PL184460B1 - Sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków przeciwbakteryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania - Google Patents
Sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków przeciwbakteryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywaniaInfo
- Publication number
- PL184460B1 PL184460B1 PL96316582A PL31658296A PL184460B1 PL 184460 B1 PL184460 B1 PL 184460B1 PL 96316582 A PL96316582 A PL 96316582A PL 31658296 A PL31658296 A PL 31658296A PL 184460 B1 PL184460 B1 PL 184460B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- test
- organism
- agar medium
- microorganism
- growth
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 38
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 title claims description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 197
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 27
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 claims abstract description 22
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 85
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 85
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 37
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 23
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 21
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 21
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 11
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 10
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 claims description 9
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 claims description 6
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 5
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 4
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 claims description 4
- KEEYRKYKLYARHO-UHFFFAOYSA-N 5-[(4,5-dimethoxy-2-methylphenyl)methyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC(C)=C1CC1=CN=C(N)N=C1N KEEYRKYKLYARHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- WSWJIZXMAUYHOE-UHFFFAOYSA-N tetroxoprim Chemical compound C1=C(OC)C(OCCOC)=C(OC)C=C1CC1=CN=C(N)N=C1N WSWJIZXMAUYHOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004809 tetroxoprim Drugs 0.000 claims description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 claims description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 claims 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 claims 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N sulfadiazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CC=N1 SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960004306 sulfadiazine Drugs 0.000 description 6
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 4
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 4-(bromomethyl)phenol Chemical compound OC1=CC=C(CBr)C=C1 MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical class OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 3
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- GMMAPXRGRVJYJY-UHFFFAOYSA-J tetrasodium 4-acetamido-5-hydroxy-6-[[7-sulfonato-4-[(4-sulfonatophenyl)diazenyl]naphthalen-1-yl]diazenyl]naphthalene-1,7-disulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].OC1=C2C(NC(=O)C)=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC(S([O-])(=O)=O)=C1N=NC(C1=CC(=CC=C11)S([O-])(=O)=O)=CC=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 GMMAPXRGRVJYJY-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical class F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-5-iminobenzo[a]phenoxazin-9-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- -1 sealed test tube Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOIRFXTZHVPXLR-UHFFFAOYSA-N 2,3,5-triphenyl-1h-tetrazole Chemical compound N1N(C=2C=CC=CC=2)N(C=2C=CC=CC=2)N=C1C1=CC=CC=C1 QOIRFXTZHVPXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 1
- XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M Janus Green B chloride Chemical compound [Cl-].C12=CC(N(CC)CC)=CC=C2N=C2C=CC(\N=N\C=3C=CC(=CC=3)N(C)C)=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IURGIPVDZKDLIX-UHFFFAOYSA-M [7-(diethylamino)phenoxazin-3-ylidene]-diethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC3=CC(N(CC)CC)=CC=C3N=C21 IURGIPVDZKDLIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M acid orange 7 Chemical compound [Na+].OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- VSSMQLIMSVAUDK-UHFFFAOYSA-L disodium;5-[(4-ethoxyphenyl)diazenyl]-2-[4-[(4-ethoxyphenyl)diazenyl]-2-sulfonatophenyl]sulfanylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1N=NC(C=C1S([O-])(=O)=O)=CC=C1SC1=CC=C(N=NC=2C=CC(OCC)=CC=2)C=C1S([O-])(=O)=O VSSMQLIMSVAUDK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BMYUQZABARGLAD-UHFFFAOYSA-L disodium;8-(4-methylanilino)-5-[[4-[(3-sulfonatophenyl)diazenyl]naphthalen-1-yl]diazenyl]naphthalene-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC(C)=CC=C1NC(C1=C(C=CC=C11)S([O-])(=O)=O)=CC=C1N=NC(C1=CC=CC=C11)=CC=C1N=NC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 BMYUQZABARGLAD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- ADAUKUOAOMLVSN-UHFFFAOYSA-N gallocyanin Chemical compound [Cl-].OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C2=[O+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 ADAUKUOAOMLVSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FETSQPAGYOVAQU-UHFFFAOYSA-N glyceryl palmitostearate Chemical compound OCC(O)CO.CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O FETSQPAGYOVAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L indigo carmine Chemical compound [Na+].[Na+].N/1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(=O)C\1=C1/NC2=CC=C(S(=O)(=O)[O-])C=C2C1=O KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L 0.000 description 1
- 229960003988 indigo carmine Drugs 0.000 description 1
- 235000012738 indigotine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L woodstain scarlet Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 PEAGNRWWSMMRPZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób wykrywania jednego lub wiecej zwiazków przeciwbakteryjnych w próbce plynu, znamienny tym, ze obejmuje etapy: (i) zetniecia próbki z mikroorganizmem testowym wybranym sposród termofilnych szczepów Bacillus stearothermophilus, przy czym przed dodaniem tej próbki wprowadza sie substancje poprawiajaca wrazliwosc testowego mikroorganizmu zapobiegajac wzro- stowi tego mikroorganizmu; (ii) zapewnienia mikroorganizmowi testowemu warunków, dzieki którym, przy nie- obecnosci zwiazków przeciwbakteryjnych, moze zachodzic i jest wykrywalny wzrost tego mikroorganizmu testowego; i (iii) wykrywania wzrostu rzeczonego mikroorganizmu po czasie wystarczajacym do wykrycia wzrostu mikroorganizmu testowego w nieobecnosci zwiazków przeciwbakteryj- nych, ale podczas którego to okresu, wykrywalne hamowanie wzrostu testowego mikroor- ganizmu utrzymywane jest przez znana ilosc zwiazku przeciwbakteryjnego w testowanej próbce przy czym wspomniany organizm testowy obecny jest w stezeniu wyzszym niz 2 x 107 jednostek koloniotwórczych (CFU)/ml. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest zatem sposób wykrywania jednego lub więcej związków przeciwbakteryjnych w próbce płynu, polegający na tym, że obejmuje etapy:
(i) zetnięcia próbki z mikroorganizmem testowym wybranym spośród termofilnych szczepów Bacillus stearothermophilus, przy czym przed dodaniem tej próbki wprowadza się substancję poprawiającą wrażliwość testowego mikroorganizmu zapobiegając wzrostowi tego mikroorganizmu;
(ii) zapewnienia mikroorganizmowi testowemu warunków, dzięki którym, przy nieobecności związków przeciwbakteryjnych. może zachodzić i jest wykrywalny wzrost tego mikroorganizmu testowego; i (iii) wykrywania wzrostu rzeczonego mikroorganizmu po czasie wystarczającym do wykrycia wzrostu mikroorganizmu testowego w nieobecności związków przeciwbakteryjnych, ale podczas którego to okresu, wykrywalne hamowanie wzrostu testowego mikroorganizmu utrzymywane jest przez znaną ilość związku przeciwbakteryjnego w testowanej próbce; przy czym wspomniany organizm testowy obecny jest w stężeniu wyższym niż 2 x 107 jednostek koloniotwórczych (CFU)/ml.
Korzystnie mikroorganizm testowy może być rozproszony w stałym podłożu, a najkorzystniej w stałym podłożu agarowym.
W sposobie według wynalazku mikroorganizm testowy przed dodaniem testowanej próbki jest w postaci zatężonej, korzystnie w postaci wysuszonej.
Sposób według wynalazku jest odpowiednim do wykrywania w czasie krótszym niż 2,5 godziny penicyliny G o stężeniu 0,003 I. U. na ml.
