PL225341B1 - Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów - Google Patents
Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworówInfo
- Publication number
- PL225341B1 PL225341B1 PL408905A PL40890514A PL225341B1 PL 225341 B1 PL225341 B1 PL 225341B1 PL 408905 A PL408905 A PL 408905A PL 40890514 A PL40890514 A PL 40890514A PL 225341 B1 PL225341 B1 PL 225341B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- buffer
- tyr
- new compound
- abz
- val
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 5
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 title claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title description 4
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 49
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 claims description 27
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 claims description 26
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 24
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 23
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 23
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 14
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical group Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 7
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- JZUZJVFERQWLNC-FQEVSTJZSA-N fmoc-3-nitro-l-tyrosine Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 JZUZJVFERQWLNC-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 6
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 3-nitro-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 3
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 2
- 206010005056 Bladder neoplasm Diseases 0.000 claims 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tris[(dimethylamino)methyl]phenol Chemical compound CN(C)CC1=CC(CN(C)C)=C(O)C(CN(C)C)=C1 AHDSRXYHVZECER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100074988 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) nmp-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 4
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100025566 Chymotrypsin-like protease CTRL-1 Human genes 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000856199 Homo sapiens Chymotrypsin-like protease CTRL-1 Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 1
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWZHDKGQKYEBKK-UHFFFAOYSA-N 3-aminochromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(N)=CC2=C1 QWZHDKGQKYEBKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl carbamate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N)C3=CC=CC=C3C2=C1 ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- -1 Boc - tert-butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- VWBWQOUWDOULQN-UHFFFAOYSA-N nmp n-methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O.CN1CCCC1=O VWBWQOUWDOULQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000004963 pathophysiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyc zny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do w ykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów.
Nowy sposób analizy ludzkiego proteasomu 20S obecnego w moczu lub innych płynach biologicznych przy użyciu sondy fluorescencyjnej i jej zastosowanie do diagnostyki raka pęcherza.
Synteza peptydów na fazie stałej (nośniku) została wprowadzona po raz pierwszy w latach 80 ubiegłego wieku przez Bruca Merfielda, który za to osiągnięcie otrzymał nagrodę Nobla.
Proteasom jest multikatalitycznym kompleksem endopeptydazy (EC 3.4.25.1) odpowiedzialnym za nielizosomalne usuwanie białek uszkodzonych i nieprawidłowo ukształtowanych w wyniku wystąpienia mutacji lub pod wpływem czynników zewnętrznych powodujących stres oksydacyjny [1,2]. D otychczas opracowane związki umożliwiające oznaczanie aktywności proteasomu 20S lub 26S to krótkie peptydy zawierające 4-5 reszt aminokwasowych zawierające na C-końcu ugrupowanie fluorescencyjne. Związki te umożliwiają oznaczanie aktywności proteasomu w tym w obecności proteasomu lub innego enzymu proteolitycznego C-końcowa grupa fluorescencyjna ulega uwolnieniu wykazując wysoki stopień fluorescencji. Przykładowe sekwencje takich substratów fluorogenicznych opisano w pracy Ma [3], wykorzystując tego typu związki do oznaczania aktywności proteasomu w osoczu. Leu-Leu-Val-Tyr-AMC, AMC to aminokumaryna.
Przegląd danych literaturowych wskazuje że głównym obiektem badań monitorujących p oziom aktywności proteasomu są nowotwory układu krwionośnego [4]. Zdecydowana większość p ochodnych peptydowych będących substratami proteasomu została opracowana w laboratoriach komercyjnych takich jak Promega czy Molecular Probes [5]. Alternatywnie pomiar stężenia proteasomu przeprowadza się stosując techniki immunochemiczne (testy ELISA) [6] które wykorzystują rozpoznanie określonej podjednostki proteasomu przez określony typ przeciwciał. Jednak procedura ta jest czasochłonna i prowadzi do oznaczania całej populacji proteasomu a nie jego aktywnie e nzymatycznej frakcji.
