PL205949B1 - Sposób wytwarzania peptydu - Google Patents
Sposób wytwarzania peptyduInfo
- Publication number
- PL205949B1 PL205949B1 PL361993A PL36199301A PL205949B1 PL 205949 B1 PL205949 B1 PL 205949B1 PL 361993 A PL361993 A PL 361993A PL 36199301 A PL36199301 A PL 36199301A PL 205949 B1 PL205949 B1 PL 205949B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- boc
- resin
- peptide
- gly
- solution
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 title claims abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 56
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 56
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 23
- -1 Boc group Chemical group 0.000 claims description 17
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 16
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 16
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 11
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 8
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 6
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 5
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 5
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 4
- NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(O)=O)=CNC2=C1 NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N 0.000 claims description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims description 4
- VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N triptorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N 0.000 claims description 4
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 3
- HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DKYVVNLWACXMDW-UHFFFAOYSA-N n-cyclohexyl-4-methylbenzenesulfonamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NC1CCCCC1 DKYVVNLWACXMDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NFVNYBJCJGKVQK-CYBMUJFWSA-N (2r)-3-(1h-indol-3-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 3
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N N-[(Tert-butoxy)carbonyl]-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 125000003287 1H-imidazol-4-ylmethyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[*])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- HDELGKMVZYHPPB-FJXQXJEOSA-N [(4s)-4-carboxy-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butyl]-(diaminomethylidene)azanium;chloride Chemical compound Cl.CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HDELGKMVZYHPPB-FJXQXJEOSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N isatin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(=O)NC2=C1 JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-(quinolin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical group C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GZYCYMQMZRWRJQ-JTQLQIEISA-N (2s)-6-amino-2-(pyridine-2-carbonylamino)hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)C1=CC=CC=N1 GZYCYMQMZRWRJQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- HYLARTCUZHPNQK-JTQLQIEISA-N (2s)-6-amino-2-(pyridine-3-carbonylamino)hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)C1=CC=CN=C1 HYLARTCUZHPNQK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 125000004206 2,2,2-trifluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(F)(F)F 0.000 description 1
- ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutane Chemical group CC(C)C(C)C ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 description 1
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N Cyclohexylamine Natural products NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical group NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N azane;methanol Chemical compound N.OC CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000002434 gonadorelin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- OFYAYGJCPXRNBL-LBPRGKRZSA-N naphthalen-2-yl-3-alanine Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=CC2=C1 OFYAYGJCPXRNBL-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- QQWYQAQQADNEIC-RVDMUPIBSA-N tert-butyl [(z)-[cyano(phenyl)methylidene]amino] carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)O\N=C(/C#N)C1=CC=CC=C1 QQWYQAQQADNEIC-RVDMUPIBSA-N 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/068—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for heterocyclic side chains
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania peptydu o wzorze pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.
Hormon uwalniający hormon luteinizujący (LHRH) stanowi neuroprzekaźnik wytwarzany przez podwzgórze, stabilizujący wydzielanie hormonu luteinizującego (LHRH) i hormonu folikulotropowego (FSH) z przysadki mózgowej, które to hormony stymulują z kolei syntezę hormonów sterydowych, np. testosteronu, w gonadach. Wiele analogów peptydu LHRH (np. agonistów i antagonistów) sprzedaje się obecnie jako leki do leczenia endometriozy, raka prostaty, przedwczesnego dojrzewania oraz innych chorób związanych z zaburzeniami hormonalnymi. Synteza takich analogów LHRH jest trudna i kosztowna.
Syntezę peptydów w fazie stałej wprowadzono w 1963 r., chcąc przezwyciężyć wiele problemów związanych z oczyszczaniem związków pośrednich występujących w przypadku syntezy peptydów w fazie ciekłej. Stewart i wsp., Solid Phase Peptide Syntesis (Pierce Chemical Co., wyd. 2) 1984. Podczas syntezy w fazie stałej aminokwasy łączy się ze sobą (tj. sprzęga) w peptyd o żądanej sekwencji, przy czym jeden z końców łańcucha (to jest C-koniec) jest zakotwiczony w nierozpuszczalnym nośniku. Po złożeniu oczekiwanej sekwencji na nośniku, peptyd oddziela się (to jest odszczepia) od nośnika.
W opisie patentowym US nr 4 010 125 (1977) opisano syntezę [D-Trp6]-LHRH, w której ł a ń cuchy boczne czterech z dziesięciu reszt agonisty LHRH są zabezpieczone (np. L-histydylo(tosyl), serylo(benzyl), tyrozylo(2,6-di-Cl-Bzl) i L-arginylo(tosyl)). Jednak Coy i wsp., Int. Peptide Protein Res. 14: 359 (1979) donieśli później o syntezie szeregu innych analogów LHRH, w przypadku których minimalne zabezpieczenie łańcuchów bocznych, np. zabezpieczenie tylko argininy w postaci soli (to jest Arg.HCl) prowadziło do wyższej wydajności w porównaniu do odpowiedniej syntezy z zabezpieczeniem. Niniejszy wynalazek jest oparty na odkryciu, że pomimo tendencji do niezabezpieczania łańcuchów bocznych aminokwasów podczas syntezy analogów LHRH, zabezpieczenie reszty tryptofanu podczas syntezy w fazie stałej istotnie zwiększa wydajność wytwarzania analogów LHRH zawierających resztę tryptofanu (np. [D-Trp6]LHRH).
