NO892441L - Kolestadienderivater, fremgangsmaate for fremstilling derav samt anvendelse derav som legemiddel med hmg-coa-reduktase-hemmende virkning. - Google Patents

Abstract

Forbindelse I. med R lik -COOX eller CHOH, hvori X betyr hydrogen eller alkyl, oppviser kolesterol-senkende virkning.Forbindelsen fremstilles ved forestring av forbindelsene III

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører kolestadienderivater, fremgangsmåte for deres fremstilling, samt deres anvendelse som legemiddel med HMG-CoA-reduktase-hemmende virkning.

Det er kjent fra stigmasterol X å fremstille stigmasteroltosylat IX og videre omsette dette til stigmasterylmetyleter VIII. Fra dette syntetiseres deretter det litteraturkjente aldehydet VII.

Intet er imidlertid hittil kjent om den kolesterolsenkende virkningen av slike forbindelser.

Det forelå følgelig behov for å omvandle de kjente forbindelsene på en slik måte at fremragende kolesterolsenkende egenskaper kan oppnås. Dette ble ifølge oppfinnelsen oppnådd med forbindelsene I

hvori R er lik COOX eller -CH2OH, hvori X betyr hydrogen eller rettkjedet eller forgrenet (C^-Cg)-alkyl. Foretrukket er forbindelser av formel I med X lik (C1-C4)-alkyl. Spesielt foretrukket er forbindelseer I hvori X utgjør en CH3~gruppe. Foretrukket er videre forbindelsene I hvori R betyr en-CH20H-gruppe.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen fremstilles ifølge nedenstående reaksjonsskjerna:

Ved omsetning av stigmasterol X med p-toluensulfonsyreklorid i pyridin ved romtemperatur oppnår man stigmasteroltosylat IX, som videreomsettes i vannfri metanol i nærvær av vannfritt natriumacetat ved tilbakeløpstemperatur til stigmasterylmetyleter VIII (E. Mosettig, J.A. Steel J. Org. Chem. 28 (1963), 571-572). Den etterfølgende ozonolysen av metyleteren av formel VIII i vannfri metylenklorid ved -78"C gir etter opparbeidelse aldehydet av formel VII (R.F.N. Hutchins, M.f. Thompson, J.A. Svoboda, Steroids 15 (1970) 113-130). Fra fosfoniumbromid etter formel Via (fremstilt fra dioksolan etter formel VIb i en oppløsningsmiddelblanding av vannfri benzen og vannfritt cykloheksan med trifenylfosfin ved tilbakeløpstemperatur) oppnås i vannfri tetrahydrofuran i nærvær av kalium-t-butanolat som base ved -10°C til -25°C, ylidet av formel VI, som direkte reagerer videre med tilsatt aldehyd av formel VII ved 0°C til dioksolanderivat av formel V. Dette gir i en aceton/vannblanding etter tilsats av p-toluensulfonsyre ved tilbakeløpstemperatur, aldehydet av formel IV.

Aldehydet av formel IV kan fremstilles fra dioksolan av formel II i nærvær av p-toluensulfonsyre i en aceton/vann-blanding ved tilbakeløpstemperatur. Dioksolanet av formel II oppnås ved omsetning av dioksolan av formel V med p-toluensulfonsyre i en aceton/vannblanding ved romtemperatur. Aldehydet av formel IV oksyderes deretter i t-butanol ved romtemperatur med natriumkloritt til karboksyl syre av formel III. Fra karboksylsyren med formel III fremstilles i vannfri tetrahydrofuran med en eter-diazometanoppløsning ved 0°C forbindelsen med formel I med R lik -COOX, hvori X betyr en CH3-gruppe.

Denne forbindelsen I kan reduseres med 1 itiumaluminiumhydrid i vannfri tetrahydrofuran ved tilbakeløpstemperatur, til en forbindelse av formel I med R lik CH20H.

En alternativ fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsen av formel I med R lik -CH2OH beståri å redusere aldehydet med formel IV i vannfri eter med litiumaluminiumhydrid ved tilbakeløpstemperatur.

