PL116713B1 - Process for preparing androsten-4-di-3,17-one - Google Patents
Process for preparing androsten-4-di-3,17-one Download PDFInfo
- Publication number
- PL116713B1 PL116713B1 PL1979217611A PL21761179A PL116713B1 PL 116713 B1 PL116713 B1 PL 116713B1 PL 1979217611 A PL1979217611 A PL 1979217611A PL 21761179 A PL21761179 A PL 21761179A PL 116713 B1 PL116713 B1 PL 116713B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- liter
- steroid
- nrrl
- solution
- fortuitum nrrl
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 241000186365 Mycobacterium fortuitum Species 0.000 claims description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 34
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 14
- KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N (-)-beta-Sitosterol Natural products O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]([C@H](CC[C@@H](C(C)C)CC)C)CC4)CC3)CC=2)CC1 KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N 0.000 claims description 12
- CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-ethyl-5alpha-cholest-22-en-3beta-ol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 24xi-n-propylcholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CCC)C(C)C)C1(C)CC2 KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N Citrostadienol Natural products CC=C(CC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC[C@H]4[C@H](C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)C(C)C LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N 0.000 claims description 12
- ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N Dehydro-beta-sitosterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N beta-Sistosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CC=C4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 claims description 12
- 235000015500 sitosterol Nutrition 0.000 claims description 12
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 claims description 12
- NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N sitosterol Natural products CC=C(/CCC(C)C1CC2C3=CCC4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC2(C)C1)C(C)C NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SGNBVLSWZMBQTH-FGAXOLDCSA-N Campesterol Natural products O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]([C@H](CC[C@H](C(C)C)C)C)CC4)CC3)CC=2)CC1 SGNBVLSWZMBQTH-FGAXOLDCSA-N 0.000 claims description 6
- BTEISVKTSQLKST-UHFFFAOYSA-N Haliclonasterol Natural products CC(C=CC(C)C(C)(C)C)C1CCC2C3=CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C BTEISVKTSQLKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SGNBVLSWZMBQTH-PODYLUTMSA-N campesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](C)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 SGNBVLSWZMBQTH-PODYLUTMSA-N 0.000 claims description 6
- 235000000431 campesterol Nutrition 0.000 claims description 6
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 claims description 6
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 claims description 6
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N ethyl cyclohexane Natural products CCC1CCCCC1 IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical group C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- XIIAYQZJNBULGD-UHFFFAOYSA-N (5alpha)-cholestane Natural products C1CC2CCCCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 XIIAYQZJNBULGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKBHKNPLNHLYHT-UHFFFAOYSA-N 5beta-Stigmastan Natural products C1CC2CCCCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 GKBHKNPLNHLYHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNMVJSSWZSJOGL-PLOWYNNNSA-N 9alpha-hydroxyandrost-4-en-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@@]3(O)CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 SNMVJSSWZSJOGL-PLOWYNNNSA-N 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000187644 Mycobacterium vaccae Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 description 1
