PL217361B1 - Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus - Google Patents
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosusInfo
- Publication number
- PL217361B1 PL217361B1 PL396517A PL39651711A PL217361B1 PL 217361 B1 PL217361 B1 PL 217361B1 PL 396517 A PL396517 A PL 396517A PL 39651711 A PL39651711 A PL 39651711A PL 217361 B1 PL217361 B1 PL 217361B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- weight
- medium
- oil
- culture
- Prior art date
Links
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 title claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims description 8
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims description 8
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims description 8
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 42
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 20
- FPVVYTCTZKCSOJ-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol distearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FPVVYTCTZKCSOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229940100608 glycol distearate Drugs 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 16
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 15
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 12
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 12
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 11
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 11
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 8
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 8
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 claims description 8
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 claims description 8
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 7
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 5
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 4
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 229920005906 polyester polyol Polymers 0.000 claims description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001247 Reticulated foam Polymers 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 1
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus katalizującego hydrolizę oligolipidów.
Z opisu zgłoszenia patentowego P 385093 jest znany sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów ze szczepu pleśni Mucor circinelloides CH81, polegający na hodowli zarodników pleśni na podłożu stałym zawierającym chitozan lub chitooligosacharydy, agar, brzeczkę piwowarską o stężeniu 8 - 9°Be, w temperaturze 29 - 31°C, w czasie 3 - 5 dni, zmyciu zawiesiny zarodników z tego podłoża i zaszczepieniu nią podłoża inokulacyjnego, na którym prowadzi się hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28 - 31°C, w czasie 18 - 26 godzin, zaszczepieniu otrzymanym inokulum podłoża hodowlanego o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29 - 31°C, w czasie 42 - 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania, doprowadzając powietrze, oddzieleniu otrzymanej w wyniku hodowli produkcyjnej biomasy od cieczy pohodowlanej, przemyciu jej acetonem i suszeniu na powietrzu otrzymanego nierozpuszczalnego preparatu enzymatycznego. Hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany, chitynę, N-acetyloglukozoaminę lub chitozan oraz wodę destylowaną lub na podłożu zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany oraz wodę destylowaną względnie na podłożu zawierającym glukozę, bactopeptonu, ekstrakt drożdżowy, (NH4)2SO4, K2HPO4, MgSO4 x 7H2O, NaCl, CaCl2 oraz wodę destylowaną.
Ze zgłoszenia patentowego P 391955 jest znany sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides, przeznaczonego m.in. do hydrolizy estrów, ze szczepu pleśni Mucor circinelloides TZA45, polegający na hodowli zarodników pleśni na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01 - 0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20 - 30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7 - 11%, w temperaturze 29 - 31°C, w czasie 3 - 5 dni, zaszczepieniu zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, podłoża produkcyjnego o składzie w częściach wagowych: 10 - 15 części śruty kukurydzianej, 6 - 12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych, 9 - 14 części wysłodków buraczanych, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczniku na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m i substancji organicznej minimum 40% s.m. i 40 - 100 części wody wodociągowej lub o składzie: 10 - 15 części śruty kukurydzianej, 6 - 12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych, 12 - 18 części wytłoków jabłkowych i 40 - 100 części wody wodociągowej, o wyj3 ściowym pH 4,6 - 5,0 używając 3 - 7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzeniu hodowli statycznej w temperaturze 29 - 31°C w czasie 2 - 5 dni przy mieszaniu podłoża 1 - 8 razy na 24 godziny i przepuszczaniu przez złoże powietrza i po zakończeniu hodowli sporządzeniu z powstałej mieszaniny grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża stałego preparatu lipazy.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się szczep pleśni Mucor racemosus oznaczony symbolem A33, wyodrębniony z pancerzy krewetek.