Enzymet HMG-CoA-reduktase er vidt utbredt i naturen. Det katalyserer dannelsen av mevalonsyre fra HMG-CoA. Denne reaksjonen er et sentralt trinn i kolesterol-biosyntesen (I.R. Sabine, "3-hydroksy-3-metylglutaryl Coenzym A Reduc-tase", CRCD Press, 1983). Høye kolesterolspeil forbindes med en rekke sykdommer, som f.eks. koronar hjertesykdom eller aterosklerose. Følgelig er senkningen av det forhøyede kolesterolspeil et terapeutisk mål for forebyggelse og behandling av slike sykdommer. Et angrepspunkt ligger i hemningen hhv. reduksjonen av den endogene kolesterol-syntesen. Hemmestoffer for HMG-CoA-reduktasen blokkerer kolesterol-biosyntesen på et tidlig trinn. Det egner seg derfor til forebyggelse og behandling av sykdommer som er forårsaket av et forhøyet kolesterolspeil. En reduksjon hhv. forminskelse av den endogene syntesen fører til et forhøyet opptak av kolesterol fra plasma i cellene. En ytterligere effekt kan oppnås ved samtidig tilførsel av gallesyre-bindende stoffer, som anionbyttere. Den forhøyede galle-syreutskillelsen fører til en forsterket nysyntese og dermed til en forøket kolesterolnedbrytning (M.S. Brown, P.T. Kovanen, J.L. Goldstein, Spektrum der Wissenschaften 1985 (1), 96). Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er hemmestoffer for HMG-CoA-reduktase. De egner seg derfor for hemning hhv. reduksjon av kolesterol-biosyntesen, og dermed til forebyggelse eller behandling av sykdommer som er forårsaket av forhøyede kolesterolspeil, spesielt koronar hjertesykdom, Atherosklerose, Hypokolesterolemi, Hypolipoproteinemi o.l. sykdommer.

Oppfinnelsen vedrører følgelig også farmasøytiske preparater på basis av forbindelsene av formel I, samt anvendelsen av disse forbindelsene som legemiddel, spesielt for behandling av Hypokolesterolemi.

Forbindelsen av formel I administreres i forskjellige doseringsformer, fortrinnsvis oralt i form av tabletter, kapsler eller væsker. Den daglige dosen varierer avhengig av kroppsvekt og konstitusjon for pasienten innenfor området fra 3 mg til 2500 mg, fortrinnsvis i doseområdet 10-500 mg. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan komme til anvendelse oppløst eller suspendert i farmakologisk godtagbare organiske oppløsningsmidler, som en- eller flerverdige alkoholer, som f.eks. etanol eller glycerol, i triacetin, oljer som f.eks. solsikkeolje, levertran, etere, som f.eks. dietylenglykol-dimetyleter eller også polyetere som f.eks. polyetylenglykol, eller også i nærvær av andre farmakologisk godtagbare polymerbærere, som f.eks. polyvinylpyrrolidon, eller andre farmasøytisk godtagbare tilsatser så som stivelse, cyklo-dekstrin eller polysakkarider. Videre kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen kombineres med tilsatsstoffer som binder gallesyrer, spesielt ikke-toksiske, basiske anionbytterhar-pikser, som binder gallesyre i en ikke-resorberbar form i gastrointestinalkanalen.

Undersøkelse av kolesterol-biosyntese-hemning i cellekultur med<l>^C-forløperinnbygning i kolesterol.

