PL185681B1 - Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu - Google Patents

Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu

Info

Publication number
PL185681B1
PL185681B1 PL94314090A PL31409094A PL185681B1 PL 185681 B1 PL185681 B1 PL 185681B1 PL 94314090 A PL94314090 A PL 94314090A PL 31409094 A PL31409094 A PL 31409094A PL 185681 B1 PL185681 B1 PL 185681B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
microorganism
transhydrogenase
gene
strain
dna
Prior art date
Application number
PL94314090A
Other languages
English (en)
Other versions
PL314090A1 (en
Inventor
Hiroyuki Kojima
Kazuhiko Totsuka
Original Assignee
Ajinomoto Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17491585&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL185681(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ajinomoto Kk filed Critical Ajinomoto Kk
Publication of PL314090A1 publication Critical patent/PL314090A1/xx
Publication of PL185681B1 publication Critical patent/PL185681B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/848—Escherichia
    • Y10S435/849—Escherichia coli

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania L-aminokwasu, zwlaszcza L-treoniny, L-lizyny, kwasu L-gluta- minowego, L-leucyny, L-izoleucyny, L-waliny lub L-fenyloalaniny, przy uzyciu mikroorgani- zmu, w którego genomie korzystnie znany jest fragment DNA zawierajacy miejsce poczatku replikacji plazmidu zawierajacego gen transhydrogenazy, dziala gen transhydrogenazy i mozliwa jest amplifikacja tego genu, zwlaszcza mikroorganizmu dobranego sposród grupy obejmujacej bakterie nalezace do rodzaju Escherichia, Bacillus lub Serratia oraz Brevibacte- rium lactofermentum, obejmujacy etapy, w których modyfikuje sie lub dostarcza zmodyfiko- wany mikroorganizm, hoduje sie mikroorganizm w podlozu hodowlanym, w którym powstaje i gromadzi sie L-aminokwas, a nastepnie wydziela sie L-aminokwas z podloza hodowlanego, znamienny tym, ze hoduje sie mikroorganizm z pobudzona aktywnoscia enzymatyczna transhydrogenazy nukleotydu nikotynoamidowego w komórce. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze hoduje sie mikroorganizm z pobudzona ekspresja genu kodujacego transhydrogenaze nukleotydu nikotynoamidowego w komórce. 3. Sposób wedlug zastrz. 2, znamienny tym, ze hoduje sie mikroorganizm ze zamplifi- kowanym genem kodujacym transhydrogenaze nukleotydu nikotynoamidoadeninowego w komórce. PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu. Typowe przykłady mikroorganizmów stosowanych w sposobie według wynalazku obejmują mikroorganizmy należące do rodzaju Escherichia , Bacillus, Serratia i Brevibacterium lactofermentum. Sposobem według wynalazku wytwarza się zwłaszcza takie L-aminokwasy jak L-tre-onina, L-lizyna, kwas L-glutaminowy, L-leucyna, L-izoleucyna, L-walina lub L-fenyloalanina.
Fermentacja L-aminokwasów jest typowym przykładem dobrze znanego sposobu wytwarzania substancji docelowej z zastosowaniem mikroorganizmów. L-aminokwasy stosuje się nie tylko do przypraw i artykułów żywnościowych, ale także jako składniki różnych leczniczych mieszanek odżywczych, dodatków do paszy dla zwierząt, jako czynniki stosowane w przemyśle farmaceutycznym i chemicznym, ponadto jako czynniki wzrostowe przy wytwarzaniu innych L-aminokwasów takich jak u L-lizyna i L-homoseryna z zastosowaniem mikroorganizmów. Mikroorganizmy należące do rodzaju Escherichia, Bacillus i Serratia oraz Brevibacterium lactofermentum znane są jako mikroorganizmy, które można stosować do fermentacyjnego wytwarzania L-aminokwasu.
Do fermentacyjnego wytwarzania L-aminokwasów można stosować bakterie typu dzikiego (szczepy typu dzikiego), szczepy auksotroficzne otrzymane z szczepów typu dzikiego, mutanty o zmienionej regulacji metabolizmu otrzymane z szczepów typu dzikiego jako różne mutanty oporne na leki oraz szczepy posiadające zarówno właściwości szczepów auksotroficznych, jak i mutantów o zmienionej regulacji metabolizmu. Substancje wymagane przez szczepy auksotroficzne różnią się w zależności od szczepu, a szczepy auksotroficzne wymagające identycznej substancji, różnią się stopniem auksotrofii. Podobnie, rozmaite są mutanty o zmienionej regulacji metabolizmu, otrzymywane jako mutanty oporne na leki.
Do fermentacji L-aminokwasów zastosowano ostatnio technikę zrekombinowanego DNA. Teoria tej technologii opiera się na wzmacnianiu układu biosyntezy L-aminokwasu w gospodarzu będącym mikroorganizmem przez wzbogacanie w gen(y) kodujący(ce) enzym(y) biosyntezy L-aminokwasów. Szczegóły takiej techniki opisano na przykład w „Amino Acid Fermentation, Society Press Japan (1986)”.
Jednakże, mikroorganizmy zazwyczaj stosowane w fermentacyjnym wytwarzaniu L-amino-kwasów posiadają szlaki biosyntetyczne, obejmujące szlaki biosyntezy L-aminokwasów
185 681 i szlaki biosyntezy koenzymów, identyczne ze szlakami mikroorganizmów typu dzikiego. Mikroorganizmy wytwarzające L-aminokwasy modyfikuje się przez zniesienie wrażliwości na hamowanie przez produkt końcowy lub inne czynniki występujące w szlaku biosyntezy aminokwasów. Jako środki do wyhodowania takich szczepów stosowano, na przykład, zapewnienie właściwości auksotroficznych lub oporności na lek komórkom mikroorganizmu lub amplifikowanie genu(ów) koduj ącego(ych) enzym(y) biosyntezy przez technologię zrekombinowanego DNA.
Podczas wytwarzania L-aminokwasów z zastosowaniem mikroorganizmów, każda substancja wytwarzana jest w szlaku biosyntezy w komórce mikroorganizmu. Jednym z ważnych koenzymów o zasadniczym znaczeniu dla efektywnego działania odpowiedzialnych enzymów w układzie biosyntetycznym jest zredukowany fosforan dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego (dalej w niniejszym opisie określany jako NADPH). Jednakże, nie donoszono o zależności pomiędzy ilością NADPH w komórce a wydajnością wytwarzania L-aminokwasów z zastosowaniem mikroorganizmów.
Transhydrogenaza dinukleotydu nikotynoamidowego (dalej w niniejszym opisie określana po prostu jako „transhydrogenaza”) jest znana jako jeden z enzymów odpowiedzialnych za wytwarzanie NADPH. Wiadomo, że enzym ten jest obecny w różnych organizmach, włącznie z mikroorganizmami należącymi do rodzaju Escherichia, Bacillus i Serratia. Stosując Escherichia coli, typowy mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia, przeprowadzono oczyszczenie transhydrogenazy (David M. Ciarkę i Philip D. Bragg, Eur. J. Biochem., 149, 517-523 (1985)), sklonowanie kodującego ją genu (David M. Ciarkę i Philip D. Bragg, J. Bacteriology, 162, 367-373 (1985)) i określenie sekwencji nukleotydowej genu (David M. Ciarkę, Tip W. Loo, Shirley Gillam i Philip D. Bragg, Eur. J. biochem. 158, 647-653 (1986)), co również uczyniło oczywistym jego istnienie. Jednakże, fizjologiczna funkcja enzymu jest wciąż prawie nieznana. Wskazuje na to fakt, że szczepy pozbawione tego enzymu nie wykazują żadnych zmian fenotypowych.
Konwencjonalnie, wydajność wytwarzania substancji docelowej poprawia się poprzez zniesienie wrażliwości na regulację syntezy przez produkt(y) końcowy(e) lub inne czynniki wytwarzane w szlaku biosyntezy substancji docelowej lub poprzez koenzym wymagany do syntezy substancji docelowej, który występuje w komórkach mikroorganizmów. Konkretnym celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie sposobu poprawienia wydajności wytwarzania substancji docelowej w oparciu o całkowicie nową teorię niż wspomniana powyżej.
