PL100028B1 - Preparat do oznaczania antybiotykow,zwlaszcza w artykulach spozywczych - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest preparat sluzacy do wykrywania i oznaczania antybiotyków, który moze byc stosowany w przemysle spozywczym, medycynie, lecznictwie weterynaryjnym itp. Wprowadzenie antybiotyków do leczenia chorób zakaznych ludzi i zwierzat wplynelo zasadniczo na poprawe zdrowotnosci czlowieka i zwierzat hodowlanych. Jednoczesnie powszechne naduzywanie antybiotyków sprawilo, ze w coraz wiekszym stopniu przedostaja sie one do surowców rolnych szczególnie do miesa i mleka, powodujac szkody w produkcji, szczególnie przy wytwarzaniu fermentowanych artykulów spozywczych, jak: sery, maslo, twarogi, niektóre wedliny stwarzajac niebezpieczenstwo dla konsumentów. Stad tez wynika potrzeba badania obecnosci antybioty¬ ków w medycynie weterynaryjnej i przemysle spozywczym.

Biologiczne metody oznaczania antybiotyków, polegaja na okreslaniu wzrostu mikroorganizmu wrazliwego na antybiotyki w obecnosci badanego materialu. Najczesciej stosowana metoda mikrobiologiczna jest metoda dyfuzji na stalym podlozu, w której jako podstawe ukladu testowego stosuje sie podloze odzywcze zawierajace odpowiednie drobnoustroje testowe. Znane i stosowane jest tylko podloze odzywcze i kazdorazowo osobno przygotowuje sie kulture bakterii testowej i dodaje do uprzednio przygotowanego podloza odzywczego w temperaturze nieszkodliwej dla drobnoustrojów testowych.

Natomiast nie znany jest preparat w formie suszonej sluzacy do bezposredniego oznaczania antybiotyków, który zawiera w swoim skladzie równoczesnie podloze odzywcze i utrwalona kulture testowa. Przy stosowaniu Bacillus stearothermophilusjako bakterii testowej stosowane jest podloze odzywcze o skladzie: ekstrakt miesny 0,15% ekstrakt drozdzowy 0,3% pepton z kazeiny 0,6% pepton z miesa 0,1% glukoza 0,1% pH = 7,02 100028 Niedogodnoscia znanych i stosowanych metod dyfuzyjnych oznaczania antybiotyków jest to, ze zakladaja one prowadzenie w kazdym laboratorium hodowli mikroorganizmu testowego: przygotowania jego zawiesiny, jej standaryzacja, odrebne przygotowanie podloza testowego i dodatek do niego mikroorganizmu. W ten sposób przygotowana kulture testowa dodaje sie do uprzednio uplynnionego i sterylizowanego podloza przed zastygnie¬ ciem agaru, co wplywa na wydluzenie czasu analizy i zwiekszenie jej pracochlonnosci wynikajacej z koniecznos¬ ci osobnego kazdorazowego przygotowania kultur testowych.

Celem wynalazku jest uzyskanie trwalego standaryzowanego preparatu w stanie suchym o odpowiednich wlasciwosciach dyfuzyjnych, ze wskaznikiem ulatwiajacym, obiektywizujacym i przyspieszajacym odczyt, który eliminuje czynnosci wstepne wystepujace przy wykrywaniu antybiotyków metoda dyfuzyjna, zwiazanym z przygotowaniem podloza, roztworów wskaznikowych, otrzymania zawiesiny bakterii testowych itp.

Wedlug wynalazku preparat do oznaczania antybiotyków zawiera w swoim skladzie szereg substancji wzrostowych i odzywczych, które po rozpuszczeniu w wodzie wystepuja w nastepujacych stezeniach: hydrolizat bialek 0,5-5% autolizat drozdzowy 0,1—1% glukoza 0,1-1% skrobia rozpuszczalna 0,4% zelatyna 0,4% agar-agar 1% Liofilizat przetrwalników Bacillus stearothermophilus w takiej ilosci, aby 1 mililitr uplynnionego preparatu zawieral nie mniej niz 1X104 sporów, wskaznik zmiany pH w granicach 5—8.

