PL160080B1 - Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL - Google Patents

Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL

Info

Publication number
PL160080B1
PL160080B1 PL27918189A PL27918189A PL160080B1 PL 160080 B1 PL160080 B1 PL 160080B1 PL 27918189 A PL27918189 A PL 27918189A PL 27918189 A PL27918189 A PL 27918189A PL 160080 B1 PL160080 B1 PL 160080B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
preparation
weight
amount
milk
percent
Prior art date
Application number
PL27918189A
Other languages
English (en)
Other versions
PL279181A1 (en
Inventor
Maria Bielecka
J Tadeusz Plodzien
Barbara Habyk
Wojciech Saczuk
Original Assignee
Inst Mleczarstwa Oddzial W Ols
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Mleczarstwa Oddzial W Ols filed Critical Inst Mleczarstwa Oddzial W Ols
Priority to PL27918189A priority Critical patent/PL160080B1/pl
Publication of PL279181A1 publication Critical patent/PL279181A1/xx
Publication of PL160080B1 publication Critical patent/PL160080B1/pl

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku zawierajacy pepton, dekstroze, ekstrakt drozdzowy, purpure brom okrezolow a, liofilizat Bacillus stearotherm ophi- lus, znamienny tym, ze sklada sie: peptonu w ilosci 1,6 - 3,3% wagowych, dekstrozy w ilosci 1,6 - 4,2% wagowych, ekstraktu drozdzowego w ilosci 2,8 - 1 3,8% wagowych, purpury bromokrezolowej w ilosci 0,68 - 0,70% wagowych, D-galakto-D-mannoglikanu w ilosci 68,0 - 97,0% wagowych, liofilizat Bacillus stearothermophilus „S“ w ilosci 0,088 - 0,88% wagowych (zawierajacy 2,0 - 4,0 X 101 0 komórek (gram) PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest preparat do wykrywania obecności substancji hamujących (sh) w mleku.
Do substancji hamujących zalicza się antybiotyki, preparaty weterynaryjne, środki dezynfekujące i dezynfekująco-myjące. Przyczyną obecności sh w mleku jest nie przestrzeganie okresów karencji po terapeutycznym stosowaniu antybiotyków, karmienie krów przeznaczonymi dla młodych zwierząt paszami treściwymi zawierającymi antybiotyki, niewłaściwe stosowanie środków dezynfekujących oraz dodawanie do mleka sh celem zahamowania rozwoju bakterii, a tym samym przedłużenia trwałości mleka.
Obecność substancji hamujących w mleku jest szkodliwa ze względów zdrowotnych i technologicznych. Wywoływanie alergii u osób wrażliwych szczególnie przez antybiotyki /Maktamowe (penicyliny i cefalosporyny), toksyczność chloramfenikolu oraz w nieco mniejszym stopniu tetracyklin, powstawanie antybiotykooporności u bakterii chorobotwórczych, czego następstwem jest obniżenie skuteczności leczenia - to tylko nieliczne przykłady szkodliwości. W przetwórstwie mleczarskim obecne w mleku sh powodują zakłócenia w bioprocesach, co wpływa ujemnie na jakość serów, twarogów, napojów z mleka fermentowanego.
Dotychczas znane i stosowane są następujce preparaty: preparat do wykrywania i oznaczania antybiotyków w formie suszonej wytwarzany zgodnie z opisem patentowym polskim nr 100028 i preparat do oznaczania substancji hamujących w mleku znany ze zgłoszenia w Urzędzie Patentowym RP, nr P 251 103, BUP 14/86. Skład upłynnionego preparatu według opisu patentowego polskiego nr 100028 jest następujący: hydrolizat białek w ilości 0,5-5,0%, autolizat drożdżowy w ilości 0,1-1,0%, glukoza w ilości 0,1-1,0%, skrobia rozpuszczalna w ilości 0,0-2,0%, żelatyna w ilości 0,0-2,0%, agar-agar w ilości 0,0-0,2%, wskaźnik zmiany pH w granicach 5-8 pH oraz liofilizat przetrwalników Bacillus stearothermophilus w takiej ilości aby 1 mililitr upłynnionego preparatu zawierał nie mniej niż 1 X 104 sporów.