W biosyntezach takich substancji, jak L-aminokwasy, w żywych organizmach zachodzi szereg reakcji redukcji. W wielu przypadkach koenzym NADPH jest wykorzystywany fizjologicznie jako wewnątrzkomórkowa substancja redukująca. Na przykład, dehydrogenaza glutaminianowa wymaga NADPH jako koenzymu w szlaku biosyntezy kwasu L-glutaminowego. Dehydrogenaza semialdehydu asparaginowego, reduktaza dihydrodipikolinianowa wymagają NADPH jako koenzymu w szlaku biosyntezy L-lizyny.
W szlakach biosyntezy innych L-aminokwasów NADPH odgrywa również ważną rolę jako koenzym. Ponadto, kwas glutaminowy ma zasadnicze znaczenie jako donor grup aminowych w wielu szlakach biosyntezy L-aminokwasów. Dlatego też, NADPH jest także wymagany do dostarczania grup aminowych w biosyntezach L-aminokwasów.
NADPH jest głownie wytwarzany przez metabolizm glukozy w cyklu pentozofosforanowym, w którym zaangażowane są dehydrogenaza glukozo-6-fosforanowa i dehydrogenaza fosfoglukonianowa. Można obliczyć, że w cyklu pentozofosforanowym wydajność wytwarzania NADPH wynosi 12 cząsteczek na jedną cząsteczkę glukozy, ponieważ uwalniany jest dwutlenek węgla.
Z drugiej strony, zredukowany dinukleotyd nikotynoamidoadeninowy (dalej w niniejszym opisie określany jako „NADH”) jest cząsteczką bardzo podobną do NADPH, jednak nie może on jednak w większości przypadków być wykorzystywany jako koenzym do biosyntezy L-amino-kwasów. NADH jest biosyntetyzowany przez cykl kwasów trikarboksylowych i w komórce obecnąjest zazwyczaj jego wystarczającą ilość.
W szlakach biosyntezy L-aminokwasów, w wyniku procesu biosyntezy pożądanych L-aminokwasów z glukozy często wytwarzane są wewnątrzkomórkowe składniki, które nie
185 681 mogą być efektywnie wykorzystywane. Zakłada się, że takie składniki są zazwyczaj utleniane w cyklu kwasów trikarboksylowych, w wyniku czego tworzą się duże ilości NADH.
Wysunięto hipotezę, że podczas wytwarzania substancji docelowej w procesie wytwarzania substancji docelowej z zastosowaniem mikroorganizmu wymagana jest duża ilość NADPH; do dostarczenia tego NADPH nieuniknione jest zużywanie glukozy i w konsekwencji wydajność wytwarzania substancji docelowej w przeliczeniu na zużyty cukier ulega obniżeniu (hipoteza 1).
Ponadto wysunięto hipotezę, że podczas procesu wytwarzania substancji docelowej z zastosowaniem mikroorganizmu nieuniknione jest akumulowanie wewnątrzkomórkowych składników, które nie mogąbyć efektywnie wykorzystywane podczas wytwarzania substancji docelowej; są one metabolizowane w cyklu kwasów trikarboksylowych, w wyniku czego występuje wzrost stężenia NADH w komórce (hipoteza 2).
Na podstawie opisanych powyżej hipotez 1 i 2 zakłada się, że jeśli wewnątrzkomórkowy NADH może być efektywnie przekształcany w NADPH, to ilość cukru wymaganego do syntezy NADPH przez mikroorganizm może się zmniejszyć, a substancja docelowa może być wytwarzana z wyższą wydajnością. Równocześnie zakłada się, że jako środek do przekształcania NADH wytwarzanego w cyklu kwasów trikarboksylowych w NADPH można wykorzystać transhydrogenazę.
Wykonano badania na podstawie opisanej powyżej koncepcji. W wyniku intensywnych badań udało się z bakterii z rodzaju Escherichia otrzymać fragment DNA zawierający gen transhydrogenazy i wykorzystując ten fragment DNA wzmocnić zdolność mikroorganizmów do wytwarzania zredukowanego fosforanu dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego. Stwierdzono ponadto, że wydajność wytwarzania L-aminokwasu ulega poprawie w wymienionych powyżej mikroorganizmach posiadających wzmocnione zdolności wytwarzania zredukowanego fosforanu dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest sposób wytwarzania L-aminokwasu, zwłaszcza L-treoniny, L-lizyny, kwasu L-glutaminowego, L-leucyny, L-izoleucyny, L-waliny lub Lfenyloalaniny, przy użyciu mikroorganizmu, w którego genomie korzystnie znany jest fragment DNA zawierający miejsce początku replikacji plazmidu zawierającego gen transhydrogenazy, działa gen transhydrogenazy i możliwa jest amplifikacja tego genu, zwłaszcza mikroorganizmu dobranego spośród grupy obejmującej bakterie należące do rodzaju Escherichia, Bacillus lub Serratia oraz Brevibacterium lactofermentum, obejmujący etapy, w których modyfikuje się lub dostarcza zmodyfikowany mikroorganizm, hoduje się mikroorganizm w podłożu hodowlanym, w którym powstaje i gromadzi się L-aminokwas, a następnie wydziela się L-aminokwas z podłoża hodowlanego, charakteryzujący się tym, że hoduje się mikroorganizm z pobudzoną aktywnością enzymatyczną transhydrogenazy nukleotydu nikotynoamidowego w komórce.
Korzystnie, hoduje się mikroorganizm z pobudzoną ekspresją genu kodującego transhydrogenazę nukleotydu nikotynoamidowego w komórce.
Szczególnie korzystnie, hoduje się mikroorganizm ze zamplifikowanym genem kodującym transhydrogenazę nukleotydu nikotynoamidoadeninowego w komórce.
Substancjami docelowymi, które maja być wytwarzane przez mikroorganizm według niniejszego wynalazku są różne L-aminokwasy, takie jak L-treonina, L-lizyna, kwas Lglutaminowy, L-leucyna, L-izoleucyna, L-walina i L-fenyloalanina. Dotyczyć może to również jakiejkolwiek innej niż powyższe substancji spośród tych dotychczas wytwarzanych przez mikroorganizmy, pod warunkiem, że do jej biosyntezy wymagany jest NADPH, na przykład kwasów nukleinowych jak kwas guanylowy i kwas inozyno wy, witamin, antybiotyków, czynników wzrostowych i substancji aktywnych fizjologicznie. Ponadto, nie trzeba dodawać, że nawet w przypadku substancji nie wytwarzanej dotąd przy użyciu mikroorganizmu, niniejszy wynalazek można zastosować pod warunkiem, że do jej biosyntezy wymagany jest NADPH.
W biosyntezie streptomycyny, na przykład, NADPH wykorzystywany jest do syntezy dTDP-4-okso-4,6-dideoksy-D-glukozy z dTDP-glukozy. Ponadto, aminokwasy służą jako prekursory w przypadku antybiotyków peptydowych, a zatem samo przez się jest zrozumiałe,
185 681 że NADPH jest wymagany do ich biosyntezy. Ponadto, prekursorami penicyliny, antybiotyku beta-laktamowego są L-walina, L-cysteina i kwas L-alfa-aminoadypinowy, a zatem NADPH jest wymagany do ich biosyntezy.
Informację na temat, jaka substancja wymaga NADPH w swojej syntezie, można uzyskać ze szlaku biosyntezy, jeśli szlak biosyntezy tej substancji jest znany.
Nie jest szczególnie ograniczone jaki mikroorganizm można wykorzystać w niniejszym wynalazku, pod warunkiem, że należy on do tych dotychczas stosowanych do wytwarzania substancji, takich jak bakterie należące do rodzaju Escherichia, maczugowce, bakterie należące do rodzaju Bacillus i bakterie należące do rodzaju Serratia. Jest on korzystnie takim organizmem, w którym fragment DNA zawierający miejsce początku replikacji plazmidu otrzymano dla tego mikroorganizmu, działa gen transhydrogenazy i można zwiększyć liczbę kopii genu transhydrogenazy. Z drugiej strony, szczep, który wyjściowo posiada wysoką zdolność wytwarzania substancji docelowej, jest najbardziej preferowany do stosowania jako szczep do poprawiania produktywności według niniejszego wynalazku. Albowiem, uważa się, że w szczepie wykazującym wysoką produktywność, wynik poprawiania produktywności według niniejszego wynalazku będzie silny, ponieważ zjawiska opisanych powyżej hipotezy 1 i 2 wykazują silne działanie. Przykładem jest szczep Escherichia coli B-3996 i podobne, gdy substancją docelową jest L-treonina, szczep Escherichia coli AJ12604 (FERM BP-3579) i podobne, gdy substancją docelową jest L-fenyloalanina, szczep Escherichia coli AJ12624 (FERM BP-3853) i podobne, gdy substancją docelową jest kwas L-glutaminowy i Brevibacterium lactofermentum AJ3990 (FERM P-3387, ATCC 31269) i podobne, gdy substancją docelowąjest L-lizyna.
