NO303620B1 - FremgangsmÕte for fremstilling av et farmas°ytisk preparat for bekjempelse av patogene mikroorganismer i mennesker og dyr - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat for bekjempelse av patogene mikroorganismer i mennesker og dyr, i det diaré og andre mave-tarm problemer kan forebygges og/eller behandles.

Diaré og andre ' mavetarmproblemer forårsaket av patogene mikroorganismer, utgjør et omfattende helseproblem som påvirker spesielt turister som reiser oversjøisk, mennesker som mottar cancer-terapi, innbefattende antibiotika eller bestråling, og mennesker som arbeider i daghjem. Slike patogene tarmbakterier som forårsaker diaré, omfatter Salmonella, Shigella, Yersinia, E-coli, Pseudomonas, Clostridium dificile og sordelli, Stafylococcus aureus og Campylobactus. Disse patogene mikroorganismene adherer til slimhinnemembranene i tarmen og forstyrrer tarmfunksjonen, som dermed forårsaker diaré.

Det er velkjent at mikroorganismer påvirker hverandre positivt eller negativt ved å fremme eller hemme veksten av hverandre. Dette interfernsfenomenet har fremfor alt blitt studert i hudfloraen, svelg og tarmen til mennesker. Til tross for at de underliggende årsakene ikke er fullstendig kjent, er det blitt oppdaget at den normale bakterielle floraen er av betraktelig viktighet i forsvar overfor patogene bakterier. Bakteriene i den normale floraen inhiberer invaderende bakterier på mange forskjellige måter, f.eks. ved å produsere antibiotikalignende forbindelser betegnet bakteriociner. Ulikt antibiotika har bakteriocinene for det meste en meget selektiv virkning på en spesifikk gruppe av bakterier uten å innvirke på den gjenværende bakterielle floraen. Behandling av infiserte pasienter med slike harmløse bakterier med spesifikk virkning, er ikke bare blitt diskutert, men også i en viss grad forsøkt. Bakteriene som blir tilført, må naturligvis kunne slå seg ned i tarmområdet hvor de skal utøve deres virkning. Dette er én av idéene bak å gi surnet melk til pasienter der tarmfloraen er forstyrret, og som lider av alvorlig diaré etter behandling med antibiotika. Det er derimot ikke vært noen vitenskapelig oppfølging av hva som virkelig skjer med tarmfloraen, og virkningen, om noen, har for det meste vært usikker, sannsynligvis på grunn av at ingen bakteriell kolonisering har foregått i tarmen eller på grunn av at bakteriene som blir tilført mangler evnen til å påvirke diaré-induserende bakterier. Det er også blitt forsøkt å erstatte den eksi-sterende bakteriefloraen i neseslimhinnen, huden og svelget med uskadelige mikroorganismer, og det er blitt vist at den såkalte rekoloniseringen er mulig, og kan være effektiv.

Som nevnt ovenfor, har tilføringen av bakterier til pasienter som lider av forskjellige sykdommer som skyldes patogene mikroorganismer ikke ført til noen konklusjon. Dette skyldes utilstrekkelig kjennskap til hvilke bakteriestammer som er mest egnede for å gi kolonisasjon og interferens.

Ved å arbeide under gitte betingelser, har det i de senere årene vært mulig å oppnå viktige prinsipper for mekanismene som kontrollerer interaksjonen mellom forskjellige mikroorganismer, og også å utvikle metoder for å undersøke denne interaksjonen. Det er derfor blitt mulig å gå inn i denne interaksjonen på en meningsfylt og reproduserbar måte, som kan bli anvendt terapeutisk/profylaktisk ved behandling med infeksjoner.

Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat for bekjempelse av patogene mikroorganismer i mennesker og dyr, i det diaré og andre mave-tarm problemer kan forebygges og/eller behandles, kjennetegnet ved at naturlig forekommende Streptococcus lactis-stammer isoleres fra tettegress, disse stammene undersøkes med hensyn på eventuelle hemmende effekter på tarmpatogene bakterier, stammen med mest hemmende effekter, Streptococcus lactis Lia med deponeringsnummer NCIMB 40157, selekteres og formeres, og mikroorganismer fra denne stammen i levedyktig form settes til et farmasøytisk akseptabelt bærermedium i en mengde på 10^-10<10>mikroorganismer pr ml sluttpreparat klar for bruk

hvor mikroorganismen beholder sin levedyktighet.