Korzystnie przed dodaniem próbki mikroorganizm testowy jest obecny w podłożu agarowym w stężeniu 2 x 107 do 3 χ 1θ8 CFU/ml, lub w przypadku gdy mikroorganizm testowy nie jest obecny w podłożu, po dodaniu próbki stężenie mikroorganizmu testowego wynosi 2 x 107do 3 x 10g CFU/ml próbki.
W sposobie według wynalazku wzrost mikroorganizmu testowego wykrywa się dzięki zmianie barwy podłoża agarowego zachodzącej na skutek obecności wskaźnika pH lub wskaźnika potencjału oksydoredukcyjnego. W korzystnej odmianie wynalazku jako mikroorganizm testowy stosuje się szczep Bacillus stearothermophilus, korzystnie Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953.
Jako podłoże agarowe stosuje się korzystnie podłoże utworzone z roztworu agarowego zawierającego odpowiednie składniki odżywcze do podtrzymywania wzrostu organizmu testowego. Jeszcze bardziej korzystnie źródło składników odżywczych dla organizmu testowego, lub jego część, dostarcza się na stałe podłoże agarowe.
184 460
Podłoże agarowe może zawierać trimetoprim, ormetoprim lub tetroksoprim dla poprawienia wrażliwości testowego organizmu na związki siarki; można w takim przypadku stosować od 10 μΐ do 3 ml podłoża agarowego.
Przedmiotem wynalazku jest także jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania jednego lub więcej związków przeciwbakteryjnych w próbce płynu, znamienna tym, że obejmuje pojemnik zawierający stałe podłoże agarowe z rozproszonym w nim organizmem testowym, wybranym spośród termofilnych szczepów Bacillus stearothermophilus w stężeniu 2 x 10' CFU/ml, przy czym podłoże agarowe ewentualnie zawiera dodatkowo składniki odżywcze do wzrostu organizmu testowego i/lub jeden lub więcej składników do wykrywania wzrostu tego organizmu.
Korzystnie jednostka testowa zawiera pojemnik, który jest probówką lub blokiem o powierzchni z wgłębieniami.
Taka metoda testu zapewnia zauważalne skrócenie czasu trwania testu w porównaniu z konwencjonalnymi testami mikrobiologicznymi wobec związków przeciwbakteryjnych. Podczas gdy konwencjonalne testy mikrobiologiczne wobec związków przeciwbakteryjnych dają na ogół wynik po 2,5 do 4,5 godzinach, metoda opisana w tym dokumencie zapewnia wynik w czasie krótszym niż 2,5 godziny, np. 70 minut, lub nawet krótszym, np. 60 minut lub mniej. Jest to bardzo ważne dla użytkownika, ponieważ jakość próbki płynu jest znana szybciej, co umożliwia wcześniejsze dostarczenie łub przetwarzanie.
Ponadto, niespodziewanie, dzięki zastosowaniu testu mikrobiologicznego według wynalazku, w którym stężenie organizmu testowego jest wyższe niż 107 CFU na ml, wynik można uzyskać w czasie krótszym niż 150 minut, bez utraty czułości. I tak, stwierdzono, że jest możliwe zastosowanie testu mikrobiologicznego według wynalazku do wykrywania, w czasie dużo krótszym niż 2,5 godziny, np. tak krótkim jak 70 minut, penicyliny G w stężeniu 0,003 IU/ml w próbce mleka (patrz przykłady).
Mikroorganizm testowy biorący udział w teście przechowuje się w takich warunkach, które po zetknięciu z testowaną próbką aktywują go, nawet po okresie przynajmniej jednego roku.
Mikroorganizm testowy można przechowywać w postaci rozproszonej w podłożu stałym np. stałym podłożu agarowym.
Zgodnie z innym rozwiązaniem mikroorganizm testowy przechowuje się w postaci zatężonej np. zliofilizowanej. W przypadku jeśli mikroorganizm jest rozproszony w podłożu stałym, ilość lub obecność mikroorganizmu definiuje się jako CPU rzeczonego mikroorganizmu na ml rzeczonego podłoża (CPU/ml). W przypadku jeśli mikroorganizm jest obecny w innych postaciach (np. liofilizowanej), ilość lub obecność mikroorganizmu definiuje się jako CPU rzeczonego mikroorganizmu na ml testowanej próbki (np. mleka) dodawanej podczas metody wykrywania (CPU/ml).
Związkami przeciwbakteryjnymi, które można wykrywać według niniejszego wynalazku są antybiotyki lub chemioterapeutyki takie jak związki sulfonamidowe. Metodę testu według wynalazku można stosować do wykrywania związków przeciwbakteryjnych w szerokim zakresie próbek płynów, na przykład mleku, produktach mlecznych, soku mięsa, surowicy, moczu, jajach, wodzie i ekstraktach mięsa, jaj lub miodu.
W kolejnym aspekcie, wynalazek zapewnia jednostkę testowa do przeprowadzania metody według wynalazku obejmująca pojemnik zawierający stałe podłoże agarowe z rozproszonym w nim organizmem testowym wybranym z termofilnych szczepów Bacillus i Streptococcus w stężeniu wyższym niż 10 CPU/ml, przy czym rzeczone podłoże agarowe ewentualnie dodatkowo zawiera składniki odżywcze do wzrostu rzeczonego organizmu i lub jeden lub więcej składników do wykrywania rzeczonego wzrostu. Przykładami pojemników użytecznych dla celu tego wynalazku są probówki lub bloki o powierzchni z wgłębieniami, na przykład przeźroczyste probówki, pojedyncze lub w zestawie, lub połączone w postaci bloku przeźroczystego materiału posiadającego liczne wgłębienia, np. płytki do mikromiareczkowania.
Podłożem agarowym w takiej jednostce może być ewentualnie zbuforowane podłoże agarowe, do którego dodaje się organizm testowy, źródło substancji odżywczych zawierające składniki odżywcze wystarczające do podtrzymania wzrostu organizmu testowego, wskaźnik pH
184 460 lub jeden bądź więcej wskaźników potencjału oksydoredukcyjnego i ewentualnie substancje mające na celu zmieniać czułość na pewne związki przeciwbakteryjne w sposób pozytywny lub negatywny. Wszystkie składniki testu można wprowadzić do początkowego roztworu agarowego stosowanego do przygotowania jednostki testowej lub przynajmniej niektóre można dodawać oddzielnie do podłoża agarowego.
A zatem, ewentualnie przynajmniej część składników odżywczych można kolejno wprowadzić do podłoża agarowego w jednostce testowej z oddzielnie stosowanego źródła, na przykład tabletki lub krążka bibuły, umieszczając na podłożu agarowym przed przeprowadzeniem testu. Przynajmniej jeden składnik wskaźnikowy można również dodać oddzielnie do podłoża agarowego, np. przez włączenie do oddzielnego źródła składników odżywczych. Także bufor i organizm testowy można dodawać w postaci oddzielnego źródła. Do testowanej próbki można dodać źródło substancji odżywczych i/lub jeden lub więcej składników wskaźnikowych, np. wskaźników potencjału oksydoredukcyjnego.
Jeśli składniki odżywcze i/lub wskaźnik(i) i/lub organizm testowy dodaje się do podłoża agarowego lub testowanej próbki z oddzielnie stosowanego źródła, np. tabletki, korzystnie podejmuje się środki zaradcze dla uniknięcia przeniesienia wilgoci z podłoża agarowego do źródła stosowanego dodatku. Jeśli do tego celu wykorzystuje się tabletkę, można tego dokonać przez powleczenie tabletki warstwą odporną na wilgoć, na przykład wosku, przy czym powleczenie tabletki musi ulegać degradacji lub topnieniu podczas procedury testu. Odpowiedni jest wosk o temperaturze topnienia 35°C do 65°C, korzystnie 40° do 45°C.
