PL214224B1 - Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety - Google Patents

Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety

Info

Publication number
PL214224B1
PL214224B1 PL373084A PL37308402A PL214224B1 PL 214224 B1 PL214224 B1 PL 214224B1 PL 373084 A PL373084 A PL 373084A PL 37308402 A PL37308402 A PL 37308402A PL 214224 B1 PL214224 B1 PL 214224B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
plasma
concentrate
animals
globulin
blood
Prior art date
Application number
PL373084A
Other languages
English (en)
Other versions
PL373084A1 (pl
Inventor
Joy M. Campbell
Ronald E. Strohbehn
Eric M. Weaver
Barton S. Borg
Louis E. Russell
Pozo Francisco Javier Polo
John D. Arthington
James D. Quigley Iii
Original Assignee
Lauridsen Group
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US09/973,283 external-priority patent/US20030103962A1/en
Application filed by Lauridsen Group filed Critical Lauridsen Group
Publication of PL373084A1 publication Critical patent/PL373084A1/pl
Publication of PL214224B1 publication Critical patent/PL214224B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A23K10/24—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/20—Milk; Whey; Colostrum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/02—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from eggs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/04—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from milk
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)

Description

(12) OPIS PATENTOWY (21) Numer zgłoszenia: 373084 (19) PL (11) 214224 (13) B1 (22) Data zgłoszenia: 29.01.2002 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
29.01.2002, PCT/US02/002752 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
10.10.2002, WO02/078741 (51) Int.Cl.
A61K 39/395 (2006.01) A61P 37/00 (2006.01) C07K 16/06 (2006.01)
Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety (73) Uprawniony z patentu:
THE LAURIDSEN GROUP, INCORPORATED, Ankeny, US (30) Pierwszeństwo:
30.01.2001, US, 60/264,987 16.04.2001, US, 60/284,067 09.10.2001, US, 09/973,283 (43) Zgłoszenie ogłoszono:
08.08.2005 BUP 16/05 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
31.07.2013 WUP 07/13 (72) Twórca(y) wynalazku:
JOY M. CAMPBELL, Ames, US RONALD E. STROHBEHN, Nevada, US ERIC M. WEAVER, Story City, US BARTON S. BORG, Ames, US LOUIS E. RUSSELL, Johnston, US
FRANCISCO JAVIER POLO POZO,
Barbera del Valles, ES
JOHN D. ARTHINGTON, Punta Gorda, US JAMES D. III QUIGLEY, Ames, US (74) Pełnomocnik:
rzecz. pat. Aleksandra Twardowska
PL 214 224 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest doustna forma koncentratu nie-hiperimmunizowanych niespecyficznych immunoglobulin oraz suplement diety.
Podstawowym źródłem pożywienia dla organizmu jest krew, która składa się z wysoko funkcjonalnych białek w skład których wchodzą immunoglobulina, albumina, fibrynogen i hemoglobina. Immunoglobuliny są produkowane przez dojrzałe komórki B (komórki osocza) i stanowią pięć różnych immunoglobulin określanych jako klasy: M, D, E, A i G. IgG jest główną klasą immunoglobulin we krwi. Dożylne zastosowanie związków immunoglobulin jest od dawna stosowane jako próba regulowania czy wspomagania układu immunologicznego. Większość danych dotyczących wpływu dożylnych IgG na układ immunologiczny sugeruje, że frakcja (Fe) molekuły odgrywa funkcję regulatorową. Właściwości specyficznie wiązanego antygenu do poszczególnej molekuły IgG są nadawane przez trójwymiarową przestrzeń utworzoną przez uwarunkowane dziedziczne (wrodzone) sekwencje aminokwasów w regionach zmiennych dwóch lekkich i dwóch ciężkich łańcuchach molekuły.
Region stały może być oddzielony od regionu zmiennego jeżeli nienaruszona molekuła jest rozszczepiona przez enzym proteolityczny taki jak papaina. Takie traktowanie prowadzi do otrzymania dwóch fragmentów ze specyficznością przeciwciał (fragmenty Fab) i jednego względnie stałego fragmentu (Fe). Liczne komórki w organizmie mają różne receptory błonowe dla fragmentu Fe odpowiedniej molekuły IgG (Fcr). Chociaż niektóre receptory Fcr wiążą wolne IgG, większość wiąże się bardziej efektywnie jeżeli antygen jest związany z molekułą przeciwciała. W rezultacie przyłączenia się antygenu następuje zmiana w kształcie fragmentu Fe, co ułatwia wiązanie się do receptora. Kompleksowa zależność sygnałów wprowadza równowagę i odpowiedniość odpowiedzi immunologicznej wywołanej w czasie odpowiedzi na dany antygen. Odpowiedzi antygenowo specyficzne są wzbudzane wtedy gdy specjalistyczne komórki prezentujące antygen wprowadzają antygen, tworząc kompleks z molekułami głównego kompleksu zgodności tkankowej i receptorami specyficznie wspomagających T-komórek zdolnych do wzbudzenia rozpoznania tego kompleksu. Okazało się, że IgG uczestniczy w regulowaniu zarówno alergicznych jak i autoimmunologicznych reakcji. Dożylna immunoglobulina do manipulacji immunologicznych była proponowana od dłuższego czasu lecz otrzymywano różne wyniki w leczeniu stanów chorobowych. Szczegółowy przegląd zastosowania dożylnej immunoglobuliny jako leku terapeutycznego do manipulowania układu immunologicznego zostało opisane w literaturze: Vol. 326, No. 2 strony 107-116, New England Journal of Medicine Dwyer, John M.,co przedstawiono tu jako referencje.
Obecnie jest to kontynuacja usiłowań i potrzeb w dziedzinie udoskonalania kompozycji i sposobów immunologicznej modulacji zwierząt. Odpowiednia immunomodulacja jest ważna, ponieważ wzmaga odpowiedź na patogeny, szczepionki, zwiększa przyrost wagi i polepsza efektywność żywienia, zwiększa przeżycie w wyniku wystąpienia choroby, polepsza zdrowie i wpływa na leczenie stanów chorobowych związanych z zaburzeniami czynności immunologicznej.
Celem obecnego wynalazku jest przedstawienie sposobów i kompozycji farmaceutycznych do leczenia zwierząt ze stanami chorobowymi związanymi z zaburzeniami immunologicznymi.
Innym celem wynalazku jest przedstawienie sposobów i kompozycji do immunomodulowania zwierząt w tym ludzi w celu uzyskania optymalnej odpowiedzi na antygeny przedstawione w protokole szczepionki.
Jeszcze innym celem wynalazku jest przedstawienie sposobów i kompozycji do immunomodulowania zwierząt w tym ludzi w celu uzyskania optymalnej odpowiedzi układu immunologicznego po wystąpieniu choroby.
Kolejnym celem wynalazku jest uzyskanie wzrostu przyrostu wagi, polepszenie ogólnego stanu zdrowia i polepszenie efektywności żywienia zwierząt poprzez odpowiednie modulowanie układu immunologicznego omawianych zwierząt.
Jeszcze innym celem wynalazku jest wprowadzenie nowych kompozycji farmaceutycznych zawierających oczyszczone osocze, komponenty lub ich pochodne, które mogą być podawane doustnie w celu wytworzenia odpowiedzi na surowicze IgG czy TNF-α.
Te i inne cele wynalazku zostaną ujawnione w następującym szczegółowym opisie wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest doustna forma koncentratu nie-hiperimmunizowanych niespecyficznych immunoglobulin pochodzących z krwi zwierząt, poza człowiekiem, do zastosowania w leczeniu prowokowanej cholery drobiu u drobiu. Korzystnie, gdy koncentrat jest dostarczany wraz z podawaną wodą.
PL 214 224 B1
Korzystnie, gdy podawanie poprzez wodę rozpoczyna się u jednodniowych zwierząt lub po prowokacji cholery drobiu. Korzystnie, gdy krew pochodzi od świni, bydła, od drobiu, jest owcza, końska lub kozia.
Korzystnie, gdy prowokowana cholera drobiu jest wywołana protokołem szczepienia.
Korzystnie, gdy szczepionkę stanowi szczepionka Pasteurella. Korzystnie, gdy koncentrat jest podawany przed szczepieniem. Korzystnie, gdy koncentrat jest podawany równolegle ze szczepieniem.
Korzystnie, gdy koncentrat jest podawany bezpośrednio po szczepieniu.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest suplement diety charakteryzujący się tym, że zawiera doustny koncentrat nie-hiperimmunizowanych niespecyficznych immunoglobulin pochodzących z krwi zwierząt, poza człowiekiem, jak określono powyżej.
Korzystnie, gdy stężenie podawanego koncentratu jest w zakresie około 0,325% - 1,3% osocza w wodzie.
Korzystnie, gdy koncentrat ten jest otrzymywany sposobem, który obejmuje:
(i) otrzymywanie osocza, (ii) uwapnienie osocza, (iii) odwirowanie osocza do usunięcia fibryny, (iv) odfiltrowanie osocza, (V) precypitację soli oraz (vi) odwirowanie.
Zgodnie z wynalazkiem ujawniono oczyszczone i wyizolowane z surowicy komponenty i ich pochodne, które są użyteczne w kompozycjach farmaceutycznych do immunologicznego modulowania zwierząt w tym ludzi. Według wynalazku osoczowe kompozycje zawierające immunoglobulinę, gdy podawane są doustnie, regulują lub obniżają niespecyficzną odpowiedź immunologiczną oraz wzbudzają obniżenie i regulowanie poziomów surowiczego IgG i poziomów TNF-α relatywnie do zwierząt nie karmionych doustnie immunoglobuliną czy frakcjami osocza. Doustne podanie kompozycji osocza zawierającego immunoglobulinę działa na ogólny stan immunologiczny zwierząt eksponowanych na antygen, szczepienia zgodne z protokołami i na leczenie stanów chorobowych związanych z zaburzeniami immunologicznymi.
Niespodziewanie wykazano, że doustne podanie białka osocza może wzbudzać zmiany w immunoglobulinie surowicy i TNF-α, jak również i inne nie-specyficzne odpowiedzi immunologiczne. Jest to nieoczekiwane, ponieważ tradycyjnie myślano, że białka osocza takie jak immunoglobuliny muszą być wprowadzane dożylnie aby mogły oddziaływać na krążące IgG, TNF-α czy inne składniki niespecyficzne immunologicznie. Natomiast, zgłaszający wykazali, że doustnie podana globulina ma zdolność wpływania na poziomy surowiczego IgG czy TNF-α. Oprócz tego ten efekt może być obserwowany co najmniej 14 dni. To ogromnie upraszcza zastosowanie immunomodulujących kompozycji takich jak immunoglobulina czy jej kompozycje, które zgodnie z wynalazkiem mogą być po prostu dodane do zestawu pokarmowego czy nawet do wody, w celu modulacji szczepienia, modulacji wywołanej choroby, czy leczenia zwierząt w stanach chorobowych z zaburzeniami immunologicznymi.
Zgodnie z wynalazkiem wykazano, że modulacja surowiczym IgG i TNF-α wpływa na odpowiedź układu immunologicznego do stymulowania szczepienia zgodnie z protokołami oraz na zaburzenia związane z nieprawidłowościami immunologicznymi. Modulowanie surowiczym IgG i TNF-α zgodnie z wynalazkiem pozwala układowi immunologicznemu zwierząt do bardziej efektywnej odpowiedzi na wywołaną chorobę poprzez znaczne wzmożenie odpowiedzi organizmu w istniejącym stanie choroby lub prezentację antygenu. Ponadto, tak wywołana regulacja immunologiczna i osiągana wydajność, jako bio-energetyczny koszt związany z podwyższeniem funkcji immunologicznej wymaga znacznej ilości energii i środków odżywczych, które pochodzą z takich procesów jak wzrost komórkowy i przyrost wagi. Modulacja układu immunologicznego pozwala energii i środkom odżywczym być użytym do innych funkcji produkcyjnych takich jak wzrost czy wydzielanie mleka. Patrz, Buttgerut i wsp. „Bioenergetics of Immune Functions: Fundamental and Therapeutic Aspects”, Immunology Today, April 2000, Vol. 21 no. 4, strony 192-199.
Ponadto wykazano, że po doustnym spożyciu fragment Fe kompozycji globuliny jest zasadniczy w komunikowaniu i/lub następującej modulacji układowego surowiczego IgG. Jest to unikalne z tego względu, że fragment molekuły nie-specyficzny immunologicznie po doustnym podaniu moduluje układowe surowicze IgG, bez podania dożylnego tak jak to opisywano poprzednio (Dwyer, 1992).
Specyficzne frakcje przeciwciał wytwarzają mniejszą odpowiedź bez trzeciorzędowej struktury Fe.
PL 214 224 B1
Ponadto udział globulin w nietkniętej postaci daje lepsze wyniki niż gdy ciężkie i lekkie łańcuchy są od siebie oddzielone.
Poniżej przedstawiono opis figur na rysunku:
Fig. 1 przedstawia wykres efektu doustnego podania białek osocza na produkcję przeciwciał po pierwszym i drugim szczepieniu rotavirusem.
Fig. 2 przedstawia wykres efektu doustnego podania białek osocza na produkcję przeciwciał po pierwszym i drugim szczepieniu PRRS.
Fig. 3A i 3B przedstawiają wykresy wagi ciała po podaniu wody i podaniu osocza w odpowiednich grupach po wywołaniu choroby układu oddechowego.
Fig. 4 przedstawia wykres przedstawiający procent indyków pozostałych po wywołaniu choroby układu oddechowego.
Fig. 5 przedstawia wykres przedstawiający procent indyków pozostałych przed wywołaniem choroby układu oddechowego.
Fig. 6 przedstawia wykres przedstawiający efekt supresorowy doustnego podania białek osocza i frakcji na produkcję TNF-α.
Poniżej przedstawiono szczegółowy opis wynalazku
Zgodnie z wynalazkiem, przedstawiono kompozycje farmaceutyczne zawierające oczyszczone składniki i zatężone z osocza zwierzęcego, przydatne w sposobach według wynalazku.