Ytterligere kjennetegn ifølge oppfinnelsen fremkommer fra følgende beskrivelse og vedlagte krav.

Ved studering av interaksjonen mellom forskjellige bakterier, er det heri blitt konsentrert på evnen som visse melkesyre-bakterier har til å forhindre veksten av patogene bakterier. På en laboratorieskala er kulturer av Streptococcus lactis blitt testet, og et stort antall kloner med forskjellige biologiske egenskaper er blitt isolert derifra. Noen av disse har vist seg å ha en utpreget inhiberende virkning på de fleste infeksjonsinduserende bakterier i mennesker, så som Stafylococcus aureus, forskjellige arter av Salmonella, Shigella, Pseudomonas, Klebsiella-Entero og Campylobactus.

En viktig grunn for effektiviteten til Streptococcus lactis-stammene er at noen av disse utskiller bakteriociner som har en spesifikk drepende virkning på noen av de invaderende mikroorgani smene.

Det farmasøytiske preparatet fremstilt ifølge oppfinnelsen har et mikroorganismestamme-innhold på 10^-10<10>, fortrinnsvis10<8->10<9>, mikroorganismer/ml av sluttpreparatet klar for bruk.

I en foretrukket utførelsesform er bæreren for mikroorganismestammen et surnet eller fermentert melkeprodukt så som surnet melk, slimet melk, yoghurt, kefir o.l. Mikroorganismestammen som kan bli anvendt som oppstartingskultur ved preparering av slike melkeprodukter som resulterer i surnete eller fermenterte melkeprodukter, har et øket innhold av den fordelaktige stammen. Det er selvfølgelig også mulig å tilsette bakteriene til de ferdige melkeproduktene for derved å oppnå et høyere innhold i mediet av de ønskede bakteriene. Denne utførelsen er av betraktelig viktighet på grunn av at preparatet som blir oppnådd, er en total og populær matvare. Et slikt preparat kan bli administrert for profylaktiske eller kurerende hensikter mot diaré og andre tarminfeksjoner som ofte påvirker små barn. Det kan videre bli gitt til mennesker som får cancer-terapi innbefattende antibiotika eller bestråling, samt til turister som reiser utenlands der bakteriefloraen ofte er forskjellig fra den som er hjemme. Preparatet kan også være i tørr form for oral administrering, f.eks. som kapsler, tabletter eller pulver. Bærermediet som blir anvendt i dette tilfellet, er av konvensjonell type og velkjent for ekspertene på dette området. Kapslene kan være resistente overfor mavesaft, slik at bakteriene blir beskyttet derifra og bare blir frigjort i tarmen. Av samme grunn kan tabletter bli tilveiebragt med et kjent belegg som er motstandsdyktig overfor mavesaft. Pulveret kan videre bli omrørt før bruk i en vandig væske, vann, melk og fruktsaft.

Preparatet har vist seg å være meget effektivt profylaktisk overfor forskjellige patogene intestinale bakterier som forårsaker mavetarmproblemer, så som "turist-diaré".

Preparatet kan også fordelaktig bli anvendt for behandling av Salmonella-infiserte mennesker og dyr.

Preparatet kan også bli tilpasse for behandling av dyr, der bæreren er et egnet dyrefor.

Mikroorganismen bør bli holdt i frysetørket tilstand, fortrinnsvis \ skummet melk på et mørkt og tørt område, eller frosset ved en temperatur på omtrent -70"C.

Den nødvendige dosen av preparatet fremstilt ifølge oppfinnelsen blir bestemt avhengig av slike faktorer som alder og generell tilstand til pasienten, samt type og alvorlighet av sykdommen. Fagfolk innenfor dette området har den nødvendige kompetansen for å bestemme den egnede dosen. En annen fordel Ifølge oppfinnelsen, er at en stor overdose av det farmasøytiske preparatet nesten ikke har noen risiko for pasienten.