Prinsipp for fremgangsmåtene

Monolag av HEP G2-celler i 1ipoproteinfritt næringsmedium ble forinkubert med aktuelle konsentrasjoner av stoffene som skulle undersøkes i 1 time; etter tilsats av den<l4>C-merkede forløperen -^C-natriumacetat ble inkubert fortsatt i 3 timer. Deretter ble en del av cellene alkalisk forsåpet ved forutgående tilsats av en indre standard av<3>H-kolesterol. Lipidene av de forsåpede cellene ble ekstrahert med kloro-form-metanol. Denne 1ipidblandingen ble etter tilsats av bærer-kolesterol adskilt ved preparativ tynnsjiktkromato-grafi, kolesterol-båndene ble isolert etter synliggjørelse med joddamp, og den fra ^^C-forløperen dannede mengden 1^C-kolesterol ble bestemt szlntlgrafisk. I en del av cellene ble celleprotelnet bestemt, slik at den i tidsenheten/mg celleproteln fra l^C-forløperen dannede mengden ^<4>C-kolesterol kunne beregnes. Som sammenligning for hemmevirkningen av et tilsatt undersøkelsespreparat tjente oppløsningsmid-delkontrollen, slik at hemningen av kolesterol-biosyntesen kan angis direkte ved en bestemt molarkonsentrasjon av undersøkelsespreparatet i mediet. I like store andeler av cellekulturen ble intaktheten av cellekulturene og den manglende cellebeskadigelsen ved preparat-innvirkning bedømt morfologisk (lysmikroskop).

Fremstilling av utgangsmaterialer

Eksempel 1

3P-(p-tosyloksy)-24(R)-etyl-kolesta-5,22t-dien (IX)

Summeformel:<C>36<H>54O3S Molekylvekt: 566,89 g/mol

For syntese av Stigmasterol-tosylatet IX er det anbefaleses-verdig på forhånd å omkrystallisere p-toluensulfonsyre-kloridet som skal anvendes fra lavtkokende petroleumseter (kp.: 35-60°C).

82,56 g (0,2 mol) Stigmasterol X oppløses sammen med 99,12 g (0,52 mol) p-toluensulfonsyreklorid i 1120 ml absolutt pyridin. Oppløsningen får stå i mørke i 16 timer, og tilsettes deretter forsiktig i 5,6 1 av en iskald og mettet

vandig natriumhydrogenkarbonatoppløsning (forsiktig: eventuelt sterk skumdannelse). Det dannede fargeløse bunnfallet frasuges og vaskes grundig med iskaldt vann og litt iskald metanol. Etter tørking i vakuum omkrystalliseres fra absolutt aceton.

Utbytte: 111,34 g (0,1964 mol; 98,2# av teoretisk) 3p-(p-tosyloksy )-24(R)-etyl-kolesta-5,22t-dien IX

Fargeløse nåler, fp.: 144-146"C.

Elementæranalyse

IR-spektrum (Presset KBr) <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13 Optiske dreieverdier (c = 1,6613 i CHC13; T = 25°C) 1-H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 125°C)

M<+>(ber.): 566,3794 g/mol

Eksempel 2 3cx, 5a-cyklo-6p-metoksy-24 (R )-etyl-kolest-22t-en (VIII )

Summeformel: C3Q<H>50<O>Molekylvekt: 426,73 g/mol

56,70 g (0,10 mol) 3p-(p-tosyloksy)-24(R)-etyl-kolesta-5,22t-dien IX suspenderes sammen med 61,5 g (0,75 mol) vannfritt natriumacetat i 2250 ml absolutt metanol. Etter 3,5 timers oppvarming under tilbakeløp oppløses suspensjonen fullstendig. For avslutning av reaksjonen avdestilleres metanol, og den gjenværende hvite resten blandes med 1000 ml vann og 1000

ml eddikester. Den organiske fasen fraskilles, vaskes med natriumhydrogenkarbonatoppløsning og vann og tørkes over magnesiumsulfat. Etter fjernelse av oppløsningsmidlet i vakuum oppnår man produktet som fargeløs seig olje (40,25 g) som er tilstrekkelig ren for de videre reaksjonene. Stoffet krystalliseres ved lengre tids henstand i form av fargeløse romber.

Utbytte: 40,25 g (0,094 mol; 94$ av teoretisk) 3a,5p-cyklo-6p<->metoksy-24(R)-etyl-kolest-22t-en VII

En rensing for analytisk karakterisering kan foregå ved preparativ sjiktkromatografi (PSC) (kiselgel; cykloheksan/- eddikester: 20/1) (rf: 0,81-0,88) med etterfølgende omkrys-tallisasjon fra absolutt aceton. Man oppnår fargeløse nåler med et smeltepunkt på 56-58°C.