Zgodnie z wynalazkiem gamma-globulina izolowana ze źródeł zwierzęcych takich jak surowica, osocze, jaja czy mleko jest podawana doustnie w połączeniu ze szczepieniem według protokołów lub do leczenia różnych stanów chorobowych zaburzeń immunologicznych poprzez modulowanie stymulacji układu immunologicznego. Całkowicie niespodziewanie odkryto, że doustne podanie tej kompozycji wywołało obniżenie poziomów surowiczego IgG i TNF-α w porównaniu gdy nie podano kompozycji farmaceutycznej. Rozpoczynając od stanu mniejszej stymulacji, układ immunologiczny był zdolny do wywołania bardziej agresywnej odpowiedzi w zależności od dawki. Co więcej, stany chorobowe związane ze zwiększeniem poziomów IgG i/lub TNF-α ulegają polepszeniu. W odniesieniu do kompozycji osocza według wynalazku, stosowane będą następujące określenia „osocze”, „globulina”, „gamma-globulina” i „immunoglobulina”. Powyższe określenia mają na celu ujawnienie kompozycji osocza lub jej komponentów lub oczyszczonych frakcji pochodzenia zwierzęcego z krwi, jaj czy mleka, które zawierają fragment Fe w cząsteczce immunoglobuliny. Obejmują one również immunoglobuliny transgenicznie rekombionowane oczyszczone z transgenicznych bakterii, roślin czy zwierząt. Mogą być one zastosowane po suszeniu-rozpryskowym osocza, lub w postaci globuliny po jego dodatkowym oczyszczeniu lub jeżeli są osiągalne z innego dostępnego źródła globulin surowiczych. Jednym z takich źródeł oczyszczonej globuliny jest NutrGammax tm czy ImmunoLin Tm produkowane przez Proliant Inc. Globuliny mogą być oczyszczane zgodnie z jakąkolwiek metodą dostępną w tej dziedzinie, włącznie z tymi opisanymi przez Akita E .M. i S. Nakai, 1993. Porównanie czterech metod oczyszczania do produkcji immunoglobuliny z jaj złożonych przez kury immunizowane szczepem E.coli pochodzenia jelitowego. Journal of Immunological Methods 160: 207-214; Steinbuch M i R. Audran, 1969. Izoloacja IgG z surowic ssaków z dodatkiem kwasu kaprylowego. Archives of Biochemistry and Biophysics 134:279-284; Lee, Y., T.Aishima, S. Nakai, i J. S. Sim. 1987. Optymalizacja selektywnego frakcjonowania białek osocza z krwi wołu przy użyciu glikolu polietylenowego. Journal of Agricultural and Food Chemistry 35: 958-962; Poison, A., G. M. Potgieter, J. F. Langier, G. E. F. Mears, and F. J. Toubert. 1964, Biochem. Biophys. Acta. 82:463-475.
Osocze zwierzęce, z którego może być izolowana immunoglobulina to osocze świńskie, wołowe, z drobiu, końskie lub kozie. Dodatkowo zgłaszający ujawnili, że źródła pokrewnych gamma globulin dają także zamierzony efekt wynalazku.
Koncentraty produktu mogą być uzyskane poprzez suszenie rozpryskowe, liofilizację lub inne metody suszenia lub zatężania i koncentraty mogą być stosowane w postaci płynnej lub zamrożonej. Aktywny składnik może być zamknięty w mikrokapsułkach, zabezpieczony i stabilizowany od wysokiej temperatury, utleniaczy, wilgotności wpływającej na pH, etc. Farmaceutyczne kompozycje według wynalazku mogą być w postaci tabletek, kapsułek, ampułek, do stosowania doustnego, granulowanego proszku, kremu, zarówno jako pojedynczy składnik lub w powiązaniu z innymi rozczynnikami aktywnymi komponentami, lub nawet jako dodatek do pożywienia.
Jednym sposobem uzyskania koncentratu kompozycji gamma-globuliny według wynalazku jest jak następuje, mimo że globulina może być dostarczona jako składnik osocza.
PL 214 224 B1
Koncentrat immunoglobuliny pochodzi z krwi zwierząt. Źródłem krwi może być jakiekolwiek zwierzę, które ma krew zawierającą osocze i immunoglobuliny. Dla wygody, korzystna jest krew z wołu, świni, drobiu spożywającego rośliny. Do całej krwi dodawany jest antykoagulant i następnie krew jest wirowana, w celu oddzielenia osocza. W tym celu może być użyty jakikolwiek antykoagulant, włącznie z cytrynianem sodu i heparyną. Znawcy dziedziny mogą łatwo wybrać takie antykoagulanty. Następnie do osocza dodawane jest wapno, aby zapobiec utworzeniu się skrzepu, tj. przekształcenia się fibrynogenu w fibrynę; jednakże inne metody są także dopuszczalne. Ta mieszanina jest następnie wirowana w celu usunięcia fragmentów fibryny.
Pierwszy raz fibryna jest usuwana z osocza w wyniku otrzymania surowicy, która może być użyta jako główne źródło Ig. Alternatywnie, można także inaktywować tę część mechanizmu krzepnięcia przy użyciu różnych antykoagulantów.
Odwłóknione osocze jest następnie traktowane pewną ilością mieszaniny soli czy polimeru wystarczającego do precypitacji z osocza albuminy czy frakcji globulin. Przykłady mieszanin fosforanowych, które mogą być użyte do tego celu to polifosforany, włącznie z metaheksafosforanem sodowym i polifosforan potasu. Globulina może być także izolowana poprzez dodanie glikolu polietylenowego czy siarczanu amonu.
Następnie poprzez dodanie mieszaniny fosforanu, obniżane jest pH roztworu osocza co stabilizuje precypitację albuminy. pH nie powinno być niższe niż 3,5, bo w przeciwnym razie białka osocza ulegną zniszczeniu. Do tego celu może być użyty każdy rodzaj kwasu, w takiej ilości jaka jest potrzebna dla roztworu osocza. Znawcy dziedziny łatwo wybiorą takie kwasy. Przykładami odpowiednich kwasów są HCl, kwas octowy, H2SO4, kwas cytrynowy i H2PO4. Kwas jest dodawany w ilości niezbędnej do obniżenia pH osocza do określonego poziomu. Generalnie, ilość ta będzie rzędu w proporcji od około 1:4 do 1:2 kwasu do osocza. Osocze jest następnie wirowane w celu oddzielenia frakcji globulin od frakcji albumin.
Następnym etapem w tym procesie jest podniesienie pH frakcji globulin z zasadowego, do momentu, w którym nie będzie powodowało korozji urządzenia do separowania. Odpowiednimi do tego celu zasadami są NaOH, KOH i inne zasady alkaliczne. Takie zasady są łatwe do dobrania przez znawców dziedziny. pH frakcji globulin jest podnoszone do takiego aby było rzędu nie-korozyjnego, a więc powinno być głównie pomiędzy 5,0 i 9,0. Frakcje immunoglobulin zaleca się przepuścić przez mikrofiltry w celu usunięcia obecnych tam bakterii.
Ostateczny koncentrat immunoglobulin może być opcjonalnie suszony rozpryskowo na proszek. Proszek ułatwia pakowanie, a produkt pozostaje stabilny przez dłuższy okres czasu aniżeli surowy koncentrat globulin w formie płynu czy mrożony. Proszek koncentratu immunoglobuliny zawiera w przybliżeniu od 35-50% IgG.
Oprócz podawania z konwencjonalnymi nośnikami, aktywne składniki mogą być podawane różnymi specjalistycznymi technikami dostarczania leków, które są znane znawcom dziedziny. Następujące przykłady są przedstawione tylko w celu ilustracji i nie stanowią ograniczeń dla wynalazku.
Znawcy w dziedzinie medycyny łatwo ocenią, że dawki i zestawienia immunoglobulin będą się zmieniać w zależności od wieku, zdrowia, płci, wysokości i wagi pacjenta aniżeli od zastosowania, etc. Te parametry można zbadać dla każdego systemu przez dobrze-ustalone procedury i analizy tj., w fazie I, II i III doświadczeń klinicznych.
Do takiego zastosowania koncentrat globulin może być połączony z farmaceutycznie uznanymi nośnikami takimi jak odpowiednie ciekłe nośniki czy rozczynniki i z dowolnymi środkami pomocniczymi czy dodatkami. Ciekłe nośniki i rozczynniki są typowe i dostępne w handlu. Przykładem tego są woda destylowana, sól fizjologiczna, wodne roztwory dekstrozy i tym podobne.
Generalnie, oprócz aktywnych związków, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą zawierać odpowiednie rozczynniki i środki pomocnicze, które ułatwiają przetwarzanie związków aktywnych do preparatów, które mogą być użyte farmaceutycznie. Formy do podania doustnego obejmują tabletki, drażetki i kapsułki.
Farmaceutyczne preparaty według wynalazku są produkowane w sposób, który jest dobrze znany specjalistom z tego zakresu. Na przykład farmaceutyczne preparaty mogą być przygotowywane przy użyciu typowych procesów mieszania, granulowania, robienia-drażetek, rozpuszczania, liofilizowania. Użyte procesy będą ostatecznie zależały od właściwości fizycznych użytych aktywnych składników.
Odpowiednimi rozczynnikami są zwłaszcza, wypełniacze takie jak cukry, na przykład laktoza lub cukier trzcinowy, mannitol lub sorbitol, preparaty celulozy i/lub fosforany wapnia, na przykład fosforan (tri)wapnia lub wodorofosforan wapnia, jak również spoiwa takie jak krochmal, pasta, przy użyciu na
PL 214 224 B1 przykład, krochmalu kukurydzianego, krochmalu z pszenicy, krochmalu ryżowego, krochmalu ziemniaczanego, żelatyny, gumy trakantowej, metyloceluloza, hydroksypropylometylocelulozy, karboksymetylocelulozy sodowej i/lub poliwinylo pirolidonu. W razie potrzeby można dodać preparaty rozdrabniające, takie jak powyżej wspomniane krochmale jak również krochmal karboksymetylowy, pochodna poliwinylopirolidonu, agar czy kwas alginowy lub jego sól taka jak alginian sodu. Środkami pomocniczymi są środki regulujące płynność i smary, na przykład krzemionka, talk, kwas stearynowy i jego sole, stearynian magnezu czy stearynian wapnia i/lub glikol polietylenowy. Rdzenie drażetek mogą być zaopatrzone w odpowiednią powłokę która, jeżeli sobie życzymy może być oporna na soki żołądkowe.
W tym celu można stosować stężone roztwory cukru, które mogą ewentualnie zawierać gumę arabską, talk, poliwinylopirolidon, glikol polietylenowy i/lub dwutlenek tytanu, roztwory lakieru i odpowiednie organiczne rozpuszczalniki czy mieszaniny rozpuszczalników. Do produkcji otoczek opornych na kwasy żołądkowe, do otoczki tabletek drażetek można dodać roztwory odpowiednich preparatów celulozy takich jak ftalan acetylocelulozy lub ftalan hydroksypropylometylocelulozy, barwniki i pigmenty, na przykład do identyfikacji lub w celu charakterystyki różnego składu dawek związku.
Inne farmaceutyczne preparaty, które mogą być użyte doustnie obejmują przylgowo-pasowane kapsułki wykonane z żelatyny, jak również miękkie, zamknięte kapsułki wykonane z żelatyny i zmiękczacza takiego jak glicerol czy sorbit. Przylgowo-pasowane kapsułki mogą zawierać aktywne związki w formie granuli, które mogą być mieszane z wypełniaczami takimi jak laktoza, spoiwami takimi jak krochmale, i/lub smarami takimi jak talk czy stearynian magnezu i, dowolnymi środkami stabilizującymi. W miękkich kapsułkach, aktywne związki są przeważnie rozpuszczane lub zawieszane w odpowiednich płynach takich jak tłuste oleje, roztwór parafiny, czy ciekłe glikole polietylenowe. Ponadto mogą być dodane związki stabilizujące.
Dawki doustne globuliny czy białka osocza według wynalazku powodują modulowanie pierwotnej i wtórnej odpowiedzi immunologicznej w odpowiedzi na szczepienia rotavirusem i PRRS pomagając w modulowaniu IgG i/lub TNF-α i układu immunologicznego. Ponadto, doustne podanie białek osocza powoduje modulowanie (wzmocnienie) układu immunologicznego zarówno u zdrowych zwierząt jak i po wywołaniu choroby układu oddechowego. Oczyszczone składniki Ig polepszają nie tylko efektywność karmienia i przeżycie po wywołaniu choroby, lecz także wzmacniają układ immunologiczny zdrowych zwierząt do lepszej walki(zmniejszają działanie) w przyszłej zmianie immunologicznej.
Sposoby według wynalazku włączają także zapobieganie i leczenie chorób przewodu pokarmowego i infekcji, zespołu złego wchłaniania pokarmowego, zapalenia jelit, chorób układu oddechowego i polepszają stan autoimmunologiczny oraz redukują ogólnoustrojowe reakcje zapalne u ludzi i zwierząt. Kompozycje leku, żywność i preparaty dietetyczne powinny prawidłowo wzmocnić układ immunologiczny u ludzi i zwierząt w chorobach związanych ze wzrostem IgG, chorobach związanych ze wzrostem TNF-α, lub w innych chorobach związanych z zaburzeniem regulacji immunologicznej, dla podtrzymania i leczenia procesów wchłaniania pokarmowego u ludzi i zwierząt, do leczenia klinicznych objawów związanych z niedożywieniem i dla zapobiegania i leczenia chorób układu oddechowego u ludzi i zwierząt. Do chorób złego wchłaniania pokarmowego należy włączyć zespół jelita małego, nie-leczącą biegunkę pochodzenia autoimmunologicznego, białaczkę, stan po wycięciu żołądka, biegunkę tłuszczową, nowotwór trzustki, rozległe resekcje trzustki, niewydolność krezki naczyniowej, do stanów związanych z niedożywieniem powinno się włączyć wrzodziejące zapalenie okrężnicy, chorobę Crohna, wyniszczenie nowotworowe związane z chronicznym zapaleniem jelit po leczeniu chemio czy radioterapią, infekcyjne patologie związane ze złym wchłanianiem pokarmu takie jak AIDS, zwłóknienie przewodu pęcherzykowego, wewnątrzskórna przetoka o małym obciążeniu, dziecięca niewydolność nerek.
Zastosowanie dietetycznego dodatku wraz z wodą powinno wzmocnić układ immunologiczny u ludzi i zwierząt w przypadku wystąpienia choroby układu oddechowego. Przykłady takich chorób włączają lecz nie ograniczają się tylko do ptasiej grypy, chronicznej choroby układu oddechowego, zapalenia zatok, zapalenia płuc, cholery ptactwa i zapalenia błony maziowej.
Zastosowania kliniczne kompozycji powinny dotyczyć typowych stanów chorobowych związanych z zaburzeniami immunologicznymi, szczególnie stanów chorobowych związanych z przewlekłą stymulacją immunologiczną. Przykłady takich chorób włączają, ale nie ograniczają się do choroby osłabienia mięśni, stwardnienia rozsianego, tocznia rumieniowatego, zapalenia wielomięśniowego, zespołu Sjogrena, reumatoidalnego zapalenia stawów, insulino-zależnej cukrzycy, pęcherzycy pęcherzowej, tarczyco-zależnej choroby oczu, mocznicy, zespołu Kawasaki, zespołu chronicznego zmęczenia,
PL 214 224 B1 astmy, choroby Crohna, choroby przeszczep-przeciw-gospodarzowi, ludzkiego wirusa niedoboru odpornościowego, małopłytkowości, neutropenii i hemofilii.
