Opis patentowy opublikowano: 1988 02 25 140870 CZYTELNIA Ur?edu Patentowano r <¦ Ir- ..... i Int. Cl.4 C07D 493/14 C07D 493/12 Twórca wynalazku Uprawniony z patentu: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar R.T., Budapeszt (Wegry) Sposób otrzymywania pochodnych pterokarpanu Wwynalazek dotyczy sposobu otrzymywania za¬ sadniczo czystych, krystalicznych pochodnych pte¬ rokarpanu na drodze wyodrebniania ich z suro¬ wych ekstraktów produktów naturalnych. Otrzy¬ mane zwiazki wykazuja aktywnosc fizjologiczna.Wiadomo, ze wodnoalkoholowe ekstrakty z ko¬ rzeni drzewa cabeca de negra, rosnacego w Ame¬ ryce Poludniowej, stosowane byly przez pracow¬ ników plantacji w dzungli nad górna Amazonka jako doustna odtrutka przeciw jadom wezy i pa- jaków. W Ameryce Poludniowej znanych jest okolo 10 odmian gatunku cabeca de negra. Dotychczas nie sa znane publikacje na temat natury substancji czynnej otrzymywanej sposobem wedlug wyna¬ lazku ani tez na temat jej dzialan ubocznych, ak¬ tywnosci farmakologicznej, stabilnosci itp. Ptero- karpany wykazujace wlasciwosci przeciwbakteryj- ne zidentyfikowano w literaturze [Heterocycles, t. 15, 1163 (1981)].Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie nowe pochodne pterokarpanu o wzorze 1 oraz o wzorze 2, które wyodrebnia sie w zasadniczo czystej krysta¬ licznej postaci. Dla ulatwienia, zwiazki o powyzszej budowie nazywane beda w dalszej czesci opisu ca- benegrina I, odpowiadajaca 3-hydroksy-4-(3-hydro- ksymetylo-2-butano)-8,9-metylenodioksypterokarpa- nowi oraz cabenegrina II, odpowiadajaca 2-(3- —hydroksymetylobutylo)- 3-hydroksy-8,9- metyleno- dioksypterokarpanowi albo tez odpowiednio, zwiaz¬ kami o wzorze 1 i o wzorze 2. 10 15 20 Sposób wedlug wynalazku polega na wieloetapo¬ wym procesie majacym na celu odzyskanie i wy¬ odrebnienie zasadniczo czystych (95—100%) krysta¬ licznych produktów, zwanych cabenegrina I i ca¬ benegrina II. Sposób wedlug wynalazku wytwarza¬ nia zwiazków o wzorze 1 i 2 polega na tym, ze rozdrobnione korzenie drzewa cabeca de negra ekstrahuje sie za pomoca wodno-alkoholowego roz¬ tworu, nastepnie surowy ekstrakt zateza sie do oleistej pozostalosci, po czym oleista pozostalosc traktuje sie wodnym roztworem metanolu i nas¬ tepnie ekstrahuje sie weglowodorem alifatycznym o 5—8 atomach wegla, po czym uzyskana wodna warstwe ekstrahuje eterem, a nastepnie otrzymana warstwe eterowa rozdziela metoda chromatogra¬ ficzna.Oleista pozostalosc mozna równiez ekstrahowac heksanem. Natomiast warstwe eterowa rozdziela sie za pomoca wysokocisnieniowej cieklej chroma¬ tografii przy uzyciu roztworu eluujacego zawiera¬ jacego metanol, a po oddzieleniu pierwszej frakcji od drugiej odzyskuje sie z pierwszej frakcji zwia¬ zek o wzorze 1, a z drugiej frakcji zwiazek o wzo¬ rze 2, stanowiacy mieszanine 3:1 epimerów przy C-3. Odzysk nastepuje przez poddanie pierwszej frakcji wysokocisnieniowej cieklej chromatografii przy uzyciu roztworu eluujacego zawierajacego metanol i chlorek metylenu. Natomiast druga frak¬ cje poddaje sie wysokocisnieniowej cieklej chro¬ matografii przy uzyciu roztworu eluujacego zawie- 140 8703 140 870 4 rajacego