Składniki odżywcze można dodawać w celu namnożenia organizmu testowego w nieobecności związków przeciwbakteryjnych. Odpowiednimi składnikami odżywczymi są na przykład przyswajalne źródła węgla (np. laktoza, glukoza lub dekstroza), przyswajalne źródła azotu (np. pepton) i źródła czynników wzrostowych i składników mineralnych (np. ekstrakt drożdżowy).
Wzrost mikroorganizmu testowego można wykrywać przez zmianę zabarwienia podłoża agarowego lub testowanej próbki, występującej w wyniku obecności wskaźnika pH lub potencjału oksydoredukcyjnego.
Jeśli zastosowanym wskaźnikiem jest wskaźnik pH, odpowiedni jest wskaźnik pH około 5,5, korzystnie czerwień bromokrezolowa lub czerwień fenolowa. Można jednakże stosować również inne wskaźniki pH.
Jeśli pożądane jest stosowanie wskaźnika potencjału oksydoredukcyjnego lub kombinacji dwóch lub więcej wskaźników potencjału oksydoredukcyjnego, odpowiednimi wskaźnikami są np. czerń brylantowa, błękit metylenowy, błękit toluidynowy, Nile Blue A, 2,3,5trifenylotetrazolinowy, safranina 0, indigokarmin, tionina, gallocyjanina, Brilliant Crocein MOO, żółcień kwaśna 38, oranż kwaśny 51, błękit kwaśny 120, błękit zasadowy 3, ażur A, ażur B, czerwień Kongo, 1-10 fenantrolina, zieleń janusowa B, brylantowy błękit krezylowy. Można również stosować inne wskaźniki potencjału oksydoredukcyjnego (pośredniki reakcji oksydoredukcyjnych, katalizatory reakcji oksydoredukcyjnych i nośniki elektronów). Korzystnymi wskaźnikami potencjału oksydoredukcyjnego są czerń brylantowa, błękit metylenowy, błękit toluidynowy i Nile Blue A lub ich kombinacje, np. kombinacja czerni brylantowej i błękitu toluidynowego.
Odpowiednim organizmem testowym do metody według wynalazku jest Streptococcus thermophilus, korzystnie Streptococcus thermophilus Tl 01 (DSM 4022, zdeponowany 3 marca 1987 r.).
Alternatywnie, można wykorzystać Bacillus stearothermophilus. Szczególnie korzystny do stosowania w metodzie według wynalazku jest Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953. Szczep C953 Bacillus stearothermophilus zdeponowano w Laboratory of Microbiology, Technical University of Delft pod numerem dostępu LMD 74.1 w 1974 r. oraz w Central Bureau voor Schimmelcultures (CBS), Baam, pod numerem dostępu CBS 760.83 w 1983 r., gdzie szczep jest ogólnie dostępny.
Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953 i Streptococcus thermophilus T101 są bardzo wrażliwe na związki przeciwbakteryjne, zwłaszcza antybiotyki, takie jak penicyliny oraz czynniki chemioterapeutyczne, takie jak związki sulfonamidowe. Są to mikroorganizmy
184 460 szybko rosnące, i posiadają tę dodatkową zaletę, że ich optymalna temperatura wzrostu jest wysoka (Bacillus stearothermophilus: pomiędzy 50°C a 70°C; Streptococcus thermophilus: pomiędzy 35°C a 45°C). Czyni to te mikroorganizmy bardzo odpowiednimi do testu według wynalazku, jako że nie mogą rosnąć w temperaturze przechowywania (np. temperaturze pokojowej) i występuje niewielkie prawdopodobieństwo, że organizmy, które ewentualnie mogą być obecne w testowanym płynie lub, które zostały w inny sposób wprowadzone do układu testowego mogą wpływać na wynik testu.
Jeśli organizmem testowym jest szczep Bacillus, korzystne jest wprowadzenie do podłoża agarowego w postaci zawiesiny przetrwałników, która można przygotować i wprowadzić do podłoża agarowego przed zestaleniem znanymi metodami (patrz na przykład brytyjskie zgłoszenie patentowe numer GB-A-1467439). Alternatywnie, jak wskazano wcześniej w niniejszym opisie, organizm testowy można dodawać w postaci oddzielnego źródła, na przykład przez zastosowanie tabletki lub krążka bibuły na podłoże agarowe.
Jeśli organizmem testowym jest szczep Streptococcus, bakterie korzystnie wprowadza się do podłoża agarowego w postaci komórek bakteryjnych, które można przygotować zgodnie ze znanymi metodami (europejski opis patentowy numer EP 0 285 729).
Jeśli mikroorganizm testowy ma postać zatężoną (np. postać zliofilizowaną, tabletki, krążka bibuły itd.), pomiar koncentratu przeprowadza się w naczyniu, którym może być konwencjonalna ampułka, zamykana probówka testowa, butelka na próbki, wgłębienia bloku, jak płytka do mikromiareczkowania i podobne (patrz na przykład europejski opis patentowy numer EP-0285792).
Odpowiednie stężenie organizmu testowego w podłożu agarowym wynosi powyżej 107 CFU/ml, ale wskazane jest, aby nie przekraczało 101θ CFU/ml, np. można zastosować stężenie organizmu testowego pomiędzy 2 χ 107 a 109 CFU/ml, korzystnie 2 χ 107 do 3 χ 108 CFU/ml. Najkorzystniej, stężenie organizmu testowego wynosi pomiędzy 3 χ 107 a 2 χ 108 CFU/ml.
Zgodnie z korzystnym rozwiązaniem niniejszego zgłoszenia, wrażliwość organizmu testowego można modyfikować. Wrażliwość można zmieniać różnymi sposobami, na przykład przez dodanie pewnych substancji, przez zmianę warunków testu, takichjak pH lub stężenie substancji buforujących bądź agaru, lub zróżnicowanie stosunku agaru i testowanego płynu.
Przykładami substancji, które można dodawać do układu testowego dla zmiany wrażliwości są nukleozydy, takie jak adenozyna, i antyfoliany, takie jak trymetoprym, ormetoprym i tetroksoprym, które poprawiają wrażliwość organizmu testowego na związki sulfonamidowe. Sole kwasu szczawiowego lub kwasu wodorofluorowego można dodawać dla poprawienia wrażliwości na tetracykliny. Cysteinę można dodawać dla osłabienia wrażliwości na penicyliny.
Dalej w niniejszym opisie wynalazek dyskutowany będzie bardziej szczegółowo pod kątem testu zawierającego podłoże agarowe, jednakże dla specjalistów w tej dziedzinie będzie zrozumiałe, że informacje te można również zastosować do testów bez podłoża agarowego.
Jak wskazano uprzednio w niniejszym opisie, składniki potrzebne lub ewentualnie pożądane w podłożu agarowym, włącznie z ewentualnymi substancjami do zmiany wrażliwości na pewne związki przeciwbakteryjne, można dodawać do ewentualnie zbuforowanego roztworu agarowego. Roztworowi agarowemu umożliwia się zestalenie w jednostce testowej z utworzeniem podłoża agarowego w taki sposób, aby organizm testowy pozostawał żywy, ale nie mógł namnażać się z powodu braku składników odżywczych i/lub niskiej temperatury. Potrzebne składniki, których nie dodano do roztworu agaru przed zestaleniem, należy dodać w postaci odddzielnego źródła, na przykład tabletki lub krążka bibuły.