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania peptydu o wzorze (I):
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 (I), w którym reszta His jest zabezpieczona grupą tosylową oraz indolowa grupa NH w każ dej z reszt Trp jest zabezpieczona, charakteryzującego się tym, że w kolejnych etapach:
(a) przyłącza się sól cezową Boc-Gly do chlorometylowanej żywicy polistyrenowej z wytworzeniem Boc-Gly-żywicy;
(b) odblokowuje się Boc-Gly-żywicę przez zmieszanie Boc-Gly-żywicy z mieszaniną kwasu organicznego usuwającego Boc, z wytworzeniem soli kwasu organicznego i H2N-Gly-żywicy;
(c) zobojętnia się sól kwasu organicznego i H2N-Gly-żywicy z użyciem zasady, z wytworzeniem H2N-Gly-żywicy;
(d) sprzęga się H2N-Gly-żywicę z Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem, który to zabezpieczony aminokwas odpowiada aminokwasowi zdefiniowanemu wzorem (I) w kolejności od C-końca do N-końca, przy czym:
(i) H2N-Gly-żywicę poddaje się reakcji z Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem w obecności środka sprzęgającego peptyd, z wytworzeniem Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu;
(ii) usuwa się grupę Boc z Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu przez zmieszanie tego Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu z kwasem organicznym usuwającym Boc, z wytworzeniem sprzęgniętego produktu;
(iii) sprzęgnięty produkt poddaje się reakcji z następnym Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem w obecności środka sprzęgającego peptyd, z wytworzeniem Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu;
(iv) usuwa się grupę Boc z Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu przez zmieszanie Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu z kwasem organicznym usuwającym Boc, z wytworzeniem kolejnego sprzęgniętego produktu;
(v) powtarza się etapy (d) (iii) i (d) (iv) aż do sprzęgnięcia N-końcowego aminokwasu peptydu o wzorze (I), usunięcia grupy Boc z N-końcowego aminokwasu i tosylowej grupy zabezpieczającej łańcuch boczny z reszty His, z wytworzeniem zabezpieczonego gotowego peptydu-żywicy;
PL 205 949 B1 (e) odszczepia się i odbezpiecza zabezpieczony gotowy peptyd-żywicę, z wytworzeniem peptydu o wzorze (I), przy czym:
(i) sporządza się roztwór zabezpieczonego gotowego peptydu-ż ywicy w mieszaninie metanol/obojętny polarny rozpuszczalnik aprotonowy;
(ii) chłodzi się roztwór do około 0-10°C;
(iii) powoli przepuszcza się pęcherzykami gazowy amoniak lub gazową etyloaminę przez roztwór aż do dokładnego wysycenia roztworu amoniakiem, z wytworzeniem roztworu nasyconego;
(iv) miesza się ten roztwór nasycony bez chłodzenia przez 15-36 godzin aż do przemiany > 95% wolnego estru metylowego w odpowiedni amid, w przypadku uż ycia gazowego amoniaku lub odpowiedni etyloamid, w przypadku użycia gazowej etyloaminy; oraz (f) wyodrębnia się peptyd z roztworu.
Korzystnie następujące Boc-a-aminowane aminokwasy kolejno sprzęga się od C-końca do N-końca: N-a-Boc-L-prolinę, N-a-Boc-L-argininęHCl, N-a-Boc-L-leucynę, N-a-Boc-D-tryptofan(N'-indoloformyl), N-a-Boc-L-tyrozynę, hydrat N-a-Boc-L-seryny, N-a-Boc-tryptofan(N'-indoloformyl), sól N-a-Boc-L-histydyno(tosylo)cykloheksyloaminy i kwas piroglutaminowy.
Korzystniej formylową grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp usuwa się działając roztworem zawierającym amoniak, pierwszorzędową aminę lub drugorzędową aminę oraz metanol.
Najkorzystniej stosuje się roztwór zawierający amoniak i metanol.
Korzystnie w sposobie przy sprzęganiu N-a-Boc-D-tryptofano(N'-indoloformylu), N-a-Boc-L-tyrozyny, hydratu N-a-Boc-L-seryny i N-a-Boc-tryptofano(N'-indoloformylu) stosuje się hydroksybenzotriazol (HOBT).
Korzystnie w sposobie w odniesieniu do syntezy na fazie stałej peptydu o wzorze (I) zdefiniowanym powyżej tymczasowo zabezpiecza się wszelkie reszty tryptofanu z użyciem wrażliwej na działanie zasady grupy zabezpieczającej łańcuch boczny, przy czym tę grupę zabezpieczającą usuwa się podczas odszczepiania peptydu o wzorze (I) od stałego nośnika drogą reakcji z zasadą.
