PL183574B1 - Cytostatyki modyfikowane węglowodanami i środek cytostatyczny - Google Patents
Cytostatyki modyfikowane węglowodanami i środek cytostatycznyInfo
- Publication number
- PL183574B1 PL183574B1 PL96322681A PL32268196A PL183574B1 PL 183574 B1 PL183574 B1 PL 183574B1 PL 96322681 A PL96322681 A PL 96322681A PL 32268196 A PL32268196 A PL 32268196A PL 183574 B1 PL183574 B1 PL 183574B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- methanol
- mmol
- tlc
- methylene chloride
- methyl
- Prior art date
Links
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 title claims abstract description 103
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 title abstract description 90
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 126
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 33
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 22
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 21
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 10
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims abstract description 6
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000005191 hydroxyalkylamino group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 claims abstract description 5
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000005042 acyloxymethyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000004849 alkoxymethyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract 2
- -1 methoxy, hydroxy, carboxyl Chemical group 0.000 claims description 82
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 44
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 44
- 239000000460 chlorine Chemical group 0.000 claims description 28
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 17
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 14
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 13
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 11
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 7
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 7
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims description 7
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000004786 difluoromethoxy group Chemical group [H]C(F)(F)O* 0.000 claims description 6
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 5
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 5
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N quinolin-2-ol Chemical compound C1=CC=C2NC(=O)C=CC2=C1 LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical group [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 claims description 4
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 claims description 4
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 claims description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 claims description 4
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 4
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229920002554 vinyl polymer Chemical group 0.000 claims description 4
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 claims description 3
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 3
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 claims description 3
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 claims description 3
- HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N ent-staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 3
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 claims description 3
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 3
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 3
- HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N staurosporine Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N 0.000 claims description 3
- FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N suramin Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(NC(=O)C3=CC=C(C(=C3)NC(=O)C=3C=C(NC(=O)NC=4C=C(C=CC=4)C(=O)NC=4C(=CC=C(C=4)C(=O)NC=4C5=C(C=C(C=C5C(=CC=4)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C)C=CC=3)C)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005314 suramin Drugs 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical group FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N Methoxyamine Chemical compound CON GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 claims description 2
- AXDLCFOOGCNDST-UHFFFAOYSA-N N-methyl-DL-tyrosine Natural products CNC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AXDLCFOOGCNDST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 2
- SIHZWGODIRRSRA-ONEGZZNKSA-N erbstatin Chemical compound OC1=CC=C(O)C(\C=C\NC=O)=C1 SIHZWGODIRRSRA-ONEGZZNKSA-N 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- 125000004970 halomethyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005113 hydroxyalkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- YXJYBPXSEKMEEJ-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;sulfuric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OS(O)(=O)=O YXJYBPXSEKMEEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims 3
- 229930189413 Esperamicin Natural products 0.000 claims 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims 1
- LJQQFQHBKUKHIS-WJHRIEJJSA-N esperamicin Chemical compound O1CC(NC(C)C)C(OC)CC1OC1C(O)C(NOC2OC(C)C(SC)C(O)C2)C(C)OC1OC1C(\C2=C/CSSSC)=C(NC(=O)OC)C(=O)C(OC3OC(C)C(O)C(OC(=O)C=4C(=CC(OC)=C(OC)C=4)NC(=O)C(=C)OC)C3)C2(O)C#C\C=C/C#C1 LJQQFQHBKUKHIS-WJHRIEJJSA-N 0.000 claims 1
- 125000002431 aminoalkoxy group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000005111 carboxyalkoxy group Chemical group 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1167
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 951
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 562
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 489
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 266
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 212
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 208
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 208
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 207
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 157
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 133
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 123
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 119
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 116
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 113
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 108
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 107
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 105
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 102
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 98
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 87
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 85
- 239000000047 product Substances 0.000 description 84
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 73
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 72
- UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N cyclohexatrienamine Chemical group NC1=CC=C=C[CH]1 UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 60
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 52
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 37
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 35
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 30
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 29
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 29
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 29
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 28
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 27
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 26
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 26
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 25
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 24
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 23
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 22
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 21
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 20
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 17
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 16
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 16
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 15
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 13
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 13
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 12
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 11
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 11
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 10
- IFBHRQDFSNCLOZ-YBXAARCKSA-N 4-nitrophenyl-beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-YBXAARCKSA-N 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 7
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- YILIDCGSXCGACV-NFOQIUCISA-N 4-nitrophenyl beta-L-fucoside Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 YILIDCGSXCGACV-NFOQIUCISA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000988 D-alanyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)C 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 6
- JGFBRKRYDCGYKD-UHFFFAOYSA-N dibutyl(oxo)tin Chemical compound CCCC[Sn](=O)CCCC JGFBRKRYDCGYKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 6
- 125000001288 lysyl group Chemical group 0.000 description 6
- YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N methyl 2-bromoacetate Chemical compound COC(=O)CBr YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N thiophosgene Chemical compound ClC(Cl)=S ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- PLIKAWJENQZMHA-UHFFFAOYSA-N 4-aminophenol Chemical compound NC1=CC=C(O)C=C1 PLIKAWJENQZMHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- LPBHYOYZZIFCQT-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl 2-(2-methylpropoxy)-2h-quinoline-1-carboxylate Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC(C)C)C(OCC(C)C)C=CC2=C1 LPBHYOYZZIFCQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 4
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- YWOITFUKFOYODT-UHFFFAOYSA-N methanol;sodium Chemical compound [Na].OC YWOITFUKFOYODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 4
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 4
- LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N nitrobenzene Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1 LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 4
- WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N triflic anhydride Chemical compound FC(F)(F)S(=O)(=O)OS(=O)(=O)C(F)(F)F WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- PILPQAMQDMXSBY-NSHDSACASA-N (2s)-6-amino-2-[bis[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)[C@H](C(O)=O)CCCCN PILPQAMQDMXSBY-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- NDQXKKFRNOPRDW-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-triethoxyethane Chemical compound CCOC(C)(OCC)OCC NDQXKKFRNOPRDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 3
- JHVLLYQQQYIWKX-UHFFFAOYSA-N benzyl 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 JHVLLYQQQYIWKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 3
- 238000006266 etherification reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 3
- DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M tetrabutylazanium;iodide Chemical compound [I-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MIAKOEWBCMPCQR-ZIQFBCGOSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2-(4-aminophenoxy)-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 MIAKOEWBCMPCQR-ZIQFBCGOSA-N 0.000 description 2
- LDPYPPYGHWOOOX-RDVVHMHSSA-N (2r,3s,4r,5r,6s)-2-(4-aminophenoxy)-4-methoxy-6-methyloxane-3,5-diol Chemical compound O[C@H]1[C@H](OC)[C@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 LDPYPPYGHWOOOX-RDVVHMHSSA-N 0.000 description 2
- IFBHRQDFSNCLOZ-GCHJQGSQSA-N (2r,3s,4s,5s,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-GCHJQGSQSA-N 0.000 description 2
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- YILIDCGSXCGACV-UOAXWKJLSA-N (2s,3r,4r,5r,6s)-2-methyl-6-(4-nitrophenoxy)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 YILIDCGSXCGACV-UOAXWKJLSA-N 0.000 description 2
- HEWZVZIVELJPQZ-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxypropane Chemical compound COC(C)(C)OC HEWZVZIVELJPQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N N-acetyllactosamine Chemical group O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCBOWMZAEDDKNH-HOTGVXAUSA-N [4-(trifluoromethoxy)phenyl]methyl (3as,6as)-2-(3-fluoro-4-sulfamoylbenzoyl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate Chemical compound C1=C(F)C(S(=O)(=O)N)=CC=C1C(=O)N1C[C@H]2CN(C(=O)OCC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C[C@@H]2C1 PCBOWMZAEDDKNH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- YKIOKAURTKXMSB-UHFFFAOYSA-N adams's catalyst Chemical compound O=[Pt]=O YKIOKAURTKXMSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,5-disulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 2
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- TYRGLVWXHJRKMT-MRVPVSSYSA-N (2r)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TYRGLVWXHJRKMT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- ZLSPNNWJFFQUQW-ICBNADEASA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-2-(hydroxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)-5-phenylmethoxyoxane-3,4-diol Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@@H]([C@H](O)[C@H]1OCC=1C=CC=CC=1)O)CO)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ZLSPNNWJFFQUQW-ICBNADEASA-N 0.000 description 1
- JFUCKMKCDRBZGV-DGTMBMJNSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-6-(4-aminophenoxy)-2-(hydroxymethyl)-4,5-dimethoxyoxan-3-ol Chemical compound CO[C@H]1[C@@H](OC)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 JFUCKMKCDRBZGV-DGTMBMJNSA-N 0.000 description 1
- BBUFLMDIEDAXFG-FPQWWODTSA-N (2r,3s,4r,6s)-2-(4-aminophenoxy)-6-methyloxane-3,4-diol Chemical compound O1[C@@H](C)C[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 BBUFLMDIEDAXFG-FPQWWODTSA-N 0.000 description 1
- IHIAHGYYUOAGNU-BNDIWNMDSA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(4-aminophenoxy)-6-(hydroxymethyl)-4-methoxyoxane-3,5-diol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](OC)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 IHIAHGYYUOAGNU-BNDIWNMDSA-N 0.000 description 1
- LGIGGYOADJBXKA-YOGXEWEVSA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-4-methoxy-2-(4-nitrophenoxy)-6-(trityloxymethyl)oxane-3,5-diol Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]([C@@H](OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)O1)O)OC)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 LGIGGYOADJBXKA-YOGXEWEVSA-N 0.000 description 1
- HNKDHAGVHBOYLY-RXGFPQBGSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-2-(hydroxymethyl)-4-methoxy-6-(4-nitrophenoxy)oxane-3,5-diol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OC)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 HNKDHAGVHBOYLY-RXGFPQBGSA-N 0.000 description 1
- JBWCYPQQRZZMKJ-LYYZXLFJSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-trimethoxy-2-(methoxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)oxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JBWCYPQQRZZMKJ-LYYZXLFJSA-N 0.000 description 1
- JEZATZVCQDNBAO-CDJZJNNCSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-3,4-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)-5-phenylmethoxyoxane Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@@H]([C@H](OC)[C@H]1OCC=1C=CC=CC=1)OC)COC)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JEZATZVCQDNBAO-CDJZJNNCSA-N 0.000 description 1
- XRZUQYFXBJOZRQ-QBROEMLDSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-3-methoxy-2-(methoxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)-4,5-bis(phenylmethoxy)oxane Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@@H]([C@H](OCC=2C=CC=CC=2)[C@H]1OCC=1C=CC=CC=1)OC)COC)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XRZUQYFXBJOZRQ-QBROEMLDSA-N 0.000 description 1
- BBVURPHIOAOYPE-QBROEMLDSA-N (2r,3s,4s,5r,6s)-4-methoxy-2-(methoxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)-3,5-bis(phenylmethoxy)oxane Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@@H]([C@H](OC)[C@H]1OCC=1C=CC=CC=1)OCC=1C=CC=CC=1)COC)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BBVURPHIOAOYPE-QBROEMLDSA-N 0.000 description 1
- UPPUGZNEPTZZIX-ZZKLTDFHSA-N (2r,3s,5s,6s)-2-(4-aminophenoxy)-6-methyloxane-3,5-diol Chemical compound O[C@H]1C[C@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 UPPUGZNEPTZZIX-ZZKLTDFHSA-N 0.000 description 1
- ANSLKGPHBYYQIM-JAMMHHFISA-N (2s)-2,6-diamino-7-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-7-oxoheptanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C(N)CCC[C@H](N)C(O)=O ANSLKGPHBYYQIM-JAMMHHFISA-N 0.000 description 1
- MWAWILWZYAOFCS-UXXRCYHCSA-N (2s,3r,4r,5s,6r)-2-(4-aminophenoxy)-4,5-dimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-3-ol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OC)[C@@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 MWAWILWZYAOFCS-UXXRCYHCSA-N 0.000 description 1
- BWQBAMCILDWILB-QBROEMLDSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-4,5-dimethoxy-2-(4-nitrophenoxy)-3-phenylmethoxy-6-(phenylmethoxymethyl)oxane Chemical compound C([C@@H]1[C@@H]([C@@H]([C@@H](OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)O1)OC)OC)OCC1=CC=CC=C1 BWQBAMCILDWILB-QBROEMLDSA-N 0.000 description 1
- HEVMDQBCAHEHDY-UHFFFAOYSA-N (Dimethoxymethyl)benzene Chemical compound COC(OC)C1=CC=CC=C1 HEVMDQBCAHEHDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 1
- 101710175516 14 kDa zinc-binding protein Proteins 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVHJQCGUWFKTSE-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYGLHSWCMVGAGN-CYDRSHDDSA-N 2-[(2r,3s,4s,5r,6r)-2-(4-aminophenoxy)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxyacetamide Chemical compound O[C@H]1[C@@H](OCC(=O)N)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 JYGLHSWCMVGAGN-CYDRSHDDSA-N 0.000 description 1
- ZCTRVBOUCQYUPC-AIXQGADWSA-N 2-[(2r,3s,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-2-(4-nitrophenoxy)-6-(trityloxymethyl)oxan-4-yl]oxyacetamide Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]([C@@H](OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)O1)O)OCC(=O)N)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 ZCTRVBOUCQYUPC-AIXQGADWSA-N 0.000 description 1
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 1
- YOWQWFMSQCOSBA-UHFFFAOYSA-N 2-methoxypropene Chemical compound COC(C)=C YOWQWFMSQCOSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRSJMIIMXPAEJB-LYYZXLFJSA-N 4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxyaniline Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 XRSJMIIMXPAEJB-LYYZXLFJSA-N 0.000 description 1
- YILIDCGSXCGACV-SQKFTNEHSA-N 4-nitrophenyl alpha-L-fucoside Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 YILIDCGSXCGACV-SQKFTNEHSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-RMPHRYRLSA-N 4-nitrophenyl beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010051779 Bone marrow toxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- KKZVQICDJUJHLN-UHFFFAOYSA-N C1(=O)OOS(=O)(=O)O1 Chemical compound C1(=O)OOS(=O)(=O)O1 KKZVQICDJUJHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004077 D-glutamic acid group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])=O 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000230491 Gulo Species 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 206010023774 Large cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004425 Makrolon Substances 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N N-dimethylaminoethanol Chemical compound CN(C)CCO UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011794 NU/NU nude mouse Methods 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122847 Phosphokinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123924 Protein kinase C inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122429 Tubulin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- VIANNNCEGVXTEB-QBROEMLDSA-N [(2r,3r,4s,5r,6s)-4-hydroxy-6-(4-nitrophenoxy)-5-phenylmethoxy-2-(phenylmethoxymethyl)oxan-3-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H]([C@H](O[C@H]1OC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)COCC=1C=CC=CC=1)OC(=O)C)CC1=CC=CC=C1 VIANNNCEGVXTEB-QBROEMLDSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 125000003691 alpha-D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMJRHBLBNYCJGL-PXNOONKDSA-N benzyl 2-[(2r,3s,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-2-(4-nitrophenoxy)-6-(trityloxymethyl)oxan-4-yl]oxyacetate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@@H]([C@H](O)[C@@H](OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)O1)OCC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)O)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HMJRHBLBNYCJGL-PXNOONKDSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 231100000366 bone marrow toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- LYQFWZFBNBDLEO-UHFFFAOYSA-M caesium bromide Chemical compound [Br-].[Cs+] LYQFWZFBNBDLEO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 229960002887 deanol Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- REQPQFUJGGOFQL-UHFFFAOYSA-N dimethylcarbamothioyl n,n-dimethylcarbamodithioate Chemical compound CN(C)C(=S)SC(=S)N(C)C REQPQFUJGGOFQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODCCJTMPMUFERV-UHFFFAOYSA-N ditert-butyl carbonate Chemical group CC(C)(C)OC(=O)OC(C)(C)C ODCCJTMPMUFERV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical class CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940012017 ethylenediamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002598 fumaric acid Drugs 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229950006191 gluconic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015220 hamburgers Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- AKRQHOWXVSDJEF-UHFFFAOYSA-N heptane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCCCCCS(O)(=O)=O AKRQHOWXVSDJEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- ZRVAYMUFKGYUHZ-SNXIHELZSA-N methyl 2-[(2r,3s,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-2-(4-nitrophenoxy)-6-(trityloxymethyl)oxan-4-yl]oxyacetate Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]([C@@H](OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)O1)O)OCC(=O)OC)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 ZRVAYMUFKGYUHZ-SNXIHELZSA-N 0.000 description 1
- VBICBUULBXXUMP-HUGQBSPZSA-N methyl 2-[(2r,3s,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)oxan-4-yl]oxyacetate Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OCC(=O)OC)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VBICBUULBXXUMP-HUGQBSPZSA-N 0.000 description 1
- 229940050176 methyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N n-propyl iodide Chemical compound CCCI PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940116315 oxalic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- MIAKOEWBCMPCQR-GCHJQGSQSA-N p-aminophenyl alpha-D-mannoside Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 MIAKOEWBCMPCQR-GCHJQGSQSA-N 0.000 description 1
- NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L palladium(2+);dihydroxide Chemical compound O[Pd]O NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229940117803 phenethylamine Drugs 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000003881 protein kinase C inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000007660 quinolones Chemical class 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000011935 selective methylation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(OC)O1 CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- UDYFLDICVHJSOY-UHFFFAOYSA-N sulfur trioxide-pyridine complex Substances O=S(=O)=O.C1=CC=NC=C1 UDYFLDICVHJSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229960001367 tartaric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 238000005866 tritylation reaction Methods 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-CFWMRBGOSA-N vinblastine Chemical compound C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-CFWMRBGOSA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/02—Halogenated hydrocarbons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
1 Cytostatyki modyfikowane weglowodanami o wzorze ogólnym K - Sp - L AA1 - AA 2 - C (I) w którym K oznacza rodnik weglowodanowy o wzorze ogólnym (II) w którym A oznacza metyl, hydroksymetyl, karboksyl oraz pochodzace od niego estry i amidy, alkoksymetyl, acyloksymetyl lub karboksyalkiloksymetyl oraz pochodzace od niego estry i amidy; A moze takze stanowic CH 2-B, gdzie B z kolei moze stanowic rodnik weglowodanowy o wzorze ogólnym (II), polaczony przez centrum anomeryczne, R2 , R 3, R 4 niezaleznie oznaczaja atom wodoru, grupe hydroksylowa, alkoksylowa, karboksyalkoksylowa oraz po- chodzace od nich estry i amidy, hydroksyalkiloksylowa, aminoalkiloksylowa, acyloksylowa, karboksyalkilokarbonyloksy- l owa, siarczanowa, fosforanowa, atom chlorowca albo inny rodnik weglowodanowy (II) zmodyfikowany w takim ukladzie i polaczony przez centrum anomeryczne, przy czym R 2 moze dodatkowo oznaczac grupe aminowa lub acyloaminowa, albo dwa sposród rodników R2 , R 3 i R 4 moga tworzyc razem grupe epoksydowa, Sp oznacza ewentualnie podstawiony arylen lub alkilen, L oznacza lub gdzie R oznacza atom chloru lub grupe hydroksyalkiloaminowa,......................................................................... ................................................ 8 Srodek cytostatyczny zawierajacy substancje czynna i farmaceutycznie dopuszczalne substancje pomocnicze, zna- mienny tym, ze jako substancje czynna zawiera zwiazek o wzorze ogólnym K - Sp - L AA1 - AA2 - C (I) w którym ...................................................... . .................... ..................... .................................... PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są cytostatyki, które dzięki modyfikacji węglowodanami, są specyficzne względem nowotworu. Odpowiedni odstępnik zapewnia stabilność w surowicy przy równoczesnym działaniu wewnątrzkomórkowym. Ponadto, przedmiotem wynalazku jest środek cytostatyczny zawierający powyższe cytostatyki jako substancję czynną.
Chemioterapii chorób nowotworowych zazwyczaj towarzyszą poważne skutki uboczne spowodowane toksycznością chemioterapeutyków w stosunku do rosnących komórek innych tkanek. Od wielu lat badaczom stawia się problem zwiększenia selektywności stosowanych związków aktywnych. Jedno z często stosowanych rozwiązań stanowi synteza proleków, które uwalniają się z mniejszą lub większą selektywnością w tkance docelowej, np. w wyniku zmiany pH (Tietze i inni, np. DE-4 229 903), przez enzymy (np. glukuronidazy; Jacquesy i inni, EP-511917; Bosslet i inni, EP-595133) lub przez koniugaty przeciwciało-enzym (Bagshawe i inni, WO 88/07378; Senter i inni, US-PS 4975278; Bosslet i inni, EP-595133). Do problemów związanych z takimi rozwiązaniami należy między innymi brak stabilności koniugatów w innych tkankach i narządach, a zwłaszcza wszechobecność substancji czynnej na skutek pozakomórkowego uwalniania substancji czynnej w tkance nowotworowej.
Wyraźny układ lektynowy na powierzchni komórek nowotworowych (Gabius; Onkologie 12, (1989), 175) stwarza wyraźną możliwość kierowania leków specyficznie na komórki nowotworowe poprzez łączenie odpowiednich węglowodanów z cytostatykami. Perspektywy takie ograniczone są faktem, że lektyny o podobnej specyficzności węglowodanowej (galaktoza, mannoza, N-acetyloglukozamina itp.) występują również w innych tkankach, zwłaszcza w wątrobie (Ashwell i inni, Annu. Rev. Biochem. 46 (1982), 531; Stahl i inni, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 (1977), 1521; Hill i inni, J. Biol. Chem. 262 (1986), 7433; Jansen i inni, J. Biol. Chem. 266 (1991), 3343). W efekcie należy oczekiwać znacznego stężenia glikokoniugatów zawierających substancję czynną w wątrobie i innych narządach bogatych w lektynę, jeśli zastosuje się takie niemodyfikowane cukry.
Heterocykliczna amina batracylina (1) wykazuje dobre działanie przeciwnowotworowe w różnych modelach raka jelita (UP-PS 4 757 072).
O
183 574
W badaniach na zwierzętach okazało się, że peptydowe koniugaty (1) dobrze działające in vivo i korzystniejszej rozpuszczalności (US-4 180 343) są gorzej tolerowane. Koniugaty fukozy opisane w EP-501 250 w znacznym stopniu nagromadzają się w wątrobie.
Chinolon-a (2), kwas 7-[(3aRS,4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-heksahydro-izodol-2-ilo]-8-chloro-l-cyklopropylo-6-fluoro-l,4-dihydro-4-oxo-3-chinolinokarboksylowy również wykazuje, obok znaczącego działania przeciwbakteryjnego, bardzo dobrą aktywność w stosunku do różnych linii komórek nowotworowych (EP-520 240, JP-4 253 973). Jednakże towarzyszą temu znaczące problemy toksykologiczne (np. genotoksyczność, toksyczność względem szpiku kostnego, wysoka doraźna toksyczność in vivo itp.).
(2) (chinolon-a)
Dzięki nowej modyfikacji cytostatyków nieoczekiwanie odkryto nową klasę koniugatów wyrażających się następującymi właściwościami.
Nowe wiązanie węglowodanów z cytostatykami (np. batracyliną, chinolonem-a) prowadzi do glikokoniugatów, które wykazują stabilność w surowicy. Działanie ich nie zależy od pozakomórkowego uwalniania substancji czynnej. Pod względem aktywności in vitro w stosunku do różnych linii komórek nowotworowych są one porównywalne z cytostatykami, na których są oparte. Specyficzne względem komórki wchłanianie zależy od węglowodanu.
Selektywność względem komórki i tkanki (zwłaszcza nowotworu względem wątroby) znacząco zwiększa się dzięki regioselektywnym modyfikacjom w węglowodanowej części opisanych koniugatów.
In vivo koniugaty według wynalazku wyróżniają się znacząco zwiększoną tolerancją w porównaniu z substancją czynną oraz odpowiednimi koniugatami peptydowymi.
Ponadto w porównaniu z cytostatykami, na których są oparte, koniugaty według wynalazku wykazują znacząco korzystniejszą rozpuszczalność.
Związki według wynalazku przedstawione są następującym wzorem ogólnym:
K - Sp - L AA1 - AA2 - C (I) w którym
K oznacza rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym
(II) w którym
A oznacza metyl, hydroksymetyl, karboksyl oraz pochodzące od niego estry i amidy, alkoksymetyl, acyloksymetyl lub karboksyalkiloksymetyl oraz pochodzące od niego estry i amidy; A może także stanowić CH2-B, gdzie B z kolei może stanowić rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym (II), połączony przez centrum anomeryczne.
183 574
R2, R3, R4 niezależnie lub równocześnie oznaczają atom wodoru, grupę hydroksylową alkoksylową karboksyalkoksylową oraz pochodzące od nich estry i amidy, hydroksyalkiloksylową aminoalkiloksylową acyloksylową karboksyalkilokarbonyloksylową siarczanową fosforanową atom chlorowca albo inny rodnik węglowodanowy (II) zmodyfikowany w takim układzie i połączony przez centrum anomeryczne, przy czym R2 może dodatkowo oznaczać grupę aminową lub acyloaminową albo dwa spośród rodników R2, R3 i R4 mogą razem tworzyć grupę epoksydową
Sp oznacza ewentualnie podstawiony arylen lub alkilen,
R s
L oznacza —hn [ub 1111 , gdzie R oznacza atom chloru lub grupę hydroksyalkiloaminową a połączenie z Sp następuje poprzez grupę NH,
AA1 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z L poprzez grupę α-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy. Gdy AA1 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to mogą być one obecne w formie odblokowanej lub w formie chronionej znanymi grupami chroniącymi. Do odpowiednich grup chroniących należy np. acetyl, alliloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl, fluorenylometoksykarbonyl, tert-butoksykarbonył, allil, benzyl, metyl lub tert-butyl.
AA2 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z AA1 poprzez grupę α-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy. Gdy AA2 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to mogą być one obecne w formie odblokowanej lub w formie chronionej znanymi grupami chroniącymi. Do odpowiednich grup chroniących należy np. benzyloksykarbonyl, acetyl, alliloksykarbonyl, fluorenylometoksykarbonyl, tert-butoksykarbonyl, allil, benzyl, metylo lub tert-butyl.
C oznacza rodniki cytostatyków lub pochodnych cytostatyków, które mogą dodatkowo zawierać grupę aminową lub hydroksylową. C może stanowić substancja wtrącająca, inhibitor topoizomerazy, antymetabolit, środek alkilujący, inhibitor tubuliny, inhibitor fosfokinazy tyrozyno wej, inhibitor białkowej kinazy C lub substancja czynna, o innym lub nieznanym mechanizmie działania cytostatycznego lub cytotoksycznego. C może np. stanowić nukleozyd, antybiotyk endiinowy, kwas chinolono- lub naftyrydono-karboksylowy lub cytostatyczny antybiotyk peptydowy, np. z klasy dolastatyn C może stanowić batracylina, chinolon-a, 5-fluorouracyl, arabinozyd cytozyny, metotreksan, etopozyd, kamptotecyna, daunomycyna, doksorubicyną taksol, winblastyna, winkrystyna, dynemycyna, kalicheamycyna, esperamycyna, kwercetyną suraminą erbstatyna, cyklofosfamid, mitamycyna C, melfalan, cisplatyna, bleomycyną staurosporyna lub inna substancja czynna o działaniu przeciwnowotworowym.
Element strukturalny -Sp-L-AA1-AA2-jako całość stanowi odstępnik, który łączy K z C.
Centrum anomeryczne węglowodanowej jednostki strukturalnej może wykazywać stereochemię a lub β. Konfiguracja gluko, manno, galakto, gulo, rarnno lub fuko może być związana ze stereochemią przy innych centrach.
183 574
Sp oznacza rodnik arylenowy, zmodyfikowany przez K i L w pozycjach orto, meta lub para, który ponadto może zawierać 1-4 dodatkowe podstawniki, różne lub identyczne, z których każdy może oznaczać atom wodoru, metyl, metoksyl, hydroksyl, karboksyl, metoksykarbonyl, grupę cyjanową, nitrową, atom chlorowca, sulfonyl lub sulfonamid;
Sp może także oznaczać liniowy lub rozgałęziony rodnik alkilenowy.
L oznacza lub —ΝΠ gdzie R oznacza atom chloru lub grupę hydroksyalkiloaminową,
AA1 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z L poprzez grupę α-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy. Gdy AA1 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to mogą być one obecne w formie odblokowanej lub w formie chronionej znanymi grupami chroniącymi. Do odpowiednich grup chroniących należy np. acetyl, alliloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl, fluorenylometoksykarbonyl, tert-butoksykarbonyl, allil, benzyl, metyl lub tert-butyl.
AA2 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi grupy ochronne lub drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z AA1 poprzez grupę α-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy. Gdy AA2 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to mogą być one obecne w formie odblokowanej lub w formie chronionej znanymi grupami chroniącymi. Do odpowiednich grup chroniących należy np. benzyloksykarbonyl, acetyl, alliloksykarbonyl, fluorenylometoksykarbonyl, tert-butoksykarbonyl, allil, benzyl, metylo lub tert-butyl.
C może stanowić rodnik nukleozydu, antybiotyku endiinowego lub cytostatycznego antybiotyku peptydowego, np. z klasy dolastyn, albo kwasu chinolono- lub naftyrydonokarboksylowego, określonego poniżej. C może stanowić batracylina, 5-fluorouracyl, arabinozyd cytozyny, metotreksan, etopozyd, kamptotecyna, daunomycyna, doksorubicyna, taksol, winblastyna, winkrystyna, dynemycyna, kalicheamycyna, esperamycyna, kwercetyna, suramina, erbstatyna, cyklofosfamid, mitamycyna C, melfalan, cisplatyna, bleomycyna, staurosporyna lub inna substancja czynna o działaniu przeciwnowotworowym. Cytostatyk połączony jest z AA2 poprzez grupę aminową lub hydroksylową.
Do szczególnie korzystnych związków o wzorze (I) należą te, w których
K oznacza rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym w którym
A oznacza metyl, hydroksymetyl, karboksyl oraz metoksykarbonylometyl i CH2-B, gdzie B z kolei może stanowić rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym (II), połączony przez centrum anomeryczne.
R2, R3, R4 niezależnie lub równocześnie oznaczają atom wodoru, grupę hydroksylową, C1-C3-alkoksylową karboksy-C1-C3-alkoksylową oraz pochodzące od nich C1-C3-alkilowe
183 574 estry i amidy, hydroksyalkiloksylową acyloksylową karboksy-(CI-C3-alkilo)-karbonyloksylową siarczanową albo inny rodnik węglowodanowy w pozycji R3 lub R4 połączony przez centrum anomeryczne.
Dwa spośród rodników R2, R3 i R4 mogą razem tworzyć grupę epoksydową.
Centrum anomeryczne węglowodanowej jednostki strukturalnej może wykazywać stereochemię α lub β. Konfiguracja D-manno, D-galakto, L-gulo, D-gluko, L-ramno lub L-fuko może być związana ze stereochemiąprzy innych centrach.
Sp oznacza rodnik arylenowy, zmodyfikowany przez K i L w pozycjach orto lub para, który ponadto może zawierać oprócz atomów wodoru inny podstawnik, który może stanowić metoksyl, gn1 0 Άη™™ lub atom chloru;
H R s νΆν
L oznacza lub —gdzie R oznacza atom chloru lub grupę hydroksyalkiloaminową, '
AA1 oznacza resztę aminokwasu takiego jak lizyna, alaniną kwas asparaginowy, kwas glutaminowy, glicyna, omityną tyrozyna, walina lub seryna, o konfiguracji D lub L, albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z L poprzez grupę a-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy i w ten sposób zawiera kolejne ugrupowanie K-Sp-L-, które może być takie same lub różne od pierwszego. Gdy AA1 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to są one korzystnie odblokowane.
AA2 oznacza resztę aminokwasu takiego jak alanina, lizyna, glicyna, seryną omityna lub kwas diaminopropionowy, o konfiguracji D łub L, albo wiązanie bezpośrednie. Reszta aminokwasu może być połączona z L poprzez grupę α-aminową oraz, gdy jest to możliwe, poprzez grupy aminowe lub hydroksylowe w bocznym łańcuchu, a także przez obydwie te grupy i w ten sposób zawiera kolejne ugrupowanie Κ-Sp-L-, które może być takie same lub różne od pierwszego. Gdy AA1 zawiera dodatkowe grupy funkcyjne, to są one korzystnie odblokowane.
C może stanowić batracykliną metotreksan, chinolon-a, etopozyd, melfalan, taksol, kamptotecyna, daunomycyna lub doksorubicyna albo kwas chinolono- lub naftyrydonokarboksylowy, określony poniżej. Cytostatyk połączony jest z AA2 poprzez grupę aminową lub hydroksylową.
Kwas chinolono- lub naftyrydonokarboksylowy jako jednostki strukturalne C stosowane jako produkty wydzielone, można przedstawić wzorem ogólnym
T - Q (III) w którym
Q oznacza rodnik o wzorze
lub gdzie
183 574
Ra oznacza alkil zawierający 1-4 atomy węgla, ewentualnie mono- lub dwupodstawiony atomami chlorowca albo grupami hydroksylowymi, winyl, cykloalkil zawierający 3-6 atomów węgla, ewentualnie podstawiony 1-2 atomami fluoru, bicyklo[l.l.l]pent-l-yl, 1,1-dimetylopropargil, 3-oksetanyl, metoksyl, grupę aminową metyloaminową dimetyloaminową lub fenyl ewentualnie mono- lub dwupodstawiony atomami chlorowca, grupami aminowymi lub hydroksylowymi albo razem z Re może również tworzyć mostek określony dla tego rodniką
Rb oznacza hydroksyl, alkoksyl zawierający 1-3 atomy węgla lub nitrometyl,
Rc oznacza atom wodoru lub metyl albo wraz z R8 może również tworzyć mostek określony dla tego rodnika,
Rd oznacza atom wodoru, CH3, CH2F lub =CH2,
X1 oznacza atom wodoru, atom chlorowca lub grupę nitrową
X2 oznacza atom wodoru, atom chlorowca, grupę aminową hydroksyl, metoksyl, grupę merkaptanową metyl, chlorowcometyl lub winyl,
Y oznacza N lub C-Re, gdzie
Re oznacza atom wodoru, atom chlorowca, CF3, OCH3, OCHF2, CH3, CN, CH-CH2 lub C=CH albo wraz z Ra może również tworzyć mostek o wzorze -·Ο-€Η2-ΟΗ-€Η3, -’S- CH2-CH2, - *S-CH2-CH-CH3, - *CH2-CH2-CH-CH3 lub - *O-CH2-N-Rf, gdzie atom zaznaczony * połączony jest z atomem węgla w Y, a
Rf oznacza atom wodoru, metyl lub formyl oraz
D oznacza N lub C-Rg, gdzie
Rg oznacza atom wodoru, atom chlorowcą CF3, OCH3, OCHF2 lub CH3, albo wraz z Rc może tworzyć mostek o wzorze - °O-CH2-, - *NH-CH2-, - *N(CH3)-CH2-, - *N(C2H5)-CH2-, - ’N(C3H5)-ĆH2- lub - *S-CH2-, gdzie atom zaznaczony * połączony jest z atomem węgla w D, n wynosi 1, 2 lub 3, a
T oznacza rodnik o wzorze
gdzie । i
Rh oznacza 0-, -N-Rk, CH2-O- lub -CH2N-Rk, gdzie
Rk oznacza atom wodoru lub metyl, a
R1 oznacza atom wodoru, Ct-C3-alkil lub cyklopropył.
Związkami o wzorze (III) będącymi szczególnie korzystnymi cytostatykami C są te, w których
Q oznacza rodnik o wzorach
Ra oznacza alkil zawierający 2-4 atomy węgla, ewentualnie podstawiony 1 atomem fluoru, cyklopropył ewentualnie podstawiony 1 atomem fluoru lub fenyl ewentualnie mono- lub dwupodstawiony fluorem,
183 574
Rb oznacza hydroksyl lub alkoksyl zawierający 1 lub 2 atomy węgla,
Rc oznacza atom wodoru lub metyl albo wraz z R8 może tworzyć mostek określony dla tego rodnika,
X1 oznacza atom fluoru,
X2 oznacza atom wodoru lub grupę aminową
Y oznacza N lub C-Re, gdzie
Re oznacza atom wodoru, fluoru, chloru, CF3, OCH3, OCHF2 lub OCH albo wraz z Ra może również tworzyć mostek o wzorze - ’0-CH2-CH-CH3 lub - ,O-CH2-N-Rf, gdzie atom zaznaczony * połączony jest z atomem węgla w Y, a
Rf oznacza atom wodoru, metyl lub formyl,
D oznacza N lub C-Rg, gdzie
Rg oznacza atom wodoru, atom fluoru lub chloru, CF3, OCH3 lub CH3, albo wraz z Rc może tworzyć mostek o wzorze - O-CH2-, - *NH-CH2-, - •N(CH3)-CH2- lub - °S-CH2-, gdzie atom zaznaczony * połączony jest z atomem węgla w D, a
T oznacza rodnik o wzorze
gdzie ]
Rh oznacza 0-, -N-Rk, w której
Rk oznacza atom wodoru lub metyl oraz
R1 oznacza atom wodoru lub metyl.
Glikokoniugaty z kamptotecyną lub jej pochodnymi są również szczególnie korzystne.
Związki o wzorze ogólnym I, w którym K, Sp i L oznaczają atomy wodoru, a C oznacza kamptotecynę, są również szczególnie istotne. Są to nowe substancje i można je poddać reakcji jako półprodukty do wytwarzania kolejnych pochodnych o wzorze ogólnym 1, a ponadto wykazują interesujący zakres działania farmaceutycznego, zwłaszcza jako cytostatyki.
Związki według wynalazku mogą występować w formach stereoizomerycznych, np. jako enancjomery lub diastereoizomery, albo w postaci ich mieszanin, np. jako racemat. Wynalazek dotyczy zarówno czystych stereoizomerów jak i ich mieszanin.