Potrzebnymi składnikami są organizm testowy, jeden lub więcej wskaźników i składniki odżywcze. Inne związki, np. substancje dla poprawy lub osłabienia wrażliwości na pewne związki przeciwbakteryjne, nie są konieczne.
Korzystne jest przeprowadzanie sposobu według niniejszego wynalazku tak, aby organizm testowy nie rósł lub nie namnażał się w podłożu agarowym w obecności znanej minimalnej ilości związku przeciwbakteryjnego mającego ulec wykryciu. Również jednostki testowe, np. probówki testowe zawierające podłoże agarowe, powinno się przechowywać w taki
184 460 sposób, aby organizm testowy nie namnażał się w podłożu agarowym. Generalnie uzyskuje się to przez pozbawienie organizmu składników odżywczych do przeprowadzania testu lub utrzymywania hodowli (podczas procesu wytwarzania) i jednostek testowych (podczas przechowywania) w wystarczająco niskiej temperaturze, korzystnie pomiędzy 4°C a 30°C, korzystniej pomiędzy 4°C a 15°C, bądź zarówno jedno, jak i drugie.
Jednostki testowe podczas przechowywania korzystnie zamknięte są w sposób nie przepuszczający powietrza, w którym to stanie można je przechowywać przez co najmniej kilka miesięcy.
Ewentualnie zbuforowanemu podłożu agarowemu, zawierającemu organizm testowy i/lub wskaźnik(i) i/lub składniki odżywcze i/lub pewne substancje do zmiany czułości testu, umożliwia się zestalenie w pionowych jednostkach testowych, np. probówkach.
Jednostki korzystnie maja określona wielkość. Jest tak dla zapewnienia wiarygodności testu. Wysokość podłoża agarowego w jednostkach testowych ma duże znaczenie. Jeśli w próbce testowej obecny jest antybiotyk, będzie on dyfundował do agaru. Dlatego też, korzystne jest sprawdzenie czułości testu wraz ze zróżnicowaniem wysokości zestalonego agaru w jednostce testowej.
Korzystnie, wysokość podłoża agarowego w jednostce testowej wybiera się w taki sposób, że wskaźnik zmienia swoje zabarwienie, gdy związek przeciwbakteryjny, który ma być wykrywany jest obecny w stężeniu poniżej pewnej wartości, ale nie zmienia swojego zabarwienia, jeśli stężenie jest wyższe od tej wartości. Korzystnie, test jest zaplanowany jako test, z którego można odczytać, czy pewne stężenie związku przeciwbakteryjnego występuje, czy nie. Dlatego też, wysokość jednostki testowej będzie korzystnie dostateczna, aby zawierać ilość podłoża agarowego i próbki odpowiadająca wysokości 3-30 mm, korzystniej 5-15 mm. Wymiar wewnętrznego przekroju poprzecznego jednostki testowej wynosi korzystnie 1-20 mm, korzystniej 1-14 mm.
Objętość podłoża agarowego w jednostce testowej określa się przez wysokość jednostki testowej, wymiar wewnętrznego przekroju poprzecznego jednostki testowej i procent objętości jednostki testowej, który jest wypełniony podłożem agarowym.
Objętość podłoża agarowego korzystnie wynosi 10 μ -3 ml, korzystniej 15 μ -1 ml, a najkorzystniej 20 μ - 500 μ!.
Odpowiednia objętość testowanej próbki płynu wynosi 0,01 - 0,5 ml. A zatem, na przykład, stwierdzono, że jednostka testowa według wynalazku utworzona przez zestalenie 0,3 ml roztworu agaru w pionowej jałowej probówce testowej o wewnętrznej średnicy 9 mm, jest odpowiednia do wykrywania 0,003 IU/ml penicyliny G w próbce mleka.
Gdy stosuje się przetrwalniki Bacillus stearothermophilus var. calidolactis, odpowiednie temperatury inkubacji wynoszą pomiędzy 55°C a 70°C, korzystniej pomiędzy 60°C a 66°C. Inkubację można prowadzić w każdej konwencjonalnej postaci inkubatora, np. łaźni wodnej, ogrzewacz blokowy, cieplarka lub inkubator suchy.
Gdy stosuje się komórki Streptococcus thermophilus, odpowiednie temperatury inkubacji wynoszą pomiędzy 36 a 44°C, korzystniej pomiędzy 38 a 42°C.
Jak uprzednio wskazano w niniejszym opisie, możliwe do uzyskania są okresy inkubacji krótsze niż 150 minut, np. 70 minut, być może tylko 60 minut lub nawet 30 minut. Taki okres inkubacji jest znacząco krótszy niż okres inkubacji innych konwencjonalnych układów mikrobiologicznych testów obecności związków przeciwbakteryjnych, wykorzystujących mniej niż 107 CFU/ml.
Test według wynalazku jest bardzo prosty do przeprowadzenia, tak że osoba, która go prowadzi nie musi mieć szczególnego wykształcenia. Wynik jest bardzo prosty do określenia. Po okresie inkubacji zabarwienie podłoża agarowego zawierającego wskaźnik wskazuje, czy wystąpił wzrost organizmu, czy nie.
Wszystkie dokumenty wymienione w tym zgłoszeniu są włóczone do niego poprzez odnośniki literaturowe w takim samym stopniu, jak gdyby każde pojedyncze zgłoszenie lub opis patentowy był specyficznie i pojedynczo wskazany jako włączony przez odnośnik literaturowy.
184 460
Opis figur
Figura 1 przedstawia czas trwania testu jako funkcję stężenia przetrwalników w jednostce testowej typu A wykorzystanej jak w przykładzie IV.
Figura 2 przedstawia czas trwania testu jako funkcję stężenia przetrwalników w jednostce testowej typu B wykorzystanej jak w przykładzie V.
Przykład I
Przygotowywanie probówek testowych typu A do wykrywania antybiotyków
Probówki testowe typu A zawierały podłoże agarowe przygotowane w następujący sposób:
Sporządzono roztwór 12 g agaru, 9 g chlorku sodowego i 50 ml roztworu buforowego 0,1 M trietanoloaminy (pH 8,0) w 1000 ml wody destylowanej. Dodano również taka ilość roztworu czerwieni bromokrezolowej, aby otrzymać stężenie końcowe 20 mg na 1000 ml. Ostateczny roztwór wyjałowiano w ciągu 20 minut w temperaturze 121°C i schłodzono do temperatury około 60°C.
Do tego roztworu dodawano różne ilości zawiesiny przetrwalników Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953 w wodzie destylowanej dla otrzymania stężeń końcowych pomiędzy 106 a 1010 przetrwalników na ml.
Jałowe probówki o średnicy około 9 mm napełniono 0,3 ml roztworu agaru w warunkach aseptycznych i natychmiast zamknięto, np. folią aluminiową. Roztworowi agaru w probówkach testowych umożliwiano zestalenie utrzymując je w pozycji pionowej.
Probówki przechowywano w temperaturze pomiędzy 5°C a 15°C.
Przykład II
Przygotowywanie probówek testowych typu B do wykrywania antybiotyków
Probówki testowe typu B zawierały podłoże agarowe przygotowane w następujący sposób:
Sporządzono roztwór 10 g agaru, 9 g chlorku sodowego, 2 g glukozy, 2 g peptonu, 2 g tryptonu, 4 g ekstraktu drożdżowego i 50 ml roztworu buforowego 0,1 M trietanoloaminy (pH 8,0) w 1000 ml wody destylowanej. Ostateczny roztwór wyjałowiano w ciągu 20 minut w temperaturze 121°C i schłodzono do temperatury około 60°C.
