PL212718B1

PL212718B1 - Sposób wytwarzania 6,4'-dihydroksyflawonu

Info

Publication number: PL212718B1
Application number: PL388267A
Authority: PL
Inventors: Edyta Kostrzewa-Suslow; Jadwiga Dmochowska-Gładysz
Original assignee: Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date: 2009-06-15
Filing date: 2009-06-15
Publication date: 2012-11-30
Also published as: PL388267A1

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 6,4'-dihydroksyflawonu, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku.

Związek ten może znaleźć zastosowanie jako składnik leków o działaniu hepatoochronnym.

Zainteresowanie aktywnością prozdrowotną bioflawonoidów jest podyktowane poszukiwaniem związków pochodzenia naturalnego, które mogą być stosowane w celu ochrony i regeneracji uszkodzonych komórek wątroby. Wątroba stanowi ważny, największy egzokrynny gruczoł człowieka. Zbudowana jest w około 80% z hepatocytów, które biorą udział w metabolizmie glukozy, lipidów, białek oraz odgrywają ważną rolę w unieczynnianiu szkodliwych metabolitów i ksenobiotyków.

Enzymy wytwarzane w wątrobie uczestniczą w procesach utleniania, redukcji, hydrolizy, syntezy z kwasem glukuronowym, siarkowym, octowym oraz z aminokwasami. (Sawicki W., Histologia, Wydawnictwa Lekarskie PZWL, Warszawa, 2003). Do najczęściej występujących schorzeń wątroby należą: zapalenia wątroby, cholestaza, marskość wątroby, stłuszczenie wątroby, polekowe uszkodzenie wątroby, alkoholowe uszkodzenie wątroby, choroby naczyń wątroby. Zmniejszenie skutków hepatotoksycznego działania leków przy użyciu farmaceutyków zawierających Iipofilne flawony (do których należy 6,4'-dihydroksyflawon), byłoby szczególnie wskazane w geriatrii, u pacjentów z różnego rodzaju schorzeniami wątroby, ponieważ zapobiegałoby konieczności przerywania terapii z powodu niekorzystnego wpływu leku na tkankę wątrobową (Tuszewski M., Kompendium gastroenterologii praktycznej dla lekarzy i studentów, Volumed, Wrocław, 1995).

Nie jest znane otrzymanie 6,4'-dihydroksyflawonu metodami chemicznymi.

Nie jest też znany sposób otrzymywania 6,4'-dihydroksyflawonu na drodze mikrobiologicznej demetylacji w pozycji C-6, z jednoczesną hydroksylacją w pozycji C-4' 6-metoksyflawonu.

Istota wynalazku polega na tym, że reakcję demetylacji w pozycji C-6 z jednoczesną hydroksylacją w pozycji C-4' prowadzi się za pomocą kultury szczepu Aspergills niger SBJ.

Korzystne jest, gdy reakcję prowadzi się wodną kulturą szczepu, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 288-308 K.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach grzyba Aspergills niger SBJ, nastę puje reakcja demetylacji w pozycji C-6 z jednoczesną hydroksylacją w pozycji C-4' 6-metoksyflawonu. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem przez ekstrakcję octanem etylu.

Będący przedmiotem wynalazku 6,4'-dihydroksyflawon, dzięki działaniu hepatoprotekcyjnemu, może hamować mikrosomalną peroksydację lipidów, co zapobiega uszkodzeniom błon komórkowych hepatocytów, przez utlenione formy lipidów i w efekcie powoduje lepszą integralność oraz mniejszą przepuszczalność błon. Istotny jest wpływ na utrzymanie na właściwym poziomie zredukowanego glutationu i aktywności enzymów antyoksydacyjnych oraz wspomagających obronę antyoksydacyjną komórki. Na przywracanie prawidłowej funkcji wątroby ma też wpływ hydroksylowanych flawonów (z grupami hydroksylowymi zwłaszcza w pozycji C-6) na enzymy metabolizujące ksenobiotyki (Μ. T. Arión, A. Ubeda, M. J. Alcaraz, Protective effects of phenolic compounds on CCl4-induced toxicity in isolated rat hepatocytes; Z. Naturforsch., 1992, vol. 47c, ss. 275-279).

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 6,4'-dihydroksyflawonu, jako jedynego produktu reakcji, z wydajnością 80%, w temperaturze pokojowej i pH bliskim obojętnego.

Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d. W kolbie Erlenmajera o pojemności 500 cm³, w której znajduje się 200 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 6 g glukozy i 2 g aminobaku, zaszczepia się Aspergills niger SBJ. Po dwóch dniach wzrostu mikroorganizmu dodaje się 10 mg 6-metoksyflawonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 0,5 cm³ tetrahydrofuranu (THF). Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 9 dni. Następnie uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 18 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie używając jako eluentu mieszaniny heksan-octan etylu, w stosunku 7:3. Na tej drodze otrzymuje się 8,0 mg 6,4'-dihydroksyflawonu (wydajność 80,0%).

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (DMSO-d6) δ: 6,77 (1H, s, H-3); 6,92 (2H, dd, J=8,8 Hz, J=2,9 Hz, H-3', H-5'); 7,22 (1H, dd, J=9,0 Hz, J=3,0 Hz, H-7); 7,30 (1H, d, J=3,0 Hz, H-5); 7,60 (1H, d, J=9,0 Hz, H-8); 7,92 (2H, dd, J=8,8 Hz, J=2,9 Hz, H-2', H-6'); 9,97 (1H, s, 6-OH); 10,27 (1H, s, 4'-OH).

¹³C NMR (DMSO-d6) δ: 103,8 (C-5); 107,5 (C-3); 116,0 (C-3', C-5'); 119,6 (C-8); 121,7 (C-1'); 122,7 (C-7); 124,3 (C-10); 128,4 (C-2', C-6'); 150,1 (C-6); 155,0 (C-9); 161,1 (C-4'); 162,9 (C-2); 178,0 (C-4).

IR (KBr, v_max, cm^-1): 3320, 1640, 1625, 1590, 1475, 627.

PL 212 718 B1

Claims

1. Sposób wytwarzania 6,4'-dihydroksyflawonu o wzorze 2, na drodze transformacji mikrobiologicznej, w którym jako substrat stosuje się 6-metoksyflawon, o wzorze 1, znamienny tym, że demetylację, w pozycji C-6 z jednoczesną hydroksylacją w pozycję C-4', prowadzi się za pomocą systemu enzymatycznego szczepu grzyba z gatunku Aspergills niger SBJ.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces prowadzi się wodną kulturą szczepu, przy ciągłym mieszaniu.

3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 288-308 K.