Nie pojawiają się żadne problemy z podłożem wykorzystywanym do wytwarzania substancji docelowej, gdy stosuje się dobrze znane, stosowane dotychczas podłoże, zależne od wykorzystywanego mikroorganizmu. A zatem, można zastosować zwykłe podłoże, które zawiera źródło węgla, źródło azotu, jony nieorganiczne i ewentualnie inne składniki organiczne. Do przeprowadzenia niniejszego wynalazku nie jest wymagane żadne specjalne podłoże.
Jako źródło węgla możliwe jest stosowanie cukrów, takich jak glukoza, laktoza, galaktoza, fruktoza i hydrolizat skrobi; alkoholi, takich jak glicerol lub sorbitol, i kwasów organicznych, takich jak kwas fumarowy, kwas cytrynowy i kwas bursztynowy lub podobne.
Jako źródło azotu możliwe jest stosowanie nieorganicznych soli amonowych, takich jak siarczan amonowy, chlorek amonowy i fosforan amonowy; azotu organicznego, takiego jak hydrolizat soi; amoniaku gazowego i wodnego roztworu amoniaku.
Jako źródła organicznych śladowych substancji odżywczych, wskazane jest aby zawarte były w pożądanych ilościach wymagane substancje, takie jak witamina B1, L-homoseryna i Ltyrozyna bądź ekstrakt drożdżowy. Ewentualnie, dodaje się inne niż wymienione powyżej substancje - małe ilości fosforanu potasowego, siarczanu magnezowego, jonu żelaza, jonu magnezu i podobnych.
Hodowlę można prowadzić w dobrze znanych, stosowanych uprzednio warunkach, które zależą od wykorzystywanego mikroorganizmu. Mianowicie, korzystne jest prowadzenie hodowli wciągu 16-120 godzin w warunkach tlenowych. Podczas hodowli kontroluje się temperaturę hodowli, tak aby wynosiła od 25°C do 45°C i pH, tak aby wynosiło 5-8. W razie potrzeby, do doprowadzania pH można użyć nieorganicznych lub organicznych substancji kwaśnych lub zasadowych, jak również gazowego amoniaku.
W niniejszym wynalazku nie jest wymagana żadna specjalna metoda zbierania produktu metabolicznego z płynu podłoża po zakończeniu hodowli. Mianowicie, niniejszy wynalazek można przeprowadzić przez połączenie konwencjonalnych dobrze znanych metod, takich jak metoda żywicy jonowymiennej, metoda wytrącania i podobne.
Przykładem sposobu zwiększania produktywności mikroorganizmów pod względem NADPH jest zwiększanie aktywności enzymatycznej transhydrogenazy w komórkach mikroorganizmów.
Przykładem sposobu zwiększania aktywności enzymatycznej transhydrogenazy jest podwyższanie ekspresji genu transhydrogenazy w komórkach mikroorganizmów. Ponadto,
185 681 innym sposobem zwiększania aktywności enzymatycznej transhydrogenazy jest modyfikacja genu transhydrogenazy i tworzenie transhydrogenazy o podwyższonej aktywności.
Przykładem sposobu zwiększania ekspresji genu transhydrogenazy w komórkach mikroorganizmów jest zwiększenie liczby kopii genu transhydrogenazy w komórkach mikroorganizmów.
Do zwiększenia liczby kopii genu transhydrogenazy, konieczny jest fragment DNA zawierający wyżej wspomniany gen. W związku z tym, gen transhydrogenazy sklonowano w szczepie K-12 Escherichia coli jako bakterii należącej do rodzaju Escherichia i określono jego sekwencję nukleotydową (D. M. Ciarkę i in., Eur. J. Biochem., 158, 647-653. A zatem, przygotowanie fragmentu DNA zawierającego wyżej wspomniany gen uzyskuje się przez zastosowanie metody ujawnionej przez Clarke'a i in. Ponadto, pożądany fragment DNa można otrzymać metodą hybrydyzacji stosując syntetyczną sondę DNa, przygotowaną w odniesieniu do sekwencji nukleotydowej ujawnionej przez D. M. Clarke'a i in., oraz metodą PCR stosując syntetyczne startery DNA przygotowane w odniesieniu do wyżej wspomnianej sekwencji nukleotydowej. Jeśli fragment DNA zawierający gen transhydrogenazy zliguje się z DNA wektora ulegającego autonomicznej replikacji w docelowym mikroorganizmie, możliwe jest zwiększenie liczby kopii genu transhydrogenazy.
Starter DNA, który stosuje się klonując gen transhydrogenazy z bakterii należącej do rodzaju Escherichia przez zastosowanie metody PCR można właściwie przygotować na podstawie, na przykład, znanej sekwencji Escherichia coli (D. M. Ciarkę i in., Eur. J. Biochem., 158, 647-653 (1986)). Ponieważ transhydrogenaza zawiera dwie podjednostki, może być konieczne zamplifikowanie obu genów pntA i pntB każdej z nich. Odpowiednie są dwa startery 5'-CTGATTTTTGGATCCAGATCACAG-3' (sekwencja o numerze identyfikacyjnym: 1) i 5'CGTTCTGTTAAGCTTTCTCAATAA-3' (sekwencja o numerze identyfikacyjnym: 2), które mogą zamplifikować region o długości 3 kb zawierający oba geny pntA i pntB. Startery te różnią się nieznacznie od sekwencji podanej przez Clarke'a i in. Jednakże, dzięki zmianom w sekwencji, możliwe jest wprowadzenie miejsca rozszczepienia BamHI przed obu genami pntA i pntB oraz miejsca rozszczepienia HindIU za obu genami pntA i pntB. Ani miejsce BamHI, ani miejsce Hindlll nie występuje w obu genach i w ich pobliżu. Są one zatem dogodne przy klonowaniu zamplifikowanego fragmentu DNA z wykorzystaniem tych enzymów restrykcyjnych i przy przenoszeniu do DNA innego wektora. Syntezę DNA startera można przeprowadzić zgodnie z powszechną metodą, stosując syntezator DNA model 380B, produkowany przez Applied Biosystems, oraz przez zastosowanie metody z wykorzystaniem fosforynoamidów (patrz Tetrahedron Letters, 22, 1859 (1981)). PCR można przeprowadzić stosując DNA Thermal Cycler model PJ2000, produkowany przez Takara Shuzo Co., Ltd., i używając polimerazy DNa Tag, zgodnie z metodą podaną przez producenta.
Fragment DNA zawierający gen transhydrogenazy można otrzymać z mikroorganizmu innego niż bakterie należące do rodzaju Escherichia. Pożądany fragment DNA można otrzymać stosując jako metodę jego otrzymywania metodę hybrydyzacji z syntetyczną sondę DNA, przygotowaną w odniesieniu do sekwencji nukleotydowej ujawnionej przez D. M. Clarke'a i in., oraz metodą PCR stosując syntetyczne startery DNA przygotowane w odniesieniu do wyżej wspomnianej sekwencji nukleotydowej.
Sondę DNA do stosowania w metodzie hybrydyzacji lub startery DNA do stosowania przy klonowaniu genu przez zastosowanie metody PCR można odpowiednio przygotować na podstawie, na przykład, znanej sekwencji Escherichia coli (D. M. Ciarkę i in., Eur. J. Biochem., 158, 647-653 (1986)). Zakłada się, że sekwencja nukleotydową genu jest inna dla każdego z mikroorganizmów. Pożądane jest zatem przygotowanie syntetycznych DNA odpowiadających częściom konserwatywnym w stosunku do transhydrogenaz pochodzących z każdego z mikroorganizmów.