Dodano również taką ilość roztworu czerni brylantowej, aby otrzymać stężenie końcowe 80 mg na 1000 ml i taką ilość roztworu błękitu toluidynowego, aby otrzymać stężenie końcowe 3 mg na 1000 ml.
Do tego roztworu dodawano różne ilości zawiesiny przetrwalników Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953 w wodzie destylowanej dla otrzymania stężeń końcowych pomiędzy 106 a 1 o10 przetrwalników na ml.
Jałowe probówki o średnicy około 9 mm napełniono 0,3 ml roztworu agaru w warunkach aseptycznych i natychmiast zamknięto, np. folią aluminiową. Roztworowi agaru w probówkach testowych umożliwiano zestalenie utrzymując je w pozycji pionowej.
Probówki przechowywano w temperaturze pomiędzy 5°C a 15°C.
Przykład III
Przygotowywanie tabletek odżywczych
Sporządzono mieszaninę 100 g dekstrozy, 160 g Avicel PH101, 50 g tryptozy, 14 g ekstraktu drożdżowego i 15 g precirolu. Mieszanina ta była wystarczająca do przygotowania około 18000 tabletek o średnicy około 3 mm i grubości około 1,9 mm.
Przykład IV
Przeprowadzanie testu typu A
Jedną z każdej z probówek testowych typu A z różnymi stężeniami przetrwalników Bacillus stearothermophilus var. calidolactis jak opisano w przykładzie I otwarto przez usunięcie korka. Do każdej z probówek testowych dodano tabletkę odżywcza jak opisano w przykładzie III. Następnie do każdej z probówek testowych dodano próbkę świeżego mleka krowiego o objętości 0,1 ml i probówki testowe natychmiast umieszczono w łaźni wodnej utrzymywanej w temperaturze 64°C.
Obserwacje prowadzono po 30 minutach do 2 godzin i 30 minut. Określano czas, po którym zabarwienie podłoża agarowego stawało się żółte. Jak przedstawiono na figurze 1, czas trwania testu skorelowany był z ilością przetrwalników dodanych do podłoża agarowego.
184 460
Jeśli w tym określonym czasie zabarwienie podłoża agarowego było niebieskie, wiadomo było, żo próbka zawiera wykrywalna ilość związku nrzzciwbaPteryjnego (np. 0,003 I.U. na ml lub więcej penicyliny G). Figura 1 wykazuje, żo możliwe jest obniżenio czasu trwania tostu przynajmniej do 60 minut.
Przykład V
Przeprowadzanie testu typu B
Postępowano zgodnie z procedurą opisaną w przykładzie IV, z wyjątkiem stosowania probówek testowych typu B i do probówek testowych nie dodawano tabletek.
Figura 2 wykazuje, że możliwe jost obniżenie czasu trwania testu przynajmniej do 70 minut.
Przykład VI
Przeprowadzanie tostu typu B
Do świeżego mloka krowiego dodano ponicylinę G w stężeniu 0,003 I.U. na ml. Próbka kontrolna nio zawierała penicyliny G.
Przez usunięcio korków otwarto dwie z każdych probówek testowych typu B ze stężeniami przotrwalników Bacillus stearothermophilus var. calldolactis jak opisano w przykładzie II. Następnie do każdej z probówek testowych dodawano 0,1 ml jednej z próbek mleka i probówki testowe natychmiast umieszczano w łaźni wodnej utrzymywanej w temperaturze 64°C.
Obserwacje prowadzono po 30 minutach do 3 godzin. Określano czas, po którym zabarwienie podłoża agarowego stawało się żółto. Sak przedstawiono w tabeli 1, czas trwania testu skorelowany był z ilością przetrwhlników dodanych do podłoża agarowego bez ujemnego wpływu na czułość testu.
Tabela 1 przedstawia zmniejszający się czas trwania tostu przynajmniej do 70 minut. Nawet przy czasio trwania testu 70 minut wykryć można stężenie 0,003 I.U. na ml penicyliny G. Oczywiście, można wykryć także wyższe stężenia penicyliny G.
Tabela 1
Czułość tostu typu B przy różnych stężeniach przztrwhlników
| Czas trwania tostu | 180 | 155 | 140 | 130 | 120 | 110 | 100 | 70 |
| PrzztrwhlsiPi/ml podłoża | 6,5x106 | 1,3x107 | 2,0x107 | 2,6x107 | 3,3x107 | 4,9x107 | 6,5x107 | 1,3x108 |
| Mleko bez antybiotyku | - | - | - | - | - | - | - | - |
| Mleko z 0,003 IU/ml penicyliny | + | + | + | + | + | + | + | + |
Przykład VII
Wykrywanie antybiotyków i związków sulfonamidowych na płytkach do mikromiareczkowania
W celu przygotowania płytek testowych (tost typu C) postępowano zgodnio z procedurą opisaną w przykładzie I, z tym wyjątkiem, żo składników odżywczych opisanych w przykładzie III ^ekstraza, tryptoza i ekstrakt drożdżowy) nie dodawano oddzielnie, lecz dodawano do początkowego podłoża agarowego w takim samym stężeniu, jak opisano w przykładzie I. Razem z roztworem buforu dodawano również taką ilość trymetoprymu, dzięki któroj otrzymywano stężenie końcowe 60 pg na litr.
Do studzienek jałowych płytek do mi^omiareczkowania dodawano w warunkach aseptycznych 20 μΐ roztworu agarowego. Płytki natychmiast zakryto folia aluminiową.
Płytki przechowywano w temperaturze pomiędzy 5°C a 15°C.
Do świeżego mloka krowiego dodano penicylinę G w stężeniu 3 ppb. Przygotowano również próbkę mleka, która zawiorała sulfadiazynę w stężeniu 100 ppb.
Próbka kontrolna nie zawierała penicyliny G ani sulfadiazyny.
Płytki do miPromiarzczkowhnia otwarto przez usunięcie przykrycia. Następnie do każdej z pytek testowych (w dwóch powtórzeniach) zawierających różno stężenia przetrwalników Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953 dodano 20 μΐ każdej z trzech próbek mloka. Płytki natychmiast umieszczono w łaźni wodnoj utrzymywanej w temperaturze 64°C.
184 460
Obserwacje prowadzono po 30 minutach do 150 minut. Określano czas, po którym zabarwienie podłoża agarowego stawało się żółte. Jak przedstawiono w tabeli 2, czas trwania testu skorelowany był z ilością przetrwalników dodanych do podłoża agarowego bez ujemnego wpływu na czułość testu.
Nawet przy czasie trwania testu 90 minut, można wykryć zarówno penicylinę G, jak i sulfadiazynę o stężeniach odpowiednio 3 ppb penicyliny G i 100 ppb sulfadiazyny. Penicylinę G (3 ppb) można nawet wykryć przy czasie trwania testu 80 minut.
Oczywiście, można wykryć także wyższe stężenia zarówno penicyliny G, jak i sulfadiazyny.
