NO871295L

NO871295L - Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive aminosyrederivater.

Info

Publication number: NO871295L
Application number: NO871295A
Authority: NO
Inventors: Kinji Iizuka; Tetsuhide Kamijo; Tetsuhiro Kubota; Kenji Akahane; Hideaki Umeyama; Yoshiaki Kiso
Original assignee: Kissei Pharmaceutical
Priority date: 1986-04-01
Filing date: 1987-03-27
Publication date: 1987-10-02
Also published as: FI871406A7; FI871406A0; HUT44043A; KR870010078A; US4711958B1; US4711958A; EP0244083A3; NO871295D0; HU200191B; AU599367B2; AU7094487A; EP0244083A2

Description

Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av nye aminosyre-derivater for terapeutisk anvendelse. Mer spesielt, vedrører den foreliggende oppfinnelse fremgangsmåte for fremstilling av aminosyre-derivater som har en human renin-inhiberende effekt ved oral tilførsel, og som således er nyttige ved behandling av hypertensjon, særlig renin-assosiert hypertensjon.

Renin er et proteolytisk enzym med en molekylvekt på omkring 40.000, som fremstilles og utskilles ved hjelp av celler som ligger tett opptil glomrtulud i nyren. Dette enzym virker på plasmarenin-substratet, angiotensinogen, for å gi dekapeptid angiotensin I som omdannes til angiotensin II ved hjelp av et angiotensin I-omdannende enzym.

Det er kjent at angiotensin II sammentrekker den vaskulære glatte muskel og virker på den adrenale cortex for utskillelse av aldosteron som regulerer salt- og vann-balansen. Følgelig spiller renin-angiotensin-systemet en viktig rolle ved hypertensjon. Man har lenge forsøkt å finne en effektiv renin-inhibitor som et middel for behandling av hypertensjon, særlig renin-assosiert hypertensjon. Som et resultat, har man funnet at visse peptider viser en renin-inhiberende effekt, som beskrevet i US patent nr. 4.548.926, japanske patentansøkninger (OPI) nr. 163899/85, 275257/86, 78795/86, 227851/84, 155245/84, 110661/84, (uttrykket "OPI" som anvendt heri vedrører ikke bevilgede japanske patentansøkninger), japansk patent nr. 39149/83, Biochemical and Biophysifal Research Communication, bind 118, sidene 929-933, 1984;

og EPO patentansøkninger nr. 77029(A^ , 77028(A^ og 81783(A1).

Av de ovennevnte litteraturhenvisninger, omfatter japansk patentansøkning (OPI) nr. 163899/85 peptider som er representert ved følgende formel:

hvori R^CO representerer

en alifatisk acyl-gruppe, en aromatisk acyl-gruppe, en aromatisk alifatisk acyl-gruppe, en heterocyklisk acyl-gruppe eller en heterocyklisk alifatisk acyl-gruppe, idet ovennevnte acyl-grupper kan ha en amino-gruppe en beskyttet amino-gruppe, en hydroksy-gruppe, en substituert ditio-gruppe, en alkyl-gruppe, en alkoksy-gruppe, en alkoksykarbonyl-gruppe, et halogenatom eller en nitro-gruppe som substituent ,-

2

R representerer

en isobutyl-gruppe eller en sek-butyl-gruppe;

X representerer

3 3

en gruppe med formel -CH-A-R hvori R representerer en

Y

karboksyl-gruppe, en N-substituert karbamoyl-gruppe, en karbazoyl-gruppe, en N-substituert karbazoyl-gruppe eller en acyl-gruppe, A representerer en enkelt binding eller en alkylen-gruppe, Y representerer en hydroksy-gruppe, en merkapto-gruppe eller en formyl-gruppe,

eller en gruppe med formel

4

hvori R representerer

en substituert alkyl-gruppe med en karboksyl-gruppe, en beskyttet karboksy-gruppe, en N-substituert karbamoyl-gruppe, en karbazoyl-gruppe, en N-substituert karbazoyl-gruppe eller en acyl-gruppe som en substituent;

His representerer

en L-histidyl-gruppe;

og farmasøytiske tålbare salter og estere derav.

Japansk patentansøkning (OPI) 78795/86 omfatter også optiske isomerer av peptider som er gitt i japansk patent-ansøkning (OPI) nr. 163899/85.

Japansk patentansøkning (OPI) 275257/86 omfatter peptider som er nær beslektet med forbindelser i henhold til foreliggende oppfinnelse. Skjønt denne patentansøkning ikke spesifikt omfatter forbindelsene, er forbindelser med følgende formel innbefattet innen området av ansøkningen:

hvori r<5>representerer en alkoksy-gruppe med fra 1 til 10 karbonatomer, en mono- eller di-alkylamino-gruppe med 1

til 10 karbonatomer eller en heterocyklisk gruppe, idet ovennevnte heterocykliske gruppe er forbundet med karbonyl-gruppen i formelen med nitrogenatomet i ovennevnte heterocykliske gruppe, og farmasøytisk tålbare salt derav.

Denne patentansøkningen lærer imidlertid ikke at forbindelsene med en morfolinokarbonylmetyl-gruppe i stedet for morfolinoetyl-gruppen utviser en utmerket renin-inhiberende aktivitet.

Et formål for den foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av nye aminosyre-derivater som utviser en spesifikk inhiberende effekt på renin ved oral tilførsel til pattedyr omfattende mennesker.

Et annet formål med den foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av nye aminosyre-derivater og farmasøytisk tålbare salter derav. Et ytterligere formål med den foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe metoder for behandling av hypertensjon ved anvendelse av nye aminosyre-derivater eller farmasøytisk tålbare salt derav.

Andre formål, trekk og fordeler i henhold til den foreliggende oppfinnelse vil fremkomme fra følgende beskrivelse av oppfinnelsen.

Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye aminosyre-derivater som er representert ved formel (I):

hvori His representerer en L-histidyl-guppe, X representerer en rettkjedet eller forgrenet alkoksy-gruppe med 1 til 7 karbonatomer, en rettkjedet eller forgrenet alkylamino-gruppe med 1 til 7 karbonatomer, en cykloalkoksy-gruppe med 3 til 7 karbonatomer eller en morfolino-gruppe eller ovennevnte alkoksy-gruppe med en eller flere halogenatomer som substituenter, eller farmasøytisk tålbare salt derav.

Aminosyre-derivatene med formel (I) i henhold til oppfinnelsen og farmasøytisk tålbare salt derav utviser en renin-inhiberende aktivitet i et humant renin-saue-renin-substratsystem og human plasma renin-aktivitet. Aminosyre-derivatene i henhold til oppfinnelsen er ytterligere stabile overfor proteolytiske enzymer slik som pepsin og chymotrypsiner.

Disse funn viser at aminosyre-derivatene med formel (I)

i henhold til oppfinnelsen utviser en human renin-inhiberende effekt ved oral tilførsel til pattedyr, omfattende mennesker, og er således nyttige for behandling av hypertensjon, særlig renin-assosiert hypertensjon.

Aminosyre-derivatene med formel (I) i henhold til oppfinnelsen kan fremstilles i overensstemmelse med vel kjente metoder. Dvs. at aminosyre-derivatene i henhold til oppfinnelsen som er representert ved formel (I):

hvori His og X har samme betydning som angitt over, kan fremstilles ved at en forbindelse som er representert ved formel (II): hvori (S) representerer S-konfigurasjon, omsettes med en forbindelse som er representert ved formel (III): hvori X har samme betydning som angitt over, eller ved at en forbindelse som er representert ved formel (IV):

hvori (S) har samme betydning som angitt over, omsettes med forbindelsen med formel (III) som angitt over i nærvær av et kondenseringsmiddel.

Forbindelsene med formel (II), og (IV) som utgangs-forbindelser, kan fremstilles ved hjelp av en analog metode til den som er beskrevet i japansk patentansøkning

(OPI) 236770/86.

Forbindelsene som er representert ved formel (III) og som anvendes som en annen utgangsforbindelse kan fremstilles ved hjelp av en analog metode til den som er beskrevet i litteraturen.

Forbindelsen som er representert ved formel (III) kan fremstilles ved hydrogenering av N-(tert-butoksykarbonyl)-L-fenylalanin over rhodium på aluminium-pulver, hvorpå det oppnådde N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksylalanin reduseres i nærvær av et reduksjonsmiddel slik som en bor-forbindelse, hvorpå det oppnådde N-(tert-butoksy-karbonyl ) -L-cykloheksyl-alaninol behandles med pyridin-svovel-trioksyd-kompleks i dimetyl-sulfoksyd i nærvær av trietylamin, og det oppnådde N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksylalaninal omsettes med kalium-cyanid, hvorpå

den oppnådde forbindelse hydrolyseres og hvorpå det oppnådde aminosyre-derivatet forestres eller amideres ved hjelp av en vanlig anvendt metode.

Reaksjonen mellom forbindelsen som er representert ved formel (II) og forbindelsen med formel (III) kan utføres på en vanlig anvendt måte.

Det vil si at aminosyre-derivatet med formel (I) i henhold til oppfinnelsen kan fremstilles ved at forbindelsene med formel (II) suspenderes i N,N-dimetylformamid, hvorpå hydrogen-klorid i et forhold på fra omtrent 3 til omtrent 5 molare mengder pr. mol av forbindelsen med formel (II) føres inn i suspensjonen, tilsetting av isoamyl-nitritt i et forhold på fra omtrent 1 til omtrent 3 molare mengder pr. mol av forbindelsen med formel (II) til blandingen, reaksjon av blandingen fra 5 til 30 min. ved omtrent -20 til omtrent -5°C og regulering av pH i reaksjonsblandingen til omtrent 8 til 9 ved tilsetting av trietylamin. Blandingen tilsettes dråpevis til en løsning av forbindelsen med formel (III) og trietylamin i en ekvimolar mengde til forbindelsen med formel (II). i N,N-dimetylformamid under isavkjøling, foretrukket ved -20 til 0°C, og blandingen behandles i omtrent 5 til 20 timer ved fra 0°C til romtemperatur. En 5% vandig natriumbikarbonat-løsning tilsettes til reaksjonsblandingen, etterfulgt av ekstraksjon med etylacetat, hvorpå etylacetat-laget avdampes og resten renses ved preparativ silikagel-tynnskiktskromatografering, hurtiggj ennomstrømmende silikagel-kolonnekromatografering eller høytrykks-væskekromatografering.

Reaksjonen mellom forbindelsen som er representert ved formel(III) og forbindelsen som er representert ved formel (IV) kan også foretrukket gjennomføres ved å oppløse en forbindelse som er representert ved formel (IV) i N,N-dimetylformamid, tilsette en hydroksybenzotriazol og dicykloheksylkarbodiimid, la blandingen reagere i 10 til 20 timer ved romtemperatur hvorpå reaksjonsblandingen behandles i henhold til en vanlig anvendt metode for å oppnå den ønskede forbindelse.

Aminosyre-derivatene som er representert ved formel (I)

i henhold til oppfinnelsen inneholder fire asymmetriske karbonatomer hvorav den ene er inkludert i L-histidin-delen, og derfor eksisterer forskjellige stereoisomerer av aminosyre-derivatene avhengig av konfigurasjonen av hvert av de asymmetriske karbonatomer, selv om konfigurasjonen av de asymmetriske karbonatomene påvirker den renin-inhiberende aktiviteten for forbindelsen med formel (I), vil konfigurasjoner for de asymmetriske karbonatomene som er forskjellige fra den for L-histidin-delen, ikke virke begrensende i den foreliggende oppfinnelse med hensyn til disse isomerer.