Gen transhydrogenazy' zamplifikowany metodą PCR liguje się z DNA wektora ulegającego autonomicznej replikacji w komórce bakterii należącej do rodzaju Escherichia, jeśli wprowadza się go do bakterii należącej do rodzaju Escherichia, i wprowadza się go do komórek bakterii należącej do rodzaju Escherichia.
185 681
W przypadku wprowadzania otrzymanego fragmentu DNA zawierającego gen transhydrogenazy do mikroorganizmu innego niż należący do rodzaju Escherichia, wyżej wspomniany fragment DNA liguje się z DNA wektora ulegającego autonomicznej replikacji w komórce mikroorganizmu poddawanego wprowadzaniu wyżej wspomnianego fragmentu DNA, i wprowadza do wyżej wymienionych komórek.
DNA wektora plazmidowego jest korzystny jako DNA wektora, który może być wykorzystany w niniejszym wynalazku; jego przykładami sąpUC19, pUC18, pBR322, pHSG299, pHSG399, RSF1010 i podobne. Dostępne są również inne niż powyższe, fagowe wektory DNA. W celu uzyskania wydajnej ekspresji transhydrogenazy, dopuszczalne jest również zastosowanie wektora działającego w mikroorganizmach, takiego jak lac, trp i PL. Ponadto, w celu zwiększenia liczby kopii genu transhydrogenazy, DNA zawierający wyżej wspomniany gen można zintegrować z chromosomem stosując metodę wykorzystującą transpozon (Berg, D.E. i Berg, C. M., Bio/Technol., 1, 417 (1983), faga Mu (japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 2-109985) lub rekombinację homologiczną (Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Lab. (1972)).
Jeśli mikroorganizmem, do którego wprowadza się gen jest maczugowiec, DNA wektora, który można zastosować w niniejszym wynalazku, jest wektor plazmidowy ulegający autonomicznej replikacji w maczugowcu, taki jak pAM330 (patrz publikacja japońskiego opisu patentowego numer 1-11280) i pHM1519 (patrz japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 58-77895).
W celu wyselekcjonowania szczepu posiadającego rzeczywiście wzmocnioną aktywność enzymatyczną transhydrogenazy ze szczepów-kandydatów posiadających potencjalnie wzmocnioną aktywność enzymatyczną transhydrogenazy, można zastosować jako metodę potwierdzenia wzmocnienia aktywności enzymatycznej transhydrogenazy na przykład znaną metodę (David M. Clarke i Philip D. Bragg, Journal of Bacteriology, 162, 367-373 (1985)).
Przedmiot wynalazku w przykładach realizacji jest odtworzony na rysunku, na którym fig. 1 przedstawia przygotowywanie plazmidu pMW::THY, fig. 2 przedstawia przygotowywanie plazmidu pHSG::THYB, a fig. 3 przedstawia przygotowywanie plazmidu pSU::THY.
Niniejszy wynalazek zostanie wyjaśniony bardziej konkretnie poniżej, w korzystnych przykładach wykonania.
Przykład 1: Klonowanie genu transhydrogenazy
Sekwencja nukleotydowa genów pntA i pntB, które kodują transhydrogenazę Escherichia coli, została określona uprzednio (D. M. Clarke i in., Eur. J. Biochem. 158, 647-653 (1986)), i opisano, że pntA i pntB kodują białka o długości odpowiednio 502-reszt aminokwasowych i 462 reszt aminokwasowych. Ponadto, wiadomo również, że oba wymienione powyżej białka są wymagane do ekspresji aktywności enzymatycznej transhydrogenazy, że oba geny pntA i pntB zlokalizowane są kolejno na chromosomalnym DNA, i że dzięki temu oba geny można sklonować w jednym fragmencie DNA.
Aby ułatwić późniejsze operacje, autorzy wynalazku jednocześnie sklonowali nie tylko oba geny pntA i pntB, ale również region położony przed tymi genami, który posiada aktywność promotora. Konkretnie, fragment DNA zawierający gen i region promotora zamplifikowano przez PCR w celu sklonowania go.
Jako startery PCR zsyntetyzowano zgodnie z konwencjonalną metodą dwa syntetyczne oligonukleotydy, posiadające sekwencję 5 '-CTGATTTTTGGATCCAGATCACAG-3' (sekwencja o numerze identyfikacyjnym: 1) i 5'-CGTTCTGTTAAGCTTTCTCAATAA-3' (sekwencja o numerze identyfikacyjnym: 2). Jako DNA matrycowy do PCR przygotowano całkowity genomowy DNA Escherichia coli K-12 MC 1061 według metody Saitoh i Miura (Biochem. Biophys. Acta, 72, 619, (1963)). Docelowy fragment DNA zamplifikowano przez PCR stosując dwa oligonukleotydy starterowe i matrycę chromosomalnego DNA zgodnie z metodą Erlicha i in. (PCR Technology, Stockton press (1989)). Syntetyczne DNA użyte jako startery miały niewielką różnicę w odpowiadających środkowych częściach syntetycznych fragmentów DNA w porównaniu z sekwencją nukleotydową podaną przez Clarke i in. Jest to zaplanowane dla wprowadzenia miejsca rozszczepienia BamHI i miejsca rozszczepienia Hindlll przy projektowaniu syntetycznych oligonukleotydów. Te miejsca rozszczepienia enzymów
185 681 restrykcyjnych wymagane są do wstawiania zamplifikowanego fragmentu DNA do DNA wektora. Wprowadzenie miejsc restrykcyjnych powoduje brak dopasowania pomiędzy starterami i chromosomalnym DNA w procesie PCR. Jednakże, brak dopasowania nie wpływa na amplifikację DNA w PCR, ponieważ te miejsca restrykcyjne zlokalizowane były w środkowych częściach syntetycznego fragmentu DNA. Amplifikację fragmentu DNA o długości 3,0 kb potwierdzono przez elektroforezę w żelu agarozowym.
Zamplifikowany fragment DNA o długości 3,0 kb i wektor plazmidowy pMWl 18, posiadający marker oporności na ampicylinę, (dostępny w Nippon Gene Inc.) strawiono BamHI i HindUL Strawione fragment DNA i DNA wektora zligowano ligazą DNA w celu przygotowania zrekombinowanego DNA. Otrzymany zrekombinowany plazmid nazwano pMW::THY (patrz fig. 1).
Escherichia coli JM109 (dostępna w Takara Shuzo Co., Ltd.) stransformowano plazmidem pMW::THY i otrzymano transformant Escherichia coli JM 109 (pMW::THY). Aktywność enzymatyczną transhydrogenazy obecną w każdym z roztworów ekstraktów komórkowych Escherichia coli JM109 i Escherichia coli JM 109 (pMW::THY) mierzono zgodnie ze znaną metodą (David M. Ciarkę i Philip D. Bragg, J. Bacteriology, 162, 367-373 (1985)). Wyniki przedstawiono w tabeli 1.
Tabela 1
Szczepy JM 109 JM109 (pMW::THY)
Aktywność właściwa transhydrogenazy (μ/mg białka) 1,0 1,7
Jak przedstawiono w tabeli 1, jest oczywiste, że Escherichia coli JM 109 (pMW::THY) ma wyższą aktywność enzymatyczną niż Escherichia coli JM 109. Na podstawie wyników udowodniono, że fragment DNA wstawiony do plazmidu pMW::THY zawiera gen transhydrogenazy. Escherichia coli zawierającą plazmid pMW::THY oznaczono jako szczep AJ12929. Szczep AJ 12929 zdeponowano w National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry (1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japonia; kod pocztowy 305) 4 października 1993 r. pod numerem depozytowym FERM P-13890, przeniesiono z pierwotnego depozytu do depozytu międzynarodowego działającego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 14 września 1994 r. i zdeponowano pod numerem depozytowym FERM BP-4798.
DNA plazmidowy pMW::THY przygotowano zgodnie z konwencjonalną metodą i strawiono BamHI i HindIII dla wyizolowania fragmentu DNA o długości 3,0 kb zawierającego gen transhydrogenazy. Wektor plazmidowy pHSG399, posiadający marker oporności na chloramfenikol (dostępny w Takara Shuzo Co., Ltd.) strawiono BamHI i HindIII i wyizolowano duży fragment. Następnie fragment DNA zawierający gen transhydrogenazy i duży fragment BamHIHindUI pHSG399 zligowano ligazą DNA dla otrzymania plazmidu pHSG::THY.