metanol, acetonitryl, wode i alkohol n-pro- pylowy.Cabenegrina I i cabenegrina II wykazuja uzy¬ tecznosc farmaceutyczna w leczeniu ssaków z czlo¬ wiekiem wlacznie, zatrutych ukaszeniami jadowi¬ tych wezy i owadów. Zwiazki te dzialaja jako silne odtrutki przeciw skutkom wywolanym przez tok¬ syny wezy i owadów. Zwiazki o wzorze 1 i 2 znaj¬ duja równiez zastosowanie w leczeniu skutków in¬ nych znanych toksyn organicznych wystepujacych przy zatruciach pokarmowych takich jak endotok- syna E. coli oraz toksyna wytwarzana przez Clos- tridium botulinum, zwana zwykle jadem kielbasia¬ nym. Zwiazki te znajduja równiez na ogól zastoso¬ wanie farmaceutyczne do leczenia skutków wywo¬ lanych u ssaków przez toksyny wytwarzane przez bakterie chorobotwórcze (endotoksyny i egzotoksy- ny) które atakuja uklad nerwowy chorego, zwla¬ szcza w przypadkach wystepowania paralizu ukla¬ du oddechowego. Wskazane jest równiez leczenie skutków toksyn dzialajacych na uklad sercowo- -naczyniowy.Zwiazki te moga byc podawane doustnie, w pos¬ taci cieklej jako zawiesiny lub solubilizowane, w od¬ powiednim nosniku farmaceutycznym. Czysty zwia¬ zek w postaci krystalicznej moze byc podawany doustnie w postaci kapsulek lub tabletek, po zmie¬ szaniu go z odpowiednimi nosnikami farmaceutycz¬ nymi. Mozna równiez dowolny ze zwiazków o wzo¬ rze 1 lub 2 rozpuscic w odpowiednim cieklym nos¬ niku farmaceutycznym i podawac roztwór dozylnie za pomoca strzykawki lub kateteru, w przypadku, gdy dostepne jest urzadzenie kontrolujace w celu oznaczenia efektów leczenia. Zwiazki o wzorze 1 i 2 moga ewentualnie byc mieszane razem w róz¬ nych proporcjach, a mieszaniny moga byc miesza¬ ne jak wyzej opisano z odpowiednimi nosnikami farmaceutycznymi.Okolo 1/2 kg uzytych korzeni drzewa cabeca de negra rozdrabnia sie na male kawalki, które nas¬ tepnie maceruje sie, proszkuje lub inaczej traktuje w celu rozerwania wlóknistej struktury. Etap ten mozna prowadzic w mieszarce do cial sypkich lub w laboratoryjnym homogenizatorze. Nie nalezy sto¬ sowac korzeni z wystepujaca plesnia lub grzybami.Sproszkowany korzen umieszcza sie w duzej zlew¬ ce szklanej lub w innym odpowiednim naczyniu, które nadaje sie do przykrycia i mieszania. Do¬ daje sie mieszanine wody i alkoholu alifatycznego o 1—4 atomach wegla, korzystnie mieszanine eta¬ nol:woda (77:23) w ilosci wystarczajacej do przy¬ krycia sproszkowanych korzeni i miesza sie gwal¬ townie pare minut. Naczynie zawierajace wodny roztwór etanolu i korzen pozostawia sie do odsta¬ nia w temperaturze co najmniej 48 godzin, miesza¬ jac co jakis czas. Po uplywie tego czasu roztwór alkoholowy zawierajacy surowy ekstrakt oddziela sie od korzenia dowolnym odpowiednim sposobem, np. przelewajac przez saczek ze sredniej bibuly fil¬ tracyjnej. Sproszkowany korzen odrzuca sie. Prze¬ saczony roztwór ma kolor mocnej herbaty.Z surowego ekstraktu otrzymanego powyzszym sposobem wyodrebniano aktywne zwiazki stosujac nastepujacy sposób. 