Mikroorganismestammen som danner en del av det farmasøytiske preparatet fremstilt ifølge oppfinnelsen, ble isolert på følgende måte. En naturlig forekommende Streptococcus lactis-stamme ble isolert fra tettegress, og undersøkt for inhi-bitorisk virkning på patogene tarmbakterier. Syv kloner ble testet, og én betegnet Lia, ga de beste resultatene.

Denne mikroorganismestammen som blir anvendt i preparatet fremstilt ifølge oppfinnelsen, ble deponert i 1989 til The National Collection of Industrial and Marine Bacteria (NCIMB), Torry Research Station, P.O. Box 31, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 8DG, Great Britain. NCIMB aksesjons-nummer er 40157. Mikroorganismestammen er typebestemt eller klassi-fisert ifølge API 20-systemet (API System, La Balme les Grottes, 38390 Montalieu, Vercieu, France).

(1) Ved en andre avlesning etter 24 timers inkubasjon, kan et presipitat bli oppdaget i rørene hvor reagensene ZYM A og ZYM B er blitt tilsatt. Dette er

et normalt fenomen, som kan bli ignorert.

(2) Syrningen av stivelse er ofte svakere enn for andre sukkerforbindelser.

Stammen har en svak a-hemolyse.

Den vokser godt ved 20-37°C, og sammenlignbart godt ved 39°C. En egnet buljong er M17, se oppskrift.

Stammen hører til Lancefield N-gruppen.

Fremstilling av surnet melk

I en utførelsesform ifølge oppfinnelsen, er det farmasøytisk akseptable bærermediet for preparatet surnet melk.

Mikroorganismen Lia blir i denne utførelsesformen latt vokse i melk i 2-20 timer, fortrinnsvis 4 timer. Deretter blir den gjenværende surmelk-kulturen tilsatt, som resulterer i ytterligere vekst, men ved en redusert temperatur på 21 "C, dersom temperaturen var høyere ved begynnelsen.

Når den gjenværende surmelkulturen blir tilsatt, bør innholdet av Lia være 10<6->10<10>cfu/ml, fortrinnsvis 10<8->10<9>cfu/ml. Deretter blir den surnede melken latt stå i 20-24 timer, fortrinnsvis 20 timer, hvor den blir avkjølt og fylt inn i beholdere.

Etter å ha tatt 260 ml av denne surnede melken om morgenen og om kvelden, kan Streptococcus lactis-stammen bli funnet i tarmen selv etter 3-5 dager.

Claims (6)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat for bekjempelse av patogene mikroorganismer i mennesker og dyr, i det diaré og andre mave-tarm problemer kan forebygges og/eller behandles,karakterisert vedat naturlig forekommende Streptococcus lactis-stammer isoleres fra tettegress, disse stammene undersøkes med hensyn på eventuelle hemmende effekter på tarmpatogene bakterier, stammen med mest hemmende effekter, Streptococcus lactis Lia med deponeringsnummer NCIMB 40157, selekteres og formeres, og mikroorganismer fra denne stammen i levedyktig form settes til et farmasøytisk akseptabelt bærermedium i en mengde på 10^-10<10>mikroorganismer pr ml sluttpreparat klar for bruk hvor mikroorganismen beholder sin levedyktighet.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisertved at Streptococcus lactis-stammen LIA settes til det farmasøytiske akseptable bærermediet i en mengde på 10<8>_10<9>pr ml sluttpreparatet klar for bruk.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisertved at Streptococcus lactis-stammen LIA settes til et syrnet eller gjærmelkeprodukt, så som surmelk, tettemelk, yoghurt, kefir o.l.

4. Fremgangsmåte ifølge ett av de foregående kravene,karakterisert vedat Streptococcus lactis-stammen LIA settes til et egnet dyrefor ved administrering av sammensetningen ifølge oppfinnelsen til dyr.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisertved at Streptococcus lactis-stammen LIA settes til bærermediet i form av en startkultur og/eller til det ferdige produktet.

6. Fremgangsmåte ifølge ett av de foregående kravene,karakterisert vedat det farmasøytiske akseptable bærermaterialet sammen med Streptococcus lactis-stammen LIA bearbeides til kapsler, tabletter eller pulver.