Opracowany i otrzymany nowy związek - znakowany peptyd charakteryzuje się wysoką wartością stałej specyficzności (rzędu 7,5 x 10 M- x s-) oraz właściwym dla tego typu oznaczeń limitem oznaczalności i detekcji, wynoszącym odpowiednio 32 pM i 5 pM. Wartości te świadczą o tym że związek jest hydrolizowany przez proteasom z dużą wydajnością, a ponadto już w obecności 32 pM tego enzymu. Cała procedura oznaczania aktywności proteasomu wymaga niewiele czasu (60 minut), nieskomplikowana (wymaga zmieszania 2 roztworów oraz wymaga niewielkiej ilości łatwo dostępnego materiału biologicznego jakim jest ludzki mocz (minimalna objętość 50 μ^. Podstawową zaletą otrzymanego związku i związanej z nią metody jest możliwość diagnostyki nowotworu pęcherza moczowego poprzez opisaną poniżej procedurę. Wynik dodatni (wzrost fluorescencji w czasie) jest jednoznaczny z obecnością w moczu aktywnego proteasomu co z kolei silnie koreluje z obecnością nowotworu.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie związku i sposobów, które mogłyby być zastosowane do wykrywania nowotworów, korzystnie nowotworu pęcherza. Nieoczekiwanie problem ten został rozwiązany w istotnym stopniu w niniejszym wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest nowy związek o wzorze ogólnym:
ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5-Ala6-Met7-Gly8-(Tyr(3-NO2)9-NH2 gdzie: ABZ oznacza kwas 2-amino benzoesowy.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania nowego związku zdefiniowanego powyżej, gdzie w następujących etapach:
a) osadzenie Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH na żywicy TentaGel S RAM, poprzez przyłączenie pochodnej aminokwasowej Fmoc-Tyr(3-NO2) do wolnych grup aminowych żywicy,
b) żywicę przemyto DMF, a następnie usunięto osłony Fmoc z grupy aminowej,
c) przyłączono resztę aminokwasową Fmoc-Gly-OH,
d) w taki sam sposób wprowadzono kolejne chronione pochodne aminokwasowe: metioninę, alaninę, tyrozynę, serynę, dwukrotnie waliny i cząsteczkę kwasu 2-aminobenzoesowego (ABZ),
e) otrzymano peptyd oznakowany fluorescencyjnie: ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5-Ala6-Met7Gly8-(Tyr(3-NO2)9-NH2,
f) następnie amid peptydu usunięto z nośnika wraz z jednoczesnym usunięciem osłon bocznych za pomocą mieszaniny: TFA : fenol : woda : TIPS (88 : 5 : 5 : 2, v/v/v/v).
PL 225 341 B1
Sposób gdzie ABZ jest donorem fluorescencji na N-końcu, a 3-nitro-L-tyrozyna jest wygaszaczem fluorescencji na C-końcu.
Roztwór farmaceutyczny do wykrywania nowotworów zawierający substancję czynną i bufor gdzie jako substancję czynną zawiera nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 oraz bufor o pH
8,1-8,5.
Roztwór gdzie bufor ma pH korzystnie 8,3.
Roztwór gdzie bufor jest wybrany z grupy zawierającej TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
Roztwór, który wykrywa nowotwory, korzystnie nowotwór pęcherza moczowego.
Sposób określania obecności choroby nowotworowej, który obejmuje analizowanie in vitro pobranej od człowieka próbki moczu, do której dodaje się nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 i miesza się z buforem o pH 8,1-8,5.
Sposób gdzie dokonuje się w czasie 0 min, 30 min, 60 min. Pomiaru intensywności fluorescencji powstałej na skutek uwolnienia fragmentu zawierającego znacznik fluorescencyjny ABZ -Val -Val Ser4-Tyr5.
Sposób gdzie bufor ma pH korzystnie 8,3.
Sposób gdzie bufor jest wybrany z grupy TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
Sposób, który wykrywa nowotwory, korzystnie nowotwór pęcherza moczowego.
Zestaw do wykrywania nowotworów, korzystnie nowotworu pęcherza moczowego, który zawiera nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 oraz bufor o pH 8,1-8,5.
Zestaw gdzie bufor ma pH korzystnie 8,3.
Zestaw gdzie bufor jest wybrany z grupy TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
Zastosowanie hydrolizy in vitro nowego związku określonego powyżej gdzie w pozycji 5 poprzez proteasom 20S do wykrywania nowotworów, korzystnie nowotworu pęcherza.