135 ml surowego ekstraktu wodnoalkoholowego zatezano za pomoca lagodnego ogrzewania pod zmniejszonym cisnieniem do otrzy- wania 1,2 g brazowej, oleistej pozostalosci. Zatezo- ny material traktowano 50°/o wodnym roztworem metanolu, po czym roztwór ekstrahowano gwaltów- 5 nie wytrzasajac go z alifatycznym weglowodorem o 5—8 atomach wegla, korzystnie z heksanem.Warstwe heksanowa oddzielono i wyrzucono. War¬ stwe wodna ekstrahowano eterem, energicznie wstrzasajac. Warstwe eterowa oddzielono od war- 10 stwy wodnej, przy czym warstwe eterowa (640 mg) odlozono. Warstwe wodna ekstrahowano alkoholem n-butylowym, energicznie wstrzasajac. Warstwe alkoholu n-butylowego oddzielono i odlozono do ewentualnych badan, zas warstwe wodna odrzu- 15 cono. / Wyzej opisana wyekstrahowana warstwe eterowa rozdzielono za pomoca znanych metod chromato¬ graficznych. Korzystnie, powyzsza warstwe etero¬ wa poddawano w pierwszym etapie wyseokocisnie- 20 niowej cieklej chromatografii (HPLC) na Sephadex LH-20, a nastepnie, w drugim etapie na zelu krze¬ mionkowym, stosujac wodny roztwór metanolu jako rozpuszczalnik eluujacy. Otrzymano w ten sposób dwie frakcje, przy czym pierwsza dalej roz- 25 dzielano za pomoca HPLC przy uzyciu Partisil-10, eluowanego 3ID/o roztworem metanolu w chlorku metylenu do otrzymania czystych, stalych zwiaz¬ ków. 30 Zwiazek zidentyfikowany jako cabenegrina I uzyskano w postaci bialej krystalicznej substancji w ilosci 44 mg. Oznaczono wyrazna temperature topnienia 167—168°C, analiza wykazala sklad C21H20O6. Wartosc Rf zwiazku o wzorze 1 przy 35 chromatografii cienkowarstwowej z uzyciem zelu krzemionkowego CO/Kiselguhr F-254 oraz miesza¬ niny benzen/octan etylu/metanol (15:4:1) wyno¬ sila 0,53. Widma UV, CD i IR zwiazków o wzorze 1 sa nastepujace: 10 Widmo w nadfiolecie: (w MeOH): 209 nm {s 75,000), 233 nm przegiecie, s 24,000), 309 nm (e 13,000).Widmo CD (w MeOH):213 nm (zk-25.58), 220 nm (As-2.00), 238 nm (Zte-9.84); 302 nm (Je+3,15).Widmo w podczerwieni (w CHC13): 3550 cm-1, l5 1600 cm"1, 1113 cm"1, 925 cm"1.Poza powyzszymi danymi spektralnymi, otrzyma¬ no dla cabenegriny I nastepujace dane ^-NMR, 13C-NMR i MS (El): iH-NMR: 1,83 (3H, d, 1 Hz, 4-CH3). '0 3,40 (2H, br, d, 7 Hz, C 1'), 3.40 (2H, ddd, 7, 7,5 Hz, C 6a), 3,61 (2H, d, d, 11,7 Hz, c 6/?), 3,90 (2H, -OCH2O-), 3,99 (2H, br, s, -CH2-OH), 5 4,28 (1H, dd, 11,5 Hz, C 6 a), 5,45 (1H, br, t, 7 Hz, C 2'), 5,45 (1H, d, 7 Hz, C lla), 6.41 (1H, s, C 10), 6,52 (1H, d, 9 Hz, C 2), 0 6,70 (1H, s, C 7), 7,23 (1H, d, 9 Hz, Cl) ppm.MC-NMR: 13,74, (4'-CH3), 21,88 (C 1'), 40,16 (C 6a), 66,72 (C 6), 68,72 (-CH2-OH), 79,10 (C lla), 93,77 (C 10), 104,73 (C 7), 109,6 (C 2), 5 112,63 (C 4 lub Cla), 115,01 (C 4 lub C la);5 140870 6 1X8,04 (C 6b), 123,49 (C 2'), 129,15 (C 1), 136.07 (C 3'), 141,67 (C 8), 148,06 (C 9), 154,20 (C lOa lub C 4a), 154,20 (C 1P lub C 4a), 155.08 (c 3) ppm.MS (18 eV): M+ = 368, 50°/o m/e - 350, 10Q»/o, 335, 95%, 335, 95°/o, = 176, 65°/o, 161, 90°/o.Druga próbka substancji otrzymanej z wyzej opi- sanej HPLC stanowila oleista mieszanine o cieza¬ rze okolo 70 mg, Te druga aktywna frakcje, otrzy¬ mana z HPLC z wyzej opisanej wartwy eterowej traktowano w nastepujacy sposób w celu otrzyma¬ nia cabenegriny II: Mieszanine poddano dalszej HPLC przy uzyciu u-Bondapack C 18 i miesza¬ niny metanol/acetonitryl/H20/alkohol n-propylowy (71:71:59:2).Zwiazek o wzorze 2 otrzymano w zasadniczo czystej (95—100%) krystalicznej postaci, w ilosci okolo 1 mg. Budowe powyzszego zwiazku ozna¬ czono na podstawie nastepujacych stalych fizycz¬ nych oraz analizy (MS) jako CaiHnOg. iH-NMR: 0,69 (3H, d, 5,8 Hz, 3'-CH3), 2,50 (2H, m, C 1'), 2,67 (2H, m, C 1'), 2,94 (1H, ddd, 9,1, 6,3, 4,9 Hz, C 6a), 3,10 (2H, dd, 8,8, 2,7 Hz, -CH2-OH), 3,18 (2H, dd, 8,8, 4,4 Hz, -CH2-OH), 3,50 (1H, dd, 9,1, 9,1 Hz, C 6 )), 3,86 (1H, dd, 9,1, 4,9 Hz, C 6 a), 5,27 (1H, d, 6,3 Hz, C lla), 5,30 (2H, -OCHaO-), 5,33 (2H, -OCHaO-), 6,36 (1H, C 10), 6.52 (1H, C 4), 6.53 (1H, C 7), 7,08 (1H, C 1) ppm.Widmo w nadfiolecie (w MeOH): 204 nm {e 116,000), 230 nm (s 8,000), 292 nm (e 9,400), 308 nm (e 11,800).Widmo CD (w MeOH): 237 nm (Je-6,68), 280 nm (Je-0,46), 299 nm (^-1,72).Dane NMR wykazuja, ze zwiazek o wzorze 2 sta¬ nowi mieszanine 3:1 epimerów przy C-3\ Budowa obu zwiazków, cabenegriny I i cabenegriny II po¬ twierdzono na drodze syntezy ich odpowiednich racematów.Nowe zwiazki otrzymane sposobem wedlug wy¬ nalazku nadaja sie do wytwarzania terapeutycz¬ nie czynnych preparatów, które stanowia odtrutki nadajace sie do leczenia skutków ukaszen ssaków, lacznie z czlowiekiem przez jadowite weze i owady.Zwiazki te nadaja sie równiez do leczenia skut¬ ków toksyn wytwarzanych przez bakterie chorobo¬ twórcze, takich jak endotoksyny E. coli, do lecze¬ nia zatrucia jadem kielbasianym i innych, którym towarzysza objawy dzialania na osrodkowy uklad nerwowy i zwiazany z tym paraliz ukladu odde¬ chowego, jak równiez do leczenia skutków wywo¬ lanych przez toksyny dzialajace na uklad sercowo- naczyniowy u ssaków.Nowe zwiazki, otrzymane wyzej opisanymi spo¬ sobami ekstrakcji, ponadto badaniom pod wzgle¬ dem obecnosci w nich substancji aktywnych fizjo¬ logicznie w próbach in vivo na myszach. Jako tes¬ towane zwierzeta zastosowano biale myszy Swiss.Webster, róznej plci, o ciezarze 20-25 g. Kazda gru¬ pe badanych zwierzat poddano zatruciu dawka dwa i pól raza wieksza od dawki smiertelnej jadu weza Fer de Lance (Bothrops atrox), na drodze- wstrzykniecia dootrzewnowego. W przypadku bra¬ ku leczenia zatrute zwierzeta zdychaly w ciagu paru minut.Koncentraty lub zwiazki o wzorze 1 i 2 otrzy¬ mane z kazdej frakcji z powyzszego sposobu eks¬ trakcji badanej pod wzgledem aktywnosci odtru¬ wania przez wstrzykiwanie myszom, natychmiast po zatruciu, roztworu wodno-etanolowego (77:23) substancji z kazdej frakcji. Kazdemu zwierzeciu podano 0,25 ml odpowiedniego roztworu. Na pod¬ stawie tych badan, stwierdzono, ze minimalna dawka potrzeba do przezycia po zatruciu trucizna Fer de Lance wynosila 2,8 mg/kg cabenegriny I oraz 2,0 mg/kg cabenegriny II.Badania toksykologiczne wykazuja, ze podanie wodno-etanolowych roztworów cabenegriny I i ca¬ benegriny II zdrowym zwierzetom kontrolnym nie wywoluje znaczacych zmian w witalnych funk¬ cjach fizjologicznych. Podawac mozna za pomoca wstrzykniecia dozylnego lub domiesniowego lub doustnie poprzez sonde zoladkowa. Nie stwierdzona znaczacej zmiany w tetniczym cisnieniu krwi, liczbie skurczów serca, oddychaniu, EKG lub cen¬ tralnym cisnieniu zylnym w zadnym okresie pa podaniu zwiazków o wzorze 1 lub 2 normalnym, zdrowym (czyli nie zatrutym) zwierzetom.Podawanie nie zmienia w sposób znaczacy po¬ tencjalów w czasie spoczynku i w czasie dzialania potencjalów plytek koncowych, przesylania impul¬ sów nerwowych, funkcji nerwowo-miesniowych lub- aktywnosci zmian potencjalu elektrycznego mozga u zwierzat doswiadczalnych. 