I aminosyre-derivatene som er representert ved formel

(I), er konfigurasjonen av karbonatomet hvor amino-gruppen er substituert i den delen av forbindelsen som er representert ved formel (III), foretrukket S-konfigurasjon, mens konfigurasjonen av karbonatomet hvor hydroksy-gruppen er substituert i ovennevnte del påvirker aktiviteten. R-konfigurasjonen er foretrukket, men en blanding av S- og R-konfigurasjon kan anvendes.

De optisk aktive utgangsmaterialene som anvendes for fremstilling av de optisk aktive forbindelsene kan fremstilles ved at man utfører en optisk spalting på vanlig måte eller ved anvendelse av en optisk aktiv forbindelse.

Aminosyre-derivatene som er representert ved formel (I)

i henhold til oppfinnelsen kan omdannes til farmasøytisk

tålbare salt derav ved hjelp av vanlig anvendte metoder. Eksempler på slike farmasøytisk tålbare salt omfatter farmasøytisk tålbare uorganiske eller organiske syresalter slik som saltsyresalt, svovelsyresalt, p-toluensulfonsyre-salt, eddiksyresalt, sitronsyresalt, vinsyresalt, ravsyre-salt, fumarsyresalt o.l. Disse saltene har en renin-inhiberende effekt som er like høy som den for den tilsvarende forbindelse som har en fri amino-gruppe, og er stabile overfor proteolytiske enzymer, og viser således den ønskede renin-inhiberende effekt selv ved oral tilførsel.

Aminosyre-derivatene som er representert ved formel (I)

i henhold til oppfinnelsen har en sterk inhiberende effekt på humant renin, f.eks. frembringer aminosyre-derivatene med formel (I) en 50% inhibering i et human renin-saue-substratsystem og i human høy-renin plasma ved molare konsentrasjoner på henhv. 3,7 x 10 - 7 til 2,4 x 10 -9 og

-7 -9

2,6 x 10 til 4,1 x 10 , og reduserer blodtrykket hos aper som er i en høy-renin-tilstand. Derivatene har lav giftighet og er således nyttige som terapeutisk aktive midler for behandling av hypertensjon, særlig renin-assosiert hypertensjon.

Aminosyre-derivatene som er representert ved formel (I)

og farmsøytisk tålbare salter derav i henhold til oppfinnelsen kan tilføres til pattedyr, omfattende mennesker, ved oral, intravenøs, intramuskulær eller intrerektal tilførsel, og for tilførsel kan de utformes til farmasøytiske preparater sammen med vanlig anvendte farmasøytiske bærere eller tilsetningsmidler.

Aminosyre-derivatene og de farmasøytisk tålbare salt med formel (I) i henhold til oppfinnelsen kan tilføres i forskjellige doseformer avhengig av den tilsiktede terapi. Typiske dose-former som kan anvendes er tabletter, piller, pulvere, flytende preparater, suspensjoner, emulsjoner, granuler, kapsler, stikkpiller og preparater for injeksjon. Ved utforming av farmasøytiske preparater til tablettform, kan man anvende en rekke vanlig anvendte bærere. Eksempler på passende bærere er tilsetningsmidler som glukose, laktose, stivelse, kakaosmør, herdede vegetabilske oljer, kaolin og talkum, bindere slik som gummi-arabikumpulver, tragantgummi-pulver og etanol, og oppløsningsmidler som laminaria og agar. Om ønsket kan tablettene belegges til sukker-belagte tabletter, gelatin-belagte tabletter, film-belagte tabletter eller tabletter som er belagt med to eller flere lag.

Når den farmasøytiske blanding formes til et injiserbart preparat, foretrekkes at den endelige oppløsningen og suspensjonen som skalinjiseres er sterilisert og isotonisk med hensyn på blodet. Ved fremstilling av et farmasøytisk preparat i form av en løsning eller en suspensjon, kan man anvende fortynningsmidler som er vanlig anvendt på området. Eksempler på passende fortynningsmidler omfatter vann, etylalkohol, propylenglykol, polyoksyetylen-sorbitol og sorbitan-estere. Natriumklorid, glukose eller glycerol kan innlemmes i et slikt flytende preparat i en mengde som er tilstrekkelig for å danne en isotonisk løsning. Det terapeutiske middel kan ytterligere inneholde vanlig anvendte oppløsnings-hjelpemidler, buffere, smertestillende midler og konserveringsmidler, og eventuelt fargemidler, luktestoff, søtemidler og andre farmasøytisk aktive midler som er kjente på området.

Dosen av aminosyre-derivatene i henhold til oppfinnelsen

kan være i området fra 5 mg til 5.000 mg pr. voksen person ved oral tilførsel pr. dag, eller fra 1 mg til 1.000 mg pr. voksen person ved parenteral tilførsel pr.

dag i multiple doser avhengig av sykdomstypen, alvoret av tilstanden som behandles og lignende.

Oppfinnelsen er videre illustrert mer detaljert ved hjelp av følgende eksempler, referanseeksempler og prøveeksempler. Smeltepunktene for de oppnådde produktene ble ikke korrigert. NMR-spekter av produktene ble målt ved hjelp av JEOL høy-oppløselig NMR-spektrometer type JNM-GX 270. Masse-spektret for produktene ble målt ved hjelp av JEOL massespektrometer av type JMS-DX 300 i henhold til FAB-metoden. Tynnskikts-kromatografering ble gjennomført ved anvendelse av Merck's silikagel 60 ?254<b>elagte plater og kolonne-kromatografering ble gjennomført ved anvendelse av Merck's kiselgel 60 (230-400 mesh). Tynnskikts-kromatograf ering ble gjennomført ved anvendelse av et nedre lag av en blanding av kloroform, metanol og vann i et volumforhold 8/3/1 (blanding A) og en blanding av kloroform og metanol i et volumforhold 5/1 (blanding B) som elueringsmiddel, og Rf^-verdien (blanding A) og Rf2~verdien (blanding B) ble beregnet.