Doustne podanie IgG, TNF-α czy innych aktywnych składników osocza do modulowania niespecyficznej odporności ma ogromne korzyści w porównaniu z pozajelitowym zastosowaniem. Wiadome jest ryzyko związane z dożylnym podaniem takie jak: reakcje alergiczne, wzrost ryzyka przeniesienia choroby poprzez krew takiej jak HIV, zapalenie wątroby, wymóg tego samego źródła gatunku, koszty zastosowania, natomiast korzyściami doustnego podania IgG jest większa neutralizacja endotoksyn oraz „podstawowa” stymulacja układu immunologicznego; możliwość użycia obcogatunkowego IgG. Zgłaszający według wynalazku przedstawili nie-inwazyjny sposób modulowania odpowiedzi immunologicznej. Może być on użyty do leczenia chorób autoimmunologicznych (tj. odczyn Rh, toczeń, reumatoidalne zapalenie stawów, etc.) i w innych stanach gdzie immunomodulacja, immunosupresja czy immunoregulacja jest konieczna do wyleczenia (transplantacje organów, zaburzenia przewlekle immunostymulowane).
Inne wykonanie wynalazku, które może być użyte to doustna immunoterapia (użycie przeciwciał) jako alternatywny sposób do IVIG. Przed dokonaniem wynalazku przez zgłaszającego, nie można było produkować dużej ilości przeciwciał wymaganych do długotrwałego leczenia, ponieważ IVIG, wymagały użycia ludzkiej IVIG. Przy doustnym zastosowaniu przeciwciała, można używać różne źródła gatunkowe bez obawy reakcji alergicznych. Taki sposób umożliwia użycie mleka, siary, surowicy, osocza, jaj, etc. ze świń, owcy, kozy, bydła, etc. jako środków do produkcji relatywnie dużych ilości immunoglobulin, które będą wymagane do zastosowanego leczenia.
Doustne zastosowanie przeciwciał może:
1/ Modulować odpowiedź immunologiczną na ekspozycję do analogicznego/podobnego antygenu. Dane uzyskane z immunizacji świń rotavirusem czy PRRS wykazały, że doustne zastosowanie immunoglobulin modyfikuje odpowiedź immunologiczną na antygen zastosowany domięśniowo. Występuje to poprzez działanie IgG na komórki immunologiczne zlokalizowane na drodze GI (głównie nabłonek jelit i tkanka Iimfatyczna). Zastosowane osocze zwierząt powinno zwykle zawierać przeciwciała zarówno do PRRS i rotavirusa. Poprzednie badania wykazały, że siara (matczyne przeciwciała) ma takie samo działanie gdy zostanie podana przed zamknięciem jelita. Zgłaszający wykazał, że przeciwciało może modulować odpowiedź immunologiczną zwierząt po zamknięciu jelita;
2/ Stężenia surowiczego IgG i TNF-α są niższe przy doustnym podaniu białek osocza. Ten efekt jest korzystny w zapobieganiu czy leczeniu wielu różnych chorób (tj. Crohna, IBD, IBS, posocznica, etc.) poprzez immunosupresyjne działanie specyficznych przeciwciał. Ten efekt nie zależy od specyficzności przeciwciał. Nie powołując się na inne teorie postulujemy, że białka osocza mogą neutralizować znaczne ilości endotoksyn w świetle jelita. W niedawno odstawionej od karmienia od matki świni, funkcja bariery jelitowej jest upośledzona i będzie „nieszczelna” dla endotoksyn. Endotoksyna (LPS) jest jednym z najsilniejszych znanych związków immunostymulujących. Tak więc po odstawieniu od karmienia zwierzęcia, ten wynalazek może pomocniczo wzmagać u zwierząt odpowiedź na endotoksynę poprzez modulowanie układu immunologicznego zapobiegając nadstymulacji.
Droga podania jest ważna dla osiągnięcia różnych efektów. Pozajelitowe podanie wzmaga przepuszczalność jelit i jak wiadomo istotnie zwiększa prawdopodobieństwo zakażenia i endotoksemii w porównaniu z podaniem dojelitowym. Doustne zastosowanie immunoglobulin polepsza funkcję bariery jelitowej i redukuje absorpcję endotoksyn. Zmniejszona absorpcja endotoksyn będzie redukowała ilość endotoksyn związanych z osoczem, co zwiększa możliwości neutralizujące osocza w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi.
Ujawniono immunomodulację, zgodną z obserwacjami o działaniu IVIG przestawianymi w literaturze. Ponadto, zaobserwowano immunomodulujące działanie IgG, po doustnym podaniu IgG z różnych źródeł gatunkowych. Jest to bardzo ważne w medycynie u ludzi, szczególnie w warunkach autoimmunizacji (czy w przypadkach gdzie jest wymagana immunomodulacja).
Powyżej opisano wynalazek w odniesieniu do pewnych kompozycji, przedstawiono teorie skuteczności i podobne, jednakże dla znawcy dziedziny jest oczywiste, że wynalazek ten nie ogranicza się jedynie do przedstawionych wykonań lub mechanizmów i można wprowadzić do niego modyfikacje, jednakże bez odbiegania od jego zakresu i przesłania, jak zdefiniowano w zastrzeżeniach. Zamierzeniem wynalazku jest włączenie wszystkich oczywistych modyfikacji i odmian wynalazku, tak jak to przedstawiono w zastrzeżeniach. Zastrzeżenia patentowe z zamierzenia obejmują zastrzegane składniki i etapy w jakiejkolwiek kolejności, która skutecznie realizuje zamierzone cele, chyba że treść jednoznacznie wskazuje przeciwnie.
PL 214 224 B1
P r z y k ł a d I
Korzystny sposób produkcji koncentratu globuliny
Poniżej przedstawiono korzystny sposób produkcji koncentratu globuliny według wynalazku.
Osocze u
Uwapnienie osocza u
Wirowanie w celu usunięcia włóknika u
Filtrowanie u
Precypitacja soli u
Wirowanie u u
Frakcja bogata w globulinę odrzucić
P r z y k ł a d 2
Konieczność nienaruszenia cząsteczki globuliny Poprzednie badania wykazały że doustne spożycie osocza polepsza zachowania świń odstawionych od karmienia od matki (Coffey and Cromwell, 1995). Dane wykazały, że na zachowania świń wpłynęła duża masa cząsteczkowa frakcji obecnej w osoczu (Cain,1995; Owen et al.1995, 1996; Weaver et al., 1995). Na dużą masę cząsteczkową frakcji składa się głównie białko IgG. Białko immunoglobuliny G ma około 150,000 MW i składa się z dwóch łańcuchów polipeptydowych o ciężarze 50,000 MW, które są oznaczone jako łańcuchy ciężkie i dwóch łańcuchów o 25,000 MW, oznaczonych jako lekkie (Kuby,1997). Badania hydrolizy nienaruszonej cząsteczki IgG były przeprowadzane w laboratorium z enzymem pepsyną. Krótkie trawienie enzymem pepsyną doprowadzało do powstania fragmentu o ciężarze 100,000 MW złożonego z dwóch Fab-podobnych fragmentów (Fab=wiązanie antygenu). Fragment Fe nienaruszonej cząsteczki nie był odzyskiwany, gdyż był trawiony na wiele fragmentów (Kuby, 1997). Drugi typ procesu prowadzący do powstania koncentratu bogato-globulinowego to redukcja wiązań dwusiarczkowych. W rezultacie redukcji z cząsteczki globuliny powstają wolne nienaruszone ciężkie i lekkie łańcuchy.
W pierwszym przykładzie wynalazku przedstawiono ilościowe określenie wpływu doustnego spożycia różnych frakcji osocza i globulin osocza poddanego trawieniu pepsyną, na średni dzienny przyrost, średnie dzienne przyjmowane pożywienie, morfologię jelitową, parametry krwi i aktywność enzymów jelitowych u odstawionych od karmienia świń.
Materiał i Metody
Zwierzęta i diety. Sześćdziesiąt cztery indywidualnie opisanych świń średnio 6,85 kg wagi ciała i w 21 dni życia podzielono na cztery diety lecznicze w systemie losowo dobranych całkowitych bloków. Użyto dwa pokoje, każdy o 32 zagrodach. Pokoje dzienne, które zajmowały zwierzęta pochodzące z tego samego stada nie były uprzednio czyszczone, co miało za zadanie poddać zwierzęta testowi stymulacji pod wpływem środowiska. Świnie miały nieograniczony dostęp do wody i pożywienia.
Zastosowane diety przedstawiono w tabeli 1 zawierającej: 1/ kontrolę; 2/ 6% suszone-rozpryskowo osocze; 3/ 3,6% suszoną-rozpryskowo globulinę; 4/ 3,6% suszoną-rozpryskowo globulinę trawioną pepsyną. Diety składały się z mączki kukurydziano-sojowej na bazie serwatki, co zastępowało
PL 214 224 B1 posiłek rybny z ryby śledziowatej na osocze o jednakowej podstawie białkowej. Frakcje osocza zawierały odpowiednie dla osocza jednakowe białka podstawowe. Diety zawierały 1,60% lizyny, która tworzy doskonały profil aminokwasowy (Chung and Baker, 1992). Diety były granulowane w 130°F lub mniej i były spożywane od 0-14 dnia po-odstawieniu od karmienia.
Zbieranie danych. Wagi poszczególnych świń pobrano w dni 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 14 poodstawieniu od karmienia. Ocenę podawanego pożywienia i biegunkę zbierano codziennie od dnia 0 do 14 po-odstawieniu od karmienia. Krew pobierano w dniu 0, 7 i 14 po odstawieniu od karmienia. W celu dalszej analizy krew wirowano i surowicę zamrażano. W celu uzupełnienia badań (14 dzień) sześć dobranych losowo świń/traktowanych dietą zabijano w celu otrzymania próbek do pomiaru wysokości kosmków, głębokości krypt, aktywności enzymów jelitowych i wagi organów (jelita, wątroby, płuc, serca, śledziony, grasicy, nerek, żołądka i trzustki). Bezpośrednio po bezbolesnej śmierci otwarto wnękę ciała i lokalizowano połączenie krętnicze. Jelito małe usunięto i wolno odcięto od przylegającej krezki. Jeden metr od czaszki do połączenia krętniczego, usunięto 10 cm jelita i utrwalano w formalinie buforowanej fosforanem w celu pomiarów histologicznych. Z cięcia linii środkowej dwunastnicy zdrapano błonę śluzową, zważono i zamrożono do analizy enzymatycznej.
Histologia. Próbki dotyczące jelita czczego osadzano w parafinie i barwiono hematoksyliną i eozyną (H&E) i analizowano przy użyciu mikroskopu świetlnego do pomiaru głębokości krypt i wysokości kosmków. Zmierzono pięć obszarów do oceny głębokości krypt i wysokości kosmków u każdej świni.
Analiza enzymatyczna. Aktywność laktazy i maltazy mierzono na zeskrobanej błonie śluzowej zgodnie z Dahlqvist, 1964.
Analizy surowicy. Całkowitą ilość białka i albuminę analizowano przy użyciu Zestawów Diagnostycznych ROCHE w systemie COBAS MIRA. Surowicze IgG analizowano według Etzel i wsp. (1997).
Analiza statystyczna. Wyniki analizowano w systemie losowo dobranych całkowitych bloków. Świnie traktowano jednostkowo, a zagroda stanowiła jednostkę doświadczalną. Analizę wariancji przeprowadzano przy użyciu GLM procedury SAS (SAS/STAT Version 6,11 SAS Institute, Cary, NC). Model sumy kwadratów składał się na blok i leczenie, przy użyciu wagi początkowej jako kowariancji. Wyniki przedstawiono metodą średnich najmniejszych kwadratów.
Wyniki
Średni dzienny przyrost (ADG) i średnie dzienne przyjmowanie pożywienie (ADFI) przedstawiono w Tabeli 2. Nie stwierdzono różnic dla ADG i ADFI od dnia 0-6. Od dnia 0-14, osocze i globulina zwiększały się (P<0,05) ADG i ADFI w porównaniu do kontroli, podczas gdy wyniki leczenia globuliną trawioną pepsyną były pośrednie. Wagę organów zapisywano i wyrażano w g/kg wagi ciała (tabela 3). Nie odnotowano różnic w sercu, nerkach, wątrobie, płucach, jelicie małym, żołądku, grasicy czy śledzionie. Jednakże waga trzustki była zwiększona (P< 0,0 5) w przypadku globuliny i globuliny trawionej pepsyną w porównaniu do kontroli. Leczenie osoczem dało wyniki pośrednie. Parametry krwi przedstawiono w tabeli 4. W porównaniu z kontrolą, surowicze IgG, świń karmionych globuliną (dzień 14) było niższe (P<0,08) podczas gdy u karmionych osoczem i globuliną trawioną pepsyną było pośrednie. Nie odnotowano różnic (P>0,1)w całkowitej ilości białka. Albumina surowicy wzrosła (P<0,08) na 14 dzień przy leczeniu globuliną i osoczem, w porównaniu do kontroli, podczas gdy w grupie traktowanych globuliną trawioną pepsyną wartość ta była pośrednia. Aktywność enzymatyczną, morfologię jelita i ocenę kału przedstawiono w tabeli 5. Nie odnotowano różnic (P>0,1) w wysokości kosmków i głębokości krypt. Aktywność laktazy i maltazy wzrosła (P<0,07) w wyniku spożycia globuliny trawionej pepsyną w porównaniu do diety kontrolnej, podczas gdy w innych podawanych dietach odnotowano wyniki pośrednie. Ocena kału była obniżona (P<0,07); przedstawiając zatwardziały stolec, w wyniku dodania globulin trawionych pepsyną w porównaniu do kontroli, podczas gdy przy podaniu globuliny ocena kału i osocza była pośrednia.
T a b e l e
T a b e l a 1. Kompozycja diet doświadczalnych (jak podawano,%).a
Składniki Kontrola Osocze Globulina Globulina trawiona pepsyną
1 2 3 4 5
Kukurydza 42,932 43,012 42,962 42,957
47% SEM 23,000 23,000 23,000 23,000
PL 214 224 B1 cd. tabeli 1
1 2 3 4 5
Wysuszona 17,000 17,000 17,000 17,000
serwatka
Ryba 8,500 3,400 3,400
śledziowata
Mączka rybna
Osocze 6,000
Globulina 3,600
Globulina 3,600
trawiona
pepsyną
Olej sojowy 4,300 5,100 4,800 4,800
Laktoza 2,118 2,118 2,118 2,118
18,5%dwuwapń 0,400 1,700 1,150 1,150
Kamień wapienny 0,070 0,435 0,290 0,290
Tlenek cynku 0,400 0,400 0,400 0,400
Mecadox 0,250 0,250 0,250 0,250
Sól 0,250 0, 250 0,250 0,250
Przedmieszka 0,400 0,400 0,400 0,400
L-Lizyna-HCL 0,250 0,195 0,290 0,290
L-Treonina 0,090
DL-Metionina 0,040 0,140 0,090 0,095
aPrzygotowane diety zawierały 1,60% lizyny, 0,48% metioniny, 14% laktozy, 0,8% wapnia i 0,7% fosforu i były podawane od dnia 0-14 po- odstawieniu od karmienia.
T a b e l a 2. Efekt suszonego rozpryskowo osocza i frakcji osocza na średnie dzienne spożycie(kg/d).1
Traktowanie Kontrola Osocze Globulina Globulina trawiona pepsyną SEM
ADG, kg/d
D 0-6 0,037 0,094 0,080 0,073 0,029
D 0-14 0,169a 0,242b 0,234b 0,222ab 0,025
ADFI, kg/d
D 0-6 0,104 0,134 0,132 0,128 0,018
D 0-14 0,213a 0,216° 0,278b 0,254ab 0,S021
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 16 świń/traktowanie. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,10).
PL 214 224 B1
T a b e l a 3. Efekt suszonego rozpryskowo osocza i frakcji osocza na wagę narządów (g/kg wagi ciała)1
Wagi narządów, g/kg BW Kontrola Osocze Globulina Globulina trawiona pepsyna SEM
Jelito 44,21 50,65 50,34 44,71 3,43
Wątroba 32,34 31,20 30,23 32,27 1,42
Śledziona 1,74 1,83 1,81 2,06 0,16