Przed użyciem preparat uwadnia się, ogrzewa przez 30 minut we wrzącej łaźni wodnej, rozlewa się do płytek Petriego i poddaje 2-godzinnej preinkubacji w temp. 65°C. Przed wykonaniem oznaczenia w żelu wycina się studzienki, do których nanosi się badane próby i inkubuje się w temp. 65°C do uzyskania zmian barwnych podłoża i widocznych stref zahamowania wzrostu szczepu testowego. Badane próby można także nanosić na krążki bibuły uprzednio nałożone na powierzchnię żelu. Wadą tej metody jest niski stopień standaryzacji, szczególnie pod względem koncentracji przetrwalników szczepu. Koncentracja przetrwalników w podłożu testowym jest głównym czynnikiem warunkującym powtarzalność wyników i czułości metody, która zmniejsza się ze wzrostem stężenia przetrwalników. Niedogodnością jest także pracochłonność i długi czas wykonywania oznaczenia.
160 080
Preparat według zgłoszenia nr P - 251 103 składa się z trzech składników: płynnego podłoża odżywczego, agaru wodnego i zawiesiny przetrwalników testowego szczepu Bacillus stearothermophilus varietas calidolactis C -953. Przy czym w skład komponentów podłoża testowego wchodzi: pepton w ilości 0,05%, glukoza w ilości 0,048-0,058%, mleko pełne w proszku 0,1-0,12%, purpura bromokrezolowa w ilości 0,0248%, agar w ilości 0,9% oraz zawiesina przetrwalników Bacillus stearothermophilus varietas calidolactis C -953 w takiej ilości aby 1 cm’ upłynnionego podłoża zawierał 1,9-2,2 X 106 przetrwalników.
Sposób przygotowania preparatu do oznaczenia substancji hamujących polega na upłynnieniu agaru wodnego we wrzącej łaźni, rozlaniu do kolbek Erlenmayera po 15 cm3, dodaniu do każdej porcji 2,0-2,5 cm3 podłoża odżywczego ze wskaźnikiem zmian pH, schłodzeniu do temp. 55°C, dodaniu 0,1-0,25 cm3 zawiesiny przetrwalników, wymieszaniu i rozlaniu do probówek serologicznych po 0,3 cm3. Wykonanie oznaczenia polega na dodaniu do probówek 0,1 cm’ badanego mleka, nie gotowanego, o normalnej kwasowości, a następnie inkubacji w łaźni wodnej o temp. 64% lub w termostacie o temp. 70°C przez 2,5-3,0 h.
W obecności antybiotyków sino-fioletowe zabarwienie podłoża pozostaje nie zmienione. Wadą tego preparatu jest krótki okres trwałości nie przekraczający 30 dni.
Celem wynalazku jest opracowanie trwałego preparatu w postaci proszku, prostego w użyciu, charakeryzującego się szerokim zakresem wykrywalności substancji hamujących w mleku, wysokim stopniem czułości, jednoznacznością uzyskiwanych wyników i ich powtarzalnością.
Postawione zadanie spełnia preparat według wynalazku o następującym składzie:
pepton dekstroza ekstrakt drożdżowy purpura bromokrezolowa
D-galakto-D-mannoglikan liofilizat Bacillus stearothermophilus „S“ (zawierający 2,0-4,0 X 1010 komórek/gram) w ilości l,6 - 3,3% wagowych, w ilości l,6 - 4,2% wagowych, w ilości 2,8 -13,8% wagowych, w ilości 0,68 - 0,70% wagowych, w ilości 68,0 -97,0% wagowych, w ilości 0,088- 0,88% wagowych
Zaletą preparatu według wynalazku jest długi okres trwałości wynoszący co najmniej 18 miesięcy, bardzo prosty sposób wykonania oznaczenia, czytelność, jednoznaczność i powtarzalność wyników oraz szeroki zakres wykrywalności substancji hamujących i wysoka czułość metody.
Przeprowadzone badania wykazały identyczność cech preparatu według wynalazku bezpośrednio po wyprodukowaniu i po 18 miesiącach przechowywania w temp. 4°C. Tak długa trwałość preparatu jest rezultatem bezwodnej jego formy, którą osiągnięto dzięki użyciu nie stosowanego dotychczas w metodach mikrobiologicznych żelifikatora tworzącego żel bezpośrednio po uwolnieniu bez ogrzewania. Skład preparatu według wynalazku zpewnia wysoką aktywność biochemiczną szczepu testowego, odpowiedni stopień zbuforowania preparatu oraz właściwe warunki dyfuzji badanej próby. Wymienione czynniki warunkują łatwość wykonania, czytelność i jednoznaczność wyników. Wysoki stopień standaryzacji preparatu, szczególnie jego odczynu i koncentracji przetrwalników zapewnia powtarzalność wyników. Preparat według opisu patentowego polskiego nr 100028 charakteryzuje się brakiem standaryzacji stężenia przetrwalników, o czym świadczy stwierdzenie, że nie może być ich mniej niż 1 X 104/cm3 podłoża upłynnionego.