Referanse-eksempel 1

2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)- propion- syre

Til en løsning av 32,3 g etyl-sukksinat og 29,0 g 1-naftaldehyd i 320 ml abs. etyl-alkohol, ble det tilsatt 10,7 g 50% natrium-hydrid (dispersjon i mineralolje) under omrøring og isavkjøling, hvorpå blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 30 min. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt 230 ml av en 2N-vandig natrium-hydroksyd-løsning, hvorpå blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk, og vann ble tilsatt til resten. Blandingen ble ekstrahert med dietyleter for å fjerne nøytrale materialer. Det vandige laget ble surgjort ved tilsetning av konsentrert saltsyre, og deretter ekstrahert med etyleter. Eterlaget ble vasket med en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Benzen ble tilsatt til resten, og de utfelte krystallene ble samlet ved filtrering til å gi 26,5 g av 2-(1-naftylmetylen)ravsyre i form av gule krystaller.

En blanding av 24,5 g 2-(1-naftylmetylen)ravsyre og 260 ml eddiksyre-anhydrid ble oppvarmet ved 60°C i 1 time, hvorpå

reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk.

Til resten ble det tilsatt en blanding av benzen og heksan (1/1, volum). De utfelte krystallene ble samlet ve filtrering til å gi 16,0 g 2-(1-naftylmetylen)ravsyre-anhydrid i form av orange-gule krystaller.

Løsningen av 1,00 g 2-(1-naftylmetylen)ravsyre-snhydrid

og 0,37 g morfolin i 31 ml tørr diklormetan ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk, og resten ble findelt med en blanding av etylacetat, benzen og heksan (1/1/1, volum) til å gi 1,10 g 2-(1-naftylmetylen)-3-(morfolinokarbonyl)-propionsyre i form av fargeløse krystaller.

En blanding av 1,00 g av syren og 0,1 g av 10% palladium-trekull i 40 ml metylalkohol ble hydrogenisert under atmosfæretrykk. Etter filtrering av katalysatoren, ble filtratet avdampet under redusert trykk, og resten ble findelt med heksan til å gi 0,90 g 2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)propionsyre i form av et hvitt pulver.

Rf1: 0,67

MS: MH<+>, 32 8

Smp. : 64-68°C

IR (KBr): Vco 1720, 1640 cm"<1>

NMR (CDClj)

6: 2.35-2.7(m; 2H), 3.05-3.85(m, 11H), 7.25-8.2(m, 7H)

Referanse-eksempel 2

N-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)- propionyl]- L-histidin- hydrazid

Til en suspensjon av 0,89 g 2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolino karbonyl)propion-syre og 0,79 g L-histidin-metyl-ester-dihydroklorid 23 ml N,N-dimetylformamid, ble det tilsatt 0,70 ml difenyl-fosforyl-azid og 1,50 ml trietylamin under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ble omrørt i ytterligere 16 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk og til resten ble det tilsatt en 5% vandig natrium-bikarbonat-løsning. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat og etylacetatlaget ble vasket med vann, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Til resten ble det tilsatt dietyleter og precipitatet ble samlet ved filtrering til å gi 1,25 g N-[2-(1-naftylenmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)-propionyl]-L-histidyl-metyl-ester i form av et hvitt pulver. Til en løsning av 0,98 g av ester-forbindelsen i 10 ml metanol ble det tilsatt 0,52 g hydrazid-monohydrat, og blandingen ble omrørt i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk og resten ble renset ved hjelp av silikagel-kolonnekromatografering (elueringsmiddel: kloroform/metanol = 10/1, volum) til å gi 0,23 g N-[2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)-propionyl]-L-histidin-hydrazid med en Rf-verdi på 0,49 i form av et hvitt pulver.

Smp. 115 - 119°C

Rf1: 0.49

MS: MH<+>, 479

IR (KBr): vco 1620 cm"<1>

Referanse-eksempel 3

( 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksybutyrsyre- isopropyl-ester- hydroklorid ( formene 2RS og 2R)

Til en løsning av 13,25 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-fenylalanin i 25 ml metanol ble det tilsatt 1,2 g av 5% rhodium på aluminiumpulver, bvorpå blandingen ble hydrogenisert under et trykk på 3,5 kg/cm 2. Etter filtrering av katalysatoren, ble filtratet avdampet under redusert trykk til å gi 13,4 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksylalamin i form av et hvitt pulver.

En blanding av 2,71 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksylalanin i 5 ml tørr tetrahydrofuran ble tilsatt dråpevis til 20 ml av IM bor-tetrahydrofuran-løsning ved en temperatur på fra 5 til 8°C og under en argon-atmosfære, hvorpå blandingen ble ytterligere omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble innstilt til en pH 4 ved tilsetning av en 10% eddiksyremetanol-løsning, og blandingen ble avdampet under redusert trykk. Til resten ble det tilsatt dietyleter, og blandingen ble vasket fortløpende med en vandig sitronsyre-løsning, en vandig natriumbikarbonat-løsning og en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk til å gi 2,42 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cyklo-heksylalaninol.