W razie potrzeby mieszaniny stereoizomerów można rozdzielić w znany sposób na stereoizomeryczne jednorodne składniki, np. w procesach chromatografii lub krystalizacji.
Związki według wynalazku mogą być także w postaci soli. Ogólnie wymienić można sole z organicznymi lub nieorganicznymi zasadami lub kwasami oraz sole wewnętrzne.
Do kwasów, które można dodawać, należą korzystnie kwasy chlorowcowodorowe, takie jak np. kwas chlorowodorowy i kwas bromowodorowy, zwłaszcza kwas chlorowodorowy, a także kwas fosforowy, kwas azotowy, kwas siarkowy, mono- i dwufunkcyjne kwasy karboksylowe i kwasy hydroksykarboksylowe, takie jak np. kwas octowy, kwas maleinowy, kwas malonowy, kwas szczawiowy, kwas glukonowy, kwas bursztynowy, kwas fumarowy, kwas winowy, kwas cytrynowy, kwas salicylowy, kwas sorbinowy i kwas mlekowy, a także kwasy sulfonowe, takie jak np. kwas p-toluenosulfonowy, kwas 1,5-naftalenodisulfonowy lub kwas kamforosulfonowy.
Fizjologicznie tolerowane sole mogą stanowić także sole z metalami lub amonowe związków według wynalazku zawierających wolną grupę karboksylową. Do szczególnie korzystnych soli należą np. sole sodowe, potasowe, magnezowe lub wapniowe oraz sole amoniowe pochodzące od amoniaku lub amin organicznych, takich jak np. etyloamina, di- lub
183 574 trietyloamina, di- lub trietanolamina, dicykloheksyloamina, dimetyloaminoetanol, arginina, lizyna, etylenodiamina lub fenetyloamina.
Seria przykładów A: Testy biologiczne
Przykład Al. Test hamowania wzrostu do oznaczania właściwości cytotoksycznych glikokoniugatów batracyliny i chinolonu-a.
Linie ludzkich komórek okrężnicy SW 480 i HT 29 (ATCC nr CCL 228 i HBT-38) oraz linie mysich komórek czerniaka B 16 F 10 hodowano na szalkach Roux w ośrodku RPMI 1640 z dodatkiem 10% FCS. Hodowle trypsynizowano następnie i rozcieńczano w RPMI z 10% FCS do osiągnięcia miana 50000 komórek/mL 100 μΐ zawiesiny komórek/studzienkę wprowadzono na płytkę o 96 mikrostudzienkach, po czym prowadzono inkubację przez 1 dzień w 37°C w komorze inkubacyjnej w atmosferze CÓ2. Dodano kolejne 100 μΐ ośrodka RPMI i 1 μΐ of dimetylosulfotlenku z badanymi substancjami. Wzrost sprawdzano po dniu 3 i dniu 6. 40 μΐ roztworu MTT (bromku 3-(4,5-dimetylotiazol-2-ilo)-2,5-difenyltetrazoliny) w wyjściowym stężeniu 5 mg/ml H2O dodano do każdej mikrostudzienki. Płytkę inkubowano przez 5 godzin w komorze inkubacyjnej w atmosferze CO2 w 37°C. Następnie ośrodek odessano i dodano 100 μΐ i-propanolu/studzienkę. Po wytrząsaniu przez 30 minut ze 100 μΐ H2O mierzono ekstynkcję przy 540 nm w aparacie Titertek Multiskan MCC/340 (Flow).
Działanie cytotoksyczne glikokoniugatów batracyliny przedstawiono poniżej w tabeli la jako wielkości IC50 w każdym przypadku dla linii komórek SW 480 i HT 29.
Wielkości IC50 dla glikokoniugatów chinolonu-a w stosunku do linii komórek SW 480, HT 29 i B 16 F 10 zestawiono w tabeli Ib.
Tabela la
| Substancja | IC50 [μΜ] SW 480 | IC50 [μΜ] HT 29 |
| 1 | 2 | 3 |
| Batracylina | 25 | 20 |
| 3.2 | 100 | 75 |
| 3.4 | 100 | 65 |
| 3.7 | 55 | n.o. |
| 3.9 | 40 | 55 |
| 3.10 | 100 | 125 |
| 3.11 | 85 | n.o. |
| 3.14 | 40 | n.o. |
| 3.18 | 15 | n.o. |
| 3 19 | 75 | n.o. |
| 3 20 | 100 | n.o. |
| 3.21 | 90 | n.o. |
| 3.23 | 50 | n.o. |
| 3.24 | 95 | n.o. |
| 3.26 | 50 | n.o. |
| 3 27 | 110 | n.o. |
| 3.28 | 60 | n.o. |
| 3.29 | 110 | n.o. |
183 574 ciąg dalszy tabeli la
| 1 | 2 | 3 |
| 3.30 | >250 | n.o. |
| 3.33 | 90 | 70 |
| 4.1 | 25 | 30 |
| 4.3 | 20 | 20 |
| 4.4 | 30 | 25 |
| 4.5 | 15 | 15 |
| 4.6 | 10 | 10 |
| 4.7 | 15 | 15 |
| 4.8 | 50 | 40 |
| 4.9 | 20 | 30 |
| 4.10 | 30 | 30 |
| 4.11 | 15 | 15 |
| 4.12 | 15 | 9 |
| 5.1 | 55 | 45 |
| 5.2 | 20 | 55 |
| 5.6 | >250 | n.o. |
| 5.8 | 100 | >250 |
| 5.9 | 70 | 70 |
| 5.12 | 20 | 20 |
| 5.13 | 20 | 40 |
| 5.14 | 20 | 30 |
| 5.15 | >250 | 70 |
| 5.19 | 35 | 25 |
| 5.20 | 50 | 30 |
| 5.21 | 60 | 80 |
| 5.22 | 30 | 40 |
| 5.23 | 25 | 35 |
| 6.2 | 40 | 50 |
| 6.3 | 70 | 105 |
| 67 | 60 | >250 |
| 6.10 | 50 | 50 |
| 6.12 | 35 | 50 |
| 6.15 | >250 | >250 |
| 6.20 | 80 | n.o. |
| 6.21 | 150 | n.o. |
| 6.23 | 107 | 45 |
| 6.25 | 50 | 40 |
183 574 ciąg dalszy tabeli la
| 1 | 2 | 3 |
| 6.28 | 40 | 25 |
| 6.29 | 95 | 130 |
| 6.30 | 60 | 70 |
| 6.32 | 60 | 60 |
| 6.34 | 50 | n.o. |
| 6.35 | 20 | n.o. |
| 6.36 | 70 | 70 |
| 6.40 | 170 | 60 |
| 6.43 | 90 | 80 |
| 6.46 | 120 | 100 |
| 6.59 | 50 | 50 |
| 6.60 | 50 | 40 |
| 6.80 | 40 | 25 |
| 6.81 | 30 | 30 |
| 6.82 | 125 | n.o. |
| 6.83 | 90 | n.o. |
| 6.85 | 22 | n.o. |
| 7.1 | 40 | 40 |
| 7.2 | 40 | 30 |
| 7.3 | 50 | n.o |
| 7.5 | 80 | n.o. |
| 7.7 | 100 | >250 |
| 7.8 | 40 | 30 |
| 7.11 | 30 | 25 |
| 7.12 | 10 | 10 |
| 8.10 | 70 | n.o. |
| 8.11 | 45 | n.o. |
| 8.12 | 30 | n.o. |
Tabela Ib
| Substancja | ΙΌ» [μΜ] SW 480 | IC50[pM]HT29 | IC50 [jjM]B16F10 |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| 10.1 | 50 | >250 | 15 |
| 10.2 | 4 | 3 | 5 |
| 10.3 | 5 | 4 | 0,7 |
| 11.2 | 30 | n.o. | 9 |
| 11.6 | 8 | 9 | 5 |
183 574 ciąg dalszy tabeli Ib
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| 11.7 | 12 | 13 | 15 |
| 11.8 | 12 | 16 | 15 |
| 11.9 | 12 | 12 | 9 |
| 11.10 | 8 | 20 | 2 |
| 11 16 | 10 | 10 | 1,5 |
| 11.17 | 75 | 75 | 8 |
| 11.18 | 4,5 | 3,5 | 0,5 |
| 12.1 | 1 | 1,5 | 0,1 |
| 12 2 | 4 | n.o. | 0,8 |
| 12.3 | 2 | n.o. | 0,3 |
| 12.5 | 1 | 4 | 0,2 |
| 12.6 | 4 | 7 | 0,3 |
| 12.7 | 60 | >250 | 20 |
| 12.8 | 8 | 7 | 1 |
| 12.9 | 4 | 8 | 2 |
| 12.10 | 15 | 15 | 4 |
| 12.11 | 2 | 2 | 0,5 |
| 12.12 | 8 | 13 | 0,5 |
| 12.13 | 35 | 100 | 1 |
| 12.14 | 1 | 2 | 0,3 |
| 12.15 | 0,3 | 1 | 0,1 |
| 14.1 | 0,8 | 1 | 1,5 |
| 14.2 | 1 | 6 | 1,5 |
| 14.3 | 8 | 4 | 4 |
| 14 4 | 1,5 | 1 | 0,4 |
| 15.1 | 20 | 20 | 2 |
| 15.2 | 50 | 70 | 15 |
| 16.1 | 50 | 100 | 200 |
| 16.2 | 50 | 60 | 80 |
| 17.1 | 10 | 5 | 5 |
| 17.2 | 4 | 4 | 4 |
| 18.1 | 0,03 | 0,01 | 0,2 |
| 18.2 | 0,02 | 0,02 | 0,2 |
| 184 | 0,02 | 0,02 | 0,3 |
| 185 | 0,2 | 0,2 | 1 |
| 18 9 | 0,08 | 0,06 | 0,7 |
| 18.14 | 0,015 | 0,01 | 0,08 |
183 574
Zależność działania biologicznego od węglowodanu dodatkowo wykazuje brak aktywności nie zawierających węglowodanów związków porównawczych, Ν-[Να, N -bis-(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizylo]-batracyliny, N-[N“, Νε -bis-(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo)-batracyliny i N-[N“, Νε -bis-(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-D-lizylo-chinolonu-a (wielkości IC50>250), na których oparte są serie przykładów 5, 6 i 11.
Przykład A2. Badanie in vitro rozszczepialności glikokoniugatów
Kinetyka rozszczepiania z ludzką krwią
1,225 ml ludzkiej krwi inkubuje się wraz z 1,25 ml PBS i 25 μΐ podstawowego roztworu substratu (1 mg/ml w 3% dimetylosulfotlenku w PBS) w 37°C. Po 1 godzinie i 24 godzinach pobiera się dla każdego przypadku próbki 1 ml, miesza się z 1 ml etanolu i odstawia się w 4°C na 20 minut. Po odwirowaniu (5 minut przy 3500 obrotów/minutę) 100 μΐ supematantu pobiera się do analizy HPLC.
Kinetyka rozszczepiania z komórkami
2,25 ml PBS inkubuje się wraz z 225 μΐ zawiesiny komórek (30 mg/ml) i 25 μΐ podstawowego roztworu substratu (1 mg/ml w 3% dimetylosulfotlenku w PBS) w 37°C. Po 1 godzinie i 24 godzinach pobiera się dla każdego przypadku próbki 1 ml, miesza się z 1 ml etanolu i odstawia się w 4°C na 20 minut. Po odwirowaniu (5 minut przy 3500 obrotów/minutę) 100 pm supematantu pobiera się do analizy HPLC.
Warunki HPLC:
| Aparat: | Jednostka Waters |
| Kolumna: | Bischoff Hypersil OCS RP 18 5 pm 250 X 4 mm |
| Eluent: | A. 10 mM fosforan potasu, bufor, pH 4,5 |
| B: 80% acetonitryl/20% woda | |
| Przepływ: | 1 ml/minutę |
| Długość fali: | 372 nm |
| Gradient: | 0 minut 10% B |
| 10 minut 60% B | |
| 15 minut 60% B | |
| 18 minut 10% B | |
| 20 minut 60% B | |
| Eluent dla koniugatów chinolonu-a: | A: 100% metanolu |
| B: 10 mM fosforan potasu, bufor, pH 2,2 | |
| C: 10 mM kwas heptanosulfonowy |
Tabela 2a
| Przykład | % rozszczepienia w ludzkiej krwi | % rozszczepienia w SW-480 | % rozszczepienia w wątrobiaku | |||
| 1 godz. | 24 godz. | 1 godz. | 24 godz. | 1 godz. | 24 godz. | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 3.4 | n.d. | n.d. | 74* | n.d. | 98* | n.d. |
| 3.9 | 0 | 54* | 28* | 100* | 32* | 100* |
| 44 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
183 574 ciąg dalszy tabeli 2a
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| 5.9 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 6.2 | n.d. | n.d. | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 6.12 | n.d. | n.d. | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 7.3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Produkt rozszczepiania stanowi N-[D-alanylo]-batracylina.
Tabela 2b
| Przykład | % rozszczepienia w ludzkiej krwi | % rozszczepienia w SW-480 | % rozszczepienia w wątrobiaku | |||
| 1 godz. | 24 godz. | 1 godz. | 24 godz. | 1 godz. | 24 godz. | |
| 11.2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 11.6 | 0 | 11% | 0 | 8% | 0 | 12% |
| 11.7 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 12.1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 12.3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 12.8 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Przykład A3. Badania rozkładu w organach
Bezgrasicze nagie myszy (szczep NMRI nu/nu) hodowane w „Drug Development Laboratory, Oncotest GmbH”, prof. H.H. Fiebig, Freiburg, zastosowano we wszystkich doświadczeniach. Zwierzęta trzymano w klatkach z Makrolonu w warunkach przepływu laminamego. Tkanki linii komórek SW480 hodowane uprzednio przez szereg pasaży w nagich myszach zastosowano jako materiał nowotworowy.
Dwa nowotwory/zwierzę wszczepiono podskórnie z dwóch boków nagim myszom w wieku 6-8 tygodni. Zwierzęta trzymano przez 26-27 dni do czasu uśredniania. Średnia waga nowotworu wynosiła wówczas 500 mg, co odpowiadało średnicy nowotworu około 10 mm.
Badania fannakokinetyczne, wykonywano w sposób następujący: badane substancje wstrzykiwano nagim myszom, po czym myszy ponownie umieszczano w klatkach, pobierając próbki po 0,5 i 4 godzinach. Pobieranie próbek rozpoczyna się od pobierania krwi. W tym celu mysz usypia się eterem do narkozy (przez 0,5-1 minutę). W 0,5 godziny i 4 godziny po wstrzyknięciu substancji otwiera się jamę brzuszną i mysz wykrwawia się pod narkozą przez żyłę główną ogonową przez 1-2 minuty i mysz uśmierca się przetrącając jej szyję. W efekcie następuje zatrzymanie krążenia ośrodkowego i zahamowana zostaje perfuzja narządów. Poszczególne narządy odsłania się i usuwa w operacji trwającej około 5 minut. Bezpośrednio potem próbki narządów i resztę ciała waży się i zamraża w ciekłym azocie.
Substancję „koniugat 1” podaje się dootrzewnowe w ilości 300 mg/kg wagi ciała, a substancję „koniugat 2” podaje się dożylnie do żyły ogonowej w ilości 100 mg/kg. Bada się 5 zwierząt dla każdej substancji i przedziału czasowego.
Wyniki rozkładu zestawiono w tabeli 3 dla koniugatu 1 i w tabeli 4 dla koniugatu 2.
A. Serie kalibracji
5,10,15, 100 i 200 pg substancji rozpuszczonej w mieszaninie woda/etanol (1:1 objętościowo) dodano do 1 g wątroby bydlęcej. Następnie próbkę roztarto w moździerzu z 1 g piasku morskiego i 2,5 g schłodzonej mieszaniny etanol/woda (1:1 objętościowo) i odwirowano
183 574 z szybkością 3500 obrotów/minutę przez 2 minuty. Po usunięciu supematantu pozostałość ponownie wymieszano z 2,5 ml mieszaniny etanol/woda, odwirowano i supematanty połączono. W każdym przypadku pobrano próbkę 100 pl, którą analizowano metodą HPLC.
Warunki HPLC:
| Aparat: | Jednostka Waters |
| Kolumna- | BischoffHypersil OCS RP 18 5 pm 250 X 4 mm |
| Eluent: | A: 80% acetonitryl/20% woda |
| B: 10 mM fosforan potasu, bufor, pH 4,5 | |
| Gradient: | 0 minut 90% B |
| 10 minut 40% B | |
| 15 minut 40% B | |
| 18 minut 90% B | |
| 20 minut 90% B | |
| Przepływ: | 1 ml/minutę |
| Długość fali: | 372 nm |
B. Obróbka narządów
Narządy poddawano obróbce w sposób analogiczny jak w A; całe narządy rozcierano w 2,5 ml mieszaniny alkohol/woda i ekstrahowano.
C. Obróbka krwi
Pobraną ilość krwi mieszano z 2 ml mieszaniny etanol/woda (1:1 objętościowo) i odwirowano z szybkością 3500 obrotów/minutę przez 2 minuty i supematant dekantowano. Do pozostałości ponownie dodawano 2 ml mieszaniny etanol/woda (1:1 objętościowo), mieszaninę odwirowano i supematanty połączono. W każdym przypadku pobrano próbkę 100 μΐ, którą analizowano metodą HPLC. HPLC wykonywano w takich samych warunkach jak w A.
Koniugat 1 (EP 501 250-A1)
183 574
Koniugat 2 (przykład 3.9)
Tabela 3
| Ocena próbek organów | |||
| Narząd | Substancja | Średnio 1 godzina (pg/g narządu) | Średnio 4 godziny (pg/g narządu) |
| Krew | Koniugat 1 | 31,2 | - |
| Batracylina | - | - | |
| Nowotwór | Koniugat 1 | 56,6 | 24,4 |
| Batracylina | - | - | |
| Wątroba | Koniugat 1 | 770 | 126 |
| Batracylina | 34,1 | 22,4 | |
| Nerka | Koniugat 1 | 81 | 78,4 |
| Batracylina | 26,1 | 27,5 | |
| Mózg | Koniugat 1, | - | - |
| Batracylina | - | - |
Tabela 4
| Ocena próbek organów | |||
| Narząd | Substancja | Średnio 0,5 godziny (pg/g narządu) | Średnio 4 godziny (pg/g narządu) |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Krew | Koniugat 2 | 6,5 | - |
| Batracylina | - | - | |
| Nowotwór | Koniugat 2 | 2,0 | - |
| Batracylina | 2,5 | 3,12 |
183 574 ciąg dalszy tabeli 4
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Wątroba | Koniugat 2 | 0,9 | 1,2 |
| Batracylina | - | - | |
| Nerka | Koniugat 2 | 17,5 | 0,5 |
| Batracylina | 10,7 | 0,8 | |
| Mózg | Koniugat 2 | - | - |
| Batracylina | - | - |
Przykład A4. Oznaczenie toksyczności doraźnej glikokoniugatów batracyliny (jednorazowe podawanie)
Duża toksyczność pochodnych batracyliny oznaczano na nagich myszach nu/nu.
Substancje podawano dożylnie w postaci roztworów wodnych, a ponadto substancje podawano dootrzewnowo w postaci roztworów w dimetylosulfotlenku, wstrzykując je jednorazowo w stężeniach do 400 mg substancji/kg myszy.
Pojedyncze tolerowane dawki wyliczano ze spadku wagi zwierząt w okresie do 21 dni po podaniu oraz z liczby zwierząt, które przeżyły.
Pojedyncze dawki substancji, które mogąbyć tolerowane, podano w tabeli 5.
W przypadku substancji 3.16; 3.33; 3.9; 6.12; 6.14; 6.2; 6.81 i 8.2 dawka wynosiła ponad 200 mg substancji/kg myszy.
W przypadku substancji 3.33; 6.12; 6.14, 6.2 i 6.81 doraźnej toksyczności nie można było wykryć nawet przy dawce 400 mg/kg.
Natomiast nie zawierająca cukru lizylo-D-alanylo-batracylina (2.13) wykazywała znaczącą toksyczność przy pojedynczych dawkach w zakresie od 25 do 50 mg/kg myszy.
Tabela 5
Maksymalne tolerowane pojedyncze dawki pochodnych batracyliny i pochodnych chinolonu-a
| Przykład | Pojedyncza tolerowana dawka w mg/kg myszy | |
| dootrzewnowo | dożylnie | |
| 2.13 | 50 | 25 |
| 3.4 | 200 | < 100 (2 zwierzęta padły) |
| 3.9 | 200 | 200 |
| 3.16 | >200 | n.d. |
| 3 33 | n.m. | >400 |
| 6.2 | >400 | n.m. |
| 6.12 | n.m. | >400 |
| 6.14 | >400 | n.m. |
| 6.81 | n.m. | >400 |
| 82 | >200 | n.d. |
| Chinolon-a | n.d. | <25 |
| 12.3 | n.d. | >200 |
183 574
Przykład A5. Oznaczanie toksyczności doraźnej po szeregu podawaniach
Substancje podawano dożylnie, a częściowo dootrzewnowe codziennie od dnia 1 do 4 i od 7 do 10, albo w dniach 1, 5 i 9. Oceny dokonywano na podstawie spadku wagi zwierząt w okresie do 21 dni po podaniu oraz z liczby zwierząt, które przeżyły. W doświadczeniach stosowano po 5 zwierząt dla każdej substancji i dawki. Wyniki zestawiono w tabeli 6.
Tabela 6
Maksymalna tolerowana dawka przy wielokrotnym podawaniu
| Podawanie | Dawka w dniu | MDT mg/kg/dzień | |
| 3.9 | dożylne | 1-4, 7-10 | -50 |
| 1-4 | -100 | ||
| 3.33 | dożylne | 1,5,9 | >400 |
| 6.2 | dootrzewnowe | 1-4, 7-10 | -400 |
| 1,5,9 | >400 | ||
| 6.12 | dożylne | 1-4, 7-10 | >400 |
| 1,5,9 | >400 | ||
| 6.14 | dootrzewnowe | 1,5,9 | >400 |
| 6.81 | dożylne | 1-4, 7-10 | -200 |
| 1,5,9 | >400 | ||
| Batracylina | dootrzewnowe | 1,5,9 | -100 |
Przykład A6. Aktywność hematopoetyczna glikokoniugatów chinolonu-a w porównaniu z substancją czynną na której są one oparte
Materiał i metody:
In vitro: komórki szpiku kostnego wydmuchuje się z kości udowej myszy. 105 komórek inkubuje się w ośrodku McCoy SA (0,3% agar) wraz ze zrekombinowanym mysim GM-GSF (Genzyme; tworzenie kolonii komórek macierzystych) i substancjami (10*4 do 100 pg/ml) w 37°C przy 7% CO2. Po 7 dniach zlicza się kolonie (<50 komórek) i gniazda (17-50 komórek).
In vivo: myszom podaje się podskórnie 1,3, 10 lub 30 mg/kg związków. W różnych odstępach czasu (3, 24, 48, 72 po inićkcji) usuwa się kość udową i wydziela się komórki szpiku kostnego. 2 χ 105 komórek inkubuje się z GM-CSF w sposób opisany powyżej, a po 7 dniach zlicza się kolonie i gniazda.
Wyniki:
Jak to przedstawiono w tabeli 7, zbadane glikokoniugaty hamują proliferację macierzystych komórek szpiku kostnego, która spada 105-103 razy w porównaniu z chinolonem-a.
In vivo nie zaobserwowano zahamowania proliferacji komórek macierzystych przez związek 12.3 w dawce do 30 mg/kg w porównaniu z chinolonem-a. Zdecydowane tłumienie proliferacji komórek macierzystych wywoływane jest już przez dawkę 3 mg/kg chinolonu-a (fig-1).
183 574
Tabela 7
Wywołana przez CSF proliferacja macierzystych komórek szpiku kostnego u myszy
| Przykłady | IC50 [pg/ml] |
| Chinolon-a | 0,0002 |
| 11.2 | 22,5 |
| 11.7 | 2,9 |
| 12.1 | 0,21 |
| 12.3 | 0,27 |
| 12.6 | 0,3 |
| 12.8 | 0,3 |
| 14.1 | 2,9 |
| 14.2 | 3,6 |
| 14.4 | 3,6 |
Przykład A7. Przeciwnowotworowaaktywnośćkoniugatówchinolonu-a
Aktywność in vitro glikokoniugatów chinolonu-a oznaczano na heteroprzeszczepach ludzkiego nowotworu w układzie hodowli z dwuwarstwowego miękkiego agaru, według Hamburgera i Salomona (Science 197: 461-463).
Stałe nowotwory hodowano na wstępie w bezgrasiczych nagich myszach (NMRI nu/nu), po czym wycięto je chirurgicznie i rozdrobniono mechanicznie. Następnie uzyskano pojedyncze komórki przez inkubowanie w mieszaninie enzymów zawierającej 0,05%, 0,07% DNAzy i 0,1% hialuronidazy w RPMI w 27°C przez 30 minut. Komórki przemyto 2 rązy, po czym przepuszczono przez sito z oczkami o szerokości 200 pm i 20 pm.
Zastosowano następującą metodę hodowli·
Warstwa bazowa zawiera 0,2 ml ośrodka Iscove's Modified Dubleccos Medium z 20% płodowej surowicy cielęcej i 0,7% agaru. 40000-200000 komórek w 0,2 ml tego samego ośrodka i 0,4% agaru naniesiono na tę warstwę na 24-studzienkowych płytkach. Substancje cytostatyczne dodawano w 0,2 ml ośrodka.
Hodowlę inkubowano w 37°C w atmosferze 7% CO2 przez 6-15 dni. Kolonie, które wzrosły, zliczano następnie pod mikroskopem inwersyjnym barwiąc żywe kolonie chlorkiem tetrazoilowym na 24 godziny przed dokonaniem oceny.
Wpływ substancji czynnej wyrażano jako procent kolonii, które przeżyły, w porównaniu z koloniami zliczonymi na płytkach nie traktpwanych (T/C = liczba kolonii traktowanych/liczba kolonii nietraktowanych).
Substancja jest aktywna, gdy wielkość T/C jest < 30%.
Wielkości te podano jako wielkości IC70 w pg/ml w tabeli 8.
183 574
Tabela 8
| IC70 (pg/ml) | |||||
| CXF 280 | >100 | 70 | 5 | <0,3 | 6 |
| HT29 | 56 | 6 | 5 | 11 | 20 |
| SW 480 | 18 | 8 | 11 | 10 | 3 |
| LXFI S29 | 4 | 0,9 | 2 | 2 | 3 |
| LXFS 538 | 18 | 0,4 | 0,5 | <0,3 | <0,3 |
| MEXF 989 | 3 | <0,3 | <0,3 | 0,5 | <0,3 |
| OVXF 899 | 234 | 45 | 162 | 55 | 2 |
| OVXF 1023 | 136 | 12 | 10 | 9 | 0,5 |
Przykład A8. Testy in vivo
Metoda
Myszom zaszczepiono 5 χ 106 komórek nowotworowych B 16F 10 w dniu 0. U zwierząt, którym wszczepiono komórki nowotworowe, rozwinęły się stałe otrzewnowe nowotwory; podawano im codziennie badane substancje lub kontrolny nośnik. W grupie kontrolnej 50% zwierząt zazwyczaj pada pomiędzy dniem 14 i 20. Badane substancje podawano w buforze lub w układzie rozpuszczalników organicznych,zawierającym 20% metanolu i 20% dimetylosulfotlenku w 0,7% roztworze chlorku sodu.
Podawanie nośnika nie wywiera wpływu na czas przeżycia zwierząt. Działanie terapeutyczne wynika z przedłużenia czasu przeżycia traktowanych zwierząt. Równolegle analizuje się tolerancję na zwierzętach, które nie przenoszą nowotworu. Wskaźnik terapeutyczny można oceniać na podstawie tolerancji i wydłużenia czasu przeżycia.
Tabela 9
Procent przeżycia
| Dzień 0 | Dzień 20 | Dzień 25 | Dzień 30 | Dzień 35 | |
| Kontrolna | 100 | 70 | 30 | 10 | 10 |
| 11.12 (Img/kg) | 100 | 90 | 60 | 30 | 30 |
| 11.12(100 mg/kg) | 100 | 100 | 100 | 90 | 90 |
| Chinolon-a (0,1 mg/kg) | 100 | 100 | 100 | 60 | 40 |
| Etopsyd (5mg/kg) | 100 | 90 | 80 | 80 | 70 |
Z tabeli 9 wynika działanie terapeutyczne związku z przykładu 11.12 na myszy, którym wszczepiono nowotwór NB16F10.
Przykład A9. Hamowanie in vivo wzrostu nowotworu z wykorzystaniem nagich myszy jako modelu
Materiał:
Bezgrasicze nagie myszy (szczep NMRI nu/nu) zastosowano we wszystkich doświadczeniach in vivo przy badaniu hamowania wzrostu nowotworu. Wybrany rak wielkich komórek płucnych LXFL 529 rozwinięto w wyniku seryjnych pasaży w nagich myszach. Ludzkie pochodzenie nowotworu wykazano metodami izoenzymatycznymi i immunohistochemicznymi.
183 574
Ustawienie doświadczeń:
Nowotwór wszczepiano podskórnie z obydwu boków nagim myszom nu/nu w wieku 6-8 tygodni. Traktowanie rozpoczynano, niezależnie od czasu podwajania, gdy nowotwory osiągnęły średnicę 5-7 mm. Myszy przypadkowo przydzielano do grup traktowanych i grupy kontrolnej (5 myszy w grupie z 8-10 dającymi się ocenić nowotworami). W grupie kontrolnej wszystkie pojedyncze nowotwory stale rosły.
Wielkość nowotworów mierzono w dwóch wymiarach za pomocą suwmiarki. We wszystkich ocenach wykorzystywano objętość nowotworów, która dobrze koreluje z ilością komórek. Objętość wyliczano z równania „długość x szerokość x szerokość/2” ([a x b2]/2, przy czym a oraz b oznaczają dwa wymiary w kierunkach prostopadłych). Wielkości względnej objętości nowotworu wyliczano dla każdego pojedynczego nowotworu dzieląc wielkość nowotworu w dniu X przez wielkość nowotworu w dniu 0 (przy randomizacji). Wielkości średnie RTV wykorzystywano następnie do wykonania dalszej oceny.
Hamowanie wzrostu objętości nowotworu objętość nowotworu grupy testowej/grupy kontrolnej, T/C (w procentach) stanowiło wynik pomiarów.
Traktowanie:
Wszystkie związki podawano według planu okresowego, w każdym przypadku w dniu 1, 5 i 9. Wszystkie związki podawano dootrzewnowe (i.p.) stosując wodę jako rozpuszczalnik.
Tabela 10
| Traktowanie | Dawkaa) [mg/kg/dzień] | Czas przeżycia (dni) | Liczba nowotworów | Względna objętość nowotworu [% względem dnia 0]b> | Optimum T/Cb) |
| Grupa kontrolna | - | 19 >21 >21 >21 14 | 10 | 1552 | 100% |
| 12.6 | 100 | 23 >26 26 >26 >26 | 8 | 300,7 | 19,4% |
| 12.8 | 50 | >21 >21 >21 >21 >21 | 9 | 502,2 | 32,3% |
| 12 14 | 25 | 23 >26 19 26 >26 | 8 | 519,2 | 33,5% |
a) maksymalna tolerowana dawka (MTD) b) w dniu 19
W teście tym związki kamptotecynowe z serii przykładów 18 z reguły wykazują porównywalne lub lepsze działanie.
Przykłady serii B: Przykłady syntezy
Przykład 1.1. 2-O-metylo-p-L-fukozydp-aminofenylu
HO Me
183 574
1.1 .a) 3,4-O-izopropylideno-p-L-fukozyd p-nitrofenylu mg kwasu p-toluenosulfonowego oraz, w 30 minutowych odstępach, 5 x 100 μΐ 2-metoksypropenu dodano do roztworu β-L-fukozydu p-nitrofenylu (750 mg, 2,63 mmola) w 40 ml mieszaniny dimetyloformamid/dioksan 1:2 w 0°C. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 16 godzin, zatężono ją pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Po zatężeniu otrzymano 710 mg (83%) białej substancji stałej.
1.1 .b) 2-O-metylo-3,4-O-izopropylideno-P-L-fukozyd p-nitrofenylu
100 mg (0,307 mmola) związku z przykładu 1.1.a wprowadzono na wstępie do 10 ml tetrahydrofuranu wraz z 96 pl jodku metylu, a następnie dodano porcjami 11 mg wodorku sodu (stężenie 80%). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 3 godziny dodano kolejne 96 μΐ jodku metylu i 11 mg wodorku sodu. Po mieszaniu w 20°C przez 16 godzin dodano trochę wody i 100 ml chlorku metylenu. Mieszaninę wyekstrahowano przez dwukrotne wytrząsanie z wodą fazę organiczną zatężono i produkt oczyszczano metodą chromatografii kolumnowej (eter naftowy/octan etylu 8:1).
Wydajność: 78 mg (75%).
1.1) 2-O-metylo-p-L-fukozyd p-aminofenylu mg (0,23 mmola) 2-O-metylo-3,4-O-izopropylideno-β-L-fukozydu p-nitrofenylu mieszano w 3 ml 80% kwasu octowego w 20°C przez 16 godzin. Kwas octowy usunięto następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, 10 ml metanolu dodano do pozostałości i po dodaniu dwutlenku platyny przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem. Zawiesinę przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto metanolem. Po oczyszczeniu metodą chromatografii (chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5) otrzymano 77 mg (80%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rt = 0,42].
Przykład 1.2.
3-O-metylo-β-L-fukozyd p-aminofenylu
OMe
1.2. a) 3-O-metylo-β-L-fukozyd: p-nitrofenylu
784 g (31,5 mmola) tlenku dibutylocyny dodano do 6 g (21 mmola) β-L-fukozydu p-nitrofenylu w 300 ml absolutnego metanolu i mieszaninę refluksowano przez 2 godziny. Zatężono ją następnie, a pozostałość wysuszono i rozpuszczono w 300 ml dimetyloformamidu. Po dodaniu 15,7 ml jodku metylu mieszaninę reakcyjną mieszano w 70°C przez 40 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszczono w 300 ml chlorku metylenu. Zawiesinę przesączono, pozostający roztwór zatężono ponownie i pozostałość poddano chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Po zatężeniu otrzymano 381,5 mg (61%) docelowego produktu.
1.2) 3-O-metylo-β-L-fukozyd p-aminofenylu
3,81 g (12,73 mola) 3-O-metylo-β-L-fukozydu p-nitrofenylu uwodorniano analogicznie jak w przykładzie 1.1. Wydajność: 3 g (88%). [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rf= 0,53].
183 574
Przykład 1.3.
3-0-metylo-a-L-fukozyd p-aminofenylu
OMe
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 1.2 wychodząc z α-L-fukozydu p-nitrofenylu. Wydajność: 63% po 2 etapach. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rf= 0,39],
Przykład 1.4.
4-O-metylo-PL-fukozyd p-aminofenylu
HO
1.4. a). 2-O-benzylo-4-O-acetylo-P-L-fukozyd p-nitrofenylu mg kwasu p-toluenosulfonowego i 1134 mg (7 mmoli) ortooctanu trietylu dodano do 1 g (3,5 mmola) β-L-fukozydu of p-nitmofenylu w 100 ml absolutnego tetrahydrofuranu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 15 minut rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w 50 ml tetrahydrofuranu i 3 ml dimetyloformamidu, po czym dodano 4165 pl bromku benzylu i 210 mg wodorku sodu (o stężeniu 60%). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 1 godzinę dodano 10 ml 80% kwasu octowego, mieszaninę zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Po zatężeniu i wysuszeniu otrzymano 1236 mg (85%) docelowego związku.
1,4.b) 2-O-benzylo-3-O-acetylo-4-O-metylo-|3-L-fukozyd p-nitrofenylu
1000 mg (2,39 mmola) 2-O-benzylo-4-O-acetyΙο-β-L-fukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 60 ml benzenu. Po dodaniu 2988 pl jodku metylu i 1109 mg tlenku srebra mieszaninę reakcyjną refluksowano przez 8 godzin. Powstałą mieszaninę produktu rozdzielono na składniki metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Wydzielono 239 mg (23%) 2-O-benzylo-3-O-acetylo-4-Ó-metylo.-P-L-fukozydu p-nitrofenylu, a ponadto 653 mg (63%) izomerycznego 2-O-benzylo-3-O-acetylo-4-O-metylo-P-L-fukozydu p-nitrofenylu, w postaci białej substancji stałej.
1.4) 4-O-metylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
224 mg (0,52 mmola) 2-O-benzylo-3-O-acetylo-4-O-metylo-P-L-fukozydu of p-nitrofenylu rozpuszczono w 20 ml metanolu i dodano 390 pl 1 N roztworu metanolami sodu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 16 godzin zobojętniono ją 80% kwasem octowym i zatężono, a pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu. Fazę organiczną przemyto 1 N roztworem wodnym wodorowęglanu i wodą wysuszono i zatężono. Pozostałość rozpuszczono w 20 ml metanolu i uwodorniano nad palladem na węglu aktywnym analogicznie jak w przykładzie 1.1. Po zatężeniu produkt rozpuszczono w wodzie i liofilizowano. Wydzielono 119 mg (88%) białej bezpostaciowej substancji stałej. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rt = 0,38],
183 574
Przykład 1.5. 3-O-n-propylo-P-L-fukozydp-aminofenylu
1.5. a) 2-O-benzylo-3-O-n-propylo-4-O-acetylo-P-L-fukozyd p-nitrofenylu
Analogicznie jak w przykładzie 1.4.b, izomeryczne produkty 3- i 4-propylowania wytworzono ze związku 1.4.a stosując jodek propylu i rozdzielono je metodą chromatografii. 2-O-benzylo-3-O-n-propylo-4-O-acetylo-[3-L-fukozyd p-nitrofenylu otrzymano z wydajnością 49%, a ponadto 2-O-benzylo-3-O-acetylo-4-O-n-propylo-p-L-fukozyd p-nitrofenylu z wydajnością 29%.