Preparat według wynalazku charakteryzuje się szerokim zakresem wykrywalności substancji hamujących. Pozwala on wykryć antybiotyki wszystkich grup różniących się budową chemiczną i właściwościami, stosowane w lecznictwie weterynaryjnym preparaty farmaceutyczne oraz środki dezynfekujące i dezynfekująco-myjące. Czułość preparatu wobec substancji hamujących jest zróżnicowana. Najniższe wykrywalne stężenie antybiotyków waha się w granicach 0,003jm/cm3 dla penicyliny do 0,8/yg/cm3 dla neomycyny i jest np. 4 - krotnie niższe od wykrywanego preparatem według zgłoszenia nr P - 251 103 stężenia tetracykliny, 7-10 - krotnie dla stężenia chlorotetracykliny oraz 2-5 - krotnie dla oksytetracykliny i 4-5 - krotnie niższe dla streptomycyny. Czułość preparatu według wynalazku jest także 4-5 - krotnie wyższa wobec bacytracyny niż preparatu wytwarzanego zgodnie z opisem patentowym polskim nr 100028.
Leki weterynaryjne są wykrywane preparatem według wynalazku w stężeniach od 0,002pg/cm3 Nafpenzalu MC do 0,2”g/cm3 Lincocinu-Forte, w przypadku którego czułość jest
160 080
2-3 - krotnie wyższa w porównaniu ze zgłoszeniem P - 251 103 i opisem patentowym polskim nr 100028, wykrywającymi ten lek w stężeniu 0,5yu/cm3.
Środki dezynfekujące i dczynfekująco-myjące są wg wynalazku wykrywane w stężeniach od 0,003% formaliny do 0,3-0,5% ΙΧΙ- 65 i Alf. Czułość metody wg wynalazku jest 2-3 - krotnie wyższa wobec Incozanu W i do 100 - krotnie wyższa wobec nadtlenku wodoru niż metody według zgłoszenia nr P - 251 103, a wobec Chlorogenu, Chlorinolu, sody kaustycznej i formaliny 3-5 -krotnie wyższa od metody według opisu patentowego polskiego nr 100028.
Przedmiot wynalazku zostanie bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.
Przykład; Skład preparatu w proszku:
peptobak 1166% wag.
dekstroza 2,75% wag.
ekstrakt drożdżowy 2,75% wag.
purpura bromokrezolowa 0,69% wag.
D-galakto-D-mannoglikan 91,72% wag.
liofilizat Bacillus stearothermophilus „S“ 0,44 % wag.
(zawierający 2,0 X 1O10 komórek/gram)
Testowy szczep Bacillus stearothermophilus „S“ przygotowuje się przez namnożenie kultur w temp. 55°C przez 48 h na skosach podłoża o następującym składzie: suchy bulion mięsny - 1,5%, dekstroza - 0,5%, Mn2+ - 0,003%, agar - 2,0%, pH po sterylizacji i ochłodzeniu do temp. 25°C - 6,8± 0,1. Wyrosłe kolonie zmywa się zbuforowaną wodą peptonową, powtórnie namnaża się w butelkach Roux i zmywa wodą peptonową. Otrzymaną zawiesinę standaryzuje się i suszy przez sublimację. Wysuszone komórki szczepu testowego dodaje się do pozostałych składników preparatu w takiej ilości, aby ich stężenie w gotowym podłożu wynosiło 3,0X 10e komórek/cm3. Gotowy preparat dozuje się do fiolek jednorazowego użytku w ilości 10,0 mg szczelnie zakorkowanych. Trwałość tak przygotowanego preparatu wynosi nie mniej niż 18 miesięcy w temp.X5°C.
Sposób wykonania oznaczenia substancji hamujących w mleku przy użyciu preparatu według wynalazku jest następujący: do fiolki z preparatem dodaje się 0,3 cm3 zimnej wody o pH 6,7-6,9, miesza się przez 1-3 sek. w celu równomiernego uwodnienia i żelifikacji, po czym na uzyskany żel nanosi się 0,1 cm3 badanego mleka i inkubuje w termostacie w temp. 68±1°C lub w łaźni wodnej z wymuszonym ruchem wody w temp. 65±1°C przez 3 h do momentu zmiany barwy z purpurowej lub purpurowo-fioletowej na żółto-kremową w próbce kontrolnej. Barwa sino-fioletowa wskazuje na obecność substancji hamujących w mleku, a żółto-kremowa na ich brak. Uwodniony preparat można przechowywać w temp.X5°C przez 3 dni bez jakiegokolwiek wpływu na wynik oznaczenia.
Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 10 000 zł

