PL215088B1 - Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałymInfo
- Publication number
- PL215088B1 PL215088B1 PL391955A PL39195510A PL215088B1 PL 215088 B1 PL215088 B1 PL 215088B1 PL 391955 A PL391955 A PL 391955A PL 39195510 A PL39195510 A PL 39195510A PL 215088 B1 PL215088 B1 PL 215088B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- medium
- weight
- average particle
- particle diameter
- Prior art date
Links
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 33
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims description 29
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims description 29
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title claims description 4
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 title 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 12
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 12
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 11
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 10
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 5
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 4
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000002361 compost Substances 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 claims 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000908169 Thamnostylum Species 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 241000221955 Chaetomium Species 0.000 description 2
- 241001515917 Chaetomium globosum Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710158368 Extracellular lipase Proteins 0.000 description 2
- 241000985510 Penicillium restrictum Species 0.000 description 2
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 2
- 101710128940 Triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 2
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221877 Chaetomium elatum Species 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 241001149472 Clonostachys rosea Species 0.000 description 1
- 241000896542 Clonostachys rosea f. catenulata Species 0.000 description 1
- 241000002309 Collariella virescens Species 0.000 description 1
- 241000002314 Dichotomopilus funicola Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241001480490 Mucoraceae Species 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000907591 Nalanthamala vermoesenii Species 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228129 Penicillium janthinellum Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000006330 Rhizopus homothallicus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101100478212 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) spo4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000825258 Scopulariopsis brevicaulis Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241001515886 Tolypocladium geodes Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 108010089807 chitosanase Proteins 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym, przeznaczonej do hydrolizy lub syntezy estrów oraz ich pochodnych.
Znane sposoby otrzymywania lipaz z grzyba Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu płynnym, opisane między innymi w opisach patentowych PL nr 150601, 153064, 162079,162080, 167092.
W czasopiśmie Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2006, 39, 141-148 opisano otrzymywanie rozpuszczalnej lipazy ze szczepów pleśni: Gliocladium roseum, Trichoderma harzianum, Scopulariopsis brevicaulis, Gliocladium catenulatum Chaetomium funicola, Chaetomium elatum, Chaetomium globusom, Fusarium oxysporum f sp. Dianthi, Chaetomium globosum, Triehoderma harzianum, Trichoderma harzianum, Triehoderma harzianum, Gliocladium vermoesenii, Chaetomium virescens, Chaetomium cochliodes, Tolypocladium geodes, Aspergillus terreus, Thamnostylum piriforme, Myrotheeium verrucaria, Thamnidium elegant, Trichoderma harzianum, Mucor hiemalis, Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym, przy czym wytworzony enzym wymywa się wodą z nierozłożonych składników podłoża.
Nadto znane jest otrzymywanie w drodze hodowli na podłożu stałym:
- pozakomórkowej lipazy ze szczepu Pseudomonas aeruginosa PseA w postaci roztworu wodnego (czasopismo Bioresource Technology 2008, tom 99, 1729-1735),
- rozpuszczalnej w wodzie lipazy przy wykorzystaniu szczepu pleśni Penicillium restrictum (czasopismo Current Microbiology 2007, tom 54, 361-365),
- pozakomórkowej rozpuszczalnej lipazy z pleśni Penicillium restrictum (czasopismo Biochemical Engineering Journal 2000, tom 4, 239-247),
- roztworu wodnego lipazy przy użyciu szczepu grzybów nitkowatych Aspergillus niger (czasopismo Process Biochemistry 2002, tom 38, 715-721),
- rozpuszczalnego w wodzie preparatu pozakomórkowej lipazy z pleśni Penicillium simplicissimum (czasopismo Brazilian Archives of Biology and Technology 2005, tom 48, Special n., 79-84),
- pozakomórkowej, rozpuszczalnej lipazy Rhizopus homothallicus (czasopismo Process Biochemistry 2006, tom 41, 2264-2269).