1.5. b) 3-O-n-propylo-a-L-fukozyd p-aminofenylu
Otrzymano ze związku z przykładu 1.5.a), analogicznie jak w przykładzie 1.4. Wydajność: 78% [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1,Rf = 0,42],
Przykład 1.6. 3-dezoksy-P-L-fukozydp-aminofenylu
1.6. a) 3,6-didezoksy-3-chloro-4-O-acetylo-p-L-glukozyd p-nitrofenylu mg kwasu p-toluenosulfonowego i 1134 mg (7 mmoli) ortooctanu trietylu dodano do 1 g (3,5 mmola) β-L-fukozydu p-nitrofenylu w 100 ml tetrahydrofuranu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 15 minut rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano 100 ml nasyconego roztworu chlorowodorku w chlorku metylenu. Po 10 minutach mieszaninę zatężono i produkt oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Otrzymano 793 mg (65%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5, Rf = 0,36],
1.6. b) 3,6-didezoksy-3-chloro-p-L-glukozyd p-nitrofenylu
375 mg 3,6-didezoksy-3-choro-4-O-acetylo-P-L-glukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 25 ml metanolu i dodano 10 kropli 1 N roztworu metanolami sodu. Po 20 minutach mieszaninę zakwaszono kwasem octowym i zatężono, a pozostałość wymieszano z 400 ml chlorku metylenu i 60 ml wody. Fazę organiczną wysuszono i zatężono, a pozostałość wytrącono z chlorku metylenu/eteru. Otrzymano 315 mg (96%) docelowego produktu.
1.6) 3-dezoksy-P-L-fukozyd p-aminofenylu
315 mg (1,04 mmola) 3,6-didezoksy-3-chloro-p-L-glukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 40 ml metanolu, dodano 200 mg palladu na aktywnym węglu drzewnym oraz 290 pl trietyloaminy i przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 4 dni. Zawiesinę przesączono, przemyto i zatężono, a produkt oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5). Otrzymano 160 mg (65%) związku dezoksy. [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,18].
183 574
Przykład 1.7. 3,4-didezoksy-p-L-fukozydp-aminofenylu
400 mg (1,16 mmola) 3,6-didezoksy-3-chloro-4-O-acetylo-P-L-glukozydu p-nitrofenylu (przykład 1.6.a) rozpuszczono w 55 ml metanolu, 323 μΐ trietyloaminy dodano i przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem nad palladem na węglu aktywnym (10%). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 16 godzin przesączono ją przez celit, materiał na filtrze przemyto, przesącz zatężono, a pozostałość ponownie rozpuszczono w 100 ml metanolu. Dodano 1,5 ml 1 N roztworu metanolami sodu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Zobojętniono ją kwasem octowym i zatężono, powstałe struktury rozdzielono metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5). Po zatężeniu odpowiednich frakcji i ponownym wytrąceniu z metanolu/eteru otrzymano 120 mg (46%) docelowego związku [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,31] oprócz 77 mg (28%) 3-dezoksy-3-L-fukozydu p-aminofenylu [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,18].
Przykład 1.8 3,4-epoksy-P-L-fukozydp-aminofenylu
mg (0,23 mmola) 3,6-didezoksy-3-chloro-4-O-acetylo-P-L-glukozydu p-nitmofenylu (przykład 1.6.a) rozpuszczono w 10 ml metanolu i dodano 345 μΐ 1 N roztworu metanolami sodu. Po obróbce ultradźwiękami przez 1 godzinę mieszaninę zakwaszono 80% kwasem octowym i zatężono, a pozostałość chromatografowano z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 99:1. Po zatężeniu odpowiednich frakcji pozostałość rozpuszczono w metanolu i przeprowadzano uwodornienie nad palladem na węglu aktywnym analogicznie jak w przykładzie 1.1. Otrzymano 46 mg (75%) docelowego związku. FAB-MS: m/e = 238 = M + 1.
Przykład 1.9. 4-dezoksy-P-L-fukozyd p-aminofenylu
Związek ten otrzymano analogicznie do sposobu, który podali T. Lindhorst i J. Thiem w Carbohydr. Res. 209 (1991), 119 wychodząc z β-L-iukozydu p-nitrofenylu poprzez 2,3-di-O-benzoilo-4,6-didezoksy-4-jodo-P-L-fukozyd p-nitrofenylu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 90:10 Rf= 0,3].
183 574
Przykład 1.10 3-O-karboksymetylo-[3-L-fukozydp-aminofenylu
COOH
1.10.a) 3 -O-metoksykarbonylometyΙο-β-L-fukozyd p-nitrofenylu g (3,5 mmola) β-L-fukozyd p-nitrofenylu i 1,3 g (5,2 mmola) tlenku dibutylocyny refluksowano w 50 ml metanolu przez 2 godziny. Roztwór zatężono, pozostałość rozpuszczono w 50 ml dioksanu, dodano 2 ml bromooctanu metylu i 100 mg jodku tetrabutyloamoniowego dodano i mieszaninę refluksowano przez 16 godzin. Rozpuszczalnik odparowano, a produkt oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 99:1). Po zatężeniu odpowiednich frakcji i ponownym wytrąceniu pozostałości z metanolu/eteru otrzymano 455 mg (37%) docelowego związku.
1.10) . 3-O-karboksymetylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
282 mg (0,79 mmola) 3-metoksykarbony lornety Ιο-β-L-fukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 20 ml metanolu i dodano 440 μΐ 2 N roztworu wodorotlenku litu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 2 godziny doprowadzono ją do pH 3 za pomocą kationitu SC 108 i przesączono. 250 mg palladu na aktywnym węglu drzewnym dodano do przesączu. Uwodornianie przeprowadzano stosując wodór pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 1,5 godziny, po czym katalizator usunięto i przemyto metanolem. Po zatężeniu mieszaniny, rozpuszczeniu pozostałości w wodzie i suszeniu sublimacyjnym uzyskano docelowy produkt z wydajnością 86% (212 mg). [TLC: acetonitryl/woda/kwas octowy 5:1:0,2, Rf= 0,24].
Przykład 1.11
3-O-metoksykarbonylometylo-p-L-fukozyd p-aminofenylu
COOMe
250 mg (0,7 mmola) 3-metoksykarbonylometylo-p-L-fukozydu p-nitrofenylu (przykład 1.10.a) rozpuszczono w 20 ml metanolu i przeprowadzano uwodornianie wodorem wobec palladu na aktywnym węglu drzewnym pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 1,5 godziny. Katalizator usunięto i przemyto metanolem. Po zatężeniu, rozpuszczeniu w wodzie i suszeniu sublimacyjnym uzyskano 195 mg (85%) docelowego produktu.
[TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rf = 0,43; FAB-MS: m/e = 328 = M + 1].
Przykład 1.12
3-O-hydroksyetylo-|3-L-fukozyd p-aminofenylu
183 574
1.12. a) 3-O-hydroksyetylo-p-L-fukozyd p-nitrofenylu
1000 mg (2,8 mmola) 3-metoksykarbonylometylo-|3-L-fukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w mieszaninie 160 ml tetrahydrofuranu i 40 ml wody o dodano 53 mg borowodorku sodu. Po 10 minutach rozpuszczalnik odparowano, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 95:5). Po zatężeniu odpowiednich frakcji pozostałość rozpuszczono w wodzie i mieszaninę suszono sublimacyjnie uzyskując 362 mg (40%) docelowego produktu.
1.12) 3 -O-hydroksyetylo- β-L-fukozy d p-aminofenylu
Po uwodornianiu 362 mg związku z przykładu 1.12.a) w sposób analogiczny jak w przykładzie 1.1 otrzymano 270 mg (82%) docelowego produktu [TLC: acetonitryl/woda 10:1, Rf=0,43].
Przykład 1.13
2-O-karboksymetylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
1.13. a) 2-O-metoksykarbonylometylo-p-L-fukozyd p-nitrofenylu
250 mg (0,88 mmola) -β-L-fukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 25 ml absolutnego tetrahydrofuranu i 3 ml dimetyloformamidu. 80 mg (2,64 mmola) 80% wodorku sodu dodano i po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 10 minut dodano 35 μΐ bromooctanu benzylu. 3 kolejne porcje, każda po 35 pl bromooctanu benzylu, dodano w odstępach 10 minutowych. Mieszaninę mieszano następnie przez 30 minut i reakcję przerwano metanolem. Po kolejnych 10 minutach zakwaszono ją 5 ml 80% kwasu octowego. Mieszaninę zatężono, a pozostałość destylowano następnie z chlorkiem metylenu. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej rozpoczęto z układem fazy ruchomej chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1. Stosunek w tym samym układzie zmieniono następnie na 80:20:2. Po zatężeniu odpowiednich frakcji pozostałości strawiono eterem i 157 mg (42%) docelowego związku otrzymano z wczesnego eluatu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,65]. Izomeryczny związek 3-O-alkilowany otrzymano z późniejszych eluatów (33%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,45].
1.13) . 2-O-karboksymetylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
Hydroliza i uwodornianie 150 mg 2-O-metoksykarbonylometylo-|3-L-fukozydu p-nitrofenylu sposobem opisanym w przykładzie 1.10 prowadzi do 109 mg docelowego produktu z wydajnością 83%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,35].
Przykład 1.14.a) Synteza regioizomerycznych produktów monosukcynylowania β-L-fukozydu p-nitrofenylu
1100 mg (3,86 mmola) β-L-fukozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 50 ml pirydyny i dodano 580 mg (5,79 mmola) bezwodnika bursztynowego. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 16 godzin zatężono ją a pozostałość destylowano następnie dwukrotnie chlorkiem metylenu. Produkt wytrącono z chlorku metylenu/eteru, otrzymując 1 g mieszaniny substancji, których nie można było rozdzielić. Rozpuszczono ją w metanolu/wodzie i dodano 846 mg (2,6 mmola) węglanu cezu. Rozpuszczalnik odparowano, a pozostałość destylowano następnie z dimetyloformamidem. Pozostałość rozpuszczono w dimetyloformamidzie i dodano 618 μΐ bromku benzylu. Po obróbce ultradźwiękami przez 1 godzinę bromek cezu odsączono i przesącz zatężono. Pozostałość wymieszano z 500 ml octanu etylu i 50 ml wody. Fazę organiczną wysuszono i zatężono. Rozdzielenie składników metodą chromatografii rzutowej osiągnięto stosując jako fazę ruchomą układ chlorek metylenu/metanol 99:1. Otrzymano:
183 574
Frakcja 1: 87 mg (4,8%) 3-O-(3-benzyloksykarbonylopropionylo)-p-L-fukozydu p-nitrofenylu [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,45];
Frakcja 2: 27 mg (1,5%) 2-O-(3-benzyloksykarbonylopropionylo)-P-L-fukozydu p-nitrofenylu [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,34];
Frakcja 3: 190 mg (10,3%) 4-O-(3-benzyloksykarbonylopropionylo)-3-L-fukozydu p-nitrofenylu [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,28],
Przykład 1.14. 3-O-sukcynylo-p-L-fukozydp-aminofenylu
COOK mg (0,17 mmola) frakcji 1 z przykładu 1.14.a) rozpuszczono w 5 ml tetrahydrofuranu i 1 ml wody. 20 mg dwutlenku platyny dodano i uwodornienie prowadzono przez 8 godzin. Katalizator odsączono, przemyto mieszaniną tetrahydrofuran/woda i przesącz zatężono. Pozostałość rozpuszczono w wodzie i liofilizowano. Otrzymano 57 mg (94%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,65].
Przykład 1.15. 2-O-sukcynylo-P-L-fukozydp-aminofenylu
Frakcję 2 z przykładu 1.14.a) uwodorniano analogicznie jak w przykładzie 1.14. Wydajność: 16 mg (87%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,62].
Przykład 1.16. 4-O-sukcynylo-p-L-fukozydp-aminofenylu
HO o ^COOH·
Frakcję 3 zprzykładu 1.14.a) uwodorniano analogicznie jak w przykładzie 1.14. Wydajność: 125 mg (88%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,63].
Przykład 1.17. 3,4-di-O-metylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu Me/z /°\
I o
Me
1.17.a) 2-O-benzylo-3,4-O-izopropylideno-p-L-fukozyd p-nitrofenylu
377 mg (1,16 mmola) związku z przykładu l.l.a) rozpuszczono w 30 ml absolutnego tetrahydrofuranu, dodano kolejno 690 μΐ bromku benzylu i 52 mg wodorku sodu i mieszaninę
183 574 mieszano w 20°C. Dodano kolejne 690 μΐ bromku benzylu i wodorek sodu, po 4 i 6 godzinach. Mieszaninę reakcyjną poddawano obróbce analogicznie jak w przykładzie 1.1.b). Otrzymano 245 mg (51%) docelowego związku.
1.17.b) 2-O-benzylo-3,4-di-O-metylo-P-L-fukozyd p-nitrofenylu
245 mg (0,59 mmola) 2-0-benzylo-3,4-0-izopropylideno-p~L-fukozydu p-nitrofenylu mieszano w 80% kwasie octowym w 20°C przez 16 godzin. Mieszaninę zatężono, a pozostałość mieszano z eterem/pentanem. Po przesączeniu mieszaniny na lejku próżniowym pozostałość wysuszono, a produkt, który pozostał, rozpuszczono w 20 ml absolutnego tetrahydrofuranu, dodano 45 mg 80% wodorku sodu i wstrzyknięto po 15 minutach 160 pl jodku metylu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 20 godzin reakcję przerwano metanolem i lodowatym kwasem octowym i mieszaninę zatężono, a pozostałość wymieszano z chlorkiem metylenu i wodą. Fazę organiczną wysuszono, i zatężono, a pozostałość oczyszczano następnie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol I 00:1). Po zatężeniu i wysuszeniu odpowiednich frakcji otrzymano 188 mg (79%) docelowego produktu.
1.17). 3,4-di-O-metylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
180 mg (0,45 mmola) związku z przykładu 1.17.b uwodorniano w mieszaninie 15 ml metanolu i 3 ml chlorku metylenu w temperaturze pokojowej przez 2 dni, po dodaniu 50 mg palladu na aktywnym węglu drzewnym. Katalizator odsączono, przesącz zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5). Otrzymano 86 mg (68%) docelowego związku. [TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,21], Przykład 1.18.
-O-karbamoilometylo-P-L-fukozyd p-aminofenylu
conh2
100 mg (0,305 mmola) związku z przykładu 1.11 rozpuszczono w 10 ml metanolu i dodano 0,5 ml 17% roztworu wodorotlenku amonu. Po 4 godzinach mieszaninę zatężono, a pozostałość rozpuszczono w wodzie i liofilizowano. Otrzymano 95 mg (ilościowo) docelowego związku. [TLC: acetonitryl/woda 10:1, Rf = 0,43].
Przykład 1.19
2-O-hydroksyetylo-[3-L-fukozyd p-aminofenylu
OH
Związek ten otrzymano analogicznie jak w przykładach 1.12.a i 1.12 wychodząc z 200 mg (0,56 mmola) 2-O-metoksykarbonylometylo-3-L-fukozyd p-nitrofenylu (przykład 1.13.a). Wydajność 76 mg )45% w 3 etapach). [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rf = 0,2].
Przykład 1.20. 3,6-didezoksy-3-chloro-p-L-glukozydp-aminofenylu
ci
183 574 mg (0,165 mmola) związku z przykładu 1.6.b uwodorniano w 5 ml metanolu nad palladem na węglu aktywnym przez 1 godzinę. Katalizator odsączono i przemyto, przesącz zatężono, a pozostałość rozpuszczono w wodzie i liofilizowano. Otrzymano 45 mg (89%) docelowego związku. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1, Rf = 0,35].
Przykład 1.21 α-L-ramnozyd p-aminofenylu
Me, .O
OH
Związek ten otrzymano analogicznie jak w przykładzie 1.1 wychodząc z 300 mg α-L-ramnozydu p-nitrofenylu (Sigma). Wydajność: 96%.
Przykład 1.22. 3-O-karboksymetylo-a-L-ramnozydp-aminofenylu
Me nh2
COOH
1.22. a) 3-O-metoksykarbony lornety lo-tx-L-ramnozyd p-nitrofenylu
481 mg (1,63 mmola) α-L-ramnozydu p-nitrofenylu rozpuszczono w 30 ml metanolu i dodano 629 mg (2,45 mmola) tlenku dibutylocyny. Mieszaninę refluksowano przez 2 godziny i zatężono, a pozostałość rozpuszczono w 30 ml dioksanu. Dodano 85 mg jodku tetrabutyloamoniowego i 950 μΐ bromooctanu metylu, po czym mieszaninę refluksowano przez 16 godzin. W razie potrzeby można dodać jeszcze 1 ml bromooctanu metylu i czas reakcji wydłużyć. Mieszaninę zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej. 3-0-metoksykarbonylometylo-a-L-ramnozyd p-nitrofenylu eluowano mieszaniną chlorek metylenu/metanol 9:1 i po wysuszeniu otrzymano 408 mg (70%).
[TLC: chlorek metylenu/metanol 95:5, Rf = 0,36].
1.22) 3-O-karboksymetylo-a-L-ramnozyd p-aminofenylu
Syntezę przeprowadzono w całości analogicznie jak w przykładzie 1.10 wychodząc z 3-O-metoksykarbonylometylo-a-L-ramnozydu p-nitrofenylu. Docelowy produkt otrzymano z wydajnością 80%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2, Rf = 0,26].
Przykład 1.23. β-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
OH β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu (3,0 g, 10 mmola) rozpuszczono w metanolu/wodzie 1:1 (50 ml) i, po dodaniu palladu na aktywnym węglu drzewnym (10% Pd; 200 mg), uwodornianie prowadzono w atmosferze wodoru pod nieznacznym nadciśnieniem przez 3 godziny. Zawiesinę przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto gorącą mieszaniną metanol/woda 1:1 (100 ml). Po zatężeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i
183 574 rekrystalizacji z metanolu otrzymano bezbarwne kryształy (2,11 g, 78%); TLC [metanol] : Rf = 0,62; [a]20 = -39,5° (c = 1,0 H2O); temperatura topnienia = 166°C.
Przykład 1.24. 2-O-metylo-|3-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
1,24.a) 6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Roztwór β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (9,0 g, 30 mmola) chlorotrifenylometanu (16,7 g, 60 mmoli) i N,N-dimetyloaminopirydyny (609 mg, 5 mmola) w absolutnej pirydynie (100 ml) ogrzewano w 60°C przez 4 godziny. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość oczyszczano następnie metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:1—»3:2, w każdym przypadku z 0,5% trietyloaminy]. Otrzymano bezbarwne kryształy (9,23 g, 57%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,55; temperatura topnienia = 82°C.
1.24.b) 3,4-O-izopropylideno-6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Dimetoksypropan (400 ml) i katalityczną ilość kwasu (±)-kamforo-10-sulfonowego (400 mg, 1,7 mmola) dodano do powyższego związku (8,7 g, 16 mmola) Po 1 godzinie w temperaturze pokojowej reakcję zakończono dodając trietyloaminę (240 ml, 1,7 mmola) mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. W wyniku oczyszczania metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:1] otrzymano bezbarwną piankę (6,2 g, 66%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf= 0,46; [a]20 = -42,1° (c = O,94/CH2C12).
1,24.c) 2-O-metylo-3,4-O-izopropylideno-6-O-trifenylometylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.24.b (5,83 g, 10 mmoli) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (100 ml) i dodano jodek metylu (2,5 ml, 40 mmoli) oraz, porcjami, 80% zawiesinę wodorku sodu w oleju mineralnym (450 mg, 15 mmoli). Po 2 godzinach w temperaturze pokojowej reakcję zakończono wkraplając metanol (10 ml) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu (1000 ml) i roztwór mieszano energicznie z wodą (500 ml). Fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (50 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 12:1—>8:1]. Otrzymano bezbarwną piankę (4,72 g, 79%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,72; [a]20 = -35,7° (c = 1,0/CH3OH).
1,24.d) 2-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
99% kwas trifluorooctowy (20 ml) dodano do roztworu powyższego związku (4,48 g, 7,5 mmola) w chlorku metylenu (200 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Następnie mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>2:1]. Otrzymano bezbarwne kryształy (1,09 g, 46%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf= 0,42; temperatura topnienia 177°C.
1.24) 2-O-metylo-|3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.24.d (946 mg, 3 mrnole) rozpuszczono w metanolu (50 ml) i po dodaniu wody (0,5 ml) i zasadowego niklu Rane/a (około 200 mg) przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 2 godziny. Zawiesinę
183 574 przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto dokładnie metanolem (100 ml). Po zatęzeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymano brązowawą piankę (579 mg, 68%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,28; [a]20 = -39,3° (c = O,15/CH3OH).
Przykład 1.25. 3-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
ν'0
1.25. a) 3-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Tlenek dibutylocyny (1,87 g, 7,5 mmola) dodano do roztworu β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (1,5 g, 5,0 mmola) w absolutnym metanolu (40 ml) i mieszaninę refluksowano. Po 3 godzinach zatężono ją pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 1 godzinę. Rozpuszczono ją w absolutnym dioksanie (40 ml), dodano jodek metylu (1,9 ml, 30 mmoli) do uzyskanego roztworu i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze łaźni 100°C przez 16 godzin. Rozpuszczalnik oddestylowano następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 2:l->octan etylu]. Otrzymano bezbarwne kryształy (1,32 g, 84%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,34; temperatura topnienia = 196°C; [a]20 = -53,3° (c = 1,0/CH3OH).
1.25) 3-O-metylo-|3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (946 mg, 3 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24 i produkt poddano obróbce. Otrzymano brązowawe kryształy (656 mg, 77%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,21; temperatura topnienia = 196°C; [a]20 = -25,2° (c = 1,0/CH3OH).
Przykład 1.26. Octan4-O-metylo-p-D-galaktopiranozydup-aminofenylu
OH
OH
1.26. a) 3-O-benzylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Tlenek dibutylocyny (1,87 g, 7,5 mmola) dodano do roztworu β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (1,5 g, 5,0 mmola) w absolutnym dioksanie (40 ml) i mieszaninę refluksowano. Po 3 godzinach bromek benzylu (3,6 ml, 30 mmoli) dodano do uzyskanego roztworu i mieszaninę reakcyjną refluksowano z mieszaniem przez kolejne 48 godzin. Rozpuszczalnik oddestylowano następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 2:1—>1:1]. Otrzymano bezbarwne kryształy (1,58 g, 81%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,69; temperatura topnienia = 127°C.
1.26. b) 3-O-benzylo-4,6-O-izopropylideno-3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
183 574
Związek 1.26.a (6,26 g, 16 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.b. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>3:1] otrzymano bezbarwną piankę (6,54 g, 95%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,34; [a]20 = -38,9° (c = 1,O/CH2C12). ,
1,26.c) 2,3-di-O-benzylo-4,6-O-izopropylideno-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.26.b (431 g, 10 mmola) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (100 ml) i dodano bromek benzylu (12 ml, 100 mmola) oraz, porcjami, 80% zawiesinę wodorku sodu w oleju mineralnym (450 mg, 15 mmola). Po 2 godzinach w temperaturze pokojowej reakcję zakończono wkraplając metanol (10 ml) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu (1000 ml) i roztwór mieszano energicznie z wodą (500 ml). Fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (50 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 20:1—>15:l-»10:l]. Otrzymano bezbarwny olej (2,72 g, 52%), który był w dalszym ciągu zanieczyszczony; TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,62.
1.26.d) 2,3-di-O-benzylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (2,6 g, 5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z eterem dietylowym otrzymano bezbarwne kryształy (805 mg, 33%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,23; temperatura topnienia = 160°C.
1,26.e) 2,3-di-O-benzylo-6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.26.d (722 mg, 1,5 mmola) tritylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.a. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 15:1—>10:1—>5:1] otrzymano bezbarwną piankę (880 mg, 81%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,79; [a]20 = -25,3° (c = O,3/CH2C12).
1,26.f) 2,3-di-O-benzylo-4-O-metylo-6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (724 mg, 1 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>-5:1] otrzymano bezbarwną piankę (662 mg, 90%); TLC [eter naftowy/octan etylu 5:1]: Rf = 0,66; [a]20 = -38,7° (c = O,2/CH2C12).
1.26) Octan 4-O-metylo-p-D-galaktopiranozydu p-aminofenylu
Powyższy związek (590 mg, 0,8 mmola) rozpuszczono w 90% kwasie octowym (50 ml) i, po dodaniu palladu na aktywnym węglu drzewnym (10% Pd, 200 mg), przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 16 godzin. Zawiesinę przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto dokładnie metanolem (100 ml). Po zatężeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i ponownym wytrąceniu pozostałości z mieszaniny eter dietylowy/eter naftowy otrzymano bezbarwne kryształy (253 mg, 92%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf= 0,12.
Przykład 1.27. ó-O-metylo-fLD-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
1.27. a) benzylowanie związku 1.24.b)
183 574
Związek 1.24.b (5,84 g, 10 mmola) benzylowano w sposób opisany w przykładzie 1.26.c. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 15:1—>12:1—>5:1—»octan etylu, w każdym przypadku z 0,5% trietyloaminy) otrzymano dwie frakcje produktu:
Frakcja 1: 2-O-benzylo-3,4-O-izopropylideno-6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; żółtawa pianka (1,71 g, 25%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,72; [a]20 = -8,1° (c = l,0/CH2C12);
Frakcja 2: 2-O-benzylo-3,4-O-izopropylideno-|3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; żółtawy olej (806 mg, 19%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,45; [a]20 = +2,8° (c = 1,2/CH3OH).
1.27. b) 2-O-benzylo-3,4-O-izopropylideno-6-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 2 z przykładu 1.27.a (777 mg, 1,8 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>8:1] otrzymano brązowawy olej (730 mg, 91%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,54; [a]20 = -11,6° (c = 1,1/CH2C12).
1.27. c) 2-O-benzylo-6-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (668 mg, 1,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po zatężeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z niewielką ilością eteru dietylowego otrzymano po schłodzeniu do temperatury pokojowej blado beżowe kryształy (388 mg, 64%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf= 0,15; temperatura topnienia = 143°C.
1.27) 6-Ó-metylo-fyD-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.27.C (324 mg, 0,8 mmola) redukowano przez 16 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po zatężeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z niewielką ilością eteru dietylowego otrzymano beżowe kryształy (184 mg, 81%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,05; temperatura topnienia = 115°C (rozkład).
Przykład 1.28. 2,3-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
1,28. a) Izopropylidenowanie β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu
Bezwodny kwas toluenosulfonowy (500 mg) dodano do roztworu β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (7,5 g, 25 mmola) w absolutnym acetonie (1000 ml). Aceton (250 ml) oddestylowano pod normalnym ciśnieniem w ciągu 30 minut i, bezpośrednio potem, mieszaninę zobojętniono dodając węglan potasu (500 mg). Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość mieszano z eterem dietylowym (1000 ml). Mieszaninę przesączono, przesącz zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:1—>1:1—>3:2]. Otrzymano w ten sposób dwie frakcje produktu:
Frakcja 1: 3,4-O-izopropylideno-β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwna pianka (3,74 g, 44%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,59; [a]20 =
-54,2° (c - 0,38/CH3OH);
183 574
Frakcja 2: 4,6-O-izopropylideno-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwna pianka (4,3 g, 50%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,54; [a]20 = -81,0° (c = O,31/CH3OH).
1.28.b) 2,3-di-O-metylo-4,6-O-izopropylideno-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 2 z przykładu 1.28.a (4,1 g, 12 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>2:1 ] otrzymano bezbarwną piankę (2,93 g, 66%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,42; [a]20 = -52,6° (c = 0,34/CH3OH).
1.28.c) 2,3-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (2,77 g, 7,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po 1 godzinie w temperaturze pokojowej mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olej ową pompą próżniową przez 1 godzinę. Po trawieniu z mieszaniną eter dietylowy/eter naftowy 1:1 (100 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (1,11 g. 45%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,24; temperatura topnienia = 156°C.
1.28) 2,3-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.28.C (989 mg, 3 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano bezbarwny olej (396 mg, 44%); TLC [chlorek metylenu/metanol/arnoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,50; [a]20 = -19,4° (c = O,16/CH3OH).
Przykład 1.29. 2,4-di-O-metylo-3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
1.29.a) Tritylowanie związku 1.26.a)
Związek 1.26.a (11.7 g, 30 mola) tritylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.a. Po chromatografii rzutowej (eter naftowy/octan etylu 10:1 —>7:1 —>5:1, w każdym przypadku z 0,5% trietyloaminy) otrzymano 2 produkty:
Frakcja 1: 2-O-(p-nitrofenylo)-3-O-benzylo-6-O-trifenylometylo-P-D-galaktopiranozyd p-fenylometylu, bezbarwna pianka (8,5 g, 32%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,68; [a]20 = +42,8° (c = 1,O/CH2C12);
Frakcja 2: 3-O-benzylo-6-O-trifenylometylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu, bezbarwna pianka (9,0 g, 47%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,22; [a]20 = -22,6° (c = 1,O3/CH2C12).
1.29. b) 2,4-di-O-metylo-3-O-benzylo—6-O-trifenylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 2 z przykładu 1.29.a (7,6 g, 12 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 15:1—>10:1] otrzymano bezbarwną piankę (7,07 g, 89%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,79; [a]20 = -35,8° (c = 1,09/CH3OH).
1.29.c) 2,4-di-O-metylo-3-O-benzylo-3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (6,0 g, 9 mmola) uwodorniano przez 48 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.26. Otrzymano bezbarwne kryształy (1,39 g, 40%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,20; temperatura topnienia = 148°C.
183 574
1.29) 2,4-di-O-metylo-tyD-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.29.C (779 mg, 2 mmola) uwodorniano przez 5 dni w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po odparowaniu połączonych przesączy pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z eterem dietylowym (2 x 50 ml), otrzymano nieznacznie zielonkawe kryształy (391 mg, 65%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 260°C (rozkład).
Przykład 1.30. 2,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
1.30. a) 2,6-di-O-metylo-3,4-O-izopropylideno-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 1 z przykładu 1.28.a (4,1 g, 12 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>8:1—>5:1] otrzymano bezbarwny olej (3,25 g, 73%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf= 0,65.
1.30. b) 2,6-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek g, 7,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 2:1] otrzymano bezbarwne kryształy (1,63 g, 66%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,31; temperatura topnienia = 222°C.
1.30) 2,6-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.30.b (989 mg, 3 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano bezbarwny olej (597 mg, 66%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,56; [a]20 - -53,1° (c = 0,49/CH3OH).
Przykład 1.31. Octan3,4-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozydup-aminofenylu
1.31 .a) 2,6-di-O-benzylo-3,4-O-izopropylideno-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 1 z przykładu 1.28.a (4,1 g, 12 mola) benzylowano w sposób opisany w przykładzie 1.26.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 6:1] otrzymano żółtawy olej (53 g, 85%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,76; [a]20 = +8,8° (c = 1,2/CH3OH).
183 574
1.31 .b) 2,6-di-O-benzylo-[3-D-galaktopiranozyd p-nitrófenylu
Powyższy związek (4,69 g, 9 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po 30 minutach w temperaturze pokojowej mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 1 godzinę. Po rekrystalizacji z etanolu otrzymano bezbarwne kryształy (2,89 g, 67%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf= 0,42; temperatura topnienia = 133°C; [a]20 = -64,2° (c = 1,0/CH3OH).
1.31 .c) 2,6-di-O-benzylo-3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (2,4 g, 5 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po rekrystalizacji z etanolu/n-heksanu otrzymano bezbarwne kryształy (1,74 g, 69%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf= 0,74; temperatura topnienia = 149°C.
1.31) Octan 3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozydu p-aminofenylu
Związek 1.3l.c (1,52 g, 3 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.26. Otrzymano bezbarwne kryształy (664 mg, 62%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,47; temperatura topnienia = 140°C (rozkład).
Przykład 1.32. 3,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
1.32. a) 3-O-metylo-6-O-(tert-butyldimetylosililo)-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Imidazol (1 g, 15 mmola) i chlorek tert-butyldimetylosililu (1,25 g, 8 mmoli) dodano do roztworu związku 1.25.a (1,58 g, 5 mmola) w dimetyloformamidzie (150 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Reakcję przerwano następnie dodając wodę (100 ml). Mieszaninę rozcieńczono chlorkiem metylenu (1000 ml) i fazę organiczną przemyto wodą (2 x 1000 ml), wysuszono nad siarczanem magnezu (20 g) i zatęzono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [eter nafto wy/octan etylu 15:1->1O:1->5:1] otrzymano żółtawą piankę (826 mg, 38%), w dalszym ciągu nieznacznie zanieczyszczoną; TLC [octan etylu]: Rf = 0,59; [a]20 = -56,3° (c = 1,O/CH2C12).
1,32.b) 2,4-di-O-benzylo-3-O-metylo-6-O-(tert-butyldimetylosililo)-3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (773 mg, 1,8 mmola) benzylowano w sposób opisany w przykładzie 1.26.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 30:1—>5:1] otrzymano bezbarwną piankę (810 mg, 74%); TLC [eter naftowy/octan etylu 5:1]: Rf = 0,58.
1,32.c) 2,4-di-O-benzylo-3-O-metylo-3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.32.b (732 mg, 1,2 mmola) rozpuszczono w tetrahydrofuranie (6 ml) i dodano 1 M roztwór fluorku tetrabutyloamoniowego w tetrahydrofuranie (2,4 ml) w 0°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 40 minut, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>3:1—>2:1] otrzymano bezbarwne kryształy (512 mg, 86%); TLC [eter naftowy/octan etylul:l]: Rf = 0,36; temperatura topnienia = 177°C.
183 574
1.32. d) 2,4-di-O-benzylo-3,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (446 mg, 0,9 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 20:1->10:1—>8:1] otrzymano bezbarwny olej (401 mg, 87%); otrzymano TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,70; [a]20 = -56,5° (c = O,96/CH2C12).
1.32) 3,6-di-O-metylo-3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.32.d (357 mg, 0,7 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po odparowaniu połączonych przesączy pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z eterem dietylowym (20 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (207 mg, 99%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,02; temperatura topnienia = >280°C (rozkład).
Przykład 1.33. 4,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu /CH
O 3
OH
1.33. a) 2,3-di-O-benzylo-4,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.26.d (2,4 g, 5 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>3:1] otrzymano bezbarwne kryształy (1,89 g, 74%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,76; temperatura topnienia = 100°C.
1.33) 4,6-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.33.a (1,53 g, 3 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano bezbarwne kryształy (890 mg, 99%); TLC [metanol/octan etylu 1:1]: Rf = 0,71; temperatura topnienia = 180°C (rozkład).
Przykład 1.34. 2,3,4-tri-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
/O CH3 H3C
1.34. a) 2,3,4-tri-O-metylo-6-O-trifenylometylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.24.a (1,63 g, 3 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1 —>3:1 ] otrzymano bezbarwną piankę (1,24 g, 71%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,54; [a]20 = -53,6° (c = 0,3/CH3OH).
183 574
1.34. b) 2,3,4-tri-O-metylo-[3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (1,17 g, 2 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 3:1—>2:1] otrzymano bezbarwne kryształy (468 mg, 68%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 104°C; [a]20 = -68,2° (c = 0,47/CH3OH).
1.34) 2,3,4-tri-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.34.b (343 mg, 1 mmol) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano beżowe kryształy (224 mg, 71%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf= 0,67; temperatura topnienia = 138°C.
Przykład 1.35. 2,3,6-tri-O-metylo-p-D-gaIaktopiranozyd p-aminofenylu
1,35. a) 2,3,6-tri-O-metylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1,30.b (2,63 g, 3 mmola) metylowano selektywnie w sposób opisany w przykładzie 1.25.a. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 5:1—>2:1] otrzymano brązowy olej (890 mg, 32%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,37; [a]20 = -63,3° (c = O^/CftyCy.
1.35) 2,3,6-tri-O-metylo-|3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (858 mg, 2,5 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano beżową piankę (519 mg, 66%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,23; [a]20 = -34,5° (c = 0,86/CH3OH).
Przykład 1.36. 2,4,6-tri-O-metylo-fl-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH CH3
1,36. a) 2,4,6-tri-O-metylo-3-O-benzylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.26.a (1,96 g, 5 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>8:1] otrzymano bezbarwne kryształy (1,47 g, 68%); TLC [eter naftowy/octan etylu 2:1]: Rf = 0,46; temperatura topnienia = 164°C.
183 574
1.36) 2,4,6-tri-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (1,3 g, 3 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.26. Otrzymano bezbarwne kryształy (642 mg, 68%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 147°C (rozkład).
Przykład 1.37. 3,4,6-tri-O-metylo-P-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
1.37. a) 2- O-benzylo-β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Frakcję 1 z przykładu 1.27.a (1,17 g, 2 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.24.d. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 3:1—>2:1] otrzymano bezbarwne kryształy (468 mg, 68%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia - 104°C; [a]20 = -68,2° (c = 0,47/CH3OH).
1.37. b) 2- O-benzylo-3,4,6-tri-O-metylo-β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (391 mg, 1 mmol) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>5:1] otrzymano blado żółte kryształy (303 mg, 70%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,81; [a]20 = -76,5° (c = 1,1/CH2C12).
1.37) 3,4,6-tri-O-metylo-β-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.37.b (260 mg, 0,6 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Otrzymano beżowe kryształy (161 mg. 86%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,20; temperatura topnienia = 132°C.
Przykład 1.3 8. 2,3,4,6-tetra-O-metylo-β-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
1.38. a). 2,3,4,6-tetra-O-metylo-β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu β-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu (904 mg, 3 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 8:1->6:1->4:1->2:1] otrzymano bezbarwną woskowatą substancję stałą (633 mg, 59%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,67; [a]20 = -55,7° (c = O,9/CH2C12).