Tabela 2
Czułość testu typu C przy różnych stężeniach przetrwalników.
| Czas trwania testu | 140 | 123 | 105 | 90 | 80 |
| przetrwalniki/ml podłoża | 1,3x107 | 2,5x107 | 5,1x107 | 1,0x108 | 2,0x108 |
| mleko bez antybiotyków | - | - | - | - | - |
| mleko z 3 ppb penicyliny G | + | + | + | + | + |
| mleko z 100 ppb sulfadiazyny | + | + | + | + | - |
Przykład VIII
Wykrywanie antybiotyków w mleku (test typu D)
W oznaczeniu tym zastosowano Streptococcus thermphilus T101 (DSM 4022) do oznaczania antybiotyków w mleku.
Streptococcus thermophilus T101 hodowano stosując metody znane per se.
Do świeżego mleka krowiego dodano taką ilość roztworu czerwieni bromokrezolowej, aby otrzymać stężenie końcowe 45 mg na 1000 ml.
Do części świeżego mleka krowiego dodano również penicylinę G w stężeniu 4 ppb.
Próbka kontrolna nie zawierała penicyliny G.
Do próbek mleka dodano różne ilości Streptococcus thermophilus T101, aby otrzymać stężenia końcowe pomiędzy 107a 109 CFU na ml.
Natychmiast po przygotowaniu próbek, jałowe probówki o średnicy około 9 mm napełniono 0,3 ml każdej z próbek mleka (w dwóch powtórzeniach). Probówki natychmiast umieszczono w łaźni wodnej utrzymywanej w temperaturze 42°C.
Obserwacje prowadzono po 30 minutach do 2 godzin i 30 minut.
Określono czas, po którym barwa podłoża agarowego stała się żółta. Jak przedstawiono w tabeli 3, czas trwania testu skorelowany był z ilością komórek dodanych do mleka, bez ujemnego wpływu na czułość testu.
Nawet przy czasie trwania testu 80 minut, można wykryć penicylinę G o stężeniu 4 ppb lub wyższym.
Tabela 3
Czułość testu przy różnych stężeniach komórek
| Czas trwania testu | 145 | 125 | 103 | 80 |
| komórki/ml podłoża | 3,0 x 107 | 6,0 x 107 | 1,3 x 108 | 2,5 X 108 |
| mleko bez antybiotyków | - | - | - | - |
| mleko z 4 ppb penicyliny G | + | + | + | + |
184 460
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (13)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wykrywania jednego lub więcej związków przeciwbakteryjnych w próbce płynu, znamienny tym, że obejmuje etapy:(i) zetnięcia próbki z mikroorganizmem testowym wybranym spośród termofilnych szczepów Bacillus stearothermophilus, przy czym przed dodaniem tej próbki wprowadza się substancję poprawiającą wrażliwość testowego mikroorganizmu zapobiegając wzrostowi tego mikroorganizmu;(ii) zapewnienia mikroorganizmowi testowemu warunków, dzięki którym, przy nieobecności związków przeciwbakteryjnych, może zachodzić i jest wykrywalny wzrost tego mikroorganizmu testowego; i (iii) wykrywania wzrostu rzeczonego mikroorganizmu po czasie wystarczającym do wykrycia wzrostu mikroorganizmu testowego w nieobecności związków przeciwbakteryjnych, ale podczas którego to okresu, wykrywalne hamowanie wzrostu testowego mikroorganizmu utrzymywane jest przez znaną ilość związku przeciwbakteryjnego w testowanej próbce; przy czym wspomniany organizm testowy obecny jest w stężeniu wyższym niż 2 x 107 jednostek koloniotwórczych (CFU)/ml.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mikroorganizm testowy jest rozproszony w stałym podłożu, korzystnie w stałym podłożu agarowym.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mikroorganizm testowy przed dodaniem testowanej próbki jest w postaci zatężonej, korzystnie w postaci wysuszonej.
- 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienny tym, że jest odpowiedni do wykrywania w czasie krótszym niż 2,5 godziny penicyliny G o stężeniu 0,003 I.U. na ml.
- 5. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienny tym, że przed dodaniem próbki mikroorganizm testowy jest obecny w podłożu agarowym w stężeniu 2 x 107 do 3 χ 108 CFU/ml, lub w przypadku gdy mikroorganizm testowy nie jest obecny w podłożu, po dodaniu próbki stężenie mikroorganizmu testowego wynosi 2 x 107do 3 χ 108 CFU/ml próbki.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wzrost mikroorganizmu testowego wykrywa się dzięki zmianie barwy podłoża agarowego zachodzącej na skutek obecności wskaźnika pH lub wskaźnika potencjału oksydo-redukcyjnego.
- 7. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 6, znamienny tym, że jako mikroorganizm testowy stosuje się szczep Bacillus stearothermophilus, korzystnie Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C953.
- 8. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że stosuje się podłoże agarowe utworzone z roztworu agarowego zawierającego odpowiednie składniki odżywcze do podtrzymywania wzrostu organizmu testowego.
- 9. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że źródło składników odżywczych dla organizmu testowego, lub jego część, dostarcza się na stałe podłoże agarowe.
- 10. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że rzeczone podłoże agarowe zawiera trimetoprim, ormetoprim lub tetroksoprim dla poprawienia wrażliwości testowego organizmu na związki siarki.
- 11. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że stosuje się 10 μΐ do 3 ml podłoża agarowego.
- 12. Jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania jednego lub więcej związków przeciwbakteryjnych w próbce płynu, znamienna tym, że obejmuje pojemnik zawierający stałe podłoże agarowe z rozproszonym w nim organizmem testowym, wybranym spośród termofilnych szczepów Bacillus stearothermophilus w stężeniu 2 x 107 CFU/ml, przy czym podłoże agarowe ewentualnie zawiera dodatkowo składniki odżywcze do wzrostu organizmu testowego i/lub jeden lub więcej składników do wykrywania wzrostu tego organizmu.184 460
- 13. Jednostka testowa wedhig zastrz. Π, znamienna tym, że pojemnik jest probówką lub blotiom o powierzchni z wgłębieniami.Przedmiotom wynalazku jest sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków nrzociwbhPtoryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania. Wynalazek dotyczy zwłaszcza nowego sposobu przeprowadzania testu mikrobiologicznego do szybkiego określania obecności lub nieobecności związków przeciwbakteryjnych w płynach takich jak mloko, sok mięsa, surowica, mocz. Wynalazek ten dotyczy także jednostki do wykrywania pozostałości związków przeciwbhkteryrnych w próbkach płynów i zastosowania toj jednostki.Motody tostów mikrobiologicznych do określania związków przociwbhPtoryjnych, szczególnie pozostałości antybiotyków i chomioterapeutyków takich jak sulfonamidy, w próbkach płynów takich jak mloko, sok mięsa, surowica i mocz, są znano od dawna. Przykłady takich testów opisano w brytyjskim zgłoszeniu patentowym numer GB-A-1467439, europejskim opisie patentowym numor 0005891, duńskim opisio patentowym numer DE 3613794, kanadyjskim opisio patentowym numor CA 2056581 i ouropojskim opisie patentowym numer 0285792. Wszystkie te opisy dotyczą gotowych do stosowania testów, które wykorzystują organizmy testowo i dają wynik, na ogół w ciągu 2,5 do 4,5 godzin, poprzez zmianę barwy dodanego do układu testowogo wskaźnika pH lub wskaźnika potencjału oksydo-redukcyjnogo. Zasadą tych testów jest to, eo jośli związek ρrzeciwbhPteryjny