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus katalizującego hydrolizę oligolipidów, w drodze hodowli pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be w temperaturze 29 - 31°C w czasie 3 - 5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6 - 5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28 - 31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28 - 31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu od cieczy pohodowlanej,
PL 217 361 B1 odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, według wynalazku polega na tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selekt anta pleśni Mucor racemosus A33/PPDGP, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20 - 30 części, brzeczki piwowarskiej 1000 części, a nadto 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego. Hodowlę inokuIum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10 - 50 części, namoku kukurydzianego 30 - 73 części, 1000 części 3 wody wodociągowej oraz 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego stosując 1 cm3 zarod3 ników na 100 cm3 podłoża, przy czym używa się wodę wodociągową o barwie większej niż 5 mg Pt (PN-EN ISO 7887 : 2002), mętności nie większej niż 0,4 NTU (PN-EN ISO 7027 : 2003), przewodności nie większej niż 500 μS/cm (PN-EN-27888 : 1999), pH w zakresie 7,1 - 7,4 (PN-90/C 04540.01), ChZT nie większym niż 1,75 (PN-ISO 15705 : 2005 PB-22.00 : 2009), twardości nie większej niż 15 °n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l (PB-03.00 : 2008) i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l (PN-ISO 6332 : 2001). Hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10 - 50 części, namoku kukurydzianego 30 - 73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentora z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego, o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tzw. pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyj3 nym S31380), charakteryzującej się gęstością 26 - 30 kg/ cm3, wytrzymałością na rozciąganie 125 kPa, średnicą porów 3,40 - 4,20 mm, o wymiarach 250 x 120 x 10 mm. Otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus A33/PPDGP oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej. Przemycie wodą monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej
120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie 12 godzin.
Selektant pleśni Mucor racemosus A33/PPDGP otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor racemosus A33, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego, 10 - 50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30 - 73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, o wyjściowym pH = 4,6 - 5,0 w temperaturze 29 - 31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb
20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor racemosus powtarza się 3-krotnie. Otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 0,5 część distearynianu glikolu polietylenowego, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie aktywnych i stabilnych preparatów enzymów z nowego selektanta Mucor racemosus A33/PPDGP, którego aktywność w reakcji hydrolizy oligolipidów jest większa o 28 - 35 % w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor racemosus A33. Wytworzone sposobem według wynalazku preparaty lipaz osadzonych na porowatej piance poliuretanowej są elastyczne i trwałe. Można je przycinać do potrzebnych wymiarów co umożliwia efektywne wypełnienie przestrzeni reaktora przeznaczonego do hydrolizy oligolipidów.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d I.
Szczep pleśni Mucor racemosus A33 wyodrębniony z pancerzy krewetek przeszczepiono na aktywujące podłoże stałe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 15 minut, o składzie w częściach wagowych; 0,2 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be i hodowano na tym podłożu w temperaturze 30°C
PL 217 361 B1 w czasie 72 godzin. Wyrosłe kolonie przenoszono za pomocą ezy na aktywujące podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000, 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego firmy Roquette, 1000 części wody wodociągowej o barwie nie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 μS/cm, pH w zakresie 7,1 - 7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15 °n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, o wyjściowym pH = 4,6 i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 29 - 31°C przez 24 godziny przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Procedurę hodowli pleśni na obydwu podłożach, stałym i ciekłym, powtarzano 3-krotnie.
Otrzymany w ten sposób selektant Mucor racemosus oznaczony numerem A33/PPDGP, wysiano na wysterylizowane termicznie w czasie 15 minut w temperaturze 121°C podłoże stałe o składzie w częściach wagowych: 0,2 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be i po 3 dniach hodowli w temperaturze 29 - 31°C zarodniki selektanta zmywano sterylną solą fizjologiczną zawierającą 0,01% Tritonu® X-100 stosując 8 ml soli fizjologicznej ma 1 skos. Otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, ciekłe podłoże hodowlane o składzie w częściach wagowych: 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000, 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jako podano wyżej, o wyjściowym pH 4,6, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28 - 31 °C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościo-1 wych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże o objętości 18 litrów wprowadzone do fermentora o objętości całkowitej 24 I, wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, o składzie analogicznym jak w hodowli inokulum, ale bez dodatku distearynianu glikolu polietylenowego, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża. Do mieszadła umieszczonego w fermentorze zamocowano w powtarzalny sposób prostopadłościenne płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego, o całkowicie otwartej strukturze komórkowej (tzw. pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyj3 nym S31380), charakteryzującej się gęstością 26 - 30 kg/ cm3, wytrzymałością na rozciąganie
125 kPa, średnicą porów 3,40 - 4,20 mm, o wymiarach 250 x 120 x 10 mm. Hodowlę prowadzono w temperaturze 28 - 31°C w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, -1 przy mieszaniu z szybkością obrotową 120 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej, przerośnięte biomasą Mucor racemosus A33/PPDGP, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu monitorowanego pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i odwadniano 10 minut w zakrytym na-1 czyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, a następnie ekstrahowano eterem naftowym. Odwodnioną i odlipidowaną biomasę, zaadsorbowaną w porach pianki poliuretanowej, suszono na powietrzu w czasie 12 godzin w temperaturze pokojowej.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 22,3 g z 1 I podłoża, którego aktywność w reakcji hydrolizy distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000 była większa o 28% w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor racemosus A33.