183 574
1.38) 2,3,4,6-tetra-O-metylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.33.a (536 mg, 1,5 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po odparowaniu połączonych przesączy pod zmniejszonym ciśnieniem i ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z eterem dietylowym (20 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (412 mg, 84%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,42; temperatura topnienia = 204°C (rozkład).
Przykład 1.39. α-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
OH
OH α-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu (3,0 g, 10 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.23. Po wytąceniu z mieszaniny metanol/eter dietylowy otrzymano bezbarwne kryształy (2,03 g, 75%); TLC [metanol]: Rf = 0,69; [a]20 - +102,7° (c = l,0/H2O); temperatura topnienia = 161°C.
Przykład 1.40. 3-O-metylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
OH
O.
CH
1.4O. a) 6-O-trifenylometylo-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu α-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu (3,0 g, 10 mmola tritylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.a. Otrzymano bezbarwne kryształy (4,35 g, 80%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,52; [a]20 = +104,0° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 102-104°C.
1.4O. b) 3-O-metylo-6-O-trifenylometylo-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (2,72 g, 5 mmoli) poddano reakcji z jodkiem metylu (2 ml, 30 mmola) w sposób opisany w przykładzie 1.26.a. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:1] i ponownym wytrąceniu z mieszaniny etanol/n-heksan otrzymano bezbarwne kryształy (1,83 g, 66%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,68; [a]20 = +106,4° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 104°C.
1.40) 3-O-metylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.40.b (1,4 g, 2,5 mmola) rozpuszczono w metanolu (50 ml) i, po dodaniu palladu na aktywnym węglu drzewnym (10% Pd; 300 mg), przeprowadzono uwodornianie w atmosferze wodoru pod nieznacznie zwiększonym ciśnieniem przez 24 godziny. Zawiesinę przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto dokładnie metanolem (100 ml). Po zatęzeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość wyekstrahowano wodą (50 ml), mieszaninę przesączono i przesącz liofilizowano. Otrzymano bezpostaciową substancję stałą (709 mg, 99%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,33; [a]20 = +92,9° (c = 1,1/CH3OH).
183 574
Przykład 1.41. 2,3-di-O-metylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
OH
O ch3 h3c
1.41. a) 4,6-O-benzylideno-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu
Dimetyloacetal benzaldehydu (3,2 ml, 21,4 mmola) i 54% roztwór kwasu tetrafluoroborowego w eterze dietylowym (2,7 ml, 20 mmola) dodano do roztworu a-D-mannopiranozydu p-nitrofenylu (6,0 g, 20 mmola) w dimetyloformamidzie (120 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 5 godzin, po czym reakcję przerwano dodając trietyloaminę (2,8 ml, 20 mmoli) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [toluen->toluen/etanol 20:1] otrzymano bezbarwne kryształy (6,48 g, 83%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,82; [a]20 = +170,7° (c = 1,0/CH2C12); temperatura topnienia =116°C.
1.41 .b) 2,3-di-O-metylo-4,6-O-benzylideno-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (3,9 g, 10 mmoli) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 20:1—>7:1] i ponownym wytrąceniu z mieszaniny octan etylu/n-heksan otrzymano bezbarwną piankę (3,2 g, 77%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,67; [a]20 = +167,3° (c = 1,05/CH3OH).
1.41) 2,3-di-O-metylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.41.b (1,25 g, 3 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.26. Po chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 2:1—>octan etylu, w każdym przypadku z 0,5% trietyloaminy] otrzymano czerwonawo-brązowąpiankę (480 mg, 53%); TLC: [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,31; [a]20 = +83,6° (c = 0,76/CH3OH).
Przykład 1.42.
OH
°\
1.42. a) 3-O-metoksykarbonylometylo-a-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Tlenek dibutylocyny (9,3 g, 37,5 mmola) dodano do roztworu β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (7,53 g, 25 mmola) w absolutnym dioksanie (ISO ml) i mieszaninę refluksowano. Po 4 godzinach bromooctan metylu (8,3 ml, 90 mmola) i jodek tetrabutyloamoniowy (9,25 g, 25 mmoli) dodano do uzyskanego roztworu i mieszaninę reakcyjną refluksowano z mieszaniem przez kolejne 3 godziny. Rozpuszczalnik oddestylowano następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metyle
183 574 nu/metanol 50:1—>20:1]. Oprócz pewnych produktów ubocznych otrzymano związek 1.42.a jako bezbarwne kryształy (4,05 g, 43%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,54; [a]20 = -62,0° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 176°C.
1.42) 3-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.42.a (3,73 g, 10 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ponownym wytrąceniu z etanolu/n-heksanu otrzymano bezbarwne kryształy (2,98 g, 87%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,39; [a]20 = -36,3° (c = 1,07/CH3OH); temperatura topnienia = 155°C.
Przykład 1.43.
OH
O^ONa
1.43. a) Sól sodowa 3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu
Roztwór wodorotlenku sodu (400 mg, 10 mmola) w wodzie (5 ml) dodano do roztworu związku 1.42.a (3,73 g, 10 mmola) w metanolu (100 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 2 godziny, po czym dodano etanol (100 ml). Mieszaninę refluksowano przez 5 minut i, po schłodzeniu w łaźni z lodem, substancję stałą odsączono uzyskując bezbarwne kryształy (3,66 g, 96%); TLC [metanol]: Rf = 0,62; [a]20 = -50,0° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 180-185°C.
1.43) Sól sodowa 3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozydu p-aminofenylu
Powyższy związek (3,05 g, 8 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ekstrakcji przez gotowanie z etanolem (50 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (2,03 g, 72%); TLC [metanol]: Rf = 0,70; [a]20 = -22,4° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 180-182°C.
Przykład 1.44. 3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
1.44. a) 3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
25% wodny roztwór amoniaku (10 ml) dodano do roztworu związku 1.42.a (373 mg, 1 mmol) w metanolu (30 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 2 godziny i dodano etanol (30 ml). Mieszaninę refluksowano przez 5 minut i przesączono, uzyskując po schłodzeniu w łaźni z lodem bezbarwne kryształy (306 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,14; [a]20 = -41,7° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 229°C (rozkład).
183 574
1.44) 3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (287 mg, 0,8 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ponownym wytrąceniu z mieszaniny metanol/eter dietylowy otrzymano bezbarwne kryształy (207 mg, 79%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]; Rf = 0,10; temperatura topnienia = 205°C (rozkład).
Przykład 1.45. 3-O-(N-metylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
HO
O.
OH
NH2
1.45. a) 3-O-(N-metylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
30% wodny roztwór metyloaminy (10 ml) dodano do roztworu związku 1.42.a (373 mg, 1 mmol) w metanolu (30 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po zatęzeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość wysuszono pod olej ową pompą próżniową przez 2 godziny, po czym rekrystalizowano z etanolu. Otrzymano bezbarwne kryształy (372, mg, 100%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,33; [a]20 = -36,7° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 205°C.
1.45) 3-O-(N-metylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.45.a (298 mg, 0,8 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ponownym wytrąceniu z mieszaniny metanol/eter dietylowy otrzymano bezbarwne kryształy (180 mg, 66%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 239°C.
Przykład 1.46. 3-O-(N-propylo-karbamoilometylo)-p-D-galaktopiranozyd p-amino-
O.
H
1.46. a) 3-O-(N-propylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.42.a (373 mg, 1 mmol) poddawano reakcji z n-propyloaminą (823 μΐ, 10 mmoli) w sposób opisany w przykładzie 1.45.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość ponownie wytrącono z etanolu/n-heksanu. Otrzymano bezbarwne kryształy (340 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,49; [a]20 = -32,4° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 155°C.
183 574
1.46) 3-O-(N-propylo-karbamoilometylo)-3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.46.a (320 mg, 0,8 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ponownym wytrąceniu z mieszaniny metanol/eter dietylowy otrzymano bezbarwne kryształy (188 mg, 63%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,31; temperatura topnienia = 154°C.
Przykład 1.47. 3-O-(N-butylo-karbamoilometylo)-3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
H
1.47. a) 3-O-(N-butylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.42.a (373 mg, 1 mmol) poddano reakcji z n-butyloaminą (900 μΐ, 10 mmoli) w sposób opisany w przykładzie 1.45.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość ponownie wytrącono z etanolu/n-heksanu. Otrzymano bezbarwne kryształy (413 mg, 100%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,51; [a]20 = -26,8° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 92°C.
1.47b ) 3-O-(N-butylo-karbamoilometylo)-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.47.a (332 mg, 0,8 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ponownym wytrąceniu z mieszaniny etanol/n-heksan otrzymano bezbarwne kryształy (105 mg, 34%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,32; temperatura topnienia = 135°C.
Przykład 1.48. 3-O-metoksykarbonylometylo-a-D-mannopiranozydp-aminofenylu
1.48. a) 3-O-metoksykarbonylometylo-6-O-trifenylornetylo-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.40.a (13,6 g, 25 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.42.a. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1], oprócz pewnej ilości produktów ubocznych otrzymano bezbarwne kryształy (2,79 g, 18%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,50; temperatura topnienia = 95-97°C.
183 574
1.48) 3-O-metoksykarbonylometylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.48.a (1,23 g, 2 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.40 i produkt poddano obróbce. Otrzymano brązowawą bezpostaciową substancję stałą (250 mg, 36%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,45.
Przykład 1.49. 3-O-karboksymetylo-a-D-mannopiranozydp-aminofenylu
OH
°\
Na
1.49. a) 3-O-benzoksykarbonylometylo-6-O-trifenylometylo-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.40.a (13,6 g, 25 mmola)poddano reakcji z bromooctanem benzylu (14,4 ml, 90 mmoli) w sposób opisany w przykładzie 1.42.a. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 20:1—>10:1], oprócz pewnej ilości produktów ubocznych otrzymano żółtawą piankę (5,0 g, 29%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,66; [a]20 = +74,8° (c = 1,O/CH2C12).
1.49) 3-O-karboksymetylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (2,08 g, 3 mmola) uwodorniano przez 36 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość ponownie wytrącono z etanolu/n-heksanu. Po przemywaniu octanem etylu i ponownym wytrąceniu z mieszaniny etanol/eter dietylowy otrzymano bezbarwne kryształy (495 mg, 50%); TLC [metanol]: Rf - 0,53; temperatura topnienia = 205-207°C.
Przykład 1.50. 3-O-karbamoilometylo-<x-D-mannopiranozydp-aminofenylu
OH
CL
1.50. a) 3-O-karbamoilometylo-6-O-trifenylometylo-a-D-mannopiranozyd p-nitrofenylu Związek 1.49.a (1,04 g, 1,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie
1,44.a. Po wysuszeniu próżniowym pod pompą olejową pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:3]. Otrzymano bezbarwne kryształy (561 mg, 62%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,67; [a]20 = +91,3° (c = 1,O/CH2C12); temperatura topnienia = 125-127°C.
183 574
1.50) 3-O-karbamoilometylo-a-D-mannopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (541 g, 0,9 mmola) uwodorniano przez 48 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość przemyto dokładnie metanolem uzyskując bezbarwne kryształy (134 mg, 45%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf= 0,21; temperatura topnienia = 126-128°C.
Przykład 1.51. 3-dezoksy-p-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
1.51. a) 2,6-di-O-benzylo-4-O-acetylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Ortooctan trietylu (3 ml, 16,3 mmola) i kwas toluenosulfonowy (20 mg) dodano do roztworu związku 1.31 .b (2,7 g, 5,6 mmola) w chlorku metylenu (20 ml). Po 30 minutach w temperaturze pokojowej mieszaninę rozcieńczono chlorkiem metylenu (200 ml) i przemyto nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu (50 ml), fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu i, po przesączeniu, przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskaną bezbarwną piankę rozpuszczono w 80% kwasie octowym (15 ml). Po kolejnych 30 minutach w temperaturze pokojowej mieszaninę wylano do nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu (200 ml) i wyekstrahowano chloroformem (3 x 75 ml), połączone fazy organiczne przemyto wodą (100 ml) i wysuszono nad siarczanem magnezu, po czym po przesączeniu przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. W wyniku powtórnego wytrącenia z mieszaniny etanol/eter naftowy otrzymano bezbarwne kryształy (2,43 g, 83%); TLC [octan etylu/eter naftowy 2:1]: Rf = 0,64; [a]20 = -62,1° (c = UO/CItyCIJ; temperatura topnienia = 83°C.
1.51 .b) 2,6-di-O-benzylo-3-O-trifluorometanosulfonylo-4-O-acetylo-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Roztwór bezwodnika trifluorometanosulfonowego (2 ml, 11,8 mmola) w chlorku metylenu (30 ml) wkroplono do roztworu związku 1.5La (2,3 g, 4,4 mmola) w mieszaninie chlorku metylenu (30 ml) i pirydyny (3 ml) w -20°C w atmosferze argonu. Po 1 godzinie w -20°C mieszaninę wylano do nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu (200 ml), fazę organiczną oddzielono i wysuszono nad siarczanem magnezu oraz, po przesączeniu, przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [toluen->toluen/octan etylu 20:1] otrzymano bezbarwne kryształy (2,39 g, 83%); TLC: [toluen/octan etylu 5:1]: Rf = 0,55; [a]20 = -61,4° (c = 1,O/CH2C12); temperatura topnienia = 105°C.
1.51 .c) 2,6-di-O-benzylo-3-dezoksy-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (1,31 g, 2 mmola) rozpuszczono w toluenie (25 ml) i dodano tetraborohydrat tetrabutyloamoniowy (1,54 g, 6 mmola). Po 2 godzinach w 80°C mieszaninę rozcieńczono chlorkiem metylenu (200 ml) i przemyto raz wodą (50 ml), fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu i, po przesączeniu, prźesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [toluen/octan etylu 7:1] otrzymano bezbarwne kryształy (596 mg, 64%); TLC: [toluen/octan etylu 5:1]: Rf = 0,10; [a]20 = -81,3° (c = 1,O/CH2C12); temperatura topnienia - 114°C.
183 574
1.51) 3-dezoksy-(3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.51.C (465 mg, 1 mmol) uwodorniano przez 6 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość wytrącono ponownie z mieszaniny etanol/eter naftowy uzyskując bezbarwne kryształy (206 mg, 81%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,22.
Przykład 1.52. 3,4-didezoksy-p-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
1.52. a) 2,6-di-O-benzylo-3,4-di-O-trifiuorometanosulfonylo-[3-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.3l.b. (2,12 g, 4,4 mmola) poddano reakcji z bezwodnikiem trifluorometanosulfonowym (4 ml, 23,6 mmola) jak w przykładzie 1.5l.b. Po chromatografii rzutowej [toluen->toluen/octan etylu 50:1] otrzymano żółtawy olej (2,75 g, 84%); TLC [toluen/octan etylu 5:1]; Rf = 0,67; [a]20 = -22,5° (c = 1,O/CH2C12).
1.52. b) 2,6-di-O-benzylo-3,4-didezoksy-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.52.a. (1,49 g, 2 mmola) poddano reakcji z tetraborohydratem tetrabutyloamoniowym (2,31 g, 9 mmoli) jak w przykładzie 1.5l.c. Po chromatografii rzutowej [toluen->toluen/octan etylu 50:1] otrzymano bezbarwne kryształy (629 mg, 70%); TLC [toluen/octan etylu 5:1]; Rf = 0,53; [a]20 = -79,1° (c = 1,O/CH2C12); temperatura topnienia = 89°C.
1.52) 3,4-didezoksy-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.52.b (450 mg, 1 mmol) uwodorniano przez 5 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość ponownie wytrącono z mieszaniny etanol/eter naftowy uzyskując bezbarwne kryształy (183 mg, 76%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,47; [a]20 = -115,1° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 187°C.
Przykład 1.53. 6-O-acetylo-|3-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
183 574
1.53. a) ó-O-acetylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu
Świeżo przygotowany roztwór pirydyny (2 ml, 25 mmola) chlorek acetylu (1,85 ml, 26 mmoli) w acetonitrylu (20 ml) wkroplono do roztworu β-D-galaktopiranozydu p-nitrofenylu (7,53 g, 25 mmola) w absolutnym acetonitrylu (80 ml) w 0°C. Mieszaninę mieszano w 0°C przez 30 minut, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 50:l->20:1] otrzymano bezbarwne kryształy (4,02 g, 47%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,50.
1.53) 6-O-acetylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.53.a (1,72 g, 5 mmola) uwodorniano przez 2 godziny w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość ponownie wytrącono z mieszaniny metanol/eter dietylowy uzyskując bezbarwne kryształy (1,34 g, 86%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,34; [a]20 = -41,0° (c - 0,56/CH3OH); temperatura topnienia = 180°C (rozkład).
Przykład 1.54. 3,4-di-O-metoksykarbonylometylo-^-D-galaktopiranozydp-aminofenylu
OH
O. -CH
CH O O 3
1.54. a) Acylowanie związku 1.24.a
Związek 1.24.a (136 g, 3 mmola) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (25 ml) i dodano bromooctan metylu (1 ml, 10,6 mmola) oraz, porcjami, 80% zawiesinę wodorku sodu w oleju mineralnym (300 mg, 10mmola). Po 3,5 godziny w temperaturze pokojowej ponownie dodano bromooctan metylu (250 μΐ, 2,65 mmola) i wodorek sodu w oleju mineralnym (75 mg, 2,5 mmola). Po kolejnych 2 godzinach reakcję zakończono wkraplając metanol (5 ml) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu (250 ml) i roztwór mieszano energicznie z wodą (100 ml). Fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (10 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 10:1—>7:1—>5:1—>3:1]. Otrzymano 3 frakcje produktu:
Frakcja 1: 2,3,4-tri-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwna pianka (401 mg, 21%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,47; [a]20 = -51,9° (c = 0,26/CH3OH);
Frakcja 2: nie zidentyfikowano; bezbarwna pianka (88 mg); TLC [eter naftowy/octan etylu 1.1]: Rf = 0,39; [cc]20 = -61,S° (c = 0,26/CH3OH);
Frakcja 3: 3,4-di-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwna pianka (275 mg, 16%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,30; [a]20 = -38,6° (c = 0,28/CH3OH).
1.54) 3,4-di-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
Frakcję 3 z przykładu 1.54.a (206 mg, 0,3 mmola) uwodorniano przez 16 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość wyekstrahowano przez gotowanie z eterem dietylowym (20 ml) uzyskując szare kryształy (45,6 mg, 37%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,22; temperatura topnienia = 155°C (rozkład).
183 574
Przykład 1.55. 2,3,4-tri-O-metoksykarbonylometyło-p-D-galaktopiranozyd p-aminofenylu
OH
/O H Cx
H C 3 O O CH 3 3
Frakcję 1 z przykładu 1.54.a (380 mg, 0,5 mmola) uwodorniano przez 16 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.40. Po zatężeniu przesączu pozostałość wyekstrahowano przez gotowanie z eterem dietylowym (20 ml) uzyskując żółto-brązowy olej (46,8 mg, 19%); TLC [eter naftowy/octan etylu 1:1]: Rf = 0,29; temperatura topnienia = 106°C (rozkład).
Przykład 1.56. 4-O-(^D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
OH
HO
4-O-P-D-galaktopiranozylo)-P-D-galaktopiranozyd p-nitrofenylu (4,63 g, 10 mmola) uwodorniano w sposób opisany w przykładzie 1.23. Otrzymano bezbarwne kryształy (3,04 g, 70%); TLC: [metanol]: Rf = 0,55; temperatura topnienia = 235-237°C (rozkład).
Przykład 1.57. Sól sodowa 4-O-(3'-siarczano-p-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozydu p-aminofenylu
OH
183 574
1.57.a) 4-O-(3',4'-izopropylideno-P-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Dimetoksypropan (400 ml) i katalityczną ilość kwasu (+)-kamforo-10-sulfonowego (400 mg, 1,7 mmola) dodano do 4-O-(P-D-galaktopiranozylo)-p-D-galaktopiranozyd (23,2 g, 50 mmoli). Po 3 dniach w temperaturze pokojowej reakcję zakończono dodając trietyloaminę (240 μΐ, 1,7 mmola), mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 2 godziny. Uzyskane kryształy rozpuszczono w metanolu/wodzie 10:1 (500 ml) i mieszaninę refluksowano przez 6 godzin. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 25:1—>10:1, w każdym przypadku z 0,5% trietyloaminy], otrzymano bezbarwne kryształy (15,2 g, 60%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]; Rf = 0,49; temperatura topnienia = 253-255°C (rozkład).
1.57.b) 2,3,6-tri-O-benzoilo-4-O-(2',6'-di-O-benzoilo-3',4'-O-izopropylideno-P-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Chlorek benzoilu (50 ml, 430 mmola) powoli wkroplono do roztworu związku ł.57.a (15,1 g 30 mmola) w pirydynie (300 ml) w 0°C w ciągu 30 minut. Mieszaninę mieszano następnie w temperaturze pokojowej przez kolejne 2 godziny, po czym mieszaninę wylano do wody z lodem (2000 ml), z ciągłym mieszaniem. Po 15 minutach kryształy, które wytrąciły się, odsączono i rozpuszczono w chlorku metylenu (1500 ml). Roztwór przemyto wodą (2 x 500 ml) i 1 N roztworem wodorowęglanu sodu (2 x 500 ml), fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (50 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano przez rekrystalizację z metanolu. Otrzymano bezbarwne kryształy (26,7 g, 87%); TLC [chlorek metylenu/metanol 50:1]; Rf = 0,49; [a]20 = +23,6° (c = 1,O8/CH2C12); temperatura topnienia = 272-274°C.
1.57.c) 2,3,6-tri-O-benzoilo-4-O-(2',6'-di-O-benzoilo-p-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
99% kwas trifluorooctowy (20 ml) dodano do roztworu związku 1.57.b (20,5 g, 20 mmola) w chlorku metylenu (400 ml) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Roztwór przemyto następnie 1 N roztworem wodorowęglanu sodu (2 x 200 ml), fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (10 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano przez ponowne wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/eter dietylowy. Otrzymano bezbarwne kryształy (18,0 g, 91%); TLC [chlorek metylenu/metanol 20:1]; Rf = 0,18; temperatura topnienia = 234°C.
1.57.d) 2,3,6-tri-O-benzoilo-4-O-(2',6'-di-O-benzoilo-4'-O-acetylo-p-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.57.C (5,5 g, 5,6 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1.5La. Po chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 3:1—>1:1] otrzymano bezbarwne kryształy (4,03 g, 70%); TLC [chlorek metylenu/metanol 20:1]; Rf = 0,67; temperatura topnienia = 118°C.
1.57.e) Sól sodowa 2,3,6-tri-O-benzoilo-4-O-(2',6'-di-O-benzoilo-3'-siarczano-4'-O-acetylo-p-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozydu p-nitrofenylu
Kompleks trójtlenek siarki-pirydyna (4,5 g, 28 mmoli) dodano do roztworu związku 1,57.d (3,59 g, 3,5 mmola) w pirydynie (200 ml) i mieszaninę mieszano najpierw w 60°C przez 2 godziny, a następnie w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Reakcję zakończono wkraplając metanol (50 ml) i mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1] Otrzymano stały produkt, który rozpuszczono w mieszaninie chlorek metylenu/metanol 1:1 (200 ml), po czym dodano Amberlite IR120 (forma Na+, 10 g). Mieszaninę tę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, po czym przesączono i przesącza zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano bezbarwne kryształy (3,64 g, 92%); TLC [chlorek metylenu/metanol 2:1]; Rf = 0,87; temperatura topnienia = 168°C.
183 574
1.57.f) Sól sodowa 4-O-(3'-siarczano-P-D-galaktopiranozylo)-|3-D-glukopiranozydu p-nitrofenylu
Związek 1.57.e (3,4 g, 3 mmola) rozpuszczono w absolutnym metanolu (150 ml), dodano metanolan sodu (200 mg) i mieszaninę mieszano w 60°C przez 7 godzin. Po schłodzeniu do temperatury pokojowej mieszaninę zobojętniono jonitem Lewatit SC108 (forma H+), a następnie przesączono. pH przesączu zwiększono do pH 7-8 wkraplając 1 N roztwór wodorotlenku sodu, mieszaninę odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem i ponownie wytrącono pozostałość z mieszaniny metanol/eter diety Iowy otrzymując nieznacznie brązowawe kryształy (1,30 g, 77%); TLC [chlorek metylenu/metanol 2:1]; Rf = 0,55 temperatura topnienia = 230°C (rozkład).
1.57) Sól sodowa 4-O-(3'-siarczano-|3-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
Powyższy związek (1,13 g, 2 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po ekstrakcji pozostałości przez gotowanie z eterem dietylowym (50 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (983 mg, 92%); TLC [chlorek metylenu/metanol 2:1]; Rf = 0,22; temperatura topnienia ~ 176°C (rozkład).
Przykład 1.58. 4-O-(3'-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
1.58.a) Selektywne metylowanie 4-O-(|3-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozydu p-nitrofenylu
4-O-(P-D-galaktopiranozylo)-(3-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu (2,3 g, 5 mmola) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.25.a. W wyniku chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1—>10:1 —>5:1 ] otrzymano 2 produkty:
Frakcja 1: 2-O-metylo-4-O-(3'-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwne kryształy (264 mg, 11%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]; Rf = 0,46; [a]20 = -73,9° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 228°C (rozkład).
Frakcja 2: 4-O-(3'-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu; bezbarwne kryształy (1,0 g, 42%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]; Rf = 0,29; [a]20 = -65,3° (c = 1,1/CH3OH); temperatura topnienia = 220°C.
1.58) 4-O-(3'-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
Frakcję 2 z przykładu 1.58.a (955 mg, 2 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po przemyciu eterem dietylowym (50 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (894 mg, 100%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]; Rf = 0,08 temperatura topnienia = 129°C (rozkład).
183 574
Przykład 1.59. 2-O-metylo-4-O-(3'-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-3-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
OH
ąc0
Frakcję 1 z przykładu 1.58.a (246 mg, 0,5 mmola) zredukowano w sposób opisany w przykładzie 1.24. Po przemyciu eterem dietylowym (20 ml) otrzymano bezbarwne kryształy (186 mg, 81%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]; Rf = 0,13; [a]20 = -3,6° (c = 1,0/CH3OH); temperatura topnienia = 105°C.
Przykład 1.60. 4-O-(3',4'-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
OH
,0
H C
1.60.a) 2,3,6-tri-O-benzylo-4-O-(2',6'-di-O-benzylo-3',4'-izopropylideno-[3-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.57.a (5,0 g, 10 mmola) poddano reakcji z bromkiem benzylu (30 ml, 250 mmoli) przez 16 godzin w sposób opisany w przykładzie 1.26.C. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość rozpuszczono w octanie etylu (300 ml) i roztwór przemyto wodą (200 ml). Fazę organiczną wysuszono nad siarczanem magnezu (10 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/eter naftowy 5:1—>chl orek metylenu]. Otrzymano brązowawy olej (5,3 g, 56%); TLC [chlorek metylenu/metanol 50:1]; Rf = 0,70; [a]20 = -23,2° (c = 1,O8/CH2C12).
1.60.b) 2,3,6-tri-O-benzylo-4-O-(2',6'-di-O-benzylo-P-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Powyższy związek (4,77 g, 5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 1,57.c. Po zatęzeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i ponownym wytrąceniu z mieszaniny eter dietylowy/eter naftowy otrzymano bezbarwne kryształy (3,94 g, 86%); TLC [chlorek metylenu/metanol 50:1]; Rf = 0,36; temperatura topnienia = 116°C.
183 574
1.60.c) 2,3,6-tri-O-benzylo-4-O-(2',6'-di-O-benzylo-3',4'-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-nitrofenylu
Związek 1.60.b (1,8 g, 2 mmole) metylowano w sposób opisany w przykładzie 1.24.C. W wyniku powtórnego wytrącenia z chlorku metylenu/eteru naftowego otrzymano bezbarwne kryształy (1,55 g, 82%); TLC [chlorek metylenu/metanol 50:1]; Rf = 0,74; temperatura topnienia = 161-162°C.
1.60.) 4-O-(3',4'-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozyd p-aminofenylu
Związek 1.60.C (1,41 g, 1,5 mmola) rozpuszczono w metanolu (50 ml) i po dodaniu wodorotlenku palladu na węglu drzewnym (wilgotny, 20% Pd, 500 mg), uwodornianie przeprowadzano w atmosferze wodoru pod nieznacznym ciśnieniem przez 6 dni. Zawiesinę przesączono przez celit i materiał na filtrze przemyto dokładnie metanolem (100 ml). Po zatężeniu przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem i przemyciu pozostałości chlorkiem metylenu otrzymano brązowawe kryształy (425 mg, 61%); temperatura topnienia = 124°C (rozkład).
Przykład 2.1.N-alanylo-batracylina
2.1 .a) N-[N-(tert-butoksykarbonylo)-alanylo]-batracylina
N-(tert-butoksykarbonylo)-alaninę (3,3 g, 17,5 mmola) i 2-izobutoksy-l-izobutoksykarbonylo-l,2-dihydrochinolinę (6,8 ml, 23 mmole) rozpuszczono w 100 ml chlorku metylenu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 20 minut roztwór batracyliny (4,1 g, 16,5 mmola) w absolutnym dimetyloformamidzie (350 ml) dodano i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez kolejne 48 godzin. Zatężono ją następnie do 50 ml pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość zalano 300 ml octanu etylu i natychmiast ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 10 minut. Mieszaninę pozostawiono następnie do ostygnięcia do temperatury pokojowej i przesączono, a materiał na filtrze wyekstrahowano przez ponowne gotowanie z octanem etylu (200 ml). Po schłodzeniu do 0°C z mieszaniem i przesączeniu otrzymano żółte kryształy (6,18 g, 84%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,57; temperatura topnienia = 246-247°C (rozkład).
2.1) N-alanylo-batracylina
Roztwór związku 2. La (10,5 g, 25 mmoli) w bezwodnym kwasie trifluorooctowym (150 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut. Następnie mieszaninę zatężono do 30 ml pod zmniejszonym ciśnieniem i wylano do nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu (1000 ml) z energicznym mieszaniem. Mieszanie kontynuowano przez 10 minut, mieszaninę przesączono, a pozostałość przemyto wodą niewielką ilością izopropanolu i eterem dietylowym. Produkt otrzymano w postaci żółtych kryształów (7,15 g, 89%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,06; temperatura topnienia = 261-262°C (rozkład).
183 574
Przykład 2.2. Di-trifluorooctan N-[lizylo-alanylo]-batracyliny
2.2. a) N-[N“,N -di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-alanylo]-batracylina
N,N-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizynę (2,1 g, 6 mmoli) i 2-izobutoksy-l-izobutoksykarbonylo-l,2-dihydrochinolinę (2,4 ml, 8 mmoli) rozpuszczono w 20 ml chlorku metylenu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 20 minut roztwór związku 2.1 (1,6 g, 5 mmoli) w dimetyloformamidzie (40 ml) dodano i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez kolejne 16 godzin. Zatężono ją następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 2:l->l:l->octan etylu]. Otrzymano żółte kryształy (2,89 g, 89%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,52; temperatura topnienia = 203-204°C.
2.2) Di-trifluorooctan N-[łizylo-alanylo]-batracyliny
Bezwodny kwas trifluorooctowy (10 ml) dodano do zawiesiny powyższego związku (2,6 g, 4 mmole) w chlorku metylenu (25 ml) i uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość krystalizowano dodając eter diety Iowy (100 ml). Wytrącony osad odsączono i przemyto dokładnie eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (2,68 g, 99%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,05; temperatura topnienia = 144-146°C (rozkład).
Przykład 2.3.N-(D-alanylo)-batracylina
2.3.a)N-[N-benzyloksykarbonylo-D-alanylo]-batracylina
N-benzyloksykarbonylo-D-alaninę (3,9 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.1.a i produkt poddano obróbce. Otrzymane żółte kryształy (6,4 g, 80%) odsączono, połączone przesącze zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 3:2—>1:1], Otrzymano kolejne 135 g (17%); TLC [octan etylu]: Pf = 0,45; temperatura topnienia = 265°C; [a]20 = +75,1° (c = 1,O/CH2C12) + 0,5% CH3OH).
183 574
2.3) N-(D-alanylo)-batracylina
Związek 2.3.a (11,4 g, 25 mmoli) rozpuszczono w 33% roztworze bromowodorku w lodowatym kwasie octowym (100 ml). Po 30 minutach w temperaturze pokojowej mieszaninę zatęzono do 30 ml pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość wylano do nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu (1000 ml) z energicznym mieszaniem. Mieszanie kontynuowano przez 10 minut, mieszaninę przesączono i pozostałość przemyto wodą niewielką ilością izopropanolu i eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (7,87 g, 98%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,06; temperatura topnienia = 267°C (rozkład).
Przykład 2.4. N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracylina
2.4. a) N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-Ns-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alany lo] -batracylina
Na-(tert-butoksykarbonylo)-Ns-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-Iizynę (5,3 g, 11,3 mmola) i 2-izobutoksy-l-izobutoksykarbonylo-l,2-dihydro-chinolinę (4 ml, 14 mmoli) rozpuszczono w 40 ml chlorku metylenu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 20 minut roztwór związku 2.3. (3,2 g, 10 mmoli) w dimetyloformamidzie (80 ml) dodano i mieszaninę reakcyjnąmieszano w temperaturze pokojowej przez kolejne 16 godzin. Zatęzono ją następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość zawieszono w chlorku metylenu (100 ml). Uzyskaną zawiesinę zadano eterem dietylowym (300 ml). Po przesączeniu i przemyciu materiału na filtrze eterem dietylowym otrzymano żółte kryształy (5,65 g, 65%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,45; temperatura topnienia = 186°C.
2.4) N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-aIanylo]-batracylina
Powyższy związek (5,6 g, 7,3 mmola) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (50 ml). Po dodaniu piperydyny (50 ml), mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,1—>15:5:0,1]. Otrzymano żółte kryształy (2,5 g, 62%); temperatura topnienia = 217°C (rozkład).
Przykład 2.5. Trifluorooctan N-[Na-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny
183 574
2.5. a) N-[Na-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-Ne-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracylina
N“-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-N6-(tert-butoksykarbonylo)-lizynę (5,3 g, 113 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.4.a i produkt oczyszczano. Otrzymano żółte kryształy (7,0 g, 80%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,51; temperatura topnienia = 223°C.
2.5) TrifluorooctanN-[Na-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny Związek 2.5.a (6,17 g, 8 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2. Po zatęzeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość ponownie wytrącono z mieszaniny chlorek metylenu/eter dietylowy uzyskując żółte kryształy (6,08 g, 97%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,05; temperatura topnienia = 224°Ć (rozkład).
Przykład 2.6. Trifluorooctan N-[N6-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny
Związek 2.4.a (6,17 g, 8 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość ponownie wytrącono z mieszaniny chlorek metylenu/eter dietylowy uzyskując żółte kryształy (5,97 g, 95%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,04; temperatura topnienia = 188°Ć (rozkład).
Przykład 2.7. Di-trifluorooctan N-[lizylo-D-asparagilo]-batracyliny
2.7. a) Ester β-tert-butylowy N-(N-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-D-asparagilo]-batracyliny
Ester β-tert-butylowy N-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-D-asparagilu (7,2 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.l.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu (1000 ml) i mieszaninę przemyto IN kwasem solnym (2 x 200 ml) i IN roztworem wodorowęglanu sodu (1 x 200 ml). Po wysuszeniu nad siarczanem magnezu (20 g), przesączeniu, zatężeniu do 100 ml i dodaniu eteru naftowego otrzymano związek 2.7.a w postaci żółtych kryształów (9,7 g, 86%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,71; temperatura topnienia = 195°C.
183 574
2.7. b) Ester β-tert-butylowy N-[D-asparagilo]-batracyliny
Powyższy związek (6,4 g, 10 mmoli) rozpuszczono w chlorku metylenu (100 ml). Po dodaniu morfoliny (50 ml), mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 5 godzin, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 4:l->octan etylu—>octan etylu/etanol 10:1]. Otrzymano żółte kryształy (3,44 g, 82%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,21; temperatura topnienia = 209°C (rozkład).
2.7. c) Ester β-tert-butylowy N-[Na,Ne-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D]-asparagilo]-batracyliny
Związek 2.7.b (2,1 g, 5 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2. Otrzymano żółte kryształy (1,71 g, 46%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,61; temperatura topnienia = 142°C.
2.7) Di-trifluorooctan N-[lizylo-D-asparagilo]-batracyliny
Związek 2.7.c (1,65 g, 2,2 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (1,5 g, 95%); TLC [metanol/kwas octowy 10:1]: Rf= 0,29; temperatura topnienia = 154-155°C (rozkład).
Przykład 2.8. Dibromo wodorek N-[lizylo-D-glutamylo]-batracyliny
2.8. a) Ester β-benzylowy N-[N-(tert-butoksykarbonylo)-D-glutamylo]-batracyliny
Ester β-benzylowy N-(tert-butoksykarbonylo)-D-glutamylu (5,9 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2. La. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 1:1] uzyskując żółte kryształy (9,45 g, 95%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,61; [a]20 = +53,1° (c = 1,O/CH2C12); temperatura topnienia = 159°C.
2.8. b) Ester β-benzylowy N-[D-glutamylo]-batracyliny
Związek 2.8.a (9,1 g, 10 mmoli) rozpuszczono w kwasie mrówkowym (100 ml) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 6 godzin. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość rozpuszczono w metanolu (100 ml) i pH roztworu zwiększono do pH 8 ostrożnie dodając 25% wodny roztwór amoniaku. Po ponownym zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem, a następnie oczyszczaniu metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 10:1] otrzymano żółty olej (4,2 g, 56%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,06.
