PL191456B1 - Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed - Google Patents
Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem MaltseedInfo
- Publication number
- PL191456B1 PL191456B1 PL331493A PL33149397A PL191456B1 PL 191456 B1 PL191456 B1 PL 191456B1 PL 331493 A PL331493 A PL 331493A PL 33149397 A PL33149397 A PL 33149397A PL 191456 B1 PL191456 B1 PL 191456B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- enzyme
- malt
- enzymes
- grain
- plant
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 title abstract description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 title description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 124
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 121
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 23
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 68
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 65
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims description 33
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 abstract description 17
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 10
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 10
- 235000015041 whisky Nutrition 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 49
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 36
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 35
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 13
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 11
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 11
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 11
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 8
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 7
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 7
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 7
- 241000959173 Rasamsonia emersonii Species 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 6
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 description 6
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 6
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004890 malting Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 4
- 241000131386 Aspergillus sojae Species 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 4
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 4
- 229940098396 barley grain Drugs 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 4
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- -1 exoamylase Proteins 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 4
- 230000002573 hemicellulolytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 3
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 3
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 3
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 101001090725 Leuconostoc gelidum Bacteriocin leucocin-A Proteins 0.000 description 3
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 3
- XDMACMMTPGFUCZ-UHFFFAOYSA-N Tetra-Ac-Benzyl glucopyranoside Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(COC(=O)C)OC1OCC1=CC=CC=C1 XDMACMMTPGFUCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 3
- 235000015047 pilsener Nutrition 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 3
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- SYFHFLGAROUHNT-VEVYYDQMSA-N Arg-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SYFHFLGAROUHNT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- JGIAYNNXZKKKOW-KKUMJFAQSA-N Asn-His-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JGIAYNNXZKKKOW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- UOUHBHOBGDCQPQ-IHPCNDPISA-N Asn-Phe-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UOUHBHOBGDCQPQ-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- IDDMGSKZQDEDGA-SRVKXCTJSA-N Asp-Phe-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IDDMGSKZQDEDGA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N Asp-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 2
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 2
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N Gly-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CN CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N 0.000 description 2
- RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N His-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 2
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 2
- XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N Thr-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 2
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- XKTWZYNTLXITCY-QRTARXTBSA-N Trp-Val-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 XKTWZYNTLXITCY-QRTARXTBSA-N 0.000 description 2
- VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N Tyr-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- YGKVNUAKYPGORG-AVGNSLFASA-N Tyr-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YGKVNUAKYPGORG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N Val-Glu-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- GUIYPEKUEMQBIK-JSGCOSHPSA-N Val-Tyr-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)NCC(O)=O GUIYPEKUEMQBIK-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 229920000617 arabinoxylan Polymers 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 description 2
- 108010083942 mannopine synthase Proteins 0.000 description 2
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 2
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 2
- BKUKXOMYGPYFJJ-UHFFFAOYSA-N 2-ethylsulfanyl-1h-benzimidazole;hydrobromide Chemical compound Br.C1=CC=C2NC(SCC)=NC2=C1 BKUKXOMYGPYFJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710102786 ATP-dependent leucine adenylase Proteins 0.000 description 1
- 108010013043 Acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N Ala-Glu-Tyr Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N Ala-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 241001677738 Aleuron Species 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N Arg-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O INOIAEUXVVNJKA-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DXVMJJNAOVECBA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- RTFXPCYMDYBZNQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RTFXPCYMDYBZNQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LOEKZJRUVGORIY-CAMMJAKZSA-N Asp-Phe-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LOEKZJRUVGORIY-CAMMJAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 101000726146 Brassica napus Cruciferin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 108010061142 Endo-arabinase Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000702463 Geminiviridae Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000617808 Homo sapiens Synphilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- LEDRIAHEWDJRMF-CFMVVWHZSA-N Ile-Asn-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LEDRIAHEWDJRMF-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- JRJLGNFWYFSJHB-HOCLYGCPSA-N Leu-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JRJLGNFWYFSJHB-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- RUTZUJXAVNWLQP-BVSLBCMMSA-N Met-Tyr-Trp Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 RUTZUJXAVNWLQP-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 108700011203 Phaseolus vulgaris phaseolin Proteins 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 108010016634 Seed Storage Proteins Proteins 0.000 description 1
- BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N Ser-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OLIJLNWFEQEFDM-SRVKXCTJSA-N Ser-Asp-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OLIJLNWFEQEFDM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 description 1
- 102100021997 Synphilin-1 Human genes 0.000 description 1
- WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N Thr-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CCCN=C(N)N WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- ABWNZPOIUJMNKT-IXOXFDKPSA-N Thr-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ABWNZPOIUJMNKT-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- LXXCHJKHJYRMIY-FQPOAREZSA-N Thr-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LXXCHJKHJYRMIY-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N Thr-Val-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- UPUNWAXSLPBMRK-XTWBLICNSA-N Trp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UPUNWAXSLPBMRK-XTWBLICNSA-N 0.000 description 1
- GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N Tyr-Leu-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N Tyr-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- XTOCLOATLKOZAU-JBACZVJFSA-N Tyr-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N XTOCLOATLKOZAU-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- KRXFXDCNKLANCP-CXTHYWKRSA-N Tyr-Tyr-Ile Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 KRXFXDCNKLANCP-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 1
- KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N Val-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N Val-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC([O-])=O AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N [5-[3,5-dihydroxy-2-(1,3,4-trihydroxy-5-oxopentan-2-yl)oxyoxan-4-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound OC1C(OC(CO)C(O)C(O)C=O)OCC(O)C1OC1C(O)C(O)C(COC(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)O1 UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 1
- JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M acetylcholine chloride Chemical compound [Cl-].CC(=O)OCC[N+](C)(C)C JUGOREOARAHOCO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010076955 arabinogalactan endo-1,4-beta-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 108010052439 arabinoxylanase Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 101150103518 bar gene Proteins 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 229910002056 binary alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004464 cereal grain Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 1
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P endo-1,4-beta-Xylanase Chemical compound C=1C=CC=CC=1C[N+](CC)(CC)CCCNC(C(C=1)=O)=CC(=O)C=1NCCC[N+](CC)(CC)CC1=CC=CC=C1 YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940038580 oat bran Drugs 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 108010082527 phosphinothricin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01073—Licheninase (3.2.1.73)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
- C12C5/006—Beta-glucanase or functionally equivalent enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C7/00—Preparation of wort
- C12C7/04—Preparation or treatment of the mash
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C7/00—Preparation of wort
- C12C7/04—Preparation or treatment of the mash
- C12C7/047—Preparation or treatment of the mash part of the mash being unmalted cereal mash
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Alcoholic Beverages (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed, znamienny tym, ze do s lodu do- daje si e mieszanin e enzymów obejmuj ac a przynajmniej endo- ß-(1,4)-ksylanaz e, arabinofuranozy- daz e, a-amylaz e, endoproteaz e oraz ß-(1,3;1,4)-glukanaz e, przy czym mieszanina enzymów zmniejsza ilo sc wymaganego s lodu. PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed.
Napoje alkoholowe takie jak piwo mogą być produkowane ze słodowanego i/lub niesłodowanego ziarna jęczmienia. Słód, wraz z drożdżami, stanowi o zapachu i kolorze piwa. Ponadto, słód spełnia rolę źródła fermentowanego cukru i enzymów. Używanie słodu w procesach browarniczych zależy od rodzaju piwa i kraju, w którym jest ono produkowane. Przykładowo, w krajach afrykańskich, nie ma tradycji używania słodu.
Ogólny sposób otrzymywania słodu i warzenia piwa został ostatnio opisany przez R.C. Hoseney (Cereal Foods World, 39(9), 675-679, 1994). Słodowanie jest procesem kontrolowanego kiełkowania przebiegającego poprzez kontrolowane suszenie ziarna jęczmienia. Ziarno jest przerabiane na słód poprzez kolejne etapy moczenia, kiełkowania, wzrostu i suszenia (piecowania). Etap kiełkowania jest istotny dla otrzymania ekspresji grupy enzymów, które umożliwiają modyfikowanie endospermy. Modyfikacja ta daje ulegające fermentacji węglowodany.
Kolejne etapy suszenia/ogrzewania w procesie słodowania dają zapach i kolor dzięki nieenzymatycznej reakcji czernienia (Maillard).
Proces słodowania jest bardzo skomplikowaną oraz kosztowną częścią procesu produkcji piwa. Można wymienić kilka wad słodowania:
• poziom enzymów słodu jest zmienny, co prowadzi do nieprzewidzianych rezultatów, • nie każda z pożądanych aktywności enzymatycznych jest otrzymywana lub jest otrzymywana w odpowiedniej ilości podczas kiełkowania, co zmusza do uzupełnienia enzymów, • warunki sprzyjające powstawaniu zapachu i koloru słodu mogą być niszczące dla jego aktywności enzymatycznej, • proces jest kosztowny, • 10 - 20% utrata wagi podczas kiełkowania, będąca efektem oddychania i wzrostu korzeni (są one usuwane podczas oczyszczania słodu), • nie jest możliwe produkowanie słodu w dowolnym miejscu, ze względu na niesprzyjające warunki klimatyczne, • stosowanie słodu może prowadzić do koloidalnej niestabllności ze względu na rozpuszczanie białek przez proteazy zawarte w słodzie, • może dochodzić do tworzenia się amin biogennych (J.Food Science 59(5), 1104-1107, 1994), które mogą prowadzić do np. zatrucia histaminowego.
Tradycyjnie, słód był jedynym źródłem fermentowanych węglowodanów i enzymów, i w wielu krajach jest tak nadal. Jednak, coraz więcej piwa jest produkowane z wykorzystaniem innych źródeł węglowodanów niż słód i/lub jęczmień, tj. praktycznie dowolnego źródła skrobi lub upłynnionej/zdegradowanej skrobi, czyli tzw. dodatków. Ponieważ słód nie jest jedynie źródłem węglowodanów poddawanych fermentacji, lecz także źródłem enzymów, dostarcza się alternatywnych enzymów, aby zastąpić więcej niż ok. 50% słodu przez niesłodowany jęczmień i/lub dodatki. Ponadto, słód daje piwu zapach i kolor.
W produkcji słodu istnieje związek między kolorem i zapachem oraz aktywnością enzymatyczną. Słód dostarczający silnego zapachu i ciemnego koloru może zostać uzyskany tylko w wyniku intensywnego suszenia w relatywnie wysokiej temperaturze. Są to warunki szkodliwe dla aktywności enzymów. Stąd też uzupełnienie enzymów z egzogennego źródła jest pożądane z kilku powodów. W związku z tym, użycie enzymów z mikroorganizmów jest w pewnych przypadkach pospolitą praktyką. Przykładowo, dla warzenia piwa ziarno i/lub słodowane ziarno jest upłynniane i scukrzane w celu uzyskania cukrów poddawanych fermentacji. Etap upłynniania może zostać ulepszony dzięki użyciu termostabilnych α-amylaz, co zostało przykładowo opisane w US 4,285,975 lub 5,180,669. Używa się także proteaz do zwiększania ilości łatwo dostępnego azotu w brzeczce dla ulepszenia fermentacji.
Obok skrobi, w ziarnach zbóż obecne są także inne polisacharydy, takie jak przykładowo β-glukany (Henry, R. J. i wsp. J.Sci.Food Agric. 36, 1243-1253, 1985). β-glukanazy obecne w słodzie nie są wystarczająco termostabilne, aby być aktywne podczas procesu warzenia piwa. Takie β-glukany są bardzo lepkie i powodują problemy przy filtracji brzeczki i piwa. Jest to powodem, dla którego mikrobiologiczne β-glukanazy są szeroko stosowane do warzenia piwa.