IR-spektrum (Presset KBr )

Optiske dreieverdier (c = 2,91 i CHC13; T = 25°C) 1-H-NMR-spektrum (300,13 MHz) 1 CDC13

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 80°C) M<+>(ber.): 426,3862 g/mol

<13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13 13C-<1>H-NMR-korrelasjonsspektrum (CDC13 ) Elementæranalyse Eksempel 3 2a,5a-cyklo-6e-metoksy-pregnan-20(S)-karbaldehyd (VII)

Summeformel:<C>23<H>35<O>2Molekylvekt: 344,54 g/mol

8,05 g (ca. 0,018 mol) av den rå 3a, 5a-cyklo-6p-metoksy-24(R)-etyl-kolest-22t-en VIII oppløses i 300 ml absolutt metylenklorid og avkjøles til -78°C. Gjennom denne opp-løsningen føres det inntil tydelig blåfarging ozon (Fischer Ozongenerator; 02ca. 40 l/time; U = 180 V; I = 2,4 A; Ozoninnhold ca. 60 mg/l svarende til 0,05 mol/time). Etter avslutning av ozonolysen foregår tilsats av 14,8 ml (12,5 g; 0,20 mol) dimetylsulfid ved -78°C. Deretter får reaksjonsblandingen oppvarmes til romtemperatur iløpet av 3 timer. Det vaskes så etter hverandre med 200 ml vann, 200 ml mettet natriumhydrogenkarbonatoppløsning og 100 ml mettet natrium-kloridoppløsning og tørkes over vannfritt natriumsulfat. Etter avfiltrering av tørkemidlet, avdestilleres oppløsnings-midlet på rotasjonsfordamper i ca. 12 Torr. Deretter følger en 45-minutters tørking ved 0,1 Torr.

Det oppnås 6,0 g (ca. 0,017 mol; ca. 94$) rått 3a,5a-cyklo-6p<->metoksy-pregnan-20(R)-karbaldehyd VII som fargeløs selg olje. Aldehydet viser tendens til isomerisering ved C-20 og til oksydasjon ved C-21, slik at en øyeblikkelig videre bearbeidelse bør foretas. Av samme grunn er en rensing ikke anbefalelsesverdi; en karakterisering foregikk bare NMR-spektroskopisk på relativt rent råprodukt.

En alternativ opparbeidelsesfremgangsmåte består i tilsats av 9,4 g sinkstøv, 23,5 g iseddik og 15,0 g vannfritt kaliumklo-rid etter avsluttet ozonolyse. Etter 1 times reaksjon, filtreres reaksjonsblandingen og vaskes syrefri med 200 ml iskaldt vann og 100 ml natriumhydrogenkarbonat; en utristing med 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning følger deretter. Metylenkloridoppløsningen tørkes over vannfritt natriumsulfat; deretter fjernes oppløsningsmidlet under redusert trykk (ca. 12 Torr) på rotasjonsfordamper. For fullstendig fjernelse av oppløsningsmidlet tørkes det ytterligere ca. 45 minutter i vakuum ved 0,1 Torr. Ved samme utbytte oppnås her råproduktet noe renere.

irl-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13

<13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13 Eksempel 4 3a , 5a-cyklo-6p-metoksy-24-(1',3'-dioksolan-2'-yl)-kol-22c-en (V)

Summeformel: C28H44O3Molekylvekt: 428,66 g/mol

13,305 g (0,03 mol) tørt og finpulverisert 2-(1',3'-dioksolan-2 ' -yl )-etyl-trlfenylfosfonium'bromid (Via) suspenderes i 100 ml vannfri THF og ved -10°C blandes langsomt 60 ml med en 0,5 molar oppløsning av kalium-t-butanolat (0,03 mol) i vannfritt THF. Den orangefargede ylid-oppløsningen omrøres ved -25°C i maksimalt 30 minutter, og ved denne temperaturen tilsettes en oppløsning av nyfremstilt 6,89 g (0,02 mol) 3a,5a-cyklo-6e-metoksy-pregnan-20(S)-karbaldehyd (VII) i 100

ml vannfri THF. Etter avsluttet tilsats oppvarmes det til 0°C, og det omrøres i 6 timer ved denne temperaturen. For opparbeidelse tilsettes det til den resulterende suspensjonen 50 ml iskaldt vann og 100 ml eter; etter fraskillelse av den organiske fasen og fjernelse av oppløsningsmidlet, ekstraheres den gjenværende klartgule resten minst 4 ganger med totalt 500 ml pentan. Etter at pentanoppløsningen er tørket over vannfritt natriumsulfat og deretter filtrert, fjernes oppløsningsmidlet først under redusert trykk (ca. 12 Torr) på rotasjonsfordamper og deretter i vakuum ved 0,1 Torr.

Man oppnår ca. 7,4 g av det rå kondensasjonsproduktet (V), som for de fleste etterfølgende reaksjonene er tilstrekkelig rent. En analytisk prøve oppnås ved PSC (kilselgel; cykloheksan/eddikester: 4/1; Rf: 0,56-0,68). Produktet oppstår som seig olje; andelen av ren cis-isomer er større enn 90%.

IR-spektrum (Presset KBr)

Int. Svingning

2990 cm-<1>s C-H Val.-sving.

1710 cm-<1>s -CH=CH- (cis)

1650 cm"<1>m cyklopropan-ring

1430 cm-<1>s -CH3, -CH2-

790 cm-<1>m =CH-

<i>H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13

Optiske dreieverdier (c = 5,3238 i CHCI3; T = 25'C) <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDCI3 Elementæranalyse

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 80"C)

M<+>(ber.): 428,3290 g/mol

Eksempel 5 3f3-hydroksy-24-(l' , 3 '-dioksolan-2 ' -yl )-kola-5 , 22c-dien

Summeformel: C27<H>42<O>3Molekylvekt: 414,63 g/mol

Den selektive syrekatalyserte åpningen av cyklopropansystemet i steroid-A-ringen oppnås ved 20 timers omsetning ved romtemperatur av 4,29 g (0,01 mol) 3a,5a-cyklo-6p-metoksy-24-(1',3'-dioksolan-2'-yl)-kol-22c-en (V) med 1,4 g (7,0 mmol) p-toluensulfonsyre i en oppløsningsmiddelblanding av 150 ml aceton og 20 ml vann. Etter avslutning av reaksjonen inndampes oppløsningsmidlet ved romtemperatur i vakuum til 20% av sitt volum, helles 1 isvann og ekstraheres med eddikester. Eddikesteroppløsningen fraskilles, og vaskes etter hverandre med 100 ml vann, 50 ml mettet natrium-hydrogenkarbonatoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning. Etter tørking av den organiske oppløsningen over vannfritt magnesiumsulfat, fraf Utreres det; oppløsningsmidlet fjernes under redusert trykk (12 Torr) på rotasjonsfordamper og deretter ved 0,1 Torr i vakuum. Det oppnådde seige råproduktet renses ved hjelp av PSC (kiselgel; cykloheksan/eddikester: 2/1; Rf: 0,28-0,37).

Utbytte: 3,6 g (8,64 mmol, 8b% av teoretisk) 3e-hydroksy-24-(1' ,3'-dioksolan-2'-yl)-kola-5,22c-dien (II).

Frysepunkt: 90-91'C (etter PSC)

Elementæranalyse

IR-spektrum (Presset KBr)

l-H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13 Optiske dreieverdier (c = 1,6613 i CHCI3; T = 25°C) <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDCI3

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 90°C)

M<+>(ber.): 414,3134 g/mol

Eksempel 6 3e-hydroksy-26,27-Msnor-kolesta-5,23t-dlen-2 5-al (IV)

Summeformel: C^s^gC^ Molekylvekt: 370,58 g/mol

a):

4,29 g (0,01 mol) 3a , 5a-cyklo-63-metoksy-24-(1' , 3 '-doksolan-2'-yl)-kol-22t-en (V) oppløses i 180 ml aceton, blandes med en oppløsning av 1,90 g (0,01 mol) p-toluensulfonsyre i 70 ml vann og oppvarmes i 24 timer under tilbakeløp. Etter fjernelse av acetonet blandes det med eddikester. Eddikester-oppløsningen av aldehydet IV vaskes først syrefri med mettet natriumhydrogenkarbonatoppløsning og utristes deretter med 50 ml vann og 50 ml mettet natr iumkloridoppløsning. Etter tørking over vannfritt natriumsulfat frafiltreres tørkemidlet og oppløsningsmidlet fjernes på rotasjonsfordamper ved redusert trykk (ca. 12 Torr); deretter følger en 30 minutters ettertørking i vakuum (0,1 Torr). Det oppnådde produktet er tilstrekkelig for de følgende reaksjoner.

Utbytte: 3,41 g (0,0092 mol; 92* av teoretisk) IV.

b):

4,15 g (0,01 mol) 3f3-hydroksy-24-(l' , 3'-dioksolan-2'-yl)-kola-5,22c-dien (II) oppløses i 150 ml aceton, blandes med en oppløsning av 1,60 g (0,008 mol) p-toluensulfonsyre i 80 ml vann og oppvarmes i 16 timer under tilbakeløp. Etter fjernelse av acetonet blandes det med eddikester og det opparbeides som beskrevet under a). Det oppnådde produktet er tilstrekkelig rent for de etterfølgende reaksjonene.

Utbytte: 3,56 g (0,0096 mol; 96* av teoretisk) IV.

En analytisk prøve oppnås ved PSC (kiselgel; cykloheksan/- eddikester: 2/1; Rf: 0,38-0,45 ) og omkrystal11 sasjon fra dietyleter.

Frysepunkt: 108-109°C (dietyleter)

IR-spektrum (Presset KBr)

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 110°C) M<+>(ber.): 370,2872 g/mol <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13 <1>H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDCI3 Optiske dreieverdier (c = 2,3814 i CHC13; T = 25°C) Elementæranalyse Eksempel 7 3e-hydroksy-kola-5,23t-dien-24-karboksylsyre III

Summeformel: 035113303 Molekylvekt: 386,58 g/mol

En oppløsning av 3,71 g (0,01 mol) 3p-hydroksy-26,27-bisnor-kolesta-5,23t-dien-25-al (IV) i 55 ml t-butanol blandes med 2,95 g (9,4 mmol) 2-metyl-2-buten. Til denne oppløsningen tilsetter man 1,86 g (16,4 mmol) natriumklorit (80*, teknisk) i 7 ml vann og 4,82 g (35 mmol) natriumdihydrogenfosfat i 6 ml vann; deretter omrøres det ved romtemperatur i 48 timer. For opparbeidelse blander man suspensjonen med 5* saltsyre inntil tydelig sur reaksjon. Det organiske oppløsningsmidlet fjernes under redusert trykk (12 Torr) på rotasjonsfordamper; den resulterende vandige resten ekstraheres med 100 ml eddikester. Etter vasking av den fraskilte organiske fasen med 100 ml vann, 50 ml natriumhydrogenkarbonatoppløsning og 50 ml natriumkloridoppløsning tørker man over vannfritt magnesiumsulfat. Tørkemidlet frafUtreres og det organiske oppløsningsmidlet fjernes først på rotasjonsfordamper (ved ca. 12 Torr), deretter i vakuum ved 0,1 Torr. Det isolerte råproduktet er tilstrekkelig rent for de videre omsetningene. Utbytte: 3,64 g (0,0094 mol, 94* av teoretisk)

3g<->hydroksy-kola-5,23t-dien-24-karboksylsyre (III)

En analytisk prøve oppnås ved PSC (kiselgel; cykloheksan/- eddikester = 1/1, Rf: 0,22-0,45 ) og omkrystal1 i sasjon fra eddikester.

Frysepunkt: 98-101°C (eddikester)

Elementæranalyse

IR-spektrum (Presset KBr)

Massespektrum (CH-7, 70 eV, T: 100°C)

M<+>(ber.): 386,2821 g/mol

irl-NMR-spektrum (300,13 MHz) i DMS0-d6 <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i DMSO-d6/metanol-d4T: 35°C Optiske dreieverdier (c = 2,0102 i metanol, T = 25°C) Eksempel 8 1-(1',3'-dioksolan-2'-yl)-etyl-tri fenyl-fosfoniumbromid Via

Summeformel: C23<H>24Br02P Molekylvekt: 443,32 g/mol

I en oppløsningsmiddelblanding av 150 ml vannfri benzen og 60 ml vannfri cykloheksan oppvarmer man 90,52 g (0,5 mol) nydestillert fargeløs 2'-(2-brometyl)-l',3'-dioksolan VIb og 196,7 g (0,75 mol) trifenylfosf in 60 timer under tilbakeløp; fosfoniumsaltet utfelles derved som svakt gul, meget seig olje. Etter avkjøling av reaksjonsblandingen avdekanteres den benzenholdige oppløsningen fra reaksjonsproduktet, og deretter vaskes det for rensing ytterligere 2 ganger, hver gang med 100 ml varm benzen.

Saltet er sterkt hydroskopisk (flyter bort i luft) og krystalliseres etter flere dagers tørking under vakuum i eksikkator over fosforpentoksyd. Man oppnår meget rent 2-(1',3'-dioksolan-2'-yl)-etyl-trifenylfosfoniumbromid Via som hvitt pulver.

Utbytte: 42,7 g (0,0962 mol; 96,2* av teoretisk)

En ytterligere rensing er vanskelig p.g.a. den sterkt vanntiltrekkende oppførselen av produktet. Oppbevaringen bør foregå under vakuum i eksikkator.

Denne syntesen foregår analogt fremgangsmåten beskrevet av J.C. Stowell og D.R. Keith i Synthesis (1979), side 132-133, Georg Thieme Verlag.

IR-spektrum (Presset KBr )

<1>H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13 <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13

Eksempler ifølge oppfinnelsen

Eksempel 8

3p<->hydroksy-kola-5,23t-dien-24-karboksylsyre-metylester I

Summeformel:<C>26<H>40<O>3Molekylvekt: 400,61 g/mol

En oppløsning av 8,72 g (0,02 mol) 3p<->hydroksy-kola-5,23t-dien-24-karboksylsyre (III) i 100 ml vannfri THF blandes ved 0°C under omrøring med en diazometan-eteroppløsning.

Etter en reaksjonstid på 3 minutter fjernes overskytende diazometan ved 0°C ved tilsats av 25* eddiksyre (oppløsnin-gen ble fargeløs). Etter vasking med mettet natriumhydrogen-karbonatoppløsning inntil nøytral reaksjon, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning tørkes det over vannfritt magnesiumsulfat. Tørkemidlet frafiltreres og THF fjernes under redusert trykk først på rotasjonsfordamper (12 Torr) og deretter i vakuum ved 0,1 Torr. Man oppnår metylesteren som er tilstrekkelig ren for ytterligere omsetning. PSC (kiselgel, cykloheksan/eddikester: 1/1; Rf: 0,80-0,89) gir en analytisk ren prøve.

Utbytte: 7,66 g (0,019 mol, 95* av teoretisk) 3P-hydroksy-kola-5,23t-dien-24-karboksylsyre-metylester (I) som fargeløs olje, som langsomt krystalliserer ved lengre henstand. Frysepunkt: 52-55<0>C (ifølge PSC).

IR-spektrum (Presset KBr)

<1>H-NMR-spektrum (300,13 MHz) i CDC13

Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 110°C)

M<+>(ber.): 400,2977 g/mol

Optiske dreieverdier (c = 2,2062 i CHC13; T = 25'C) <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i CDC13

Elementæranalyse

Kolesterol-biosyntese-hemning

Cellekultur: HEP-G2-celler

Oppløsningsmiddel-sluttkonsentrasjon: 1% DMSO

Eksempel 9 33,25-dihydroksy-26,27-bisnor-kolesta-5,23t-dien I

Summeformel: C25<H>3g<0>2Molekylvekt: 371,59 g/mol

En oppløsning av 5,56 g (0,015 mol) 3p<->hydroksy-26,27-bisnor-kolesta-5,23t-dlen-25-al (IV) i 180 ml absolutt eter blandes med 0,304 g (0,008 mol) 1itiumalumlniumhydrid og oppvarmes i 6 timer til tilbakeløpstemperatur. Etter avsluttet reaksjon hydrolyseres det forsiktig ved 0°C med 5* ammoniumkloridopp-løsning. Etter hydrolysen fraskilles eterfasen og vaskes etter hverandre med 40 ml mettet natriumhydrogenkarbonatopp-løsning, med 50 ml vann og med 25 ml mettet natriumkloridopp-løsning; deretter tørkes det over magnesiumsulfat. For isolering av reaksjonsproduktet frafiltreres magnesiumsulfat, oppløsningsmidlet fjernes først på rotasjonsfordamper under redusert trykk (12 Torr) og deretter i vakuum ved 0,1 Torr. Det oppnådde produktet omkrystalliseres fra heksan/eter. En rensing ved hjelp av PSC er mulig (kiselgel; cykloheksan/- eddikester: 1/1, Rf: 0,32-0,45).

Utbytte: 4,68 g (0,0126 mol; 84* av teoretisk) 33,25-dihydroksy-26,27-bis-nor-kolesta-5,23t-dien (I) Frysepunkt: 166-167°C (eddikester/cykloheksan).

Alkoholen I kan også syntetiseres med utgangspunkt fra 33-hydroksy-24-karboksymetyl-kola-5,23t-dien I: 4,01 g (0,01 mol) 33-hydroksy-24-karboksymetyl-kola-5,23t-dien oppløses i 80 ml vannfri THF, blandes med 253 mg (6,66 mmol) litiumaluminiumhydrid og oppvarmes i 6,5 timer under tilbakeløp. Etter avsluttet reduksjon får blandingen komme til romtemperatur, hydrolyseres med 25 ml 5* saltsyre, blandes med 100 ml eter og den organiske fasen fraskilles. For ytterligere opparbeidelse, vaskes den fraskilte fasen først syrefri med mettet natriumhydrogenkarbonatoppløsning og deretter med 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløs-ning. Etter tørking over vannfri magnesiumsulfat fjernes tørkemidlet. Det organiske oppløsningsmidlet avdestilleres på rotasjonsfordamper; deretter følger en ettertørking i vakuum. Den rene diolen oppnås ved PSC (kiselgel, cykloheksan/eddikester: 1/1, Rf: 0,32-0,45).

Utbytte: 2,90 g (7,8 mmol, 78* av teoretisk) 33,25-dihydroksy-26,27-bisnor-kolesta-5,23t-dien (I).

IR-spektrum (Presset KBr)

<1>H-NMR-spektrura (300,13 MHz) i CDC13 <13>C-NMR-spektrum (75,47 MHz) i metanol-d4 Elementæranalyse Massespektrum (MAT, 70 eV, T: 130°C) M<+>(ber.): 371,2950 g/mol

Optiske dreieverdier (c = 2,9404 i metanol, T = 25°C)

Kolesterol-tiosyntese-hemning

Cellekultur: HEP-G2-celler

Oppløsningsmiddel-sluttkonsentrasjon: 1% DMSO

Claims (6)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse I

med R lik -COOX eller CH2 0H, hvori X betyr hydrogen eller rettkjedet eller forgrenet (C^ -Cg)- alkyl, karakterisert ved at man forestrer en forbindelse av formel III

til I.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at X betyr ( C-L-C4 )-alkyl.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at X betyr CH3 .

4 . Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at R betyr CH2 0H.

5. Anvendelse av en forbindelse I ifølge krav 1 som legemiddel for profylakse og terapi av hypokolesterolemi.

6. Anvendelse av en forbindelse I ifølge krav 1 for fremstilling av et legemiddel for profylakse og terapi av hypokolesterolemi .