Grasica 1,45 1,39 1,32 1,36 0,20
Serce 4,93 4,89 4,94 4,73 0,22
Płuca 11,26 11,28 12,14 11,95 1,03
Żołądek 6,96 7,06 6,61 6,84 0,32
Nerki 4,76 5,75 5,66 5,45 0,47
Trzustka 1,93a 2,20ab 2,42b 2,34b 0,11
1 Wartości są średnimi metody najmniej szych kwadratów z 6 świń/traktowanie. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,05).
T a b e l a 4. Efekt suszonego rozpryskowo osocza i frakcji osocza na parametry krwi.1,2
Kontrola Osocze Globulina Globulina trawiona pepsyną SEM
IgG, mg/ML
D0 4,84a 5,70b 4,83a 5,05ab 0,34
D7 4,98 4,71 4,66 4,96 0,17
D14 4,88 4,43 4,30 4,54 0,24
Całkowita ilość Białka, g\dL
D0 4,55 4,59 4,54 4,65 0,07
D7 4,39 4,37 4,35 4,47 0,08
D14 4,22 4,30 4,29 4,20 0,07
Albumina, g/dL
D0 3,03 3,02 3,11 3,09 0,06
D7 2,98 3,03 3,02 3,01 0,06
D14 2,61a 2,78b 2,80b 2,71ab 0,07
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 16 świń/traktowanie.
2 Dzień 0 jest używany jako kowariancja do analizy na D7 i D14. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,08).
T a b e l a 5. Efekt suszonego rozpryskowo osocza i frakcji osocza na aktywność enzymów, morfologię jelita i ocenę kału.1
Kontrola Osocze Globulina Globulina trawiona pepsyną SEM
1 2 3 4 5 6
Maltaza, μmol/mg prot/godz 7, 97a 11,08ab 10, 93ab 13, 30b 1,93
Laktaza, μmol/mg 1,14a 1,57ab 1,55ab 2,15b 0,31
prot/godz
PL 214 224 B1 cd. tabeli 5
1 2 3 4 5 6
Wysokość kosmków mikron 378,7 370,7 374,0 387,7 34,4
Głębokość krypt mikron 206,3 191,0 195,0 192,7 9,3
Ocena kału 5,12b 5,06b 4,19ab 2,88a 0,65
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 6 świń/traktowanie.
ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,07).
P r z y k ł a d 3
Ilość i wpływ diety zawierającej różne frakcje osocza Celem drugiego badania był wpływ ilości diety zawierającej różne frakcje osocza oraz efekt rozdzielonych ciężkich i lekkich łańcuchów IgG na średni dzienny przyrost wagi, średnie dzienne przyjmowane pożywienie, wagę organów i parametry krwi u odstawionych od karmienia świń.
Materiały i Metody
Zwierzęta i diety. Dziewięćdziesiąt sześć indywidualnie opisanych świń średnio 5,89 kg wagi ciała i w 21 dniu życia podzielono na cztery podawane diety w systemie losowo dobranych kompletnych bloków. Zwierzęta rozmieszczano w określonym czasie pomiędzy 3 nieodkażone pokoje dzienne. Świnie miały nieograniczony dostęp do wody i pożywienia.
Zastosowane diety (tabela 6) zawierały: 1/kontrolę; 2/ 10% suszone-rozpryskowo osocze; 3/ 6% suszono-rozpryskowo globulina; i 4/ 6% materiał wzbogacony w globulinę traktowany w celu redukcji mostków dwusiarczkowych cząsteczki IgG (H + L). Diety były kukurydziano-sojowym suchym posiłkiem, który zastępował posiłek sojowy osoczem, przy zachowaniu jednakowej ilości lizyny. Frakcje osocza dodano odpowiednio do osocza na podstawie równej ilości frakcji osocza. Diety zawierały 1,6% lizyny i tworzyły doskonały profil aminokwasowy (Chung and Baker, 1992).Diety były formą posiłku spożywanego od dnia 0-14 po odstawieniu od karmienia.
Zbieranie danych. Wagi poszczególnych świń pobrano w dni 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 14 poodstawieniu od karmienia. Ocena podawanego pożywienia i biegunkę notowano codziennie od dnia 0 do 14 po-odstawieniu od karmienia. Krew zbierano w dniu 0, 7 i 14 po odstawieniu od karmienia. W celu dalszej analizy krew wirowano i surowicę zamrażano. W celu uzupełnienia badań (14 dzień) dziewięć świń/traktowanych zabijano aby otrzymać wagę organów (jelita, serca wątroby, płuc, śledziony, grasicy, nerek, żołądka i trzustki).
Analizy surowicy. Całkowita ilość białka, albuminy i azotanu mocznika były analizowano przy użyciu Zestawów Diagnostycznych ROCHE w systemie COBAS MIRA. Surowicze IgG było analizowano według Etzel i wsp. (1997).
Analiza statystyczna. Wyniki były analizowano w systemie losowo dobranych kompletnych bloków, przy użyciu GLM procedury SAS (SAS/STAT Version 6.11 SAS Institute, Cary, NC). Świnie umieszczono pojedynczo, a zagroda stanowiła jednostkę doświadczalną. Model sumy kwadratów składał się z bloku i traktowania, przy użyciu początkowej wagi jako kowariancji. Wyniki przedstawiono metodą średnich najmniejszych kwadratów.
Wyniki
Od dnia 0-6 (tabela 7), wzrastały wartości ADFI osocza (P<0,10) w porównaniu do kontroli i H+L, podczas gdy globulina dawała wyniki pośrednie. Od dnia 7-14, wzrastały wartości ADFI osocza (P<0,10) w porównaniu do kontroli i podawaniem diety H+L. Średnie dzienne przyjmowanie pożywienia globulin pokarmu świń wzrastało (P<0,10) w porównaniu do kontroli i podawaniem diety H+L. Średni dzienny przyrost przedstawiono w Tabeli 8. Średni dzienny przyrost był podobny do ADFI od dnia 0-6. Od dnia 7-14 i 0-14, ADG osocza i globuliny wzrastało (P<0,10) w porównaniu do kontroli, podczas gdy po podaniu H+L było pośrednie. Parametry krwi przedstawiono w tabeli 9. Surowicze IgG i azotan mocznika (dzień 14) były niższe (P<0,05) gdy do diety włączono osocze i globulinę w porównaniu do kontroli. Efekt H+L był pośredni. Zastosowane diety nie miały wpływu na białko surowicy. Albumina surowicy zmniejszała się (dzień I) (P<0,05) z powodu włączenia osocza w porównaniu do innych zastosowanych diet. Nie stwierdzono różnic w ocenie kału. Długość jelita i wagi narządów przedstawiono w tabeli 10. Nie stwierdzono różnic w wagach narządów czy długości jelita spowodowanych zastosowaną dietą.
PL 214 224 B1
T a b e l e
T a b e l a 6. Kompozycja diet doświadczalnych (jak podawano %)1
Składniki Kontrola Osocze Globulina H + L
Kukurydza 37,937 44,96 40,006 40,034
47% mączka 18 18 18 18
z ziaren soi
Serwatka 14 14 14 14
wysuszona
Laktoza 6,253 6,253 6,253 6,253
Osocze 10
Globulina 6
H + L 6
Biało soji 17,31 9,07 9,07
Koncentrat
Oleju soji 3,219 3,047 3,187 3,186
18,5% dwuwapń 1,79 1,493 2,133 2,146
Wapień 0,562 0,354 0,46 0,42
Przedmieszka 0,55 0,55 0,55 0,55
Sól 0,15 0,15 0,15 0,15
DL-Metionina 0,083 0,152 0,092 0,096
L-Lizyna-HCL 0,146 0,041 0,099 0,095
1 Przygotowane diety zawierały 1,60% lizyny, 0,48% metioniny, 16% laktozy, 0,9% wapnia i 0,8% fosforu i były podawane od dnia 0-14 po odstawieniu od karmienia.
T a b e l a 7. Efekt suszonego-rozpryskowo osocza i frakcji osocza na średnie dzienne spożycie(g/d).1
Kontrola Osocze Globulina H + L SEM
ADFI, g/d D 0-6 102,82a 152,43b 128,53ab 114,50a 13,44
D 7-14 280,74a 413,57c 379,21bc 319,06ab 29,07
D 0-14 193,94a 284,83b 258,55b 216,83ab 16,69
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 24 świń/traktowanie. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,10).
T a b e l a 8. Efekt suszonego-rozpryskowo osocza i frakcji osocza na średni dzienny przyrost (g/d)1
Kontrola Osocze Globulina H + L SEM
ADG, g/d D 0-6 -41,05a 27,23b -1,23ab -21,86a 20,26
D 7-14 199,38a 282,46b 302,22b 255,12ab 26,40
D 0-14 96,34a 173,07b 172,17b 136,42ab 20,56
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 24 świń/traktowanie. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,10).
PL 214 224 B1
T a b e l a 9. Efekty suszonych rozpryskowo frakcji osocza na krwi.
1,2
Kontrola Osocze Globulina H + L SEM
IgG, g/dL D 0 0,674 0,664 0,584 0,661 0,037
D 7 0,668 0,643 0,624 0,673 0,021
D 14 0,631b 0,555a 0,545a 0,596ab 0,022
Mocznik N
D 0 8,53 9,78 9,94 9,87 0,68
D 7 17,55b 14,65a 16,48ab 17,56b 1,01
D 14 17,57c 10,48a 14,73b 15,56bc 0,87
Całkowita ilość białka, g/dL D 0 4,58 4,46 4,56 4,56 0,076
D 7 4,69 4,60 4,53 4,74 0,106
D 14 4,55 4,49 4,59 4,49 0,080
Albumina, g/dL D O 2,69 2,64 2,75 2,69 0,069
D 7 2,92b 2,79a 2,92b 2,94b 0,045
D 14 2,83 2,76 2,86 2,80 0,060
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 2 4 świń/traktowanie. 2 Dzień O stosowano jako kowariancję do analizy na D7 i D14. ab Średnie z rzędu bez wspólnych liter u góry są różne (P<0,05).
T a b e l a 10. Efekt suszonego-rozpryskowo osocza i frakcji osocza na długość jelita (cale) i wagi narządów (g/kg wagi ciała).1
Kontrola Osocze Globulina H + L SEM
Jelito, 358,67 368,33 359,33 358,56 13,05
długość, cal Waga organu, g/kg BW Jelito 41,48 41,79 42,82 41,04 2,16
Wątroba 29,61 32,61 32,29 31,09 1,10
Śledziona 2,05 2,32 2,44 2,17 0,22
Grasica 1,15 1,45 1,15 1,15 0,14
Serce 6,12 6,14 5,77 5,80 0,22
Płuco 12,24 12,33 13,65 11,63 0,74
Żołądek 9,26 9,14 10,08 10,08 0,58
Nerki 6,18 6,57 6,10 6,30 0,21
Trzustka 2,70 2,61 2,54 2,70 0,11
1 Wartości są średnimi metody najmniejszych kwadratów z 9 świń/traktowanie.
Dyskusja
Zgodnie z opublikowanymi badaniami (Coffey and Cromwell, 1995) dane te wskazują, że po włączeniu do diety osocza i globuliny, wzrastała wydajność (ADG, ADFI) w porównaniu do kontroli.
PL 214 224 B1
Wyniki globuliny trawionej pepsyną i frakcja H+L pośrednio polepszają wydajność. Aktywność enzymów (laktazy i maltazy) wzrosła i ocena kału była lepsza gdy dodano wszystkie frakcje osocza (osocze, globulina, globulina trawiona pepsyną czy H&L) w porównaniu do kontroli.
Stężenia surowiczego IgG i BUN były niższe po spożyciu osocza czy globuliny w porównaniu do kontroli, globuliny trawionej pepsyną czy H&L. Nieoczekiwanym była zdolność doustnie podanego osocza czy globuliny do wywołania ogólnoustrojowej odpowiedzi, jak wykazano przy niskim stężeniu surowiczego IgG w porównaniu do kontroli.
Różnice wykazane pomiędzy osoczem i frakcjami globulin w porównaniu z globuliną trawioną pepsyną czy H+L są spowodowane tym, że czwartorzędowa struktura regionu Fe jest nienaruszona tylko w osoczu i frakcjach globulin. Globulina trawiona pepsyną ma strawiony region Fe, podczas gdy w frakcji H+L region Fe pozostaje nienaruszony ale bez czwartorzędowej struktury. Fab region pozostaje nienaruszony w globulinie trawionej pepsyną. Region zmienny jest ciągle zdolny do wiązania antygenu w preparacie H+L (APC, nieopublikowane dane). Tak więc wyniki wskazują, że interakcja przeciwciało-antygen jest ważna do wywołania miejscowego efektu (zmniejszona ocena kału, wzrost aktywności laktazy i maltazy) podczas gdy nietknięty region Fab i Fe osocza i frakcji globulin jest ważny do modulowania ogólnoustrojowej odpowiedzi surowiczego IgG.
P r z y k ł a d 4
Wpływ doustnych dawek białka osocza na aktywność odpowiedzi immunologicznej po pierwszorazowym i drugorazowym szczepieniu Rotavirusem i PRRS u młodych prosiąt.
Ogólny cel badania
Badanie wpływu dodatku białka osocza na aktywność odpowiedzi immunologicznej w następstwie pierwszorazowych i drugorazowych szczepień rotavirusem i PRRS.
Metody
U dziesięciu macior wzbudzano poród w tym samym czasie. Zastosowane diety przydzielono losowo dla każdego miotu. Traktowanie stosowano dwa razy tygodniowo (3 lub 4 dni przerwy) rurką aplikacyjną do żołądka. Zastosowano serie 7 aplikacji poprzedzających końcowe szczepienie i odstawienie od karmienia. Podania składały się: z kontroli (10 ml soli) i osoczowego IgG (0,5g podane w końcowej objętości 8 ml). Wszystkie świnie otrzymywały pierwszorazowe szczepienie (doustne = rotavirus; zastrzyk = PRRS) 10 dni przed odstawieniem od karmienia. Drugorazowe szczepienie podawano w czasie odstawienia od karmienia poprzez zastrzyk domięśniowy. Próbki krwi zbierano przed pierwszorazowym szczepieniem (10 dni przed odstawieniem od karmienia).Drugorazowe szczepienie podano w czasie odstawienia od karmienia poprzez zastrzyk domięśniowy. Próbki krwi zbierano przed pierwszorazowym szczepieniem (10 dni przed odstawieniem od karmienia),przed drugorazowym szczepieniem (w czasie odstawienia od karmienia), i z przerwami co 3 dni aż do 12 dni po odstawieniu od karmienia do matki.
Wyniki
U świń otrzymujących doświadczalne dawki białka osocza (P< 0,0 5) miana swoistych przeciwciał spadały w następstwie pobudzenia szczepieniem. Taka odpowiedź miana przeciwciał była widoczna zarówno przy szczepieniu rotavirusem (fig. 1) jak i przy szczepieniu PRRS (fig. 2).
Dyskusja
Dane te dostarczają doskonałych wskazówek działania doustnie podanych białek osocza u młodych świń. Immunologiczna aktywacja ma działanie silnej energii i stanowi ujście preparatu odżywczego. W czasie aktywacji systemu immunologicznego energia i składniki odżywcze są ukierunkowywane do produkcji składników immunologicznych (immunoglobuliny, cytokin, białek ostrej fazy, itd.) a nie na wzrost. Doustnie podane osocze może modulować układ immunologiczny, w ten sposób pozwalając energii i składnikom odżywczym być ukierunkowywanym na inne funkcje produkcyjne takie jak wzrost.
P r z y k ł a d 5
Ocena osocza podawanego wraz z wodą u indyków po wywołaniu choroby
Ogólny cel badania
Ocena krwi lub pochodzących z niej frakcji takich jak surowica, osocze czy pochodzące z niej oczyszczone frakcje zawierające immunoglobulinę, po podaniu z wodą zwierzętom, szczególnie ptactwu domowemu, głównie indykom, wykazała pozytywny skutek jakim był spadek zgonów u indyków u których wywołano chorobę. Wynalazek wykazał udoskonalenie w przypadku indyków zwłaszcza w początkowym okresie, po spożyciu białka osocza z wodą. Ponadto, dostarczenie białek osocza
PL 214 224 B1 z wodą zwiększa wydajność pożywienia oraz procent indyków przeżywających po wywołaniu choroby dróg oddechowych i ma działanie pomocnicze u indyków w początkowym okresie.
Materiały i metody