Nieskrobiowe polisacharydy obejmują także pentozany, których struktura była ostatnio szeroko badana (Gruppen, H. i wsp. Carbohydr. Res. 233, 45-64, 1992), w szczególności tych z jęczmienia
PL 191 456 B1 i słodu (Vietor, R. J. i wsp., Carbohydr. Res. 254, 245-255, 1994). Pentozanaza z Penicillium emersonii została użyta do ulepszenia produkcji i ekstrakcji cukrów poddawanych fermentacji podczas warzenia piwa (GB 2,150,933).
Zastosowanie ksylanazy B do ulepszenia jakości brzeczki przedstawione jest w WO94/14965.
Pomimo postępu poczynionego w tej dziedzinie, ciągle potrzebne są preparaty enzymatyczne służące do ulepszania procesu warzenia piwa.
Podsumowanie wynalazku
Niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed, w którym to do słodu dodaje się mieszaninę enzymów obejmującą przynajmniej endo-e-(1,4)-ksylanazę, arabinofuranozydazę, α-amylazę, endoproteazę oraz p-(1,3;1,4)-glukanazę, przy czym mieszanina enzymów zmniejsza ilość wymaganego słodu.
W korzystnym wykonaniu wynalazku mieszanina zawiera także scukrzającą amylazę, korzystniej mieszanina zawiera także egzopeptydazę.
W korzystnym wykonaniu sposobu według wynalazku każdy z enzymów dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku więcej niż jeden enzym dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
W kolejnym korzystnym wykonaniu wynalazku co najmniej jeden enzym dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
Korzystne jest, gdy pojedynczą roślinną linią transgeniczną jest roślinna linia jęczmienia.
Opis wynalazku
Nieoczekiwanie stwierdziliśmy, że procesy warzenia mogą być prowadzone w obecności zastrzeganej mieszaniny enzymów, z minimalną ilością słodu. Proces ten został wykorzystany do produkcji klasycznego piwa słodowego, ale może być równie dobrze wykorzystany w innych procesach, w których używa się słodu w celu uzyskania aktywności enzymatycznych.
Użyte enzymy zostały wybrane z grupy enzymów, które są niezbędne do procesu warzenia. Zawierają one enzymy wybrane z grupy enzymów amylolitycznych, grupy enzymów celulolitycznych, z grupy enzymów hemicelulolitycznych oraz z grupy enzymów proteolitycznych.
Enzymy amylolityczne obejmują enzymy takie jak α-amylaza, amylaza scukrzająca, amyloglukozydaza, egzoamylaza, pullulanaza.
Enzymy celulolityczne obejmują enzymy takie jak β-14-endoglukanaza, cellobiohydrolaza, β-glukozydaza.
Enzymy hemicelulolityczne obejmują enzymy takie jak e-1,3-1,4-glukanaza, ksylanaza, endoarabinaza, arabinofuranozydaza, arabinoksylanaza, arabinogalaktanaza, esteraza kwasu ferulenowego.
Enzymy proteolityczne obejmują enzymy takie jak egzopeptydazy i endopeptydazy (zwane także proteazami lub proteinazami).
W związku z tym, wybór odpowiedniego enzymu amylolitycznego, celulolitycznego, hemicelulolitycznego lub proteolitycznego nie jest istotą niniejszego wynalazku, gdyż wybór enzymu powinien polegać na takim doborze właściwości enzymu (takich jak zakres tolerancji pH i temperatury) i powinien być związany z odpowiednimi właściwościami w procesie warzenia.
Liczne geny kodujące enzymy amylolityczne, celulolityczne, hemicelulolityczne lub proteolityczne są znane specjalistom. Geny kodujące odpowiednie enzymy mogą pochodzić z wielu źródeł, roślinnych, zwierzęcych lub mikrobiologicznych. Korzystnie, geny te są pozyskiwane ze źródeł mikrobiologicznych.
Endo-e-(1,4)-ksylanaza może być otrzymywana z hodowli Aspergillus niger (EP 0 463 706). Arabinofuranozydaza jest dostępna jako izoenzym A lub izoenzym B (EP O 506 190) lub hydrolaza arabinoksylanowa (EP 0 730 653) pochodzące z hodowli Aspergillus niger. Termostabilne amylazy pochodzą z Bacillus licheniformis (WO91/14772, WO92/05259), i jest, przykładowo dostępna komercyjnie pod nazwą handlową Brewers Amyliq Termostable (B.A.T.S.). Aktywność termostabilnej amylazy wyraża się w jednostkach TAU. Endoproteaza może pochodzić z Bacillus amyloliquefaciens, i jest także komercyjnie dostępna pod nazwą handlową Brewers protease (+), a jej aktywność wyraża się w j ednostkach PC. Z tej samej bakterii może pochodzić także β-(1,3;1,4)-glukanaza (Hofemeister i wsp., Gene 49, 177, 1986), która to jest także komercyjnie dostępna pod nazwą handlową Filtrase L 3000 (+). Aktywność glukanazy jest wyrażana w jednostkach BGLU. Ewentualna amylaza scukrzająca może być także pozyskana z komercyjnych źródeł (amylaza z Aspergillus oryzae pod handlową na4
PL 191 456 B1 zwą Brewers Fermex, której aktywność wyrażana jest w jednostkach FAU), ale może być także otrzymywana z czystych kultur Penicillium emersonii (dostępna w ATTC (American Type Culture Collection) pod numerem ATCC16479). Ewentualna egzopeptydaza może pochodzić z czystych kultur
Aspergillus sojae, która została zdeponowana w Centraal Bureau for Schimmelcultures (CBS),
Oosterstraat 1, Baarn, Holandia, pod numerem CBS 209.96 (A. sojae (DS 8351) 12 lutego 1996).
Aktualnie znanymi aktywnościami potrzebnymi do produkcji piwa są α- i β-amylaza zamieniająca skrobię z endospermy na cukry ulegające fermentacji, proteaza degradująca białka do rozpuszczalnych związków azotowych, które są pożywką dla drożdży, i β-glukanaza oraz ksylanaza hydrolizujące, odpowiednio, jęczmienne e-1,3-1,4-glukany i ksylany do oligosacharydów, co prowadzi do obniżenia lepkości i polepszenia zdolności filtracyjnej. Stąd, aby dostarczyć wszystkich potrzebnych enzymów ze źródła egzogennego, np. mikrobiologicznego, wymagane jest dodanie, co najmniej 5 różnych enzymów. Jakkolwiek do produkcji wszystkich enzymów może zostać użyty jeden mikroorganizm, różne warunki fermentacji mogą być wymagane do optymalizacji produkcji poszczególnych enzymów.
Dzięki użyciu enzymów ze źródeł mikrobiologicznych mogą zostać ominięte pewne wady procesu słodowania wspomniane powyżej. Jednakże, użycie mikroorganizmu jako źródła enzymów ma także swoje wady:
• seria różnych fermantacji co najmniej jednego mikroorganizmu jest wymagana do otrzymania odpowiedniej ilości każdego z enzymów, • preparaty enzymatyczne mogą posiadać dodatkowe, niepożądane aktywności, • konsumenci mogą nie akceptować dodawania surowców innych niż materiał roślinny, woda i drożdże, • ograniczona stabilność preparatów enzymatycznych podczas ich przechowywania w temperaturze pokojowej.
Ogólnie, użycie transgenicznych ziaren zawierających zwiększoną ilość enzymów w procesach przemysłowych katalizowanych enzymatycznie zostało opisane w międzynarodowym zgłoszeniu WO91/14772. Bezpośrednie użycie w procesach przemysłowych ziarna zawierającego enzymy omija przede wszystkim potrzebę oczyszczania i/lub izolowania enzymu. Ziarno może służyć jako stabilna i nadająca się do przechowywania postać enzymu.
W przypadku jednego enzymu, β-1,3-1,4-glukanazy, ekspresja w ziarnie jęczmienia została wymieniona jako alternatywa dla dodawania z zewnątrz.
Wschodnio Niemieckie zgłoszenie patentowe DD 275704 ujawnia skonstruowanie wektora ekspresyjnego umożliwiającego ekspresję w ziarnie jęczmienia e-1,3-1,4-glukanazy z Bacillus. Jednakże, dotychczas nie jest znana efektywna transformacja jęczmienia. Używając ziaren wyrażających β-1,3-1,4-glukanazę z Bacillus, większa ilość ziarna może być zastąpiona w słodzie, bez uzyskania poważnych problemów filtracyjnych. Jednakże, inne aktywności enzymatyczne potrzebne do warzenia piwa są nadal uzyskiwane ze słodu lub dodawane z zewnątrz.
Mannonen i wsp. (1993) sugeruje włączenie pochodzącej z grzybów β-1,3-1,4-glukanazy do ziaren jęczmienia. Tym sposobem, proces warzenia może być ulepszony poprzez ekspresję w ziarnie β-1,3-1,4-glukanazy, która ma wyższą termostabilność niż endogenny enzym jęczmienny. Jednak w tym przypadku, intencją jest przeprowadzenie ziaren przez normalny proces słodowania. Ponadto, także w tym przypadku, inne aktywności enzymatyczne potrzebne do warzenia piwa są nadal otrzymywane ze słodu lub uzupełniane egzogennie.
W korzystnym sposobie według niniejszego wynalazku, enzymy potrzebne do warzenia są wyraźne w ziarnie transgenicznym. Tak otrzymane transgeniczne ziarno wyrażające wspomniane potrzebne enzymy jest w przewadze użyte w procesie warzenia piwa. W ten sposób, zmniejszono stosowanie słodu, i ominięto stosowanie mikrobiologicznych enzymów z zewnątrz.
Transgeniczne ziarna wyrażające enzymy potrzebne do warzenia piwa są nazwane ogólnie MaltSeed.
Rodzaje roślin, które są zdolne do produkcji pożądanych enzymów w ich ziarnie obejmują gatunki, których ziarno lub produkty z ziarna były tradycyjnie używane do warzenia piwa. Jednakże, również gatunki roślin, które nie są zwykle używane w piwowarstwie mogą zostać użyte jako źródło ziarna wyrażającego pożądane enzymy, szczególnie w takich przypadkach, gdy jedynie mała ilość takiego transgenicznego ziarna jest dodawana podczas warzenia piwa. Rodzajami roślin, które spełniają te kryteria są, przykładowo, jęczmień, kukurydza, ryż, pszenica, sorgo, proso, owies, maniok i tym podobne.
PL 191 456 B1
Gen kodujący pożądany enzym jest wyrażany w roślinnym ziarnie z wykorzystaniem sekwencji regulatorowych funkcjonujących w roślinie lub ziarnie roślinnym. Te sekwencje regulatorowe obejmują sekwencje promotorowe, sekwencje terminacyjne i, ewentualnie sekwencje wzmacniające transkrypcję.
Mogą zostać użyte sekwencje promotorowe powodujące konstytutywną ekspresję genu w całej roślinie. Można też użyć sekwencji promotorowej kierującej ekspresją genu, tak że jest on aktywny w ziarnie rośliny.
Ponadto, ekspresja pożądanego enzymu może być ukierunkowana na specyficzny obszar komórkowy, taki jak cytozol, retikulum endoplazmatyczne, wakuole, ciała białkowe, lub do przestrzeni poza komórkowej, dzięki zastosowaniu odpowiednich sekwencji ukierunkowujących.
