-06-14 | Coulter Electronics, Inc. | Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood |
| AU602129B2 (en) * | 1985-09-06 | 1990-10-04 | Technicon Instruments Corportion | Method for the determination of a differential white blood cell count |
-
1989
- 1989-11-20 FR FR8915166A patent/FR2654744B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-11-14 AU AU66631/90A patent/AU634600B2/en not_active Ceased
- 1990-11-15 AT AT90403231T patent/ATE117803T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-11-15 EP EP90403231A patent/EP0430750B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-15 DK DK90403231.5T patent/DK0430750T3/da active
- 1990-11-15 NO NO904963A patent/NO180787C/no unknown
- 1990-11-15 DE DE69016377T patent/DE69016377T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-15 ES ES90403231T patent/ES2078327T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-16 ZA ZA909212A patent/ZA909212B/xx unknown
- 1990-11-19 KR KR1019900018731A patent/KR100194407B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-19 IE IE416390A patent/IE65785B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-11-19 CA CA002030381A patent/CA2030381C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-19 PT PT95928A patent/PT95928B/pt not_active IP Right Cessation
- 1990-11-19 US US07/615,710 patent/US5232857A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-20 FI FI905725A patent/FI93658C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-11-20 JP JP2317640A patent/JP2920690B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-04-17 GR GR950400977T patent/GR3015847T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA909212B (en) | 1991-10-30 |
| NO180787C (no) | 1997-06-18 |
| FI93658C (fi) | 1995-05-10 |
| DE69016377T2 (de) | 1995-05-24 |
| NO904963D0 (no) | 1990-11-15 |
| ES2078327T3 (es) | 1995-12-16 |
| GR3015847T3 (en) | 1995-07-31 |
| PT95928A (pt) | 1991-09-13 |
| FI905725A0 (fi) | 1990-11-20 |
| KR100194407B1 (ko) | 1999-06-15 |
| AU6663190A (en) | 1991-05-23 |
| JP2920690B2 (ja) | 1999-07-19 |
| FR2654744B1 (fr) | 1992-03-13 |
| ATE117803T1 (de) | 1995-02-15 |
| IE65785B1 (en) | 1995-11-15 |
| CA2030381C (en) | 1997-03-25 |
| DK0430750T3 (da) | 1995-03-20 |
| FI905725L (fi) | 1991-05-21 |
| US5232857A (en) | 1993-08-03 |
| FI93658B (fi) | 1995-01-31 |
| NO904963L (no) | 1991-05-21 |
| IE904163A1 (en) | 1991-05-22 |
| KR910010188A (ko) | 1991-06-29 |
| PT95928B (pt) | 1998-01-30 |
| EP0430750B1 (fr) | 1995-01-25 |
| JPH03266999A (ja) | 1991-11-27 |
| DE69016377D1 (de) | 1995-03-09 |
| AU634600B2 (en) | 1993-02-25 |
| EP0430750A1 (fr) | 1991-06-05 |
| FR2654744A1 (fr) | 1991-05-24 |
| CA2030381A1 (en) | 1991-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO180787B (no) | Reagens og fremgangsmåte for å bestemme minst en leukocytt subpopulasjon | |
| JP3048260B2 (ja) | 白血球分類計数用試料調製方法 | |
| US4751179A (en) | Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood | |
| US5817518A (en) | Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood | |
| EP0305491B1 (en) | System for isolating and identifying leukocytes | |
| EP1004880B1 (en) | Erythroblast diagnostic flow-cytometry method and reagents | |
| EP1049919B1 (en) | Method for differentiation of nucleated red blood cells | |
| JPS6188896A (ja) | 白血球弁別用組成物および弁別方法 | |
| US6632676B1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| US20040241769A1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| JPH0439910B2 (no) | ||
| JP4087560B2 (ja) | 赤芽球の識別方法 | |
| US5196346A (en) | Reagent and method of using same for automatically counting basophilic leukocytes in the blood in resistivity variation measuring apparatus | |
| JPH0599919A (ja) | 白血球分析方法 | |
| US6214625B1 (en) | Composition and method for differentiation of basophils and eosinophils in blood | |
| EP0259833A2 (en) | Reagent and method for classifying leukocytes by flow cytometry | |
| JP2778745B2 (ja) | 血液中の白血球弁別測定用試薬 | |
| CN108132343B (zh) | 一种白细胞四分群分析用溶血剂 | |
| Saunders | The automation of cytochemical methods for automated cytophotometers. |