P r z y k ł a d II.
Selektant Mucor racemosus oznaczony numerem A33/PPDGP otrzymano postępując jak w przykładzie I, ale stosując aktywujące podłoże stałe zawierające 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000 i ciekłe podłoże aktywujące zawierające 0,2 części distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000.
Dalej postępowano jak w przykładzie I.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 19,4 g z 1 podłoża, którego aktywność w reakcji hydrolizy distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000 była większa o 33% w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor racemosus A33.
PL 217 361 B1
P r z y k ł a d III.
Selektant Mucor racemosus oznaczony numerem A33/PPDGP otrzymano postępując jak w przykładzie I. Hodowlę wytworzonego selektanta prowadzono w fermentorze jak w przykładzie I. Otrzymane w wyniku hodowli produkcyjnej płaty pianki poliuretanowej przerośnięte biomasą Mucor racemosus A33/PPDGP, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą jak w przykładzie I, zamrożono do temperatury -45°C i poddano liofilizacji, produkt liofilizacji zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą i ekstrahowano przez 10 minut w zakrytym -1 naczyniu umieszczonym na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, następnie przemywano eterem naftowym i suszono na powietrzu w czasie 12 godzin w temperaturze pokojowej.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat lipazy w ilości 18,6 g z 1 litra podłoża, którego aktywność w reakcji hydrolizy distearynianu glikolu polietylenowego Mc 6000 była większa o 35% w porównaniu z aktywnością wyjściowego szczepu Mucor racemosus A33.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus katalizującego hydrolizę oligolipidów, w drodze hodowli pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8°Be w temperaturze 29 - 31°C w czasie 3 - 5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę, o wyjściowym pH 4,6 - 5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28 - 31°C w czasie 18 godzin przy stop-1 niu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego oliwę z oliwek lub olej, korzystnie sojowy, słonecznikowy lub uniwersalny, namok kukurydziany i wodę i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28 - 31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu od cieczy pohodowlanej, odmyciu od rozpuszczalnych produktów metabolizmu oraz suszeniu, znamienny tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor racemosus A33/PPDGP, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20 - 30 części, brzeczki piwowarskiej 1000 części, a nadto 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego, hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10 - 50 części, namoku kukurydzianego 30 - 73 części, 1000 części wody wodocią3 gowej oraz 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego stosując 1 cm3 zarodników na 3100 cm3 podłoża, przy czym używa się wodę wodociągową o barwie większej niż 5 mg Pt, mętności nie większej niż 0,4 NTU, przewodności nie większej niż 500 μS/cm, pH w zakresie 7,1 - 7,4, ChZT nie większym niż 1,75, twardości nie większej niż 15 °n, o zawartości azotanów nie większej niż 4 mg/l i żelaza nie większej niż 0,2 mg/l, zaś hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: oliwy z oliwek lub oleju 10 - 50 części, namoku kukurydzianego 30 - 73 części oraz 1000 części wody wodociągowej o właściwościach jak podano wyżej, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentora z szybkością obrotową 120 minut-1 za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik wygodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej, a otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus A33/PPDGP oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że selektant pleśni Mucor racemosus A33/PPDGP otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor racemosus A33, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 05 części distearynianuPL 217 361 B1 glikolu polietylenowego, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be w temperaturze 30°C w czasie 72 godz., a następnie kolonie wyrosłe na podłożu stałym poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 0,5 