Wybór określonego obszaru komórki lub przestrzeni poza komórkowej zależy od właściwości pożądanego enzymu i powinien zostać dokonany tak, aby dobrać odpowiednie środowisko dla enzymu. Przykładowo, pożądany enzym powinien znajdować się w otoczeniu zapewniającym optymalną stabilność białka podczas dojrzewania ziarna. Dodatkowo, pożądany enzym powinien znajdować się w otoczeniu, w którym jego ekspresja nie będzie zaburzała zasadniczych procesów metabolicznych rośliny bądź prowadziła do niszczenia żywotności rośliny lub ziarna.
W celu umożliwienia ekspresji w komórkach roślinnych sekwencji DNA kodującego wybrany enzym, dostarcza się go zwykle wraz z elementami regulatorowymi umożliwiającymi rozpoznawanie przez maszynerię biochemiczną gospodarza, co umożliwia transkrypcję i translację otwartej ramki odczytu w gospodarzu. Obejmuje to zwykle region inicjujący transkrypcję, który może być odpowiednim pochodzącym z genu wyrażanego w komórce roślinnej, jak i region inicjacji translacji odpowiedzialny za rozpoznawanie i przyłączanie rybosomu. W eukariotycznych komórkach roślinnych, taka kaseta ekspresyjna zawiera zwykle ponadto region terminacji transkrypcji ulokowany za wspomnianą otwartą ramką odczytu, umożliwiający terminację transkrypcji i poliadenylację pierwotnego transkryptu. Ponadto, użyte kodony mogą zostać dostosowane do używanych w wybranym gospodarzu roślinnym. Zasady sterowania ekspresją konstruktów DNA w komórkach roślin są znane w dziedzinie a konstruowanie chimerycznych ekspresyjnych konstruktów DNA należy do czynności rutynowych.
Pewne rodzaje replikonów są zdolne do samodzielnego wnikania w całości lub części do innych komórek gospodarza, takich jak komórki roślinne, kotransferując jednocześnie otwartą ramkę odczytu kodującą enzym(y) do wspomnianej komórki roślinnej. Replikony o takich właściwościach są tu nazywane wektorami. Przykładem takiego wektora jest plazmid Ti, który gdy jest obecny w odpowiednim gospodarzu, takim jak Agrobacterium tumefaciens, jest zdolny do przenoszenia swojego fragmentu, tzw. regionu T, do komórki roślinnej. Inny typ wektorów Ti (patrz EP 0 116 718 B1) jest teraz rutynowo używany do przenoszenia chimerycznych sekwencji DNA do komórek roślinnych, lub protoplastów, z których może być odtworzona nowa roślina posiadająca wbudowany na stałe do swego genomu chimeryczny DNA. Szczególnie korzystne wektory plazmidowe Ti są tzw. wektorami binarnymi jak zastrzeżone w (EP 0 120 516 B1 i US 4,940,838). Inne odpowiednie wektory, które mogą być użyte do wprowadzania DNA do gospodarza roślinnego, mogą być wybrane z wektorów wirusowych, np. nieintegrujących się roślinnych wektorów wirusowych, takich jak pochodzące od dwuniciowych wirusów roślinnych (np. CaMV) i jednoniciowych wirusów, wirusów gemini i tym podobnych. Użycie takich wektorów może być korzystne, szczególnie, gdy trudno jest stabilnie transformować roślinę gospodarza, jak to ma miejsce przykładowo u gatunków drzewiastych, szczególnie drzew i krzewów.
Wyrażenie „komórki gospodarza posiadające wbudowaną do swego genomu chimeryczną sekwencję” obejmuje swym znaczeniem komórki, jak i organizmy wielokomórkowe posiadające takie komórki, lub zasadniczo składające się z takich komórek, które posiadają stabilnie wbudowany do swego genomu chimeryczny DNA zachowujące chimeryczne DNA, i korzystnie przekazujące kopie takiego chimerycznego DNA komórkom potomnym, w trakcie mitozy lub mejozy. Zgodnie z korzystną realizacją wynalazku, dostarczane są rośliny, które zasadniczo składają się z komórek, które mają wbudowane jeden lub więcej kopii chimerycznego DNA do swego genomu, i które są zdolne przekazywać tę kopię/te kopie swemu potomstwu, korzystnie zgodnie z regułami genetyki mendlowskiej. Dzięki transkrypcji i translacji chimerycznego DNA komórki te produkują enzymy. Mimo, że zasady rządzące transkrypcją DNA w komórkach roślinnych nie są zawsze znane, stworzenie chimerycznego DNA poddawanego ekspresji jest czynnością rutynową. Regiony inicjacji transkrypcji rutynowo używane do ekspresji transformowanych polinukleotydów na drodze konstytutywnej są promotorami otrzymywanymi z wirusa mozaiki kalafiora, zwłaszcza 35S RNA i 19S RNA promotory transkrypcji i tzw. promotory T-DNA z Agrobacterium tumefaciens. W szczególności należy wspomnieć promotor syntazy nopaliny, promotor syntazy oktopiny (ujawnione w EP 0 122 791 B1) i promotor syntazy manno6
PL 191 456 B1 piny. Ponadto mogą zostać użyte promotory roślinne, które mogą być właściwie konstytutywne, takie jak promotor genu aktyny z ryżu. Dla ekspresji specyficznej w nasionach, cDNA pożądanego genu może zostać wbudowane za promotorem pochodzącym z genu, który jest specyficznie wyrażany w ziarnie roślin. Takie promotory obejmują promotory genów kodujących białka zapasowe nasion, takie jak promotor krucyferyny z Brassica napus, promotor fazeoliny z Phaseolus vulgaris, promotor gluteliny z Oryza sativa, promotor zeiny z Zea mays i promotor hordeiny z Hordeum vulgare.
Wiadomo ponadto, że powielenie pewnych elementów, tzw. enhancerów, może znacząco wzmacniać poziom ekspresji DNA spod jego kontroli (patrz przykładowo: Kay R. i wsp. (1987), Science 236, 1299-1302: duplikacja sekwencji między -343 i -90 z promotora CaMV 35S zwiększa aktywność tego promotora). Ponadto konstytutywny promotor 35S, pojedynczo lub podwójnie wzmocniony, przykładowo silnymi promotorami są promotor indukowanej przez światło małej podjednostki karboksylazy dwufosforanorybulozowej (rbcSSU) i promotor białka przyłączającego chlorofil a/b (Cab). Także polecanymi przez niniejszy wynalazek są promotory hybrydowe, które zawierają elementy różnych regionów fizycznie sprzężonych z promotorami. Dobrze znanym przykładem takiego jest tak zwany wzmocniony promotor syntazy mannopiny CaMV (US patent 5,106,739), który zawiera elementy promotora syntazy mannopiny sprzężone z enhancerem CaMV.
Specyficznym dla transformacji roślin jednoliściennych jest użycie intronów umieszczonych między promotorem i genem markera selekcyjnego wzmacniającego ekspresję.
Pojecie „promotor” odnosi się do regionu DNA poprzedzającego gen strukturalny i zawierającego region rozpoznawany i wiążący polimerazę RNA i inne białka inicjacji transkrypcji. „Promotor roślinny” jest promotorem zdolnym do inicjowania transkrypcji w komórkach roślinnych. „Promotor konstytutywny” jest promotorem, który jest aktywowany w większości warunków środowiskowych i stanowi o rozwoju bądź różnicowaniu komórki.
W odniesieniu do konieczności stosowania regionu terminacji transkrypcji, jest powszechnie przyjęte, że takie regiony wzmacniają wydajność i zachodzenie transkrypcji w komórkach roślinnych. Dlatego ich użycie jest bardzo korzystne w kontekście niniejszego wynalazku.
Jako, że pewne realizacje wynalazku mogą być aktualnie nieużyteczne, przykładowo, dlatego, że pewne gatunki roślin są niepodatne na transformacje genetyczne, wdrożenie wynalazku w takich gatunkach roślin jest zaledwie kwestią czasu i nie dotyczy istoty, gdyż niepodatność na transformację nie wyklucza takiej realizacji z zakresu niniejszego wynalazku.
Transformowanie gatunków roślinnych jest aktualnie rutynowo przeprowadzane dla znacznej liczby gatunków roślinnych, włączając zarówno Dicotyledoneae jak i Monocotyledoneae. W zasadzie może zostać użyta dowolna metoda transformacji w celu wprowadzenia chimerycznego DNA do odpowiedniej wyjściowej komórki przodka. Metodami, które mogą być użyteczne jest metoda otrzymywania protoplastów z wykorzystaniem wapnia/glikolu polietylenowego (Krens, F.A. i wsp., 1982, Nature 296, 72-74; Negrutiu I, i wsp, czerwiec 1987, Plant. Mol.Biol. 8, 363-373), elektroporacja protoplastów (Shillito R. D. i wsp., 1985 Bio/Technol. 3, 1099-1102), mikroiniekcja do materiału roślinnego (Crossway A. i wsp., 1986, Mol.Gen.Genet. 202, 179-185), mikrobombardowanie cząstkami (otoczonymi DNA lub RNA) różnorodnego materiału roślinnego (Klein T.M. i wsp., 1987, Nature 327, 70), infekowanie wirusami (nie integrującymi się), przenoszenie genów przez Agrobacterium tumefaciens poprzez infiltrowanie dojrzałych roślin lub transformowanie dojrzałego pyłku lub mikrospor (EP 0 301 316) i tym podobne. Korzystny sposób według wynalazku obejmuje przenoszenie DNA przez Agrobacterium. Szczególnie korzystne jest zastosowanie tzw. układu binarnego jak ujawniono w EP A 120 516 i U.S. Patent 4,940,838.
Mimo iż uznawane za bardziej oporne na transformację genetyczną, rośliny jednoliścienne są podatne na transformację i płodne rośliny transgeniczne mogą być odtwarzane z transformowanych komórek lub embrionów, lub innego materiału roślinnego. Korzystnym sposobem transformowania jednoliściennych jest mikrobombardowanie embrionów, linii komórek roślinnych i zawiesin komórek, bezpośrednie przenoszenie DNA lub (tkankowa) elektroporacja (Shimamoto, i wsp., 1989, Nature 338, 274-276). Rośliny kukurydzy transgenicznej uzyskano poprzez wprowadzanie genu bar z Streptomyces hygroscopicus, który koduje acetylotransferazę fosfinotrycyny (enzym inaktywujący herbicyd fosfinotrycynę), do zawiesiny komórek embriogennych kukurydzy poprzez mikrobombardowanie (GordonKamm, 1990, Plant Cell, 2, 603-618). Zastało opisane wprowadzanie materiału genetycznego do aleuronów protoplastów innych jednoliściennych roślin uprawnych, takich jak jęczmień czy pszenica (Lee, 1989, Plant Mol.Biol. 13, 21-30). Rośliny pszenicy były regenerowane z hodowli zawiesin komórek embriogennych poprzez selekcję kalusa embriogennego w celu uzyskania hodowli zawiesinowych
PL 191 456 B1 komórek embriogennych (Vasil, 1990 Bio/Technol. 8, 429-434). Połączenie z systemami transformacyjnymi dla tych roślin uprawnych umożliwia zastosowanie niniejszego wynalazku dla jednoliściennych.
Rośliny jednoliścienne, włącznie z komercyjnie ważnymi zbożami takimi jak ryż i kukurydza są także podatne na transfer DNA przez szczepy Agrobacterium (patrz WO 94/00977; Ep 0 159 418 b1;
Gould J, Michael D, Hasegawa O, Ulian EC, Peterson G, Smith RH, (1991) Plant.Physiol. 95, 426-434).