Korzystniej jako grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp lub D-Trp stosuje się grupę acylową.
Jeszcze korzystniej grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp lub D-Trp usuwa się działając roztworem zawierającym amoniak, pierwszorzędową aminę lub drugorzędową aminę oraz metanol.
Także korzystniej jako grupę zabezpieczającą łańcuch boczny stosuje się grupę formylową, a jako zasadę roztwór metanolowy zawierający amoniak.
Inne cechy i korzyści wynalazku staną się oczywiste po zapoznaniu się ze szczegółowym opisem wynalazku i zastrzeżeniami patentowymi.
Skróty:
BOC = t-butoksykarbonyl
Cit = cytrulina cPzACAla = cis-3-(4-pirazynylokarbonyloamonicykloheksylo)alanina hArg(Bu) = N-guanidyno(butylo)homoarginina hArg(Et)2 = N,N'-guanidyno(dimetylo)homoarginina hArg(CH2CF3)2 = N,N'-guanidynobis(2,2,2-trifluoroetylo)homoarginina HOBT = 1-hydroksybenzotriazol
Lys(iPr) = NMzopropylolizyna β-Nal = β-1-naftyloalanina lub β-2-naftyloalanina, o ile nie podano inaczej,
NicLys = N^nikotynoilolizyna
Pal = pirydyloalanina p-Cl-Phe = 3-(4-chlorofenylo)alanina p-F-Phe = 3-(4-fluorofenylo)alanina
PicLys = N^pikolinoilolizyna
Qal = chinoliloalanina
Uważa się, że w oparciu o niniejszy opis fachowiec może użyć niniejszego wynalazku w jak najszerszym zakresie. Poniższe szczegółowe jego postacie mają zatem jedynie charakter ilustracji i nie ograniczają zakresu wynalazku.
O ile nie zdefiniowano inaczej, wszystkie zastosowane tu określenia techniczne i naukowe mają powszechnie przyjęte znaczenie, zrozumiałe dla fachowców. Wszystkie publikacje, zgłoszenia patentowe, opisy patentowe i inne źródła literaturowe są włączone jako odnośniki.
PL 205 949 B1
Peptyd o wzorze (I) można wytworzyć drogą syntezy peptydu w fazie stałej z użyciem chemii Boc na żywicy Merrifielda, a następnie odszczepienia peptydu od żywicy z użyciem amoniaku, aminy pierwszorzędowej lub aminy drugorzędowej w alkoholu, z wytworzeniem tytułowego peptydu.
Pierwszym etapem tego sposobu według wynalazku jest przyłączenie soli cezowej C-końcowego aminokwasu, Boc-A10, gdzie A10 oznacza końcowy aminokwas, którym jest Gly, do żywicy Merrifielda wiązaniem estrowym. Sól cezową Boc-A10 wytwarza się przez dodanie Boc-A10 do węglanu cezu w mieszaninie metanolu i wody. Sól cezową Boc-A10 suszy się pod próżnią, a następnie poddaje reakcji z grupami chlorometylobenzylowymi na polistyrenie w środowisku niewodnego polarnego rozpuszczalnika aprotonowego, takiego jak dimetyloformamid (DMF). Reakcję tę prowadzi się przez około 24-48 godzin, korzystnie 36 godzin, w temperaturze 45-60°C, a korzystnie w 50°C. Po reakcji żywicę odsącza się, płucze wodą, polarnym rozpuszczalnikiem aprotonowym, takim jak DMF, i alkoholem, takim jak metanol, a następnie suszy do stałej masy, korzystnie pod zmniejszonym ciśnieniem. Wysuszoną żywicę można badać w celu określenia zawartości Boc-A10, wyrażanej w milimolach A10 na gram suchej żywicy. Obliczoną wartość stosuje się do określenia skali reakcji przyłączania dla potrzeb prowadzonych następnie obliczeń wykorzystania materiału i wydajności teoretycznej.
Syntezę peptydu o wzorze (I) można prowadzić na Boc-A10-żywicy umieszczonej w szklanym reaktorze wyposażonym w koliste filtry ze spiekanego szkła znajdujące się na dnie reaktora. Zawartość reaktora miesza się z użyciem mieszadła mechanicznego, a reaktor opróżnia się z użyciem ciśnienia gazu obojętnego, takiego jak azot, które wymusza przepływ cieczy przez filtr spiekany na dnie, podczas gdy żywica pozostaje w reaktorze.
