PL217686B1 - Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides - Google Patents
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloidesInfo
- Publication number
- PL217686B1 PL217686B1 PL396201A PL39620111A PL217686B1 PL 217686 B1 PL217686 B1 PL 217686B1 PL 396201 A PL396201 A PL 396201A PL 39620111 A PL39620111 A PL 39620111A PL 217686 B1 PL217686 B1 PL 217686B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- culture
- mucor circinelloides
- oil
- weight
- Prior art date
Links
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 title claims description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims description 8
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims description 8
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims description 8
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 41
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 21
- GXJLQJFVFMCVHG-QXMHVHEDSA-N 2-methylpropyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C)C GXJLQJFVFMCVHG-QXMHVHEDSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 12
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 12
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 12
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 11
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 8
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 8
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 claims description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 7
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 4
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 4
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 229920001247 Reticulated foam Polymers 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229920005906 polyester polyol Polymers 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000010701 ester synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 1
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides przeznaczonego do katalizowania syntezy estrów wyższych kwasów tłuszczowych.
Z opisu zgłoszenia patentowego P 385093 jest znany sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów ze szczepu pleśni Mucor circinelloides CH81, polegający na hodowli zarodników pleśni na podłożu stałym zawierającym chitozan lub chitooligosacharydy, agar, brzeczkę piwowarską o stężeniu 8-9°Be, w temperaturze 29-31°C, w czasie 3-5 dni, zmyciu zawiesiny zarodników z tego podłoża i zaszczepieniu nią podłoża inokulacyjnego, na którym prowadzi się hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18-26 godzin, zaszczepieniu otrzymanym inokulum podłoża hodowlanego o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania, doprowadzając powietrze, oddzieleniu otrzymanej w wyniku hodowli produkcyjnej biomasy od cieczy pohodowlanej, przemyciu jej acetonem i suszeniu na powietrzu otrzymanego nierozpuszczalnego preparatu enzymatycznego. Hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany, chitynę, N-acetyloglukozoaminę lub chitozan oraz wodę destylowaną lub na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany oraz wodę destylowaną względnie na podłożu zawierającym glukozę, bactopeptonu, ekstrakt drożdżowy, (NH4)2SO4, K2HPO4, MgSO4 x 7Η2Ο, NaCl, CaCl2 oraz wodę destylowaną.
Ze zgłoszenia patentowego P 391955 jest znany sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides, przeznaczonego m. in. do syntezy estrów, ze szczepu pleśni Mucor circinelloides TZA45, polegający na hodowli zarodników pleśni na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11°%, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni, zaszczepieniu zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, podłoża produkcyjnego o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych, 9-14 części wysłodków buraczanych, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczniku na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m i substancji organicznej minimum 40% s. m. i 40-100 części wody wodociągowej lub o składzie: 10-15 części śruty kukurydzianej, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 40-100 części wody wodociągowej, o wyj3 ściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzeniu hodowli statycznej w temperaturze 29-31 °C w czasie 2-5 dni przy mieszaniu podłoża 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczaniu przez złoże powietrza i po zakończeniu hodowli sporządzeniu z powstałej mieszaniny grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża stałego preparatu lipazy.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się szczep pleśni Mucor circinelloides oznaczony symbolem L25, wyodrębniony z pancerzy krewetek.
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides przeznaczonego do katalizowania syntezy estrów wyższych kwasów tłuszczowych, ze szczepu pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be w temperaturze 29-31°C w czasie 3-5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze
28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki
180 min-1, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego
PL 217 686 B1 preparatu od cieczy pohodowlanej, odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, według wynalazku polega na tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides L25/3SE, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20-30 części, brzeczki piwowarskiej 20-30 części, a nadto 0,5-1 części oleinianu izobutylu. Hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części, wody wodociągowej 1000 części, a nadto 0,5-1 części oleinianu izobutylu, przy czym stosuje się wodę wodociągową o barwie większej niż 5 mg Pt (PN-EN ISO 7887 : 2002), mętności nie większej niż 0,4 NTU (PN-EN ISO 7027 : 2003), przewodności nie większej niż 500 μS/cm (PN-EN-27888 : 1999), pH w zakresie 7,1-7,4 (PN-90/C 04540.01), ChZT nie większym niż 1,75 (PN-ISO 15705:2005 PB-22.00:2009), twardości nie większej niż 15°n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l (PB-03.00:2008) i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l (PN-ISO 6332:2001). Hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentora z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tzw. pianki retykulowanej, uzyskiwanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyjnym S28133), o wymiarach 250x120x10 mm, charakteryzu3 jącej się gęstością 23-27 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 150 kPa i średnicą porów 1,08-1,58 mm. Otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides L25/3SE oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej. Przemycie wodą płatów pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides L25/3SE monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej
120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie 12 godzin.