Określenia stosowane powyżej oraz w opisie i zastrzeżeniach patentowych, mają następujące znaczenie:
Boc - grupa tert-butyloksykarbonylowa
Fmoc - grupa 9-fluorenylometoksykarbonylowa
DMF - dimetyloformamid
NMP - N-metylopirolidon
DCM - dichlorometan
TFA - Trifluoroacetic acid
TIPS - Triisopropylsilan
TRIS-HCI - Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride
ABZ - kwas 2-amino benzoesowy
Opis figur:
Fig. 1 - przedstawia wynik analizy chromatograficznej związku (A) w obecności ludzkiego proteasomu 20S (B) oraz w trakcie inkubacji z ludzkim moczem (C) po 5 minutach i (D) po 60 minutach.
Fig. 2 - Krzywa zależności intensywności fluorescencji od czasu dla próbek 42, 4,
16, 39 oraz H2 i H4. Fluorescencję monitorowano przy długości fali 450 nm.
Fig. 3 - przedstawia wyniki analizy próbek ludzkiego moczu osób zdrowych próbki
H (39) oraz zdiagnozowanym rakiem pęcherza (69).
Fig. 4 - przedstawia Blot próbek moczu osób ze zdiagnozowanym rakiem pęcherza moczowego.
Fig. 5 - przedstawia wyniki Elisa human proteasome 20S detection kit dla 6 próbek osób zdrowych / 15 chorych.
Tabela 1 - przedstawia przykładowe wartości aktywności proteosomu zależności fluorescencji w czasie dla próbek 42, 18, 27, 37 oraz H1 i H11.
Wynalazek ilustruje następujący przykład wykonania, nie stanowiący jego ograniczenia.
PL 225 341 B1
Przykład
I) Synteza nowego związku:
a) Pierwszym etapem syntezy było otrzymanie peptydu oznakowanego fluorescencyjnie który otrzymano metodą syntezy w fazie stałej z wykorzystaniem chemii Fmoc/tBu
Związek o sekwencji ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5-Ala6-Met7-Gly8-(Tyr(3-NO2)9-NH2, gdzie ABZ oznacza kwas 2-amino benzoesowy, otrzymano na drodze syntezy chemicznej w fazie stałej z wyk orzystaniem następujących pochodnych aminokwasowych.
Boc-ABZ, Fmoc-Val, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Ala, Fmoc-Met, Fmoc-Gly, Fmoc-Tyr(3-NO2).
Syntezę substratów peptydowych prowadzono na dwóch rodzajach nośnika stałego:
- żywicy TentaGel S RAM firmy RAPP Polymere (Niemcy) o osadzeniu 0,23 mmol/g
Syntezę wszystkich peptydów prowadzono w sposób manualny z zastosowaniem wytrząsarki laboratoryjnej. Przez większość etapów reaktorami była strzykawka zakończona spiekiem do syntezy w fazie stałej o pojemności 25 ml.
Wszystkie syntezowane substraty zawierały w swojej sekwencji na N-końcu kwas 2-aminobenzoesowy (ABZ) i cząsteczkę 3-nitro-L-tyrozyny położoną na C-końcu. ABZ pełnił rolę donora fluorescencji, natomiast Tyr(3-NO2) pełniła rolę wygaszacza fluorescencji. Peptydy w swojej sekwencji zawierały jedno miejsce reaktywne zlokalizowane pomiędzy resztami aminokwasowymi położonymi w pozycji P1-P1'.
Osadzenie Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH na żywicy TentaGel S RAM:
Syntezę peptydów wykonano na żywicy TentaGel S RAM firmy Rapp Polymere o osadzeniu 0,23 mmol/g. W pierwszym etapie dokonano spulchnienia żywicy poprzez cykl przemywań. Kolejno przystąpiono do usunięcia z nośnika osłony grupy aminowej Fmoc - za pomocą 20% roztworu piperydyny w NMP. Następnie przeprowadzono cykl przemywań rozpuszczalnikami. W celu potwierdzenia obecności wolnych grup aminowych wykonano test chloranilowy.
Cykl przemywań rozpuszczalnikami:
DMF 1 x 10 minut
IsOH 1 x 10 minut
DCM 1 x 10 minut
Usunięcie osłony Fmoc:
DMF 1 x 5 minut
20% piperydyna w NMP 1 x 3 minuty
20% piperydyna w NMP 1 x 8 minut
Cykl przemywań rozpuszczalnikami:
DMF 3 x 2 minuty
IsOH 3 x 2 minuty
DCM 3 x 2 minuty
Test chloranilowy:
Test chloranilowy polegał na przeniesieniu za pomocą łopatki, kilku ziaren żywicy z reaktora strzykawki do szklanej ampułki, do której następnie dodano 100 gl nasyconego roztworu p-chloranilu w toluenie i 50 gl świeżego aldehydu octowego. Po upływie 10 minut przeprowadzono kontrolę zabarwienia ziaren.