W przypadku jęczmienia korzystna jest metoda transformacji opisana przez Tingay, S. i wsp. (The Plant j. 11(6), 1369-1376, 1997).
Aby otrzymać rośliny transgeniczne zdolne do konstytutywnego wyrażania więcej niż jednego genu chimerowego, istnieje wiele możliwości włącznie z następującymi:
A. Użycie DNA np. T-DNA na plazmidzie binarnym, z Ilcznymi modyfikowanymi genami nie sprzężonymi z drugim genem markerowym. Zaletą takiej metody jest to, że geny chimerowe są fizycznie sprzężone i dlatego migrują jako pojedynczy locus mendlowski.
B. zapylanie roślln transgenicznych, z których każda jest zdolna do wyrażania jednego lub więcej chimerycznych genów, korzystnie sprzężonych z genem markerowym, z pyłkiem z rośliny transgenicznej, która zawiera jeden lub więcej genów chimerycznych sprzężonych z innym genem markerowym. Otrzymane nasiona, które powstają w wyniku tego krzyżowania, mogą być selekcjonowane na podstawie obecności dwóch genów markerowych, lub na podstawie obecności samych genów chimerowych. Rośliny uzyskane z wybranych nasion mogą być następnie użyte do kolejnych krzyżowań. W zasadzie geny chimerowe nie są pojedynczym locus i dlatego mogą zajmować niezależne loci.
C. Zastosowanie licznych chimerycznych cząsteczek DNA, przykładowo plazmidów, z których każdy posiada jeden lub więcej genów chimerowych i marker selekcyjny. Gdy częstość kotransformacji jest wysoka, wtedy możliwa jest selekcja na podstawie tylko jednego markera. W innych przypadkach, korzystna jest selekcja z użyciem kilku markerów.
D. Kofojne transformacje roślln transgenicznych posiadających już pierwszy, drugi etc.. chimerowy gen z nowym chimerowym DNA, ewentualnie obejmującym gen markera selekcyjnego. Tak jak w sposobie B, geny chimerowe w zasadzie nie są pojedynczym locus i geny chimerowe mogą segregować jako niezależne loci.
E. Połączenie powyższych strategii.
Aktualne podejście może być związane z kilkoma rzeczami, takimi jak właściwości linii rodzicielskich (ukierunkowanie do upraw, użycie w programach hodowlanych, zastosowanie do otrzymywania hybryd), ale nie jest krytyczne w stosunku do niniejszego wynalazku.
Wiadomo, że właściwie każda roślina może być regenerowana z komórek lub tkanek. Znaczenie regeneracji różni się w zależności od gatunku rośliny, której to dotyczy, ale ogólnie najpierw dostarczane są zawiesina transformowanych protoplastów lub szalki petriego zawierające transformowane komórki roślinne. Kiełki mogą być indukowane bezpośrednio, lub pośrednio poprzez kalus na drodze organogenezy lub embriogenezy a następnie ukorzeniane. Obok markerów selekcyjnych, kultury tkankowe mogą ogólnie zawierać różne aminokwasy i hormony, takie jak auksyny i cytokininy. Korzystne jest także dodawanie kwasu glutaminowego i proliny do pożywki. Wydajność regeneracji będzie zależeć od pożywki, genotypu i przebiegu hodowli. Jeśli te trzy zmienne są kontrolowane, kontrolowana regeneracja zachodzi zwykle bez kłopotów i jest powtarzalna.
Po stabilnym wbudowaniu transformowanej sekwencji genowej do roślin transgenicznych, nowe cechy mogą być przenoszone z kolei na inne rośliny w drodze krzyżowania płciowego. Mogą zostać użyte liczne standardowe techniki hodowli, zależnie od gatunku poddawanego krzyżowaniu.
W jednym z wykonań niniejszego wynalazku, są używane transgeniczne nasiona, które zostały tak spreparowane, aby mogły wytwarzać pewien enzym, umożliwiając dowolne kształtowanie składu mieszaniny enzymatycznej, w zależności od potrzebnej ilości enzymu. W innej realizacji, więcej niż jedna aktywność enzymatyczna jest zawarta w nasionach określonej linii rośliny transgenicznej.
Nasiona transgeniczne zawierające pożądane enzymy może być dodawane razem w odpowiednim stadium procesu warzenia. Ewentualnie, ziarno transgeniczne zawierające określony pożądany enzym może być podawane indywidualnie, każde na odpowiednim etapie procesu.
Sposób według wynalazku umożliwia uzyskanie słodu o intensywnej barwie i zapachu, bez korzystania z aktywności enzymatycznej słodu. W sposobie według wynalazku omija się w dużym stopniu stosowanie słodowych aktywności enzymatycznych. Tylko niewielka ilość słodu jest potrzebna, aby dostarczyć piwu koloru i zapachu.
PL 191 456 B1
Ziarno transgeniczne zawierające pożądane enzymy może być stosowane w odpowiednim stosunku ze zbożem oraz, ewentualnie, wraz z odpowiednia ilością słodu dającego zapach i kolor. Ziarno transgeniczne boże być zmieszane wstępnie ze zbożem i słodem.
Ewentualnie, każdy ze składników, zboże, ziarno transgeniczne, zboże i słód, lub mieszanina transgenicznego ziarna, zboże i słód są mielone przed poddaniem procesom warzenia.
Ziarno transgeniczne zawiera pożądane enzymy w ilości 0,001-2,5%, korzystnie 0,01-1,0%, bardziej korzystnie 0,05%-0,25% wagi ziarna. Zależnie od poziomu ekspresji w ziarnie część lub całe ziarno normalnie używane w procesie warzenia może być zastąpione ziarnem transgenicznym. Gdy osiągany jest wysoki poziom ekspresji, jest również możliwe dodawanie ziarna transgenicznego z innych roślin nieużywanych tradycyjnie do produkcji piwa, bez zbytniego zmieniania składu mieszaniny piwowarskiej.
W przypadku słodu, korzystnie część słodu poddaje się specjalnej obróbce, w porównaniu z tradycyjnym słodem, w której słód jest ogrzewany podczas opiekania w celu maksymalizowania produkcji komponentów zapachowych i barwnych. Zachowywana aktywność enzymatyczna jest nieistotna po takiej obróbce.
Ekspresja enzymów w ziarnie, zgodnie z ujawnieniem w niniejszym wynalazku, dostarcza możliwość uniknięcia dodawania enzymów mikrobiologicznych w procesie warzenia. Koszty produkcji ziarna transgenicznego, zawierającego enzymy są dużo niższe niż koszty produkcji enzymów w procesach fermentacyjnych. Ponadto, transgeniczne ziarno jest bardziej wygodne w użyciu, ponieważ dostarcza ono stabilnej i poddającej się przechowywaniu postaci enzymów i jest łatwe w obróbce. Redukcja kosztów i zalety użytkowe, które łączą się ze stosowaniem transgenicznego ziarna są szczególnie istotne w sposobie według wynalazku, ponieważ unika się konieczności dodawania kilku różnych enzymów z kilku różnych mikrobiologicznych fermentacji do procesu warzenia piwa.
Sposób postępowania według niniejszego wynalazku jest dużo bardziej zalecany niż sposób stosujący słód jako źródło enzymów, ponieważ transgeniczne ziarno nie zawiera wysokiego poziomu innych aktywności enzymatycznych poza reprezentującymi wprowadzone geny. Ponadto, sposób według niniejszego wynalazku jest dużo bardziej zalecany niż sposób stosujący mikrobiologiczne enzymy, ponieważ preparaty enzymów mikrobiologicznych wykazują niezdefiniowaną i zmienną aktywność uboczną.
Jednym z obszarów, na którym szczególnie może być stosowany sposób według wynalazku są kraje afrykańskie, w których utrudnione jest stosowanie słodu. W tym przypadku enzymy mogą być wyrażane w sorgo, które może być później dodawane w procesie warzenia.
Można rozpatrywać także dalsze zastosowania, obok warzenia napojów alkoholowych, w których MaltSeed może zastąpić słodowane ziarno. Słodowany jęczmień i/lub słodowana pszenica są używane przez młynarzy do standaryzacji siły distatycznej mąki. Także hemicelulazy (takie jak ksylanaza) są dodawane do mąki w celu polepszenia utrzymywania gazów w cieście produkowanym z mąki. Dodatek, bądź zastosowanie enzymów w mące może być zastąpione przez stosowanie MaltSeed, jest to bardzo odpowiedni sposób, ponieważ enzymy mogą być podawane w formie ziarna, które i tak jest używane. Podobnie w procesach piekarniczych mogą być dodawane enzymy, zastępując słód stosowany w produkcji wielu ciast. Enzymy ulepszające proces pieczenia to ksylanaza, amylaza, arabinofuranozydaza, egzopeptydaza. Także oksydaza glukozowa z Aspergillus niger może być wyrażana w ziarnie stosowanym w piekarnictwie.
P r z y k ł a d 1. Pomiar aktywności endo-p-1,4-ksylanazy
Endoksylanaza została otrzymana z czystych kultur Aspergillus niger w sterylnych zbiornikach i pożywce. Pożywka hodowlana zawierała odpowiednie źródło węgla i azotu oraz soli mineralnych. Fermentację przeprowadzano w stałej temperaturze pomiędzy 30-40°C, a pH utrzymywano w przedziale 3-5.
Aktywność enzymu była mierzona poprzez reakcję hydrolizy ksylanu z zawiesiny otrębów owsianych (35g/l) w 1M buforze glicynowym o pH 2,75. Lepkość roztworu określano wiskozymetrem kapilarnym (typu Ubbelhode) w temperaturze 47°C. Czas dt potrzebny do tego, aby dolny menisk płynu spadł pomiędzy dwa punkty odnośnikowe mierzono dla czasu T. Nachylenie w punkcie T wektora 1/dt daje pewną stałą kinetyczną. Jednostka 1 Lyx jest ilością enzymu potrzebną do osiągnięcia wartości 1 min1 przez wspomnianą stałą kinetyczną.
P r z y k ł a d 2. Pomiar aktywności egzopeptydazy.
Hodowano szczep produkcyjny Aspergillus sojae (DS. 8351). Aktywność egzopeptydazy wyrażana była jako jednostka leucynowa aminopeptydazy (Leu-1): 1 Leu-A jest ilością enzymu potrzebną
PL 191 456 B1 do produkcji 1 pmol p-nitroaniliny na minutę w pH 7,2 i 20°C z L-leucyno-p-nitroalaniny. Test prowadzono następująco: Paranitroanilid leucyny (SIGMA) rozpuszczano w wodzie do stężenia 9 mM. 1 ml roztworu mieszano z 1,5 ml 0,1 M buforu fosforanowego o pH 7,2. W t=0, wprowadzano 0,5 ml enzymu i prowadzono reakcje w 20°C. Piętnaście minut później, 1 ml 1N HCl dodawano w celu zatrzymania reakcji. Start dla próby ślepej następował w czasie t=0 poprzez wprowadzenie 1N HCl. Mierzono gęstość optyczną przy 400 nm dla próby kontrolnej (ODk) i próby testowej (ODt). Aktywność obliczano ze wzoru:
λ (ODk — ODt ) 4 . . . .
A = 4-k-T. χ — Leu - A / ml
9,8 x 15 03
P r z y k ł a d 3. Pomiar aktywności arabinofuranozydazy
Izoenzym A lub izoenzym B lub hydroksylazę arabinoksylanową otrzymywano z hodowli szczepów Aspergillus niger lub Aspergillus nidulans. Aktywność izoenzymów A i B mierzono poprzez hydrolizę p-nitrofenylo-alfa-L-arabinofuranozydazy. 1 ARF jednostka jest ilością enzymu potrzebną do uwolnienia 1 pmol p-nitrofenolu na minutę w warunkach testowych opisanych przez Gunata Z. i wsp. (J.Agric.Food Chem. 38, 772, 1989).