Claims (1)

  1. Zastrzeżenie patento we
    Preparat do wykrywania obecności substancji hamujących w mleku zawierający pepton, dekstrozę, ekstrakt drożdżowy, purpurę bromokrezolową, liofilizat Bacillus stearothermophilus, znamienny tym, że składa się:
    peptonu dekstrozy ekstraktu drożdżowego purpury bromokrezolowej
    D-galakto-D-mannoglikanu liofilizat Bacillus stearothermophilus „S“ (zawierający 2,0-4,0 X 1O10 komórek (gram) w ilości 1,6 - 3,3% wagowych, w ilości 1,6 - 4,2% wagowych, w ilości 2,8 -13,8% wagowych, w ilości 0,68 - 0,70% wagowych, w ilości 68,0 -97,0% wagowych, w ilości 0,088- 0,88% wagowych
PL27918189A 1989-04-28 1989-04-28 Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL PL160080B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL27918189A PL160080B1 (pl) 1989-04-28 1989-04-28 Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL27918189A PL160080B1 (pl) 1989-04-28 1989-04-28 Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL279181A1 PL279181A1 (en) 1991-04-22
PL160080B1 true PL160080B1 (pl) 1993-02-26

Family

ID=20047186

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL27918189A PL160080B1 (pl) 1989-04-28 1989-04-28 Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL160080B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL279181A1 (en) 1991-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wachtel et al. Comparison of limulus amebocyte lysates and correlation with the United States Pharmacopeial pyrogen test
PL184460B1 (pl) Sposób wykrywania jednego lub większej ilości związków przeciwbakteryjnych i jednostka testowa do przeprowadzania sposobu wykrywania
Adetunji et al. Formation of biofilm by strains of Listeria monocytogenes isolated from soft cheese'wara'and its processing environment
EP1216307B1 (en) Method for the detection of antimicrobial residues
PL160080B1 (pl) Preparat do wykrywania obecnosci substancji hamujacych w mleku PL
US6511819B2 (en) Rapid coliform detection system
US20090042240A1 (en) Rapid detection of antimicrobial drug residues
AU2014261436B2 (en) Method for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid
US3990946A (en) Substrate for the determination of desoxy-ribonuclease
RU2264466C2 (ru) Композиция и способ обнаружения и раннего и дифференцированного подсчета грамотрицательных микроорганизмов
NO770657L (no) Preparat for selektiv bakterieanalyse.
RU2223313C2 (ru) Дифференциально-диагностическая среда для выделения листерий
AU2011298206B2 (en) Use of a beta-glucosidase activator for detecting and/or identifying C. difficile
Wright et al. The estimation of penicillin in milk
JP2002010799A (ja) 細菌検査培地
CA2336956A1 (en) Dehydrated immediate reconstruction culture medium to identify group b streptococci streptococcus agalactiae by the detection of their pigment
Heriyati et al. Susceptibility of Vibrio spp. from Gill of Barramundi (Lates calcarifer) Towards Antibiotics
JP2003125797A (ja) 熱量測定による微生物活性測定方法および装置
RU2249037C2 (ru) Модифицированная сухая питательная среда кесслер для индикации и количественного учета бактерий группы кишечной палочки в пищевой промышленности
Nakamura et al. The lecithinase (a toxin) activity of strains of Clostridium perfringens
Pușcaș A new procedure for the rapid determination of Pseudomonas aeruginosa bacteria in medications
SU1693062A1 (ru) Питательна среда дл вы влени тиолзависимых гемолизинов энтеробактерий
PL100028B1 (pl) Preparat do oznaczania antybiotykow,zwlaszcza w artykulach spozywczych
CA1064024A (en) Substrate for the determination of desoxy-ribonuclease
HU201843B (en) Method and composition for detecting presence of the inhibitors and other chemical agents