Na tym etapie po przeprowadzeniu testu otrzymano zielone zabarwienie ziaren, które świadczyło o obecności wolnych grup aminowych. Po potwierdzeniu usunięcia osłon fluorenylometoksykarbonylowych z żywicy można było przystąpić do kolejnego etapu, przyłączania pochodnej aminokwasowej Fmoc-Tyr(3-NO2) .
Przyłączanie Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH do żywicy:
Wszystkie przyłączania reszt aminokwasowych poprzedzono przemywaniem żywicy za pomocą DMF przez 5 minut. W kolejnych przyłączan iach stosowano diisopropylokarbodiimid jako środek sprzęgający. Procedurę powtarzano dwukrotnie.
PL 225 341 B1
Po każdym z acylowań rozpoczynano cykl przemywań żywicy, a następnie wykonywano test chloranilowy, w celu monitorowania przyłączania pochodnej aminokwasowej Fmoc-Tyr(3-NO2) do wolnych grup aminowych żywicy.
Cykl przemywań rozpuszczalnikami:
DMF 3 x 2 minuty
IsOH 3 x 2 minuty
DCM 3 x 2 minuty
Test chloranilowy:
W wyniku przeprowadzonych testów po dwóch pierwszych sprzęganiach zabarwienie ziaren najpierw było zielone, a następnie szare, więc konieczne było przeprowadzenie kolejnego acylowania, w wyniku którego ziarna żywicy badanej testem chloranilowym były bezbarwne. Świadczyło to przyłączeniu Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH do żywicy TentaGel S RAM, co pozwoliło przejść do następnego etapu syntezy peptydu.
Przyłączanie kolejnych chronionych reszt aminokwasowych:
Żywicę wraz z przyłączoną resztą Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH znajdującą się w reaktorku przemyto za pomocą DMF, a następnie przystąpiono do deprotekcji osłony Fmoc z grupy aminowej w celu przyłączenia chronionej pochodnej aminokwasowej glicyny.
Usunięcie osłony Fmoc:
DMF 1 x 5 minut
20% piperydyna w NMP 1 x 3 minuty
20% piperydyna w NMP 1 x 8 minut
Cykl przemywań rozpuszczalnikami:
DMF 3 x 2 minuty
IsOH 3 x 2 minuty
DCM 3 x 2 minuty
Test chloranilowy:
W wyniku przeprowadzenia testu chloranilowego otrzymano wynik pozytywny, o czym świadczyło zielone zabarwienie ziaren żywicy. Pozwoliło to na rozpoczęcie kolejnego etapu - przyłączania reszty aminokwasowej Fmoc-Gly-OH.
Przyłączanie pochodnej aminokwasowej:
Wykonywane sprzęgania poprzedzono przemywaniem żywicy w DMF. Podczas przyłączania chronionej reszty glicyny skład mieszaniny sprzęgającej pozostawał bez zmian.
Po zakończeniu każdego z acylowań stosowano cykl przemywań rozpuszczalnikami według podanej procedury, a następnie przeprowadzono test chloranilowy na obecność wolnych grup aminowych w roztworze.
Cykl przemywań rozpuszczalnikami:
DMF 3 x 2 minuty
IsOH 3 x 2 minuty
DCM 3 x 2 minuty
Test chloranilowy:
Ziarna żywicy testu przeprowadzonego po drugim acylowaniu były bezbarwne, co pozwoliło na przejście do kolejnego etapu syntezy, jakim było wprowadzenie kolejnych chronionych pochodnych aminokwasowych - metioniny, alaniny, tyrozyny, seryny, dwukrotnie waliny i cząsteczki kwasu 2-aminobenzoesowego. Procesy sprzęgania odbyły się zgodnie z procedurą omówioną wcześniej.