2.8. c) Ester β-benzylowy N-[N“, NE-(di-tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-glutamylo]-batracyliny
Powyższy związek (3,75 g, 8 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2.a i produkt oczyszczono. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (2,26 g, 35%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,40; [a]20 = +32,1° (c = 1,2/CH2C12).
2.8) Dibromowodorek N-[lizylo-D-glutamylo]-batracyliny
Związek 2.8.c (2,0 g, 2,5 mmola) rozpuszczono w roztworze bromowodoru w lodowatym kwasie octowym (50 ml). Po 1 godzinie w temperaturze pokojowej mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość przemyto dokładnie eterem dietylowym. Produkt otrzymano w postaci żółto-czerwonych kryształów (1,63 g, 98%); temperatura topnienia = 207-209°C (rozkład).
183 574
Przykład 2.9. Di-trifluorooctanN-[lizylo-glicylo]-batracyliny
2.9. a) N- [N-(tert-butoksykarbony lo)-glicylo] -batracylina
N-(tert-butoksykarbonylo)-glicynę (3,07 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.1.a. Po 3 dniach w temperaturze pokojowej mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszczono w etanolu (200 ml). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej we wrzeniu przez 30 minut i przesączeniu otrzymano po schłodzeniu docelowy związek jako żółte kryształy (4,73 g, 66%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,44; temperatura topnienia = 279°C (rozkład).
2.9. b) Chlorowodorek N-glicylo-batracyliny
Powyższy związek (4,1 g, 10 mmoli) rozpuszczono w chlorku metylenu (1200 ml), z ogrzewaniem w łaźni ultradźwiękowej. Po dodaniu chlorowodoru w eterze dietylowym (100 ml) mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, po czym etanol (200 ml) dodano do pozostałości. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej we wrzeniu przez 10 minut i przesączeniu, po schłodzeniu, produkt otrzymano jako żółte kryształy (3,21 g, 94%); temperatura topnienia = 297-299°C (rozkład).
2.9.c ) N-[N“, N8-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-glicylo]-batracylina
N,N-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizynę (2,1 g, 6 mmoli) i 2-izobutoksy-l-izobutoksykarbonylo-l,2-dihydro-chinolinę (2,4 ml, 8 mmoli) rozpuszczono w 20 ml chlorku metylenu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 20 minut dodano roztwór związku 2.9.b (1,71 g, 5 mmola), etylodiizopropyloaminę (0,86 ml, 5 mmoli) i dimetyloformamid (40 ml) dodano i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez kolejne 16 godzin. Zatężono ją następnie pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy l:l->octan etylu]. Otrzymano żółte kryształy (1,69 g, 53%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,31; temperatura topnienia = 211°C (rozkład).
2.9) Di-trifluorooctan N-[lizylo-glicylo]-batracyliny
Związek 2.9.c (1,4 g, 2,2 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (1,33 g, 91%); temperatura topnienia = 153°C (rozkład).
Przykład 2.10. Di-trifluorooctan N-[lizylo-serylo]-batracyliny
OH
I
183 574
2.10. a) N-[N-(tert-butoksykarbonylo)-serylo]-batracylina
N-(tert-butoksykarbonylo)-serynę (3,6 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.l.a. Po 48 godzinach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i 2 litry chlorku metylenu dodano do pozostałości. Uzyskany roztwór przemyto wodą (1 x 500 ml) 0,5 N kwasem solnym (2 x 250 ml) i nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu (1 x 250 ml). Po wysuszeniu nad siarczanem magnezu (50 g), oddestylowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 1:1] jako pozostałość otrzymano związek 2.10.a (4,6 g, 64%) w postaci żółtych kryształów; TLC [octan etylu/kwas octowy 100:1]: Rf = 0,38; temperatura topnienia = 219°C (rozkład); [a]20 = -61,0° (c = O,5/CH2C12) + 0,5% CH3OH).
2.10. b) Chlorowodorek N-serylo-batracyliny
Stężony kwas solny (10 ml) dodano do zawiesiny powyższego związku (4,6 g, 10,4 mmola) w dioksanie (70 ml) z mieszaniem i mieszaninę mieszano następnie energicznie w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Z kolei zatężono ją pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 2 godziny. Po dodaniu etanolu (100 ml) mieszaninę refluksowano przez 15 minut. Po schłodzeniu i przesączeniu otrzymano pomarańczowe kryształy (1,97 g, 96%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,05; [a]20 = +51,8° (c = l,0/H2O); temperatura topnienia>270°Ć (rozkład).
2.10. c) N-[N“,N8-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-serylo]-batracylina
Związek 2.10.b (1,86 g, 5 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.9.c. Po chromatografii rzutowej [octan etylu/eter naftowy 2:l->octan etylu] otrzymano żółte kryształy (1,18 g, 36%); TLC [octan etylu/kwas octowy 100:1]: Rf = 0,24; temperatura topnienia = 188°C (rozkład); [a]20 = -13,1° (c = 0,5/0¾¾) + 0,5% CH3OH).
2.10 ) Di-trifluorooctan N-[lizylo-serylo]-batracyliny
Związek 2.10.C (1,0 g, 1,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (1,0 g, 96%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 188-189°C (rozkład).
Przykład 2.11. Dibromowodorek N-[lizylo-D-serylo]-batracyliny
2.11 .a) N-[N-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-O-(tert-butylo)-D-serylo]-batracylina
N-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-O-(tert-butyło)-D-serynę (6,7 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.l.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 1:1] otrzymano związek 2.11.a (5,64 g, 52%) w postaci żółtych kryształów; TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,87; temperatura topnienia = 225-226°C (rozkład).
2.11 .b) N-[O-(tert-butylo)-D-serylo]-batracylina
Powyższy związek (2,89 g, 4,7 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.7.b. W wyniku chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 3:2->octan etylu] otrzymano produkt jako żółte kryształy (1,15 g, 62%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,01 1; temperatura topnienia = 197°C.
183 574
2.11 .c) N-[Na,NE-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-O-(tert-butylo)-D-serylo]-batracylina
Powyższy związek (1,1 g, 2,8 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2.a. Otrzymano żółte kryształy (1,94 g, 96%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,59; temperatura topnienia = 208°C.
2.11 .d) Di-trifluorooctan N-[lizylo-O-(tert-butylo)-D-serylo]-batracyliny
Związek 2.11.C (1,08 g, 1,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (1,1 g, 98%); TLC [metanol/kwas octowy 10:1]: Rf = 0,30; temperatura topnienia = 128°C.
2.11) Dibromowodorek N-[lizylo-D-serylo]-batracyliny
Związek 2.11 ,d (1,05 g, 1,4 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.8 i produkt oczyszczono. Otrzymano czerwono-żółte kryształy (846 mg, 96%); temperatura topnienia = 247-248°C.
Przykład 2.12. DibromowodorekN-[lizylo-D-treonylo]-batracyliny
2.12 .a) N- [N-(fluoreny lo-9-metoksykarbonylo)-O-(tert-buty lo)-D-treonylo] -batracy lina
N-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-O-(tert-butylo)-D-treoninę (6,96 g, 17,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.La. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczaniu metodą chromatografii rzutowej [eter naftowy/octan etylu 1:1] otrzymano związek 2.12.a (7,45 g, 68%) jako żółte kryształy; TLC [octan etylu]: Rf = 0,63; temperatura topnienia = 225-226°C.
2.12.b) N-[O-(tert-butylo)-D-treonylo]-batracylina
Związek 2.12.a (3,8 g, 6 mmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.7.b. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem produkt otrzymano jako żółte kryształy (1,9 g, 78%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,21; temperatura topnienia = 110-111 °C.
2.12.c) N-[Na,N£-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-O-(tert-butylo)-D-treonylo]-batracylina
Związek 2.12.b (1,8 g, 4,5 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2.a. Otrzymano żółte kryształy (2,6 g, 79%); TLC [octan etylu]: Rf = 0,59; temperatura topnienia = 112°C.
2.12.d) Di-trifluorooctan N-[lizylo-O-(tert-butylo)-D-treonylo]-batracyliny
P.owyzszy związek (2,5 g, 3,4 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.2 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (2,5 g, 96%); TLC [metanol/kwas octowy 10:1]: Rf= 0,30; temperatura topnienia = 142°C (rozkład).
2.12) Dibromowodorek N-[lizylo-D-treonylo]-batracyliny
Związek 2.12.d (2,29 g, 3 mmola) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 2.8 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółto-czerwone kryształy (1,86 g, 97%); temperatura topnienia = 232°C (rozkład).
183 574
Przykład 2.13. Di-trifluorooctan N-[lizylo-D-alanylo]-batracyliny
CF3COOH HN
2.13.a)N-[Na,N8-bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracylina g (17,3 mmola) Na,Ne-bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizyny rozpuszczono w 75 ml dimetyloformamidu, po czym dodano 3 g (26 mmoli) N-hydroksysukcynimidu i 4,29 g (20,8 mmola) Ν,Ν’-dicykloheksylokarbodiimidu w 0°C. Po 3 godzinach powstały mocznik odsączono, 5 g (15,6 mmola) N-[D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.3) dodano do przesączu i mieszaninę mieszano w 20°C przez 16 godzin. Resztki mocznika odsączono i odrzucono. Przesącz zatężono, pozostałość wymieszano z metanolem i mieszaninę przesączono. Przesącz zatężono ponownie i pozostałość zadano ponownie metanolem. Mieszaninę ponownie przesączono i pozostałości na filtrach połączono. Rozpuszczono je w mieszaninie chlorek metylenu/metanol 10:1 i produkt wytrącono eterem. Otrzymano 8,22 g (81%) krystalicznego docelowego produktu.
2.13) Di-trifluorooctan N-[lizylo-D-alanylo]-batracyliny
Otrzymano z 8,2 g związku 2.13.a analogicznie jak w przykładzie 2.2. Wydajność: 7,58 g (89%).
Przykład 2.14. Di-trifluorooctan N-[N8-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny
2.14. a) N-[Nc‘-(tert-butoksykarbonylo)-N8-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracylina
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 2.4.a z N“-(tert-butoksykarbonylo)-N8 -(fluorofenylo-9-metoksykarbonylo)-lizyny i batracyliny. Wydajność: 78%.
2.14) Di-trifluorooctan N-[N8-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 2.5 ze związku 2.14.a. Wydajność: 90%.
183 574
Przykład 2.15. Di-trifluorooctan N-[lizylo-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny
2.15 .a) N-[Na,NE-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-Ne-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo] -batracylina
3240 mg (4,54 mmola) związku 2.14 rozpuszczono w 50 ml dimetyloformamidu i dodano 2550 mg (5,45 mmola) estru p-nitrofenylowego Nct,NE-di-(tert-butoksykarbonylo)-lizyny i 938 pl etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę mieszano w 20°C przez 16 godzin i zatężono, a pozostałość wstępnie wymieszano z eterem. Mieszaninę przesączono i pozostałość na filtrze mieszano ponownie z mieszaniną metanol/eter 1:1. W ten sposób otrzymano 3881 mg (92%) docelowego produktu po przesączeniu pod próżnią i wysuszeniu.
2.15) Di-trifluorooctan N-[lizylo-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny
W wyniku odblokowania związku 2,15.a bezwodnym kwasem trifluorooctowym/chlorkiem metylenu 1:1, analogicznie jak w przykładzie 2.2. Wydajność 95% [TLC chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:6:0,6; Rf = 0,08].
Przykład 2.16. Di-trifluorooctanN-[lizylo-Na-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-a, p-diaminopropionylo)-batracyliny
Koniugat peptydu otrzymano analogicznie jak w przykładach 2.14 i 2.15 w 4 etapach z batracyliny i kwasu Na-(tert-butoksykarbonylo)-Np-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-diaminopropionowego. [TLC chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2; Rf = 0,15],
183 574
Przykład 2.17. N-(lizylo)-batracylina
O
NH
Otrzymano w wyniku odszczepienia Fmoc analogicznie jak w przykładzie 2.4 od trifluorooctanu N-[N8-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny (przykład 2.14). Wydajność: 65%.
Przykład 2.18. TrifluorooctanN-[sery lo-D-alanylo]-batracyliny
2.18.a) N-[N-(tert-butoksykarbonylo)-serylo-D-alanylo]-batracylina
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 2.13.a z N-(tert-butoksykarbonylo)-seryny i N-[D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.3). Wydajność: 77%.
2.18) Trifluorooctan N-[sery lo-D-alanylo]-batracyliny
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 2.2 ze związku 2.18.a. Wydajność: 98%.
Przykład 2.19. Trifluorooctan N-[D-alanylo-D-alanylo]-batracyliny
Otrzymano w 2 stadiach, analogicznie jak w przykładzie 2.18.
183 574
Przykład 2.20.N-[glutamylo-D-aanylo]-batracylina
Otrzymano w 2 etapach analogicznie jak w przykładzie 2.18 wychodząc z estru δ-tert-butylowego N-tert-butoksykarbonylo-glutamylu i N-[D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.3). Po odszczepieniu Boc mieszaninę zatężono, pozostałość rozpuszczono w wodzie, doprowadzono do 7 0,1 N roztworem wodorotlenku sodowego i betainę odsączono podciśnieniowo.
Przykłady 3.1-3.34
Wzór ogólny
Przykład 3.1. N-{Ne-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracylina
3.1 .a) N- {N“-(tert-butoksykarbony lo)-Nε-(O-[β-L-fukozylo-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Tiofbsgen (34 pl, 0,44 mmola) dodano do 55 mg (0,22 mmola) β-L-fukozydu p-aminofenylu w 10 ml dioksanu/wody 1:1 z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatęzono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod wysoką próżnią przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian sprzęgnięto następnie w absolutnym dimetyloformamidzie z 109 mg (0,21 mmola) N-[N“-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.4) w obecności 115 μΐ etylodiizopropyloaminy. Po dwukrotnym wytrąceniu surowego produktu z mieszaniny metanol/izopropanol otrzymano 132 mg (75%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1 Rf = 0,15],
183 574
3.1) N-{NE-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
127 mg (0,15 mmola) związku z przykładu 3.1.a mieszano w 10 ml chlorku metylenu z 6 ml bezwodnego kwasu trifluorooctowego w 0°C przez 2 godziny. Mieszaninę zatężono, pozostałość destylowano następnie 3 razy z 5 ml chlorku metylenu i produkt chromatografowano z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Po suszeniu sublimacyjnym otrzymano 80 mg (71%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,4 Rf = 0,3],
Analogicznie jak w przykładzie 3.1 następujące glikokoniugaty otrzymano z częściowo chronionego koniugatu peptydu z przykładu 2.4 lub z izomerycznej N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-alanylo]-batracyliny, którą otrzymuje się w analogiczny sposób.
Przykład 3.2. N-{NE-[O-(2-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizy lo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.1.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej związku pośredniego z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 95:5 iw stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Wydajność: 55%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,4].
Przykład 3.3. N-{NE-[O-(2-O-metylo-|3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizyloalanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.1.
Oczyszczanie związku pośredniego przez wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem i oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Wydajność: 65%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf = 0,21].
Przykład 3.4. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.2.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej związku pośredniego z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5 i wytrącanie w stadium końcowym z metanolu eterem; wydajność: 59% [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf = 0,19].
Przykład 3.5. N-{NE-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizyloalanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.2.
Oczyszczanie związku pośredniego przez wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem i oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Wydajność: 36%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf = 0,57].
Przykład 3.6. N-{NE-[O-(3-O-metylo-a-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloanunotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.3.
Oczyszczanie związku pośredniego przez wytrącanie z metanolu eterem i oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Wydajność: 44%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf = 0,15],
Przykład 3.7. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3-dezoksy-3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.6.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej związku pośredniego z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 95:5 i wytrącanie w stadium końcowym z metanolu eterem. Wydajność: 35% [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf= 0,42].
183 574
Przykład 3.8. TrifluorooctanN-{N8-[0-(3,4-epoksy-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.8. .
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej związku pośredniego z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 95:5. Szereg wytrącań w stadium końcowym z metanolu eterem, a następnie mieszanie z octanem etylu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf= 0,49].
Przykład 3.9. Sól sodowa N-{N8 -[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-feny loaminotiokarbony lo]-lizylo-D-alany lo }-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.10.
Oczyszczanie związku pośredniego przez mieszanie z metanolem i pełne wytrącanie eterem. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:3:0,3, a potem w tym samym układzie 15:6:0,6. Odpowiednie frakcje zatężono, pozostałość rozpuszczono w wodzie i pH doprowadzono do 7 0,1 N roztworem wodorotlenku sodu. Mieszaninę przesączono podciśnieniowe, pozostałość na filtrze rozpuszczono w mieszaninie dimetyloformamid/woda 1:3 i dodano 1 równoważnik 0,1 N roztworu wodorotlenku sodowego. Mieszaninę zatężono i sól sodową rozpuszczono w wodzie i liofilizowano. Wydajność: 43%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf = 0,15].
Przykład 3.10. Sól sodowa N-{N8-[O-(3-O-karbamoilometylo-(l-L-iukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.18.
Oczyszczanie związku pośredniego przez mieszanie z metanolem i pełne wytrącanie eterem. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:2:0,2. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3 Rf = 0,38]; temperatura topnienia: 190°C (rozkład).
Przykład 3.11. Octan N-{N8-[O-(4-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.4.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej związków pośrednich z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol 95:5 i w stadium końcowym chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2. Po zatężeniu dodano 1 równoważnik lodowatego kwasu octowego i 10 ml wody do pozostałości i mieszaninę liofilizowano. Wydajność: 52%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,43].
FAB-MS: m/z = 760 = Μ + 1.
Przykład 3.12. Trifluorooctan N-{N8-[O-(a-D-glukozylo)-4-hydroksy-fenytaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: α-D-glukozyd p-aminofenylu.
Oczyszczanie związku pośredniego i w stadium końcowym przez mieszanie z metanolem i pełne wytrącanie eterem. Wydajność: 83%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:8:0,8 Rf= 0,48].
Przykład 3.13. TrifluorooctanN-{N8-[O-(a-D-glukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizy lo-alany lo} -batracyliny
Związek wyjściowy: α-D-glukozyd p-aminofenylu.
Otrzymano analogicznie jak izomer w przykładzie 3.12.
Przykład 3.14. Trifluorooctan N-{N8-[O-(3-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
3.14.a) N- {bF-(tert-butoksykarbonylo)-N8-[O-(3-O-metylo-fl-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-łizylo-D-alanylo}-batracyliny
Tiofosgen (33,5 ml, 0,44 mmola) dodano do roztworu związku 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) w mieszaninie dioksan/woda 1:1 (10 ml) z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez
183 574 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml) i dodano związek 2.4 (109,7 mg, 0,2 mmola) i etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a następnie zatęzono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1]. Otrzymano żółte kryształy (108,3 mg, 62%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,42; temperatura topnienia = 194-195°C (rozkład).
3.14) Trifluorooctan N-{Ne-[O-(3-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Grupę tert-butoksykarbonylowąodszczepiono ze związku 3.14.a (105,1 mg, 0,12 mmola) w sposób opisany w przykładzie 2.2. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i ponownym wytrąceniu z mieszaniny metanol/eter dietylowy otrzymano żółte kryształy (57,4 mg, 54%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 188-189°C (rozkład).
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 3.14.a i 3.14 z koniugatu peptydu 2.4 (w każdym przypadku 109,7 mg, 0,2 mmola).
Przykład 3.15. Trifluorooctan N-{Ne-[O-(p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.23 (59,7 mg, 0,22 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1]. Otrzymano żółte kryształy (79,5 mg, 46%); TLC [metanol]: Rf = 0,27; temperatura topnienia - 182°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (77,1 mg, 44%); TLC [metanol]: Rf = 0,27; temperatura topnienia = 191-192°C (rozkład).
Przykład 3.16. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.31 (79 mg, 0,22 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1->20:1]. Otrzymano żółte kryształy (150,7 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,35; temperatura topnienia = 197-199°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (137 mg, 76%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,13; temperatura topnienia = 184-186°C (rozkład).
Przykład 3.17. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1—>25:1]. Otrzymano żółte kryształy (124,1 mg, 66%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,50; temperatura topnienia = 165°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (107,8 mg, 57%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,53; temperatura topnienia = 183°C (rozkład).
Przykład 3.18. Trifluorooctan Ν-{Νε -[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego przez ponowne wytrącanie z mieszaniny etanol/eter dietylowy otrzymano sól sodową as. Otrzymano żółte kryształy (172 mg, 91%); TLC [metanol] : Rf = 0,71; temperatura topnienia = 225-228°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (136,5 mg, 73%); TLC [metanol]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 217-220°C (rozkład).
183 574
Przykład 3.19. Trifluorooctan N-{N6-[O-(3-O-karbamoilometylo-3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1], Otrzymano żółte kryształy (137,7 mg, 75%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf= 0,41; temperatura topnienia = 198-201°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego jak w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (140,2 mg, 75%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 188-190°C (rozkład).
Przykład 3.20. Trifluorooctan N-{Ne-[O-(3-O-(N-metylo-karbamoilometylo)-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.45 (75,3 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 7:1:0,1]. Otrzymano żółte kryształy (158,4 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,25; temperatura topnienia = 161-163°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (132,5 mg, 70%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 191-193°C (rozkład).
Przykład 3.21. Trifluorooctan N-{N6-[O-(3-O-(N-propylo-karbamoilometylo)-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.46 (81,5 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 8:1:0,1]. Otrzymano żółte kryształy (153,1 mg, 80%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,33; temperatura topnienia = 187°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (154,9 mg, 79%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,21; temperatura topnienia = 179°Ć (rozkład).
Przykład 3.22. TrifluorooctanN-{N6-[O-(3-O-(N-butylo-karbamoilometylo)-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.47 (84,6 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 12:1]. Otrzymano żółte kryształy (132,7 mg, 68%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,54; temperatura topnienia = 180-182°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (115,2 mg, 58%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,30; temperatura topnienia = 176°Ć.
Przykład 3.23. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3,4-didezoksy-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.52 (52,6 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 25:1], Otrzymano żółte kryształy (127,4 mg, 77%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,60; temperatura topnienia = 166-167°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (103,1 mg, 61%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf= 0,44; temperatura topnienia = 173-175°C (rozkład).
Przykład 3.24. Trifluorooctan N-{NE-[O-(6-O-acetylo-[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.53 (78,2 mg, 0,22 mmola).
183 574
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 25:1]. Otrzymano żółte kryształy (88,3 mg, 49%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,61; temperatura topnienia = 196-199°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (89,6 mg, 49%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,31; temperatura topnienia = 186°C (rozkład).
Przykład 3.25. Trifluorooctan N-{NE-[O-(a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.39 (59,7 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1]. Otrzymano żółte kryształy (101,7 mg, 59%); TLC [metanol]: Rf = 0,79; temperatura topnienia = 180°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (103,1 mg, 59%); TLC [metanol]: Rf = 0,34; temperatura topnienia = 177-178°C (rozkład).
Przykład 3.26. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizyło-D-alanylo} -batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1]. Otrzymano żółte kryształy (56,6 mg, 32%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf= 0,38; temperatura topnienia = 191-192°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (46,6 mg, 26%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf= 0,13; temperatura topnienia = 190-191 °C (rozkład).
Przykład 3.27. Trifluorooctan N-{N®-[O-(2,3-di-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.41 (66 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 25:1]. Otrzymano żółte kryształy (77,8 mg, 44%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf= 0,65; temperatura topnienia = 182-183°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (66,1 mg, 37%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,40; temperatura topnienia = 181°C.
Przykład 3.28. Trifluorooctan N-{Ne-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.48 (75,5 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą*chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 18:1]. Otrzymano żółte kryształy (62,1 mg, 33%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,66; temperatura topnienia = 165°C.
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (57,6 mg, 30%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,43; temperatura topnienia = 183-184°C.
Przykład 3.29. Trifluorooctan N-{N6-[O-(3-O-karboksymetylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.49 (77,3 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego przez ponowne wytrącanie z etanolu/eteru dietylowego. Otrzymano sól sodową jako żółte kryształy (173,4 mg, 92%); TLC [metanol]: Rf = 0,57; temperatura topnienia = 201-205°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (171,7 mg, 92%); TLC [metanol]: Rf = 0,29; temperatura topnienia = 196-198°C (rozkład).
183 574
Przykład 3.30. Trifluorooctan N-{NE-[O-(3-O-karbamoilometylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.50 (72,2 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1]. Otrzymano żółte kryształy (106,6 mg, 58%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf= 0,34; temperatura topnienia = 192-194°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.14. Otrzymano żółte kryształy (107,7 mg, 58%); TLC [chlorek metylenu/metanol 4:1]: Rf = 0,13; temperatura topnienia = 186-187°C (rozkład).
Przykład 3.31.N-{NE-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozyio)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alany lo} -batracy lina
3.31 .a) N-{Nx-(fluorofenylo-9-metoksykarbonylo)-NE-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopirano2ylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Tiofosgen (33,5 ml, 0,44 mmola) dodano do roztworu związku 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) w mieszaninie dioksan/woda 1:1 (10 ml). Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml) i dodano związek 2.5 (157 mg, 0,2 mmola) i etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, po czym pozostałość rozpuszczono w mieszaninie chlorek metylenu/metanol 1:1. Produkt wytrącono dodając eter dietylowy i przemyto go niewielką ilością schłodzonego w lodzie metanolu. Otrzymano żółte kryształy (191 mg, 94%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,35; temperatura topnienia = 203°C (rozkład).
3.31) N- {NF-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alanylo} -batracy lina
Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono ze związku 3.31.a (182,2 mg, 0,18 mmola) w sposób opisany w przykładzie 2.4. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Otrzymano żółte kryształy (127,1 mg, 89%); TLC [metanol]: Rf = 0,46; temperatura topnienia = 158°C.
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładach 3.3 La i 3.31 z koniugatu peptydu z przykładu 2.5 (w każdym przypadku 157 mg, 0,2 mmola).
Przykład 3.32. N-{N®-[O-(3-O-(piperydylo-N)-karbonylometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 3.3 La. Otrzymano żółte kryształy (1912 mg, 91%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf - 0,28; temperatura topnienia = 208°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.31. Otrzymano żółte kryształy (155,8 mg, 88%); TLC [metanol]: Rf = 0,47; temperatura topnienia = 120°C (rozkład).
Przykład 3.33. Sól sodowa N-{NE-[O-(3-O-karboksymetylo-|3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 3.3La. Otrzymano żółte kryształy (192 mg, 90%); TLC [etanol/metanol 1:1]: Rf = 0,05; temperatura topnienia = 211-213°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.31. Otrzymano żółte kryształy (110,6 mg, 66%); TLC [metanol]: Rf = 0,33; temperatura topnienia = 233-235°C (rozkład).
183 574
Przykład 3.34. N-{NE-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Otrzymano żółte kryształy (159,2 mg, 76%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,04; temperatura topnienia = 177°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 3.31. Otrzymano żółte kryształy (125,1 mg, 76%); TLC [metanol]: Rf = 0,48; temperatura topnienia = 106°C (rozkład).
Przykłady 4.1-4.12.
Przykład 4.1. 4.1.a) N-{Na-(O-(3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
140 mg (0,55 mmola) β-L-fukozydu p-aminofenylu przekształcono najpierw w izotiocyjanian w sposób opisany w przykładzie 3.1.a i produkt sprzęgnięto następnie z 430 mg (0,55 mmola) trifluorooctanu N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.5) w obecności 375 pl etylodiizopropyloaminy. Po wytrącaniu z mieszaniny metanol/chlorek metylenu surowy produkt oczyszczono metodą chromatografii rzutowej (acetonitryl/woda 10:1). Po mieszaniu pozostałości z eterem otrzymano 358 mg (67%) docelowego produktu. [ TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,48].
4.1) N- {N“-(O-(p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo} -batracylina
356 mg (0,37 mmola) związkp z przykładu 4.1.a rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu i 5 ml piperydyny i roztwór mieszano w 20°C przez 1 godzinę. Zatężono go, a pozostałość chromatografowano z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:6:0,6. Docelowy produkt otrzymano z wydajnością 46%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf=0,ll].
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 4.1 z częściowo chronionego koniugatu peptydu 2.5.
Przykład 4.2. Sól sodowa N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.10.
Oczyszczanie chromatograficzne związku pośredniego z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:03, potem ten sam układ 15:4:0,5. Oczyszczanie produktu końcowego jak w stadium betainy przez mieszanie z wodą, następnie przekształcenie w sól sodową za pomocą 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu i suszenie sublimacyjne z mieszaniny dioksan/woda. Wydajność: 65%; temperatura topnienia = 220°C.
183 574
Przykład 4.3. N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbony lo] -lizy lo-D-alany lo} -batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.2.
Oczyszczanie związku pośredniego przez wytrącanie z chlorku metylenu eterem; oczyszczanie produktu końcowego przez kilkakrotne wytrącanie z dimetyloformamidu eterem. Wydajność: 88%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,28],
Przykład 4.4. N-{Na-[O-(4-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.4.
Oczyszczanie związku pośredniego przez kilkakrotne wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem; oczyszczanie produktu końcowego metodą chromatografii kolumnowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8], wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Wydajność: 74%. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:1 Rf=0,19].
Przykład 4.5. N-{N“-[O-(3,4-di-O-metylo-3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizy lo-D-alany lo} -batracylina
4.5.a) N-{Na-(O-(3,4-di-O-metylo-|3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo))lizylo-D-alanylo}-batracylina
Tiofosgen (33,5 ml, 0,44 mmola) dodano do roztworu związku 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) w mieszaninie dioksan/woda 1:1 (10 ml). Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml) i dodano związek 2.6 (157 mg, 0,2 mmola) i etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po kilka razy powtarzanym wytrącaniu pozostałości z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem dietylowym i końcowym przemywaniu niewielką ilością schłodzonego w lodzie metanolu. Otrzymano żółte kryształy (198 mg, 98%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,23; temperatura topnienia = 175°C.
4.5) N- {N“-[O-(3,4-di-O-metylo-3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alanylo} -batracylina.
Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono ze związku 4.5.a (172,1 mg, 0,17 mmola) w sposób opisany w przykładzie 2.4. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w mieszaninie metanol/chlorek metylenu 1:1, produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Otrzymano żółte kryształy (114,5 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:!]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 206°C (rozkład).
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 4.5.a i 4.5 z koniugatu peptydu 2.6 (w każdym przypadku 157 mg, 0,2 mmola).
Przykład 4.6. N-{Na-[O-(3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.23 (59,7 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (185,5 mg, 94%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,09; temperatura topnienia = 182°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 4.5. Otrzymano żółte kryształy (134,3 mg, 88%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf - 0,04; temperatura topnienia = 221°C (rozkład).
Przykład 4.7 N-{N“-[O-(3-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina.
Związek wyjściowy: węglowodan 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (193,5 mg, 97%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,27; temperatura topnienia = 178°C (rozkład).
183 574
Oczyszczanie produktu końcowego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 2:1—>1:1]. Otrzymano żółte kryształy (130,5 mg, 84%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,09; temperatura topnienia = 206°C (rozkład).
Przykład 4.8. N-{Na-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (209,8 mg, 99%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,32; temperatura topnienia = 235°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 4.5. Otrzymano żółte kryształy (164,3 mg, 99%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,05; temperatura topnienia = 217°C (rozkład).
Przykład 4.9. Sól sodowa N-{N“-[O-(3-O-karbonylometylo3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (210,3 mg, 99%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,02; temperatura topnienia = 185°C.
Po oczyszczaniu produktu w sposób opisany w przykładzie 4.5 pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą(150,8 mg, 90%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf= 0,04.
Przykład 4.10. N-{Na-[O-(3-O-karbamoilometyloP-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy feny loamino-tiokarbonylo] -lizylo-D-alany lo} -batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (152,7 mg, 73%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,11; temperatura topnienia = 229°C (rozkład).
Po oczyszczaniu produktu w sposób opisany w przykładzie 4.5 pozostałość zawieszono w wodzie/dioksanie 1:1 (20 ml). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (98,4 mg, 61%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,10; [a]20 = +44,9° (c = 0,2/H2O).
Przykład 4.11. N-{Na-[O-(a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alany lo} -batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.39 (59,7 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (179,6 mg, 91%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,07; temperatura topnienia = 176°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 4.5. Otrzymano żółte kryształy (137,5 mg, 90%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,09; temperatura topnienia = 213°C (rozkład).
Przykład 4.12. N-{N“-[O-(3-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: węglowodan 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola).
Oczyszczanie związku pośredniego w sposób opisany w przykładzie 4.5.a. Otrzymano żółte kryształy (94,2 mg, 48%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,13; temperatura topnienia = 173°C (rozkład).
Oczyszczanie produktu końcowego w sposób opisany w przykładzie 4.5. Otrzymano żółte kryształy (66,6 mg, 43%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf= 0,07; temperatura topnienia = 215°C (rozkład).
183 574
Przykłady 5.1-5.23.
Przykład 5.1. N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-N8-[O-(3-O-metylop-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)lizylo-D-alanylo} -batracylina μΐ (0,18 mmola) tiofosgenu dodano do 50 mg (0,16 mmola) 3-O-karboksymetyΙο-β-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.10) w 10 ml dioksanu/wody 1:1 z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatężono, a pozostałość wysuszono pod wysoką próżnią przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian sprzęgnięto następnie w absolutnym dimetyloformamidzie z 109 mg (0,144 mmola) koniugatu z przykładu 3.4 w obecności 82 μΐ etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5]. Substancję uzyskaną po zatężeniu liofilizowano z wody. Wydajność: 89 mg (56%). [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:6:0,6 Rf=0,22],
Następujące koniugaty z mieszanymi podstawnikami otrzymano analogicznie jak w przykładzie 5.1.
Przykład 5.2. N-{Na-[O-(3-O-mety,lo-|3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-Ns-[O-(3-O-karboksymetylo-p-L-fiikozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: węglowodan z przykładu 1.2, koniugat z przykładu 3.10.
Oczyszczanie przez wytrącanie surowego produktu z metanolu eterem. Wydajność: 78%.[TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2]: Rf = 0,45].
Przykład 5.3. N-{Na-[O-(3-O-metylo^L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-N8-(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 4.3,4-hydroksyanilina.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]; wydajność: 60%; [TLC:chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf=0,31].
Przykład 5.4. N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-N6-(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizy lo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 4.2,4-hydroksyanilina.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5]. Pozostałość mieszano następnie z metanolem/eterem. Wydajność: 55%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:6:0,6 Rf= 0,3].
Przykład 5.5. N-{Na-[O-(4-O-metylo[3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-N8 -(4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 4.4, 4-hydroksyanilina.
183 574
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]. Pozostałość wytrącono następnie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu eterem. Wydajność: 49%; temperatura topnienia = 128°C; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf=0,26],
Przykład 5.6. N-{Na-[4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo-NE-(4-O- metylo-P-L-fukozylo)-hydroksyfenyloammo-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 3.11, 4-hydroksy-anilina.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]. Pozostałość liofilizowano następnie z wody/dioksanu. Wydajność: 50%; [TLC:chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf=0,29],
Przykład 5.7. N-{Na-[4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-NE-[O-(3-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 3.4, 4-hydroksyanilina.
Pozostałość wytrącono z metanolu eterem. Wydajność: 76%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2 Rf=0,26].
Przykład 5.8. N-{Na-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-N6-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-O-metylo[3-L-fukozylo)-(4-hydroksyfenyloamino)-triazyn-6-ylo]]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: koniugat z przykładu 8.10, węglowodan z przykładu 1.2.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]. Wydajność: 9%; FAB-MS: m/z = 1165 = M + 1. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3 Rf = 0,27].
Przykład 5.9. N-{N“-[O-(3-O-karboksymetyloP-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-NE-(acetylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związki wyjściowe: N-[NE-(acetylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliną węglowodan z przykładu 1.10.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2; potem ten sam układ 15:4:0,5]. Pozostałość następnie suszono sublimacyjnie z wody. Wydajność: 46%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,31].
Przykład 5.10. N-{Na-[O-(4-O-metylo-(3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-NE [acetylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina μΐ bezwodnika octowego dodano do 51 mg (0,067 mmola) koniugatu z przykładu 4.4 w 5 ml dimetyloformamidu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Zatężono ją a pozostałość wytrącono z metanolu eterem. Wydajność: 46 mg (86%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,6].
Przykład 5.11. Sól sodowa N-{N“-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony 1 o]-NE- [sukcynylo] lizy lo-D-ąlany lo} -batracy liny mg bezwodnika bursztynowego dodano do 20 mg (0,027 mmola) koniugatu z przykładu 4.1. w 2 ml dimetyloformamidu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 6 godzin. Zatężono ją a pozostałość wytrącono z metanolu eterem. Pozostałość rozpuszczono w wodzie i dodano 27 μΐ 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu. Wydajność: 20 mg (86%). [TLC: chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:2 Rf = 0,2].
Przykład 5.12. N-{Na-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-NE-[O-3,4-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Węglowodan 1.42 (37,7 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.31 (79 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.3 La. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1—>10:1] otrzymano żółte kryształy (52,9 mg, 45%); TLC:[chlorek metylenu/metanol 10:1] Rf = 0,14; temperatura topnienia = 178°C (rozkład).
183 574
Przykład 5.13. Sól sodowa N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-NE-[O-3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Węglowodan 1.43 (38,6 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.31 (79 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter diety Iowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (87,9 mg, 74%); TLC [etanol] : Rf= 0,17; [a]20 = +56,0° (c = 0,l/H2O).
Przykład 5.14. N-{N“-[O-(3-O-karboksymetylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-NE-[O-3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksy feny loamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracy lina
Węglowodan 1.44 (36,1 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.31 (79 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Otrzymano żółte kryształy (45,9 mg, 39%); TLC [etanol] : Rf = 0,38; temperatura topnienia = 219°C (rozkład).