Osiemdziesiąt jednodniowych płci męskiej indyków Nicholas dobrano losowo do traktowania wodą. Początkowa waga ciała była 59g. Zastosowano traktowanie planowane czynnikowo obejmujące 1/ wywołanie choroby i nie wywołanie choroby, i 2/ wodę zawierającą osocze lub czystą wodę. Drób indyczy umieszczono po 6 lub 7 osobników w jednej zagrodzie zajmując całkowicie 12 zagród. Zakażone indyki oddzielono od nie- zakażonych indyków, aby zapobiec przeniesieniu zakażenia. Waga ciała, zużycie pożywienia i zużycie wody mierzono codziennie. Indyki karmione były handlowo dostępnym pożywieniem. Codziennie dostarczano świeżą wodę. Stężenie osocza w podawanej wodzie regularnie zmieniano, które wynosiło 1,3%, 0,65%, 0,325% i 1,3% w dniu 0-7, 7-14, 14-21 i 21-49, odpowiednio. Indyki zarażono w 35 dniu pasterellą, w celu wywołania choroby dróg oddechowych. Od 0-49 dnia codziennie rejestrowane objawy kliniczne i spadek zgonów. W 49 dniu badania zakończono i wszystkie indyki zabito.
Dane analizowano w planowaniu czynnikowym przy użyciu GLM procedury SAS (SAS/START Version 8, SAS Institute, Cary, NC). Model sumy kwadratów zawierał wywołane zakażenie i traktowanie wodą. Przedstawiono wyniki metodą średnich najmniejszych kwadratów. Liczbę zgonów po wywołaniu zakażenia analizowano na podstawie analizy przeżycia SAS.
Wyniki
Uzyskane dane przed wywołaniem zakażenia przedstawiono w Tabeli 11. Ponieważ indyki nie były zakażone przed 35 dniem, przedstawiono tylko główne efekty. Dodatek osocza do wody powodował wzrost (p<0,001)średniego dziennego przyrostu (ADG) od dnia 0-7, podczas gdy nie odnotowano polepszenia przyrostu do 35 dnia. Nie notowano różnic (P>0,05) w średnim dziennym zużyciu pożywienia (ADFI) od dnia 0-35. Zanik wody wzrósł (P< 0,0 5) od dnia 0-7, 0-14, i 0-21 po spożyciu wody z osoczem w porównaniu z karmieniem kontrolnym zawierającym wodę bez osocza. Wydajność karmienia (G/F) wzrosła (P<0,05) od dnia 0-7, 7-14, 0-14, i 0-28 z powodu spożycia wody zawierającej osocze w porównaniu do spożycia wody bez osocza. Nie odnotowano różnic (P>0,05) w G/F i zaniku wody w czasie dalszego badania aż do 35 dnia. Uzyskane dane po wywołaniu choroby przedstawiono w tabeli 12. Nie odnotowano różnic w ADG, ADFI i zaniku wody po spożyciu wody zawierającej osocze w porównaniu do zużycia wody bez osocza w grupach zakażonych lub niezakażonych. Wydajność pokarmu była lepsza (P<0,05) u indyków zakażonych od dnia 35-42 i od dnia 35-49 po spożyciu wody zawierającej osocze w porównaniu do wody bez osocza, podczas gdy nie odnotowano różnic (P>0,05) u indyków niezakażonych po spożyciu wody zawierającej osocze.
Waga ciała w grupach niespożywających i spożywających po wywołaniu choroby przedstawiono na fig. 3A i 3B. Siedem indyków spożywających wodę bez osocza po zakażeniu usunięto lub zmarło z powodu zakażenia co przedstawiono na fig. 3A. Jeden indyk spożywający wodę z osoczem po zakażeniu zmniejszył wagę i zmarł z powodu zakażenia co przedstawiono na fig. 3B. Fig. 4 przedstawia procent pozostałych po zakażeniu, podczas gdy fig. 5 przedstawia procent pozostałych przed zakażeniem. Nie odnotowano różnic (P>0,05) w procencie pozostałych po okresie zakażenia u niezakażonych indyków, podczas gdy procent pozostałych zakażonych indyków spożywających wodę zawierającą osocze wzrastał (P<0,05) w porównaniu z zakażonymi indykami spożywającymi wodę bez osocza (fig.4). Nie odnotowano różnic (P>0,05) w procencie pozostałych przed zakażeniem (dzień 0-35) z powodu spożycia wody z osoczem (fig. 5).
Dyskusja
Obecne badania wykazały polepszenie zachowań indyków w początkowym okresie w związku ze spożyciem białek osocza z wodą. Ponadto, po wywołaniu choroby dróg oddechowych, spożycie białek osocza poprzez wodę zwiększało przeżycie i zmniejszało ilość zgonów indyków. Ponadto, dostarczanie białek osocza poprzez wodę wzmagało wydajność pożywienia i procent pozostałych przy życiu po wywołaniu choroby dróg oddechowych oraz wykazało działanie pomocnicze u indyków w początkowym okresie.
PL 214 224 B1
ADG
Woda Osocze SEM P
DO-7 14.38 16.62 0.42 0.0003
D7-14 31.64 32.06 0.69 0.6587
D 14-21 50.01 51.18 1.3 0.5152
D 21-28 77.53 78.56 2.18 0.7372
D 28-35 98.85 101.85 3.39 0.5281
D 0-14 23.13 24.34 0.48 0.0728
D 0-21 32.09 33.29 0.7 0.2212
D0-28 43.51 44.52 1.04 0.4854
D0-35 54.57 55.99 1.42 0.4772
ADFI
Woda Osocze SEM P
DO-7 19,13 18.93 0.47 0.7757
D7-14 39.32 37.62 1.18 0.3361
D 14-21 59.69 61.54 1.38 0.3736
D 21-28 99.82 97.44 2.14 0.455
D 28-35 162.65 161.66 4.77 0.8871
D 0-14 29.22 28.27 0.75 0.4002
D 0-21 39.38 39.36 0.9 0.9889
D 0-28 54.49 53.88 1.1 0,7081
D 0-35 76.12 75.44 1.78 0.7922
Zanik wody
Woda Osocze SEM P
DO-7 68.58 79.8 3.21 0.0387
D 7-14 122.25 131.68 3.29 0.077
D 14-21 171.3 186.18 4.94 0.066
D 21-28 236.65 251.42 8.97 0.2779
D 28-35 313.1 339.22 11.59 0.1497
D 0-14 95.41 105.74 3 0.0407
D0-21 120.71 132.56 3.26 0.0332
D 0-28 149.7 162.27 4.42 0.0791
D 0-35 182.38 197,66 5.43 0.0819
Przyrost/Pokarm
D 0-7 Woda 0.74 Osocze 0.88 SEM 0.03 P 0.01 Ił
D 7-14 0.79 0.85 0.01 0.0019
D 14-21 0.84 0,83 0.02 0.9194
D 21-28 0,76 0.8 0.01 0.0897
D 28-35 0.6 0.63 0,02 0.2613
D 0-14 0.77 0.86 0.02 0.0032
D0-21 0.8 0.85 0.02 0,0544
D 0-28 0.78 0.82 0.01 0.0272
D 0-35 0.71 0.74 0.01 0.0618
PL 214 224 B1
Tabela 12. Efekt traktowania wodą i zakażenia na zachowania indyków.
AQG
L) 3542 C 4249 C 3549 Niezakażone SEM 5, 39 5, 36 5, 28 8 0,6991 0,8342 Q,9167 zakażono SEM 6,09 6, 19 6,1 P 0,1913 0, 4177 0,5574
Woda 117,92 123,64 12C,45 Osocze 114,7? 124,58 lis,69 Woda 124,06 131,46 129,16 Osocze 135,11 133,14 136,65
ADFI
Nieżakażonę Zakażone
Woda Osocze 8 EM P Woda Osocze SEM P
D 35- 194,51 181,67 7, 54 0,2628 199,56 208,75 7, 54 0,4134
42
u 42- 242,85 275,3 14,99 0,4318 239,62 249,28 14,99 0, 661
49
rc 35- 216,69 203,48 9,72 0, 3011 219,59 229, 02 9,72 0,5124
49
Zanik wody
Niezakaźone Zakażone
Woda Osocze SEM p Woda Osocze SEM P
D 35- 472,24 400,46 29, 62 0,1096 459,23 500,35 29, 0,3137
42 62
U 42- !<· ',57 516,09 29,22 0,8 41.8 475,92 524,5 29, 0,2735
49 21
B 35- 489,91 450,74 31,48 0,3724 469,52 512,68 31, 0,3291
9 4 8
Przyrost/Pokarm
Niezakażone SEM P Zakażone
Woda Osocze Woda Osocze SEM P
D 35- 0, 6 0, 58 0, 02 0,5063 0,54 0, 65 C,0 0,0143
42 2
0 42- 0,5 0,56 0,05 0,352? 0,48 0,54 0,0 0,3255
49 5
0 35- 0,54 0, 53 0, 02 0, 4125 0,51 Dy53 0,0 0,0319
' 2
P r z y k ł a d 5
Wpływy doustnego - zastosowania osocza na funkcje immunologiczne.
PL 214 224 B1
Odpowiedź immunologiczną na zastosowane białko osocza nie badano. Jednakże odkryto że, niektóre poszczególne komponenty z siary czy mleka mają działanie immuno-modulacyjne. IgA i slgA mają funkcje przeciwzapalne u noworodków. Eibl stwierdził, że doustne zastosowanie ludzkiej immunoglobuliny redukuje produkcję krążącego TNF-α w izolowanych makrofagach i redukuje także stężenie immunoglobulin u małych dzieci dotkniętych martwiczym zapaleniem jelita cienkiego i okrężnicy. Schriffrin stwierdził, że siara była efektywna w modulowaniu doświadczalnego zapalenia okrężnicy. W niekontrolowanym badaniu, Schriffrin i jego współpracownicy wykazali, że uzupełnienie diety TGF-32-bogatą frakcją kazeiny było użyteczne w modulowaniu przypadków zapalenia w chorobie Crohna u ludzi x. Sposób działania nie został wyjaśniony lecz wykazano, że TGF-32 hamuje interferon-γ który pobudza ekspresję receptorów MHC klasy II u noworodków. Receptory MHC klasy II także jak wiadomo wspomagają regulację u niedawno odstawionych od karmienia zwierząt. Inne peptydy znalezione w mleku, siarze i osoczu mogą także mieć działanie przeciwzapalne. Wykazano, że pozajelitowe zastosowanie TGF-32 polepsza przeżycie myszy zakażonych salmonellą. Ponadto, doustne zastosowanie immunoglobulin z białek osocza polepsza przyrost wagi i przyjmowanie pożywienia u młodych zwierząt.
TNF-α jest główną cytokiną biorącą udział w procesach zapalnych i ma negatywny wpływ na
1,1 apetyt i wykorzystanie białka , . Jak dobrze wiadomo, produkcja TNF-α jest stymulowana poprzez ekspozycję fagocytów na endotoksynę. Białka osocza zawierają immunoglobulinę, białka wiążąceendotoksynę, lektyny wiążące-mannan, i TGF-β. Mieszanina białek, cytokin i inne czynniki mogą odgrywać rolę w redukowaniu ekspozycji układu immunologicznego na bakterie pochodzące z przewodu pokarmowego i endotoksynę i dlatego zmienia się aktywność układu immunologicznego.
Zadaniem tego eksperymentu było zbadanie immunomodulacyjnego wpływu białek osocza zastosowanych u zwierząt poza okresem po odstawieniu od karmienia poprzez pomiar: (a) wybuchu oddechowego w monocytach krwi obwodowej, (b) wybuchu oddechowego w makrofagach otrzewnowych, (d) produkcję TNF-α makrofagów otrzewnowych w obecności i nieobecności lipopolisacharydów.
2.0 Procedury w doświadczeniu I i II.
2.1 Zwierzęta Doświadczenie I myszy białych Balb/c płci żeńskiej otrzymano z Laboratoriów Charles River. Po odbiorze, zwierzęta lokowano po cztery w klatce. Na początku dawkowania waga ciała wynosiła 15-19 g. Trzy klatki przeznaczono do testowania diet, ogółem 12 zwierząt na dietę. Dawkowanie należało rozłożyć na trzy kolejne dni tak aby przystosować proces do wymogów sekcji zwłok. I tak w 1-szym dniu po przybyciu dawkowanie rozpoczęto na zwierzętach w klatce pierwszej z każdego traktowania/kontrolna grupa, w 2-gim dniu dawkowanie rozpoczęto na wszystkich zwierzętach z drugich klatek i w 3-cim dniu klatki trzecie otrzymywały dawki z wszystkich grup. Sekcję zwłok rozłożono podobnie, tak aby zwierzęta otrzymywały dawki przez łącznie 7 dni. Wszystkie klatki oznakowano numerami zwierząt i przeznaczoną dietą. Temperatura w pokojach zwierząt utrzymywała się pomiędzy 66 a 82°F. Oświetlenie było w cyklach: przez 12 godzin włączone - 12 godzin wyłączone.
Doświadczenie II
Myszy białe Balb/c płci żeńskiej (73) otrzymano z Laboratoriów Charles River, 18 czerwca 2001r, i 72 zwierzęta zostały użyte do badań. Zwierzęta te urodziły się 7 maja 2001 r. Po otrzymaniu, zwierzęta lokowano po 3 w klatce.
Na początku dawkowania waga ciała wynosiła 15-19 g. Trzy klatki przeznaczono do testowania diet, ogółem 9 zwierząt na dietę. Dawkowanie rozłożono na trzy kolejne dni tak aby przystosować proces do wymogów sekcji zwłok. I tak w 1-szym dniu po przybyciu dawkowanie rozpoczęto na zwierzętach w klatce 1-szej z każdego traktowania/kontrolna grupa, na 2-gim dniu dawkowanie rozpoczęto na wszystkich zwierzętach z drugich klatek i w 3-cim dniu klatki trzecie otrzymywały dawki z wszystkich grup. Sekcję zwłok rozłożono podobnie, tak aby zwierzęta otrzymały dawki łącznie przez 7 dni. Wszystkie myszy otrzymywały dawki przez doustny zgłębnik ze 100 μg LPS 2 dni po rozpoczęciu traktowania poszczególną dietą i na 5 dni przed końcem badania. Wszystkie klatki oznaczono numerami zwierząt i zastosowaną dietą. Temperatura w pokojach zwierząt utrzymywała się pomiędzy 66 a 82°F. Oświetlenie było w cyklach: przez 12 godzin włączone - 12 godzin wyłączone.
2.2 Płukanie otrzewnowe, skrwawianie i opracowywanie próbek krwi.
Komórki zbierano z każdego zwierzęcia na drodze płukania otrzewnowego. Po zakończeniu, mięśnie brzuszne odrzucano z organów brzusznych i do jamy otrzewnowej wstrzykiwano 9 ml sterylnego PBS. Brzuch masowano i odzyskiwano 6-8 ml płynu płuczącego. Cztery myszy przebywające razem pulowano aby utworzyć jedną próbkę. Próbki przetrzymywano w lodzie przed opracowy20
PL 214 224 B1 waniem. Komórki wirowano i osad zawieszano w 1 ml płynu Eagla w modyfikacji Dulbeco z surowicą płodów cielęcych i penicyliną/streptomycyną. Liczbę komórek oceniano przy użyciu licznika Coulter Z1.
Po zebraniu komórek z płukania, z otwartej jamy brzusznej pobrano krew z tętnicy nerkowej i przeniesiona do 3 ml probówki zawierającej EDTA. I tym razem myszy pulowano aby utworzyć jedną próbkę. Próbki krwi rozcieńczano w PBS do całkowitej objętości 8 ml. Tę mieszaninę nawarstwiano od góry na 3 ml Histopaqu-1077. Próbki wirowano i nieprzezroczystą warstwę interfazy zawierającą komórki jednojądrzaste usuwano przy użyciu pipety pastera. Po trzykrotnym płukaniu w PBS osad zawieszano w 0,5 ml PBS. Liczbę komórek liczono przy użyciu licznika Coultera Z1.
2.3 Wybuch oddechowy
Po określeniu liczby komórek zarówno monocyty jak i próbki otrzewnowe doprowadzono do stężenia 1 x 106 komórek/ml. Wszystkie próbki oznaczano w trzech powtórzeniach. Sto (100) μ! każdej 5 zawiesiny komórek (1 x 105 komórek/na wgłębienie) dodawanych na 96 wgłębieniową płytkę do hodowli tkankowej. Do każdego wgłębienia dodawano dioctan 2,7-dichlorofluoresceiny (Molekular Probe) i płytki inkubowano w 37°C aby umożliwić wniknięcie substratu do komórek. Po inkubacji, dodano forbol octanu mistyrianowego (PMA) (Sigma) do trzech wgłębień w powtórzeniach w stężeniu 10 ng/wgłębienie w celu stymulacji produkcji rodników tlenowych. Płytki inkubowano w 37°C. Po 1 godzinie inkubacji, do każdego wgłębienia na płytce dodano po 200 μ! standardu 2,7-dichlorofluoresceiny (Polyscience). Wzrost fluorescencyjnego produktu mierzono przy użyciu czytnika fluorescencji mikropłytek Cytofluor-4000 (PerSeptive Biosystems)(Długość fali: wzbudzenie -485, emisja - 530). Dane przenoszono z programu Cytofluorymetru na Excel. Z Excela układ płytek kopiowano i przenoszono do pliku Softmax Pro (Molecular Devices), gdzie wyniki odczytywano automatycznie poprzez interpolację na krzywej standardowej.
2.4 Fagocytoza