Plazmid pHSG::THY może ulegać autonomicznej replikacji w komórkach mikroorganizmów należących do Escherichia, ale nie utrzymuje się w sposób stabilny w komórkach maczugowców. A zatem, do plazmidu pHSG::THY wprowadzono miejsce początku replikacji otrzymane z plazmidu ulegającego autonomicznej replikacji pochodzącego z maczugowca.
Plazmid pHM1519, ulegający autonomicznej replikacji w komórkach maczugowców (patrz japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 58-77895) strawiono enzymem restrykcyjnym BamHI dla otrzymania fragmentu DNA o długości 3,0 kb, zawierającego miejsce początku replikacji. Z drugiej strony, plazmid pHSG::THY strawiono BamHI dla otrzymania fragmentu DNA. Oba fragmenty DNA zligowano ligazą DNA w celu przygotowania plazmidu pHSG::THYB (fig. 2). Szczep Escherichia coli zawierający pHSG:THYB oznaczono jako szczep AJ12872. Ten szczep AJ12872 zdeponowano w National Institute of Bioscience and Humań Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry 4 października 1993 r. pod numerem depozytowym FERM P-13889, przeniesiono z pierwotnego depozytu do depozytu międzynarodowego działającego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 14 września 1994 r. i zdeponowano pod numerem depozytowym FERM BP-4797.
185 681
Ponadto, plazmid pSU18, który ulega autonomicznej replikacji w komórkach bakterii należących do rodzaju Escherichia i ma gen oporności na kanamycynę (Borja, Bartolome i in., Gene, 102, 75-78 (1991)) strawiono enzymami restrykcyjnymi BamHI i HindlH dla otrzymania dużego fragmentu. Duży fragment zligowano stosując ligazę DNA z fragmentem DNA o długości 3,0 kb, zawierającym opisany powyżej gen transhydrogenazy w celu przygotowania plazmidu pSU::THY (fig. 3). Szczep Escherichia coli zawierający pSU::THY oznaczono jako szczep AJ12930. Ten szczep AJ12930 zdeponowano w National Institute of Bioscience and Humań Technology, Agency of Industrial Microorganism Breeding, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry 4 października 1993 r. pod numerem depozytowym FERM P-13 891, przeniesiono z pierwotnego depozytu do depozytu międzynarodowego działającego na wanmkach Porozumienia Budapesztańskiego 14 września 1994 r. i zdeponowano pod numerem depozytowym FERM BP-4799.
Stwierdzono, jak na wydajność wytwarzania różnych L-aminokwasów w komórkach bakterii należącej do rodzaju Escherichia lub maczugowca wpływa zwiększenie aktywności transhydrogenazy w obu bakteriach.
Przykład 2: fermentacyjne wytwarzanie L-treoniny przez szczep z wprowadzoną transhydrogenazą
Spośród wytwarzających L-treoninę bakterii z gatunku Escherichia coli, szczep B-3996 (patrz japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 3-501682 (PCT)) posiada najwyższą zdolność wytwarzania wśród tych znanych obecnie. A zatem, szczepu B-3996 użyto jako gospodarza do oszacowania wpływu wzmocnienia transhydrogenazy. Szczep B-3996 zawierający plazmid pVIC40 (broszura publikacji światowego opisu patentowego numer W090/04636), który otrzymano przez wstawienie operonu treoninowego do wektora plazmidowego o szerokim spektrum gospodarzy pAYC32, posiadającego marker oporności na streptomycynę (zobacz, Chistoserdov A. Y. i Tsygankov Y. D., Plasmid, 1986, 16, 161-167). Szczep B-3996 zdeponowano w Research Institute for Genetics and Industrial Microorganism Breding pod numerem rejestracyjnym RIA1867.
Plazmid pMW:: THY odzyskano z Escherichia coli AJ12929 otrzymanego w Przykładzie 1 według metody Maniatisa i in. (Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1. 21 (1989)). Otrzymany plazmid pMW: : THY wprowadzono do szczepu B-3996 według metody D. M. Monisona (Methods in Enzymology, 68, 326, (1979)). Szczep B-3996 stransformowany pMW::THY oznaczono jako szczep B-3996(pMW::THY). Szczep B-3996 i szczep B-3996(pMW::THY) hodowano w następujących warunkach.
Hodowlę prowadzono w ciągu 38 godzin w temperaturze 37°C z mieszaniem przy 114116 obrotach na minutę, stosując podłoże posiadające skład przedstawiony w tabeli 2. Wymienione w tabeli 2 składniki A, B i C przygotowano oddzielnie, wyjałowiono i schłodzono, przy mieszaniu stosując 16/20 objętości składnika A, 4/20 objętości składnika B i 30 g/litr składnika C. Wyniki hodowli przedstawiono w tabeli 3. Udowodniono, że wydajność wytwarzania L-treoniony poprawiła się w wyniku wzmocnienia wewnątrzkomórkowej aktywności transhydrogenazy w wytwarzającej L-treoninę bakterii należącej do rodzaju Escherichia.
Tabela 2. Podłoże do wytwarzania treoniny
g/litr
1 2 3
(A) (NH4)2SO4 16
KH2PO4 1
MgSO47H2O 1
FeSO47H2O 0,01
MnSO45H2O 0,01
Ekstrakt drożowy (Difco) 2
L-metionina 0,5
Doprowadzone KOH do pH 7,0 i autoklawowane w temperaturze 115°C w ciągu 10 minut (16/20 objętości)
185 681 cd. tabeli 2
1 2 3
(B) (C) Antybiotyki 20% glukoza Autoklakckaza w temperaturze 115°C w ciągu 10 minut CaCO3 zgodny z farmakopeą AutoklakCkazL w temperaturze 180°C w ciągu 2 dni (streptomycyna: 100 pg/ml, k^smy^a: 5 pg/ml) (4/20 objętości) (30 g/litr)
Tabela 3
Szczepy B-3996 B-3996(pMW: :THY)
freonina (g/litr) 12,97 13,99
Przykład 3: fermentacyjne wytwαrozzie L-lizyny przez szczep z wprowadzoną trazyhydrogenazą
Sprawdzano, czy wydajność kytksrzaziz L-lisLzy poprawiła się w wyniku wsmoczieziz wewzątrokcmórkcwej aktywności trsnyhydrcgezsoL w maczugowcu kytwsrzzjącLm Lalioyzę. Jako wLksrzającą L-lizynę bakterię należącą do maczugowców oaytcycwsnc szczep Brevibacterium lactofermentum AJ3990. Szczep AJ3990 zdeponowano w Nalwnal Institute of Bicsczzcz and Humań Tzchzolcgy, Agency of Induytrisl Science and Techzolcgy, Ministry of Izterzαticzαl Trade and Industry i nadano mu numer depcsytoky FERM P-3387. Plazmid pHSG::THYB odzyskano ze szczepu Escherichia coli AJ12872 otrzymanego w przykładzie 1 według metody Msziztiyz i in. (Sambrook, J., Fritsch, E. F., Μ^ϊζ^, T., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laborator^y Press, 1. 21 (1989)). Otrzymany plazmid wprcwsdoozo do szczepu AJ3390 według metody transformacji stosując impuls elektryczny (patrz japoński kyłożezicwL opis patentowy numer 2-207791). Szczep AJ3990 strzzsformcwzny pHSG::THYB oznaczono jako szczep AJ3990 (pHSG::THYB). Szczep AJ3990 i szczep AJ3990 (pHSG::THYB) hodowano w następujących warunkach.
Hodowlę prowadzono w ciągu 72 godzin w temperaturze 31,5°C z mieszaniem przy 114-116 obrotach nr minutę, stosując podłoże posiadające skład przedstawiony w tabeli 4. Jsko cukier użyto trzech różnych cukrów, glukozy, sacharozy i fruktozy. Wyniki hodowli prszdytzwiozo w tabeli 5. Udowodniono, że wydajność kytwsroaziα L-lizyny poprawiła się w wyniku wzmocnienia wewzątrokomórkowej aktywności trsnshLdrogezaoL w maczugowcu kytkaroającym L-lizynę.