jest obocny w próbco w stężeniu dostatecznym do hamowania wzrostu organizmu testowego, to barwa wskaźnika nio zmienia się, natomiast jośli nie zachodzi żadno hamowanie, to wzrostowi organizmu testowogo towarzyszy powstawanie kwaśnych lub zredukowanych metabolitów, które zmieniają barwę wskaźnika.Wspomniane powyżej znane jednostki tostowe mogę obejmować podłoże agarowe zaszczepiono odpowiednim organizmem tostowym, korzystnie szczepem Bacillus lub Streptococcus oraz wskaźnik pH lub wskaźnik potencjału oksydoreauPcyjnego. Odpowiedni organizm tostowy oraz wskaźnik wprowadza się do ewentualnie zbuforowanego roztworu agarowego, przy czym do roztworu dodajo się ewentualnie substancje odżywcze i substancje zmieniające, w sposób pozytywny lub negatywny, wrażliwość wobec pewnych związków przeciw bakteryjnych. Ostatecznie, umożliwia się zestalenie roztworu agarowego do uzyskania podłoża agarowego, w którym organizm testowy pozostaje żywy, ale nie może się namnażać z powodu braku substancji odżywczych i/lub niskiej temperatury. Ewentualnie, do podłoża agarowego można dodać związki, np. substancje odżywcze lub wskaźnik(i), w postaci odrębnego źródła np. tabletek lub krążków bibuły.Korzystnym gatunkiem Streptococcus do stosowania w konwoncjonalnych testach mikrobiologicznych wobec związków przociwbhPtoryjnych jest Streptococcus thermophilus. Korzystnym gatunkiem Bacillus do stosowania w takich testach jest Bacillus stearothermophilus. Gatunek ton można wykorzystać do tego celu w postaci nrzotrwalnipów.W większości dokumentów dotyczących testów mikrobiologicznych wobec związków przeciwbakteryjnych, wymienia się szeroki zakres stężeń organizmu tostowego 105 do 108-109 jodnostek koloniotwórczych (CFU) na ml. Przykładami takich dokumontów są brytyjskie zgłoszonio patentowo numer GB-A-1467439, europejski opis patentowy numor 000581, europejski opis patentowy numer 0611001, duński opis patentowy numor DE 3429823, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numor 3941658, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4946777 i europejski opis patentowy numor 0285792. SednhPeo, żaden z tych dokumentów nio zawiera przykładu wymieniającego stężenie organizmu testowego wyższo niż 107 CFU/ml. W kanadyjskim opisie patentowym numer CA 2056581 (strona 11, wers 27), wyraźnie stwierdzono, że stężenie organizmu testowego - w tym konkretnym przypadku nrzetrwhlniPów Bacillus stearothermophilus - może być różne, alo nigdy nio może przekraczać stężenia 107 CFU na ml podłoża agarowego.184 460A zatem, do tej pory powszechnie przyjmowano, że stężenie organizmu testowego wynoszące 107 na ml jest maksymalnym stężeniem jakie można stosować w testach mikrobiologicznych typu opisanego w tym dokumencie. Do tej pory, powszechnie uważano, że stosowanie wyższego stężenia mikroorganizmu w takich testach może spowodować utratę wrażliwości na będące przedmiotem zainteresowania związki przeciwbakteryjne.Oczywiście, odpowiednie szybkie testy wobec związków przeciwbakteryjnych powinny między innymi spełniać następujące wymaganie:- wysoka wrażliwość wobec szerokiego zakresu stosowanych w praktyce związków przeciwbakteryjnych.Test przy stężeniu bakterii 106 do 107 cfu m mj na ogół daje wynik po 2,5 do 4,5 godzinach lub nawet po dłuższym czasie. Chociaż czasami podaje się 1,5 godziny jako minimalny czas trwania testu (na przykład europejski opis patentowy numer 000581, brytyjskie zgłoszenie patentowe numer GB-A 1467439. opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 3941653, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4946777), takiego testu nigdy nie zaprezentowano w przykładach lub gdzie indziej.Do tej pory, nie uważano za możliwe przeprowadzenie testu mikrobiologicznego wobec związków przeciwbakteryjnych w czasie testu krótszym niż 2,5 godziny przy zastosowaniu stężenia organizmu testowego wyższego niż 107 na ml, zachowując dobrą wrażliwość wobec szerokiego zakresu związków przeciwbakteryjnych. Niniejszy opis wykaże teraz, że wbrew oczekiwaniom, takie testy mikrobiologiczne są możliwe do przeprowadzenia.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95200243 | 1995-02-01 | ||
| PCT/EP1996/000488 WO1996023901A1 (en) | 1995-02-01 | 1996-02-01 | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL316582A1 PL316582A1 (en) | 1997-01-20 |
| PL184460B1 true PL184460B1 (pl) | 2002-10-31 |
Family
ID=8219988
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96316582A PL184460B1 (pl) | 1995-02-01 | 1996-02-01 | Sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków przeciwbakteryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6867015B1 (pl) |
| EP (1) | EP0755456B1 (pl) |
| JP (1) | JPH09511150A (pl) |
| AT (1) | ATE197477T1 (pl) |
| AU (1) | AU693993B2 (pl) |
| BG (1) | BG100882A (pl) |
| BR (1) | BR9603963A (pl) |
| CA (1) | CA2186728A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ284196A3 (pl) |
| DE (1) | DE69610879T2 (pl) |
| ES (1) | ES2153562T3 (pl) |
| HU (1) | HUP9602995A2 (pl) |
| NO (1) | NO964142L (pl) |
| NZ (1) | NZ301691A (pl) |
| PL (1) | PL184460B1 (pl) |
| SK (1) | SK123496A3 (pl) |
| WO (1) | WO1996023901A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA96786B (pl) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0755456B1 (en) | 1995-02-01 | 2000-11-08 | Dsm N.V. | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds |
| CN100375788C (zh) * | 2003-07-02 | 2008-03-19 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于测定流体中是否存在抗生素的经过改进的检验系统 |
| PL1639122T3 (pl) * | 2003-07-02 | 2009-07-31 | Dsm Ip Assets Bv | Ulepszony zestaw testowy do oznaczania obecności antybiotyków w płynach |
| EP1664330B1 (en) * | 2003-09-11 | 2008-11-19 | DSM IP Assets B.V. | Blood and urine test |
| ATE528389T1 (de) * | 2003-11-18 | 2011-10-15 | Charm Sciences Inc | Hemmtestverfahren und -vorrichtung zum nachweis von antibiotika |
| EP1766046B1 (en) | 2004-06-02 | 2010-10-20 | DSM IP Assets B.V. | High ph test system for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid |
| ES2263361B1 (es) * | 2004-11-30 | 2007-11-01 | Universidad De Zaragoza | Metodo de deteccion de residuos de antibioticos y otros compuestos antibacterianos. |
| US8476064B2 (en) * | 2006-05-09 | 2013-07-02 | Charm Sciences, Inc. | Inhibition assay method and device for detection of antibiotics |
| EP2365968B1 (en) | 2007-09-29 | 2018-08-22 | Timothy James Williams | Composition and method to modify sperm function and increase male gender ratio in mammals |
| CN102656275A (zh) * | 2009-07-01 | 2012-09-05 | 生物梅里埃有限公司 | 用于中和培养基中的抗生素的方法 |
| WO2013037888A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| WO2013037887A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Competitive immunoassay for the detection of antibiotics |
| EP2756306B1 (en) | 2011-09-16 | 2019-08-21 | DSM IP Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| WO2013037886A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