Przykład 5.15. N-{Na-[O-3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-NE-[O-(3-O-(piperydylo-N)-karbonylometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Węglowodan 1.31 (39,5 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.32 (88,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1->10:1] otrzymano żółte kryształy (38,8 mg, 32%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,79; temperatura topnienia = 205°C (rozkład).
Przykład 5.16. Sól sodowa N-{Na-[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-N8-[0-(3-0-(piperydylo-N)-karbonylometylo-p-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Węglowodan 1.43 (38,6 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.32 (88,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i wkroplono 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (90,3 mg, 71%); TLC [etanol]: Rf = 0,05; [a]20 = +39,0° (c = 0,l/H2O).
Przykład 5.17. N-{Na-[O-(3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-NE-[O-(3-O-(piperydylo-N)-karbonylometylo-[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-feny loamino-tiokarbony lo] -lizylo-D-alanylo } -batracy lina
Węglowodan 1.44 (36,1 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.32 (88,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Otrzymano żółte kryształy (44,8 mg, 36%); TLC [etanol] : Rf = 0,06; temperatura topnienia = 223°C (rozkład).
Przykład 5.18. Sól sodowa N-{Na-[O-3,4-di-O-metylo-|3-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-NE-[O-(3-O-karboksymetylo-3-D-galaktopiranozylo) -4-hy droksy feny loaminotiokarbony lo] -lizylo-D-alanylo } -batracy liny
Węglowodan 1.31 (39,5 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.33 (84,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.3l.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem metanol/chlorek metylenu 1:1 (20 ml) dodano do pozostałości i produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego
183 574 roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (80,7 mg, 68%); TLC [etanol] : Rf = 0,09; [a]20 = +35,0° (c = 0,l/H2O).
Przykład 5.19. Sól sodowa N-{Na-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-|3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-Ne-[O-(3-O-karboksymetylo-[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Węglowodan 1.42 (37,7 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.33 (84,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem metanol/chlorek metylenu 1:1 (20 ml) dodano do pozostałości i produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (87,5 mg, 71%); TLC [etanol] : Rf = 0,10; [a]20 - +24,6° (c = 0,ll/H2O).
Przykład 5.20. Sól sodowa N-{Na-[O-(3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)-NE-[O-(3-O-karboksymetylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Węglowodan 1.44 (36,1 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.33 (84,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem metanol/chlorek metylenu 1:1 (20 ml) dodano do pozostałości i produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (78,6 mg, 65%); TLC [etanol] : Rf = 0,11; [a]20 = -44,0° (c = 0,13/H2O).
Przykład 5.21. N-{Na-[O-3,4-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-NE-[O-(3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Węglowodan 1.31 (39,5 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.34 (81,9 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i chromatografii rzutowej [etanol-»etanol/metanol 2:1] otrzymano żółte kryształy (17,4 mg, 15%); TLC [etanol]: Rf = 0,20; temperatura topnienia> 290°C (rozkład).
Przykład 5.22. N-{Na-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-NE-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Węglowodan 1.42 (37,7 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.34 (81,9 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Otrzymano żółte kryształy (72 mg, 60%); TLC [etanol]: Rf = 0,21; temperatura topnienia = 222°C (rozkład).
Przykład 5.23. Sól sodowa N-jN^OTS-O-karboksymetylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-NE-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo]-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Węglowodan 1.43 (38,6 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 3.34 (81,9 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 3.31.a. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczeniu w metanolu/chlorku metylenu 1:1 produkt wytrącono dodając eter dietylowy. Pozostałość zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą(78,2 mg, 65%); TLC [etanol] : Rf = 0,07; [a]20 = +33,0° (c = 0,l/H2O).
183 574
Przykłady 6.1-6.89.
Wzór ogólny
, w;
Przykład 6.1. N-iN01, NE-bis-(O-(2-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbony lo]-lizy lo-D-alanylo}-batracy lina
Tiofosgen (30 μΐ, 0,4 mmola) dodano do roztworu związku 1.1 (50 mg, 0,19 mmola) w mieszaninie dioksan/woda 1:1 (10 ml) z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olej ową pompą próżniową przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml) i dodano związek 2.13 (61 mg, 0,09 mmola) oraz etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, po czym pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2], Pozostałość wytrącono z metanolu eterem. 48 mg (50%) docelowego produktu otrzymano jako żółte kryształy.
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 6.1 z koniugatu peptydu z przykładu 2.13 lub z izomeru L-alanylowego (przykład 2.2).
Przykład 6.2. N-{N“, NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 100 mg (0,38 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:0,5:0,05; potem 15:1:0,1, w tym samym układzie]; następnie wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol/eter. Wydajność: 59%. Temperatura topnienia = 178°C (rozkład); [TLC:acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,51].
Przykład 6.3. N-{N“, NE-bis-[O-(4-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 115 mg (0,44 mmola) węglowodanu z przykładu 1.4.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]; następnie wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol (l:l)/eter. Wydajność· 58%. Temperatura topnienia = 176°C (rozkład); [TLC: acetonitiyl/woda 10:1 Rf= 0,52].
Przykład 6.4. N-{N®, NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbony lo] -lizylo-alanylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 115 mg (0,44 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
Oczyszczanie przez wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol (l:l)/eter. Wydajność: 93%. Temperatura topnienia = 192°C (rozkład); [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf=0,46].
183 574
Przykład 6.5. Ν-{Να, Ne-bis-[O-(3-O-metylo-<x-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 100 mg (0,38 mmola) węglowodanu z przykładu 1.3.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1]; wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol (l:l)/eter. Temperatura topnienia = 178°C (rozkład); FAB-MS: m/z =1071=M+l.
Przykład 6.6. Ν-{Να,Νε-bis-[O-(3-O-n-propylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 38 mg (0,127 mmola) węglowodanu z przykładu 1.5.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1]; wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol (l:l)/eter. Wydajność: 42%; temperatura topnienia = 167-170°C (rozkład); [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) Rf=0,34],
Przykład 6.7. N-fN, Ne-bis-(O-(3-dezoksy-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 40 mg (0,167 mmola) węglowodanu z przykładu 1.6.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]; wytrącanie z metanolu/eteru. Wydajność: 81%. [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf=0,46].
Przykład 6.8. Ν-{Να,Νε-bis-[0-(3,4-didezoksy-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 41 mg (0,183 mmola) węglowodanu z przykładu 1.7.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 95:5]; suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Wydajność: 60%. [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1 Rf=0,22].
Przykład 6.9. N-{Na,NE-bis-[O-(3-hydroksyetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 75 mg (0,25 mmola) węglowodanu z przykładu 1.12.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2; potem ten sam układ 15:4:0,5]. Wytrącanie z metanolu/eteru. Wydajność: 66%; [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf= 0,28].
Przykład 6.10. N-{Na, NE-bis-[O-(2-hydroksyetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 50 mg (0,167 mmola) węglowodanu z przykładu 1.19.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3]; wytrącanie z metanolu/eteru; suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Wydajność: 72%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2]; Rf = 0,39].
Przykład 6.11. SóldisodowaN-{N®,NE-bis-[O-(2-O-karboksymetylo-|3-L-fukozyło)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: 50 mg (0,16 mmola) węglowodanu z przykładu 1.13.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8; potem ten sam układ 15:10:1]. Trawienie pozostałości eterem, potem suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Przekształcenie w sól disodową z 2 równoważnikami 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu, następnie suszenie sublimacyjne z wody. Wydajność: 49%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,5 Rf = 0,38]. MS-FAB: FAB’; m/z = 1157 = M - 2Na++ H+.
Przykład 6.12. Sól disodowa N-{N“, N® -bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: 200 mg (0,64 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5; potem ten sam układ 15:8:0,8; i na koniec 15:10:1]. Trawienie pozostałości eterem, następnie suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu 1:1. Przekształcenie w sól diso
183 574 dowąz 2 równoważnikami 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu, następnie suszenie sublimacyjne z wody. Wydajność: 59%; [TLC:chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) Rf = 0,1],
Przykład 6.13. IV- {N“, NE-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 60 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.18.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3]. Pozostałość wytrącono z mieszaniny chlorek metylenu/metanol (1:1) eterem, odsączenie podciśnieniowe, a następnie suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu 1:1. Wydajność: 36%; TLC: [acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2]; Rf = 46; temperatura topnienia = 190°C (rozkład).
Przykład 6.14. N-JLF, NE-bis-[O-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 100 mg (0,39 mmola) β-L-fukozydu p-aminofenylu.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2; potem ten sam układ 15:4:0,5]. Pozostałość wytrącono z dimetyloformamidu eterem, odsączono podciśnieniowo. Wydajność: 48%; temperatura topnienia = 195-198°C.
Przykład 6.15.N-{N“,N6-bis-[O-(a-L-ramnozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 158 mg (0,61 mmola) węglowodanu z przykładu 1.21.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3; potem ten sam układ 15:4:0,5]. Liofilizowano pozostałość z wody/dioksanu. Wydajność: 87%. TLC: [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5]; Rf = 0,25.
Przykład 6.16. Sól disodowa N-{N“, NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-oc-L-ramnozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: 200 mg (0,64 mmola) węglowodanu z przykładu 1.22.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5; potem ten sam układ 15:8:0,8; i na koniec 15:10:1]. Trawienie pozostałości eterem, następnie suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu 1:1.
Następujące glikokoniugaty zawierające całkowicie odblokowaną jednostkę strukturalną lizyny na końcu aminowym otrzymano w sposób analogiczny jak w przykładzie 6.1 z różnych peptydowych koniugatów batracyliny.
Przykład 6.17. Sól disodowa N-{Na, NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-β-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-glicylo}-batracyliny
Związki wyjściowe: 32 mg (0,1 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10.
mg (0,045 mmola) di-trifluorooctanuN-[lizylo-glicylo]-batracyliny (przykład 2.9).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8; potem ten sam układ 15:15:1,5]. Wytrącanie z dimetyloformamidu/metanolu (1:1) eterem, następnie suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Przekształcenie w sól disodową z 2 równoważnikami 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu, następnie suszenie sublimacyjne z wody. Wydajność: 25%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8 Rf = 0,19], FAB-MS: m/z = 1189 = Μ + 1.
Przykład 6.18. N-{N“, NE-bis-[O-(3-O-metylo-β-L-ίukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-glicylo} -batracylina
Związki wyjściowe: 60 mg (0,22 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
mg (0,1 mmola) di-trifluorooctanuN-[lizylo-glicylo]-batracyliny (przykład 2.9).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1]; wytrącanie z metanolu eterem, następnie suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Wydajność: 68%; TLC: [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:2]; Rf= 0,62.
183 574
Przykład 6.19. Ν-{Να, NE-bis-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizy lo-lizy Ιο} -batracylina
6.19. a) N-{Na,Ns-bis-[O-(3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo}- batracylina
Związki wyjściowe: 297 mg (1 mmol) β-L-fukozyd p-aminofenylu.
mg (0,1 mmola) di-trifluorooctanu N-[lizylo-ŃE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-batracyliny (przykład 2.15), 206 μΐ etylodiizopropyloaminy.
Oczyszczanie przez dwukrotne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu (1:1) eterem, przemywanie pozostałości na filtrze eterem. Wydajność: 89%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf=0,31].
6.19) N-{Na,NE-bis-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyIoamino-tiokarbonylo]-lizylo-lizylo}-batracylina
515 mg (0,39 mmola) związku z przykładu 6.19.a rozpuszczono w 5 ml dimetyloformamidu i 5 ml piperydyny i roztwór mieszano w 20°C przez 30 minut. Mieszaninę zatężono, a pozostałość przemyto eterem. Mieszaninę przesączono podciśnieniowo i pozostałość na filtrze rozpuszczono w dimetyloformamidzie. Po wytrąceniu eterem i przemyciu pozostałości na filtrze pozostało 335 mg (78%) krystalicznego produktu docelowego. FAB-MS:m/z= 1100 = M+ 1.
Przykład 6.20. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-diaminopropionylo} -batracylina
6.20. a) N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo-[3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo- Na (fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-diaminopropionylo} -batracylina
Synteza analogiczna jak w przykładzie 6.19.
Związki wyjściowe: 60 mg (0,22 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
100 mg (0,11 mmola) di-trifluorooctanu N-[lizylo-Na-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-diamino-propionylo]-batracyliny (przykład 2.16), 76 μΐ etylodiizopropyloaminy.
Oczyszczanie przez dwukrotne wytrącanie z metanolu eterem, przemywanie pozostałości na filtrze eterem. Wydajność: 105 mg (73%).
- 6.20) N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbony lo] -lizylo-diaminopropionylo} -batracylina
103 mg (0,079 mmola) związku z przykładu 6.20.a odblokowano piperydyną analogicznie jak w przykładzie 6.19. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3; potem ten sam układ 15:6:0,6]. Suszenie sublimacyjne z wody/dioksanu. Wydajność: 21%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf=0,32].
Przykład 6.21. Sól disodowa N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)-lizylo-diaminopropionylo}-batracyliny
Związek ten otrzymano analogicznie jak w przykładzie 6.20 w 2 etapach, wychodząc z węglowodanu z przykładu 1.10 i koniugatu peptydu z przykładu 2.16. Oczyszczanie chromatograficzne można pominąć, gdyż produkty uboczne można usunąć przez ucieranie z metanolem i eterem. Produkt przekształca się następnie w sól disodową z 2 równoważnikami 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu. Wydajność: 66% w 2 etapach; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5]; Rf- 0,3].
Przykład 6.22. N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizy lo-serylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 60 mg (0,22 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
di-trifluorooctanu 76 mg (0,1 mmola) N-(lizylo-serylo)-batracyliny (przykład 2.10).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]; wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol/eter. Wydajność: 26%; [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,39].
183 574
Przykład 6.23. N-{Na,N6-bis-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-serylo}-batracylina
Związek wyjściowy: 60 mg (0,22 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
mg (0,11 mmola) dibromowodorku N-[lizylo-D-serylo]-batracyliny (przykład 2.11).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:2:0,2]; suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody. Wydajność: 29%; [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,36].
Przykład 6.24. N-{N“,N6-bis-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 80 mg (0,3 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2.
mg (0,14 mmola) N-[lizylo]-batracyliny (przykład 2.17).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:1:01; potem ten sam układ 15:2:0,2]; wytrącanie z metanolu/eteru. Wydajność: 26%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:2:0,2 Rf=0,22].
Przykład 6.25. N-{bP,N8-bis-[O-(3-O-lXboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizylo} -batracylina
Związek wyjściowy: 60 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10.
mg (0,063 mmola) N-[lizylo]-batracyliny (przykład 2.17).
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:2:02] potem ten sam układ 15:4:0,5; suszenie sublimacyjne z wody. Wydajność: 26%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,25].
Przykład 6.26. N-{N^N£-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfeny loamino-tiokarbony lo] -lizylo} -batracylina
Tiofosgen (33,5 pl, 0,44 mmola) dodano do roztworu związku 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) w mieszaninie dioksan/woda 1:1 (10 ml), z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próżniową przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml), po czym dodano 2.17 (37,7 mg, 0,1 mmola) i etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszczono metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1—>20:1—>10:1]. Otrzymano żółte kryształy (56,7 mg, 53%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,72; temperatura topnienia = 125°C (rozkład).
Przykład 6.27. N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo} -batracylina
Związek 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.17 (37,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1-»20:1->10:1]. Otrzymano żółte kryształy (51,1 mg, 44%); TLC [etanol]: Rf= 0,80; temperatura topnienia = 176°C (rozkład).
Przykład 6.28. Sól disodowa N-{Na,N®-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.17 (37,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (53 mg, 47%); TLC [metanol]: Rf = 0,75; temperatura topnienia-> 260°C (rozkład).
Przykład 6.29. N-{N“,N£-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-batracylina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.17 (37,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytracanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 z eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (55,6 mg, 48%); TLC [etanol]: Rf = 0,09; temperatura topnienia = 206°C (rozkład).
183 574
Przykład 6.30. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo^D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość rozpuszczono w mieszaninie chlorek metylenu/metanol 1:1 (10 ml) i produkt wytrącono dodając eter dietylowy (15 ml) i przemyto niewielką ilością schłodzonego w lodzie metanolu. Otrzymano żółte kryształy (46 mg, 41%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 190-191 °C.
Przykład 6.31. N-{Na,Nc-bis-[O-(P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]lizylo-serylo}-batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu (56,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu->etanol]; po ponownym wytrąceniu z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 eterem dietylowym otrzymano żółte kryształy (73,8 mg, 70%); TLC [etanol]: Rf = 0,15; temperatura topnienia = 123°C.
Przykład 6.32. N-{Nα,Nε-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo} -batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu—>octan etylu/etanol 7:1]. Otrzymano żółte kryształy (43,8 mg, 38%); TLC [octan etylu/etanol 2:1 ]: Rf = 0,31; temperatura topnienia = 176°C.
Przykład 6.33. N-{Nχ,Nε-bis-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu—>octan etylu/etanol 3:1]. Otrzymano żółte kryształy (46,2 mg, 37%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 161°C.
Przykład 6.34. SóldisodowaΝ-{Ν“,Νε-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (39,2 mg, 31%); TLC [metanol]: Rf = 0,77; temperatura topnienia = 213-215°C (rozkład).
Przykład 6.35. N-{Nα,Nε-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 2:1], Otrzymano żółte kryształy (66,1 mg, 53%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf= 0,14; temperatura topnienia = 192°C (rozkład).
Przykład 6.36. N-{Na,Ne-bis-[O-(3-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (48,9 mg, 44%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 204°C.
Przykład 6.37. N-{N“,Ne-bis-[O-(2,3-di-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.41 (66 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu—>octan etylu/etanol 7:1]. Otrzymano żółte kryształy (52 mg, 45%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,28; temperatura topnienia = 164-165°C.
183 574
Przykład 6.38. N-{N“,NE-bis-[O-(4-O-(P-D-galaktopiranozylo)-3-D-glukopiranozylo-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-serylo}-batracylina
Związek 1.56 (95,4 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.10 (69,3 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem produkt przemyto dokładnie gorącym metanolem (50 ml). Otrzymano żółte kryształy (6,16 mg, 44%); TLC [metanol]: Rf = 0,32; temperatura topnienia = 222°C (rozkład).
Przykład 6.39. N-{N%NE-bis-[O-(P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-serylo}-batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu (56,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (62,6 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu—>etanol], po ponownym wytrąceniu pozostałości z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 z eterem dietylowym otrzymano żółte kryształy (50,9 mg, 48%); TLC [etanol]: Rf = 0,14; temperatura topnienia = 133°Ć.
Przykład 6.40. N-{N“,NE-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-serylo}-batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (62,6 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu-»octan etylu/etanol 5:1]. Otrzymano żółte kryształy (53,8 mg, 47%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,38; temperatura topnienia = 145-146°C.
Przykład 6.41. N-{N“NE-bis-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-serylo}-batracylina
Związek 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (62,6 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu-»octan etylu/etanol 3:1]. Otrzymano żółte kryształy (52,4 mg, 42%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,12; temperatura topnienia = 168°C.
Przykład 6.42. Sól disodowa N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-3-D-galaktopiranozy lo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-serylo}-batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (62,6 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (69,2 mg, 55%); TLC [metanol]: Rf = 0,71; temperatura topnienia = 214-216°C (rozkład).
Przykład 6.43. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-serylo]-batracylina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (62,6 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 2:1]. Otrzymano żółte kryształy (46,4 mg, 38%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 173°C.
Przykład 6.44. N-{Na,NE-bis-[O-(P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony ło] -lizy lo-D-asparagilo} -batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu (56,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.11 (72,1 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 z eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (69,4 mg, 64%); TLC [etanol]: Rf = 0,14; temperatura topnienia = 185-187°C.
Przykład 6.45. N-{N“,NE-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.7 (72,1 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/kwas octowy 200:l->octan etylu/etanol 3:1]. Otrzymano żółte kryształy (99,5 mg, 85%); TLC [etanol]: Rf = 0,59; temperatura topnienia = 149°C (rozkład).
183 574
Przykład 6.46. Sól disodowa N-{Na,Ne-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-3-D-galaktopiranozy lo)-4-hydroksy feny loamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo} -batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.7 (72,1 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z metanolu/chlorku metylenu 1:1 z eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (93,4 mg, 73%); temperatura topnienia = 220°C (rozkład).
Przykład 6.47. N-{Na,Nc-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracylina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.7 (72,1 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol/kwas octowy 400:100:2]. Otrzymano żółte kryształy (69,7 mg, 57%); TLC [etanol]: Rf = 0,11; temperatura topnienia = 111 °C.
Przykład 6.48. Sól disodowa N-{Na,N8-bis-[O-(P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracyliny
Związek 6.44 (21,7 mg, 20 pmoli) zawieszono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem, aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (20,6 mg, 93%).
Przykład 6.49. Sól disodowa N-{N“Ns-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracyliny
Związek 6.45 (23,5 mg, 20 pmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 6.48 i produkt poddano obróbce. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (23,9 mg, 100%).
Przykład 6.50. Sól trisodowa N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracyliny
Związek 6.46 (25,6 mg, 20 pmoli) rozpuszczono w wodzie (10 ml) i 0,05 N roztwór wodorotlenku sodu wkroplono do roztworu z mieszaniem, aż do uzyskania pH 8. W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (24 mg, 92%).
Przykład 6.51. Sól sodowa Ν-{Να,Νε -bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-asparagilo}-batracyliny
Związek 6.47 (24,7 mg, 20 pmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 6.48 i produkt poddano obróbce. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (23,0 mg, 92%).
Przykład 6.52.N-{Na,Ns-bis-[O-(p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -lizy lo-D-glutamylo} -batracy lina β-L-fiikopiranozyd p-aminofenylu (56,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.8 (66,8 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/kwas octowy 200:1—>oc tan etylu/etanol/kwas octowy 10:1:0,1]. Otrzymano żółte kryształy (39,5 mg, 36%); TLC [etanol]: Rf = 0,09; temperatura topnienia = 138-139°C (rozkład).
Przykład 6.53. Sól disodowa Ν-{Ν“,Νε -bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-glutamylo}-batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 pmoli) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.8 (66,8 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (97,4 mg, 75%); temperatura topnienia = 180°C (rozkład).
Przykład 6.54. Sól trisodowa Ν-{Ν“,Νε -bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-glutamylo}-batracyliny
Związek 6.53 (25,6 mg, 20 pmoli) poddano reakcji w sposób opisany w przykładzie 6.50 i produkt poddano obróbce. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (24,3 mg, 92%); [a]20 = +20,0° (c = 0,26/H2O).
183 574
Przykład 6.55. N-{N“NE-bis-[0-(|3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloarnino-tiokarbonylo]-lizylo-glicylo } -batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu->etanol]. Otrzymano żółte kryształy (62,2 mg, 60%); TLC [etanol]: Rf 0,12; temperatura topnienia = 176°C.
Przykład 6.56. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-glicylo}-batracylina
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 10:1—>2:1]. Otrzymano żółte kryształy (56,2 mg, 52%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf- 0,22; temperatura topnienia - 197°C.
Przykład 6.57. N-{Na,Ne-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy fenyloamino-tiokarbony lo] -lizy lo-glicylo} -batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 10:1 —>3:1]. Otrzymano żółte kryształy (26,2 mg, 23%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf= 0,39; temperatura topnienia = 209°C.
Przykład 6.58. N-{Na,N8-bis-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-glicylo}-batracylina
Związek 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol->10:l]. Otrzymano żółte kryształy (22 mg, 18%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf= 0,06; temperatura topnienia = 194-195°C (rozkład).
Przykład 6.59. Sól disodowa N-{N“,Ne-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-[LD-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-glicylo}-batracyliny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem produkt przemyto dokładnie metanolem, chlorkiem metylenu i eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (86,8 mg, 71%); temperatura topnienia = 230-232°C (rozkład).
Przykład 6.60. N-{Na,N8-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy fenyloamino-tiokarbonylo] -lizylo-glicylo } -batracylina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem produkt przemyto dokładnie metanolem, chlorkiem metylenu i eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (40,9 mg, 35%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf= 0,05; temperatura topnienia = 214-216°C (rozkład).
Przykład 6.61. N-{Na,N8-bis-[O-(3-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizy lo-glicylo} -batracylina
Związek 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 10:1—>2:1]. Otrzymano żółte kryształy (72,2 mg, 66%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,18; temperatura topnienia - 175°C.
Przykład 6.62. N-{Na,N8-bis-[O-(2,3-di-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-glicylo}-batracylina
Związek 1.41 (66 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.9 (66,2 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu/etanol 10:1—>3:1]. Otrzymano żółte kryształy (66,6 mg, 60%); TLC [octan etylu/etanol 2:1]: Rf = 0,41; temperatura topnienia = 173°C.
183 574
Przykład 6.63. N-{Na,Ns-bis-[O-(P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]lizylo-D-treonylo}-batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu (56,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.12 (64 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [octan etylu-»etanol] i po ponownym wytrąceniu produktu z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 z eterem dietylowym otrzymano żółte kryształy (30,5 mg, 28%); TLC [etanol]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 172°C.
Przykład 6.64. NJNĘNF-bis-fOJP-D-galaktopiranozyloj^-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]lizy lo-D-alanylo }-batracylina
Związek 1.23 (59,7 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1—>1:1]. Otrzymano żółte kryształy (68,3 mg, 64%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,49; temperatura topnienia = 222-224°C (rozkład).
Przykład 6.65. N-{N“,NE -bis-[O-(2-O-metylo-[3-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.24 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (69,6 mg, 63%); TLC [etanol]: Rf = 0,24; temperatura topnienia = 208°C (rozkład).
Przykład 6.66. N-{N“,Ne-bis-[O-(3-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 15:1—>10:1—>5:1]. Otrzymano żółte kryształy (94,3 mg, 85%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,16; temperatura topnienia = 212°C (rozkład).
Przykład 6.67. N-{N“,N£-bis-[O-(4-O-metylo-[P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-feny loamino-tiokarbony lo] -lizy lo-D-alanylo} -batracylina
Związek 1.26 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 15:1—>10:1—>5:1]. Otrzymano żółte kryształy (52,6 mg, 48%); TLC [chlorek metylenu/metanol]: Rf = 0,88; temperatura topnienia = 192°C (rozkład).
Przykład 6.68. N-{Na,NE-bis-[O-(6-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.27 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany W przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (96,7 mg, 88%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,04; temperatura topnienia = 210°C (rozkład).
Przykład 6.69. N-{N“,Nl5-bis-[O-(2,3-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy feny loamino-tiokarbony lo] -lizy lo-D-alanylo} -batracylina
Związek 1.28 (65,9 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1]. Otrzymano żółte kryształy (57,4 mg, 51%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf= 0,40; temperatura topnienia = 148°C (rozkład).
Przykład 6.70.N-{Ń“,NE-bis-[O-(2,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.29 (65,9 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1 —>15:1 —>10:1 ]. Otrzymano żółte kryształy (74,2 mg, 65%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf- 0,40; temperatura topnienia = 140°C (rozkład).
183 574
Przykład 6.71. N- {N“,N6-bis-[O-(2,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.30 (65,9 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1^15:1], Otrzymano żółte kryształy (43,9 mg, 40%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,43; temperatura topnienia = 229°C (rozkład).
Przykład 6.72. N-{Na,Ne-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1]. Otrzymano żółte kryształy (66,2 mg, 59%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]; Rf = 0,39; temperatura topnienia = 184°C.
Przykład 6.73. N-{NXNe-bis-[O-(3,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.32 (65,9 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 15:1—>10:1]. Otrzymano żółte kryształy (57,1 mg, 50%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,42; temperatura topnienia = 190°C (rozkład).
Przykład 6.74. N-{N“,N®-bis-[O-(4,6-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy fenyloamino-tiokarbony lo] -lizylo-D-alanylo} -batracy lina
Związek 1.33 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 20:1—>10:1—>5:1]. Otrzymano żółte kryształy (47,0 mg, 42%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,39; temperatura topnienia = 169°C.
Przykład 6.75. N-{N“,N6-bis-[O-(2,3,4-tri-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.34 (69 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1]. Otrzymano żółte kryształy (83,8 mg, 72%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,36; temperatura topnienia = 165°C (rozkład).
Przykład 6.76. N-{NXN6-bis-[O-(2,3,6-tri-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.35 (69 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (105 mg, 91%); TLC [chlorek metylenu/etanol 5:1]: Rf = 0,48; temperatura topnienia = 194°C (rozkład).
Przykład 6.77. N-{Na,NE-bis-[O-(2,4,6-tri-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.36 (69 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 30:1 —> 10:1 ]. Otrzymano żółte kryształy (67 mg, 58%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf - 0,54; temperatura topnienia = 228°C (rozkład).
Przykład 6.78.N-{Na,N®-bis-[O-(3,4,6-tri-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -batracylina
Związek 1.37 (69 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez powtórne wytrącanie z metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (109,3 mg, 94%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,52; temperatura topnienia = 180°C (rozkład).
183 574
Przykład 6.79. N-{Na,NE-bis-[O-(Z,3,4,6-tetra-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo]-batracylina
Związek 1.38 (69 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 z eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (99,2 mg, 84%); TLC [chlorek metylenu/metanol 10:1]: Rf = 0,73; temperatura topnienia = 188°C (rozkład).
Przykład 6.80. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-(l-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.42 (75,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (22 mg, 18%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,33; temperatura topnienia = 194-195°C (rozkład).
Przykład 6.81. Sól disodowa N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy feny loamino-tiokarbony lo]-lizylo-D-alany lo}-batracy liny
Związek 1.43 (77,3 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy (99,7 mg, 81%); TLC [metanol]: Rf = 0,80; temperatura topnienia = 230°C (rozkład).
Przykład 6.82. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hy droksy feny loamino-tiokarbony lo] -lizylo-D-alany lo} -batracy lina
Związek 1.44 (72,2 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 17:1]. Otrzymano żółte kryształy (29,4 mg, 25%); TLC [chlorek metylenu/metanol 3:1]: Rf= 0,23; temperatura topnienia = 201-202°C.
Przykład 6.83. N-{Nł,NE-bis-[O-(3,4-didezoksy-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.52 (52,6 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 17:1], Otrzymano żółte kryształy (38,8 mg, 37%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,40; temperatura topnienia = 175°C.
Przykład 6.84. N- {N',Ne-bis- [O-(a-D-mannopiranozylo)-4-hy droksy fenyloamino-tiokarbony lo] lizylo-D-alany lo} -batracy lina
Związek 1.39 (59,7 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1—>1:1], Otrzymano żółte kryształy (52 mg, 48%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1 ]: Rf = 0,10; temperatura topnienia = 196°C.
Przykład 6.85. N-{Nx,NE-bis-[O-(3,4-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-ałanylo}-batracylina
Związek 1.31 (79 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.2 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1], Otrzymano żółte kryształy (77,6 mg, 69%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 15:3:0,2]: Rf = 0,33; temperatura topnienia = 186°C.
Przykład 6.86. N-{Na,NE-bis-[O-(4-O-(P-D-galaktopiranozylo)-(3-D-glukopiranozy lo-4-hy droksy fenyloamino-tiokarbonylo] -lizylo-D-alany lo} -batracy lina
Związek 1.56 (95,4 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem pozostałość przemyto dokładnie gorącym metanolem (50 ml). Otrzymano żółte kryształy (102,8 mg, 73%); TLC [metanol]: Rf = 0,27; temperatura topnienia = 225-226°C (rozkład).
183 574
Przykład 6.87. Sól disodowa Ν-{Ν“,Νε -bis-[O-(4-O-(3'-siarczano-|3-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozylo-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek 1.57 (117,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (152,8 mg, 95%); temperatura topnienia = 232°C (rozkład).
Przykład 6.88. N-{Na,N6-bis-[O-(4-O-(3'-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozylo-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.58 (98,4 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (118,2 mg, 83%); TLC [chlorek metylenu/metanol 1:1]: Rf = 0,58; temperatura topnienia = 221°C (rozkład).
Przykład 6.89. N-{Na,NE-bis-[O-(2-O-metylo-4-O-(3'-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.59 (101,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.13 (67,7 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 15:1—>10:1—>5:1]. Otrzymano żółte kryształy (101,3 mg, 70%); TLC [chlorek metylenu/metanol 2:1]: Rf = 0,58; temperatura topnienia = 233°C (rozkład).
Przykłady 7.1-7.13
Wzór ogólny
(n = 0, 1, 2)
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 4.1.a) wychodząc z innych koniugatów aminokwasowych lub peptydowych batracyliny lub z batracyliny.
Przykład 7.1. N-{N-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -D-alany lo } -batracylina
Związki wyjściowe: węglowodan z przykładu 1.2, koniugat aminokwasu z przykładu 2.3.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1]. Suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody. Wydajność: 42%; TLC: [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2]; Rf = 0,31.
Przykład 7.2. Sól sodowa N-{N-[O-(3-O-karboksymetylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-alanylo}-batracyliny
Związki wyjściowe: węglowodan z przykładu 1.10, koniugat aminokwasu z przykładu 2.3.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3]. Suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody, a następnie przekształcenie w sól sodową z 0,1 N roztworem wodorotlenku sodowego. Wydajność: 43%; TLC: [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5]; Rf = 0,14.
183 574
Przykład 7.3. N-{N-[O-(p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]serylo-D-alanylo} -batracylina
Związki wyjściowe: β-L-fukozyd p-aminofenylu, koniugat aminokwasu z przykładu 2.18.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3]. Suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody. Wydajność: 93%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3; Rf = 0,28]. FAB-MS: m/z = 705 = M + 1.
Przykład 7.4.N-{N-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-alany lo-D-alanylo} -batracylina
Związki wyjściowe: β-3-L-fukozyd p-aminofenylu, koniugat aminokwasu z przykładu 2.19.
Oczyszczanie przez ucieranie z metanolem i wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu eterem. Wydajność: 65%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf=0,78],
Przykład 7.5. N-{N-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-glutamy lo-D-alanylo} -batracylina
Związki wyjściowe: β-L-fiikozyd p-aminofenylu, koniugat aminokwasu z przykładu 2.20.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,4; potem ten sam układ 15:6:0,6]. Suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody. Wydajność: 92%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8; Rf = 0,55],
Przykład 7.6.N-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -batracylina
250 mg (1 mmol) batracyliny rozpuszczono w 50 ml dioksanu i po dodaniu 184 μΐ tiofosgenu mieszaninę mieszano w 20°C przez 2 godziny. Zatężono ją, a pozostałość przemyto eterem i przesączono. Pozostałość na filtrze wysuszono pod wysoką próżnią przez 16 godzin i rozpuszczono w 30 ml dimetyloformamidu. Dodano 312 mg (1 mmol) węglowodanu z przykładu 1.10 i 500 μΐ etylodiizopropyloaminy i mieszaninę poddawano obróbce ultradźwiękowej przez 4 godziny. Następnie zatężono ją, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2; potem ten sam układ 15:6:0,6]. Odpowiednie frakcje zatężono i liofilizowano z dioksanu/wody. Wydajność: 363 mg (60%); [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:6:0,6; Rf = 0,38],
Przykład 7.7. N-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo)batracylina
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 7.6 wychodząc z batracyliny i węglowodanu z przykładu 1.2.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1). Wydajność: 58%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2; Rf= 0,39]. FAB-MS: m/z = 561 = M + 1.
Przykład 7.8. N-{N-[Q-(3,4-di-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo]-D-alanylo} -batracylina
Związek 1.31 (37,5 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.3 (32 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 30:1). Otrzymano żółte kryształy (49,3 mg, 75%); [TLC:octan etylu/etanol 2:1 Rf = 0,81]; temperatura topnienia = 185°C (rozkład).
Przykład 7.9. N-{N-[O-(2,3,4-tri-O-metylo-[LD-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -D-alany lo } -batracylina
Związek 1.34 (34,5 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.3 (32 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 40:1—>15:1). Otrzymano żółte kryształy (54,9 mg, 81%); [TLC chlorek metylenu/metanol 20:1: Rf = 0,15]; temperatura topnienia = 190°C (rozkład).
183 574
Przykład 7.10. N-{N-[O-(3-O-metoksykarbonylometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-alanylo}-batracylina
Związek 1.42 (37,8 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.3 (32 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 20:1—>10:1). Otrzymano żółte kryształy (44,3 mg, 68%); TLC [etanol]: Rf = 0,85; temperatura topnienia = 195°C (rozkład).
Przykład 7.11. Sól sodowa N-{N-[O-(3-O-karbamoilometylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-alanylo} -batracyliny
Związek 1.43 (38,6 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.8 (82 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie przez ponowne wytrącanie z metanolu/chlorku metylenu 1:1 eterem dietylowym. Otrzymano żółte kryształy (63,8 mg, 89%); TLC [etanol]: Rf = 0,15; temperatura topnienia = 217°C (rozkład).
Przykład 7.12. N-{N-[O-(3-O-karbamoilometylo-[3-D-galaktopira-nozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -D-alany lo} -batracylina
Związek 1.44 (37,8 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.3 (32 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 20:1—>10:1—>5:1). Otrzymano żółte kryształy (20 mg, 29%); TLC [etanol]: Rf = 0,15; temperatura topnienia = 184°C (rozkład).
Przykład 7.13. N-{N-[O-(3-O-p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -D-alany lo} -batracylina β-L-fukopiranozyd p-aminofenylu (28,1 mg, 0,11 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 2.3 (32 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 6.26. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (octan etylu/eter naftowy 2:1—>5:1). Otrzymano żółte kryształy (49,8 mg, 81%); TLC [etanol]: Rf = 0,50; temperatura topnienia = 173°C.
Przykłady 8.1-8.12.