Tabela 4. Podłoże do wytkaroazia lizyny
Cukier 36 g/litr
NH,Cl 20 g/litr
KH2PO4 1 g/litr
MgSO47H2O 0,4 g/litr
FeSO47H2O 10 mg
MzSO44H2O 8 mg
Hydrolizat białkowy soi (jako źródło azotu) 1 mg
Tiamina-HCl 100 mg
Satyna 300 mg
Po autcklakcksniu w temperaturze 115°C w ciągu 10 minut, dodawano 3% węglan wapniowy wL’alakiszL osobno.
Tabela 5
Akumulokaza ilość chlorowodorku L-lizyny (g/litr)
AJ3990 AJ3990(pHSG::THYB)
Glukoza 13,6 14,5
Sacharoza 11,1 12,6
Fruktoza 8,2 11,9
185 681
Przykład 4: fermentacyjne wytwarzanie L-fenyloalaniny przez szczep z wprowadzoną transhydrogenazą
Sprawdzano, czy wydajność wytwarzania L-fenyloalaniny ulegała poprawie przez wzmocnienie wewnątrzkomórkowej aktywności transhydrogenazy w wytwarzającej L-fenylo-alaninę bakterii należącej do rodzaju Escherichia. Jako wytwarzającą L-fenyloalaninę bakterię należącą do rodzaju Escherichia, zastosowano szczep Escherichia coli AJ 12604. Szczep AJ12604 zawierający plazmid pBR-aroG4, który otrzymano przez wstawienie zmutowanego genu aroG do wektora plazmidowego pBR322, posiadającego marker oporności na ampicylinę, oraz plazmid pACMAB, który otrzymano przez wstawienie zmutowanego genu pheA do wektora plazmidowego pACYC184, posiadającego marker oporności na chloramfenikol (patrz japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 5-236947). Szczep AJ 12604 zdeponowano w National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry 12 stycznia 1991 r. pod numerem depozytowym FERM P-11975, przeniesiono z pierwotnego depozytu do depozytu międzynarodowego działającego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 26 września 1991 r. i zdeponowano pod numerem depozytowym FERM BP-3579. Plazmid pSU::THY odzyskano ze szczepu Escherichia coli AJ12930 otrzymanego w przykładzie 1 sposobem według metody Maniatisa i in. (Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1. 21 (1989)). Otrzymany plazmid wprowadzono do szczepu AJ12604 sposobem według metody D. M. Morrisona (Methods in Enzymology, 68, 326, (1979)). Szczep AJ12604 stransformowany pSUr.THY oznaczono jako szczep AJ12604(pSU::THY). Szczep AJ12604 i szczep AJ12604(pSU::THY) hodowano w następujących warunkach.
Hodowlę prowadzono w ciągu 16 godzin w temperaturze 37°C z mieszaniem przy 114116 obrotach na minutę, stosując podłoże posiadające skład przedstawiony w tabeli 6. Wyniki hodowli przedstawiono w tabeli 7. Udowodniono, że wydajność wytwarzania L-fenyloalaniny ulegała poprawie w wyniku wzmocnienia wewnątrzkomórkowej aktywności transhydrogenazy w wytwarzającej L-fenyloalaninę bakterii należącej do rodzaju Escherichia.
Tabela 6. Podłoże do wytwarzania fenyloalaniny
g/litr
Glukoza 20
Na2HPO4 29,4
KH2PO4 6
NaCl 1
NH4CI 2
Cytrynian sodowy 20
L-glutaminian sodowy 0,4
MgSO47H2O 3
CaCl2 0,23
Tiamina-HCl 2 mg
L-tyrozyna 75 mg
Po autoklawowaniu w temperaturze 115°C w ciągu 10 minut dodawano 3% węglan wapniowy wyjałowiony oddzielnie.
Tabela 7
Szczep AJ 12604 AJ 12604 (pSU::THY)
Akumulowana ilość 4,28 4,89
L-fenyloalaniny (g/litr) 3,75 4,28
185 681
LISTA SEKWENCJI
1) INFORMACJA OGÓLNA:
(i) ZGŁASZAJĄCY: Ajinomoto Co. Inc.
(ii) TYTUŁ WYNALAZKU: Metoda wytwarzania substancji (iii) LICZBA SEKWENCJI: 2 (iv) ADRES DO KORESPONDENCJI:
(A) ADRESAT:
(B) ULICA:
(C) MIEJSCOWOŚĆ:
(D) STAN:
(E) KRAJ:
(F) KOD POCZTOWY (ZIP):
(vi) DANE DOTYCZĄCE AKTUALNEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZŁOŻENIA:
(C) KLASYFIKACJA:
(vi) DANE DOTYCZĄCE UPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZŁOŻENIA:
(viii) INFORMACJA O PEŁNOMOCNIKU/PRZEDSTAWICIELU:
(A) NAZWISKO:
(B) NUMER REJESTRACYJNY:
(C) NUMER, NA KTÓRY NALEŻY SIĘ POWOŁYWAĆ/NUMER W REJESTRZE:
(ix) INFORMACJE TELEKOMUNIKACYJNE:
(A) TELEFON:
(B) TELEFAX:
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWECJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 24 (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: jedna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: inne..syntetyczny DNA (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM 1: CTGATTTTTG GATCCAGATC ACAG (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM 2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWECJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 24 (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: 'jedna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: inne..syntetyczny DNA (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM 2: CGTTCTGTTA AGCTTTCTCA ATAA
185 681 .3
Hmdin
BamHl trawienie BamHl i Hindtll
BamHl Hindm
trawienie BamHl i Hindtll ligaza DNA
Hindin
BamHl
185 681
Fig.2
BamHI H/ndlll
BamHI
BamHI pntA pntB
HiaKR
BamHI miejsce początku replikacji Brevibacteruun
Hindlll
BamHI
BamHI
185 681
Fig.1
chromosomalny DNA E. coli syntetyczny starter reakcja PCR trawienie BamHI i Hindlll pntA pntB
BamHI
HindIU
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (3)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania L-aminokwasu, zwłaszcza L-treoniny, L-lizyny, kwasu L-glutaminowego, L-leucyny, L-izoleucyny, L-waliny lub L-fenyloalaniny, przy użyciu mikroorganizmu, w którego genomie korzystnie znany jest fragment DNA zawierający miejsce początku replikacji plazmidu zawierającego gen transhydrogenazy, działa gen transhydrogenazy i możliwa jest amplifikacja tego genu, zwłaszcza mikroorganizmu dobranego spośród grupy obejmującej bakterie należące do rodzaju Escherichia, Bacillus lub Serratia oraz Brevibacterium lactofermentum, obejmujący etapy, w których modyfikuje się lub dostarcza zmodyfikowany mikroorganizm, hoduje się mikroorganizm w podłożu hodowlanym, w którym powstaje i gromadzi się L-aminokwas, a następnie wydziela się L-aminokwas z podłoża hodowlanego, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm z pobudzoną aktywnością enzymatyczną transhydrogenazy nukleotydu nikotynoamidowego w komórce.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm z pobudzoną ekspresją genu kodującego transhydrogenazę nukleotydu nikotynoamidowego w komórce.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm ze zamplifikowanym genem kodującym transhydrogenazę nukleotydu nikotynoamidoadeninowego w komórce.