Testy przeprowadzone po przyłączeniu wyżej wymienionych reszt wykazały wyniki pozytywne, ziarna żywicy były bezbarwne.
b) Usuwanie peptydu z nośnika
Po zakończeniu syntezy amid peptydu usunięto z nośnika wraz z jednoczesnym usunięciem osłon bocznych za pomocą mieszaniny: TFA : fenol : woda : TIPS (88 : 5 : 5 : 2, v/v/v/v) w kolbie okrągłodennej na mieszadle magnetycznym.
PL 225 341 B1
Po upływie 3 godzin zawartość kolby sączyło się pod zmniejszonym ciśnieniem na lejkach ze spiekiem Schotta przemywając eterem dietylowym. Powstały osad odwirowano na wirówce SIGMA
2K30 (Laboratory Centrifuges) w czasie 20 minut. Osad otrzymany po wirowaniu rozpuszcza się w wodzie przy pomocy ultradźwięków, a następnie poddano liofilizacji.
c) Tożsamość/charakterystyka nowego związku - analiza HPLC, MS oraz NMR
HPLC warunki: kolumna RP Bio Wide Pore Supelco C8 250 mm 4 mm, układ faz A 0,1% TFA w wodzie, B: 80% acetonitrylu w A), przepływ 1 ml/min, detekcja UV przy 226 nm.
tR 20.60
MS MALDI TOF matryca kwas alfa cynamonowy masa cząsteczkowa 1054,23 Da obliczona 1053,1 H1 NMR 500 MHz s 8,50 (1H); m 8,00 (11 H); m 7,5-7,1 (11H); m 6,7-6,5 (5H); s 6,3 (2H); s 5,42 (2H); m 4,8 (3H); m 4,7-4,4 (4H); m 4,1 (4H); m 3,9-3,7 (2H); s 3,6 (1H); m 3,4-3,2 (4H); m 2,7 (2H); m 2,06 (2H); m 1,5 (3H); m 0,8 (12H)
II) Badania potwierdzające
a) Wyniki na modelach/walidacja
Otrzymany nowy związek jest efektywnie hydrolizowany przez podjednostkę chymotrypsynopodobną ludzkiego proteasomu 20S. Ten wewnątrzkomórkowy kompleks enzymatyczny w określonych stanach patofizjologicznych wydostaje się z komórki i krąży w osoczu i innych płynach ustrojowych w tym moczu.
W wyniku prowadzonej hydrolizy enzymatycznej powstają dwa fragmenty: ABZ-Val-Val-Ser-TyrOH - silnie fluorescencyjny, którego wzrost stężenia w czasie jest podstawą testu oraz C-końcowy fragment Ala-Met-Gly-Tyr(3-NO2)-NH2 pozbawiony właściwości fluorescencyjnych. (Fig. 1A, 1B). Wzrost fluorescencji w obecności proteasomu jest proporcjonalny do jego stężenia.
Analiza HPLC i MS potwierdza obecność omawianych wyżej fragmentów związku ABZ-Val-ValSer-Tyr-OH oraz Ala-Met-Gly-Tyr(3-NO2)-NH2 powstałych w wyniku trawienia przez podjednostkę chymotrypsynopodobną proteasomu 20S (rys. 1 B). Zahamowanie jej aktywności poprzez użycie selektywnego inhibitora tej podjednostki powoduje brak hydrolizy związku.
b) Wyniki w moczu
Procedura oznaczania aktywności proteasomu w próbce przebiegała następująco. Badaną próbkę moczu (50 μΊ) mieszano z buforem Tris HCl pH 8,3 w stosunku 1:1. Do tak przygotowanej mieszaniny dodano roztworu związku 100 μl w podanym wyżej buforze. Tak otrzymaną mieszaninę inkubowano w temp 37°C. Pomiar fluorescencji układu wykonywano przy długości fali wzbudzenia 320 nm a emisji fluorescencji 450 nm. Pomiar prowadzono w sposób ciągły lub w wybranych odstępach czasu tj.: 0, 30 minut, 60 minut. Podobne wyniki uzyskano w buforze HEPES lecz buforze tym związek wykazywał słabą rozpuszczalność, w buforach fosforanowym i BisTris o analogicznej wartości pH szybkość wzrostu fluorescencji była niższa.