Po sto (100) μ! każdej zawiesiny komórek dodawano do pięciu wgłębień na 96-wgłębieniowej płytce do hodowli tkankowej, w stężeniu 1 x 106 komórek/ml (1 x 105 komórek/na wgłębienie). Do każdego wgłębienia dodawano 50 μ! płynu hodowlanego (DMEM) uzyskując końcową objętość 100 μι Pięć wgłębień zawierało tylko DMEM i stanowiło próby ślepe. Wszystkie próbki i ślepe próbki nastawiano w pięciu (5) powtórzeniach. Komórki inkubowano w 37°C i następnie oceniano pod mikroskopem.
W czasie okresu inkubacji, przygotowano zawiesinę biocząsteczek E.coli K-12 w HBSS (Molekular Probe). Mieszaninę wstrząsano i sonifikowano. Po jednej godzinie okresu inkubacji, płytki odwirowano i supernatant odciągano pod ciśnieniem. Następnie do każdego wgłębienia dodawano po 100 μ! mieszaniny E.coli/HBSS i inkubowano dwie godziny w 37°C.
Po inkubacji, biocząsteczki E.coli odciągano pod ciśnieniem i do każdego wgłębienia dodawano po 100 μ! błękitu trypanu/cytrynianu-zrównoważonego roztworem soli (Molekular Probe). W przybliżeniu po 1 minucie, błękit trypanu usuwano poprzez aspirację pod ciśnieniem i produkt fluorescencji mierzono przy użyciu czytnika fluorescencji mikropłytek Cytofluor 4000.(Długość fali: wzbudzenie -485, emisja - 530).
2.5 Badanie cytokin
Po sto (100) μ! zawiesiny komórek o stężeniu 1 x 106 komórek/ml dodawano do 10 wgłębień replikacyjnych na 96-wgłębieniowej płytce do hodowli tkankowej. Pięć wgłębień zawierało LPS (1 μg/wgłębienie), do innych pięciu wgłębień nie dodawano LPS. Płytki inkubowano w 37°C przez 24 godziny. Po inkubacji, supernatanty (nadsącze) z wgłębień duplikatów łączono i przechowywano do czasu badania w -20°C. Produkcję TNF i IL-10 w supernatantach oceniano przy użyciu mysich zestawów ELISA z firmy R&R Systems.
3.0 Materiał
Użyto następujące materiały:
Dieta A - Kontrola (Mleko odtłuszczone)
Dieta B - Surowica świńska (PP)
Dieta C - Białko osocza wołowego (BP)
Dieta D - Lekka faza osocze - traktowanego-Nalco (BL)
Dieta E - Ciężka faza osocza - traktowanego-Nalco (BH)
Do doświadczenia II zastosowane następujące diety:
1. Kontrola (Mleko odtłuszczone)
2. Koncentrat Ig, 2,5%
3. Koncentrat Ig, 0,5%
4. Surowica wołowa, 5%
5. Surowica wołowa, 1%
PL 214 224 B1
6. Faza ciężka, 0,5%
7. Aktywowane HP, 0,5%
8. Aktywowane, od-popielone HP,0,1%
3.1 Przechowywanie i używanie materiału badawczego.
Testowane diety przechowywano w 4°C w ich oryginalnych torbach żywnościowych. W czasie kontaktu z materiałem badawczym używano bezpieczne szkło laboratoryjne, rękawiczki i fartuchy laboratoryjne.
3.2 Zastosowanie materiału badawczego
Miski żywieniowe napełniano dwa razy dziennie i zwierzętom pozwalano pożywiać się bez ograniczeń przez siedem dni.
Wyniki i Dyskusja
Zgodnie z wynalazkiem stwierdzono, że osocze pochodzenia wołowego albo świńskiego wpływało na zmniejszenie produkcji TNF-α zarówno przez stymulowane jak i nie stymulowane makrofagi otrzewnowe. Ponadto, zastosowanie zarówno ciężkiej jak i lekkiej fazy osocza traktowanego 5% dwutlenkiem krzemu powodowało zmniejszenie produkcji TNF-α jednakże w różnych stężeniach. Aczkolwiek, frakcje nie były oceniane w jednakowych stężeniach. Zmiany TNF-α które towarzyszyły stymulacji makrofagów były wyższe gdy zwierzęta były karmione frakcją osocza, niezależnie od źródła czy stężenia. Te obserwacje wskazują, że odpowiedź immunologiczna makrofagów była wzmagana po dodaniu osocza i/lub jego składników do diety młodych myszy.
W drugim doświadczeniu, potwierdzono supresorowy efekt frakcji osocza na produkcję TNF-α przez nie stymulowane makrofagi otrzewnowe. Jednakże poziom suplementacji i frakcja zmieniały ten efekt. Precypitacja Nalco zmniejszała produkcję TNF-α przez nie stymulowane komórki zarówno przy 0,5% jak i 0,1%. Frakcja bogata w immunoglobulinę zmniejszała produkcję TNF-α przy 0,5% lecz nie przy 2,5%. Dodatek surowicy zmniejszył produkcję TNF-α przy 5% ale nie przy 1,0%.
Warunki doświadczalne w doświadczeniu II różniły się od poprzedniego doświadczenia. W badaniu tym wszystkie myszy prowokowano endotoksyną w 1-szym dniu w celu sprawdzenia układu immunologicznego u wszystkich zwierząt. Poprzednie doniesienia wykazały, że makrofagi redukują reaktywność odpowiedzi immunologicznej w następstwie prowokacji. Wyniki pierwszego doświadczenia wydają się potwierdzać te obserwacje. Izolowane makrofagi od zwierząt karmionych dietą kontrolną produkowały wyższe poziomy TNF-α gdy nie były stymulowane i dlatego też produkowały mniej TNF-α w przypadku stymulowania LPS, w porównaniu do zwierząt karmionych dietami z dodatkiem osocza i/lub frakcjami. Poziomy TNF-α znacznie różniły się u zwierząt kontrolnych w dwóch doświadczeniach. Produkcja TNF-α była 15 razy wyższa w pierwszym doświadczeniu niż w drugim doświadczeniu. Niemniej jednak gdy układ immunologiczny był aktywowany produkcja była niższa w obu doświadczeniach, reaktywność immunologiczna była wyższa u myszy karmionych dietą z dodatkiem frakcji osocza. Oba stężenia TNF-α i IL-10 znacznie wzrastały gdy makrofagi poddawano działaniu LPS.
Osocze jest bogate w aktywne biologicznie białka, peptydy, cytokiny i inne immunomodulujące związki. Frakcje osocza zastosowane w tych doświadczeniach różniły się w kompozycjach i wielkościach włączonych diet. Efekt tych frakcji na produkcję TNF-α był zgodny w obu doświadczeniach. Zwierzęta karmione osoczem i/lub jego frakcjami produkowały mniej TNF-α w nie stymulowanym stanie i dlatego odpowiadały wzrostem produkcji TNF-α po stymulacji endotoksyną. Wyniki tych dwóch doświadczeń są zgodne z koncepcją, że obie frakcje bogate w immunoglobulinę i frakcje dwutlenku krzemu zmniejszały stymulację układu immunologicznego. Doustne zastosowanie białek osocza czy jego frakcji jest nowym środkiem zmniejszania produkcji TNF-α i jego poziomów.
T a b e l a 13. Efekty wołowego i świńskiego białka osocza zastosowanego do mierzenia odpowiedzi immunologicznej u myszy.
TNF-α, pg/ml Wybuch oddechowy
Traktowanie -LPS +LPS TNF-α zmienne -LPS +LPS
Kontrola 1540a 1867a 322a 17,4a 23,9a
Osocze świńskie 70b 1156b 1085b 12,2b 14,6b
Osocze wołowe 28b 1135b 1107b 10,1b 11,1b
Osocze wołowe 136b 1260b 1101b 10,6b 13,7b
(frakcja ciężka) Osocze wołowe (frakcja lekka) 34b 1135b 1124b 9,3b 11,2b
PL 214 224 B1
T a b e l a 1 4. Średnie wyniki fagocytozy przez makrofagi otrzewnowe (fig. 5)
Dieta Zwierzęta No. Średnie wyniki Se
Kontrola 1-12 298 47,6
PP 13-24 264 46,2
BP 25-36 311 52,1
BL 37-48 360 66,5
BH 49-60 375 63,9
T a b e l a 15. Produkcja TNF-α przez makrofagi otrzewnowe hodowane z myszy karmionych składnikami białka osocza
Traktowanie Produkcja TNF-α
-LPS +LPS Zmiana
Kontrola 128a 296a 169a
Ig stężenie, 2,5% 107ab 308a 201ab
Ig stężenie, 0,5% 20b 325a 306b
Surowica wołowa, 5% 5b 371a 366b
Surowica wołowa, 1% 130a 306a 176a
Frakcja ciężka, 0,5% 48ab 271a 223ab
Aktywowany HP, 0,5% 30ab 303a 272ab
Aktywowany, odpopielany HP, 0, 1 11b 352a 341b
T a b e l a 16. Produkcja IL-10 przez makrofagi otrzewnowe hodowane z myszy karmionych składnikami białek osocza
Traktowanie Produkcja IL-10
-LPS +LPS Zmiana
Ig stężenie, 2,5% 92a 366a 274a
Ig stężenie, 0,5% 4 5a 37 4a 329ab
Surowica wołowa, 5% 22a 369a 347b
Surowica wołowa, 1% 116a 354a 238ab
Frakcja ciężka, 0,5% 64a 348a 284ab
Aktywowany HP, 0,5% 54ab 3 94a 339b
Aktywowany, odpopie- 32b 412a 381b
Iony HP, 0,1%
PL 214 224 B1
Odnośniki literaturowe:
Hardic, W.R. 1984. Orał immune globulin. U.S. Patent #4,477,432. Filed April 5, 1982.
Bier, M. Aug 1, 2000. Orał immune therapy of bacterial overgrowth. U.S. Patent #6, 096,310.
Bridger, J.C. and J.F. Brown. 1981. Development of immunity to porcine rotavirus in piglets protected from disease by bovine colostrum. Infection and Immunity 31:906.
Cunningham-Rundles, S. 1994. Malnutrition and gut immune function. Current Opinion in gastroenterology. 10:644-670.
Dwyer, J.M. 1992. Drug Therapy. Manipulating the Immune system with Immune Globulin. N.E.J.M. 326:107116.
Eibl, M.M., H.M. Wolf, H. Furnkranz, and A Rosenkranz. 1988. Prevention of necrotizing enterocolitis in lowbirth-weight infants by IgA-IgG feeding. N.E.J.M. 319:1-7.
Hammarstrom, L., A. Gardulf, V. Hammarstrom, A. Janson, K. Lindfoerg, and C.I, Edvard Smith. 1994. Systemie and topical immunoglobulin treatment in immunoccmpromised patients. Immunological Reviews 139:43-70.
Heneghan, J.B. 1984. Physiology of the alimentary tract. In: Coats, M.E., B.E. Gustafsson eds. The germ-free animal in biomedical research. London: Laboratory Animals Ltd. Pp. 169-191.
Henry, C. and N. Herne. 1968. J. Exp. Med. 128:133-152.
Karlsson, S. Wernersson, T. Diaz de stahl, S.
Gustavsson, and B. Heyman. 1999. Efficient IgG-mediated suppression of primary antibody responses in Fcy receptor-deficient mice. Proc. Natl. Acad. Sci. 96:22442249.
Klobasa, F., J.E. Butler, and F. Habe, 1990. Maternal-neonatal immunoregulation: suppression of de novo synthesis of IgG and IgA, but not IgM, in neonatal pigs by bovine colostrum, is lost upon storage. Am. J. Vet. Res. 51:1407-1412.
McCracken, 3.A., M.E. Spurlock, M.A. Roos, F.A. Zuckermann, and H. Rex Gaskins. Weaning anorexia may contribute to local inflammation in the piglet smali intestine. J. Nutr. 129:613.
Mietens, infantile E.
anti-E. coli
C. and H. Keinhorst. 1979. Treatment of coli gastroenteritis with specific bovine milk immunoglobulins. Eur. J. Pedlatr.
132:239-252.
0'Gormon, P., D.C. McMillan, and C.S. McArdle. 1998. Impact of weight loss, appetite, and the inflammatory
PL 214 224 B1 response on ąuality of life in gastroin.test.inal cancer patients. Nutrition and Cancer 32(2):76-80.
Rowlands, B. J. and K.R. Gardiner. 1998. Nutritional modulation of gut inflammation. Proceedings of the Nutrition Society 57:395-401.
Sharma, R., U. Schumacher, V. Ronaasen, and M. Coates. 1995. Rat intestinal mucosal responses to a microbial flora and different diets. Gut 36:209-214.
Van der Poll, T., M. Levi, C.C. Braxton, S.M. Coyle, M. Roth, J.W. Ten Gate, and S.F. Lowry. 1998. Parenteral nutrition facilitates activation of ccagulation but not fibrinoiysis during huaian endotoxemia. J. Infect. Dis. 177:793-795.
Wolf, H.M. and M.M. Eibl. 1994. The anti-inflammatory effect of an orał inraiunoglobulin (IgA-IgG) preparation and its possible relevance for the prevention of necrotizing enterocolitis. Acta Pediatr. Suppl. 396:37-40.
Skarnes, R.C. 1985, In vivo distribution and detoxification of endotoxins. In: Proctor, R.A. (ed) : Handbook of Endotoxin, Vol. 3, strony 56-81.
Zhang, G.H., L. Bask, T. Bertelsen and C Quant i f .ication of the endotoxin-neutrali zing serum and plasma. APMIS 103:721-730.
Kock. 1995. capacity of
Wolf HM, Eibl MM.-The anti-inflammatory effect of an orał inraiunoglobulin (IgA-IgG) preparation and its possible relevance for the prevention of necrotizing enterocolitis. Acta Paediatr Suppl 1994;396:37-40.
Wolf HM, Hauber I, Guile H, Samstag A, Fischer MB, Ahmad RU, Eibl MM. Anti-inf lammatory properties of human serum IgA: induction of IL-1 receptor antagonist and Fc aR (CD89)-mediated down-regulation of tumour necrosis factor-alpha (TNF-a) and IL-6 in human monocytes. Clin.Exp. Iiranunol. 1996; 105:537-43.
Eibl MM, Wolf HM, Furnkranz H, Rosenkranz A. Prevention of Necrotizing Enterocolotis in low-birthweight infants by IgA-IgG feeding. The New England Journal of Medicine 1988;319 (1) :1-7 .
Caldarini dBM, Schiffrin EJ, Ogawa dF, Caccano DV, Ledesma dPM, Celener D, Bustos-Fernandez L. Prevention of carrageenan-induced ulcerative colitis in the guinea pig by serum of bovine colostrum. Medicina.(B.Aires.) 1987,-47 (3) :273-7.
Beattie RM, Schiffrin EJ, Donnet-Hughes A, Huggett AC, Domizio P, MacDonald TT, Walker-Smith JA. Polymeric nutrition as the primary therapy in children with smali bowel Crohn's disease. Aliment.Pharmacol.Ther.1994 Dec;8(6):609-15.
Donnet-Hughes A, Schiffrin EJ, Huggett AC. Expression of MHC antigens by intestinal epithelia1
PL 214 224 B1 cells. Effect of transforming growth factor-beta 2 (TGFbeta2). Clin Exp.Immunol. 1995 Feb;99(2);240-4.
Zijlstra RT, McCracken BA, Odle J, Donovan SM, Gelberg HB, Petschow BW, Zuckermann FA, Gaskins HR. Malnutrition modifies pig smali intestinal inflammatory responses to rotavirus. J Nutr 1999 Apr;129(4):838-43.
Donnet-Hughes A, Due N, Serrant P, Vidal K, Schiffrin EJ. Bioactive molecules in milk and their role in health and disease: the role of transforming-growth factor-beta. Immunol.Celi Biol.2000.Feb.;78.(1.):74-9.
Galdiero M, Marcatili A, Cipollaro dl, Nuzzo I, Bentivoglio C, Romano CC. Effect of transforming growth factor beta on experimental Salmonella typhimurium infection in mice. Infect.Immun. 1999 Mar; 67(3) :1432-8 .
Owen KQ, Nelssen JL, Goodband RD, Tokach MD, Friesen KG, Richert BT, Smith JW, Russell LE. Effect of various fractions of spray-dried porcine plasma on performance of early weaned pigs [Abstract]. In: J.Anim.Sci. (Suppl.) 2000.
Pierce JL, Cromwell GL, Lindemann MD, Monegue HJ, Weaver EM, Russell LE. Spray-dried bovine globulin for early weaned pigs [Abstract]. In: J.Anim.Sci. (Suppl.) 1996.
Yeh SS, Schuster MW. Geriatrie cachexia: the role of cytokines. Am.J Clin Nutr 1999 Aug;70(2):183-97.
Rozenfeld RA, Huang W, Hsueh W. Effects of antibiotics and germ-free environment on endotoxin (LPS)-induced injury and on intestinal group Ilphospholipase A2 (PLA2-II) activity [Abstract]. In: FASEB Journal 1999:643.5
PL 214 224 B1