W pierwszej kolejnoś ci odszczepia się grupę Boc w Boc-A10 (odblokowanie) od A10- ż ywicy przez dwukrotne mieszanie A10-żywicy z mieszaniną kwasu organicznego i chlorowanego rozpuszczalnika, korzystnie z 25% roztworem kwasu trifluoroctowego (TFA) w dichlorometanie (DCM), najpierw przez około 2 minuty, a następnie przez 25 minut, po czym żywicę odsącza się pod ciśnieniem azotu. A10-żywicę następnie przemywa się trzykrotnie DCM i dwukrotnie alkoholem, takim jak alkohol izopropylowy (IPA), a otrzymaną sól amino-TFA zobojętnia się dwukrotnie zasadą w obojętnym rozpuszczalniku, korzystnie w 10% roztworem trietyloaminy w DCM, za każdym razem przez około 5 minut i ponownie trzykrotnie przemywa DCM. Następnie żywicę sprzęga się z Boc-a-amino-zabezpieczonymi aminokwasami w postaci mieszanin zawierających 2,5 równoważnika molowego, odpowiadającymi aminokwasom zdefiniowanym we wzorze (I) począwszy od C-końca do N-końca, z użyciem środka sprzęgającego peptyd, korzystnie diizopropylokarboimidu (DIC), w polarnych rozpuszczalnikach aprotonowych, korzystnie w mieszaninach DMF/DCM. Po każdym sprzęganiu prowadzi się przemywanie DMF i DCM. Żywicę można badać z użyciem testu ninhydrynowego Kaisera po zakończeniu sprzęgania, z wyjątkiem sprzęgania argininy, które to sprzęganie może być badane przy użyciu izatyny dla wykrycia drugorzędowej grupy aminowej resztkowej nie sprzęgniętej proliny. Grupa Boc jest usuwana z każdego sprzęgniętego aminokwasu po wykonaniu testu opisanego powyżej. Następujące zabezpieczone aminokwasy odpowiadające aminokwasom ze wzoru (I) stosuje się korzystnie w syntezie według wynalazku: N-a-Boc-L-prolinę, N-a-Boc-L-argininę-HCl, N-a-Boc-L-leucynę, N-a-Boc-D-tryptofan(N'-indoloformyl), N-a-Boc-L-tyrozynę, hydrat N-a-Boc-L-seryny, sól N-a-Boc-L-histydyno(tosylo)cykloheksyloaminy i kwas piroglutaminianowy.
Można również stosować 1-hydroksybenzotriazol (HOBT) (3-5 równ.) przy sprzęganiu zabezpieczonych pochodnych D-Trp, Tyr, Ser i Trp. Grupę tosylową zabezpieczającą łańcuch boczny histydyny usuwa się poprzez dwukrotne podziałanie HOBT w DMF w ciągu 1 godziny (każde) po zakończeniu sprzęgania aminokwasów. Boc-D-tryptofan i Boc-L-tryptofan mają łańcuchy boczne zabezpieczone grupą formylową przy azocie pierścienia indolowego. Grupę formylową następnie usuwa się podczas odszczepiania peptydu od żywicy z użyciem zasady.
Gotowy peptyd-żywicę spłukuje się do zważonego lejka ze spiekanego szkła z użyciem obojętnego chlorowanego rozpuszczalnika, takiego jak DCM, dwukrotnie przepłukuje alkoholem, takim jak metanol i suszy pod próżnią. Wysuszony peptyd-żywicę przenosi się do jednolitrowej, trójszyjnej, okrągłodennej kolby. Do tej okrągłodennej kolby wlewa się mieszaninę 9:1 metanolu/DMF w proporcji 15 ml na 1 g peptydu-żywicy. Roztwór chłodzi się do około < 10°C oraz, gdy wymagana jest amidowa postać C-końca, w trakcie intensywnego chłodzenia powoli przepuszcza się pęcherzykami gazowy amoniak do chwili wysycenia (czas dodawania około 1 godziny), przy czym peptyd uwalnia się od żywicy w postaci wolnego pośredniego estru metylowego. Roztwór następnie miesza się bez chłodzenia przez około 15-36 godzin, podczas których około > 95% wolnego estru metylowego ulega konwersji do odpowiedniego produktu amidowego. Postęp reakcji może być monitorowany, np. metodą wyPL 205 949 B1 sokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), a reakcja można zakończyć po uzyskaniu żądanego stopnia jej przebiegu. Produkt w roztworze przesącza się przez lejek ze spiekanego szkła, a żywicę przepłukuje się kilkakrotnie metanolem i DMF. Wszystkie ciecze z przemycia oraz przesącze zagęszcza się do postaci bardzo gęstego oleju. Po dodaniu octanu etylu roztwór rozciera się dla zestalenia produktu, dekantuje i ponownie rozciera z użyciem octanu etylu. Surowy produkt rozpuszcza się w metanolu, a nastę pnie dodaje jednakową obję tość 4N kwasu octowego. Roztwór zatęża się w celu całkowitego usunięcia metanolu. Następnie produkt rozcieńcza się 4N kwasem octowym.
Postać peptydu z etyloamidem na C-końcu można otrzymać poprzez zastąpienie amoniaku etyloaminą w procedurze opisanej w powyższym akapicie, przy czym w trakcie wysycania roztworu etyloaminą temperaturę roztworu utrzymuje się poniżej około < 16°C, a korzystnie około 5-15°C.
Surową substancję można oczyścić przez powtarzanie zabiegów preparatywnej chromatografii z odwróconymi fazami, a następnie liofilizować , z wytworzeniem produktu końcowego.