części distearynianu glikolu polietylenowego, 10 - 50 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub uniwersalnego, 30 - 73 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej o właściwościach określonych w zastrzeżeniu 1, o wyjściowym pH = 4,6 - 5,0, w temperaturze 29 - 31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objęto-1 ściowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 180 min-1, przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor racemosus powtarza się 3-krotnie, a otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,2 - 0,5 część distearynianu glikolu polietylenowego, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego, o całkowicie otwartej strukturze komórkowej - pianki retykulowanej, uzyskanej w wyniku procesu termicznej retykulacji, o numerze klasyfikacyjnym S31380, charakteryzującej się 3 gęstością 26 - 30 kg/cm3, wytrzymałością na rozciąganie 125 kPa, średnicą porów 3,40 - 4,20 mm, o wymiarach 250 x 120 x 10 mm.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przemycie wodą płatów pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor racemosus A33/PPDGP monitoruje się pomiarem absorbancji A<0,05 dla długości fali λ=280 nm, odwodnienie acetonem prowadzi 3-krotnie stosując 15 części wagowych acetonu na 1 część wagową pianki przerośniętej biomasą w czasie 10 minut w zakrytym naczyniu umieszczony na wytrząsarce o szybkości obrotowej 120 minut-1, zaś suszenie prowadzi się na powietrzu w czasie 12 godzin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396517A PL217361B1 (pl) | 2011-10-03 | 2011-10-03 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396517A PL217361B1 (pl) | 2011-10-03 | 2011-10-03 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL396517A1 PL396517A1 (pl) | 2013-04-15 |
| PL217361B1 true PL217361B1 (pl) | 2014-07-31 |
Family
ID=48536267
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL396517A PL217361B1 (pl) | 2011-10-03 | 2011-10-03 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL217361B1 (pl) |
-
2011
- 2011-10-03 PL PL396517A patent/PL217361B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL396517A1 (pl) | 2013-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI68078C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av biologiskt aktiva mikroorganismmyceliepellets | |
| CN101955888B (zh) | 高产油脂皮状丝孢酵母b3及其ems和紫外线复合诱变选育方法 | |
| CN106801017A (zh) | 一种高产耐热蛋白酶及虫草素的蛹虫草菌株筛选及诱变方法 | |
| Ludemann et al. | Conidial production by Penicillium nalgiovense for use as starter cultures in dry fermented sausages by solid state fermentation | |
| Ibrahim et al. | Potential use of nylon scouring pad cubes attachment method for pectinase production by Aspergillus niger HFD5A-1 | |
| CN104774888B (zh) | 一种虫草素发酵固体培养基及其制备方法与应用 | |
| CN111154661B (zh) | 复合菌剂及其应用 | |
| Gutarra et al. | Lipase production and Penicillium simplicissimum morphology in solid‐state and submerged fermentations | |
| PL217361B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217360B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217686B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217359B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217358B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217695B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| Boakye et al. | Isolation, screening and identification of pectinolytic fungi from the soil of decomposed plant materials | |
| CN112980698B (zh) | 微生物发酵碳源及其制备方法 | |
| PL217332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| PL217339B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| CN104694607B (zh) | 一种固态发酵制备β-胡萝卜素的方法 | |
| CN114287462A (zh) | 一种蛋糕复合防腐乳化剂及其制备方法 | |
| Namasivayam et al. | Evaluation of organic waste liquor media for the production of alpha amylase using Aspergillus niger | |
| Boakye et al. | Isolation, Screening and Identification of Pectinolytic Fungi from the Soil of Decomposed Plant Materials. Fermentation 2025, 11, x | |
| Owusu et al. | Isolation, Screening and Identification of Pectinolytic Fungi from the Soil of Decomposed Plant Materials | |
| JP5641303B2 (ja) | アゾ染料分解剤およびアゾ染料の分解方法 | |
| RU2626528C2 (ru) | Иммобилизованный биокатализатор для получения фумаровой кислоты |