En blanding av 2,4 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cyklo-heksylalaninol, 6,5 ml tørr trietylamin, 3 ml tørr benzen og 6,6 ml tørr dimetyl-sulfoksyd ble avkjølt til 15°C, hvorpå 7,4 g av et svovel-trioksyd-pyridin-kompleks ble tilsatt porsjonsvis til blandingen ved en temperatur på

fra 15 til 20°C. Blandingen ble omrørt for ytterligere 10 min. Reaksjonsblandingen ble helt over i vann, og blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Etylacetat-laget ble vasket fortløpende med en mettet vandig natrium-bikarbonat-løsning og vann, tørket over vannfritt magnesium-sulf at og avdampet under redusert trykk til å gi 2,9 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksylalaninal.

En løsning av 2,9 g natrium-sulfitt i 20 ml vann ble tilsatt til 2,9 g N-(tert-butoksykarbonyl)-L-cykloheksyl-alaninal, og blandingen ble omrørt i 14 timer med isavkjøling. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt en løsning av 1,82 g kaliumcyanid i 5 ml vann og 40 ml etylacetat, hvorpå blandingen ble omrørt i 4 timer ved romtemperatur. Etylacetatlaget ble vasket med en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Til resten ble det tilsatt 21 ml av en 23% saltsyre og blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 12 timer til å

gi reaksjonsblandingen [A].

Metode 1 (2RS-formen)

Reaksjonsblandingen [A] ble vasket med dietyleter og det vandige laget ble avdampet under redusert trykk til å gi 2,5 g (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

Hydrogen-klorid ble innført i en løsning av 100 mg

(2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmøresyre-hydroklorid i 12 ml isopropyl-alkohol under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet til tørrhet under redusert trykk og resten ble renset ved hjelp av silikagel-kolonnekromatografering (elueringsmiddel: kloroform/metanol = 15/1 volum), og eluatet ble surgjort ved tilsetning av saltsyre. Blandingen ble avdampet til tørrhet under redusert trykk til å gi 108 mg (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-isopropyl-ester-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

IR (KBr): vco 1735 cm"<1>

NMR (D20)

6: 0.8-1.8(m, 19H), 3.6-3.8(m, 1H), 4,3-4.6(m,

1H), 5.0-5.2(m, 1H)

Metode 2 (2R-formen)

Reaksjonsblandingen [A] ble vasket med toluen, og det vandige laget ble avdampet til omtrent 30 ml under redusert trykk. Løsningen fikk stå over natten og de utfelte krystallene ble samlet ved filtrering og vasket med toluen til å gi 1,0 g (2R, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

Hydrogen-klorid ble innført i en suspensjon av 1,0 g

(2R, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-hydroklorid i 10 ml isopropyl-alkohol under omrøring og avkjøling på is, og blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 2 timer. Etter avdamping av reaksjonsblandingen ble det tilsatt benzen til resten og blandingen ble avdampet under redusert trykk. Resten ble oppløst i 10 ml etyl-acetat og de utfelte krystallene ble samlet ved filtrering til å gi 1,0 g (2R, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-smøresyre-isopropyl-ester-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

Smp.: 113 - 115°C

IR (KBr): co 1720 cm<-1>

NMR (D20)

6: 0.8-1.8(m, 19H), 3.6-3.8(m, 1H) , 4.37(d, 1H,

J=4.9Hz), 5.0-5.2(m, 1H)

Referanse-eksempel 4

( 2RS, 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy- N-isobutylbutyramid- hydroklorid

I en blanding av 10 ml vann og 10 ml dioksan ble det oppløst 1,4 g (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-hydroklorid og 1,64 ml trietylamin, hvorpå det ble tilsatt 3,2 g di-tert-butyldikarbonat til løsningen. Blandingen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur og 20 ml vann ble tilsatt til reaksjons blandingen. Blandingen ble ekstrahert med dietyleter for å fjerne nøytrale forbindelser. Det vandige laget ble surgjort ved tilsetning av en vandig sitronsyre-løsning og deretter ekstrahert med dietyleter. Eterlaget ble vasket med en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk til å gi 0,9 g (2RS, 3S)-3-tert-butok-sykarbonylamino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre i form av en fargeløs olje.

Til en løsning av 400 mg av smørsyre-forbindelsen, 175 mg isobutylamino-hydroklorid, 270 mg 1-hydroksybenzotiazol og 0,22 ml trietylamin i 20 ml etylacetat, ble det tilsatt 300 mg dicykloheksylkarbodiimid under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ytterligere ble omrørt i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og filtrert for å fjerne uoppløselige forbindelser. Filtratet ble vasket fortløpende med en vandig sitronsyre-løsning, en 5% vandig natriumbikarbonat-løsning og en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk til å gi 595 mg

(2RS, 3S)-3-tert-butoksykarbonyl)amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-N-isobutylbutyramid.

Til en løsning av 590 mg av amid-forbindelsen i 10 ml metyl-alkohol ble det tilsatt 3,3 ml av en 2N-saltsyre,

og blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk til

å gi 254 mg (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-N-isobutylbutyramid-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

IR (KBr): vco 1640 cm"<1>

NMR (D20)

6: 0.8-2.0(m, 2H) , 2.9-3.2(m, 2H), 3.5-3.7(m,

1H), 4.2-4.5(m, 1H)

Referanse-eksempel 5

N-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)- propionyl]- L-histidin- metyl- ester

Til en suspensjon av 0,89 g 2-(1-naftylmetyl-3-(morfolinokarbonyl ) propionsyre og 0,79 g L-histidin-metyl-ester-dihydroklorid i 23 ml N,N-dimetylformamid ble det tilsatt 0,70 ml difenylfosforyl-azid og 1,50 ml trietylamin under omrøring og avkjøling på is hvorpå blandingen ble ytterligere omrørt i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert'trykk hvorpå det til resten ble tilsatt en 5% vandig natrium-bikarbonat-løsning. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat og etylacetat-laget ble vasket med vann, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Resten ble renset ved hjelp av silikagel-kolonnekromatografering (elueringsmiddel: kloroform/metanol = 20/1, volum) til å gi 0,25 g N-[2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidin-metyl-ester med en Rf^-verdi lik 0,56 i form av et hvitt pulver.