Oczywiste dla fachowca będzie stosowanie innych układów rozpuszczalników, w tym między innymi alkoholi o małej masie cząsteczkowej, takich jak etanol, propanol, izopropanol, butanol, izobutanol, tert-butanol itp., innych polarnych rozpuszczalników aprotonowych oraz ich mieszanin.
Następujący przykład opisano w celu zilustrowania sposobu według wynalazku i nie ogranicza on niniejszego wynalazku w żadnej mierze.
P r z y k ł a d
Synteza pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2-([D-Trp6]LHRH-NH2)
[D-Trp6]LHRH-NH2 wytworzono poprzez syntezę peptydu w fazie stałej z użyciem Boc na żywicy Merrifielda, a następnie poprzez odszczepienie peptydu od żywicy metanolowym roztworem amoniaku, z wytworzeniem tytułowego peptydu.
Pierwszym etapem procesu było przyłączenie soli cezowej C-końcowego aminokwasu, Boc-glicyny, do żywicy Merrifielda poprzez wiązanie estrowe. Sól cezową Boc-glicyny wytworzono drogą reakcji Boc-glicyny (40,9 g) z węglanem cezu (37,9 g) w mieszaninie metanolu i wody (80 ml/40 ml). Sól cezową Boc-glicyny wysuszono pod próżnią, a następnie poddano reakcji z grupami chlorometylobenzylowymi umieszczonymi na perełkach polistyrenu (żywica Merrifielda; Advanced Chemtech, 88,2 g) w bezwodnym dimetyloformamidzie (DMF; 200 ml). Reakcję prowadzano przez około 36 godzin w około 50°C w obrotowej wyparce Buchi™ Model 110. Przereagowaną żywicę odsączono, przepłukano wodą, DMF i metanolem, a następnie wysuszono do stałej masy w T < 35°C pod próżnią. Wysuszoną żywicę zbadano w celu określenia zawartości Boc-glicyny, wyrażonej w milimolach glicyny na gram suchej żywicy. Obliczoną wartość 0,872 milimoli/gram stosowano do określania dokładnej skali reakcji składania do obliczeń zużycia substancji w dalszych etapach i wydajności teoretycznej.
Syntezę peptydu prowadzono z użyciem Boc-glicyny-żywicy (12,5 g) znajdującej się w 500 ml szklanym reaktorze z filtrami ze spiekanego szkła na górze i na dole reaktora. Reaktor napełniono od dołu i wstrząsano poprzez inwersję (obracanie o 180° przez 3 sekundy). Najpierw grupę Boc usunięto (odblokowanie) z glicyny-żywicy poprzez dwukrotne zmieszanie żywicy z 175 ml 25% kwasu trifluoroctowego (TFA) w dichlorometanie (DCM) (przez 2 minuty i 25 minut), po czym żywicę wysuszono pod ciśnieniem azotu. Żywicę trzykrotnie przepłukano 125 ml DCM i dwukrotnie 125 ml alkoholu izopropylowego (IPA), a następnie trzy razy 125 ml DCM. Otrzymaną sól amino-TFA zobojętniono dwukrotnie z użyciem 125 ml 10% trietyloaminy w DCM przez 5 minut za każdym razem, a następnie ponownie przepłukano trzy razy DCM.
W kolejnym etapie żywicę sprzęgano i odblokowywano z użyciem mieszanin zawierających po
2,5 równoważnika molowego poniższych aminokwasów zabezpieczonych Boc i 4,2 ml diizopropylokarbodiimidu (DIC) w 16 ml DMF i 47 ml DCM: 5,84 g Boc-L-proliny, 8,93 g Boc-L-argininy^HCl, 6,77 g Boc-L-leucyny, 9,0 g Boc-D-tryptofanu(formyl), 7,64 g Boc-L-tyrozyny, 9,0 g Boc-L-tryptofanu (formyl), 6,06 g hydratu Boc-L-seryny, 16 g soli Boc-L-histydyno(tosylo)cykloheksyloaminy oraz 13,5 g kwasu piroglutaminowego. Przy sprzęganiu D-Trp, Tyr, Ser i Trp stosowano również 1-hydroksybenzotriazol (HOBT) (3-5 równ.). Przy sprzęganiu Arg użyto 75 ml dimetyloacetamidu (DMA) zamiast DMF i DCM.
Żywicę płukano DMF i DCM i badano ninhydryną w teście Kaisera pod kątem zakończenia sprzęgania. Grupę Boc usuwano z każdego sprzęgniętego aminokwasu, jak opisano powyżej. Łańcuch boczny histydyny był zabezpieczony tosylem, który usunięto przez dwukrotne podziałanie 4,16 g HOBT w 105 ml DMF przez 1 godzinę (każde płukanie) po ostatnim sprzęganiu aminokwasów. Boc-D-tryptofan i Boc-L-tryptofan miały łańcuchy boczne zabezpieczone grupą formylową usuwaną podczas odszczepiania peptydu od żywicy.