| EA201400482A1 (ru) * | 2011-10-18 | 2014-09-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Способ определения присутствия антибиотика в жидкости |
| JP5954640B2 (ja) * | 2012-10-25 | 2016-07-20 | 学校法人福岡大学 | 感染評価系モデル |
| CN104293661B (zh) * | 2014-10-22 | 2016-08-24 | 哈德逊（天津）生物技术有限责任公司 | 一种快速抗菌试验方法及试剂盒 |
| CN106554987A (zh) * | 2015-09-29 | 2017-04-05 | 北京华益精点生物技术有限公司 | 一种检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒及其检测方法 |
| CN105524975A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-04-27 | 丽珠集团新北江制药股份有限公司 | 一种用于恩拉霉素微生物效价测定的检定培养基 |
| AU2017207860A1 (en) | 2016-01-15 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| EP3630997B1 (en) | 2017-06-02 | 2021-12-29 | Fastinov S.A. | Therapeutic drug monitoring |
| CN114323876B (zh) * | 2022-03-14 | 2022-05-13 | 广东江门中医药职业学院 | 一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE755456C (de) | 1938-10-05 | 1955-05-05 | Schaeffer & Budenberg G M B H | Sicherheitsventil mit einem Ellipsenlenker zur senkrechten Fuehrung des Ventilkoerpers |
| GB1467439A (en) * | 1973-05-31 | 1977-03-16 | Gist Brocades Nv | Method for determination of the presence of antibiotics |
| NL7806086A (nl) | 1978-06-05 | 1979-12-07 | Gist Brocades Nv | Analyse-unit. |
| DE3429823A1 (de) | 1984-08-14 | 1986-02-27 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Mittel und verfahren zum nachweis antimikrobiell wirksamer substanzen |
| FI75865C (fi) | 1987-04-07 | 1988-08-08 | Valio Meijerien | Testanordning och foerfarande foer bestaemning av antibiotika i mjoelk samt i dessa anvaendbar ny streptococcus thermophilus-stam. |
| US5354663A (en) * | 1988-05-04 | 1994-10-11 | Charm Sciences, Inc. | Microbial inhibition test kit and method |
| US5008255A (en) | 1989-01-12 | 1991-04-16 | Alcon Laboratories, Inc. | Method for enhancing solubility of trimethoprim with sodium sulfacetamide, and synergistic pharmaceutical compositions derived therefrom |
| CA2056581A1 (en) * | 1991-11-12 | 1993-05-13 | Stanley E. Charm | Microbial inhibition test kit and method |
| CZ251094A3 (en) * | 1993-02-11 | 1995-02-15 | Gist Brocades Nv | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids |
| DE4432771A1 (de) * | 1994-09-14 | 1996-03-21 | Landesvereinigung Der Bayerisc | Testmedium für einen mikrobiologischen Hemmstofftest und Verfahren zu seiner Durchführung |
| EP0755456B1 (en) | 1995-02-01 | 2000-11-08 | Dsm N.V. | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds |
-
1996
- 1996-02-01 EP EP96902983A patent/EP0755456B1/en not_active Revoked
- 1996-02-01 JP JP8523277A patent/JPH09511150A/ja active Pending
- 1996-02-01 BR BR9603963A patent/BR9603963A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-02-01 US US08/704,747 patent/US6867015B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-01 NZ NZ301691A patent/NZ301691A/en unknown
- 1996-02-01 CA CA002186728A patent/CA2186728A1/en not_active Abandoned
- 1996-02-01 AU AU47180/96A patent/AU693993B2/en not_active Ceased
- 1996-02-01 DE DE69610879T patent/DE69610879T2/de not_active Revoked
- 1996-02-01 HU HU9602995A patent/HUP9602995A2/hu unknown
- 1996-02-01 AT AT96902983T patent/ATE197477T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-02-01 ZA ZA96786A patent/ZA96786B/xx unknown
- 1996-02-01 CZ CZ962841A patent/CZ284196A3/cs unknown
- 1996-02-01 WO PCT/EP1996/000488 patent/WO1996023901A1/en not_active Ceased
- 1996-02-01 SK SK1234-96A patent/SK123496A3/sk unknown
- 1996-02-01 PL PL96316582A patent/PL184460B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-02-01 ES ES96902983T patent/ES2153562T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-30 NO NO964142A patent/NO964142L/no unknown
- 1996-10-01 BG BG100882A patent/BG100882A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0755456A1 (en) | 1997-01-29 |
| ES2153562T3 (es) | 2001-03-01 |
| US6867015B1 (en) | 2005-03-15 |
| NO964142D0 (no) | 1996-09-30 |
| NZ301691A (en) | 1997-03-24 |
| NO964142L (no) | 1996-11-20 |
| HUP9602995A2 (en) | 1997-05-28 |
| AU4718096A (en) | 1996-08-21 |
| CZ284196A3 (en) | 1997-03-12 |
| HU9602995D0 (en) | 1997-01-28 |
| DE69610879T2 (de) | 2001-05-17 |
| JPH09511150A (ja) | 1997-11-11 |
| SK123496A3 (en) | 1997-07-09 |
| BR9603963A (pt) | 1997-10-07 |
| PL316582A1 (en) | 1997-01-20 |
| ZA96786B (en) | 1996-08-12 |
| CA2186728A1 (en) | 1996-08-08 |
| MX9604494A (es) | 1997-11-29 |
| ATE197477T1 (de) | 2000-11-11 |
| DE69610879D1 (de) | 2000-12-14 |
| AU693993B2 (en) | 1998-07-09 |
| EP0755456B1 (en) | 2000-11-08 |
| BG100882A (en) | 1997-08-29 |
| WO1996023901A1 (en) | 1996-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL184460B1 (pl) | Sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków przeciwbakteryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania | |
| US4245043A (en) | Negative control media device and method for microbiologic biochemical tests | |
| US4946777A (en) | Method for determination of the presence of antibiotics | |
| AU609794B2 (en) | A test set and a process for the determination of antibiotics in milk and a novel streptococcus thermophilus strain to be used therein | |
| FI67725C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av enheter avsedda foer bestaemning av antibiotika- och sulfarester i biologiska vaetskor och framstaellda enheter | |
| US6737266B1 (en) | Devices and methods for microorganism detection | |
| PL179275B1 (pl) | Sposób wykrywania zwiazków przeciwbakteryjnychi zestaw do wykrywania zwiazków przeciwbakteryjnych PL PL | |
| US5523214A (en) | Method of visually demonstrating the presence of microorganisms, identifying them, and testing them for sensitivity to antibiotics with redox indicators | |
| US3671400A (en) | Bacterial controls and preparation thereof | |
| EP1403378B1 (en) | Medium for detecting target microbes in a sample | |
| EP1216307B1 (en) | Method for the detection of antimicrobial residues | |
| EP1222469B1 (en) | One step test to detect antimicrobial residues in eggs | |
| EP0286434A2 (en) | Method for the detection of bacteria and fungi | |
| Magalhães et al. | Traditional methods for isolation of Listeria monocytogenes | |
| CA1290272C (en) | Method for differentiation with film medium of lactobacillus organisms from streptococcus organisms | |
| MXPA96004494A (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacteria compounds | |
| WO1996040981A1 (en) | Testing device for determining the susceptibility of microorganisms to inhibitory agents | |
| Salvo | The air-drying of Escherichia coli reporters in natural polymers and incorporation into simple bioassays | |
| Blank | Possible Thermocin Interference in Antibiotic Diffusion Tests using Bacillus stearothermophilus var. calidolactis | |
| Hirway | Recovery of Escherichia coli from freeze dried model systems | |
| PL160080B1 (pl) | Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL | |
| IE48345B1 (en) | Analysis unit |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20070201 |