Inkubacja otrzymanego nowego związku w moczu pochodzącego od osób chorych na raka pęcherza i analiza chromatograficzna takiej mieszaniny skutkuje powstaniem fragmentów związku tożsamych z opisanymi wyżej gdzie w systemie zastosowano izolowany proteasom 20S. Użycie selektywnych inhibitorów podjednostki chymotrypsynopodobnej powoduje brak rozpadu związku. Rozp adu związku nie obserwuje się w moczu pochodzących od zdrowych ochotników (Fig. 1C, 1D).
Przebadano 108 próbek (69 pochodzących od osób chorych i 39 zdrowych) przy użyciu opracowanego nowego związku wykazała że większość próbek pochodzących od pacjentów chorych (61) wykazuje wzrost fluorescencji świadczący o rozpadzie peptydu pod wpływem proteasomu. Przykładowe krzywe zależności fluorescencji w czasie dla próbek 42, 18, 27, 37 oraz H1 i H11 przedstawiono na Fig. 2 oraz tabeli 1. Żadna z próbek zdrowych takiego wzrostu nie wykazała (Fig. 3).
Test potwierdzający - BLOT
Analiza immunochemiczna tj. SDS PAGE próbek moczu zdrowych osób (ochotników) i chorych na raka pęcherza a następnie półsuchy transfer na membranę i inkubacja z przeciwciałem antyproteasome 20S ujawniła obecność prążków tylko w materiale pochodzącym od osób chorych (Fig. 4).
PL 225 341 B1
Test potwierdzający - ELISA
Badane próbki analizowano zestawem ELISA wykrywającym proteasom 20S. Otrzymane wyniki silnie korelują z tymi otrzymanymi przy użyciu nowego związku będącego przedmiotem wynalazku (Fig. 5).
Literatura:
1. Borissenko L., Groll M., Diversity of proteasomal missions: fine tuning of the immune response, Biol. Chem., 388, 947-955, 2007.
2. Groll M., Bochtler M., Brandstetter H., Clausen T., Huber R., Molecular machines for protein degradation, ChemBioChem., 6, 222-256, 2005.
3. Ma W, Kantarjian H, O'Brien S, Jilani I, Zhang X, Estrov Z, et al. Enzymatic activity of circulating proteasomes correlates with clinical behavior in patients with chronic lymphocytic leukemia. Cancer 2008; 112: 1306-12.
4. Ostrowska H, Hempel D, Holub M, Sokolowski J, Kloczko J. Assessment of circulating proteasome chymotrypsin-like activity in plasma of patients with acute and chronic leukemias. Clin Biochem. 2008 Nov; 41 (16-17): 1377-83.
5. www.promega.com
6. Ma W, Kantarjian H, O'Brien S, Jilani I, Zhang X, Estrov Z, et al. Enzymatic activity of circulating proteasomes correlates with clinical behavior in patients with chronic lymphocytic leukemia. Cancer 2008; 112: 1306-12.
Claims (16)
1. Nowy związek o wzorze ogólnym:
ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5-Ala6-Met7-Gly8-(Tyr(3-NO2)9-NH2 gdzie:
ABZ oznacza kwas 2-amino benzoesowy.
2. Sposób otrzymywania nowego związku zdefiniowanego w zastrzeżeniu 1, znamienny tym, że w następujących etapach:
g) osadzenie Fmoc-Tyr(3-NO2)-OH na żywicy TentaGel S RAM, poprzez przyłączenie pochodnej aminokwasowej Fmoc-Tyr(3-NO2) do wolnych grup aminowych żywicy,
h) żywicę przemyto DMF, a następnie usunięto osłony Fmoc z grupy aminowej,
i) przyłączono resztę aminokwasową Fmoc-Gly-OH,
j) W taki sam sposób wprowadzono kolejne chronione pochodne aminokwasowe: metioninę, alaninę, tyrozynę, serynę, dwukrotnie waliny i cząsteczkę kwasu 2-aminobenzoesowego (ABZ),
k) otrzymano peptyd oznakowany fluorescencyjnie: ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5-Ala6-Met7Gly8-(Tyr(3-NO2)9-NH2,
l) następnie amid peptydu usunięto z nośnika wraz z jednoczesnym usunięciem osłon bocznych za pomocą mieszaniny: TFA : fenol : woda : TIPS (88 : 5 : 5 : 2, v/v/v/v) .
3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że ABZ jest donorem fluorescencji na N-końcu, a 3-nitro-L-tyrozyna jest wygaszaczem fluorescencji na C-końcu.