PL 205 949 B1
Gotowy peptyd z żywicą spłukano do zważonego lejka ze spiekanego szkła z użyciem DCM, przepłukano dwukrotnie metanolem i wysuszono pod próżnią. Wysuszony peptyd-żywicę przeniesiono do jednolitrowej, trójszyjnej, okrągłodennej kolby. Do kolby dodano 15 ml/gram peptydu-żywicy w mieszaninie 9:1 metanol/DMF (380 ml na skalę 10,9 mM). Roztwór ochłodzono do około < 10°C i przepuszczono powoli pęcherzykami gazowy amoniak z silnym chłodzeniem do chwili wysycenia (dodawanie w ciągu około 1 godziny). Roztwór dalej mieszano bez chłodzenia przez około 15-36 godzin, do chwili, gdy około > 95% wolnego estru metylowego uległo konwersji do produktu amidowego, co stwierdzono monitorując postęp reakcji metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Produkt przesączono do roztworu w lejku ze spiekiem szklanym, a żywicę przepłukano kilkakrotnie metanolem i DMF. Wszystkie ciecze z przemycia oraz przesącze zagęszczono do postaci bardzo gęstego oleju w wyparce obrotowej w T < 40°C. Dodano octanu etylu (0,08 litra), a roztwór roztarto do zestalenia się produktu, zdekantowano i te czynności powtórzono z użyciem 0,08 g octanu etylu. Twardy, żywiczny produkt namoczono w octanie etylu na noc i zdekantowano ciecz. Surowy produkt rozpuszczano w metanolu (0,07 litra), a następnie dodano tę samą objętość 4N kwasu octowego. Roztwór zatężono w celu całkowitego usunięcia metanolu na wyparce obrotowej w T < 40°C. Następnie produkt rozcieńczono 4N kwasem octowym do około 35 gramów produktu/litr.
Surowy produkt oczyszczono następnie metodą preparatywnej chromatografii z odwróconymi fazami, a potem liofilizowano i otrzymano produkt końcowy (8,4 g, wydajność 59%) w postaci białej substancji stałej o czystości > 99%.
Na podstawie powyższego opisu, fachowiec może z łatwością zapoznać się z zasadniczą charakterystyką niniejszego wynalazku oraz może dokonać szeregu zmian i modyfikacji wynalazku w celu zaadaptowania go do różnych zastosowań i warunków, bez zmiany założeń i zakresu wynalazku. Tym samym, inne wykonania są również objęte zakresem zastrzeżeń patentowych.
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania peptydu o wzorze (I): pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 (I), w którym reszta His jest zabezpieczona grupą tosylową , oraz indolowa grupa NH w każ dej z reszt Trp jest zabezpieczona, znamienny tym, że w następujących etapach:(a) przyłącza się sól cezową Boc-Gly do chlorometylowanej żywicy polistyrenowej z wytworzeniem Boc-Gly-żywicy;(b) odblokowuje się Boc-Gly-żywicę przez zmieszanie Boc-Gly-żywicy z mieszaniną kwasu organicznego usuwającego Boc, z wytworzeniem soli kwasu organicznego i H2N-Gly-żywicy;(c) zobojętnia się sól kwasu organicznego i H2N-Gly-żywicy z użyciem zasady, z wytworzeniem H2N-Gly-żywicy;(d) sprzęga się H2N-Gly-żywicę z Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem, który to zabezpieczony aminokwas odpowiada aminokwasowi zdefiniowanemu wzorem (I) w kolejności od C-końca do N-końca, przy czym:(i) H2N-Gly-żywicę poddaje się reakcji z Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem w obecności środka sprzęgającego peptyd, z wytworzeniem Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu;(ii) usuwa się grupę Boc z Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu przez zmieszanie tego Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu z kwasem organicznym usuwającym Boc, z wytworzeniem sprzęgniętego produktu;(iii) sprzęgnięty produkt poddaje się reakcji z następnym Boc-a-amino-zabezpieczonym aminokwasem w obecności środka sprzęgającego peptyd, z wytworzeniem Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu;(iv) usuwa się grupę Boc z Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu przez zmieszanie Boc-zablokowanego sprzęgniętego produktu z kwasem organicznym usuwającym Boc, z wytworzeniem kolejnego sprzęgniętego produktu;(v) powtarza się etapy (d) (iii) i (d) (iv) aż do sprzęgnięcia N-końcowego aminokwasu peptydu o wzorze (I), usunięcia grupy Boc z N-końcowego aminokwasu i tosylowej grupy zabezpieczającej łańcuch boczny z reszty His, z wytworzeniem zabezpieczonego gotowego peptydu-żywicy;PL 205 949 B1 (e) odszczepia się i odbezpiecza zabezpieczony gotowy peptyd-żywicę, z wytworzeniem peptydu o wzorze (I), przy czym:(i) sporządza się roztwór zabezpieczonego gotowego peptydu-ż ywicy w mieszaninie metanol/obojętny polarny rozpuszczalnik aprotonowy;(ii) chłodzi się roztwór do około 0-10°C;(iii) powoli przepuszcza się pęcherzykami gazowy amoniak lub gazową etyloaminę przez roztwór aż do dokładnego wysycenia roztworu amoniakiem, z wytworzeniem roztworu nasyconego;(iv) miesza się ten roztwór nasycony bez chłodzenia przez 15-36 godzin aż do przemiany > 95% wolnego estru metylowego w odpowiedni amid, w przypadku uż ycia gazowego amoniaku lub odpowiedni etyloamid, w przypadku użycia gazowej etyloaminy; oraz (f) wyodrębnia się peptyd z roztworu.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że następujące Boc-a-aminowane aminokwasy kolejno sprzęga się od C-końca do N-końca: N-a-Boc-L-prolinę, N-a-Boc-L-argininę^HCl, N-a-Boc-L-leucynę, N-a-Boc-D-tryptofan(N'-indoloformyl), N-a-Boc-L-tyrozynę, hydrat N-a-Boc-L-seryny, N-a-Boc-tryptofan(N'-indoloformyl), sól N-a-Boc-L-histydyno(tosylo)cykloheksyloaminy i kwas piroglutaminowy.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że formylową grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp usuwa się działając roztworem zawierającym amoniak, pierwszorzędową aminę lub drugorzędową aminę, oraz metanol.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że stosuje się roztwór zawierający amoniak i metanol.