Wzór ogólny
R
Przykład 8.1. Trifluorooctan N-{NE-[2-chloro-4-[O-(3-O^-L-fukozylo)-4-hydroksy-feny loamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alany lo}-batracyliny
8.1 .a) N-{Nα-(tert-butoksykarbonylo)-Nε-[2-chloro-4-[O-(3-O-β-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
265 mg (0,98 mmola) 3-O-metylo-β-L-fίlkozydu p-aminofenylu (przykład 1.2) i 181 mg (0,98 mmola) chlorku cyjanurowego rozpuszczono w 50 ml dioksanu/wody 1:1, mieszaninę schłodzono do -5°C i po dodaniu 83 mg wodorowęglanu sodowego mieszano w tej temperaturze przez 15 minut. Następnie dodano 538 mg (0,98 mmola) N-[N“-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-batracyliny (przykład 2.4) rozpuszczonej w 14 ml dimetyloformamidu i kolejną porcję 83 mg wodorowęglanu sodowego i mieszaninę pozostawiono do ogrzania się
183 574 do temperatury pokojowej. Po mieszaniu w 20°C przez 16 godzin mieszaninę zatężono, a pozostałość wymieszano z wodą. Mieszaninę przesączono podciśnieniowo, a pozostałość na filtrze wysuszono pod wysoką próżnią uzyskując 890 mg (96%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 10:1 Rf = 0,26].
8.1) Trifluorooctan N-{Ne-[2-chloro-4-[O-(3-O-[3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino] -triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo } -batracy liny
100 mg (0,11 mmola) związku z przykładu 8.1.a mieszano w mieszaninie 5 ml bezwodnego kwasu trifluorooctowego i 5 ml chlorku metylenu w 0°C przez 30 minut. Mieszaninę zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1,5:0,15). Po wytrąceniu z metanolu/eteru otrzymano 41 m (95%) docelowego produktu; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2: Rf = 0,26]; FAB-MS: m/z = 829 = Μ + 1.
Przykład 8.2. Trifluorooctan N-{NE-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
8.2.a) N- {Na-(tert-butoksykarbonylo)-Ns-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracylina
100 mg (0,11 mmola) związku z przykładu 8.1.a rozpuszczono w 3 ml dioksanu. Dodano 60 mg węglanu potasu i 6,5 ml 0,1 N roztworu etanoloaminy w dioksanie i mieszaninę mieszano w 80°C przez 18 godzin. Zatężono ją następnie a pozostałość mieszano z wodą. Mieszaninę przesączono, a pozostałość na filtrze oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1). Po zatężeniu odpowiednich frakcji i wysuszeniu pod wysoką próżnią otrzymano 83 mg (80%) docelowego związku; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2: Rf = 0,23].
8.2) Trifluorooctan N-{N6-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny mg (0,07 mmola) związku z przykładu 8.2.a odblokowano analogicznie jak w przykładzie 8.1. Oczyszczanie przeprowadzono metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2], Przeprowadzone następnie wytrącanie z metanolu/eteru prowadzi do związku docelowego z wydajnością 90%. FAB-MS: m/z = 854 = Μ + 1.
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 8.1.
Przykład 8.3. Trifluorooctan N-{N®-[2-chloro-4-(O-(2-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino)-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracy liny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.1;
Wydajność: 76%; FAB-MS: m/z = 829 = M + 1.
Przykład 8.4. Trifluorooctan N-{Ne-[2-chloro-4-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: β-L-fukozyd p-aminofenylu;
Wydajność: 36%;FAB-MS: m/z = 815 = M+1;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,4: Rf = 0,44].
Przykład 8.5. Trifluorooctan N-{Ne-[2-chloro-4-[O-(3-dezoksy-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.6;
Wydajność: 56%; FAB-MS: m/z = 799 = M + 1;
[TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 15:1:0,2: Rf = 0,54],
Następujące glikokoniugaty wytworzono analogicznie jak w przykładach 8.1.a, 8.2.a i 8.2 z koniugatu batracyliny z peptydem z przykładu 2.4 lub z izomeru L-alanylowego, który wytwarza się w następujący sposób.
Przykład 8.6. Trifluorooctan N-{N6-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(2-O-metylo-^L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.1;
Wydajność: 78%; FAB-MS: m/z = 854 = M + 1;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf = 0,33].
183 574
Przykład 8.7. Trifluorooctan N-{NE-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-dezoksy-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-yl]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.4;
Wydajność: 38%;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf = 0,4].
Przykład 8.8. Trifluorooctan N-{NE-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-dezoksy-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.6;
Wydajność: 77%; FAB-MS: m/z = 824 = M + 1;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf = 0,37].
Przykład 8.9. Trifluorooctan Ν-{Νε ’[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino)triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: β-L-iukozyd p-aminofenylu;
Wydajność: 52%; FAB-MS: m/z = 840 = M + 1;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf= 0,30].
Przykład 8.10. Trifluorooctan N-{N8-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanylo}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.2;
Wydajność: 88%;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:3:0,3: Rf = 0,35].
Przykład 8.11. Trifluorooctan N-{NE-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(2-O-metylo-fyL-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanyło}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.1;
Wydajność: 58%;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf= 0,40].
Przykład 8.12. Trifluorooctan N-{NE-[4-hydroksyetyloamino-2-[O-(4-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino]-triazyn-6-ylo]-lizylo-D-alanyło}-batracyliny
Związek wyjściowy: węglowodan z przykładu 1.4;
Wydajność: 66%; FAB-MS: m/z = 854 = M + 1;
[TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf= 0,37].
Przykład 9.1. Trifluorooctan N-(D-alanylo)-chinolonu-a
O
9.1 .a) N-[N-(tert-butoksykarbonylo)-D-alanylo]-chinolon-a
N-(tert-butoksykarbonylo)-D-alaninę (3,6 g, 19,2 mmola) i 2-izobutoksy-l-izobutoksykarbonylo-l,2-dihydro-chinolinę (5,8 g, 19,2 mmola) rozpuszczono w 200 ml dimetyloformamidu. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez 8 godzin dodano chinolon-a (4 g, 9,6 mmola) i 3,3 ml etylodiizopropyloaminy i mieszaninę
100
183 574 poddawano obróbce ultradźwiękowej przez 10 godzin. Zatężono ją, a pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu i produkt wytrącono eterem. Po przesączeniu, przemyciu eterem i wysuszeniu pod wysoką próżnią otrzymano 4,58 g (81%) docelowego produktu, który poddano reakcji bez dalszego oczyszczania.
9.1) Trifluorooctan N-(D-alanylo)-chinolonu-a
4,56 g (7,75 mmola) związku z przykładu 9.1.a rozpuszczono w 50 ml chlorku metylenu i 50 ml bezwodnego kwasu trifluorooctowego w 0°C i roztwór mieszano w tej temperaturze przez 1 godzinę. Zatężono go, a pozostałość destylowano następnie z chlorkiem metylenu i produkt wytrącono z metanolu z eterem. Otrzymano 4,07 g (87%) krystalicznego docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 15:1:0,2: Rf = 0,34].
Przykład 9.2. Trifluorooctan N-(alanylo)-chinolonu-a
Syntezę wykonano w analogiczny sposób jak w przypadku izomeru w przykładzie 9.1.
Przykład 9.3. Trifluorooctan N-(lizylo-p-alanylo)-chinolonu-a
9.3.a) N-[Na,N6-bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolon-a
341 mg (0,984 mmola) N“NE-bis-(tert-butoksykarbonylo)lizyny rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu, po czym dodano 200 mg (1,48 mmola) N-hydroksybenzotriazolu i 227 mg (1,18 mmola) chlorowodorku N'-(3-dimetyloaminopropylo)-N-etylokarbodiimidu w 0°C. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 10°C przez 5 godzin dodano 432 mg (0,82 mmola) związku z przykładu 9.1 i mieszaninę mieszano w 20°C przez kolejne 2 godziny. Zatężono ją a pozostałość wymieszano 3 razy z 50 ml wody. Pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu i mieszaninę wysuszono nad siarczanem sodu. Wytrącanie eterem prowadzi do 516 mg (78%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda 10:1: Rf- 0,55].
183 574
101
9.3) Trifluorooctan N-(lizylo-p-alanylo)-chinolonu-a
512 mg (0,63 mmola) związku z przykładu 9.3.a odblokowano analogicznie jak w przykładzie 9.1. Wytrącono go z octanu etylu eterem. Wydajność: 479 mg (90%); [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5: Rf = 0,3].
Przykład 9.4. Di-trifluorooctan N-(lizylo-alanylo)-chinolonu-a
Syntezę wykonano w analogiczny sposób jak w przypadku izomeru w przykładzie 9.3.
Przykład 9.5. N-[N“-bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolon-a
Η N
COOK
9.5.a) N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolon-a
1,57 g (3,36 mmola) Na-(tert-butoksykarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)lizyny rozpuszczono w 25 ml dimetyloformamidu i dodano 600 mg (5,04 mmola) N-hydroksysukcynimidu oraz 820 mg (4,03 mmola) N'-(3-dimetyloaminopropylo)-N-etylokarbodiimidu w 0°C. Po 3 godzinach powstały mocznik odsączono, dodano 1,5 g (2,86 mmola) związku z przykładu 9.1 do przesączu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Resztki mocznika odsączono, a przesącz oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 97,5:2,5; potem ten sam układ 90:10]. Produkt wytrącono następnie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Wydajność: 1,5 g (56%); [TLC: chlorek metylenu/metanol 9:1; Rf = 0,47].
9.5) N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolon-a
Odszczepianie Fmoc ze związku z przykładu 9.5.a) piperydyną w dimetyloformamidzie. Wytrącanie surowego produktu z dimetyloformamidu eterem. Wydajność: 72%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,43].
Przykład 9.6. Trifluorooctan N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolonu-a
102
183 574
Odszczepianie Boc ze związku z przykładu 9.5.a) analogicznie jak w przykładzie 9.1. Wytrącanie surowego produktu z metanolu/eteru. Wydajność: 80%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5: Rf= 0,36].
Przykład 9.7. N-[Na-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-alanylo]-chinolon-a
Syntezę wykonano w analogiczny sposób jak w przypadku izomeru w przykładzie 9.5.
Przykład 9.8. Di-trifluorooctanN-(lizylo)-chinolonu-a
9.8.a) Ν-[Να,Νε -bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo]-chinolon-a
1317 mg (3,8 mmola) N“,Nr-bis-(tert-butoksykarbonylo)-lizyny połączono z chinolonem-a w sposób opisany w przykładzie 9.1.a. Oczyszczanie przeprowadzono metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/arnoniak (17%) 15:1:0,1]. Otrzymano 1010 mg (71%) docelowego produktu.
9.8) Di-trifluorooctan N-(lizylo)-chinolonu-a
1005 mg (1,347 mmola) związku z przykładu 9.8.a odblokowano analogicznie jak w przykładzie 9.1. Po wytrącaniu z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem otrzymano 966 mg (93%) krystalicznego docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:5:3: Rf = 0,33].
Przykład 9.9.Di-trifluorooctanN-(D-lizylo)-chinolonu-a
Syntezę wykonano w analogiczny sposób jak w przypadku izomeru w przykładzie 9.8.
Przykład 9.10. N-[N“-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo]-chinolon-a
183 574
103
9.10.a) N-[N“-(tert-butoksykarbonylo)-Ne-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-chinolon-a
1350 mg (2,88 mmola) Na-(tert-bntoksykarbonylo)-N8-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizyny połączono z chinolonem-a w sposób opisany w przykładzie 9.8.a. Oczyszczanie przeprowadzono metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:1:0,1, potem ten sam układ 15:2:0,2]. Otrzymano 1025 mg (82%) docelowego produktu.
9.10) N-[N“-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo]-chinolon-a
Odszczepianie Fmoc ze związku z przykładu 9.10.a analogicznie jak w przykładzie 9.5. Dwukrotne strącanie surowego produktu z metanolu eterem. Wydajność: 86%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,48].
Przykład 9.11. Trifluorooctan N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-chinolonu-a
Odszczepianie Boc ze związku z przykładu 9.10.a analogicznie jak w przykładzie 9.1. Dwukrotne strącanie surowego produktu z metanolu eterem. Suszenie sublimacyjne z dioksanu/wody. Wydajność: 92%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf=0,44].
Przykłady 10.1-10.3.
Wzór ogólny
104
183 574
Przykład 10.1. N-{NE-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbony lo] -lizy lo-D-alany lo } -chinolon-a
10.1 .a) N-IN^tert-butoksykarbonyloj-N^O-^-O-karboksymetylo-P-L-fukozytoj^hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-chinolon-a μΐ (0,28 mmola) tiofosgenu dodano do 78 mg (0,25 mmola) 3-O-karboksymetyΙο-β-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.10) w 15 ml dioksanu/wody 1:1 z mieszaniem. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20 °C przez 10 minut zatężono ją, a pozostałość wysuszono pod wysoką próżnią przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian sprzęgnięto następnie w absolutnym dimetyloformamidzie ze 180 mg (0,25 mmola) N-[N'-(tert-butoksykarbonylo)-lizylo-D-alanylo]-chinolonu-a (przykład 9.5) w obecności 86 μΐ etylodiizopropyloaminy. Po dwóch wytrącaniach surowego produktu z chlorku metylenu/eteru, a następnie mieszaniu z wodą i suszeniu sublimacyjnym z dioksanu/wody otrzymano 210 mg (78%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rt - 0,62].
10.1) N- {Νε- [0-(3 -O-karboksymetylo- β-L-fukozy lo)-4-hy droksy-feny loaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo} -chinolon-a
208 mg (0,193 mmola) związku z przykładu 10. La mieszano z 10 ml bezwodnego kwasu trifluorooctowego w 10 ml chlorku metylenu w 0°C przez 1 godzinę. Mieszaninę zatężono, a pozostałość destylowano następnie z 15 ml metanolu i chromatografowano stosując chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:0,8. Po wytrąceniu z dimetyloformamidu eterem otrzymano 52 mg (28%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: R,-0,53],
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 10.1 z częściowo chronionych koniugatów peptydu w przykładach 9.5,9.719.10.
Przykład 10.2. N-{N6-[O-(3-O-metylo-|3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizylo-alany lo} -chinolon-a
Związki wyjściowe: węglowodan z przykładu 1.2; koniugat peptydu z przykładu 9.7.
Oczyszczanie związku pośredniego przez kilkakrotne wytrącanie z metanolu eterem. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5; potem ten sam układ 15:8:0,8. Wydajność: 20%; [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8: Rf = 0,15].
Przykład 10.3. N-{Ns-[O-(3-O-metylo-(3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizylo} -chinolon-a
Związki? wyjściowe: węglowodan z przykładu 1.2; koniugat peptydu z przykładu 9.10.
Oczyszczanie związku pośredniego przez wytrącanie z metanolu eterem. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej w stadium końcowym z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8. Wydajność: 39%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,33].
Przykłady 11.1-11.18.
Wzór ogólny
η = 0, 1
183 574
105
Przykład 11.1. Ν-{Ν“,Νε bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloammotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-chinolon-a mg (0,19 mmola) 3-O-metylo-P-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.2) przekształcono najpierw w izotiocyjanian w sposób opisany w przykładzie 10.1.a, po czym produkt sprzęgnięto w 5 ml dimetyloformamidu z 68 mg (0,08 mmola) difluorooctanu N-[lizylo-D-alanylo]-chinolonu-a (przykład 9.3) w obecności 55 pl etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin i zatężono, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 85:15:1,5]. 62 mg (6%) docelowego produktu otrzymano przez wytrącanie z metanolu eterem. [TLC: chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:2: Rt = 0,5]; MS-MALDI: m/z = 1242 = M + 1.
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 11.1 z koniugatów peptydu w przykładach 9.3,9.4, 9.8 i 9.9.
Przykład 11.2. N-{Na,Nsbis-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo}-chinolon-a
Związki wyjściowe: 50 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2; 0,08 mmola koniugatu peptydu z przykładu 9.4.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1] i wytrącanie z metanolu eterem. Wydajność: 79%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rt = 0,42].
Przykład 11.3. N-{N“,N°-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo}-chinolon-a
Związki wyjściowe: 52 mg (0,166 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 0,07 mmola koniugatu peptydu z przykładu 9.4.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:2] i mieszanie pozostałości z metanolem. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5: Rf = 0,62].
Przykład 11.4. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-chinolon-a
Związki wyjściowe: 44 mg (0,14 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 0,06 mmola koniugatu peptydu 9.3.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:2] i mieszanie pozostałości z metanolem. Wydajność: 57%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5: Rf = 0,62].
Przykład 11.5. N-{N“N6-bis-[O-(a-L-ramnozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -lizy lo-alany lo } -chinolon-a
Związki wyjściowe: 44 mg (0,166 mmola) węglowodanu z przykładu 1.21; 0,07 mmola koniugatu peptydu z przykładu 9.4.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 80:20:1] i mieszanie pozostałości z metanolem/eterem. Wydajność: 90 mg (89%); [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rt = 0,51]; MS-ESI: m/z = 1212 = M+1.
Przykład 11.6. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizylo} -chinolon-a
Związki wyjściowe: 70 mg (0,258 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2; 0,11 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 9.8.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1] i wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Wydajność: 41%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf= 0,65j].
106
183 574
Przykład 11.7. N-{N“,N®-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -D-lizy lo } -chinolon-a
Związki wyjściowe: 50 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2; 0,08 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 9.9.
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1] i wytrącanie z chlorku metylenu/metanolu 1:1 eterem. Mieszanie pozostałości z wodą. Wydajność: 67%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,65]; MS-FAB: m/z = 1169 = M + 1.
Przykład 11.8. Sól disodowa Ν-{Ν“,Νε -bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-a
Związki wyjściowe: 50 mg (0,16 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 0,07 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 9.8.
Po zatężeniu mieszaniny reakcyjnej pozostałość rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu i dodano 8 ml 0,lN roztworu wodorotlenku sodowego, mieszaninę mieszano w 20°C przez 2 godziny. Po ponownym zatężeniu pozostałość rozpuszczono w wodzie i pH doprowadzono do 5. Produkt liofilizowano i ucierano z metanolem, a następnie metanolem/eterem. Otrzymano w ten sposób 68 mg (65%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,26].
Przykład 11.9. Sól disodowa N-{N“,Ns-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-a-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-D-lizylo}-chinolonu-a
Związki wyjściowe: 100 mg (0,32 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 0,13 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 12.9.
Po zatężeniu mieszaniny reakcyjnej pozostałość rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu i dodano 16 ml 0,lN roztworu wodorotlenku sodowego, mieszaninę mieszano w 20°C przez 2 godziny. Po ponownym zatężeniu pozostałość rozpuszczono w wodzie i pH doprowadzono do 5. Produkt liofilizowano i ucierano z metanolem, a następnie metanolem/eterem, otrzymując 160 mg (77%) docelowego związku. Temperatura topnienia: 218-220°C; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5: Rf = 0,69].
Przykład 11.10. N-{N^NE-bis-[O-(3-O-metylo-a-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -D-lizy lo} -chinolon-a
Związki wyjściowe: 50 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.3; 0,08 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 9.9.
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 11.7. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:1], a następnie wytrącono z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Wydajność: 66%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,62].
Przykład 11.11. Ni{Na,Ns-bis-[O-(a-L-ramnozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo]-D-lizylo} -chinolon-a
Związki wyjściowe: 50 mg (0,19 mmola) węglowodanu z przykładu 1.21; 0,08 mmola koniugatu aminokwasu z przykładu 9.9.
Otrzymano analogicznie jak w przykładzie 11.7. Wydajność: 57%; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2: Rf = 0,63].
Przykład 11.12. Sól sodowa N-{N“NE-bis-[O-(3-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo] -D-lizy lo} -chinolonu-a mg (0,05 mmola) związku z przykładu 11.7 zawieszono w wodzie i przekształcono w sól sodową z 1 równoważnikiem 0,1 N roztworu wodorotlenku sodu. Po suszeniu sublimacyjnym otrzymano docelowego związku.
Przykład 11.13. Sól sodowa N-{N“,NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-galaktopiranozylo)-4-hy droksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizy lo} -chinolonu-a
Tiofosgen (33,5 ml, 0,44 mmola) dodano do roztworu związku 1.25 (62.8 mg, 0,22 mmola) w dioksanie/wodzie 1:1 (10 ml) z mieszaniem. Po 10 minutach mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość wysuszono pod olejową pompą próź183 574
107 niową przez 1 godzinę. Uzyskany izocyjanian rozpuszczono w absolutnym dimetyloformamidzie (10 ml), po czym dodano związek 9.8 (77,4 mg, 0,1 mmola) i etylodiizopropyloaminę (0,5 ml). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 10:10:l->metanol/amoniak (25%) 20:1]. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). 0,05N roztworu wodorotlenku sodu wkroplono do zawiesiny z mieszaniem aż do uzyskania klarownego roztworu (pH < 10). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (39,7 mg, 32%); [a]D 20 = +25,8° (c = 0,26/H2O).
Przykład 11.14. Sól sodowa N-{NMNe-bis-[O-[4-O-(3'-O-metylo-p-L-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-a
Związek 1.58 (98,4 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 9.8 (77,4 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 11.13 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (62,5 mg, 40%); [a]D 20 = +12,9° (c = 0,26/H2O).
Przykład 11.15. Sól sodowa N-{Na,N®-bis-[O-[2-O-metylo-4-O-(3'-O-metylo-P-L-galaktopiranozylo)-p-D-glukopiranozylo]-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-a
Związek 1.59 (101,5 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 9.8 (77,4 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 11.13. W wyniku czyszczenia przez dwukrotne wytrącanie z mieszaniny metanol/chlorek metylenu 1:1 eterem di etylowym oraz ekstrakcję przez gotowanie z etanolem otrzymano żółte kryształy, które przekształcono w sól sodową w podany sposób, otrzymując żółtą bezpostaciową substancję stałą (51,1 mg, 32%); [a]D 20 = +27,9° (c = 0,24/H2O).
Przykład 11.16. Sól sodowa N-{N“,N®-bis-[O-(3-O-metylo-[3-L-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-lizylo}-chinolonu-a
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 9.9 (77,4 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 11.13 i oczyszczano. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (77,3 mg, 63%); [a]D 20 = -23,8° (c = 0,63/H2O).
Przykład 11.17.
Sól sodowa N- {Na,h^-bis-fO-J-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -D-lizy lo} -chinolonu-a
Związek 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji koniugatem peptydu 9.9 (77,4 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 11.13 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (33,6 mg, 27%); [a]D 20 = +0,7° (c = 0,28/H2O).
Przykład 11.18. Sól sodowa N-{NcUiE-bis-[O-(4-O-(3'-O-metylo-[3-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-D-lizylo}-chinolonu-a:
Związek 1.58 (98,4 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 9.9 (77,4 mg, 0,1 mmola) w sposób opisany w przykładzie 11.13 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (63,0 mg, 41%); [a]20 = -21,8° (c = 0,22/H2O).
Przykłady 12.1-12.15
108
183 574
Przykład 12.1. N-{N'-[O-(3-O-metylo-P-L-fiikozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -D-alany lo} -chinolon-a:
447 mg (1,66 mmola) 3-O-metylo-P-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.2) przekształcono najpierw w izotiocyjanian w sposób opisany w przykładzie 10.1.a, po czym produkt sprzęgnięto w 40 ml dimetyloformamidu z 1 g (1,66 mmola) trifluorooctanu N-[D-alanylo)-chinolonu-a, (przykład 9.1) w obecności 568 pl etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, po czym zatęzono ją, a pozostałość oczyszczano przez kilkakrotne wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Pozostałość na filtrze dwukrotnie mieszano z wodą. Otrzymano 876 mg (66%) docelowego produktu. Temperatura topnienia: 198°C; [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,63].
Następujące glinokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 12.1 koniugatów aminokwasów z przykładów 9.1 i 9.2:
Przykład 12.2. N-{N'-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] alany lo} -chino lon-a:
Związek wyjściowy: 25 mg (0,092 mmola) węglowodanu z przykładu 1.2. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:1], wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem i mieszanie pozostałości na filtrze z wodą. Wydajność: 53 mg (52%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf= 0,65].
Przykład 12.3. Sól sodowa N-{N'-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-feny loaminotiokarbonylo] -D-alany lo} -chinolonu-a:
Związki wyjściowe: 523 mg (1,67 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 840 mg (1,39 mmola) związku z przykładu 12.1
Po 6 godzinach reakcji mieszaninę zatężono, a pozostałość mieszano z wodą. Po chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:8:0,8; potem ten sam układ 10:1:1], a następnie suszeniu sublimacyjnym z dioksanu/wody produkt rozpuszczono w wodzie, 1 równoważnik 0,lN roztworu wodorotlenku sodowego dodano i ponownie przeprowadzono liofilizację. Wydajność: 525 mg (45%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf= 0,39].
Przykład 12.4. N-{Ν'-[Ο-ΐχ-L-ramnozy lo)-4-hydroksy-feny loaminotiokarbony lo]-D-alany lo} chinolon-a:
Związek wyjściowy: 20 mg (0,076 mmola) węglowodanu z przykładu 1.21
Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 90:10:11] i wytrącanie z metanolu eterem. Wydajność: 20 mg (34%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,42].
Następujące glikokoniugaty otrzymano z częściowo chronionych koniugatów N-(lizylo)chinolonu-a i koniugatów N-(lizylo-D-alanylo)-chinolonu-a:
Przykład 12.5. N-{Na-[O-(3-O-metylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]lizylo} -chinolon-a:
12.5 a) N-fNP-fO^S-O-metylo-P-L-fukozyloj^-hydroksyfenyloamino-tiokarbonyloj-N-ffluorenylo-9-metoksykarbony lo] -lizylo} -chinolon-a:
mg (0,34 mmola) 3-O-metylo-P-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.2) przekształcono najpierw w izotiocyjanian w sposób opisany w przykładzie 10.1 .a, po czym produkt sprzęgnięto w 20 ml dimetyloformamidu z 300 mg (0,34 mmola) trifluorooctanu N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-łizylo]-chinolonu-a (przykład 9.11) w obecności 116 μΐ etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, po czym zatężono ją a pozostałość oczyszczano przez wytrącanie z chlorku metylenu eterem. Pozostałość na filtrze mieszano następnie z wodą i liofilizowano z dioksanu/wody. Otrzymano 290 mg (79%) docelowego produktu. [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,61].
183 574
109
12.5) N-{Na-[O-(3-O-metylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]lizylo}-chinolon-a:
288 mg (0,267 mmola) związku z przykładu 12.5. a rozpuszczono w 20 ml chlorku metylenu i dodano 8 ml piperydyny. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej w 20°C przez 30 minut zatężono ją i pozostałość wytrącono z chlorku metylenu eterem. Produkt oczyszczano metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:2]. Pozostałość mieszano z eterem i liofilizowano z wody. Otrzymano 90 mg (79%) docelowego produktu. [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:5 Rf = 04].
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 12.5 z koniugatów z przykładu 9.11 i 9.6:
Przykład 12.6. Sól disodowa N-{N“-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-a:
Związki wyjściowe; 63 mg (0,2 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10; 158 mg (0,18 mmola) związku z przykładu 9.11
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5; potem ten sam układ 10:10:1], a w stadium końcowym przez mieszanie szereg razy z metanolem i przemywanie pozostałości na filtrze eterem. Wydajność: 44%. Produkt zawieszano następnie w wodzie i sól disodową wytwarzano z 2 równoważnikami 0,lN roztworu wodorotlenku sodu, po czym roztwór liofilizowano. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5 Rf = 0,34].
Przykład 12.7. N-{Na-[O-(3-karboksymetylo-p-fukozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo] -lizylo-D-alany lo} -chinolon-a:
Związki wyjściowe: 147 mg (0,47 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10;
448 mg (0,47 mmola) związku z przykładu 9.6
Oczyszczanie związku pośredniego przez dwukrotne wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem; mieszanie pozostałości na filtrze z wodą (wydajność: 92%). Oczyszczanie w stadium końcowym metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 10:10:2]; wytrącanie z dimetyloformamidu eterem. Wydajność: 59%. [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 10:3:1,5 Rf = 0,4].
Przykład 12.8. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3-O-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonyIo]-lizylo}-chinolonu-a:
Związki wyjściowe: związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola); koniugat peptydu 9.11 (180,0 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1—>7:1—>2:1). Otrzymano żółte kryształy (145,7 mg, 67%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,4. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono następnie w sposób opisany w przykładzie 4.5, po czym produkt oczyszczano. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). Do mieszanej zawiesiny wkroplono 0,lN kwas solny do uzyskania klarownego roztworu (pH> 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (119,4 mg, 66%); [a]D 20 = +33,8° (c = 0,28/H2O).
Przykład 12.9. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3,6-di-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-a:
Związki wyjściowe: związek 1.32 (65,9 mg, 0,22 mmola);
koniugat peptydy 9.11 (180,0 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol 10:1—>7:1—>1:1]. Otrzymano żółte kryształy (115,0 mg, 52%), TLC [chlorek metylenu/metanol 51: Rf = 0,44. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono następnie w sposób opisany w przykładzie 4.5 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). 0,lN kwas solny wkroplono do mieszanej zawiesiny aż do uzyskania klarownego roztworu (pH > 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (94,3 mg, 51%); [a]D 20 = +44,2° (c = 0,34/H2O).
110
183 574
Przykład 12.10. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3-O-metylo-a-D-mannopiranozylo)4-hydroksy-fenylamino-tiokarbony lo] -lizylo } -chinolonu-a:
Związek wyjściowy: związek 1.40 (62,8 mg, 0,22 mmola);
koniugat peptydu 9.11 (180,0 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 10:1 —>5:1—>1:1). Otrzymano żółte kryształy (96,7 mg, 44%); TLC [chlorek metylenu/metanol 5:1]: Rf = 0,47. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono w sposób opisany w przykładzie 4.5 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). Do mieszanej zawiesiny wkroplono 0,lN kwas solny aż do uzyskania klarownego roztworu (pH > 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu uzyskano żółtą bezpostaciową substancję stałą (78,2 mg,43%); [a]D 20 = -157,2° (c = 0,30/H20).
Przykład 12.11. Chlorowodorek N-IN+fO-^-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-[3-D-glukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}chinolonu-a:
Związki wyjściowe: związek 1.58 (98,4 mg, 0,22 mmola);
koniugat peptydu 9.11 (180,0 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 20:10:l->10:10:l->metanol/amoniak (25%) 20:1]. Otrzymano beżowe kryształy (132,1 mg, 53%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 10:10:3]: Rf = 0,60. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono następnie w sposób opisany w przykładzie 4.5 i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). Do mieszanej zawiesiny wkroplono 0,lN kwas solny aż do uzyskania klarownego roztworu (pH> 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (90,0 mg, 42%); [a]D 20 = +192,2° (c = 0,27/H2O).
Następujące glikokoniugaty otrzymano w sposób opisany w przykładzie 12.1 wychodząc z niepodstawionego chinolonu-a:
Przykład 12.12. Sól disodowa N-(-O-(3-O-karboksymetylo-p-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)chinolonu-a:
Związki wyjściowe: 78,5 mg (0,25 mmola) węglowodanu z przykładu 1.10;
mg (0,167 mmola) chinolonu-a
Po 6 godzinach reakcji mieszaninę zatężono, a pozostałość rozpuszczono w dimetyloformamidzie i mieszano z 4 ml of a 0,lN roztworu wodorotlenku sodu przez 1 godzinę. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5. pH doprowadzono do 7 0,lN roztworu wodorotlenku sodu i przeprowadzono liofilizację. Wydajność: 60 mg (44%). [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,42] FAB-MS: m/z = 773 = M-2Na+ + 3H+.
Przykład 12.13. N-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-chinolon-a:
Związki wyjściowe: 32 mg (0,12 mmola) węglowodanu przykładu 1.2;
mg (0,12 mmola) chinolonu-a
Czas reakcji 2 godziny; oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/lodowaty kwas octowy 9:10:1); wytrącanie z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem. Wydajność: 59 mg (51%). [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,43].
Przykład 12.14. Chlorowodorek N-{N“-[O-(3-O-metylo-[LL-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo} chinolonu-a:
mg (0,1 mmola) związku z przykładu 12.5 rozpuszczono w wodzie i przekształcono w sól z 1 równoważnikiem 0,lN kwasu solnego. Po suszeniu sublimacyjnym otrzymano 88 mg docelowego związku.
183 574
111
Przykład 12.15. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]diamino-propionoilo} -chinolonu-a.
Glikokoniugat 12.5 otrzymano analogicznie jak w przykładzie 12.14 w kilku etapach wychodząc z kwasu Na-(tertbutoksykarbonylo)-Nl3-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-L-diaminopropionowego i chinolonu-a [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf- 0,3].
Przykład 13
Wzór ogólny
Przykład 13.1. N-{N'-[O-(3-O-metylo-^L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-D-alanylo}-chinolon-a:
13.1.a) Chinolon-b: kwas 4-amino-7-((3aRS,4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-heksahydro-izoindol-2-ilo)-l-cyklopropylo-6-fluoro-l,4-dihydro-8-metoksy-4-oxo-3-chinolinokarboksylowy .
170 mg (1,5 mmola) l,4-diazabicyklo[2,2,2]oktanu i 152 mg (1,1 mmola) (3aRS,4RS,7aSR)-4-amino-l,3,3a,4,7,7a-heksahydro-izoindolu dodano do 310 mg (1 mmol) kwasu 5-amino-l-cyklopropylo-6,7-difluoro-l,4-dihydro-8-metoksy-4-oxo-3-chinolinokarboksylowego w mieszaninie 4 ml acetonitrylu i 2 ml of dimetyloformamidu i mieszaninę refluksowano przez 1 godzinę. Zatężono ją pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość mieszano z około 20 ml wody i wytrącony osad odsączono podciśnieniowo i wysuszono w 100°C pod zmniejszonym ciśnieniem.
Wydajność: 301 mg (70% wielkości teoretycznej),
Temperatura topnienia: 237-239°C (z rozkładem),
13.1 .b) Trifluorooctan N-[D-alanylo]-chinolonu-B;
Docelowy związek otrzymano analogicznie jak w przykładzie 9.1 wychodząc ze związku 13.1.a i N-(tertbutoksykarbonylo)-D-alaniny.
13.1) N-{N'-[O-(3-O-metylo-P-L-fukozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-D-alanylo}-chinolon-b:
Docelowy związek otrzymano analogicznie jak w przykładzie 12.1 wychodząc ze związku 13.1.b i 3-O-metylo-P-L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.2.).
Przykład 14:
Wzór ogólny
112
183 574
Chinolon-c: kwas 8-(2-amino-5-metylo-8-azabicyklo[4,3,0]-non-3-en-8-ylo)-l-metylo7-fluoro-5-okso-5H-tiazolo[3,2-a]chinolino-4-karboksylowy
Przykład 14.1. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3-O-metylo-fyD-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-c:
14.1.a) Trifluorooctan N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizyło]-chinolonu-c:
Związki wyjściowe: Na-(tert-butoksykarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizyna (1,4 g, 3,0 mmola);
chinolon-c (820 mg, 1,9 mmola)
Związek pośredni wytworzono analogicznie jak w przykładzie 9.1.a. W wyniku powtórnego wytrącenia z etanolu/eteru dietylowego otrzymano blado żółte kryształy (1,37 g, 82%), z których związek 14.1. a uwolniono analogicznie jak w przykładzie 9.1.b. Otrzymano pomarańczowe kryształy (1,25 g, 74%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 30:10:1]: Rf = 0,7; temperatura topnienia 180°C.
14.a) Chlorowodorek N-{Nα-[O-(3-O-metylo-β-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -lizylo} -chinolonu-C:
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 14.La (178,4 mg, 0,2 mmola) analogicznie jak w przykładzie 12.5. Oczyszczanie związku pośredniego przeprowadzono metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 30:6:1->30:10:1]. Otrzymano blado żółte kryształy (97,0 mg, 44%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 30:10:1]: Rf = 0,23. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiano następnie w opisany sposób i produkt oczyszczono. Otrzymano żółte kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). 0,lN kwas solny wkroplono do mieszanej zawiesiny aż do uzyskania klarownego roztworu (pH> 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (75,8 mg, 41%); [a]D 20 +12,5° (c = 0,267/H2O).
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 14.1 z koniugatu peptydu 14. La:
Przykład 14.2. Chlorowodorek N-{Nc'-[O-(3-O-metylo-fyL-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-c:
Związki wyjściowe: związek 1.2 (59,5 mg, 0,22 mmola) koniugat peptydu 14.1.a (178,4 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 30:6:1—>30:10:1]. Otrzymano blado żółte kryształy (146,6 mg, 67%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 30:6:1]: Rf = 0,48. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono następnie w opisany sposób i produkt przekształcono w chlorowodorek. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (107,7 mg, 60%); [a]D 20 = +51,6° (c = 0,36/H2O).
Przykład 14.3. Sól disodowa N-{N“-[O(3-O-karboksymetylo-3-L-fukozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-c:
Glikokoniugat 14.4 analogicznie jak w przykładzie 12.6 w szeregu etapach wychodząc ze związku 14.La [FAB-MS: m/z = 911 = M-2Na+3H].
Przykład 14.4. ChlorowodorekN-{Na-[O-(3-O-metylo-3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-D-lizylo}-chinolonu-c:
Koniugat otrzymano analogicznie jak izomer w przykładzie 14.2 [FAB-MS: m/z = 867 = M+H].
183 574
113
Przykład 15: Wzór ogólny
Chinolon-d: kwas 4-(2-amino-8-azabicyklo[4,3,0]-non-4-en-8-ylo-l-cyklopropylo-6,8-difluoro-l,4-dihydro-4-okso-chinolino-3-karboksylowy
Przykład 15.1. Chlorowodorek N-{Na-[O-(3-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-d:
15.1 .a) Trifluorooctan N-[NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizylo]-chinolonu-d:
Na-(tert-butoksykarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizynę (1,4 g, 3,0 mmola) poddano reakcji z chlorowodorkiem chinolonu-d (1,28 mg, 2,8 mmola) w sposób opisany w przykładzie 9.1.a. W wyniku dwukrotnego wytrącenia z mieszaniny chlorek metylenu/metanol 1:1 eterem dietylowym otrzymano beżowe kryształy (1,97 g, 83%), z których związek 15.1.a uwolniono analogicznie jak w przykładzie 9.1.b. Otrzymano beżowe kryształy (1,7 g, 70%); TLC (chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 28:14:1): Rf = 0,60; temperatura topnienia = 215°C.