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się wydrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor circinelloides oznaczony symbolem TZA45 należący do klasy Zygomycetes (Sprzężniaków), rzędu Mucorales, rodziny Mucoraceae i rodzaju Mucor, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 4-35°C, charakteryzujący się szczególnie szybkim wzrostem w 30°C. Obficie rośnie na agarze brzęczkowym już po 2-3 dniach pokrywając jego powierzchnię gęstą masą puszystej grzybni o barwie żółtej szarzejącej podczas jej starzenia się, zbudowanej z nieseptowanych, wielojądrowych strzępek wytwarzających liczne, podlegające zjawisku fototropizmu sporangiofory z osadzonymi na końcach sporangiami, których ściana podczas dojrzewania rozpuszcza się uwalniając kuliste sporangiospory (zarodniki, o średnicy 20-200 ąm) zdolne w sprzyjających dla wzrostu warunkach do natychmiastowego kiełkowania. Szczep ten jest prototrofem, szybko i obficie rozwija się na pożywkach zawierających nieorganiczne źródła azotu, w tym jony amonowe zawarte w NH4CI, (NH4)2SO4, (NH4)SPO4 i/lub azotanowe w NaNO3, lub organiczne źródło azotu w wielu formach, w tym także mocznik czy namok kukurydziany. Jako źródło węgla wykorzystuje monosacharydy, w tym najlepiej glukozę, przy czym gdy stężenie tej heksozy w pożywce przekracza 10% wagowych pleśnie te rosnąc w formie drożdżoidalnej, co jest przejawem ich dimorfizmu, przetwarzają ją w etanol, a także różne oligosacharydy, słabiej laktozę i rafmozę oraz skrobię i triglicerydy a także wyższe kwasy tłuszczowe. Szczep jest zaliczany do organizmów olejodajnych (oleogineous), gdyż w jego mycelium mogą być gromadzone lipidy zapasowe w postaci ciał lipidowych, których ilość, w sprzyjających warunkach, w pożywkach płynnych, sięga nawet ponad 80% zawartości suchej masy grzybni, a w ich skład wchodzą przede wszystkim wolne i związane w postaci triacylogliceroli wyższe kwasy tłuszczowe, nienasycone jak linolowy, oleinowy i gamma-linolenowy oraz nasycone jak palmitynowy, stearynowy, mirystynowy i kaprylowy, których proporcje mogą być różne i zależą od warunków wzrostu szczepu. Lipidy te charakteryzują się znaczną zawartością karotenoidów (w tym dużą zawartością beta-karotenu, przekraczającą niekiedy 100 mg w 100 g lipidów). Odtłuszczona grzybnia tych pleśni zawiera liczne białka enzymatyczne, w tym
PL 215 088 B1 lipazy, chitozanazy i chitynazy, a nie zawiera aktywnych enzymów katalizujących hydrolityczny rozkład białek.
Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides, w drodze hodowli na podłożu stałym, według wynalazku polega na tym, że szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 inkubuje się na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11 °%o, następnie hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą
0,01-0,5% wodnego roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, szczepi się wysteryli3 zowane podłoże produkcyjne j, o wyjściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzi hodowlę statyczną w temperaturze 29-31°C w czasie 2-5 dni mieszając podłoże 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczając przez złoże powietrze z szybkością 15-100 1/minutę. Stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 9-14 części wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 1,80-3,60 mm, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczniku na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m, substancji organicznej minimum 40% s.m. i 40-100 części wody wodociągowej lub podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 40-100 części wody wodociągowej. Po zakończeniu hodowli z uzyskanej mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża sporządza się stały preparat lipazy. W tym celu mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża ekstrahuje się 2-5-krotnie acetonem stosując 1-5 ml acetonu na 1 g wyjściowego podłoża, ekstrakty sączy się na przegrodzie ceramicznej i suszy na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 24 godziny lub mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża suszy się na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 48 godzin. Otrzymany stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Sposób według wyrazku otrzymywania immobilizowanych lipaz Mucor circinelloides, na podłożu zawierającym 25-40% składników stałych, jest około 4-krotnie tańszy od tradycyjnych metod wgłębnych, wykorzystujących podłoże hodowlane w postaci cieczy, a preparaty enzymów otrzymane sposobem według wynalazku charakteryzują się aktywnością katalityczną w reakcji hydrolizy tłuszczów w zakresie 2,8-5,3 ąmol/g x s.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I.
Szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 przeszczepiano na podłoże stałe, wysterylizowane w czasie 20 minut w temperaturze 121 °C, zawierające 0,01 części wagowych oleju rzepakowego, 30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8% i hodowano w temperaturze 30°C, w czasie 3 dni. 5,2 ml zawiesiny zarodników (sporangiospor) zmytych z podłoża, uzyskanej w wyniku 2-kronego zmycia jednego skosu 4 ml 0,01% roztworu detergentu o nazwie handlowej Triton® X-100 w wodzie destylowanej, szczepiono wysterylizowane przez 20 minut w temperaturze 121°C podłoże produkcyjne o wyjściowym pH 4,85, zawierające 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm, 11,20 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,70 mm, 8,26 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85 części wagowych wody wodociągowej, umieszczone w kolbie stożkowej o objętości 1000 ml i prowadzono hodowlę statyczną w temperaturze 30°C w czasie 3 dni mieszając stałe podłoże hodowlane co 24 godziny. Do uzyskanej po hodowli mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża wprowadzano 300 ml acetonu i intensywnie mieszając prowadzono ekstrakcję składników rozpuszczalnych, po czym ekstrakt sączono na przegrodzie ceramicznej. Ekstrakcję powtarzano 3-krotnie.
Otrzymany stały preparat enzymatyczny suszono w temperaturze 21 °C przez 24 godziny, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Otrzymano 28,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 4,15 Limol/g x s.
PL 215 088 B1
P r z y k ł a d II.
Hodowlę szczepu pleśni Mucor circinelloides TZA45 prowadzono jak w przykładzie I. Uzyskaną po hodowli mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża suszono w temperaturze 20°C w czasie 48 godzin, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach. Otrzymano 35,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 2.80 ąmol/g x s.
P r z y k ł a d III.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm, 16,80 części wagowych wytłoków jabłkowych, 8,26 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85,00 części wagowych wody wodociągowej.
Otrzymano 29,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 4,35 nmol/g x s.
P r z y k ł a d IV.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm, 16,80 części wagowych wytłoków jabłkowych, 8,26 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie II.
Otrzymano 34,5 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 3,80 nmol/g x s.
P r z y k ł a d V.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm,
11,20 części wagowych otrąb pszennych, 8,26 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 22,8 części wagowych stałego preparatu lipazy o masie i aktywności lipolitycznej 4,11 ąmol/g x s.
P r z y k ł a d VI.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie w częściach wagowych: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm, 11,20 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,70 mm, 8,26 części wagowych wytłoków sojowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 22,8 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 4,11 nmol/g x s.
P r z y k ł a d VII.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm,
11,20 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,70 mm, 8,26 części wagowych wytłoków słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 85,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 21,6 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 3,89 Lmol/g x s.
P r z y k ł a d VIII.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,15 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm,
11,20 części wagowych kompostu, 8,26 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 42,50 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I. Otrzymano 27,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 2,11 L mol/g x s.
P r z y k ł a d IX.
Szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 przeszczepiano na podłoże stałe, wysterylizowane przez 20 minut w temp. 121°C, o składzie: 0,01 części wagowych oleju rzepakowego, 30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8%0 i hodowano w temperaturze 30°C w czasie 3 dni. 25 ml zawiesiny zarodników (sporangiospor), uzyskanej z 3 skosów tego podłoża w wyniku 2-krotnego zmycia każdego skosu 4 ml 0,01% roztworu detergentu o nazwie handlowej Triton® X-100 w wodzie destylowanej, szczepiono umieszczone w fermentorze SSF o objętości 5 I, wysterylizowane przez 30 minut w temp. 121°C, podłoże produkcyjne o składzie: 60,8 części
PL 215 088 B1 wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,62 mm, 56 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,70 mm, 41,3 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 425 części wagowych wody wodociągowej i prowadzono hodowlę statyczną w temperaturze 30°C przez 4 dni, przepuszczając przez fermentor powietrze z szybkością 15 l/minutę i mieszając podłoże hodowlane co 4 godziny przez 1 minutę. Do uzyskanej po hodowli mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża wprowadzano 1 I acetonu i intensywnie mieszając prowadzono ekstrakcję składników rozpuszczalnych acetonem, po czym ekstrakty sączono na przegrodzie ceramicznej. Ekstrakcję powtarzano 3-krotnie. Otrzymany stały preparat enzymatyczny dodatkowo suszono w temperaturze pokojowej przez 24 godziny w celu odparowania resztek acetonu, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Otrzymano 150,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 5,34 ąmol/g x s.
Claims (5)
1. Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides, w drodze hodowli na podłożu stałym, znamienny tym, że szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 inkubuje się na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11 %o, następnie hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą 0,01-0,5% wodnego roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, szczepi się wy sterylizowane podłoże pro3 dukcyjne, o wyjściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzi hodowlę statyczną w temperaturze 29-31°C w czasie 2-5 dni mieszając podłoże 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczając przez złoże powietrze z szybkością 15-100 1/minutę i po zakończeniu hodowli z powstałej mieszaniny grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża sporządza się stały preparat lipazy.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 9-14 części wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 1,80-3,60 mm, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczniku na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m i substancji organicznej minimum 40% s.m., i 40-100 części wody wodociągowej.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 40-100 części wody wodociągowej.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża, powstałą po hodowli, ekstrahuje się 2-5-krotnie acetonem stosując 1-5 ml acetonu na 1 g wyjściowego podłoża, ekstrakty sączy się na przegrodzie ceramicznej i suszy na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 24 godziny, a powstały stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża, uzyskaną po hodowli, suszy się na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 48 godzin, a powstały stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL391955A PL215088B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL391955A PL215088B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL391955A1 PL391955A1 (pl) | 2012-01-30 |
| PL215088B1 true PL215088B1 (pl) | 2013-10-31 |
Family
ID=45510287
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL391955A PL215088B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL215088B1 (pl) |
-
2010
- 2010-07-26 PL PL391955A patent/PL215088B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL391955A1 (pl) | 2012-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021201888B2 (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| Sundaramahalingam et al. | An encapsulated report on enzyme-assisted transesterification with an allusion to lipase | |
| Gutarra et al. | Lipase production and Penicillium simplicissimum morphology in solid‐state and submerged fermentations | |
| Parashar et al. | Production of Microbial Enzyme Triacylglycerol Acyl Hydrolases by Aspergillus Sydowii Jpg01 in Submerged Fermentation Using Agro-residues | |
| PL215088B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym | |
| KR101743232B1 (ko) | 염류 스트레스를 이용하여 지질함량을 증가시킨 미세조류 및 그의 제조방법 | |
| PL215087B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym | |
| Naqvi et al. | Screening of lipase producing fungi and catalytic activity from molasses culture medium | |
| ASWATHI | ISOLATION OF LIPASE PRODUCTION FROM ASPERGILLUS NIGER BY USING COCONUT OIL CAKE | |
| Avendaño-Morales et al. | Lipid production by Penicillium decumbens from the direct conversion of seaweed bagasse | |
| Avendano-Morales et al. | CONVERSI ON DIRECTA DE BAGAZO DE MACROALGAS | |
| HK40061933A (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| HK40061933B (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| Gropoșilă-Constantinescu et al. | Production of microbial lipids by Yarrowia lipolytica | |
| Haritha | Fungal Lipase Production fr Scale by Solid State | |
| PL228104B1 (pl) | Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych | |
| BRPI0906455A2 (pt) | processo de produÇço de lipases a partir de resÍduo agroindustrial | |
| HK40002685A (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| HK40002685B (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| PL218192B1 (pl) | Sposób wytwarzania in situ mieszaniny estrów wyższych kwasów tłuszczowych |