Claims (12)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Doustna forma koncentratu nie-hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin pochodzących z krwi zwierząt, poza człowiekiem, do zastosowania w leczeniu prowokowanej cholery drobiu u drobiu.
  2. 2. Koncentrat według zastrz. 1, znamienny tym, że jest dostarczany wraz z podawaną wodą.
  3. 3. Koncentrat według zastrz. 2, znamienny tym, że podawanie poprzez wodę rozpoczyna się u jednodniowych zwierząt lub po prowokacji cholery drobiu.
  4. 4. Koncentrat według zastrz. 1, znamienny tym, że krew pochodzi od świni, bydła, od drobiu, jest owcza, końska lub kozia.
  5. 5. Koncentrat według zastrz. 1, znamienny tym, że prowokowana cholera drobiu jest wywołana protokołem szczepienia.
  6. 6. Koncentrat według zastrz. 5, znamienny tym, że szczepionkę stanowi szczepionka Pasteurella.
  7. 7. Koncentrat według zastrz. 5, znamienny tym, że jest podawany przed szczepieniem.
  8. 8. Koncentrat według zastrz. 5, znamienny tym, że jest podawany równolegle ze szczepieniem.
  9. 9. Koncentrat według zastrz. 5, znamienny tym, że jest podawany bezpośrednio po szczepieniu.
  10. 10. Suplement diety, znamienny tym, że zawiera doustny koncentrat nie-hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin pochodzących z krwi zwierząt, poza człowiekiem, jak określono w zastrz. 1.
  11. 11. Suplement diety według zastrz. 10, znamienny tym, że stężenie podawanego koncentratu jest w zakresie około 0,325% - 1,3% osocza w wodzie.
  12. 12. Koncentrat określony w zastrz. 1, znamienny tym, że koncentrat ten jest otrzymywany sposobem, który obejmuje:
    (i) otrzymywanie osocza, (ii) uwapnienie osocza, (iii) odwirowanie osocza do usunięcia fibryny, (iv) odfiltrowanie osocza, (v) precypitację soli oraz (vi) odwirowanie.
    PL 214 224 B1
    Rysunki
    Wpływ doustnego zastosowania białek osocza na produkcję przeciwciał po pierwszym i drugim szczepieniu Rotavirusem
    Średnie miano; 0,7, 11,14, 18,21
    AB = średnie różnice, P > 0,05
    Fig. 1
    PL 214 224 B1
    Wpływ doustnego zastosowania białek osocza na produkcję przeciwciał po pierwszym i drugim szczepieniu PRRS
    Średnie miano; 0,7,11,14,18,21
    B
    AB = średnie różnice, P > 0,05
    Fig. 2
    PL 214 224 B1
    Waga ciała po traktowaniu wodą co
    CM <0
    O «Λ
    CO
    Gramy
    Dni po wywołaniu choroby
    Fig. 3A
    PL 214 224 B1
    Waga ciała po traktowaniu osoczem o o o o O o o s o o o «0 CM t-
    Gramy
    PL 214 224 B1
    Pozostały procent Pozostały procent choroby
    Fig. 4
    Fig. 5
    PL 214 224 B1
PL373084A 2001-01-30 2002-01-29 Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety PL214224B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26498701P 2001-01-30 2001-01-30
US28406701P 2001-04-16 2001-04-16
US09/973,283 US20030103962A1 (en) 2001-10-09 2001-10-09 Methods and compositions for modulating the immune system of animals