P r z y k ł a d 4. Pomiar aktywności amylazy scukrzającej.
Amylazę scukrzającą otrzymywano z hodowli Penicillium emersonii w sterylnych zbiornikach i pożywce, która zawierała odpowiednie źródło węgla i azotu oraz soli mineralnych. Zbiornik napełniano maltodekstrynami po 10-30 godzinach (korzystnie 24 godzinach) od startu fermentacji. Temperaturę utrzymywano w przedziale 40-50°C (korzystnie 45°C) a pH w zakresie 4,5-5,5 (korzystnie 5,0). Fermentację zatrzymywano po 40-55 godzinach (korzystnie 48 godzinach) od startu hodowli.
Aktywność amylazy scukrzającej mierzono testem BETAMYL, produkowanym przez MEGAZYME, Irlandia. 1 BTU jest ilością enzymu potrzebną do produkcji 1 pmol p-nitrofenolu w pH 6,2 i 40°C z substratu udostępnianego przez MEGAZYME.
P r z y k ł a d 5. Przygotowywanie brzeczki z zastosowaniem enzymów mikrobiologicznych.
Brzeczka była przygotowywana z surowych ziaren jęczmienia, odmiany PLAISANT. Jęczmień był mielony młynem EBC MIAG w celu osiągnięcia granulacji nadającej się do filtrowania. 57 g otrzymanego zmielonego jęczmienia zawieszano w 300 ml ciepłej wody (50°C) zawierającej:
650 Lyx jednostek endo-p-(1,4)-ksylanazy
850 ARF jednostek arabinofuranozydazy 18 mg B.A.T.S. (termostabilna amylaza) mg Brewers Protease (+) (endopeptydaza) mg Filtrase L3000 (+) (-p-(1,3;1,4)-glukanaza)
Utrzymywano temperaturę 50°C przez 30 minut a następnie podnoszono ją do 63°C (o 1°C/min); utrzymywano temperaturę 63°C przez 30 minut i podnoszono ją do 72°C (o 1°C/min) i utrzymywano ją przez 30 minut. W końcu zwiększano temperaturę do 76°C (o 1°C/min) i utrzymywano ją przez 5 minut. Uzupełniano wodę, która odparowała. Zacier oczyszczano filtrując na bibule Schleicher and Schull. Z gęstości filtrowanej brzeczki, określano wydajność metodami piwowarskimi, także lepkość i poziom wolnych aminokwasów (FAA) określano zgodnie ze standardami EBC.
Wydajność wynosiła 71,5%, lepkość 2,52 mPa, a mierzony poziom wolnych aminokwasów 66 mg/l.
P r z y k ł a d 6. Porównanie amylaz scukrzających.
Brzeczka była przygotowywana z surowych ziaren jęczmienia, odmiany PLAISANT. Jęczmień był mielony młynem EBC MIAG w celu osiągnięcia granulacji nadającej się do filtrowania. 57 g otrzymanego zmielonego jęczmienia zawieszano w 300 ml ciepłej wody (50°C) zawierającej:
650 Lyx jednostek endo-p-(1,4)-ksylanazy
850 ARF jednostek arabinofuranozydazy 18 mg B.A.T.S. (termostabilna amylaza) mg Brewers Protease (+) (endopeptydaza) mg Filtrase L3000 (+) (-p-(1,3;1,4)-glukanaza)
Dodawano scukrzające amylazy do mieszaniny brzeczki zgodnie z tabelą 1.
PL 191 456 B1
T a b e l a 1.
Porcje enzymów scukrzających.
| numer brzeczki | enzym scukrzający | |
| 1 | żaden | 0 |
| 2 | Brewers Fermex | 510 FAU |
| 3 | amylaza z P.emersonii | 10 BTU |
| 4 | Brewers Fermex +, amylaza z P. emersonii | 510 FAU + 10 BTU |
Utrzymywano temperaturę 50°C przez 30 minut a następnie podnoszono ją do 63°C (o 1°C/min); utrzymywano temperaturę 63°C przez 30 minut i podnoszono ją do 72°C (o 1°C/min) i utrzymywano ją przez 30 minut. W końcu zwiększano temperaturę do 76°C (o 1°C/min) i utrzymywano ją przez 5 minut. Uzupełniano wodę, która odparowała. Zacier oczyszczano filtrując na bibule Schleicher and Schull. Gęstość filtrowanej brzeczki, wydajność określano metodami piwowarskimi, także lepkość i poziom wolnych aminokwasów (FAA) określano zgodnie ze standardami EBC.
Wyniki mierzonej wydajności, lepkości i FAA podane w tabeli 2 wskazują, że enzym scukrzający z Penicillium emersonii może być substytutem Brewers Fermex, przy czym należy spodziewać się synergizmu podczas używania obydwu enzymów. Szczególnie zaskakujące jest dosyć pozytywny wpływ amylazy z Penicillium emersonii na wzrost FAA i redukcję lepkości.
| numer brzeczki | wydajność (%) | lepkość (%) | FAA (12 Plato) (mg/l) |
| 1 | 71,2 | 3,12 | 116 |
| 2 | 74,6 | 2,73 | 114 |
| 3 | 78,2 | 1,99 | 153 |
| 4 | 79,6 | 1,99 | 152 |
P r z y k ł a d 7. Konstrukcja wektora binarnego zawierającego kasetę ekspresyjną specyficzną dla nasion
Konstrukt ekspresyjny specyficzny dla nasion został otrzymany z zastosowaniem sekwencji gluteliny z Oryza sativa L. będącej białkiem zapasowym (Zheng i wsp., Plant Physiol. (1995) 109; 77-786). Sekwencje te mogą być zastąpione innymi podobnymi, specyficznymi dla nasion genami, w celu uzyskania tego samego efektu, który jest celem tego wynalazku.
Aby otrzymać konstrukt ekspresyjny dla uzyskania specyficznej ekspresji w nasionach, syntetyzowano za pomocą reakcji PCR sekwencje promotora i terminatora z genu gluteliny (Gt1) z Oryza sativa L. używając klonu genomowego Gt1 (Okita i wsp., J.Biol.Che. 264, 12573-12581, 1989) jako matrycy. Gen ten wykazuje ekspresję specyficzną dla nasion i jego sekwencje kodująca i flankujące są znane (EMBL, Genbank Nucleotide Sequence Database numer dostępu D00584)). Syntetyzowano dwa zestawy oligonukleotydów. Jeden umożliwiał amplifikację 2,4 kpz fragmentu Xho-I/Sphl zawierającego fragment 5' flankujący regionu kodującego Gt1:
5'Gt1.1 5' GCACAATTCTCGAGGAGACCG 3'
5'Gt1.2 5' ATGGATGGCATGCTGTTGTAG 3'
Inny zestaw amplifikował fragment (725 kpz) BamHI/EcoRI sekwencji flankującej 3': 3'Gt1.3 5' CCTCTTAAGGATCCAATGCGG 3'
3'Gt1.4 5' CTTATCTGAATTCGGAAGCTC 3'
Oligonukleotydy zaprojektowano tak, aby zawierały odpowiednie miejsca restrykcyjne na swych końcach umożliwiające proste połączenie konstruktu ekspresyjnego po trawieniu fragmentów enzymami restrykcyjnymi. Geny kodujące enzymy do mieszanki określonej w wynalazku można znaleźć w literaturze odpowiednio dla endoksylanazy (Mol.Microbiol. 12, 479-490, 1994), dla izoenzymu A i izoenzymu B arabinofuranozydazy (EP 0 506 190), dla amylazy z Bacillus licheniformis (EP 0 449 376), dla proteazy z Bacillus amyloliquefaciens (J.Bact. 159, 811-819) i dla glukanazy z Bacillus amyloliquefaciens (Gene 49, 177-187, 1986). Geny scukrzającej amylazy z Penicillium i egzopeptydazy
PL 191 456 B1 z Aspergillus sojae specjalista może łatwo otrzymać korzystając z czystych enzymów uzyskiwanych w hodowlach wskazanych w opisie. Używanie kodonów w genach kodujących enzymy, które mają być wyrażane w ziarnie zostało zoptymalizowane dla ekspresji w ziarnie jednoliściennych. W tym celu wytworzono całkowicie syntetyczny gen, wprowadzając miejsce BspHI przy kodonie start ATG i miejsce BamHI za kodonem stop TAA w celu ułatwienia klonowania. 2,4 kpz produkt PCR zawierający 5' flankujący region Gt1 trawiono XhoI/SphI i klonowano w wektorze pSL1180 linearyzowanym XhoI/SphI. Otrzymany wektor linearyzowano Sphl/BamHI i użyto jako wektor w potrójnej ligacji z syntetycznym genem kodującym enzym oraz, ewentualnie dupleksem oligonulkleotydowym kodującym sekwencję sygnalną ukierunkowującą. Można zastosować ukierunkowywanie do wakuoli, apoplastów, amyloplastów lub (wraz z np. sygnałem utrzymującym KDEL) do retikulum endoplazmatycznego.
Z tego wektora izolowano fragment, zawierający fuzję promotora Gt1 gluteliny, ewentualnie sekwencję sygnałową i gen syntetyczny. Fragment ten klonowano w potrójnej ligacji z 725 pz produktem PCR zawierającym 3' sekwencję terminalną z Gt1 trawionego BamHI/EcoRI do wektora binarnego pMOG22 (w szczepie DH5-alfa E.coli K-12, zdeponowanym w Centraal Bureau voor Schimmelcultures 29 stycznia 1990 pod numerem CBS 101.90).
P r z y k ł a d 8. Konstruowanie wektora binarnego zawierającego gen endoksylanazy w kasecie ekspresyjnej specyficznej dla nasion
Gen endoksylanazy z Aspergillus niger zoptymalizowano pod kątem używanych przez jęczmień kodonów. Wynikowa sekwencja DNA jest ujawniona jako SEQ ID NO:1.
W celu zoptymalizowania ekspresji wyposażono gen endoksylanazy w zewnątrzkomórkową sekwencję ukierunkowującą z oligonukleotydów:
PRS.1
5' AACTTCCTCAAGAGCTTCCCCTTTTATGCCTTCCTTTGTTTTGGCCAATACTTTGTAGCTGTTACGCATGC 3'
PRS.2
3' GTACTTGAAGGAGTTCTCGAAGGGGAAAATACGGAAGGAAACAAAACCGGTTATGAAACATCGACAATGCGTACGGTAC 5' kodującą sygnałowy peptyd z tytoniowego białka PR-S i w poddawano potrójnej ligacji z syntetycznym genem ksylanazy trawionym BspHI/BamHI.
Z tego wektora izolowano 3,1 kpz fragment XhoI/BamHI, zawierający fuzję promotora gluteiny Gt1, sekwencję sygnałową z PR-S i syntetyczny gen ksylanazy. Fragment ten klonowano w potrójnej ligacji z 725 pz produktem PCR zawierającym 3' terminalną sekwencję z Gt1 trawioną BamHI/EcoRI do wektora binarnego pMOG22. Powstały wektor nazwano pMOG1265.
P r z y k ł a d 9. Transformowanie jęczmienia.