Selektant pleśni Mucor circinelloides L25/3SE otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides L25, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2-1 części oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,2-1 części oleinianu izobutylu, 10-50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30-73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, o wyjściowym pH=4,6-5,0 w temperaturze 29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrzą-1 sarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor circinelloides powtarza się 3-krotnie. Otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 1 część oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie aktywnych i stabilnych preparatów enzymów katalizujących syntezę estrów wyższych kwasów tłuszczowych, z nowego selektanta Mucor circinelloides L25/3SE, którego aktywność w reakcji syntezy estrów jest większa o 28% w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor circinelloides L25. Wytworzone sposobem według wynalazku preparaty lipaz osadzonych na porowatej piance poliuretanowej są elastyczne i trwałe. Można je przycinać do potrzebnych wymiarów co umożliwia efektywne wypełnienie przestrzeni reaktora przeznaczonego do katalizy reakcji syntezy estrów.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d I
Szczep pleśni Mucor circinelloides L25 wyodrębniony z pancerzy krewetek przeszczepiono na aktywujące podłoże stałe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 15 minut, o składzie w częściach wagowych: 0,2 części oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki
PL 217 686 B1 piwowarskiej o stężeniu 8°Be i hodowano na tym podłożu w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin. Wyrosłe kolonie przenoszono za pomocą ezy na aktywujące podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 1 część oleinianu izobutylu, 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego firmy Roquette, 1000 części wody wodociągowej o barwie nie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 μS/cm, pH w zakresie 7,1-7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15°n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, o wyjściowym pH = 4,6 i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 29-31 °C przez 24 godziny przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Procedurę hodowli pleśni na obydwu podłożach, stałym i ciekłym, powtarzano 3-krotnie.
Otrzymany w ten sposób selektant Mucor circinelloides oznaczony numerem L25/3SE, wysiano na wysterylizowane termicznie w czasie 15 minut w temperaturze 121 °C podłoże stałe o składzie w częściach wagowych: 1 część oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 30 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be i po 3 dniach hodowli w temperaturze 29-31°C zarodniki selektanta zmywano sterylną solą fizjologiczną zawierającą 0,01% Tritonu® Χ-100 stosując 8 ml soli fizjologicznej ma 1 skos. Otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, ciekłe podłoże aktywujące o składzie w częściach wagowych: 1 część oleinianu izobutylu, 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, o wyjściowym pH 4,6, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, ciekłe podłoże produkcyjne o składzie analogicznym jak w hodowli inokulum, ale bez dodatku oleinianu izobutylu, o objętości 18 l, wprowadzone do fermentora o objętości całkowitej 24 I, wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża. Do mieszadła umieszczonego w fermentorze zamocowano w powtarzalny sposób prostopadłościenne płaty pianki poliuretanowej na poliolu poliestrowego o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tzw. pianki retykulowanej, uzyskiwane w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyjnym S28133, o wymiarach 250x120x10 mm, charakteryzującej się gęstością 3
23-27 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 150 kPa i średnicą porów 1,08-1,58 mm. Hodowlę prowadzono w temperaturze 28-31 °C w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, przy mieszaniu z szybkością obrotową 120 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej, przerośnięte biomasą Mucor circinelloides L25/3SE, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu monitorowanego pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C, stosowanego w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i odwadniano 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, a następnie ekstrahowano eterem naftowym. Odwodnioną i odlipidowaną biomasę, zaadsorbowaną w porach pianki poliuretanowej, suszono na powietrzu w czasie 12 godzin w temperaturze pokojowej.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 24,2 g z 1 I podłoża, o aktywności syntetycznej mierzonej w reakcji syntezy oleinianu izobutylu równej 8,53 μkat/g preparatu.
P r z y k ł a d II
Selektant Mucor circinelloides oznaczony numerem L25/3SE otrzymano postępując jak w przykładzie I, ale stosując aktywujące podłoże stałe zawierające 0,5 części oleinianu izobutylu i ciekłe podłoże aktywujące zawierające 0,5 części oleinianu izobutylu.
Dalej jak w przykładzie I.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 23,1 g z 1 I podłoża, o aktywności syntetycznej w reakcji syntezy oleinianu izobutylu równej 10,24 μkat/g preparatu.
P r z y k ł a d III
Selektant Mucor circinelloides oznaczony numerem L25/3SE otrzymano postępując jak w przykładzie I. Hodowlę wytworzonego selektanta prowadzono w fermentorze jak w przykładzie I. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej przerośnięte biomasą Mucor circinelloides L25/3SE, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą jak w przykładzie I, zamrożono do temperatury -45°C i poddano liofilizacji, produkt liofilizacji zalewano
PL 217 686 B1 kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i ekstrahowano przez 10 minut w zakrytym naczyniu -1 umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, następnie przemywano eterem naftowym i suszono na powietrzu w czasie 12 godzin w temperaturze pokojowej.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat lipazy w ilości 20,6 g z 1 litra podłoża, o aktywności syntetycznej reakcji syntezy oleinianu izobutylu równej 11,7 μkat/g preparatu.
Claims (4)
1. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides przeznaczonego do katalizowania syntezy estrów wyższych kwasów tłuszczowych, ze szczepu pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be w temperaturze 29-31 °C w czasie 3-5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze
28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki
180 min-1, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31 °C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu od cieczy pohodowlanej, odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, znamienny tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides L25/3SE, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20-30 części, brzeczki piwowarskiej 20-30 części, a nadto 0,5-1 części oleinianu izobutylu, hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części, wody wodociągowej 1000 części, a nadto 0,5-1 części oleinianu izobutylu, przy czym stosuje się wodę wodociągową o barwie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 μ S/cm, pH w zakresie 7,1-7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15°n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/1 i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentora z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej, zaś otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides L25/3SE oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że selektant pleśni Mucor circinelloides L25/3SE otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides L25, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2-1 części oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,2-1 części oleinianu izobutylu, 10-50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30-73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach określonych w zastrzeżeniu 1, o wyjściowym pH=4,6-5,0 w temperaturze 29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb
20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania
PL 217 686 B1 i selekcji pleśni Mucor circinelloides powtarza się 3-krotnie, a otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 1 część oleinianu izobutylu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się prostopadłościenne płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego o całkowicie otwartej strukturze komórkowej - pianki retykulowanej, uzyskiwanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyjnym S28133, 3 o wymiarach 250x120x10 mm, charakteryzującej się gęstością 23-27 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 150 kPa i średnicą porów 1,08-1,58 mm.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przemycie wodą płatów pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides L25/3SE monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie 12 godzin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396201A PL217686B1 (pl) | 2011-09-05 | 2011-09-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396201A PL217686B1 (pl) | 2011-09-05 | 2011-09-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL396201A1 PL396201A1 (pl) | 2013-03-18 |
| PL217686B1 true PL217686B1 (pl) | 2014-08-29 |
Family
ID=47846374
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL396201A PL217686B1 (pl) | 2011-09-05 | 2011-09-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL217686B1 (pl) |
-
2011
- 2011-09-05 PL PL396201A patent/PL217686B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL396201A1 (pl) | 2013-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ruiz et al. | Pectinase production from lemon peel pomace as support and carbon source in solid-state fermentation column-tray bioreactor | |
| CN111019836B (zh) | 丝状真菌生物垫、及其生产方法和使用方法 | |
| CN103025862B (zh) | 新型破囊壶菌类微藻及用其生产生物油的方法 | |
| CA3120549A1 (en) | Method of producing fungal mats and materials made therefrom | |
| FI68078C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av biologiskt aktiva mikroorganismmyceliepellets | |
| CN101955888B (zh) | 高产油脂皮状丝孢酵母b3及其ems和紫外线复合诱变选育方法 | |
| CN106801017A (zh) | 一种高产耐热蛋白酶及虫草素的蛹虫草菌株筛选及诱变方法 | |
| KR20220088761A (ko) | 모르테에렐라 알피나 및 그 응용, Sn-2 ARA가 풍부한 미생물 유지 및 그것의 제조 방법과 응용 | |
| Ogawa et al. | Filamentous fungal pellets as versatile platforms for cell immobilization: developments to date and future perspectives | |
| Ludemann et al. | Conidial production by Penicillium nalgiovense for use as starter cultures in dry fermented sausages by solid state fermentation | |
| Gutarra et al. | Lipase production and Penicillium simplicissimum morphology in solid‐state and submerged fermentations | |
| PL217686B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217695B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217359B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217358B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217361B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217360B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| Boakye et al. | Isolation, screening and identification of pectinolytic fungi from the soil of decomposed plant materials | |
| PL217339B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| PL217332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| Namasivayam et al. | Evaluation of organic waste liquor media for the production of alpha amylase using Aspergillus niger | |
| CN102028096A (zh) | 浅盘液体高密度菌体蛋白生产方法 | |
| Owusu et al. | Isolation, Screening and Identification of Pectinolytic Fungi from the Soil of Decomposed Plant Materials | |
| Boakye et al. | Isolation, Screening and Identification of Pectinolytic Fungi from the Soil of Decomposed Plant Materials. Fermentation 2025, 11, x | |
| RU2626528C2 (ru) | Иммобилизованный биокатализатор для получения фумаровой кислоты |