1. Dzialanie odtruwajace przeciw jadom wezy~ u psów.Zatrucie smiertelna dawka jadu wezy takich jak Bothrops antrox, Crotalus adamamteus lub Crota- lus atrox powoduje gwaltowny spadek tetniczego cisnienie krwi, spadek liczby skurczów serca oraz: wzrost centralnego cisnienia zylnego, po czym nas¬ tepuje czesciowa poprawa tych parametrów, a nas¬ tepnie calkowite zalamanie sie ukladu oddechowe¬ go i sercowo-naczyniowego. Smierc wydaje sie byc nastepstwem polaczenia calkowitego zalamania sie ukladu naczyn obwodowych i przerwania normal¬ nego mechanizmu oddychania. Ponadto, wydaje sier ze wystepuje pewne dzialanie tych trucizn na osrodkowy uklad nerwowy u zwierzat doswiad¬ czalnych. Ten ostatni efekt (CNS) objawia sie zmniejszeniem tak rytmu alfa jak i beta mózgu (EEG). Zmiana ta jest równiez zwiazana z obni¬ zeniem przesylania impulsów do nerwów rucho¬ wych oraz z progresywnym blokowaniem ukladu: nerwowo-miesniowego, podobnym do ofektów wy¬ wolywanych przez kurare. Trucizny nie maja plywu na reakcje miesni na bezposrednie pobu¬ dzenie.W celu zbadania skutecznosci cabenegriny I i II przeciw truciznom przeprowadzono próby na gru¬ pie siedmiu doroslych psów gonczych. Psy usypia¬ lo 15 20 25 30 35 40 45 5C 55 607 140 870 8 no pentabarbitalem sodu (30 mg/kg) po czym kon¬ trolowano zmiany w tetniczym cisnieniu krwi, liczby skurczów serca, elektrokardiogramie i od¬ dychaniu. Podano dawki smiertelne (5-cio-10-cio- krotnie LD5o)liofilizowanego i rekonstytuowanego jadu grzechotnika poludniowo-amerykanskiego Bothrops atrox (Fer de Lance) (2,5 mg—5,0 mg/kg) luj) (10 mg/kg). W ciagu 15 minut po zatruciu ob¬ serwowano wyrazny, staly spadek liczby skurczów serca i cisnienia krwi. W czasie od 15—30 minut oddychanie podobnie spadalo od 20 na minute do 5 na minute. Leczenie rozpoczynano po zaobserwo¬ waniu silnych zaklócen sercowo-naczyniowych oraz widocznych trudnosci w oddychaniu (zwykle po 15—30 min. po zatruciu).Roztwór cabenegriny I otrzymano przez roz¬ puszczenie 33 mg krystalicznego zwiazku w 100 ml wodnego roztworu etanolu (25:75). Podobnie, przy¬ gotowano roztwór 24 mg cabenegriny II w 100 ml wodnego roztworu etanolu (15:75). Dawki do poda¬ wania przygotowywano mieszajac 5 ml kazdego z roztworów alkoholowych zwiazków o wzorze 1 i 2 z 50 ml wody.Odpowiednie roztwory podawano przez sonde umieszczona i wsuwana do zoladka psa. Leczenie przebiegalo nastepujaco: Nie zaobserwowano na¬ tychmiastowej reakcji po leczeniu. Cisnienie krwi, liczba skurczów serca i oddychania pozostawaly krancowo niskie. Po okolo 30 min. od pierwszej dawki odpowiedniego roztworu alkoholowego zwiazku o wzorze 1 lub 2 nastepowalo powolne stopniowe polepszenie oddychania, po czym cze¬ sciowo powracala do stanu pierwotnego liczba skurczów* serca i cisnienie krwi. Leczenie