PL94314090A 1993-10-28 1994-10-26 Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu PL185681B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP27082893 1993-10-28
PCT/JP1994/001791 WO1995011985A1 (en) 1993-10-28 1994-10-26 Process for producing substance

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL314090A1 PL314090A1 (en) 1996-08-19
PL185681B1 true PL185681B1 (pl) 2003-07-31

Family

ID=17491585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL94314090A PL185681B1 (pl) 1993-10-28 1994-10-26 Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5830716A (pl)
EP (1) EP0733712B1 (pl)
JP (1) JP2817400B2 (pl)
KR (1) KR100230878B1 (pl)
CN (1) CN1082092C (pl)
AT (1) ATE210728T1 (pl)
AU (1) AU687458B2 (pl)
BR (1) BR9407907A (pl)
CA (1) CA2175042C (pl)
CZ (1) CZ291499B6 (pl)
DE (1) DE69429452C5 (pl)
DK (1) DK0733712T3 (pl)
ES (1) ES2166788T3 (pl)
HU (1) HU221120B1 (pl)
MY (1) MY121990A (pl)
PE (1) PE30295A1 (pl)
PL (1) PL185681B1 (pl)
RU (1) RU2182173C2 (pl)
SK (1) SK283058B6 (pl)
WO (1) WO1995011985A1 (pl)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9622516D0 (en) * 1996-10-29 1997-01-08 Univ Cambridge Tech Enzymic cofactor cycling
FI980551A7 (fi) * 1998-03-11 1999-09-12 Valtion Teknillinen Transformoidut mikro-organismit, joilla on parannettuja ominaisuuksia
AU756507B2 (en) 1998-03-18 2003-01-16 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid
EP1097217A2 (en) * 1998-07-10 2001-05-09 Jens Nielsen Metabolically engineered microbial cell comprising a modified redox activity
US7018829B1 (en) 1998-07-10 2006-03-28 Fluxome Sciences A/S Metabolically engineered microbial cell with an altered metabolite production
JP3965821B2 (ja) * 1999-03-09 2007-08-29 味の素株式会社 Ｌ−リジンの製造法
CA2377693C (en) 1999-07-23 2016-11-08 Archer-Daniels-Midland Company Methods for producing l-amino acids
US6830903B1 (en) 1999-07-23 2004-12-14 Archer-Daniels-Midland Company Methods for producing L-amino acids using a corynebacterium glutamicum with a disrupted pgi gene
US6586214B1 (en) * 1999-09-15 2003-07-01 Degussa Ag Method for increasing the metabolic flux through the pentose phosphate cycle in coryneform bacteria by regulation of the phosphoglucose isomerase (pgi gene)
ES2313878T3 (es) 2000-01-21 2009-03-16 Ajinomoto Co., Inc. Procedimiento para la produccion de l-lisina.
CN101824392B (zh) * 2000-01-21 2014-09-24 味之素株式会社 生产l-赖氨酸的方法
MXPA01011643A (es) * 2000-03-20 2003-02-27 Degussa Proceso para la preparacion fermentativa de l-aminoacidos con amplificacion del gen gnd.
JP4380029B2 (ja) * 2000-07-05 2009-12-09 味の素株式会社 微生物を利用した物質の製造法
JP4265093B2 (ja) * 2000-08-11 2009-05-20 味の素株式会社 スレオニン及びイソロイシンの製造法
AU2001295456A1 (en) 2000-09-12 2002-03-26 Degussa A.G. Nucleotide sequences which code for the gora gene
US7326549B2 (en) * 2001-03-19 2008-02-05 Cargill, Incorporated Myo-inositol oxygenases
RU2299907C2 (ru) * 2001-09-06 2007-05-27 Адзиномото Ко., Инк. Бактерия рода bacillus, продуцирующая l-аминокислоту, и способ получения l-аминокислоты
FI20012091A0 (fi) * 2001-10-29 2001-10-29 Valtion Teknillinen Sienimikro-organismi, jolla on parantunut suorituskyky bioteknisessä prosesseissa
ATE423843T1 (de) * 2001-12-03 2009-03-15 Kyowa Hakko Kogyo Kk Mutierte 6-phosphogluconat-dehydrogenase
GB0227435D0 (en) * 2002-11-25 2002-12-31 Univ Denmark Tech Dtu Metabolically engineered micro-organisms having reduced production of undesired metobolic products
WO2005010175A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-03 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-lysine or l-threonine using escherichia bacteria having attnuated malic enzyme activity
JP4780783B2 (ja) * 2004-02-27 2011-09-28 協和発酵バイオ株式会社 アミノ酸の製造法
US20070092951A1 (en) 2005-03-24 2007-04-26 Degussa Ag Alleles of the zwf gene from coryneform bacteria
JP2007185184A (ja) * 2005-12-16 2007-07-26 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
EP1979486B1 (en) 2006-01-30 2013-04-17 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009089603A (ja) 2006-02-02 2009-04-30 Ajinomoto Co Inc メタノール資化性細菌を用いたｌ−リジンの製造法
JP2009095237A (ja) 2006-02-02 2009-05-07 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
EP2004803A2 (en) 2006-03-23 2008-12-24 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using bacterium of theenterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna
JP2009060791A (ja) 2006-03-30 2009-03-26 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2009165355A (ja) * 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2007136133A1 (en) 2006-05-23 2007-11-29 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family
CN103215319A (zh) * 2006-07-19 2013-07-24 味之素株式会社 使用肠杆菌科细菌产生l-氨基酸的方法
JP2010017082A (ja) 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010017081A (ja) * 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
WO2008072761A2 (en) * 2006-12-11 2008-06-19 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing an l-amino acid
RU2006143864A (ru) 2006-12-12 2008-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006145712A (ru) * 2006-12-22 2008-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
JP5540504B2 (ja) 2007-01-22 2014-07-02 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2010088301A (ja) * 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010110216A (ja) 2007-02-20 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法
JP2010110217A (ja) 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2010130899A (ja) 2007-03-14 2010-06-17 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
BRPI0823327A2 (pt) 2007-03-16 2013-10-22 Genomatica Inc Biocatalisadores microbianos que não ocorrem naturalmente e métodos para a biosíntese de ácido 4-hidroxibutanóico e 1,4-butanodiol
EP1975241A1 (de) 2007-03-29 2008-10-01 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
JP2010226956A (ja) * 2007-07-23 2010-10-14 Ajinomoto Co Inc Ｌ−リジンの製造法
US7947483B2 (en) 2007-08-10 2011-05-24 Genomatica, Inc. Methods and organisms for the growth-coupled production of 1,4-butanediol
RU2395579C2 (ru) * 2007-12-21 2010-07-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia
WO2009031565A1 (ja) 2007-09-04 2009-03-12 Ajinomoto Co., Inc. アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
JP2010263790A (ja) * 2007-09-04 2010-11-25 Ajinomoto Co Inc アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
DE102007044134A1 (de) 2007-09-15 2009-03-19 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2215243A2 (en) * 2007-10-31 2010-08-11 GEVO, Inc. Methods for the economical production of biofuel precursor that is also a biofuel from biomass
DE102007052270A1 (de) 2007-11-02 2009-05-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2060636A1 (de) 2007-11-14 2009-05-20 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
WO2009093703A1 (ja) 2008-01-23 2009-07-30 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ-アミノ酸の製造法
RU2008105793A (ru) 2008-02-19 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена
EP2098597A1 (de) 2008-03-04 2009-09-09 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008002309A1 (de) 2008-06-09 2009-12-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008044768A1 (de) 2008-08-28 2010-03-04 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von organisch-chemischen Verbindungen unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2336347B1 (en) 2008-09-08 2017-03-15 Ajinomoto Co., Inc. An l-amino acid-producing microorganism and a method for producing an l-amino acid
EP3514242A3 (en) 2008-09-10 2019-08-28 Genomatica, Inc. Microrganisms for the production of 1,4-butanediol
CA2779262C (en) * 2008-10-31 2021-09-07 Gevo, Inc. Engineered microorganisms capable of converting pyruvate to isobutanol under anaerobic conditions
JP2012029565A (ja) 2008-11-27 2012-02-16 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010142200A (ja) 2008-12-22 2010-07-01 Ajinomoto Co Inc Ｌ−リジンの製造法
BRPI1007069A2 (pt) 2009-01-23 2015-08-25 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido.