4. Roztwór farmaceutyczny do wykrywania nowotworów zawierający substancję czynną i bufor, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 oraz bufor o pH 8,1-8,5.
5. Roztwór według zastrz. 3, znamienny tym, że bufor ma pH korzystnie 8,3.
6. Roztwór według zastrz. 3, znamienny tym, że bufor jest wybrany z grupy zawierającej TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
7. Roztwór według zastrz. 3, znamienny tym, że wykrywa nowotwory, korzystnie nowotwór pęcherza moczowego.
8. Sposób określania obecności choroby nowotworowej, znamienny tym, że obejmuje analizowanie in vitro pobranej od człowieka próbki moczu, do której dodaje się nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 i miesza się z buforem o pH 8,1 -8,5.
PL 225 341 B1
9. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że dokonuje się w czasie 0 min, 30 min, 60 min, pomiaru intensywności fluorescencji powstałej na skutek uwolnienia fragmentu zawierającego znacznik fluorescencyjny ABZ1-Val2-Val3-Ser4-Tyr5.
10. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że bufor ma pH korzystnie 8,3.
11. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że bufor jest wybrany z grupy TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
12. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że wykrywa nowotwory, korzystnie nowotwór pęcherza moczowego.
13. Zestaw do wykrywania nowotworów, korzystnie nowotworu pęcherza moczowego, znamienny tym, że zawiera nowy związek określony w zastrzeżeniu 1 oraz bufor o pH 8,1-8,5.
14. Zestaw według zastrz. 13, znamienny tym, że bufor ma pH korzystnie 8,3.
15. Zestaw według zastrz. 13, znamienny tym, że bufor jest wybrany z grupy TRIS HCl, bufor fosforanowy, HEPES, BisTRIS, korzystnie TRIS-HCI.
16. Zastosowanie hydrolizy in vitro nowego związku określonego w zastrzeżeniu 1 w pozycji 5 poprzez proteasom 20S do wykrywania nowotworów, korzystnie nowotworu pęcherza.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL408905A PL225341B1 (pl) | 2014-07-17 | 2014-07-17 | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL408905A PL225341B1 (pl) | 2014-07-17 | 2014-07-17 | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL408905A1 PL408905A1 (pl) | 2016-01-18 |
| PL225341B1 true PL225341B1 (pl) | 2017-03-31 |
Family
ID=55072340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL408905A PL225341B1 (pl) | 2014-07-17 | 2014-07-17 | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL225341B1 (pl) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3431490A1 (en) * | 2017-07-17 | 2019-01-23 | Uniwersytet Gdanski | Chemical compounds for use as diagnostic markers of inflammation and neoplams, the method for synthesis of the chemical compounds, diagnostic kit for use in diagnosis of inflammatory processes and epithelial neoplasms and in vitro diagnostic method of inflammatory processes and epithelial neoplasms |
| PL422233A1 (pl) * | 2017-07-17 | 2019-01-28 | Uniwersytet Gdański | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, zestaw zawierający nowy związek oraz zastosowanie nowego związku do wykrywania nowotworów nabłonkowych. |
| WO2020017984A1 (en) * | 2018-07-14 | 2020-01-23 | Uniwersytet Gdanski | Chemical compounds for use as diagnostic markers of inflammation and neoplasms |
| EP3919911A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-08 | Urteste S.A. | Novel diagnostic marker for prostate cancer |
-
2014
- 2014-07-17 PL PL408905A patent/PL225341B1/pl unknown
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3431490A1 (en) * | 2017-07-17 | 2019-01-23 | Uniwersytet Gdanski | Chemical compounds for use as diagnostic markers of inflammation and neoplams, the method for synthesis of the chemical compounds, diagnostic kit for use in diagnosis of inflammatory processes and epithelial neoplasms and in vitro diagnostic method of inflammatory processes and epithelial neoplasms |