Sposób użyty do transformacji niedojrzałych zalążków Hordeum vulgare cv. Golden Promise z zastosowaniem Agrobacterium tumefaciens został ogólnie opisany przez Tingay, S i wsp., The Plant J. 11(6), 1369-1376, 1997. W skrócie, protokół jest następujący:
Wyjściowy materiał roślinny wzrastał w fitotronie przy 10-20°C przez 16 godzinny jasny okres przy 10,000-30,000 lux i 50-95% RH. Niedojrzałe ziarno zbierano 10-15 dni po zapyleniu i sterylizowano w roztworze utleniającym przez 20-40 minut. Niedojrzałe zarodki były wycinane z młodych osłon i oś zarodka była usuwana ostrzem skalpela. Eksplanty umieszczano stroną tarczki do góry na podłożu indukującym kalus i inkubowano w 24°C w ciemności przez okres od 16 godzin do 7 dni.
Zarodki zanurzano w zawiesinie Agrobacterium, zawierającym w przybliżeniu 0,1 - 10 x 109 bakterii na ml, na 5 do 20 minut, przy czym bakterie zawierały konstrukty z DNA kodującym wybrane enzymy i przenoszono do podłoża indukującego kalus. Następnie, zarodki były inkubowane 2 lub 3 dni w 24°C w ciemności. Po hodowli, zarodki przenoszono do podłoża indukującego kalus zawierającego antybiotyk zabijający Agrobacteria, bezpośrednio połączony z czynnikiem selekcyjnym rozpoczynającym proces selekcji komórek transgenicznych. Proces selekcji trwał do 8 tygodni. Oporne linie kalusa embriogennego przenoszono do podłoża regeneracyjnego i inkubowano przy wzrastającym oświetleniu (500 do 3000 lux) w 16 godzinnym okresie jasnym przy 24°C. Zregenerowane szczepki przenoszono na pozbawione hormonów lub zawierające wysokie stężenie cytokinin podłoże indukujące kalus zawierające, bądź niezawierające czynnika aktywnego. Po utworzeniu systemu korzeniowego, szczepki przenoszono do gleby i uprawiano do dojrzałości z samozypalaniem się.
P r z y k ł a d 10.
Przeprowadzono trzy pełne wstępne próby piwowarskie. Dwie z testowanych brzeczek zawierały znacznie zredukowaną ilość słodu (20% surowców) natomiast kontrolna zawierała normalną ilość słodu (patrz tabela 3). Dwie testowane brzeczki poddawano różnej technologii filtrowania i mielenia (patrz tabela 3). Diagram procesu warzenia wszystkich brzeczek pokazuje figura 1.
PL 191 456 B1
T a b e l a 3:
Skład, filtrowanie i mielenie kompozycji surowców.
| kontrolna | brzeczka testowa 1 | brzeczka testowa 2 | |
| słód Pils | 75% | 20% | 20% |
| kasza kukurydziana | 25% | 25% | 25% |
| niesłodowany jęczmień | - | 55% | 55% |
| filtrowanie | Lautertun | Lautertun | Meura 20001 |
| mielenie | cylinder | cylinder | młot |
W mieszaninie kontrolnej 8% słodu użyto w podgrzewaczu zbożowym wraz z kaszą kukurydzianą, pozostałe 67% słodu dodano do zbiornika konwersyjnego. W brzeczkach testowych 8% niesłodowanego jęczmienia zastosowano w podgrzewaczu zbożowym wraz z kaszą kukurydzianą, pozostałe 47% niesłodowanego jęczmienia dodawano do zbiornika konwersyjnego wraz ze słodem.
T a b e l a 4.
Nazwy enzymów i ilości dodane na 100 kg surowców
| numer enzymu | enzym | podgrzewacz zbożowy | zbiornik konwersyjny |
| 1 | endo-β (1,4)-ksylanaza | 117,000 Lyx | |
| 2 | arabinofuranozydaza | 112,500 ARF | |
| 3 | B. A. T. S. | 16,5 g | |
| 4 | Brewers Fermex | 75 g | |
| 5 | Brewers protease (+) | 75 g | |
| 6 | egzopeptydaza | - | |
| 7 | Filtrase L3000 (+) | 23 g |
Enzymy 1,2, 4, 5 i 7 dodawano do zbiornika konwersyjnego, enzym 3 dodawano do podgrzewacza zbożowego (patrz tabela 4 wyjaśniająca kody enzymów).
Wyniki obróbki brzeczki (zacierania i klarowania) były podobne dla warzeń testowego i kontrolnego. Dwa testowe wary przebiegały podobnie w browarze. Testowe wary dały z grubsza taką samą brzeczkę, wykazując, że różnice w filtrowaniu i mieleniu nie są istotne. Z porównania piw testowych i kontrolnego stwierdzono, że wszystkie trzy piwa miały podobny bukiet smakowy. Mocniejsze w smaku wydawały się wary testowe w porównaniu z warem kontrolnym. Może to być powodowane przez wyższy poziom dekstryn stwierdzony podczas analizy brzeczek. Poziom aminokwasów w brzeczce, mimo iż akceptowalny, był niższy dla warów testowych w porównaniu z kontrolnym. Poziom aminokwasów może być zwiększany przez dodawanie egzopeptydazy (patrz przykład 11). Piwa z testowych brzeczek zaklasyfikowano jako dobre pilsnery, wykazując, że częściowe zastąpienie słodu przez mieszaninę enzymów daje piwo porównywalne z piwem produkowanym z ilością słodu zwykle używaną w piwowarstwie.
P r z y k ł a d 11.
Przeprowadzono dwie pełne próby warzenia. Testowy war przygotowano ze zredukowaną ilością słodu, a kontrolny posiadał normalną ilość słodu (patrz tabela 5). Filtrowanie było dokonywane na filtrze Lautertun. Figura 2 prezentuje diagramy procesu warzenia waru testowego 1 i kontrolnego.
PL 191 456 B1
T a b e l a 5. Kompozycja surowców
| kontrola | war testowy 1 | |
| słód pils | 75% | 20% |
| kasza kukurydziana | 25% | 25% |
| niesłodowany jęczmień | - | 55% |
W mieszaninie kontrolnej 8% słodu użyto w podgrzewaczu zbożowym wraz z kaszą kukurydzianą, pozostałe 67% słodu dodawano w zbiorniku konwersyjnym. W warach testowych 8% niesłodowanego jęczmienia stosowano w podgrzewaczu zbożowym wraz z kaszą kukurydzianą, pozostałe 47% niesłodowanego jęczmienia dodawano do zbiornika konwersyjnego wraz ze słodem.
W warze testowym, enzymy 1-7 dodawano do zbiornika konwersyjnego, podczas gdy enzym 3 dodawano do zawartości podgrzewacza zbożowego (patrz tabela 6 zawierająca oznaczenia enzymów i użyte ilości).
Wyniki obróbki brzeczki (zacierania i klarowania) były podobne dla waru testowego i kontrolnego. Zawartość azotu z wolnych aminokwasów w brzeczkach było podobne dla waru testowego i kontrolnego. Z porównania piw testowych i kontrolnego stwierdzono, że piwo testowe miało podobny bukiet smakowy do piwa kontrolnego. Piwo z testowej brzeczki zaklasyfikowano jako dobry pilsner, wykazując że częściowe zastąpienie słodu przez mieszaninę enzymów daje piwo porównywalne z piwem produkowanym z ilością słodu zwykle używaną w piwowarstwie.
T a b e l a 6.
Oznaczenia enzymów i ilości dodane na 100 kg surowców w warze testowym
| numer enzymu | enzym | podgrzewacz zbożowy | zbiornik konwersyjny |
| 1 | endo-β (1,4)-ksylanaza | 117,000 Lyx | |
| 2 | arabinofuranozydaza | 112,500 ARF | |
| 3 | B. A. T. S. | 16,5 g | 33,5 g |
| 4 | Brewers Fermex | 75 g | |
| 5 | Brewers protease (+) | 75 g | |
| 6 | egzopeptydaza | 105,000 LeuA | |
| 7 | Filtrase L3000 (+) | 23 g |
P r z y k ł a d 12.
Ziarno jęczmienia transgenicznego z siedmiu linii, każda z jednym enzymem pokazanym w tabeli 9, mieszano w takich ilościach żeby dawało MaltSeed, dodawano jako 10% surowego jęczmienia, dostarczając tym aktywności enzymatycznych pokazanych w tabeli 9. Preparaty MaltSeed mieszano i mielono razem z jęczmieniem nietransgenicznym, tworząc razem 55% surowców testowego waru. Kompozycję surowców w podgrzewaczu zbożowym i zbiorniku konwersyjnym dla waru testowego pokazano w tabeli 8. W kontroli 8% słodu stosowano w podgrzewaczu zbożowym wraz z kaszą kukurydzianą. Pozostałe surowce stosowano w zbiorniku konwersyjnym. Podział aktywności enzymatycznych MaltSeed na dodawane do podgrzewacza zbożowego i zbiornika konwersyjnego pokazano w tabeli 10.
Przeprowadzono próbne warzenia. Testowy war przygotowano ze zredukowaną ilością słodu natomiast kontrolny posiadał normalną ilość słodu (patrz tabela 7). Filtrowanie prowadzono na filtrze Lautertun. Figura 2 przedstawia diagram procesu warzenia dla waru testowego i kontrolnego.
PL 191 456 B1
T a b e l a 7. Kompozycja surowców
| kontrola | war testowy 1 | |
| słód pils | 75% | 20% |
| kasza kukurydziana | 25% | 25% |
| niesłodowany jęczmień + MaltSeed | - | 55% |
T a b e l a 8.
Kompozycja na 100 kg surowców w warze testowym.
| surowiec | podgrzewacz zbożowy (kg) | zbiornik konwersyjny (kg) |
| słód | 20 | |
| jęczmień niesłodowany | 7,2 | 42,3 |
| MaltSeed | 0,8 | 4,7 |
| kasza kukurydziana | 25 | |
| razem (kg) | 33 | 67 |
Wyniki obróbki brzeczki (zacierania i klarowania) były podobne dla waru testowego i kontrolnego. Zawartości azotu z wolnych aminokwasów w brzeczkach były podobne dla waru testowego i kontrolnego. Z porównania piwa testowego i kontrolnego stwierdzono, że piwo testowe miało podobny bukiet smakowy do piwa kontrolnego. Piwo z testowej brzeczki zaklasyfikowano jako klasyczne piwo słodowe, wykazując, że słód może być (częściowo) zastąpiony przez enzymy wyrażane w ziarnie transgenicznym.
T a b e l a 9.
Ilości aktywności enzymatycznych dodanych poprzez dodawanie MaltSeed (jednostki na 100 kg surowców) w warze testowym 1
| numer enzymu | enzym | podgrzewacz zbożowy | zbiornik konwersyjny |
| 1 | endo-β (1,4)-ksylanaza | 19,915 Lyx | 117,000 Lyx |
| 2 | arabinofuranozydaza | 19,149 ARF | 112,500 ARF |
| 3 | B. A. T. S. | 107,250 TAU | 630,094 TAU |
| 4 | Brewers Fermex | 57,872 FAU | 340,00 FAU |
| 5 | Brewers protease (+) | 115,745 PC | 680,000 PC |
| 6 | egzopeptydaza | 17,872 Leu-A | 105,000 Leu-A |
| 7 | Filtrase L3000 (+) | 11,701 BGLU | 68,745 BGLU |
PL 191 456 B1
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE : (i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) NAZWA: MOGEN International nv (B) ULICA: Einsteinveg 97 <C) MIASTO: Leider (E) KRAJ: The Netherlands (F) KOD POCZTOWY (ZIP): 2333 CB (G) TELEFON: 31-(0)71-5258282 (H) TELEFAX: 31-(0) 71-5221471 (A) NAZWA: Gist-brocades N.V.