Rekrystallisering av 0,25 g av metylesteren fra benzen

ble utført til å gi 0,20 g N-[2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidin-metyl-ester inneholdende 1 mol benzen, i form av fargeløse nåler.

Rf^ 0.61

Rf2: 0.56

IR (KBr): vco 1755, 1630, 1610 cm"1

Referanse-eksempel 6

( 2RS, 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksysmørsyre-cyklopentyl- ester- hydroklorid

Hydrogen-klorid ble innført i en løsning av 300 mg

(2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmøresyre-hydroklorid, som ble fremstilt i referanseeksempel 2,

i 5 ml cyklopentyl-alkohol under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ble oppvarmet til 90°C i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk og resten ble renset ved hjelp av silikagel-kolonne-kromatografering (elueringsmiddel, kloroform/metanol = 15/1, volum). Eluatet ble surgjort ved tilsetning av saltsyre, og deretter avdampet til tørrhet under redusert trykk til å gi 380 mg (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmøresyre-cyklopentyl-ester-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

IR (KBr): vco 1730 cm"<1>

NMR (D20)

6: 0.8-2.0(m, 21H), 3.6-4.0(m, 1H), 4.3-4.7(m,

1H), 5.2-5.4(m, 1H)

Referanse-eksempel 7

Følgende ester-forbindeler ble fremstilt på en analog måte som den som er beskrevet i referanseeksempel 2 og 6.

( 2RS, 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksysmøresyre-cykloheksyl- ester- hydroklorid

Viskøs fargeløs olje

IR (ren) : v co 1730 cm

NMR (D20)

6: 0.8-2.0(m, 23H), 3.5-4.0(m, 1H), 4.3-4.7(m,

1H), 4.8-5.0(m, 1H)

( 2RS, 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksysmørsyre-1, 3- difluor- 2- propyl- ester

Hvitt pulver

IR (KBr): vco 1735 cm"<1>

NMR (CDC13)

6: 0.8-2.0(m, 13H) , 3.3-3.9(m, 1H), 4.1-5.0(m,

5H), 5.2-5.6(m, 1H)

Referanse-eksempel 8

4-[( 2RS, 3S)- 3- amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksybutyryl]-morfolin- hydroklorid

Til en løsning av 200 mg (2RS, 3S)-3-tert-butoksykarbonyl-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre som var fremstilt i referanseeksempel 4, 0,06 ml morfolin og 13 mg 1- hydroksybenzotriazol i 6 ml etyl-acetat, ble det tilsatt 150 mg dicykloheksyl-karbodiimid under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og filtrert for å fjerne uoppløselige forbindelser. Filtratet ble fortløpende vasket med en vandig sitronsyre-løsning,

en 5% vandig natrium-bikarbonat-løsning og en mettet vandig natrium-klorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk til å gi 296 mg 4-[(2RS, 3S)-3-(tertbutoksykarbonyl)amino-4-cykloheksyl-2- hydroksybutyryl]morfolin.

Til en løsning av 290 mg av amid-forbindelsen i 5 ml metyl-alkohol ble det tilsatt 1,0 ml av en 2N-saltsyre og blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk til

å gi 206 mg 4-[(2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-butyryl]morfolin-hydroklorid i form av et hvitt pulver.

IR (KBr): vco 1620 cm"<1>

NMR (D20)

6: 0.8-1.9(m, 13H) , 3.4-3.9(m, 9H) , 4.4-4.7(m,

1H)

Eksempel 1

( 2RS, 3S)- 3-{ N-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)-propionyl]- L- histidylV amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-smørsyre- isopropyl- ester (Forbindelse A)

Til en løsning av 100 mg N-[2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidin-hydrazid i 5 ml N,N-dimetylformamid ble det sukksessivt tilsatt en løsning av 0,12 ml av en 5,95N tørr hydrogen-klorid i N,N-dimetyl-formamid og 0,043 ml isoamyl-nitritt ved -20°C under omrøring. Etter at hydrazid-forbindelsen var oppløst, ble reaksjonsblandingen avkjølt til -30°C og deretter nøytraliert ved tilsetning av 0,10 ml trietylamin for å fremstille en løsning av N-[2-(1-naftylmetyl)-3-(morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histiin-azid. Azid-løsningen ble tilsatt til en løsning av 58 mg (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmøresyre-isopropyl-ester-hydroklorid og 0,064 ml trietylamin i 2 ml N,N-dimetyl-formamid under omrøring og avkjøling på is, hvorpå blandingen ble omrørt i ytterligere 16 timer. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt en 5% vandig natrium-bikarbonat-løsning og blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Etyl-acetat-laget ble vasket med en mettet vandig natrium-klorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfitt og avdampet under redusert trykk. Resten ble renset ved preparativ silikagel-tynnskiktskromato-grafering (løsningsmiddel: kloroform/metyl-alkohol =

5/1, volum) ttil å gi 55 mg (2RS, 3S)-3-{N-[2-(1-naftyl-metyl )- 3-(morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidyl}amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmøresyre-isopropyl-ester med en

Rf2~verdi på 0,50 i form av et hvitt pulver.