15.1) Chlorowodorek N- {N“- [O-(3 -O-metyΙο-β-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotio-karbonylo] -lizy lo} -chinolonu-d:
Związek 1.25 (62,8 mg, 0,22 mmola) poddano reakcji z koniugatem peptydu 15.La (173,2 mg, 0,2 mmola) analogicznie jak w przykładzie 12.5. Oczyszczanie związku pośredniego przeprowadzono metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 28:14:l->metanol/amoniak (25%) 20:1]. Otrzymano beżowe kryształy (140,8 mg, 65%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 28:14:1]: R = 0,06. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono w opisany sposób i produkt oczyszczono. Otrzymano beżowe kryształy, które zawieszono w wodzie (10 ml). 0,lN kwas solny wkroplono do mieszanej zawiesiny aż do powstania klarownego roztworu (pH > 3). W wyniku liofilizacji przesączonego roztworu otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (102,6 mg, 57%); [a]D 20 = -49,0° (c = 0,26/H2O).
Następujące glikokoniugaty otrzymano analogicznie jak w przykładzie 15.1 z koniugatu peptydu 15. La:
Przykład 15.2. ChlorowodorekN-{N“-[O-(4-O-(3'-O-metylo-p-D-galaktopiranozylo)-P-D-glukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo}-chinolonu-d:
Związki wyjściowe: związek 1.58 (98,4 mg, 0,22 mmola) koniugat peptydu 15.La (173,2 mg, 0,2 mmola)
Oczyszczanie związku pośredniego metodą chromatografii rzutowej [chlorek metylenu/metnaol/amoniak (25%) 20:10:1—>10:10:1—>metanol/amoniak (25%) 20:1]. Otrzymano beżowe kryształy (106,5 mg, 43%); TLC [chlorek metylenu/metanol/amoniak (25%) 10:10:3]: Rf = 0,51. Grupę fluorenylo-9-metoksykarbonylową odszczepiono następnie w opisany sposób, a produkt przekształcono w chlorowodorek. Otrzymano żółtą bezpostaciową substancję stałą (82,0 mg, 39%); [a]D 20 = +22,8° (c = 0,29/H2O).
114
183 574
Przykład 16: Glikokoniugaty z melfalanem
Wzór ogólny ci
Przykład 16.1. N-{N'-[O-(3-O-metylo-[3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo] -D-alanylo} -melfalan:
16.1 .a) N-butoksykarbonylo-D-alanylo-melfalan:
114 mg (0,6 mmola) N-tert-butoksykarbonylo-D-alaniny rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu i dodano 138 mg chlorowodorku N'-(3-dimetyloaminopropylo)-N-etylokarbodiimidu oraz 1-hydroksy-benzotriazol w 0°C. Po 10 minutach dodano 153 mg melfalanu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Zatężono ją i pozostałość wymieszano z chlorkiem metylenu i wodą. Fazę organiczną przemyto, wysuszono nad siarczanem sodu i zatężono, a pozostałość poddano chromatografii rzutowej z zastosowaniem układu chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:2:0,2-+15:4:0,5. Otrzymano 134 mg (56%) docelowego związku [TLC: chlorek metylenu/metanol/amoniak (17%) 15:4:0,5 Rf=0,45].
16.1) N- {Ν'- [0-(3 -O-metylo-β-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo] -D-alanylo} -melfalan:
Odszczepianie grupy chroniącej i sprzęganie z węglowodanem przeprowadzono w sposób opisany w przykładach 9.1 i 12.1.
[TLC: acetonitryl/woda 10:11 Rf = 0,26; FAB-MS: m/z = 685 = M-H].
Przykład 16.2. N-{N'-[O-(3-O-metylo-|3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -alany lo-alany lo} -melfalan:
Związek ten można otrzymać analogicznie jak w przykładzie 16.1 w kilku etapach [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,2; FAB-MS: m/z = 756 = M-H].
Przykład 17: Glikokoniugaty z doksorubicyną adriamycyną)
Wzór ogólny
183 574
115
Przykład 17. N-{N'-[O-(3-O-metylo-p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo] -alany lo-alanylo} -doksorubicyna:
17.1 .a) N-[O-(3-O-metylo-p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo] -alany lo-alanina:
160 mg (1 mmola) of alanylo-alaniny rozpuszczono w 20 ml dioksanu/wody 1:1 i dodano 1 ml zasady Huniga. 1,2 mmola 3-O-metylo-P~L-fukozydu p-aminofenylu (przykład 1.2) przekształcono najpierw w izotiocyjanian w sposób opisany w przykładzie 10.1.a i produkt dodano następnie do roztworu dipeptidu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (acetonitryl/woda 15:1). Po zatężeniu odpowiednich frakcji produkt wytrącono z metanolu eterem. Wydajność: 267 mg (57%).
17.1) N-{N'-[0-(3-0-metylo-3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo] -alany lo-alanylo} -doksorubicyna:
mg (0,1 mmola) związku z przykładu 17.1.a rozpuszczono w 10 ml dimetyloformamidu i dodano 23,1 mg chlorowodorku N'-(3-dimetyloaminopropylo)-N-etylokarbodiimidu oraz 21 mg of 1-hydroksy-benzotriazolu. Po 5 minutach dodano 30 mg doksorubicyny i 35 pl zasady Huniga i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Zatężono ją a pozostałość oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (chlorek metylenu/metanol 88:12). Odpowiednie frakcje zatężono, a pozostałość liofilizowano z dioksanu/wody. Otrzymano 20 mg (40%) docelowego związku. [TLC: chlorek metylenu/metanol 10:1 Rf = 0,17; ESI: m/z = 997 = M+H].
Przykład 17.2. N-{Na,NE-bis-[O-(3-O-metylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -D-lizy lo-alanylo} -doksorubicyna:
17.2.a) Na,NE-bis-[O-(3-metylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-D-lizylo-alanina:
580 mg (1,31 mmola) di-trifluorooctanu D-lizylo-alaniny sprzęgnięto z 2,2 równoważnikami węglowodanu z przykładu 1.2 w obecności 1,3 ml zasady Huniga w sposób opisany w przykładzie 17. La. Oczyszczanie metodą chromatografii rzutowej przeprowadzano stosując układ acetonitryl/woda 10:1. Otrzymano 446 mg (41%) docelowego związku.
17.2) N-{Na,NE-bis[O-(3-O-metylo-3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbony lo] -D-lizy lo-alanylo} -doksorubicyna:
Sprzęganie 59 mg związku z przykładu 17.2.a z 20 mg doksorubicyny przeprowadzono w sposób opisany w przykładzie 17.1. Otrzymano 15 mg koniugatu. [TLC: chlorek metylenu/metanol 85:15 Rf = 0,43; FAB-MS: m/z = 1365 - M+H).
Przykłady 18: Glikokoniugaty z kamptotecyną
Wzór ogólny
116
183 574
Przykład 18.1. 20-0-{Na,NE-bis-[0-(3-0-metylo-3-L-glukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo}-kamptotecyna:
18.l.a) Trifluorooctan 20-O-(alanylo)-kamptotecyny:
500 mg (1,44 mmola) kamptotecyny rozpuszczono w 20 ml dimetyloformamidu i dodano 50 mg 4-dimetyloaminopirydyny oraz N-karboksybezwodnik N-tert-butoksykarbonylo-alaniny. Po 3 godzinach dodano kolejną porcję 775 mg N-tert-butoksykarbonyloalanino-N-karboksybezwodnika i zawiesinę poddawano obróbce ultradźwiękowej przez 16 godzin. Mieszaninę zatężono, surowy materiał rozpuszczono w 50 ml chlorku metylenu i dodano 5 ml kwasu trifluorooctowego w 0°C. Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej przez 30 minut zatęzono ją ponownie i produkt oczyszczano metodą chromatografii rzutowej (acetonitryl/woda 20:1). Odpowiednie frakcje zebrano i zatężono, a pozostałość liofilizowano z dioksanu/wody. Otrzymano 712 mg (93%) docelowego związku [FAB m/z = 420 = M+H],
18.1.b) Bis-trifluorooctan 20-O-(licylo-alanylo)kamptotecyny:
Koniugat z przykładu 18.l.a sprzęgnięto z N“,bF-bis-(tert-butoksykarbonylo)lizyną zgodnie ze standardowymi procedurami, po czym produkt odblokowano. Docelowy związek otrzymano z 65% wydajnością.
18.1) 20-0-(1^,NB-bis-[O-(3-O-metylo-p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-alanylo)-kamptotecyna:
3-O-metylo-[3-L-fukozyd p-aminofenylu (przykład 1.2) sprzęgnięto z koniugatem z przykładu 18.1 .b analogicznie jak w przykładzie 11.1.
Wydajność: 40% [TLC: acetonitryl/woda 10:1 Rf = 0,44]
Przykład 18.2. 20-0-{Na-[0-(3-0-karboksymetylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo} -kamptotecyna:
18.2.a) Trifluorooctan 20-O-(NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)lizylo-alanylo)-kamptotecyny:
Koniugat z przykładu 18.l.a sprzęgnięto z N“-(tertbutoksykarbonylo)-NE-(fluorenylo-9-metoksykarbonylo)-lizyną zgodnie ze standarowymi procedurami i produkt odblokowano przy grupie α-aminowej. Docelowy związek otrzymano z wydajnością 24%. (TLC: acetonitryl/woda 20:1 Rf = 0,15)
18.2.b) 20-O- {Na-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo] -N®- [fluoreny lo-9-metoksykarbony lo] -lizy lo-alanylo} kamptotecyna:
Związek z przykładu 18.l.a zmodyfikowano pochodną węglowodanu z przykładu 1.10 analogicznie jak w przykładach 12.6. i 12.5. Surowy produkt można oczyszczać przez ucieranie z wodą, a następnie liofilizowanie z dioksanu/wody; stosuje się go w następnym etapie bez dalszego analizowania.
18.2) 20-O-{N“-[O-(3-O-karboksymetylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbony lo] -lizy loalany lo} -kamptotecyna:
Koniugat 18.2.b odblokowano piperydyną w dimetyloformamidzie. Po 30 minutach mieszaninę zatężono, a pozostałość przemyto dwukrotnie chlorkiem metylenu. Rozpuszczono ją w dimetyloformamidzie i wytrącono metanolem/eterem. Produkt odsączono podciśnieniowo, przemyto eterem, a następnie liofilizowano z dioksanu/wody. Wydajność: 86% [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf = 0,17]
Przykład 18.3. Sól sodowa 20-0-{Na-0-[3-0-karboksymetylo-3-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloaminotiokarbonylo]-lizylo-alanylo}-kamptotecyny:
mg (0,074 mmola) koniugatu z przykładu 18.2 rozpuszczono w mieszaninie dioksan/woda i przekształcono w sól sodową z 1 równoważnikiem 0,lN roztworu wodorotlenku sodu. Wydajność: ilościowa [TLC: acetonitryl/woda/lodowaty kwas octowy 5:1:0,2 Rf= 0,17].
Następujące glikokoniugaty kamptotecyny otrzymano analogicznie jak w przykładach 18.1 i 18.2:
Przykład 18.4. 20-0-{NxNE-bis-[0-(3-0-metylo-[3-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-kamptotecyna
183 574
117
Przykład 18.5. 20-0-{N“,NE-bis-[0-(3-0-metylo-p-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-walinylo}-kamptotecyna
Przykład 18.6. 20-0-{N“-[0-(3-0-karboksymetylo-p-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo)-lizylo-walinylo} -kamptotecyna
Przykład 18.7. 20-0-{NP-[0-(3-0-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbony lo)-lizy lo-waliny lo } -kamptotecyna
Przykład 18.8. 20-0-{Na-[0-(3-0-metylo-P-D-galaktopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbony lo]-lizylo-alanylo}-kamptotecyna
Przykład 18.9. Chlorowodorek 20-0-{Na-[0-(3-0-karboksymetylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylowalinylo}-kamptotecyny
Związek 18.6 przekształcono w chlorowodorek z 1 równoważnikiem 0,01 N kwasu solnego.
Przykład 18.10. Chlorowodorek 20-0-{Na-[0-(3-0-karboksymetylo-P-L-fukopiranozy lo)-4-hy droksy feny loamino-tiokarbony lo] -1 izy loalany lo} -kamptotecyny
Związek 18.2 przekształcono w chlorowodorek z 1 równoważnikiem 0,01 N kwasu solnego.
Przykład 18.11. Chlorowodorek 20-0-{N“-[0-(3-0-karboksymetylo-P-L-fukopiranozylo)-4-hydroksyfenyloamino-tiokarbonylo]-lizylofenyloałanylo}-kamptotecyny
Przykład 18.12. Sól sodowa 20-O-{Na, N®-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-P-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-D-alanylo}-kamptotecyny
Przykład 18.13. Sól sodowa 20-O-{N“, NE-bis-[O-(3-O-karboksymetylo-^-fukopiranozylo)-4-hydroksy-fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-walinylo}-kamptotecyny
Przykład 18.14. Chlorowodorek Ao-{Na-[O-XÓ-metylo-3-L-fukopiranozylo)-4-hy droksy fenyloamino-tiokarbonylo]-lizylo-alanylo} -kamptotecyny
183 574
Proliferacja komórek macierzystych szpiku kostnego
Przykład 12 3
Chinolon-a
Kontrolna
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 6,00 zł.
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Cytostatyki modyfikowane węglowodanami o wzorze ogólnymK - Sp - L AA1 - AA2 - C (I) w którymK oznacza rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym.. 1 (II) w którymA oznacza metyl, hydroksymetyl, karboksyl oraz pochodzące od niego estry i amidy, alkoksymetyl, acyloksymetyl lub karboksyalkiloksymetyl oraz pochodzące od niego estry i amidy; A może także stanowić CH2-B, gdzie B z kolei może stanowić rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym (II), połączony przez centrum anomeryczne,R2, R3, R4 niezależnie oznaczają atom wodoru, grupę hydroksylową alkoksylową karboksyalkoksylową oraz pochodzące od nich estry i amidy, hydroksyalkiloksylową aminoalkiloksylową acyloksylową karboksyalkilokarbonyloksylową siarczanową fosforanową atom chlorowca albo inny rodnik węglowodanowy (II) zmodyfikowany w takim układzie i połączony przez centrum anomeryczne, przy czym R2 może dodatkowo oznaczać grupę aminową lub acyloaminową albo dwa spośród rodników R2, R3 i R4 mogą tworzyć razem grupę epoksydowąSp oznacza ewentualnie podstawiony arylen lub alkilen,RSII N ^NL oznacza —lub gdzie R oznacza atom chloru —NH \ lub grupę hydroksyalkiloaminowąAA1 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi grupy ochronne lub drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie,AA2 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi grupy ochronne lub drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie, aC oznacza rodnik cytotoksyczny albo rodnik cytostatyku lub pochodnej cytostatycznej, który może dodatkowo zawierać grupę aminową lub hydroksylową oraz ich izomery i sole.
- 2. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 1, w którymSp oznacza rodnik arylenowy, zmodyfikowany przez K i L w pozycjach orto, meta lub parą który ponadto może zawierać 1-4 dodatkowe podstawniki, różne lub identyczne, z których każdy może oznaczać atom wodoru, metyl, metoksyl, hydroksyl, karboksyl, metoksykarbonyl,183 574 grupę cyjanową nitrową atom chlorowcą sulfonyl lub sulfonamid albo Sp może także oznaczać liniowy lub rozgałęziony rodnik alkilenowy, aK, L, AA1, AA2 oraz C mają znaczenie podane w zastrz. 1, oraz ich izomery i sole.
- 3. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 1, w którym C oznacza nukleozyd, antybiotyk endiinowy, cytotoksyczny antybiotyk peptydowy, kwas chinolono- lub naftyrydono-karboksylowy albo batracylinę, 5-fluorouracyl, arabinozyd cytozyny, metotreksan, etopozyd, kamptotecynę, daunomycynę, doksorubicynę, taksol, winblastynę, winkrystynę, dynemycynę, kalicheamycynę, esperamycynę, kwercetynę, suraminę, erbstatynę, cyklofosfamid, mitamycynę C, melfalan, cisplatynę, belomycynę, staurosporynę lub inną substancję czynną o działaniu przeciwnowotworowym, aK, Sp, L, AA1 i AA2 mają znaczenie podane w zastrz. 1, oraz ich izomery i sole.
- 4. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 1, w którym AA1 oznacza resztę aminokwasu pochodzącą od lizyny, alaniny, kwasu asparaginowego, kwasu glutaminowego, glicyny, omityny, tyrozyny, waliny lub seryny, która jest ewentualnie połączona z kolejnym ugrupowaniem L-Sp-L albo AA1 oznacza wiązanie, aK, Sp. L, AA2 i C mają znaczenie podane w zastrz. 1, oraz ich izomery i sole.
- 5. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 1, w którym AA2 oznacza resztę aminokwasu pochodzącą od lizyny, alaniny, glicyny, omityny, kwasu diaminopropionowego lub seryny, o konfiguracji D lub L, która jest ewentualnie połączona z kolejnym ugrupowaniem L-Sp-L albo AA2 oznacza wiązanie, aK, Sp. L, AA2 i C mają znaczenie podane w zastrz. 1, oraz ich izomery i sole.
- 6. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 1, w którym C oznacza rodnik o wzorze (III) w którymQ oznacza rodnik o wzorzeR lub gdzieRa oznacza alkil zawierający 1-4 atomy węgla, ewentualnie mono- lub dwupodstawiony atomami chlorowca albo grupami hydroksylowymi, winyl, cykloalkil zawierający 3-6 atomów węglą ewentualnie podstawiony 1-2 atomami fluoru, bicyklo[l.l.l]pent-l-yl, 1,1-dimetylopropargil, 3-oksetanyl, metoksyl, grupę aminową metyloaminową dimetyloaminową lub fenyl ewentualnie mono- lub dwupodstawiony atomami chlorowca, grupami aminowymi lub hydroksylowymi albo razem z Re może również tworzyć mostek określony dla tego rodnikąRb oznacza hydroksyl, alkoksyl zawierający 1-3 atomy węgla lub nitrometyl,Rc oznacza atom wodoru lub metyl albo wraz z Rg może również tworzyć mostek określony dla tego rodniką183 574Rd oznacza atom wodoru, CH3, CH2F lub =CH2,X1 oznacza atom wodoru, atom chlorowca lub grupę nitrową,X2 oznacza atom wodoru, atom chlorowca, grupę aminową, metoksyl, grupę merkaptanową, metyl, chlorowcometyl lub winyl,Y oznacza N lub C-Re, gdzieRe oznacza atom wodoru, atom chlorowca, CF3, OCH3, OCHF2, CH3, CN, CH=CH2 lub C=CH albo wraz z Ra może również tworzyć mostek o wzorze - °O-ĆH2-CH-CH3, - ’SCH2-CH2, - °S-CH2-CH-CH3, - °CH2-CH2CH-CH3 lub - *O-CH2-N-Rf, gdzie atom zaznaczony * połączony jest z atomem węgła w Y, aRf oznacza atom wodoru, metyl lub formy 1 orazD oznacza N lub C-R8, gdzieRg oznacza atom wodoru, atom chlorowca, CF3, OCH3, OCHF2 lub CH3, albo wraz z Rc może tworzyć mostek o wzorze - O-CH2-, - *NH-CH2-, - ,N(CH3)-CH2-, - “N(C2H5)-CH2-, -N(C3H5)-CH2- lub -S-CH2-, gdzie atom zaznaczony ’ połączony jest z atomem węgla w D, n wynosi 1,2 lub 3, aT oznacza rodnik o wzorze' 9 gdzie Rh oznacza 0-, -N-Rk, CH2-O- lub -CH2-N-R, gdzieRk oznacza atom wodoru lub metyl, aR1 oznacza atom wodoru, Cj-C3-alkil lub cyklopropyl, aK, Sp, L, AA1 i AA2 mają znaczenie podane w zastrz. 1 oraz ich izomery i sole.
- 7. Cytostatyki o wzorze ogólnym (I) według zastrz. 6, w którym Q oznacza rodnik o wzorze:gdzieRa oznacza alkil zawierający 2-4 atomy węgla, ewentualnie podstawiony 1 atomem fluoru, cyklopropyl ewentualnie podstawiony 1 atomem fluoru lub fenyl ewentualnie monolub dwupodstawiony fluorem albo razem z Re może również tworzyć mostek określony dla tego rodnika,Rb oznacza hydroksyl, alkoksyl zawierający 1 lub 2 atomy węgla,Rc oznacza atom wodoru lub metyl albo wraz z Rg może również tworzyć mostek określony dla tego rodnika,X1 oznacza atom fluoru,X2 oznacza atom wodoru lub grupę aminową,Y oznacza N lub C-Re, gdzie183 574Re oznacza atom wodoru, fluoru, chloru, CF3, OCH3, OCHF2 lub C=CH albo wraz z Ra może również tworzyć mostek o wzorze - °O-CH2-CH-CH3 lub - *O-CH2-N-Rf, gdzie atom zaznaczony ’ połączony jest z atomem węgla w Y, aRf oznacza metyl,D oznacza N lub C-R8, gdzieR8 oznacza atom wodoru, atom fluoru lub chloru, CF3, OCH3 lub CH3, albo wraz z Re tworzy również mostek o wzorze - ’O-CH2-, - *NH-CH2-, - *N(CH3)-CH2 lub - *S-CH2-, gdzie atom zaznaczony ’ połączony jest z atomem węgla w D, aT oznacza rodnik o wzorzegdzieRh oznacza grupę -N-Rk, w którejRk oznacza atom wodoru lub metyl orazR1 oznacza atom wodoru lub metyl.
- 8. Środek cytostatyczny zawierający substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalne substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera związek o wzorze ogólnymK-Sp-L AA1 - AA2-C (I) w którymK oznacza rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym(Π) w którymA oznacza metyl, hydroksymetyl, karboksyl oraz pochodzące od niego estry i amidy, alkoksymetyl, acyloksymetyl lub karboksyalkiloksymetyl oraz pochodzące od niego estry i amidy; A może także stanowić CH2-B, gdzie B z kolei może stanowić rodnik węglowodanowy o wzorze ogólnym (II), połączony przez centrum anomeryczne,R2, R3, R4 niezależnie lub równocześnie oznaczają atom wodoru, grupę hydroksylową, alkoksylową karboksyalkoksylową oraz pochodzące od nich estry i amidy, hydroksyalkiloksylową aminoalkiloksylową acyloksylową karboksyalkilokarbonyloksylową siarczanową, fosforanową atom chlorowca albo inny rodnik węglowodanowy (Π) zmodyfikowany w takim układzie i połączony przez centrum anomeryczne, przy czym R2 może dodatkowo oznaczać grupę aminową lub acyloaminową albo dwa spośród rodników R2, R3 i R4 mogą tworzyć razem grupę epoksydowąSp oznacza ewentualnie podstawiony arylen lub alkilen,183 574SL ozna< chloru lub gr —HNlub kiloaminową,gdzie R oznacza atomAA1 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi grupy ochronne lub drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie,AA2 oznacza resztę aminokwasu o konfiguracji D lub L, która ewentualnie przenosi grupy ochronne lub drugą grupę Κ-Sp-L-, w której K, Sp i L, niezależnie od innego ugrupowania Κ-Sp-L-, mogą mieć wyżej podane znaczenie albo wiązanie bezpośrednie, aC oznacza rodnik cytotoksyczny albo rodnik cytostatyku lub pochodnej cytostatycznej, który może dodatkowo zawierać grupę aminową lub hydroksylową lub ich izomery i sole.* * *
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19512484A DE19512484A1 (de) | 1995-04-04 | 1995-04-04 | Kohlenhydratmodifizierte Cytostatika |
| PCT/EP1996/001279 WO1996031532A1 (de) | 1995-04-04 | 1996-03-22 | Kohlenhydratmodifizierte cytostatika |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL322681A1 PL322681A1 (en) | 1998-02-16 |
| PL183574B1 true PL183574B1 (pl) | 2002-06-28 |
Family
ID=7758679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96322681A PL183574B1 (pl) | 1995-04-04 | 1996-03-22 | Cytostatyki modyfikowane węglowodanami i środek cytostatyczny |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6271342B1 (pl) |
| EP (1) | EP0819135B1 (pl) |
| JP (1) | JPH11502860A (pl) |
| KR (1) | KR19980703591A (pl) |
| CN (1) | CN1185786A (pl) |
| AT (1) | ATE186738T1 (pl) |
| AU (1) | AU713466B2 (pl) |
| BG (1) | BG63048B1 (pl) |
| BR (1) | BR9604825A (pl) |
| CA (1) | CA2217164A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ291098B6 (pl) |
| DE (2) | DE19512484A1 (pl) |
| DK (1) | DK0819135T3 (pl) |
| EE (1) | EE03619B1 (pl) |
| ES (1) | ES2140078T3 (pl) |
| GR (1) | GR3032605T3 (pl) |
| HU (1) | HUP9800513A3 (pl) |
| IS (1) | IS1822B (pl) |
| MX (1) | MX9707613A (pl) |
| NO (1) | NO974564L (pl) |
| NZ (1) | NZ305855A (pl) |
| PL (1) | PL183574B1 (pl) |
| RU (1) | RU2170234C2 (pl) |
| SK (1) | SK281785B6 (pl) |
| TW (1) | TW384290B (pl) |
| UA (1) | UA61054C2 (pl) |
| WO (1) | WO1996031532A1 (pl) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2267328A1 (en) * | 1996-09-30 | 1998-04-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Glycoconjugates from modified camptothecin derivates (20-o-linkage) |
| DE19640970A1 (de) * | 1996-10-04 | 1998-04-16 | Bayer Ag | Modifizierte Cytostatika |
| JP3101710B2 (ja) | 1997-02-28 | 2000-10-23 | 工業技術院長 | 硫酸化オリゴ糖化合物 |
| ID23424A (id) * | 1997-05-14 | 2000-04-20 | Bayer Ag | Glikokonjugat dari 20(s)-kamptotesin |
| US6387928B1 (en) | 1997-09-15 | 2002-05-14 | The Procter & Gamble Co. | Antimicrobial quinolones, their compositions and uses |
| SK286420B6 (sk) | 1997-09-15 | 2008-09-05 | The Procter & Gamble Company | Zlúčenina so štruktúrou chinolónu, farmaceutický prostriedok s jej obsahom a jej použitie |
| US6613879B1 (en) * | 1999-05-14 | 2003-09-02 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | FAP-activated anti-tumour compounds |
| DE10005275A1 (de) * | 2000-02-07 | 2001-08-09 | Bayer Ag | Neuartige Glycokonjugate |
| US7220824B1 (en) * | 2000-08-28 | 2007-05-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Integrin-mediated drug targeting |
| EP1219634A1 (en) * | 2000-12-27 | 2002-07-03 | Bayer Aktiengesellschaft | Cytostatic-glycoconjugates having specifically cleavable peptidic linking units |
| EP1238678A1 (en) * | 2001-03-08 | 2002-09-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Enzyme-activated cytostatic conjugates with integrin ligands |
| WO2003040093A2 (de) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Bayer Healthcare Ag | Isotopencodierte affinitätsmarker 2 |
| US7199149B2 (en) * | 2003-10-01 | 2007-04-03 | Bristol Myers Squibb Company | Monocyclic and bicyclic lactams as factor Xa inhibitors |
| PT1718677E (pt) | 2003-12-19 | 2012-07-18 | Genentech Inc | Fragmentos de anticorpo monovalentes úteis como agentes terapêuticos |
| CA2647457C (en) | 2006-03-28 | 2011-05-24 | The Procter & Gamble Company | A hydride reduction process for preparing quinolone intermediates |
| MX2008012488A (es) | 2006-03-28 | 2008-10-10 | Procter & Gamble | Un proceso de acoplamiento para preparar intermedios de quinolona. |
| EP2001862B1 (en) | 2006-03-28 | 2011-04-27 | Warner Chilcott Company, LLC | Malate salts, and polymorphs of (3s,5s)-7-[3-amino-5-methyl-piperidinyl]-1-cyclopropyl-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid |
| EP3242883A4 (en) | 2015-01-06 | 2018-10-17 | ImmunoVaccine Technologies Inc. | Lipid a mimics, methods of preparation, and uses thereof |
| AU2016359235B2 (en) | 2015-11-25 | 2022-09-15 | Ligachem Biosciences Inc. | Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto |
| AU2016359230B2 (en) | 2015-11-25 | 2020-04-23 | Ligachem Biosciences Inc. | Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto |
| CA3058360A1 (en) | 2017-03-29 | 2018-10-04 | Legochem Biosciences, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same |
| CN112601555A (zh) | 2018-05-09 | 2021-04-02 | 乐高化学生物科学股份有限公司 | 与抗cd19抗体药物结合物相关的组合物和方法 |
| KR20210028544A (ko) | 2019-09-04 | 2021-03-12 | 주식회사 레고켐 바이오사이언스 | 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도 |
| JP7820508B2 (ja) * | 2021-10-06 | 2026-02-25 | サムヤン コーポレイション | 飽和フロジオキシン誘導体化合物及びその二次電池用添加剤としての使用 |
Family Cites Families (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5977356A (ja) * | 1982-06-30 | 1984-05-02 | Fuji Photo Film Co Ltd | 螢光アツセイ用多層分析要素およびそれを用いる螢光アツセイ法 |
| DE3611194A1 (de) * | 1986-04-04 | 1987-10-08 | Bayer Ag | Cancerostatisches mittel |
| ATE106898T1 (de) * | 1987-03-26 | 1994-06-15 | Neorx Corp | Metall-radionuklid-markierte proteine und glykoproteine zur diagnose und therapie. |
| US4975278A (en) | 1988-02-26 | 1990-12-04 | Bristol-Myers Company | Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells |
| US4980343A (en) * | 1988-10-27 | 1990-12-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Aminooxodihydroisoindoloquinazoline carcinostatic agents |
| DE3837825A1 (de) | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| ZA909847B (en) * | 1989-12-13 | 1992-08-26 | Lilly Co Eli | Glycopeptide derivatives |
| US5160727A (en) * | 1990-02-13 | 1992-11-03 | Warner-Lambert Company | Tumor cell sensitization method using quinazolinedione derivatives |
| US5965695A (en) | 1990-05-15 | 1999-10-12 | Chiron Corporation | Modified peptide and peptide libraries with protease resistance, derivatives thereof and methods of producing and screening such |
| US5420297A (en) | 1990-10-24 | 1995-05-30 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides having substance P antagonistic activity |
| US5399363A (en) * | 1991-01-25 | 1995-03-21 | Eastman Kodak Company | Surface modified anticancer nanoparticles |
| DE4106101A1 (de) * | 1991-02-27 | 1992-09-03 | Bayer Ag | Fucose-markierte cytostatika |
| US5595732A (en) * | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
| FR2676058B1 (fr) | 1991-04-30 | 1994-02-25 | Hoechst Lab | Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers. |
| DE4120646A1 (de) | 1991-06-22 | 1992-12-24 | Bayer Ag | 7-isoindolinyl-chinolon- und naphthyridoncarbonsaeure-derivate |
| DE59209745D1 (de) | 1991-11-29 | 1999-10-21 | Hoechst Ag | Peptide mit insulinartiger Wirkung |
| SE9103612D0 (sv) | 1991-12-04 | 1991-12-04 | Astra Ab | New peptide derivatives |
| NZ248332A (en) | 1992-08-07 | 1995-01-27 | Sankyo Co | Hiv protease inhibitor and its use |
| US5872207A (en) | 1992-09-04 | 1999-02-16 | Sanofi Pharmaceuticals, Inc. | N-terminal-marked peptides immobilized on glass beads and method of preparation and method of use thereof |
| IL106998A0 (en) | 1992-09-17 | 1993-12-28 | Univ Florida | Brain-enhanced delivery of neuroactive peptides by sequential metabolism |
| DE4236237A1 (de) * | 1992-10-27 | 1994-04-28 | Behringwerke Ag | Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel |
| US5576298A (en) | 1992-11-30 | 1996-11-19 | Research And Development Institute, Inc. At Montana State University | Peptides from pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antibiotic activity |
| SE9300012D0 (sv) | 1993-01-05 | 1993-01-05 | Astra Ab | New peptides |
| US5750648A (en) | 1993-08-20 | 1998-05-12 | G.D. Searle & Co. | Retroviral protease inhibitors and combinations thereof |
| EP0647450A1 (en) | 1993-09-09 | 1995-04-12 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Improved prodrugs for enzyme mediated activation |
| GB9320781D0 (en) | 1993-10-08 | 1993-12-01 | Erba Carlo Spa | Polymer-bound camptothecin derivatives |
| WO1995010296A1 (en) * | 1993-10-12 | 1995-04-20 | Glycomed Incorporated | A library of glyco-peptides useful for identification of cell adhesion inhibitors |
| US5610145A (en) | 1994-04-15 | 1997-03-11 | Warner-Lambert Company | Tachykinin antagonists |
| US5780589A (en) | 1994-11-30 | 1998-07-14 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Ultraselective opioidmimetic peptides and pharmacological and therapeutic uses thereof |
| FR2729668A1 (fr) | 1995-01-23 | 1996-07-26 | Adir | Nouveaux derives de mercaptoalcanoyldipeptides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| US5677286A (en) * | 1995-04-27 | 1997-10-14 | The University Of Michigan | Glycosylated analogs of camptothecin |
| US6143931A (en) | 1997-04-16 | 2000-11-07 | Arqule, Inc. | Synthesis and use of α-ketoamide derivatives and arrays |
-
1995
- 1995-04-04 DE DE19512484A patent/DE19512484A1/de not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-03-22 ES ES96910926T patent/ES2140078T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-22 CZ CZ19973143A patent/CZ291098B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-03-22 UA UA97115364A patent/UA61054C2/uk unknown
- 1996-03-22 DE DE59603678T patent/DE59603678D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-03-22 DK DK96910926T patent/DK0819135T3/da active
- 1996-03-22 JP JP8529934A patent/JPH11502860A/ja not_active Ceased
- 1996-03-22 RU RU97118421/04A patent/RU2170234C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-03-22 US US08/930,546 patent/US6271342B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-03-22 SK SK1345-97A patent/SK281785B6/sk unknown
- 1996-03-22 MX MX9707613A patent/MX9707613A/es unknown
- 1996-03-22 HU HU9800513A patent/HUP9800513A3/hu unknown
- 1996-03-22 EP EP96910926A patent/EP0819135B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-22 AU AU53976/96A patent/AU713466B2/en not_active Ceased
- 1996-03-22 BR BR9604825A patent/BR9604825A/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-03-22 PL PL96322681A patent/PL183574B1/pl unknown
- 1996-03-22 CN CN96194180A patent/CN1185786A/zh active Pending
- 1996-03-22 AT AT96910926T patent/ATE186738T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-03-22 CA CA002217164A patent/CA2217164A1/en not_active Abandoned
- 1996-03-22 KR KR1019970706996A patent/KR19980703591A/ko not_active Abandoned
- 1996-03-22 WO PCT/EP1996/001279 patent/WO1996031532A1/de not_active Ceased
- 1996-03-22 EE EE9700258A patent/EE03619B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-03-22 NZ NZ305855A patent/NZ305855A/xx unknown
- 1996-10-01 TW TW085111956A patent/TW384290B/zh not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-09-16 BG BG101892A patent/BG63048B1/bg unknown
- 1997-09-18 IS IS4562A patent/IS1822B/is unknown
- 1997-10-02 NO NO974564A patent/NO974564L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-02-09 GR GR20000400304T patent/GR3032605T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL183574B1 (pl) | Cytostatyki modyfikowane węglowodanami i środek cytostatyczny | |
| EP1447099B1 (de) | Antineoplastisch wirkende Polyethylenkonjugate zytostatischer Verbindungen und diese enthaltende Arzneimittel | |
| EP0939765B1 (de) | Glycokonjugate von modifizierten camptothecin-derivaten(a- oder b-ring-verknüpfung) | |
| EP3152223B1 (en) | Mitomycin conjugate | |
| SA93130351B1 (ar) | مشتقات إندولبيرولوكربازول | |
| DE102009051799B4 (de) | Bifunktionale Prodrugs und Drugs | |
| EP0934329B1 (de) | Glycokonjugate von modifizierten camptothecin-derivaten (20-o-verknüpfung) | |
| US7045300B2 (en) | Lectin protein prepared from Maackia fauriei, process for preparing the same and the use thereof | |
| PL184667B1 (pl) | Zastosowanie związku typu lamellaryny przeciwdziałającego nabytej oporności na leki wykazującego efekt przeciwdziałający MDR i kompozycja farmaceutyczna | |
| CN120957753A (zh) | 生物活性结合物、其制备方法和其用途 | |
| EP0929570A1 (de) | Modifizierte cytostatika | |
| Goerlach et al. | In vitro antitumor activity of 2'-deoxy-5-fluorouridine-monoclonal antibody conjugates | |
| WO2001058932A1 (de) | Glycokonjugate von cytostatika | |
| IL119334A (en) | Carbohydrate modified cytostatics and medicaments containing them | |
| DE10005275A9 (de) | Neuartige glycokonjugate | |
| HRP960440A2 (en) | Sugar-modified cytostatics | |
| US11464864B2 (en) | Drug-bound compound and use thereof | |
| CZ401799A3 (cs) | Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující | |
| KR20040108112A (ko) | 밀리타리스 동충하초로부터 추출된 시알산유도체 결합렉틴 단백질, 그의 분리 방법 및 용도 | |
| MXPA97001283A (en) | Compounds, pharmaceutical composition and diagnostic device containing them and its |