- 5. Sposób według zastrz. 1-4, znamienny tym, że przy sprzęganiu N-a-Boc-D-tryptofano(N'-indoloformylu), N-a-Boc-L-tyrozyny, hydratu N-a-Boc-L-seryny i N-a-Boc-tryptofano(N'-indoloformylu) stosuje się hydroksybenzotriazol (HOBT).
- 6. Sposób według zastrz. 1, w odniesieniu do syntezy na fazie stałej peptydu o wzorze (I) zdefiniowanym w zastrz. 1, znamienny tym, że tymczasowo zabezpiecza się wszelkie reszty tryptofanu z użyciem wrażliwej na działanie zasady grupy zabezpieczającej łańcuch boczny, przy czym tę grupę zabezpieczającą usuwa się podczas odszczepiania peptydu o wzorze (I) od stałego nośnika drogą reakcji z zasadą.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że jako grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp lub D-Trp stosuje się grupę acylową.
- 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że grupę zabezpieczającą łańcuch boczny Trp lub D-Trp usuwa się działając roztworem zawierającym amoniak, pierwszorzędową aminę lub drugorzędową aminę oraz metanol.
- 9. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że jako grupę zabezpieczającą łańcuch boczny stosuje się grupę formylową, a jako zasadę roztwór metanolowy zawierający amoniak.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IE20001079 | 2000-12-22 | ||
| PCT/IE2001/000159 WO2002051861A2 (en) | 2000-12-22 | 2001-12-19 | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL361993A1 PL361993A1 (pl) | 2004-10-18 |
| PL205949B1 true PL205949B1 (pl) | 2010-06-30 |
Family
ID=11042704
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL361993A PL205949B1 (pl) | 2000-12-22 | 2001-12-19 | Sposób wytwarzania peptydu |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7122628B2 (pl) |
| EP (1) | EP1343808B1 (pl) |
| JP (1) | JP4064817B2 (pl) |
| KR (1) | KR100591832B1 (pl) |
| CN (2) | CN1481389A (pl) |
| AT (1) | ATE339442T1 (pl) |
| AU (1) | AU2002222439C1 (pl) |
| BR (1) | BR0116447B1 (pl) |
| CA (1) | CA2432708C (pl) |
| CZ (1) | CZ299141B6 (pl) |
| DE (1) | DE60123115T2 (pl) |
| DK (1) | DK1343808T3 (pl) |
| ES (1) | ES2266104T3 (pl) |
| HU (2) | HU230601B1 (pl) |
| IE (1) | IES20011090A2 (pl) |
| IL (2) | IL156258A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA03005678A (pl) |
| NO (1) | NO325038B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ526990A (pl) |
| PL (1) | PL205949B1 (pl) |
| PT (1) | PT1343808E (pl) |
| RU (1) | RU2276156C2 (pl) |
| WO (1) | WO2002051861A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200304809B (pl) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7091311B2 (en) | 1996-06-07 | 2006-08-15 | Smithkline Beecham Corporation | Peptides and compounds that bind to a receptor |
| ES2781475T3 (es) | 2002-09-18 | 2020-09-02 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Métodos para aumentar la producción de células madre hematopoyéticas y plaquetas |
| SG131110A1 (en) * | 2003-08-28 | 2007-04-26 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Peptides and compounds that bind to thrombopoietin receptors |
| WO2007077112A1 (en) * | 2005-12-30 | 2007-07-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for the synthesis of arginine-containing peptides |
| WO2014047822A1 (zh) * | 2012-09-27 | 2014-04-03 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备布舍瑞林的方法 |
| US9969769B2 (en) | 2014-12-19 | 2018-05-15 | Cem Corporation | Coupling method for peptide synthesis at elevated temperatures |
| US10308677B2 (en) | 2014-12-19 | 2019-06-04 | Cem Corporation | Coupling method for peptide synthesis at elevated temperatures |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4211693A (en) | 1977-09-20 | 1980-07-08 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides with para-substituted phenylalanine |
| US4569927A (en) * | 1984-02-23 | 1986-02-11 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Antagonists IV |
| IL74827A (en) | 1984-05-21 | 1989-06-30 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides active as gnrh antagonists and pharmaceutical compositions containing them |
| IT1203600B (it) | 1985-12-06 | 1989-02-15 | Phidea Srl | Metodo per preparare il (d-trp6)-lhrh |