Smp.: 103 - 106°C

Rf^- 0,60

Rf2: 0,50

MS: MH<+>, 690

Eksempel 2

( 2RS, 3S)- 3- N-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl) - propionyl]- L- histidyl amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-N- isobutylbutyramid (Forbindelse B)

Til en løsning av 100 mg N-[2-(1-naftylmetyl)-3-morfolinokarbonyl ) propionyl ] -L-histidinmetyl-ester i 5 ml metyl-alkohol ble det tilsatt 0,42 ml av en IN vandig natrium-hydroksyd-løsning under omrøring og avkjøling på is,

hvorpå blandingen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk. Resten, 61 mg (2RS, 3S-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-N-isobutylbutyramid-hydroklorid og 43 mg 1-hydroksybenzotriazol ble oppløst i 5 ml N,N-dimetylformamid, hvorpå det til løsningen ble tilsatt 48 mg dicykloheksylkarbodiimid under omrøring og avkjøling på is. Blandingen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk og til resten ble det tilsatt en 5% vandig natriumbikarbonat-løsning. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat og etylacetat-laget ble vasket med en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Resten ble renset ved preparativ silikagel-tynnskiktskromatografering (løsningsmiddel: kloroform/ metylalkohol = 5/1, volum) til å gi 6,5 mg (2RS, 3S)-3-{N-[2-(1-naftylmetyl)-3-morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidyl\ amino-4-cykloheksyl-2-hydroksy-N-isobutylbutyramid i form av et hvitt pulver.

Smp. : 119 - 125°C

Rf1: 0,54

Rf2: 0,41

MS: MH<+>, 70 3

Eksempel 3

( 2RS, 3S)- 3- tN-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl) propionyl]- L- histidylfr amino- 4- cykloheksyl- 2-hydroksysmørsyre- cyklopentyl- ester (Forbindelse C)

Til en løsning av 100 mg N-[2-(1-naftylmetyl)-3-morfolinokarbonyl)propionyl]-L-histidylmetyl-ester i 1 ml metyl-alkohol ble det tilsatt 0,20 ml av IN vandig natrium-hydroksyd-løsning under omrøring og avkjøling på

is. Blandingen ble omrørt i 1 time under avkjøling på

is og deretter omrørt i 14 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk.

Til en løsning av resten og 55 mg (2RS, 3S)-3-amino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-cyklopentyl-ester-hydroklorid i 2 ml N,N-dimetylformamid ble det tilsatt 0,046 ml difenylfosforyl-azid og 0,030 ml trietylamin under omrøring og avkjøling på is hvorpå blandingen ble omrørt i 14 timer under avkjøling på is. Reaksjonsblandingen ble avdampet under redusert trykk og en 5% vandig natriumbikarbonat-løsning ble tilsatt til resten. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat og etylacetat-laget ble vaset med en mettet vandig natriumklorid-løsning, tørket over vannfritt magnesiumsulfat og avdampet under redusert trykk. Resten ble renset ved preparativ silikagel-tynnskikts-kromatografering (løsningsmiddel: kloroform/metylalkohol = 5/1, volum) til å gi 41 g (2RS, 3S)-3-{N-[2-(1-naftyl-metyl) -3- (morf olinokarbonyl) propionyl] -L-histidyl} arnino-4-cykloheksyl-2-hydroksysmørsyre-cyklopentyl-ester med en Rf2_ verdi på 0,58 i form av et hvitt pulver.

Smp.: 95 - 100°C

Rf1: 0,59

Rf 2*. 0,58

MS: MH<+>, 716

Eksempel 4

Følgende forbindelser er fremstilt på analog måte som beskrevet i eksempel 3.

( 2R, 3S)- 3- fN-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)-propionyl ] - L- histidyl][ amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-smørsyre- isopropyl- ester (Forbindelse D)

Hvitt pulver

Smp.: 99 - 104°C

Rf1: 0,60

Rf2: 0,50

MS: MH<+>, 69 0

( 2RS, 3S)- 3- f-[ 2-( 1- naftylmetyl)- 3-( morfolinokarbonyl)-propionyl]- L- histidyl^ amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-smørsyre- cykloheksyl- ester (Forbindelse E)

Hvitt pulver

Smp. : 110 - 115°C

Rf1: 0,59

Rf2: 0,58

MS: MH<+>, 7 30

4-[( 2RS, 3S)- 3- fN-[ 2-( l- naftylmetvl)- 3- morfolinokarbonyl) propionyl]- L- histidylfr amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-butyryl] morfolin (Forbindelse F)

Hvitt pulver

Smp.: 118 - 125°C

Rfx:0,57

Rf2: 0,51

MS: MH<+>, 717

( 2RS, 3S) - 3- lN-[ 2- ( 1- naf tylmetyl) - 3- ( morf olinokarbonyl) - propionyl]- L- histidyl) amino- 4- cykloheksyl- 2- hydroksy-smørsyre- 1, 3- difluor- 2- propy1- ester (Forbindelse G)

Hvitt pulver

Smp.: 116 - 122°C

Rf1: 0,57

Rf2: 0,53

MS: MH<+>, 726

Test-eksempel 1

Inhiberende effekt på human renin- saue- reninsubstrat-reaksions- system in vitro

Til en blanding av 200/ul av en 125 mM pyrof osf at-buf f er (pH 7,4) inneholdende 5 mM EDTA • 2Na og 0,1% neomycin-sulfat, 25 pl av en 20 mM L-fenylalanyl-L-alanyl-L-prolin som en angiotensin-omdannende enzym-inhibitor, 50 pl halvrenset saue-renin-substrat (2000 ng angiotensin I:eq./ml), 50 pl dimetyl-sulfoksyd-løsning av et aminosyrederivat av den foreliggende oppfinnelse og 150 pl ione-fritt vann ble det tilsatt 25 pl renset humant renin (20-30 ng angiotensin I/ml/t). Blandingen ble inkubert i 15 min. i et vannbad ved 37°C og reaksjonsblandingen fikk stå 5 min. i vannbadet ved 100°C for å stoppe reaksjonen. Etter avkjøling, ble 200 pl av løsningen tatt opp og mengden angiotensin I som var dannet ved tilsetting av renin ble bestemt ved radioimmunoassay ved anvendelse av renin-"riabead"-kit (DAINABOT).