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N anhydrous amyl acetate Natural products CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000003516 cell number determination Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- XIIAYQZJNBULGD-LDHZKLTISA-N cholestane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 XIIAYQZJNBULGD-LDHZKLTISA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013360 fish flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- GKBHKNPLNHLYHT-LWQAOISPSA-N stigmastane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 GKBHKNPLNHLYHT-LWQAOISPSA-N 0.000 description 1
- LAGFCVRVICMFFF-UHFFFAOYSA-N stigmastane Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CCC4CC(=O)CC(C)C4C3CCC12C)C(C)C LAGFCVRVICMFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/005—Degradation of the lateral chains at position 17
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest ulepszony sposób wytwarzania androsteno-4-dionu-3,17 oznaczonego dalej jako AD.Procesy przemiany steroidów przy uzyciu drob¬ noustrojów naleza do procesów wnikliwie bada¬ nych i opisanych. W istocie, do najwczesniejszych naleza prace takie, jak prowadzone przez Mamoli i Vercellone w roku 1937; patrz Ber., 70 470 oraz Ber. 70 2079. Autorzy ci opisali sposób redukcji steroidów zawierajacych w pozycji 17 grupe ke¬ tonowa do steroidów zawierajacych w pozycji 17 grupe hydroksylowa droga fermentacji drozdzo¬ wej.Nastepnie Peterson i Murray opisali sposób podstawie¬ nia progesteronu w pozycji 11 grupa hydroksylowa przy uzyciu grzybów Rhizopus nigricans; patrz opis patento¬ wy St. Zjedn. Am. nr 2 602 769 (1952). Kraychy i inni w opisie patentowym St. Zjedn. Am. opisali selektywnie przebiegajacy mikrobiologiczny proces degradacji stero¬ idów zawierajacych w pozycji 17 grupe alkilowa za¬ wierajaca co najmniej 8 atomów wegla, polegaja¬ cy na fermentacji tych steroidów przy uzyciu Mycobaterium NRRL B-3683, prowadzacej do wytworzenia androsteno-4-dionu-3,17 (AD), andro- stadieno-l,4-dionu-3,17 (ADD) oraz 20tt-hydroksy- metylopregnadien-l,4-onu-3. Marsheck i inni omó¬ wili w opisie patentowym St. Zjedn. Ameryki Kr 3750791 (1973) selektywny sposób wytwarzania androsteno-4-dionu-3,17 droga fermentacji steroi¬ dów, takich jak cholestan lub stigmastan, które 15 20 25 w pozycji 17 podstawione sa lancuchem alkilo¬ wym zawierajacym co najmniej 8 atomów wegla.Przemiany tej dokonano przy uzyciu szczepu My- cobacterium NRRL B-3805, który okreslono jako Mycobacterium vyccae.Omówiono równiez sposób wytwarzania AD, be¬ dacego produktem wystepujacym w przewazaja¬ cej ilosci, przy uzyciu drobnoustrojów szczepu M. fortuitum NRRL B-11045. W procesie tym otrzymano równiez niewielkie ilosci ADD. Sposób ten uwaza sie za najkorzystniejszy z dotychczas znanych, prowadzacych do uzyskania AD.W procesie wg wynalazku stosuje sie mutant pochodzacy od dajacego sie zaadoptowac mutanta, stosowanego w dotychczasowych procesach. Mutan¬ tem, który uzyto w niniejszym procesie jest Myco¬ bacterium fortuitum NRRL B-11359, który otrzy¬ mano z M. fortuitum NRRL B-11358, który z ko¬ lei pochodzi od Mycobacterium fortuitum NRRL B-11045.M. fortuitum NRRL B-11359 posiada zdolnosc wywolywania selektywnej przemiany steroidów, w których w pozycji 17 znajduje sie boczny lan¬ cuch alkilowy zawierajacy od 2 do 10 atomów wegla, wlacznie oraz zdolnosc akumulowania AD, bedacego zasadniczo jedynym produktem przemia¬ ny w procesie fermentacji piwa.W ^najkorzystniejszym z dotychczas znanych sposobów wytwarzania AD akumuluje sie kolo czterokrotnie wiecej ADD podczas fermentacji 116 713116 713 3 piwa niz w procesie wedlug niniejszego wynalaz¬ ku. Mniejsze ilosci ADD powstajacego w procesie fermentacji piwa ulatwiaja wydzielanie zadanego produktu, to znaczy AD.Odpowiedni mutant mozna otrzymac droga mu- 5 tacji, która omówiono w niniejszym opisie hib droga innych przemian. Mutant stosowany w pro¬ cesie wedlug niniejszego wynalazku otrzymano ho¬ dujac M. fortuitum NRRL B-11045 na odpowied¬ niej pozywce, zawierajacej 9a-OH/ AD. Wybrano 10 szczep szybko rosnacy, który uznano za mutant o zdolnosci do adoptowania sie. M. fortuitum NRRL B-11358 poddano nastepnie mutagenezie przy uzyciu nitrozoguanidyny (NTG).Mutant wedlug wynalazku wydzielono na plycie 15 agarowej stosujac — jak poprzednio — pozywke zawierajaca 9a-OH AE|. Zadamy mutant M.for- tuitum NRRL B-11359 nie bedzie rósl na pozywce zawierajacej AD lub 9a-OH AD jako jedyne zród¬ lowegla. 20 Mycobacterium fortuitum NRRL B-11359 uzyto do selektywnej przemiany steroidów podstawionych w pozycji 17 lancuchem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 atomów wegla w zwiazek AD. Steroi¬ dami, które mozna poddawac przemianie sa np. '25 sitosterol, cholesterol, stigmasterol, kampesterol oraz inne steroidy podstawione w pozycji 17 lan¬ cuchem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 ato¬ mów wegla, wlacznie. Steroidy te mozna stoso¬ wac zarówno w postaci ziwazków oczyszczonych, 39 jak i nieoczyszczonych.Mutant wedlug niniejszego wynalazku posiada zdolnosc wywolywania selektywnej przemiany steroidów podstawionych w pozycji 17 lancuchem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 atomów weg- 35 la, wlacznie oraz zdolnosc akumulowania AD, be¬ dacego zasadniczo jednym produktem przemiany podczas fermentacji piwa. Mutant ten mozna otrzy¬ mac w wyniku mutacji mutanta pochodzacego od M. fortuitum NRRL B-11045, który jest znanym ^ szczepem w procesie wytwarzania AD.Za wykazujacy zdolnosc do adoptowania sie uznano M. fortuitum NRRL B-11358* Mutant z nie¬ go otrzymany M.fortuitum NRRL B-11359 powodu¬ je powstawanie AD ze znacznie wieksza wydajnos- cia niz M. fortuitum NRRL B-11045. Wydajnosc uwaza sie za wyzsza, gdyz podczas piwa M. for¬ tuitum NRRL B-11359 powoduje powstawanie od okolo 75 do 100% mniej ADD, bedacego niepozada¬ nym produktem niz ma to miejsce w przypadku „ M. fortuitum NRRL B-11Ó45. tuitum NRRL B-11045.M. fortuitum NRRL B-11353 M. fortuitum NRRL B-11359 oraz M.fortuitum NRRL B-11045 zostaly zdeponowane w stalej kolekcji w Northern Re- ' gional Research Laboratory, U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois, St Zjednoczone. W razie potrzeby z tej samej kolekcji uzyskac mozna podkultury tych szczepów.M. fortuitum NRRL B»1135ft tym rózni sie od M M. fortuitum NRRL B-11045, ze w procesie fer¬ mentacji piwa powoduje powstawanie obok zwiaz¬ ku AD — znacznie mniejszej iloscT ADD.M. fortuitum NRRL B-11045 rózni sie od Mycobac¬ terium gatunku NRRL B-3805, który omówiono1 m wczesniej w opisie patentowym St. Zjedno. Ame¬ ryki Nr 3759791. NRRL B-3806 posiada cechy cha¬ rakterystyczne dla Mycobacterium Vaccae, który jest gatunkiem calkowicie odmiennym od M. for¬ tuitum wedlug niniejszego wynalazku. Porównanie- tych drobnoustrojów mozna znalezc w Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 8th Edition, The Williams and Wilkins Company, 1974 nr str. 695 i 696.Morfologia oraz wrazliwosc na srodki lecznicze M. fortuitum NRRL B-11358 i NRRL B-11359 jest taka sama jak M.fortuitum ATCC 6842 i M. for¬ tuitum NRRL B-11045. M. fortuitum jest odpor¬ na na kw;:is, nieruchliwa i nie tworzaca zarodni¬ ków bakteria, nalezaca ii o grupy Mycobacteriacae,. rzedu Actinomycetales. Zgodnie z klasyfikacja Runyo. \s.i, E TT. Runyon, 1959 Med. Clin. North Americ • 43 : 273, M. fortuitum jest nie wytwarza¬ jaca barwnika bakteria grzybowa grupy IV, co oznacza, ze rosnie ona szybko w niskich tempera¬ turach i na stosunkowo prostej pozywce tworzy bezbarwne kolonie.Mutancja M.fortuitum NRRL B-11358 w M. for¬ tuitum NRRL B-11359 zachodzi w obecnosci ni¬ trozoguanidyny. Przemiane te omówiono szczegó¬ lowo w dalszej czesci opisu.Selektywnej przemiany wedlug niniejszego wy¬ nalazku dokonuje sie przy uzyciu hodowli M. for¬ tuitum NRRL B-11359, do której odpowiedni ste¬ roid wprowadza sie badz w okresie*inkubacji, badz: tez przed zaszczepieniem. Steroid mozna stosowac pojedynczo, badz w polaczeniu z innymi steroida¬ mi. Korzystnie — choc nie jedyne — stezenie ste¬ roidu w hodowli wynosi od okolo 0,1 do okolo 100 g/litr. Kulture hoduje sie na pozywce zawieraja¬ cej zródlo wegla w postaci np. przyswajalnego weglowodanu, zródlo azotu w postaci np. przyswa¬ jalnego zwiazku azotu lub zwiazek proteinowy.Do korzystnych zwiazków stanowiacych zródlo- wegla nalezy glikoza, nieoczyszczony cukier, sacha¬ roza, gliceryna, skrobia, maczka kukurydziana, lak* toza, dekstryna, melasa, itp.Do korzystnych zwiazków stanowiacych zródlo azotu nalezy wyciag nomokowy kukurydzy, droz¬ dze, autolityczne drozdze browarniane wraz z mle¬ cznymi produktami w stanie stalym, maczka z fa¬ soli sojowej, maczka z nasion bawelny, maczka kukrydziana, mleczne produkty w stanie stalym,, ekstrakt trzustkowy kazeiny, maczka rybna,, desty¬ lowane ciala stale, ciekle peptony zwierzece, reszt¬ ki miesa i kosci, sole amoniowe, itp.Korzystne jest stosowac mieszaniny zwiazków zawierajacych wegiel i azot Do srodowiska fer¬ mentacyjnego nie nalezy wprowadzac nawet sta* dowych ilosci takich metali, jak cynk, magnez, mangan, kobalt, zelazo, itp., poniewaz przed stery¬ lizacja tego srodowiska w jego sklad wchodzi wo¬ da z kranu i skladniki nie poddawane uprzednia oczyszczaniu.Proces przemiany prowadzi sie przez okres od okolo 72 godzin do 15 dni lub dluzej. Temperatura inkubacji wynosi od okolo 25°C do okolo 37°C, fazy czym w przypadku NRRL B-11359 korzystna lemperatura w^ndsl ~3CT*C. SklatfmTei przedtnucTra^ je sie sterylnym powietrzem i miesza sie je w116 713 celu ulatwienia wzrostu drobnoustroju, a co za tym idzie — zwiekszenia efektywnosci przemiany.Po zakonczeniu przemiany, co twierdza sie droga chromatografii cienkowarstwowej na platkach z zelu krzemionkowego E. Merck, Darmstadt), stosu- $ jac jako rozpuszczalnik mieszanine octanu etylu z cykloheksanem (w stosunku obojetosciowym 2 : 3), steroid bedacy produktem przemiany odbiera sie metodami znanymi fachowcom. Na przyklad, mie¬ szanine poddawana fermentacji (przemianie), wla- ia czajac w to ciecz i komórki podawane fermentacji, ekstrahuje sie niemieszajacym sie z woda rozpusz¬ czalnikiem organicznym, stanowiacym rozpuszczal¬ nik steroidu. Do odpowiednich rozpuszczalników nalezy dwuchlorometan (najkorzystniejszy), chlo- 15 rek wegla, chlorek etylenu, trójchloroetylen, eter, octan amylu, benzen, itp.Alternatywnie, ciecz i komórki poddawane fer¬ mentacji mozna najpierw rozdzielic konwencjonal¬ nymi metodami, np. przez filtracje lub wirowanie, 20 a nastepnie ekstrahowac oddzielnie rozpuszczalni¬ kami mieszajacymi sie z woda lub niemieszajacy- mi sie z nia. Ciecz fermentacyjna, nie zawierajaca komórek mozna ekstrahowac rozpuszczalnikami niemieszajacymi sie zwoda. x Ekstrakty przesacza sie przez warstwe ziemi okrzemkowej, a przesacz oddestylowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc zawie¬ rajaca przetransformowany steroid rozpuszcza sie w minimalnej ilosci mieszaniny zawierajacej octan 34 etylu i cykloheksan (20:80). Otrzymany roztwór poddaje sie chromatografii na zelu krzemionko¬ wym. AD wymywa sie z zelu krzemionkowego mieszanina octanu etylu z chloroformem (15 : £5).Zwiazek ten mozna nastepnie' wyodrebnic przez 35 odparowanie rozpuszczalnika i rekrystalizacje z heksanu.Zadanym produktem w procesie przemiany wed¬ lug wynalazku jest znany steroid AD. Zwiazek tej jest uzytecznym produktem posrednim w syn- tf tezie hormonów majacych budowe steroidalna. Na przyklad, AD stosuje sie w procesie wytwarzania testosteronu, co omówiono w opisach patentowych St. Zjedn. Ameryki Nr Nr 2143453, 2253708, 2264888 i2356154. 45 Podane nizej przyklady zamieszczono w celu zilustrowania sposobu wedlug wynalazku i otrzy¬ mywanego w nim produktu. Jezeli nie zaznaczono inaczej, wówczas ilosci skladników podano w pro¬ centach wagowych, zas sklady mieszanin rozpusz- ^ czalników — w stosunkach objetosciowych.Przyklad I. a Sposób wytwarzania mutanta M. fortuitum NRRL B-11359 z M. fortuitum NRRL B-11358.M. fortuitum NRRL B-11358 otrzymano przez nanoszenie pasmami M. fortuitum NRRL B-11045 umieszczonego na plytce agarowej zawierajacej jako srodowisko reakcyjne nastepujace skladniki: NH4N03 K2NP04 MgS04 • IHfi NaCl FeS04 • 7H20 Woda destylowana 1,0 g/litr W 0,25 g/litr 0,25 g/litr 0.005 g/litr 0,001 g/litr uzupelnienie do 1 litra es pH roztworu doprowadzono do wartosci 7fi za pomoca 1 n roztworu HC1. Do srodowiska reakcyj¬ nego dodano agar (15 g/litr) i 9 a-hydroksyandro- stenodion (0,25 g/litr) i calosc utrzymywano w auto¬ klawie przez okres 30 minut w temperaturze 121°C.Goraca mieszanine reakcyjna przelano nastep¬ nie do wysterylizowanego mieszalnika i mieszano ja przez okres kilkunastu minut, po czym prze¬ niesiono na wysterylizowane plytki Petri'ego. Plyt¬ ki inkubowano w temperaturze 28°C przez okres okolo 7 dni. Z plytek zebrano szybko rosnacy szczep. M.fortuitum NRRL B-11358. M.fortuitum NRRL B-11358 poddano nastepnie mutacji otrzy¬ mujac M.fortuitum NRRL B-11359. (a) Mutagene- za przy uzyciu nitrozoguanidyny.Komórki M.fortuitum NRRL B-11358 hodowano w temperaturze 28°C na sterylnej pozywce zawie¬ rajacej nastepujace skladniki: Bulion odzywczy (difco)8 g/litr Bulion drozdzowy 1 g/litr Gliceryna 5 g/litr TWEEN80 1 g/litr Woda destylowana uzupelnienie do 1 litra Przed poddaniem sterylizacji w temperaturze 121°C przez okres 20 minut, pH roztworu dopro¬ wadzono do wartosci 7,0 za pomoca 1 n roztworu NaOH.Komórki hodowano az do uzyskania gestosci okolo 5Xl08/ml po czym poddano je tabletkowania w wirówce, a nastepnie przemyto taka sama obr jetoscia sterylnego roztworu cytrymamu soda (0,1 molowy) o pH = 5,6.Z przemytych komórek ponownie sporzadzono zawiesine w takiej samej objetosci buforowego roztworu cytrynianu, z której pobrano próbke do- zmiareczkowania (okreslenie ilosci komórek) i do¬ dano nitrozoguanidyne do uzyskania koncowego1 stezenia 50 \i g/ml. Zawiesine komórek inkubowa* no w temperaturze 37°C w lazni wodnej przez: okres 30 minut, po czym ponownie pobrano prób¬ ke do miareczkowania. Pozostalosc odwirowano i przemyto taka sama objetoscia sterylnego" 0,1 molowego roztworu fosforanu potasowego* o pH = 7,0.Z hodowli komórek ponownie sporzadzono za¬ wiesine w minimalnej ilosci sterylnego roztworui soli pozbawionego zwiazków stanowiacych zródlo- wegla: NH4N03 *jHPOf MgSQ4 • THjO NaCl FeSO«• 7HjO 1,0 g/litr 0,2* gnw 0,25 g/litr 0,005 g/litr 0,001 g/litr Woda destylowana, uzupelnienie do 1 litra: pH otrzymanego roztworu doprowadzono do* wartosci 7,0 za pomoca 1 n roztworu HCl* a na¬ stepnie poddano go sterylizacji w temperaturze* 121°C, która prowadzono przez okres 20 minut- Hodowle komórek przeniesiono nastepnie na ki celem wyodrejbnieia mutanta^ b) Wybór i wydzielanie Sporzadzono niewielka ilosc roztworu soli, jak to opisano w przykladzie I lecz dodano do niego* dodatkowo gliceryne (10 g/litr), bedaca jedynym.116 713 8 zródlem wegla i energii. Do roztworu dodano nastepnie agar (15 g/litr) i calosc utrzymywano w autoklawie w temperaturze 121 °C przez okres 30 minut, po czym przelano na .sterylne plytki Pe- trrego.Jak juz wspomniano, komórki które ulegly mu- tageriezie rozcienczono i wylano na plytki.Hodowla na takiej pozywce eliminuje wiekszosc tych organizmów samozywnych powstajacych w wyniku mutagenezy które do wzrostu na che¬ micznie okreslonej pozywce wymagaja witamin, czynników powodujacych wzrost, itp. Po inkubacji w temperaturze 28°C przez okres 7 dni otrzyma¬ ne kolonie przeniesiono na plytki sluzace do wy¬ odrebnienia mutantów, a nastepnie na plytki kon¬ trolne zawierajace roztwór, w sklad którego wchodzila gliceryna.Plytki testowane sporzadzono w sposób opisa¬ ny przez G. F. Petersona, H. L Lewisa i J. R. Da- visa, 1962 „Preparation of uniform dispersions of cholesterol and ther water-insoluble carbon in agar media", J. Lipid Research 3 :275—276.Roztwór soli znajdujacy sie na plytkach sporza¬ dzono tak, jak to opisano w czesci (a) przykladu I.Do roztworu dodano agar (15 g/litr) i 9 «-OH AD (0,25 g/litr) i otrzymana zawiesine utrzymywa¬ no w autoklawie w temperaturze 121°C przez okres 30 minut. Sterylna, goraca mieszanine przelano nastepnie do sterylnego mieszalnika i mieszano przez okres kilku minut, po czym przelano ja na sterylne plytki Petri'ego.W metodzie tej sklonnosc do pienienia stanowi pewna trudnosc, która mozna jednak pokonac przez mieszanie roztworu na goraco oraz przez wyrzazanie powierzchni spieczonych plytek aga¬ rowych. W ten sposób uzyskuje sie jednorodna zawiesine nierozpuszczalnych w wodzie zwiazków wegla, co ulatwia wytworzenie homogenicznych lecz nieprzezroczystych plytek agarowych.Kolonie, które hodowano na plytkach kontrol¬ nych i które wykazywaly niewielki wzrost — (jesli w ogóle — na plytkach zawierajacych 9 a-OHAD jako jedyne zródlo wegla, oczyszczono przez na¬ noszenie pasami na odzywsze plytki agarowe.Po hodowaniu ich w temperaturze 28°C pojedyn¬ cze kolonie zebrano z odzywczych plytek agaro¬ wych przy pomocy sterylnych szczypców i ponow¬ nie poddano je testom przez zaszczepianie wyza¬ rzonych plytek zawierajacych 9 a-OHAD jako zród¬ lo wegla. Oczyszczone kolonie, którte wykazywaly cechy dziedziczne odmienne od szczepów macierzy¬ stych poddano ocenie w kolbach dó wytrzasania, c) Dokonywanie oceny w kolbach dg wytrzasania Kolbki do wytrzasania 500 ml) zawieraly po 100 ml roztworu poddawanego bioprzemianie: Cereloza 5,0 g/litr NH4C1 3,0 g/litr KHjPO, 0,5 g/litr CaCO? Na3CBH507 • 2H20 MgS04 • 7H20 mocznik TWEEN 80* Ucon •• Woda kranowa 3,0 g/litr 3,0 g/litr 2,0 g/litr 0,5 g/litr 2,"0 g/litr 8,0 g/litr do 1 litra pH doprowadzono do wartosci 7,0 za pomoca 1 n roztworu NaOH.* Altas Refinery, Inc., Newark, New Jersey ** Syntetyczny srodek zapobiegajacy pienieniu produkcji Union Carbide Chem. Co., Ny, Ny. 5 Do roztworu dodano najpierw maczke sojowa (1 g/litr), a nastepnie sitosterol (30 g/litr). Kolbki umieszczono w autoklawie w temperaturze 121°C na okres 30 minut, po czym chlodzono je do tem- pertury 28°C i zaszczepiono 10 ml wzrastajacych io zarodników, spreparowanych w nastepujacy spo¬ sób: Oczyszczone i wydzielone kolonie (z czesci (b) niniejszego przykladu) hodowano na ukosnych plytkach agarowych w temperaturze 28°C. Pobra¬ la na porcje komórek uzyto do zaszczepienia kolbek o pojemnosci 500 ml, zawierajacych 100 ml ste¬ rylnego roztworu pozywki zawierajacej nastepu¬ jace skladniki: 20 Bulion odzywczy 8 g/litr Ekstrakt drozdzowy 1 g/litr Gliceryna 5 g/litr TWEEN30 . 1 g/litr Woda destylowana, uzupelnienia do 1 litra 25 pH roztworu doprowadzono do wartosci 7,0 za pomoca 1 n roztworu NaOH, po czym kolbki umieszczono w autoklawie w temperaturze 121^ na okres 20 minut. Kolbki inkubowano w tempera¬ turze 28°C przez okres 72 godzin. 30 Jak juz wspomniatno, do szczepienia kolbek o pojemnosci 500 ml zawierajacych po 100. ml sterylnego roztworu ulegajacego przemianie uzyto 10 ml wzrastajacych zarodników. Kolbki inkubo¬ wano nastepnie w^temperaturze od 28°C do 30°C 35 w wytrzasarce obrotowej, pobierajac w pewnych odstepach czasu 10 ml próbki roztworu.Pobrane próbki ekstrahowano nastepnie 3 porc¬ jami chlorku metylenu. Porcje ekstraktu anali¬ zowano chromatograficznie (gaz—ciecz) na zelu w krzemionkowym, stosujac opisana wyzej miesza¬ nine rozpuszczalników, to znaczy mieszanine octa¬ nu etylu z cykloheksanem w stosunku objetos¬ ciowym 2:3. Obecnosc zwiazku AD potwierdzila fakt selektywnej degradacji sitosterolu wywola- 45 nej mutantem otrzymanym z M.fortuitum NRRL B-11358.Przykladu. Przemiana sitosterolu w AD.Zastosowano taki sam roztwór jak opisany w przykladzie I. (c). Roztwór poddano sterylizacji 50 w autoklawie w temperaturze 121°C w ciagu 30 minut, po czym ochlodzono go 'do temperatury 30°C i zaszczepiono 10 czesciami hodowli zawie¬ rajacej mutant M.fortuitum NRRL B-11359, otrzy¬ many w sposób opisany w przykladzie I (c). Za- 55 szczepiona mieszanine inkubowano w temperatu¬ rze 30° przez okres 336 godzin, jednoczesnie mie¬ szajac celem pobudzenia wzrostu.Po inkubacji mieszanine ekstrahowano dwu- chlorometanem. Ekstrat wysuszono nad bezwodnym 60 siarczanem sodu, a rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc rozpusz¬ czono w niewielkiej ilosci mieszaniny octanu ety¬ lu z cykloheksanem (20:80). Otrzymany roztwór poddano chromatografii na zelu krzemionkowym. 65 Obecnosc androsteno-4-dionu-3,17 oraz niewiel-118 713 9 10 kich ilosci androstadieno-4-dionu-3,17 stwier¬ dzono na podstawie chromatografii cienkowarst¬ wowej. Zwiazki te wymywano z zelu krzemion¬ kowego eluentem stanowiacym mieszanine octa¬ nu etylu z chloroformem (15 :85). 5 Z otrzymywanych zwiazków odparowano roz¬ puszczalnik i poddano je krystalizacji z heksanu.Przyklad III. Stosujac cholesterol zamiast sitosterolu, stosowanego w przykladzie II, uzys¬ kano AD jako zasadniczo jedyny produkt prze- 10 miany.Przyklad IV. Stosujac stigmasterol zamiast sitosterolu z przykladu II, uzyskano AD jako za¬ sadniczo jedyny produkt przemiany.Przyklad V. Stosujac kampesterol zamiast 15 sitosterolu z przykladu II, uzyskano AD jako za¬ sadniczo jedyny produkt przemiany.Przyklad VI. W sposób opisany w przykla¬ dzie II mozna wytworzyc AD jako zasadniczo je¬ dyny produkt przemiany, stosujac mieszanine do- M wolnych stereidów z przykladu II—V jako doda¬ tek do sitosterolu lub zamiast niego.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania andrbsteno-4-dionu-3,17, ^ znamienny tym, ze hoduje sie Mycobacterium for- tuitum NRRL B-11359 w wodnym roztworze po¬ zywki, w atmosferze tlenowej i w obecnosci stero¬ idu, który w pozycji 17 podstawiony jest lancu¬ chem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 ato¬ mów wegla, wlacznie. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie sitosterol. 3. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie cholesterol. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie stigmasterol. 5. Sposób wedlug zatrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie kampesterol. 6. Sposób wytwarzania androsteno-4-dionu-3,17, znamienny tym, ze hoduje sie Mycobacterium for- tuitum NRRL B-11359 w wodnym roztworze po¬ zywki, w atmosferze tlenowej i w obecnosci mie¬ szaniny dwóch lub kilku steroidów, z których kazdy podstawiony jest w pozycji 17 lancuchem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 atomów weg¬ la wlacznie. 7. Sposób wedlug zastrz. 6, znamienny tym, ze Jako skladniki mieszaniny steroidów stosuje sie sitosterol, cholesterol, stigmasterol i kampesterol. PL
Claims (7)
- Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania andrbsteno-4-dionu-3,17, ^ znamienny tym, ze hoduje sie Mycobacterium for- tuitum NRRL B-11359 w wodnym roztworze po¬ zywki, w atmosferze tlenowej i w obecnosci stero¬ idu, który w pozycji 17 podstawiony jest lancu¬ chem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 ato¬ mów wegla, wlacznie.
- 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie sitosterol.
- 3. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie cholesterol.
- 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie stigmasterol.
- 5. Sposób wedlug zatrz. 1, znamienny tym, ze jako steroid stosuje sie kampesterol.
- 6. Sposób wytwarzania androsteno-4-dionu-3,17, znamienny tym, ze hoduje sie Mycobacterium for- tuitum NRRL B-11359 w wodnym roztworze po¬ zywki, w atmosferze tlenowej i w obecnosci mie¬ szaniny dwóch lub kilku steroidów, z których kazdy podstawiony jest w pozycji 17 lancuchem alkilowym zawierajacym od 2 do 10 atomów weg¬ la wlacznie.
- 7. Sposób wedlug zastrz. 6, znamienny tym, ze Jako skladniki mieszaniny steroidów stosuje sie sitosterol, cholesterol, stigmasterol i kampesterol. PL
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/931,741 US4293646A (en) | 1978-08-07 | 1978-08-07 | Composition of matter and process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL217611A1 PL217611A1 (pl) | 1980-04-21 |
| PL116713B1 true PL116713B1 (en) | 1981-06-30 |
Family
ID=25461277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1979217611A PL116713B1 (en) | 1978-08-07 | 1979-08-07 | Process for preparing androsten-4-di-3,17-one |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4293646A (pl) |
| EP (1) | EP0008214B1 (pl) |
| JP (1) | JPS5545394A (pl) |
| DD (1) | DD145280A5 (pl) |
| DE (1) | DE2963006D1 (pl) |
| IE (1) | IE50417B1 (pl) |
| IL (1) | IL57788A (pl) |
| PL (1) | PL116713B1 (pl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57500226A (pl) * | 1980-02-22 | 1982-02-12 | ||
| US4444884A (en) * | 1982-05-25 | 1984-04-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| US4755463A (en) * | 1982-05-25 | 1988-07-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2602769A (en) * | 1952-02-23 | 1952-07-08 | Upjohn Co | Oxygenation of steroids by mucorales fungi |
| US3684657A (en) * | 1970-05-11 | 1972-08-15 | Searle & Co | Selective microbiological degradation of steroidal 17-alkyls |
| US3759791A (en) * | 1970-12-10 | 1973-09-18 | Searle & Co | Selective microbiological preparation of androst-4-ene-3,17-dione |
| US4035236A (en) * | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| DE2703645C3 (de) * | 1976-03-01 | 1981-11-12 | The Upjohn Co., 49001 Kalamazoo, Mich. | Verfahren zur Herstellung eines Gemischs aus Androsta-1,4-dien-3,17-dion und Androst-4-en-3,17-dion |
| NL189865C (nl) * | 1976-10-22 | 1993-08-16 | Upjohn Co | Werkwijze voor het bereiden van androst-4-een-3,17-dion en de daarbij toegepaste micro-organismen. |
-
1978
- 1978-08-07 US US05/931,741 patent/US4293646A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-07-12 IL IL57788A patent/IL57788A/xx unknown
- 1979-08-03 JP JP9875879A patent/JPS5545394A/ja active Granted
- 1979-08-06 EP EP79301582A patent/EP0008214B1/en not_active Expired
- 1979-08-06 DD DD79214824A patent/DD145280A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-08-06 DE DE7979301582T patent/DE2963006D1/de not_active Expired
- 1979-08-07 PL PL1979217611A patent/PL116713B1/pl unknown
- 1979-08-08 IE IE1503/79A patent/IE50417B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4293646A (en) | 1981-10-06 |
| EP0008214A1 (en) | 1980-02-20 |
| DD145280A5 (de) | 1980-12-03 |
| DE2963006D1 (en) | 1982-07-22 |
| IE791503L (en) | 1980-02-07 |
| IL57788A0 (en) | 1979-11-30 |
| IL57788A (en) | 1982-03-31 |
| JPS6258715B2 (pl) | 1987-12-07 |
| JPS5545394A (en) | 1980-03-31 |
| PL217611A1 (pl) | 1980-04-21 |
| IE50417B1 (en) | 1986-04-16 |
| EP0008214B1 (en) | 1982-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4035236A (en) | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione | |
| US4029549A (en) | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum | |
| US4293645A (en) | Process for preparing androsta-1,4-diene-3,17-dione and androst-4-ene-3,17-dione | |
| JPH022395A (ja) | ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法 | |
| US4293644A (en) | Process for preparing androst-4-ene-3,17-dione | |
| PL116713B1 (en) | Process for preparing androsten-4-di-3,17-one | |
| US4062729A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| PL111029B1 (en) | Method for microbiological manufacturing the mixture ofandrostadien-1,4-di-3,17-one and androsten-4-di-3,17-one | |
| US4039381A (en) | Composition of matter and process | |
| US4358538A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4042459A (en) | Composition of matter and process | |
| US4097335A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4345030A (en) | Microorganism mutant conversion of sterols to androsta-4-ene-3,17-dione | |
| US4062880A (en) | 9α-Hydroxy-bis-nor-cholanic acid | |
| US4345033A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4177106A (en) | Process for preparing 3aα-H-4α-[3'-propanol]-7aβ-methylhexahydro-1,5-indanedione hemiketal | |
| US4211841A (en) | Process for microbial transformation of steroids | |
| US4304860A (en) | Process for the microbial transformation of steroids | |
| US4345034A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4329432A (en) | Mycobacterium fortuitum strain | |
| JPS608120B2 (ja) | 微生物による化合物の製法 | |
| JPS6231906B2 (pl) | ||
| US4443541A (en) | Process for preparing an indenedione and a mycobacterium culture therefor |