| PL422233A1 (pl) * | 2017-07-17 | 2019-01-28 | Uniwersytet Gdański | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, zestaw zawierający nowy związek oraz zastosowanie nowego związku do wykrywania nowotworów nabłonkowych. |
| PL238575B1 (pl) * | 2017-07-17 | 2021-09-06 | Univ Gdanski | Związek oraz jego zastosowanie do wykrywania nowotworów nabłonkowych |
| WO2020017984A1 (en) * | 2018-07-14 | 2020-01-23 | Uniwersytet Gdanski | Chemical compounds for use as diagnostic markers of inflammation and neoplasms |
| EP3919911A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-08 | Urteste S.A. | Novel diagnostic marker for prostate cancer |
| WO2021246883A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Urteste S.A. | Novel diagnostic marker for prostate cancer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL408905A1 (pl) | 2016-01-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL225341B1 (pl) | Nowy związek, sposób jego otrzymywania, roztwór farmaceutyczny zawierający nowy związek, sposób określania obecności choroby nowotworowej, zestaw do wykrywania nowotworów oraz zastosowanie hydrolizy nowego związku do wykrywania nowotworów | |
| KR20240099390A (ko) | Fret 효소 기질 및 간암에서의 그 용도 | |
| Feliu et al. | Synthesis of an 8‐Benzyl‐4‐(p‐substituted‐benzyl)‐1, 4, 8‐triazaspiro [4.5] decan‐2‐one Library on SynPhase TMLanterns | |
| US20250270617A1 (en) | Compound - diagnostic marker for kidney cancer, method for detecting enzymatic activity, method for diagnosis of kidney cancer, kit comprising the compound, uses of the compound and method for the treatment of kidney cancer | |
| US20250003970A1 (en) | Fret enzymatic substrate and uses thereof in lung cancer | |
| US20250206777A1 (en) | Compound - diagnostic marker for intestinal cancer, method for detecting enzymatic activity, method for diagnosis of intestinal cancer, kit comprising the compound, uses of the compound and method for the treatment of intestinal cancer | |
| CN112794878B (zh) | 去泛素化酶活性探针及其制备和应用 | |
| PL238575B1 (pl) | Związek oraz jego zastosowanie do wykrywania nowotworów nabłonkowych | |
| EP3431490B1 (en) | Chemical compounds for use as diagnostic markers of inflammation and neoplams, the method for synthesis of the chemical compounds, diagnostic kit for use in diagnosis of inflammatory processes and epithelial neoplasms and in vitro diagnostic method of inflammatory processes and epithelial neoplasms | |
| JP2026500952A (ja) | 化合物 － 胆道がんの診断マーカー、酵素活性の検出法、胆道がんの診断法、本化合物を含むキット、本化合物の使用、及び胆道がんの治療法 | |
| PL245425B1 (pl) | Związek-marker diagnostyczny raka trzonu macicy, sposób wykrywania aktywności enzymatycznej, sposób diagnozowania raka trzonu macicy, zestaw zawierający taki związek oraz związek do zastosowania medycznego | |
| TWI776812B (zh) | 血管收縮素-1-受體拮抗劑 | |
| HK40113726A (zh) | 化合物-肾癌诊断标志物、酶活性检测方法、肾癌诊断方法、包含该化合物的试剂盒、化合物的用途及肾癌治疗方法 | |
| PL236125B1 (pl) | Związki chemiczne mające zastosowanie jako markery diagnostyczne stanu zapalnego i nowotworów, sposób ich otrzymywania, marker diagnostyczny i metoda diagnozowania procesów zapalnych i nowotworów nabłonkowych | |
| JP2025535688A (ja) | 化合物 － 卵巣がん用診断マーカー、酵素活性の検出法、卵巣がんの診断法、本化合物を含むキット、本化合物の使用、及び卵巣がんの治療法 | |
| EP3464324B1 (en) | Angiotensin-1-receptor antagonists | |
| HK40129291A (zh) | 化合物-用於胆道癌的诊断标志物、用於检测酶活性的方法、用於诊断胆道癌的方法、包括该化合物的试剂盒、该化合物的用途和用於治疗胆道癌的方法 | |
| HK40111059A (zh) | 化合物——肠癌诊断标志物、酶活性检测方法、肠癌诊断方法、包含该化合物的试剂盒、化合物的用途和治疗肠癌的方法 | |
| Terrett | Combinatorial Chemistry Online Volume 12, Issue 3, March 2010 | |
| PL238699B1 (pl) | Związek chemiczny mający zastosowanie jako marker diagnostyczny nowotworów, sposób otrzymywania, metoda diagnozowania nowotworów nabłonkowych | |
| HK40004701A (en) | Angiotensin-1-receptor antagonists | |
| HK40004701B (en) | Angiotensin-1-receptor antagonists |