ciagle stosowano w odstepach co 30 min: w 50 ml wody do momentu, kiedy wszystkie kontrolowane obja¬ wy zycia powracaly do normy w granicach 10% w stosunku do wyników kontrolnych. Zakres sku¬ tecznej dawki wynosi 10—20 ml ekstraktu odtrutki na zwierze. Potrzebne sa 2—4 dawki. Po obserwacji w ciagu 8—10 godz. zwierzeta umieszczono w klat¬ kach z pokarmem i woda. Po 24 godz. wszystkie 7 psów wykazywalo oznaki zmniejszonej aktyw¬ nosci. Po 72 godz. wszystkie psy przyjmowaly po¬ karm i wode. Nie bylo potrzebne dodatkowe le¬ czenie. 2. Aktywnosc cabenegriny I i II przeciw endotok- synom E. coli.Skutecznosc cabenegriny I i II w leczeniu szo¬ ków, spowodowanych endotoksyna E. coli, wyka¬ zano na trzech doroslych psach gonczych. Psy uspiono pentabarbitalem sodu (30 mg/kg) i kontro¬ lowano ich zmiany cisnienia tetniczego krwi, liczby skurczów serca, EKG i oddychania. Wstrzyknieto dozylnie smiertelne dawki (1 mg/kg) endotoksyny E.coli przez kateter umieszczony w zyle tylnej nogi psa. W pierwszym doswiadczeniu nie rozpoczeto leczenia odtruwajacego i zwierze zdechlo po 2 godz. od zastrzyku. W trzech dalszych przypadkach roz¬ poczeto leczenie odtruwajace w momencie poja¬ wienia sie silnego zalamania sie sercowo-naczynio- wego i trudnosci oddechowych. Nastepuje to zwy¬ kle w ciagu 1 1/2 godz., po wstrzyknieciu toksyny.Roztwory cabenegriny 1 i II, sporzadzone jak wy¬ zej opisano, wprowadzono przez sonde zoladkowa w jednej dawce 10 ml w 100 ml wody, kazdemu z psów. Tak potraktowane zwierzeta przezywaly i odzyskiwaly normalna aktywnosc. 3. Preparat z wyodrebnionego serca (Lagendorff). 5 Grupe 2 preparatów z serca psa badano w celu zmierzenia wplywu odtrutki na wiencowy obieg krwi, liczbe skurczów serca, EKG, sile skurczu ko¬ morowego i opornosc naczyn wiencowych, gdy po¬ dawano cabenegrine I i II przed albo po podaniu ii smiertelnej dawki trucizny. Obserwowano, ze le¬ czenie wydaje sie zdolne do zwalczania toksycz¬ nych skutków trucizny na funkcje sercowo-naczy- niowe. Skutki te objawiaja sie jako spadek sily skurczu i liczby skurczów serca. Opornosc naczyn 15 wiencowych równiez wzrasta progresywnie po po¬ daniu trucizny.Gdy roztwory zawierajace 0,05 mg/ml zwiazku o wzorze 1 lub 2 wstrzykuje sie bezposrednio do krwiobiegu przed podaniem trucizny tropikalnego 20 grzechotnika, nie obserwuje sie szkodliwych wply¬ wów na serce, a raczej sila skurczu i wiencowy obieg krwi wzrastaja o okolo 15—20°/o. Przy poda¬ waniu zwiazku o wzorze 1 lub 2 po podaniu smier¬ telnej dawki trucizny tropikalnego grzechotnika, 25 odtrutka przywraca do normalnego poziomu sile skurczu i liczbe skurczów serca i likwiduje mniej¬ sze arytmie spowodowane przez zatrucie. 4. Funkcje neurofizjologiczne.