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL373084A1 PL373084A1 (pl) 2005-08-08
PL214224B1 true PL214224B1 (pl) 2013-07-31

Family

ID=27401757

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL373084A PL214224B1 (pl) 2001-01-30 2002-01-29 Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety

Country Status (8)

Country Link
US (4) US20050271674A1 (pl)
EP (1) EP1357943A2 (pl)
AU (1) AU2002309486A1 (pl)
BR (1) BR0206870A (pl)
CA (1) CA2437095A1 (pl)
MX (1) MXPA03006818A (pl)
PL (1) PL214224B1 (pl)
WO (1) WO2002078741A2 (pl)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR0206869A (pt) * 2001-01-30 2007-01-02 Lauridsen Group Inc método para o tratamento de um animal sofrendo de um estado doentio de disfunção imune associado com nìveis alterados de igg ou tnf-delta, composição farmacêutica para o tratamento de distúrbios auto-imunes associados com elevados igg e/ou tnf-delta ou para a potenciação de protocolos de vacina, e método para o tratamento de estado doentio associado com disfunção imune em um animal
US20030190314A1 (en) * 2001-01-30 2003-10-09 The Lauridsen Group Methods and compositions of treatment for modulating the immune system of animals
PL214224B1 (pl) * 2001-01-30 2013-07-31 Lauridsen Group Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety
ES2403054T3 (es) * 2008-05-23 2013-05-13 The Lauridsen Group, Inc. Métodos y composiciones para reducir la inflamación pulmonar en un animal
CZ303161B6 (cs) * 2009-02-26 2012-05-09 Svus Pharma, A. S. Zpusob biotechnologické výroby bovinního hemoderivátu
BRPI1006722A2 (pt) 2009-04-09 2017-10-10 Entegrion Inc "método de preparação de hemoderivados desidratado, hemoderivados desidratados, bandagem ou auxílio cirúrgico, método para a preparação de plaquetas sanguíneas fixas desidratadas, plaquetas sanguíneas fixas desidratadas, método para o tratamento de um paciente que sofre de um distúrbio sanguíneo e plaquetas de sangue fixas secas por atomização tendo geometria com cavidades esféricas"
WO2011035062A2 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Velico Medical, Inc. Spray dried human plasma
US8407912B2 (en) 2010-09-16 2013-04-02 Velico Medical, Inc. Spray dried human plasma
BR112013010575A2 (pt) 2010-10-29 2016-08-09 Velico Medical Inc conjunto de secagem por atomização, câmara de secagem por atomização, conjunto de cabeça de secagem por atomização, dispositivo de coleta de secagem por atomização, e, método para secar por atomização um líquido
US20140083628A1 (en) 2012-09-27 2014-03-27 Velico Medical, Inc. Spray drier assembly for automated spray drying
PL2606741T3 (pl) * 2011-12-23 2014-08-29 Foodip Sarl Kompozycja wzbogacona w glikoproteinę jako dodatek do pokarmu i karmy i/lub jako środek terapeutyczny
US9561184B2 (en) 2014-09-19 2017-02-07 Velico Medical, Inc. Methods and systems for multi-stage drying of plasma
US12246266B2 (en) 2022-09-15 2025-03-11 Velico Medical, Inc. Disposable for a spray drying system
US11841189B1 (en) 2022-09-15 2023-12-12 Velico Medical, Inc. Disposable for a spray drying system
US11998861B2 (en) 2022-09-15 2024-06-04 Velico Medical, Inc. Usability of a disposable for a spray drying plasma system
US12246093B2 (en) 2022-09-15 2025-03-11 Velico Medical, Inc. Methods for making spray dried plasma
US11975274B2 (en) 2022-09-15 2024-05-07 Velico Medical, Inc. Blood plasma product
US12571587B2 (en) 2022-09-15 2026-03-10 Velico Medical, Inc. Finishing apparatus for a spray drying system
WO2024059770A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Velico Medical, Inc. Rapid spray drying system
US12083447B2 (en) 2022-09-15 2024-09-10 Velico Medical, Inc. Alignment of a disposable for a spray drying plasma system
US12539355B2 (en) 2022-09-15 2026-02-03 Velico Medical, Inc. Dryer for a spray drying system

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2607716A (en) * 1949-08-02 1952-08-19 Wisconsin Alumni Res Found Prophylactic compositon for scours
CA1046407A (en) * 1975-06-20 1979-01-16 Canada Packers Limited Dried particulate animal serum of reduced saline content
US4165370A (en) * 1976-05-21 1979-08-21 Coval M L Injectable gamma globulin
NL7900908A (nl) * 1978-02-06 1979-08-08 Slagteriernes Forskningsinst Werkwijze ter bereiding van een materiaal op basis van bloed, alsmede de toepassing van het verkregen produkt als voedingsmiddel-toevoegsel.
USRE33565E (en) * 1978-02-06 1991-04-02 Stolle Research And Development Corporation Prevention and treatment of rheumatioid arthritis
US4732757A (en) * 1978-02-06 1988-03-22 Stolle Research And Development Corporation Prevention and treatment of rheumatoid arthritis
SE448344B (sv) * 1978-02-06 1987-02-16 Stolle Res & Dev Antikropp for behandling av reumatoid artrit samt sett att framstella denna
US4636384A (en) * 1982-06-03 1987-01-13 Stolle Research & Development Corporation Method for treating disorders of the vascular and pulmonary systems
JPS6034997A (ja) * 1983-05-09 1985-02-22 ジヨージ、ジヨセフ、トダロ 生物学的活性ポリペプチド類
CA1260828A (en) * 1983-07-04 1989-09-26 Masakazu Iwai Therapeutic and prophylactic agent for gastrointestinal ulcers
US4623541A (en) * 1984-06-26 1986-11-18 Candian Patents And Development Limited Production of purified porcine immunoglobulins
US4816252A (en) * 1985-04-15 1989-03-28 Protein Technology, Inc. Product and process for transferring passive immunity to newborn domestic animals using ultrafiltered whey containing immunoglobulins
US5093117A (en) * 1989-01-24 1992-03-03 Baxter International Inc. Compositions and method for the treatment or prophylaxis of sepsis or septic shock
US5601823A (en) * 1989-10-31 1997-02-11 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Avian antitoxins to clostridium difficle toxin A
US5719267A (en) * 1989-10-31 1998-02-17 Ophidian Pharmaceuticals Inc. Clostridial toxin disease therapy
US5147639A (en) * 1990-06-19 1992-09-15 Ambico, Inc. Type-c rotavirus cultures and uses therefor
US5348867A (en) * 1991-11-15 1994-09-20 George Georgiou Expression of proteins on bacterial surface
KR950702416A (ko) * 1992-07-08 1995-07-29 제임스 클리프튼 보올딩 돼지에서 위궤양을 완화시키기 위한 벤즈이미다졸(Benzimidazoles for alloviating stomach ulcers in swine)
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
US5681565A (en) * 1993-01-12 1997-10-28 Medical Sciences Research Institute Methods and compositions for passive immunotherapy
US5585098A (en) * 1993-11-23 1996-12-17 Ovimmune, Inc. Oral administration of chicken yolk immunoglobulins to lower somatic cell count in the milk of lactating ruminants
US5575999A (en) * 1993-12-03 1996-11-19 Ampc, Inc. Animal feed supplement containing co-sprayed dried plasma protein and amylase
US6090380A (en) * 1994-01-12 2000-07-18 Research Corporation Technologies, Inc. Treatment of rheumatoid arthritis by oral administration of pooled human immunoglobulin
US5980953A (en) * 1994-10-03 1999-11-09 Stolle Milk Biologics, Inc. Anti-inflammatory factor, method of isolation, and use
US5531989A (en) * 1994-10-28 1996-07-02 Metagenics, Inc. Immunoglobulin and fiber-containing composition for human gastrointestinal health
US5531988A (en) * 1994-10-28 1996-07-02 Metagenics, Inc. Bacteria and immunoglobulin-containing composition for human gastrointestinal health
ES2142200B1 (es) * 1995-08-01 2000-11-01 Fichtel & Sachs Ag Disco de embrague con un disco de friccion compuesto.
DE19548221C1 (de) * 1995-12-22 1997-05-15 Biotest Pharma Gmbh Orale Anwendung von Immunglobulin-Präparationen zur Behandlung und Prophylaxe chronischer Schmerzzustände
ES2102971B1 (es) * 1996-01-25 1998-03-01 Hipra Lab Sa Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.
US5976537A (en) * 1996-07-02 1999-11-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
NZ335170A (en) * 1996-10-02 2001-08-31 Ovimmune Inc Oral administration of chicken yolk Ig-gamma antibodies to treat disease
ATE199022T1 (de) * 1996-10-09 2001-02-15 Akzo Nobel Nv Europäische vakzinstämme des fortplanzungs- atmungs-syndromsvirus des sweins (prrsv)
US6004576A (en) * 1997-08-11 1999-12-21 Ampc, Inc. Granular plasma protein supplement with increased bio-efficacy
US6086878A (en) * 1997-08-21 2000-07-11 Dcv, Inc. Method of increasing muscle protein and reducing fat in animals
US20020114802A1 (en) * 1998-02-10 2002-08-22 Tjellstrom Bo Arthur Einar Oral immunoglobulin treatment for inflammatory bowel disease
US6258383B1 (en) * 1998-08-14 2001-07-10 Lactoferrin Products Company Dietary supplement combining colostrum and lactoferrin in a mucosal delivery format
PL214224B1 (pl) * 2001-01-30 2013-07-31 Lauridsen Group Doustna forma koncentratu nie - hiperimmunizowanych nie-specyficznych immunoglobulin oraz suplement diety
US20030190314A1 (en) * 2001-01-30 2003-10-09 The Lauridsen Group Methods and compositions of treatment for modulating the immune system of animals

Also Published As

Publication number Publication date
WO2002078741A3 (en) 2003-05-01
AU2002309486A8 (en) 2005-10-13
BR0206870A (pt) 2005-04-26
US20120148570A1 (en) 2012-06-14
EP1357943A2 (en) 2003-11-05
AU2002309486A1 (en) 2002-10-15
CA2437095A1 (en) 2002-10-10
WO2002078741A2 (en) 2002-10-10
US20080213263A1 (en) 2008-09-04
PL373084A1 (pl) 2005-08-08
MXPA03006818A (es) 2004-10-15
US20080138340A1 (en) 2008-06-12
US20050271674A1 (en) 2005-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080138340A1 (en) Methods and compositions for modulating the immune system of animals
US20130095093A1 (en) Methods and compositions for treatment of immune dysfunction disorders
ES2340492T3 (es) Metodos de modulacion inmunitaria en animales.
EP0918528B1 (en) Use of hyperimmunized milk and/or egg for treating gastrointestinal damage
AU729502B2 (en) Oral administration of chicken yolk antibodies to treat disease
ES2684696T3 (es) Preparación de inmunoglobulina enriquecida con anti-LPS para su uso en el tratamiento y/o la profilaxis de esteatohepatitis no alcohólica
UA115524C2 (uk) Композиції та способи лікування у клінічних застосуваннях широкого спектра дії, недиференційованих або змішаних
US20030103962A1 (en) Methods and compositions for modulating the immune system of animals
UA98099C2 (uk) Вакцина, що містить альфа-токсоїд c. perfringens
US20030099633A1 (en) Methods and compositions for treatment of immune dysfunction disorders
EP0706400A1 (en) Therapeutic formulation and method
US20250222101A1 (en) Composition and Methods for Preventing and Treating African Swine Fever in Wild and Domestic Swine
US20030068314A1 (en) Anti-diarrheal and method for using the same
IE44814B1 (en) Agent for the prophylaxis and therapy of gastroenteritis
JP2024522404A (ja) アルコール性肝疾患及び移植片対宿主病を治療又は予防するための高度免疫化卵製品
HK40100305A (zh) 用於治疗或预防酒精性肝病和移植物抗宿主病的超免疫的蛋制品
Lee EggR/0tedIInc
MXPA00010967A (en) Anti-diarrheal and method for using the same
WO2004002529A1 (en) Supplemented antibody in circulating system of newborns
AU6278794A (en) Therapeutic formulation and method