Preparat wedlug wynalazku, który zawiera w swoim skladzie lacznie: podloze dyfuzyjne, bakterie testowe i wskaznik pH umozliwia latwe i szybkie w czasie do 1,5 godzin wykonanie analizy wykrywania antybiotyków metoda dyfuzji na stalym podlozu w laboratoriach kontrolnych. Zwalnia przez to uzytkownika od klopotliwej i pracochlonnej hodowli szczepów testowych, zmniejsza ilosc uzywanego szkla laboratoryjnego, obniza praco¬ chlonnosc analizy, skraca jej czas zachowujac wysoka czulosc, a nawet przewyzszajac w tym wzgledzie znane metody biologiczne. Preparat posiadajacy w swoim skladzie liofilizowany koncentrat sporów Bacillus stearother¬ mophilus umozliwia równoczesne przygotowanie, uplynnianie i jalowienie podloza. Bacillus stearothermophilus w temperaturze 55—60°C rosnie z szybkoscia wystarczajaca do wystapienia widocznych stref zahamowania wzrostu w czasie do 2 godzin.

Przyklad preparatu wedlug wynalazku. Jeden litr podloza testowego zawiera: bulionu miesnego autolizatu drozdzowego glukozy skrobi rozp. zelatyny agar-agar purpury bromokrezolowej g 3g Ig 4g 4g g 0,016 g zmielony liofilizat przetrwalników Bacillus stearothermophilus varietes calidolactis, w takiej ilosci, by 1 ml gotowego podlpza zawieral nie mniej niz 105 przetrwalników.

Sposób stosowania preparatu wedlug wynalazku do szybkiego oznaczania antybiotyków jest nastepujacy.

Porcje suszonego podloza rozpuszcza sie w odpowiedniej ilosci wody i wstawia do wrzacej lazni wodnej (nie autoklawuje) na 15 minut, czesto mieszajac. Po rozpuszczeniu sprawdza sie pH i w razie koniecznosci ustala na 7,0—7,2. Nastepnie rozlewa na sterylne plytki Petriego i wstawia je do termostatu o temperaturze 62—65°C na 3,5 godzin. Tak przygotowane plytki gotowe do uzycia mozna przechowywac w temperaturze 4—6°C przez 10 dni. Analize obecnosci substancji hamujacych mozna wykonywac metoda: a) studzienkowa b) krazkowa Plytki z naniesionym materialem badanym inkubuje sie w temperaturze 62-65°C w czasie 1,5 godzin. Nie zachodzi koniecznosc pasteryzacji badanego materialu, nalezy jednak ustawic pH na 7,0 w przypadku badania artykulów kwasnych. Obecnosc substancji hamujacych uwidacznia sie strefa zahamowania wzrostu bakterii i równoczesnie strefa zahamowania ma kolor sinoniebieski, a reszta podloza kolor zólty. Substrat badany winien byc w postaci plynnej. W przypadku badania substratu o konsystencji stalej nalezy przeprowadzic jego rozdrobnienie i homogenizacje w srodowisku jalowej wody, w znanym stosunku, homogenizat przefiltrowac i badac filtrat. Czulosc preparatu jest wysoka wykrywalne sa ilosci 0,003 j.m. penicyliny.

Antybiogram dla Bacillus stearothermophilus varietes calidolactis okreslony przy zastosowaniu preparatu.

Stezenie antybiotyków podano w u/ml.100 028 3 Neomycyna Tetracyklina Chlorotetracyklina Chloramfenikol Streptomycyna Óxyvet Syfttarpen Oxyterracyna Erytromycyna Penicylina 0,2 0,6 0,7 1,0 1,0 0,1 0,1 0,1 0,3 0,003 j.m.

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Preparat do oznaczania antybiotyków zwlaszcza w artykulach spozywczych, znamienny tym, ze w sklad uplynnionego w wodzie podloza wchodzi: hydrolizat bialek w ilosci 1,5%, autolizat drozdzowy w ilosci 0,3%, glukoza w ilosci 0,1%, skrobia rozpuszczalna w ilosci 0,4%, zelatyna w ilosci 0,4%, agar-agar w ilosci 1%, purpura bromokrezolowa 0,0016%, jako wskaznik pH oraz liofilizat przetrwalników Bacillus stearothermophilus w takiej ilosci, aby 1 mililitr uplynnionego podloza zawieral nie mniej niz IX104 sporów.