(B) ULICA: Postbus 1 (C) MIASTO: Del.ft (E) KRAJ: The Netherlands (F) KOD POCZTOWY (ZIP): 2600 MA (G) TELEFON: 31-(0)15-2799111 (H) TELEFAX: 31-(0)15-2793957 (ii) TITLE OF INVENTION: Ulepszony sposób wytwarzania napojów alkoholowych z zastosowaniem ziarna słodowego (iii) LICZBA SEKWENO d: 8 (iv) POSTAĆ MOŻLIWA DO ODCZYTANIA PRZEZ KOMPUTER:
(A) RODZAJ NOŚNIKA: Floppy disk (B) KOMPTUTER: IBM PC compaaible (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentln Release #1.0, Version #1,25 (EPO) (vi) DANE DOT. POPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA: EP 96202195.2 (B) DATA ZGłOSZENIA: 05-AUG-1996 (2) INFORMACJA DLA ID. SEKW. NR: 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 558 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: podwójna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: de (lii) ANTYSENS: Nie (ί^Χ) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS
PL 191 456 Β1 (B) POŁOŻENIE: 1..558 (D) INNE INFORMACJE: /product= maturę protein' (xi) OPIS SEKWENCJI: ID. SEKW. NR 1:
| ATG AQC GCG GGA ATC | AAC Asn | TAC GTC CAG AAC TAC AAT GGC AAC CTC | GGC Gly | 48 | ||||||||||||
| Met 1 | Ser | Ala Gly | Ile 5 | Tyr Val | Gln | Asn Tyr 10 | Asn | Gly | Asn Leu 15 | |||||||
| GAC | TTT | ACT | TAC | GAC | GAG | TCA | GCG | GGA | ACT | TTC | AGC | ATG | TAT | TGG | GAG | 96 |
| Asp | Phe | Thr | Tyr | Asp | Glu | Ser | Ala | Gly | Thr | Phe | Ser | Met | Tyr | Trp | Glu | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| GAT | GGC | GTG | TCC | TCA | GAC | TTC | GTC | GTG | GGA | CTG | GGC | TGG | ACC | ACT | GGA | 144 |
| Asp | Gly | Val | Ser | Ser | Asp | Phe | Val | Val | Gly | Leu | Gly | Trp | Thr | Thr | Gly | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| TCA | TCC | AAT | GCG | ATC | ACC | TAC | AGC | GCC | GAG | TAC | TCC | GCG | TCA | GGA | TCA | 192 |
| Ser | Ser | Asn | Ala | Ile | Thr | Tyr | Ser | Ala | Glu | Tyr | Ser | Ala | Ser | Gly | Ser | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| GCC | TCC | TAT | CTG | GCC | GTG | TAC | GGA | TGG | GTG | AAC | TAC | CCG | CAG | GCC | GAG | 240 |
| Ala | Ser | Tyr | Leu | Ala | Val | Tyr | Gly | Trp | Val | Asn | Tyr | Pro | Gln | Ala | Glu | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| TAC | TAC | ATC | GTG | GAG | GAT | TAC | GGA | GAT | TAC | AAC | CCA | TGC | AGC | TCA | GCG | 288 |
| Tyr | Tyr | Ile | Val | Glu | Asp | Tyr | Gly | Asp | Tyr | Asn | Pro | Cys | Ser | Ser | Ala | |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
| ACC | TCC | CTC | GGA | ACT | GTG | TAC | AGC | GAC | GGC | TCC | ACC | TAC | CAG | GTC | TGC | 336 |
| Thr | Ser | Leu | Gly | Thr | Val | Tyr | Ser | Asp | Gly | Ser | Thr | Tyr | Gln | Val | Cys | |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| ACC | GAC | ACC | CGC | ACT | AAC | GAG | CCG | TCA | ATC | ACC | GGC | ACT | TCC | ACC | TTC | 384 |
| Thr | Asp | Thr | Arg | Thr | Asn | Glu | Pro | Ser | Ile | Thr | Gly | Thr | Ser | Thr | Phe | |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| ACC | CAG | TAC | TTC | AGC | GTG | CGC | GAG | TCC | ACT | CGC | ACC | TCA | GGA | ACC | GTG | 432 |
| Thr | Gln | Tyr | Phe | Ser | Val | Arg | Glu | Ser | Thr | Arg | Thr | Ser | Gly | Thr | Val | |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| ACC | GTC | GCG | AAC | CAC | TTC | AAC | TTC | TGG | GCG | CAG | CAC | GGA | TTC | GGC | AAC | 480 |
| Thr | Val | Ala | Asn | His | Phe | Asn | Phe | Trp | Ala | Gln | His | Gly | Phe | Gly | Asn | |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
| AGC | GAC | TTT | AAC | TAC | CAG | GTG | GTC | GCA | GTG | GAG | GCA | TGG | TCA | GGA | GCG | 528 |
| Ser | Asp | Phe | Asn | Tyr | Gln | Val | Val | Ala | Val | Glu | Ala | Trp | Ser | Gly | Ala | |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
| GGC | TCA | GCG | TCC | GTC | ACT | ATC | AGC | TCC | TG | 558 | ||||||
| Gly | Ser | Ala | Ser | Val | Thr | Ile | Ser | Ser |
180 185
PL 191 456 B1 (2) INFORMACJA DLA ID. SEKW. NR: 2.
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWWENJJ:
(A) DŁUGOŚĆ: 185 aminokwasów (B) RODZAJ: aminokwas (D) TOPOLOGIA: linoowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENNCI: ID. SEKW. NR 2:
| Met 1 | Ser Ala Gly | Ile Asn Tyr Val Gin Asn Tyr Asn Gly Asn Leu Gly | ||
| 5 | 10 | 15 | ||
| Asp | Phe Thr Tyr | Asp Glu Ser | ALa Gly Thr | Phe Ser Met Tyr Trp Glu |
| 20 | 25 | 30 | ||
| Asp | Gly Val Ser | Ser Asp Phe | Val Val Gly | Leu Gly Trp Thr Thr Gly |
| 35 | 40 | 45 | ||
| Ser | Ser Asn ALa | Ile Thr Tyr | Ser Ala Glu | Tyr Ser ALa Ser Gly Ser |
| 50 | 55 | 60 . | ||
| Ala | Ser Tyr Leu | Ala Val Tyr | Gly Trp Val | Asn Tyr Pro Gin Ala Glu |
| 65 | 70 | 75 80 | ||
| Tyr | Tyr Ile Val | Glu Asp Tyr | Gly Asp Tyr | Asn Pro Cys Ser Ser Ala |
| 85 | 90 | 95 | ||
| Thr | Ser Leu Gly | Thr Val Tyr | Ser Asp Gly | Ser Thr Tyr Gin Val Cys |
| 100 | 105 | 110 | ||
| Thr | Asp Thr Arg | Thr Asn Glu | Pro Ser Ile | Thr Gly Thr Ser Thr Phe |
| 115 | 120 | 125 | ||
| Thr | Gin Tyr Phe | Ser Val Arg | Glu Ser Thr | Arg Thr Ser Gly Thr Val |
| 130 | 135 | 140 | ||
| Thr | Val Ala Asn | His Phe Asn | Phe Trp Ala | Gin His Gly Phe Gly Asn |
| 145 | 150 | 155 160 | ||
| Ser | Asp Phe Asn | Tyr Gin Val | Val Ala Val | Glu Ala Trp Ser Gly Ala |
| 165 | 170 | 175 | ||
| Gly | Ser Ala Ser | Val Thr Ile | Ser Ser | |
| 180 | 185 | |||
| (2) INFORMACJA DLA ID. | SEKW. NR: | 3: |
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 71 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NIJIOWOŚĆ: pojedyncza
PL 191 456 Β1 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: Nie (iii) ANTYSENS: Nie (vi) ŹRÓDŁO POCHODZENIA:
(A) ORGANIZM: Nicotiana tabacum (Xi) OPIS SEKWENCJI: ID. SEKW. NR 3:
AACTTCCTCA AGAGCTTCCC CTTTTATGCC TTCCTTTGTT TTGGCCAATA CTTTGTAGCT 60
GTTACGCATG C 71 (2) INFORMACJA,DLA ID. SEKW. NR: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 80 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI; cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: Nie (iii) ANTYSENS: Nie (xi) OPIS SEKWENCJI: ID. SEKW. NR 4:
CCATGGCATG CGTAACAGCT ACAAAGTATT GGCCAAAACA AAGGAAGGCA TAAAAGGGGA 60 (2 AGCTCTTGAG GAAGTTCATG β 0 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 21 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: Nie (iii) ANTYSENS: Nie (xi) OPIS SEKWENCJI: ID. SEKW. NR 5:
ATGGATGGCA TGCTGTTGTA G
PL 191 456 B1 (2) INFORMACJA DLA ID. SEKW. NR 6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWWNNJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 21 par zasac (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: pojedyncze (D) TOPOLOGIA: linOowe (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: Nie (ii_L) ANTYSENS: Nie (xi) OPIS SEKWENCCI: ID. SEKW. NR 6:
GCACAATTCT CGAGGAGACC G 21 (2) INFORMACJA DLA ID. SEKW. NR: 7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCI:
(A) DŁUGOŚĆ: 21 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: pojedyncza ' (D) TOPOLOGIA: linOowa (ii) RODZAJ : cDNA (iii) ) HYPOTETYCZNA: N.e (ii±) ANTYSENS: Nie (xi) OPIS SNKWENCJI: ID. SEKW. NR 7:
CCTCTTAAGG ATCCAATGCG G 21 (2) INFORMACJA DLA ID. SEKW. NR: 8:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJ: tA) DŁUGOŚĆ: 21 par zasad (B) RODZAJ: kwas nukleinowy (C) NICIOWOŚĆ: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: linOowa (ii) RODZAJ : cDNA (iii) HYPOTETYCZNA: Nie (iii) ANTYSENS: Nie (xi) OPIS SNKWENCJI: ID. SEKW. NR 8:
CTTATCTGAA TTCGGAAGCT C
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed, znamienny tym, że do słodu dodaje się mieszaninę enzymów obejmującą przynajmniej endo-p-(1,4)-ksylanazę, arabinofuranozydazę, αamylazę, endoproteazę oraz p-(1,3;1,4)-glukanazę, przy czym mieszanina enzymów zmniejsza ilość wymaganego słodu.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mieszanina zawiera także scukrzającą amylazę.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że mieszanina zawiera także egzopeptydazę.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że każdy z enzymów dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że więcej niż jeden enzym dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że co najmniej jeden enzym dostarczany jest przez ziarna pojedynczej roślinnej linii transgenicznej.