| GB8822502D0 (en) | 1988-09-24 | 1988-10-26 | Expansia Sa | New peptide synthesis method |
| US5175254A (en) * | 1988-09-24 | 1992-12-29 | Societe D'expansion Scientifque Expansia | Solid phase peptide synthesis using a polyacrylic support in aqueous solution |
| RU2043362C1 (ru) * | 1991-08-12 | 1995-09-10 | Синтекс (Ю-Эс-Эй) Инк. | Способ твердофазного синтеза пептидов |
| JPH05331188A (ja) | 1992-05-28 | 1993-12-14 | Nippon Chemiphar Co Ltd | トリペプチド、その製造方法及びエンドセリン拮抗剤 |
| RU2086561C1 (ru) * | 1995-09-25 | 1997-08-10 | Тихонов Александр Васильевич | Способ получения нонапептидэтиламида |
-
2001
- 2001-12-19 CZ CZ20031634A patent/CZ299141B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 US US10/451,486 patent/US7122628B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 CN CNA018210384A patent/CN1481389A/zh active Pending
- 2001-12-19 KR KR1020037008232A patent/KR100591832B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 WO PCT/IE2001/000159 patent/WO2002051861A2/en not_active Ceased
- 2001-12-19 DE DE60123115T patent/DE60123115T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 DK DK01272223T patent/DK1343808T3/da active
- 2001-12-19 CN CNA2007100047879A patent/CN101003563A/zh active Pending
- 2001-12-19 NZ NZ526990A patent/NZ526990A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 AT AT01272223T patent/ATE339442T1/de active
- 2001-12-19 PL PL361993A patent/PL205949B1/pl unknown
- 2001-12-19 JP JP2002552954A patent/JP4064817B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 RU RU2003122779/04A patent/RU2276156C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-12-19 HU HUP1400157A patent/HU230601B1/hu unknown
- 2001-12-19 IL IL15625801A patent/IL156258A0/xx active IP Right Grant
- 2001-12-19 EP EP01272223A patent/EP1343808B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 HU HU0302633A patent/HU229701B1/hu unknown
- 2001-12-19 MX MXPA03005678A patent/MXPA03005678A/es active IP Right Grant
- 2001-12-19 CA CA2432708A patent/CA2432708C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 BR BRPI0116447-3B1A patent/BR0116447B1/pt active IP Right Grant
- 2001-12-19 ES ES01272223T patent/ES2266104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-19 AU AU2002222439A patent/AU2002222439C1/en not_active Expired
- 2001-12-19 PT PT01272223T patent/PT1343808E/pt unknown
- 2001-12-20 IE IE20011090A patent/IES20011090A2/en not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-06-02 IL IL156258A patent/IL156258A/en unknown
- 2003-06-20 NO NO20032852A patent/NO325038B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-06-20 ZA ZA200304809A patent/ZA200304809B/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ZA200107753B (en) | Novel LHRH antagonists with improved solubility characteristics. | |
| Ruczyński et al. | Problem of aspartimide formation in Fmoc‐based solid‐phase peptide synthesis using Dmab group to protect side chain of aspartic acid | |
| PL205949B1 (pl) | Sposób wytwarzania peptydu | |
| JP5445456B2 (ja) | ジベンゾフルベンの除去方法 | |
| AU2002222439A1 (en) | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue | |
| US5212288A (en) | Temporary minimal protection synthesis of serine-containing polypeptides | |
| CN113614100A (zh) | 用于制备地加瑞克的方法 | |
| CN115181158B (zh) | Fmoc基团裂解方法 | |
| RU2043362C1 (ru) | Способ твердофазного синтеза пептидов | |
| HK1055749B (en) | Process for the synthesis of an lhrh peptide | |
| EP0410182A2 (en) | A new technique for rapid peptide coupling | |
| US4440676A (en) | Process for the production of a dipeptide, a polypeptide or a protein | |
| FI102538B (fi) | LH-RH-analogien synteesi väliaikaisella, pienimmällä mahdollisella suo jauksella | |
| AU2005202990A1 (en) | Process for the synthesis of a peptide having a tryptophan residue | |
| CN119823209A (zh) | 一种含马来酰亚胺酸的环肽合成方法 | |
| Di‐Segni et al. | β‐Sulfonamido gonadotropin‐releasing hormone analogs: synthesis and evaluation of several parent hormone properties | |
| Borin et al. | Studies on cytochrome c. Part IV. Synthesis of the protected dodecapeptide (sequence 45–56) of Baker's yeast iso‐1‐cytochrome c |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification |