PL217332B1 - Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu - Google Patents
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanuInfo
- Publication number
- PL217332B1 PL217332B1 PL395968A PL39596811A PL217332B1 PL 217332 B1 PL217332 B1 PL 217332B1 PL 395968 A PL395968 A PL 395968A PL 39596811 A PL39596811 A PL 39596811A PL 217332 B1 PL217332 B1 PL 217332B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- weight
- oil
- culture
- medium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 18
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 title claims description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 13
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 10
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 38
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 claims description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 14
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 14
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 13
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 11
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 11
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 11
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 9
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 claims description 8
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 8
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 claims description 8
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 7
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 7
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 7
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-WTZNIHQSSA-N n-[(2r)-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)NC1[C@H](O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-WTZNIHQSSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 238000010187 selection method Methods 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 101100173542 Caenorhabditis elegans fer-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- UJHBVMHOBZBWMX-UHFFFAOYSA-N ferrostatin-1 Chemical compound NC1=CC(C(=O)OCC)=CC=C1NC1CCCCC1 UJHBVMHOBZBWMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 101710136247 Endo-chitosanase Proteins 0.000 description 3
- 108010014701 Exo-beta-D-glucosaminidase Proteins 0.000 description 3
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 241000235389 Absidia Species 0.000 description 1
- 241001149952 Amylomyces rouxii Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 1
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229920001247 Reticulated foam Polymers 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu.
Z czasopisma Biotechnologia 2 (57), 193-206, (2002) jest znany sposób otrzymywania wewnątrzkomórkowego biokatalizatora, pochodzącego z pleśni Absidia orchidis, stosowanego w postaci rozpuszczonej w procesie hydrolizy chitozanu.
Z czasopisma Food Research International 38, 315-322, (2005) znany jest sposób otrzymywania zewnątrzkomórkowych biokatalizatorów pochodzących z pleśni Aspergillus CJ22, stosowanych w procesie hydrolizy chitozanu.
Z czasopisma FEMS Microbiology Letters vol. 95, 187-194, (1992), jest znany sposób otrzymywania dwóch wewnątrzkomórkowych biokatalizatorów (o aktywności endochitozanolitycznej), pochodzących z pleśni Mucor rouxii, stosowanych w postaci roztworu w procesie hydrolizy chitozanu i jego pochodnych.
Z opisu zgłoszenia patentowego P 385093 jest znany sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni z rodzaju Mucor, polegający na tym, że szczepy pleśni Mucor circinelloides CH81 lub Mucor racemosus CH52, po inkubacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym zawierającym chitozan lub chitooligosacharydy, agar, brzeczkę piwowarską o stężeniu 8-9°Be, hoduje się w temperaturze 29-31°C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników zmytych z tego podłoża szczepi się wysterylizowane podłoże inokulacyjne i prowadzi hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18-26 godzin. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepia się, wysterylizowane i wstępnie napowietrzone podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania, doprowadzając powietrze, otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej, przemywa się acetonem i otrzymany nierozpuszczalny preparat enzymatyczny suszy się na powietrzu. Hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany, chitynę, N-acetylo-glukozoaminę lub chitozan oraz wodę destylowaną lub na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany oraz wodę destylowaną względnie na podłożu zawierającym glukozę, bactopeptonu, ekstrakt drożdżowy, (NH4)2SO4, K2HPO4, MgSO4 x 7H2O, NaCl, CaCl2 oraz wodę destylowaną.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się, szczep pleśni Mucor racemosus oznaczony symbolem CH52, wyodrębniony z pancerzy krewetek.
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni Mucor racemosus, polegający na hodowli zarodników pleśni na wy sterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be w temperaturze 30°C w czasie 4-6 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, chitynę koloidalną, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28-31°C w czasie 18 godzin przy stop-1 niu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu od cieczy pohodowlanej, odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, według wynalazku polega na tym, że preparaty otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor racemosus CH52/3SC, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20-30 części, brzeczki piwowarskiej 20-30 części, a nadto 0,5-1 części koloidalnej chityny pochodzącej z pancerzy krewetek. Hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części, handlowej chityny 0,5-1 części oraz 1000 części wody wodociągowej o barwie większej niż 5 mg Pt (PN-EN ISO
PL 217 332 B1
7887 : 2002), mętności nie większej niż 0,4 NTU (PN-EN ISO 7027 : 2003), przewodności nie większej niż 500 ąS/cm (PN-EN-27888 : 1999), pH w zakresie 7,1-7,4 (PN-90/C 04540.01), ChZT nie większym niż 1,75 (PN-ISO 15705 : 2005 PB-22.00 : 2009), twardości nie większej niż 15° n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l (PB-03.00 : 2008) i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l (PN-ISO 6332 : 2001). Hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentora -1 z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta, w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej na bazie poliolu polieteru o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tak zwanej pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, numer klasyfikacyjny TM23280), o wymia3 rach 250 x 120 x 10 mm, charakteryzującej się gęstością 19-22 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 70 kPa i średnicą porów 2,20-3,40 mm. Otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus CH52/3SC oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa wodą destylowaną w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej. Przemycie wodą monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym na-1 czyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie 12 godzin.
Selektant pleśni Mucor racemosus CH52/3SC otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor racemosus CH52, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,5-1 części koloidalnej chityny pochodzącej z pancerzy krewetek, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,5-1 części handlowej chityny, 10-50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30-73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, o wyjściowym pH = 4,6-5,0 w temperaturze 29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objęto-1 ściowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor racemosus powtarza się 3-krotnie. Otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 1 część koloidalnej chityny, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie aktywnych i stabilnych preparatów enzymów hydrolizujących chitozan, z nowego selektanta Mucor racemosus CH52/3SC, którego aktywność w reakcji hydrolizy chitozanu jest większa o 20% w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor racemosus CH52. Wytworzone sposobem według wynalazku preparaty lipaz osadzonych na porowatej piance poliuretanowej są elastyczne i trwałe. Można je przycinać do potrzebnych wymiarów co umożliwia efektywne wypełnienie przestrzeni reaktora przeznaczonego do reakcji hydrolizy chitozanu.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d I.
Szczep pleśni Mucor racemosus CH52 wyodrębniony z pancerzy krewetek przeszczepiono na aktywujące podłoże stałe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 15 minut, o składzie w częściach wagowych: 1 część koloidalnej chityny pochodzącej z pancerzy krewetek, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be i hodowano na tym podłożu w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin. Wyrosłe kolonie przenoszono za pomocą ezy na aktywujące podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 0,5 części handlowej chityny, 27 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego, uniwersalnego, 37 części namoku kukurydzianego firmy Roquette, 1000 części wody wodociągowej o barwie nie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 ąS/cm, pH w zakresie 7,1-7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15° n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, o wyjściowym pH = 4,6 i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 29-31°C przez 24 godziny przy stopniu napełnienia
PL 217 332 B1 kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Procedurę hodowli pleśni na obydwu podłożach, stałym i ciekłym, powtarzano 3-krotnie.
Otrzymany w ten sposób selektant Mucor racemosus oznaczony numerem CH52/3SC, wysiano na wysterylizowane termicznie, w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, podłoże stałe o składzie w częściach wagowych: 0,5 części koloidalnej chityny, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be i po 3 dniach hodowli w temperaturze 29-31°C zarodniki selektanta zmywano ® sterylną solą fizjologiczną zawierającą 0,01% Tritonu® X-100 stosując 8 ml soli fizjologicznej ma 1 skos. Otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie w częściach wagowych: 0,5 części handlowej chityny, 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody wodociągowej o wła33 ściwościach jako podano wyżej, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% obję-1 tościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże o objętości 18 litrów wprowadzone do fermentora o objętości całkowitej 24 I, wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, o składzie analogicznym jak w hodowli inokulum, ale bez dodatku chityny, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża. Do mieszadła umieszczonego w fermentorze zamocowano w powtarzalny sposób prostopadłościenne płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu polieteru o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tak zwanej pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, numer klasyfikacyjny TM23280), charakteryzującej 3 się następującymi parametrami fizykochemicznymi: gęstością 19-22 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 70 kPa i średnicą porów 2,20-3,40 mm, o wymiarach: 250 x 120 x 10 mm wysokość/szerokość/grubość). Hodowlę prowadzono w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin, w obec-1 ności środków przeciwdziałających pienieniu, przy mieszaniu z szybkością obrotową 120 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej, przerośnięte biomasą Mucor racemosus CH52/3SC, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu monitorowanego pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i odwadniano 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obro-1 towej 120 minut-1. Odwodnioną i odlipidowaną biomasę, zaadsorbowaną w porach pianki poliuretanowej, suszono na powietrzu w czasie 18 godzin w temperaturze pokojowej. Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,1 g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 352,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,138 U/g preparatu.
P r z y k ł a d II.
Selektant Mucor racemosus oznaczony numerem CH52/3SC otrzymano postępując jak w przykładzie I, ale stosując aktywujące podłoże stałe zawierające 0,5 części koloidalnej chityny i ciekłe podłoże aktywujące zawierające 1 część chityny handlowej. Dalej postępowano jak w przykładzie I.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,6g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 375,7 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,142 U/g preparatu.
P r z y k ł a d III.
Selektant Mucor racemosus oznaczony numerem CH52//3SC otrzymano postępując jak w przykładzie I. Hodowlę wytworzonego selektanta prowadzono w fermentorze jak w przykładzie I. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej przerośnięte biomasą Mucor racemosus CH52/3SC, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą jak w przykładzie I, zamrożono do temperatury -45°C i poddano liofilizacji, produkt liofilizacji zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i ekstrahowano przez 10 minut w zakrytym naczyniu umiesz-1 czonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, następnie przemywano eterem naftowym i suszono na powietrzu w czasie 12 godzin w temperaturze pokojowej.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 18,1 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 368,1 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,139 U/g preparatu.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni Mucor racemosus, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be, w temperaturze 30°C w czasie 4-6 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, chitynę, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28-31°C w czasie 18 -1 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1 następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu od cieczy pohodowlanej, odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, znamienny tym, że preparaty otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor racemosus CH52/3SC, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20-30 części, brzeczki piwowarskiej 20-30 części, a nadto 0,5-1 części koloidalnej chityny pochodzącej z pancerzy krewetek, hodowlę inokulum prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części, chityny handlowej 0,5-1 części oraz 1000 części wody wodociągowej o barwie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 μS/cm, pH w zakresie 7,1-7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15° n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10-50 części, namoku kukurydzianego 30-73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fer-1 mentora z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik wyhodowanego selektanta, w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej, zaś otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus CH52/3SC oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że selektant pleśni Mucor racemosus CH52/3SC otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor racemosus CH52, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,5-1 części koloidalnej chityny pochodzącej z pancerzy krewetek, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be w temperaturze 30°C w czasie 72 godz., następnie wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,5-1 części handlowej chityny, 10-50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30-73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach określonych w zastrzeżeniu 1, o wyjściowym pH = 4,6-5,0 w temperaturze29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor racemosus powtarza się 3-krotnie, a otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,5-1 część koloidalnej chityny, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu8°Be, w temperaturze 4°C.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu polieteru o całkowicie otwartej strukturze komórkowej - pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyjnym TM23280, charakteryzującej się gęsto3 ścią 19-22 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 70 kPa i średnicą porów 2,20-3,40 mm, o wymiarach 250 x 120 x 10 mm.PL 217 332 B1
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przemycie wodą płatów pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus CH52/3SC monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczony na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie w czasie 12 godzin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL395968A PL217332B1 (pl) | 2011-08-16 | 2011-08-16 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL395968A PL217332B1 (pl) | 2011-08-16 | 2011-08-16 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL395968A1 PL395968A1 (pl) | 2013-02-18 |
| PL217332B1 true PL217332B1 (pl) | 2014-07-31 |
Family
ID=47682239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL395968A PL217332B1 (pl) | 2011-08-16 | 2011-08-16 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL217332B1 (pl) |
-
2011
- 2011-08-16 PL PL395968A patent/PL217332B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL395968A1 (pl) | 2013-02-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI68078B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av biologiskt aktiva mikroorganismmyceliepellets | |
| US20100086979A1 (en) | Production of omega-3 fatty acids in microflora of thraustochytriales using modified media | |
| JP4642351B2 (ja) | 共培養による没食子酸の調製法 | |
| Paranthaman et al. | Optimization of various culture media for tannase production in submerged fermentation by Aspergillus flavus | |
| CN103642698A (zh) | 高山被孢霉突变株及其应用 | |
| PL217332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| PL217339B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| CN101845397A (zh) | 一种培养金龟子绿僵菌的方法 | |
| CN103074243A (zh) | 一株伯克霍尔德氏菌qz7及其产生生物表面活性剂的应用 | |
| PL217361B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217686B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217360B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217358B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217695B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217359B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| Singh et al. | Chitinase production by Serratia marcescens GG5 | |
| CN114287462A (zh) | 一种蛋糕复合防腐乳化剂及其制备方法 | |
| Darah et al. | Tannase enzyme production by entrapped cells of Aspergillus niger FETL FT3 in submerged culture system | |
| RU2295563C1 (ru) | Штамм бактерий lactococcus lactis subspecies lactis вкпм в-8558, используемый в производстве молочных продуктов, и способ получения стартерной культуры штамма lactococcus lactis subspecies lactis вкпм в-8558 | |
| CN112375699B (zh) | 一株表达脂肪酶的地衣芽孢杆菌及其发酵产酶方法 | |
| Namasivayam et al. | Evaluation of organic waste liquor media for the production of alpha amylase using Aspergillus niger | |
| NO780862L (no) | Fremgangsmaate til fremmstilling av polysakkarid | |
| PL214332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| Fattah et al. | Production and properties of dextransucrase by free and immobilized cells of | |
| JP5641303B2 (ja) | アゾ染料分解剤およびアゾ染料の分解方法 |