- Badano 3 psy i 1 kota pod wzgledem wplywu odtrutki na funkcje nerwowo-miesniowe, potencjal dzialania oraz aktywnosc fal zmian potencjalu elektrycznego mózgu po zatruciu smiertelnymi dawkami jadu Fer de Lance. Jad weza obniza tak aktywnosc fal zmian potencjalu elektrycznego mózgu jak i przekazywania impulsów nerwowych.Zostaja one prawie, jezeli nie calkowicie, przywró¬ cone do normalnego poziomu przez podanie cabe¬ negriny I i II. Potencjaly dzialania i funkcje ner- wowo-miesniowe pozostaja obnizone w ciagu okolo 30—60 min. po leczeniu kazdym ze zwiazków, po czym nastepuje powolny, stopniowy powrót do poziomów kontrolnych po 12—24 godz.W pewnych doswiadczeniach, w których naste- 45 puje calkowite zablokowanie nerwowo-miesniowe i zwierzeta nie sa juz zdolne do spontanicznego od¬ dychania, niezbedne jest sztuczne wprowadzanie powietrza dopóki dzialanie zwiazku nie nastapi.Moze to nastapic po zatruciu, jednakze po ustabi- 5o lizowaniu, zwierzeta sa zdolne do spontanicznego oddychania i nie jest potrzebne dalsze leczenie.Aktywnosc elektryczna kory zostaje znacznie (25— —35%) obnizona przez trucizne, zas po podaniu cabenegriny I i II powraca do normy. Po leczeniu 55 nie obserwuje sie dalszych zmian.Wyniki powyzszych badan wykazuja, ze doustne lub dozylne dawki cabenegriny I i II nadaja sie do leczenia stanów uwazanych klinicznie jako kar— diotoksyczne i/lub neurotoksyczna w swej natu- 60 rze, przy czym nie obserwuje sie zauwazalnych skutków ubocznych. Jak wspomniano wyzej, nowe zwiazki otrzymywane sposobem wedlug wynalazku nadaja sie do wytwarzania róznych preparatów farmaceutycznych, korzystnie do podawania doust— 65 nego lub do wstrzykiwan pozajelitowych.9 140 870 10 Odpowiednie nosniki farmaceutyczne do poda¬ wania doustnego obejmuja ciecze obojetne wzgle¬ dem sluzówki zoladka. Ciekle nosniki moga byc tego rodzaju, z których mozna sporzadzic stabilne zawiesiny zwiazków o wzorze 1 i 2. Alternatywnie, ciekle nosniki moga byc rozpuszczalnikami dla ca- benegriny I lub II. W tym ostatnim przypadku moga to byc roztwory w cieklych nosnikach do podawania doustnego lub pozajelitowego. Prepa¬ raty doustne mozna równiez sporzadzac mieszajac cabenegrine I i II z odpowiednimi znanymi su¬ chymi nosnikami farmaceutycznymi. Te suche pre¬ paraty moga byc formowane w dowolna odpowied¬ nia postac jednostkowa, taka jak pigulki, tabletki lub kapsulki. Mozna stosowac techniki mikro- -kapsulkowania, aby zapewnic przedluzone uwal¬ nianie zadanej dawki, o ile szczególny stan pacjen¬ ta wymaga takiej postaci leczenia.W wielu przypadkach albo rodzaj toksyny albo bardzo zly stan chorego wymaga podania cieklej dawki, aby zapewnic szybkie rozpoczecie terapeu¬ tycznego dzialania zwiazków. Skuteczne leczenie zwierzat lub pacjentów, którzy sa nieprzytomni lub których objawy zycia sa w znacznym stanie obnizenia, wymaga podania doustnych dawek przez sonde zoladkowa lub wstrzykniecie dozylnego strzy¬ kawka lub kateterem Jako przyklad, mozna wy¬ mieniac preparat farmaceutyczny otrzymany przez zmieszanie nastepujacych skladników w ponizszych proporcjach wagowych: Zwiazek o wzorze 1 20 Skrobia 15,0 Stearynian magnezu 2,0 Benzoesan sodu 6,0 Chlorek benzalkoniowy 2,0 Po dokladnym zmieszaniu suchych skladników, tabletkowano mieszanine. Formowano tabletki tak, aby kazda z nich zawierala 100 mg zwiazku o wzo¬ rze 1. Podobnie, przygotowano tabletki z tej samej mieszaniny, stanowiacej nosnik lecz zamiast zwiaz¬ ku o wzorze 1 dodano taka sama proporcje zwiazku o wzorze 2, w tym przypadku formowano tabletki o zawartosci 70 mg zwiazku o wzorze 2. PL