- 7. Sposób według zastrz. 4 albo 5, albo 6, znamienny tym, że pojedynczą roślinną linią transgeniczną jest roślinna linia jęczmienia.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP96202195 | 1996-08-05 | ||
| PCT/EP1997/004016 WO1998005788A1 (en) | 1996-08-05 | 1997-07-23 | Improved process for the production of alcoholic beverages using maltseed |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL331493A1 PL331493A1 (en) | 1999-07-19 |
| PL191456B1 true PL191456B1 (pl) | 2006-05-31 |
Family
ID=8224258
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL331493A PL191456B1 (pl) | 1996-08-05 | 1997-07-23 | Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6361808B1 (pl) |
| EP (1) | EP0915985A1 (pl) |
| JP (1) | JP2000515381A (pl) |
| CN (1) | CN1230225A (pl) |
| AU (1) | AU720139B2 (pl) |
| BG (1) | BG64681B1 (pl) |
| BR (1) | BR9711620A (pl) |
| CA (1) | CA2262436A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ296732B6 (pl) |
| MX (1) | MXPA99001239A (pl) |
| PL (1) | PL191456B1 (pl) |
| WO (1) | WO1998005788A1 (pl) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7033627B2 (en) * | 1990-03-23 | 2006-04-25 | Syngenta Mogen B.V. | Production of enzymes in seeds and their use |
| ATE286119T1 (de) * | 1997-04-30 | 2005-01-15 | Leuven K U Res & Dev | Inhibitoren von cellulolytischen, xylanolytischen und beta-glukanolytischen enzymen |
| EP0979830A1 (en) * | 1998-08-12 | 2000-02-16 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | A novel class of xylanase inhibitors |
| WO2001059141A2 (en) * | 2000-02-10 | 2001-08-16 | Washington State University Research Foundation | Methods and compositions that utilize barley as a foodstuff for animals |
| WO2001083792A2 (en) | 2000-05-02 | 2001-11-08 | Applied Phytologics, Inc. | Enhanced gene expression in plants using transcription factors |
| US6991824B2 (en) | 2000-05-02 | 2006-01-31 | Ventria Bioscience | Expression of human milk proteins in transgenic plants |
| US7417178B2 (en) | 2000-05-02 | 2008-08-26 | Ventria Bioscience | Expression of human milk proteins in transgenic plants |
| AU7242200A (en) * | 2000-06-12 | 2001-12-13 | Academia Sinica | Protein production in transgenic plant seeds |
| US20030091691A1 (en) * | 2000-06-23 | 2003-05-15 | Olsen Hans Sejr | Stepping process |
| DE60210749T2 (de) * | 2001-02-19 | 2007-03-29 | Kirin Beer K.K. | Verfahren zur präparation von hefe für fermentationstest |
| US20040115779A1 (en) * | 2002-03-19 | 2004-06-17 | Olsen Hans Sejr | Fermentation process |
| US7008652B2 (en) * | 2002-06-14 | 2006-03-07 | Brown-Forman Corporation | Method for production of a flavorless malt base |
| EP2258829A3 (en) * | 2003-12-19 | 2013-03-27 | Novozymes A/S | Mashing Process |
| NZ548762A (en) * | 2004-01-30 | 2009-07-31 | Dsm Ip Assets Bv | Carboxypeptidase CPD-1 for cheese ripening and other fermented food |
| WO2005118769A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Novozymes A/S | Mashing process and enzyme composition useful therein |
| US20080028486A1 (en) * | 2004-07-07 | 2008-01-31 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Aluminium Tolerant Barley |
| GB2418431A (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-29 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
| JP2006288379A (ja) * | 2005-03-18 | 2006-10-26 | Suntory Ltd | 分画したコーンを用いた発酵飲料 |
| WO2007102850A1 (en) * | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Lakefront Brewery, Inc. | Gluten-free beer and method for making the same |
| JP4627296B2 (ja) * | 2006-10-27 | 2011-02-09 | キリンホールディングス株式会社 | 発酵麦芽飲料製造用麦汁の製造方法 |
| GB0702844D0 (en) | 2007-02-14 | 2007-03-28 | Leuven K U Res & Dev | Improving taste of beer |
| WO2010009531A1 (en) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Atreo Medical, Inc. | Cpr assist device for measuring compression parameters during cardiopulmonary resuscitation |
| JP5658489B2 (ja) * | 2010-06-16 | 2015-01-28 | アサヒビール株式会社 | 発酵麦芽飲料の製造方法 |
| MX353745B (es) | 2011-09-14 | 2018-01-26 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Composiciones que comprenden enzimas con activiad de endo-1,4-beta-xilanasa y enzimas con actividad de endo-1,3(4)-beta glucanasa. |
| EP2847316A1 (en) * | 2012-05-11 | 2015-03-18 | Novozymes A/S | A brewing method |
| DK2958437T3 (da) * | 2013-02-21 | 2020-03-30 | Direvo Ind Biotechnology Gmbh | Præbiotiske dyrefoderprodukter |
| EP3041923A1 (en) * | 2013-09-05 | 2016-07-13 | Novozymes A/S | Method for production of brewers wort |
| DK3451852T3 (da) * | 2016-05-02 | 2020-09-28 | Univ Copenhagen | Drikkevarer indeholdende beta-glucan fra byg |
| US20200056131A1 (en) * | 2017-05-09 | 2020-02-20 | Suntory Holdings Limited | Saccharified liquid, method for producing saccharified liquid, food and beverage, distilled liquid for whiskey, and whiskey |
| MA51410A (fr) | 2017-12-28 | 2021-04-07 | Carlsberg As | Plantes céréalières présentant des propriétés de paroi cellulaire améliorées |
| JP2020061988A (ja) * | 2018-10-18 | 2020-04-23 | サッポロビール株式会社 | ビールテイスト飲料の製造方法及びビールテイスト飲料の香味向上方法 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE275704C (pl) | ||||
| CA961432A (en) | 1969-07-08 | 1975-01-21 | Labatt (John) Limited | Process for making a brewers' wort and beer derived therefrom |
| CH572519A5 (pl) | 1972-10-25 | 1976-02-13 | Ciba Geigy Ag | |
| US4285975A (en) * | 1980-01-29 | 1981-08-25 | Miles Laboratories, Inc. | Production of brewer's wort |
| ZA821071B (en) | 1981-03-03 | 1983-01-26 | Flogates Ltd | Improvements in the pouring of molten metals |
| JPS57152888A (en) | 1981-03-14 | 1982-09-21 | Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd | Alcoholic fermentation of raw potato by enzymatic process |
| NL8403600A (nl) * | 1983-11-28 | 1985-06-17 | Glaxo Group Ltd | Werkwijze voor de bioafbraak van pentosanen. |
| CA1280704C (en) | 1985-12-03 | 1991-02-26 | Paul Ducroo | Production of beer |
| US5487989A (en) * | 1988-08-31 | 1996-01-30 | Bioenergy International, L.C. | Ethanol production by recombinant hosts |
| DD275704A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-01-31 | Akad Wissenschaften Ddr | Verfahren zur herstellung von gerstenpflanzen |
| JP2530942B2 (ja) * | 1989-02-16 | 1996-09-04 | カールスベルク エイ／エス | 酵素に関する改良 |
| NZ237549A (en) * | 1990-03-23 | 1993-06-25 | Gist Brocades Nv | Production of enhanced levels of enzymes in the seeds of transgenic plants and the use of these seeds |
| IE913215A1 (en) | 1990-09-13 | 1992-02-25 | Gist Brocades Nv | Transgenic plants having a modified carbohydrate content |
| US5180669A (en) * | 1991-03-27 | 1993-01-19 | Genencor International, Inc. | Liquefaction of granular-starch slurries using alpha-amylase in the presence of carbonate ion |
| IL108175A0 (en) * | 1992-12-24 | 1994-04-12 | Gist Brocades Nv | Cloning and expression of xylanase B |
| AU7807394A (en) * | 1993-10-04 | 1995-05-01 | Novo Nordisk A/S | An enzyme preparation comprising a modified enzyme |
| SI9520013A (en) | 1994-08-26 | 1996-10-31 | Gist Brocades Bv | Arabinoxylan degrading enzymes. |
| US6265000B1 (en) * | 1994-10-20 | 2001-07-24 | Hokkaido Wine Co, Ltd | Process for the production of carbonated alcoholic beverages using koji, malt, and various fermentation media |
| GB9505479D0 (en) | 1995-03-17 | 1995-05-03 | Danisco | Enzyme |
| EA001078B1 (ru) | 1996-05-03 | 2000-10-30 | Гист-Брокейдс Б.В. | СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СУСЛА, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПИВА, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПИТЬЕВОГО СПИРТА, ПРИМЕНЕНИЕ α-L-АРАБИНОФУРАНОЗИДАЗ А И В И СМЕСЬ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ |
-
1997
- 1997-07-23 CZ CZ0037899A patent/CZ296732B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-23 US US09/230,590 patent/US6361808B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-23 MX MXPA99001239A patent/MXPA99001239A/es unknown
- 1997-07-23 CN CN97197918A patent/CN1230225A/zh active Pending
- 1997-07-23 WO PCT/EP1997/004016 patent/WO1998005788A1/en not_active Ceased
- 1997-07-23 CA CA2262436A patent/CA2262436A1/en not_active Abandoned
- 1997-07-23 AU AU41161/97A patent/AU720139B2/en not_active Ceased
- 1997-07-23 BR BR9711620-3A patent/BR9711620A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-07-23 JP JP10507549A patent/JP2000515381A/ja not_active Ceased
- 1997-07-23 PL PL331493A patent/PL191456B1/pl unknown
- 1997-07-23 EP EP97938858A patent/EP0915985A1/en not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-02-23 BG BG103199A patent/BG64681B1/bg unknown
-
2001
- 2001-10-04 US US09/970,616 patent/US6699515B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-01-07 US US10/765,716 patent/US20050095315A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL331493A1 (en) | 1999-07-19 |
| AU4116197A (en) | 1998-02-25 |
| CZ37899A3 (cs) | 1999-10-13 |
| US6361808B1 (en) | 2002-03-26 |
| EP0915985A1 (en) | 1999-05-19 |
| CA2262436A1 (en) | 1998-02-12 |
| MXPA99001239A (es) | 2003-09-12 |
| BG103199A (en) | 2000-05-31 |
| US20050095315A1 (en) | 2005-05-05 |
| US20020164399A1 (en) | 2002-11-07 |
| WO1998005788A1 (en) | 1998-02-12 |
| JP2000515381A (ja) | 2000-11-21 |
| AU720139B2 (en) | 2000-05-25 |
| BR9711620A (pt) | 2001-11-20 |
| CN1230225A (zh) | 1999-09-29 |
| CZ296732B6 (cs) | 2006-05-17 |
| US6699515B2 (en) | 2004-03-02 |
| BG64681B1 (bg) | 2005-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6699515B2 (en) | Process for the production of alcoholic beverages using maltseed | |
| James et al. | Glucoamylases: microbial sources, industrial applications and molecular biology—a review | |
| RU2312144C2 (ru) | Аутопроцессирующиеся растения и части растений | |
| US5889189A (en) | Process for protein production in plants | |
| JP3938401B2 (ja) | 種子における酵素の生産およびその使用 | |
| CA2199158C (en) | Seed-specific promoter from barley beta-amylase gene | |
| Nuutila et al. | Expression of fungal thermotolerant endo-1, 4-β-glucanase in transgenic barley seeds during germination | |
| US9677058B2 (en) | Polypeptides having glucoamylase activity and method of producing the same | |
| US5665585A (en) | Recombinant production of glucoamylase P in trichoderma | |
| US9688973B2 (en) | Polypeptides having alpha-glucosidase activity and polynucleotides encoding same | |
| JP2000510336A (ja) | 改善された濾過性及び／又は増加した収率を有する麦汁の製造方法 | |
| EP1346030B1 (en) | Low-lipoxygenase 1 barley | |
| AU710169B2 (en) | Endo beta-1,4-glucanase from aspergillus | |
| US20050106699A1 (en) | Process for xylanase production | |
| CN109486841B (zh) | 一种利用稻麦种子生产饲料复合酶的方法 | |
| MXPA97007112A (en) | Endo-beta-1,4-glucanase from aspergil | |
| CN110358775A (zh) | 一种抑制酵母提前絮凝因子产生的方法 |