Den inhiberende effekt ble beregnet ved følgende formel.

Som en kontroll, ble den ovennevnte fremgangsmåten gjennomført ved anvendelse av 50 pl ren dimetylsulfoksyd i stedet for 50 ul dimetylsulfoksyd-løsning inneholdende en aminosyre-forbindelse i henhold til oppfinnelsen.

Den molare konsentrasjonen som frembringer en 50% inhibering (IC^q) ble beregnet fra de oppnådde inhiberings-verdiene, og resultatene er vist under.

Test-eksempel 2

Renin- inhiberende effekt i et humant plasma med høy renin- konsentraslon

Til en blanding av 350 pl av en 0,5 M fosfatbuffer

(pH 7,0) inneholdende 14 mM EDTA • 2Na og 0,3% neomycin-sulfat, 50 pl av en 20 mM L-fenylalanyl-L-alanyl-L-prolin som en angiotensin-omdannende enzym-inhibitor og 100 pl dimetyl-sulfoksyd-løsning inneholdende et aminosyrederivat i henhold til oppfinnelsen, ble det tilsatt 500 pl humant plasma med høy renin-konsentrasjon. 200/ul av blandingen ble plassert i et isbad ved 4°C og resten av blandingen (800 pl) ble inkubert i 60 min. ved 37°C i et vannbad. 200 pl av den inkuberte restblandingen ble avkjølt strakts i et isbad og mengden (A) fremstilt angiotensin I ble bestemt ved radioimmunoassay ved anvendelse av renin-"riabead"-kit (DAINABOT).

Mengden (B) angiotensin I i blandingen som var plassert i isbad ved 4°C ble også bestemt ved hjelp av radioimmunoassay .

Som kontroll, ble den samme fremgangsmåten som nevnt over gjennomført ved anvendelse av 100 pl rent dimetylsulfoksyd i stedet for 100 pl dimetylsulfoksyd-løsning inneholdende en aminosyre-forbindelse i henhold til oppfinnelsen.

Netto mengde ble beregnet som forskjellen mellom A og B.

Den inhiberende effekt ble beregnet ved hjelp av følgende formel.

Den molare konsentrasjon som frembragte en 50% inhibering (IC^q) ble beregnet fra de oppnådde inhiberings-verdiene og resultatene er vist i det følgende.

Test-eksempel 3

Renin- inhiberende effekt i plasma på vanlig marmosett

Forsøket ble gjennomført ved anvendelse av vanlig marmosett som beskrevet i K.G. Hofbauer et al., Clinical and Experimental hypertension, bind. A5, nr. 7 & 8 (1983), sidene 1237-1247.

Furosemid ble tilført oralt tre ganger til en vanlig marmosett som hadde en saltfattig diett på 15 mg pr. kg pr. dag de andre dagene for å oppnå et høyt renin-nivå. Forsøket ble gjennomført den tredje dagen etter den siste furosemid-dosen.

Måling

Bevisste hun- og han-marmosetter som veide fra 335 til 375 g ble plassert i små stoler hvor de ble holdt fast, hvorpå man ved anvendelse av et kateter i den femorale arterien tok blodprøver ved intervallene 20, 40, 60, 120, 180 og 300 min.

Blodprøvene ble sentrifugert ved 1200 g i 15 min, ved 4°C. 200 ul plasma ble tatt ut og inkubert i 60 min. ved 37°C og plasma-renin-aktiviteten ble målt ved hjelp av radioimmunoassay under anvendelse av renin-"riabead"-kit

(DAINABOT).

Forbindelse A i henhold til oppfinnelsen ble oppløst i fortynnet saltsyre og tilført oralt i en enhetsdose på

30 mg/kg ved anvendelse av et kateter.

De oppnådde resultatene er vist i det følgende.

Test-eksempel 4

Hypoentensiv effekt i marmosett

Forsøket ble gjennomført ved anvendelse av vanlig marmosett som beskrevet i K.G. Hofbauer et al.,

Clinical and Experimental Hypertension, bind A5, nr.

7 & 8 (1983), sidene 1237-1247.

Furosemid ble tilført oralt tre ganger til vanlige marmosetter i en dose på 15 mg pr. kg. pr. dag hver annen dag for å danne et høyt renin-nivå. Blodtrykket hos de bevisste marmosettene ble målt den tredje dag etter den siste furosemid-dosen.

Måling av blod-trykk.

En bevisst han-marmosett som veide 460 g ble plassert i en liten stol hvor den var bundet fast. Blodtrykket ble målt ved hale-mansjett-metoden under anvendelse av en pretismograf. Forbindelse C ble oppløst i fortynnet saltsyre og tilført oralt i en dose på 30 mg/kg ved anvendelse av et kateter.

De oppnådde resultatene er vist i det følgende.

Claims

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et aminosyrederivat med formel (I):

hvori His er en L-histidyl-gruppe, X er en rettkjedet eller forgrenet alkoksy-gruppe med 1 til 7 karbonatomer, en rettkjedet eller forgrenet alkylamino-gruppe med 1 til 7 karbonatomer, en cykloalkoksy-gruppe med 3 til 7 karbonatomer eller en morfol ino-gruppe, idet ovennevnte alkoksy-gruppe har en eller flere halogenatomer som substituenter, eller farmasøytisk tålbare salt derav, karakterisert ved(a) en forbindelse med formel (II):

hvori (S) er S-konfigurasjon, omsettes med en forbindelse med formel (III):

hvori X har den samme betydning som angitt over, eller (b) en forbindelse med formel (IV):

hvori (S) har samme betydning som angitt over, omsettes med en forbindelse med formel (III) som angitt over i nærvær av et kondenseringsmiddel.