JP5521347B2 (ja) 2009-02-16 2014-06-11 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2010141920A2 (en) 2009-06-04 2010-12-09 Genomatica, Inc. Microorganisms for the production of 1,4-butanediol and related methods
LT2438036T (lt) 2009-06-04 2017-06-26 Genomatica, Inc. Fermentacijos sultinio komponentų išskyrimo būdas
EP2267145A1 (de) 2009-06-24 2010-12-29 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102009030342A1 (de) * 2009-06-25 2010-12-30 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von organisch chemischen Verbindungen
BRPI1014661B1 (pt) 2009-07-29 2020-12-15 Ajinomoto Co., Inc. Método para produzir um l-aminoácido
JP2012223092A (ja) 2009-08-28 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
KR20120083908A (ko) * 2009-10-13 2012-07-26 게노마티카 인코포레이티드 1,4-부탄다이올, 4-하이드록시부탄알, 4-하이드록시부티릴-ｃｏａ, 푸트레신 및 관련 화합물의 제조를 위한 미생물 및 관련 방법
JP2013013329A (ja) 2009-11-06 2013-01-24 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
US8530210B2 (en) 2009-11-25 2013-09-10 Genomatica, Inc. Microorganisms and methods for the coproduction 1,4-butanediol and gamma-butyrolactone
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
RU2460793C2 (ru) 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
JP2013074795A (ja) 2010-02-08 2013-04-25 Ajinomoto Co Inc 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法
RU2471868C2 (ru) 2010-02-18 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот
US8048661B2 (en) 2010-02-23 2011-11-01 Genomatica, Inc. Microbial organisms comprising exogenous nucleic acids encoding reductive TCA pathway enzymes
US8445244B2 (en) 2010-02-23 2013-05-21 Genomatica, Inc. Methods for increasing product yields
RU2010122646A (ru) 2010-06-03 2011-12-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина
RU2471870C2 (ru) 2010-06-03 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА И L-ЦИТРУЛЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА pepA
RU2501858C2 (ru) 2010-07-21 2013-12-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2482188C2 (ru) 2010-07-21 2013-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE
JP2014036576A (ja) 2010-12-10 2014-02-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
CN102191287B (zh) * 2011-03-18 2012-08-15 宁夏伊品生物科技股份有限公司 赖氨酸的顺式发酵制备
CN102191288B (zh) * 2011-03-18 2012-08-15 宁夏伊品生物科技股份有限公司 赖氨酸的反式发酵制备
CN102191290B (zh) * 2011-03-18 2012-08-15 宁夏伊品生物科技股份有限公司 苏氨酸的发酵制备
US20120247066A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 Ice House America, Llc Ice bagging apparatus and methods
CN102234666B (zh) * 2011-06-08 2012-08-15 宁夏伊品生物科技股份有限公司 赖氨酸的流加发酵制备
US9169486B2 (en) 2011-06-22 2015-10-27 Genomatica, Inc. Microorganisms for producing butadiene and methods related thereto
RU2011134436A (ru) 2011-08-18 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности
JP2015013812A (ja) 2011-11-01 2015-01-22 味の素株式会社 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法
WO2013092967A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Deinove Bacteria and the uses thereof
SI2855687T1 (sl) 2012-06-04 2020-09-30 Genomatica, Inc. Mikroorganizmi in metode za proizvodnjo 4-hidroksibutirat, 1,4-butandiola in sorodne spojine
EP2762571A1 (de) 2013-01-30 2014-08-06 Evonik Industries AG Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren
RU2013118637A (ru) 2013-04-23 2014-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK
EP2868745B1 (en) 2013-05-13 2017-06-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for manufacturing an L-amino acid
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法
JP5958653B2 (ja) 2013-10-02 2016-08-02 味の素株式会社 アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法
RU2013144250A (ru) 2013-10-02 2015-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР
EP2886651B1 (en) 2013-10-21 2018-08-22 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid
JP6519476B2 (ja) 2013-10-23 2019-05-29 味の素株式会社 目的物質の製造法
RU2014105547A (ru) 2014-02-14 2015-08-20 Адзиномото Ко., Инк. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL
CN104789516B (zh) * 2015-04-22 2017-12-22 天津大学 一种产三羟基丙酸的集胞藻6803基因工程菌及构建方法及应用
RU2015114955A (ru) 2015-04-22 2016-11-10 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-изолейцина с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой сверхэкспрессирован ген cycA
RU2015120052A (ru) 2015-05-28 2016-12-20 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA
JP6623690B2 (ja) 2015-10-30 2019-12-25 味の素株式会社 グルタミン酸系ｌ−アミノ酸の製造法
WO2017146195A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing l-amino acids using a bacterium of the family enterobacteriaceae overexpressing a gene encoding an iron exporter
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
KR101956510B1 (ko) * 2018-07-27 2019-03-08 씨제이제일제당 (주) 신규 5'-이노신산 디하이드로게나아제 및 이를 이용한 5'-이노신산 제조방법
EP3608409A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Evonik Operations GmbH Process for preparing l amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family
EP3861109A1 (en) 2018-10-05 2021-08-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
WO2020138178A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium
BR112021014194A2 (pt) 2019-02-22 2021-12-28 Ajinomoto Kk Método para a produção de um l-aminoácido
BR112021017870A2 (pt) 2019-04-05 2021-12-07 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
JP7655312B2 (ja) 2019-09-25 2025-04-02 味の素株式会社 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法
JP7845187B2 (ja) 2020-10-28 2026-04-14 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
CN119012914A (zh) 2022-04-04 2024-11-22 味之素株式会社 防治寄生植物的方法
US20240117393A1 (en) 2022-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid
JP7716823B1 (ja) 2023-12-28 2025-08-01 味の素株式会社 Ｌ－グルタミン酸生産菌およびｌ－グルタミン酸の製造方法
EP4692312A1 (en) 2023-12-28 2026-02-11 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing l-glutamic acid

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5943157B2 (ja) * 1982-10-29 1984-10-19 工業技術院長 ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法
EP0136359B1 (en) * 1983-02-17 1991-04-03 Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha Process for preparing l-histidine
US4849345A (en) * 1985-04-17 1989-07-18 Sagami Chemical Research Center L-phenylalanine dehydrogenase and use thereof
JP2742281B2 (ja) * 1988-12-29 1998-04-22 旭化成工業株式会社 グルコース―６―リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子

Also Published As

Publication number Publication date
CA2175042A1 (en) 1995-05-04
SK283058B6 (sk) 2003-02-04
KR100230878B1 (ko) 1999-11-15
HU9601085D0 (en) 1996-06-28
AU8002694A (en) 1995-05-22
EP0733712B1 (en) 2001-12-12
DK0733712T3 (da) 2002-03-18
MY121990A (en) 2006-03-31
CZ121396A3 (en) 1996-09-11
CN1139956A (zh) 1997-01-08
CA2175042C (en) 2002-05-28
AU687458B2 (en) 1998-02-26
DE69429452C5 (de) 2012-10-25
JP2817400B2 (ja) 1998-10-30
DE69429452T2 (de) 2002-08-29
ES2166788T3 (es) 2002-05-01
KR960705947A (ko) 1996-11-08
HU221120B1 (en) 2002-08-28
CZ291499B6 (cs) 2003-03-12
CN1082092C (zh) 2002-04-03
EP0733712A1 (en) 1996-09-25
BR9407907A (pt) 1996-11-26
RU2182173C2 (ru) 2002-05-10
DE69429452D1 (de) 2002-01-24
US5830716A (en) 1998-11-03
WO1995011985A1 (en) 1995-05-04
EP0733712A4 (en) 1998-05-27
SK53796A3 (en) 1996-10-02
HUT74840A (en) 1997-02-28
PE30295A1 (es) 1995-10-26
PL314090A1 (en) 1996-08-19
ATE210728T1 (de) 2001-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL185681B1 (pl) Sposób wytwarzania L-aminokwasu przy użyciu mikroorganizmu
EP1651758B1 (en) Method for producing l-lysine or l-threonine using escherichia bacteria having attenuated malic enzyme activity
KR100337959B1 (ko) 돌연변이체포스포에놀피루베이트카복실라제,이의유전자및아미노산의제조방법
RU2204604C2 (ru) Днк, кодирующая аспартокиназу iii бактерий, и способ получения l-лизина
EP1092776B1 (en) Method for producing L-amino acids by fermentation of an Escherichia strain which is transformed with a pyruvate carboxylase-encoding gene from Bacilus subtilis
KR100823044B1 (ko) 트레오닌 및 이소류신의 제조방법
EP0877090B1 (en) Process for producing l-amino acids
CN100564516C (zh) 生产靶物质的方法
JP2926991B2 (ja) 発酵法によるｌ−リジン及びｌ−グルタミン酸の製造方法
JP2002017363A (ja) 微生物を利用した物質の製造法
CZ174697A3 (en) Gene encoding lysinedecarboxylase, micro-organism and process for preparing l-lysine
KR100815041B1 (ko) 아미노산 생산의 대사 공학
JP2003204788A (ja) 発酵法による目的物質の製造法
JP2003159065A (ja) 発酵法による目的物質の製造法
EP1514921A2 (en) Method for producing L-threonine
JP2000050894A (ja) 発酵生産物の製造法及びストレス耐性微生物
JPWO1995011985A1 (ja) 物質の製造法
JP2003204783A (ja) 発酵法による目的物質の製造法