PL237895B1 - Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny - Google Patents
Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny Download PDFInfo
- Publication number
- PL237895B1 PL237895B1 PL427994A PL42799418A PL237895B1 PL 237895 B1 PL237895 B1 PL 237895B1 PL 427994 A PL427994 A PL 427994A PL 42799418 A PL42799418 A PL 42799418A PL 237895 B1 PL237895 B1 PL 237895B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- amino
- methyl
- group
- propanol
- chiral
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- HFFXLYHRNRKAPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichloro-n-(5-methyl-1,2-oxazol-3-yl)benzenesulfonamide Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C(=CC(Cl)=C(Cl)C=2)Cl)=N1 HFFXLYHRNRKAPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 12
- CDZNRTDXHPIGIS-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-phenyl-1,2,4,5,8,10,11,12-octazatricyclo[7.3.0.03,7]dodeca-3,6,9,11-tetraene Chemical class CN1N=C2C(N=C3N(N2C2=CC=CC=C2)N=NN3)=C1 CDZNRTDXHPIGIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 10
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 title abstract description 29
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 title description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- -1 sulfonamide derivatives of 5-phenyl-7-methyl-pyrazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazine Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 25
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 16
- BKMMTJMQCTUHRP-VKHMYHEASA-N (S)-2-aminopropan-1-ol Chemical compound C[C@H](N)CO BKMMTJMQCTUHRP-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 12
- HXKKHQJGJAFBHI-VKHMYHEASA-N (2s)-1-aminopropan-2-ol Chemical group C[C@H](O)CN HXKKHQJGJAFBHI-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- VPSSPAXIFBTOHY-LURJTMIESA-N (2s)-2-amino-4-methylpentan-1-ol Chemical group CC(C)C[C@H](N)CO VPSSPAXIFBTOHY-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- HXKKHQJGJAFBHI-GSVOUGTGSA-N (2R)-1-aminopropan-2-ol Chemical group C[C@@H](O)CN HXKKHQJGJAFBHI-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 8
- NWYYWIJOWOLJNR-YFKPBYRVSA-N (2r)-2-amino-3-methylbutan-1-ol Chemical compound CC(C)[C@@H](N)CO NWYYWIJOWOLJNR-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 8
- VPSSPAXIFBTOHY-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-amino-4-methylpentan-1-ol Chemical group CC(C)C[C@@H](N)CO VPSSPAXIFBTOHY-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims description 8
- JCBPETKZIGVZRE-SCSAIBSYSA-N (2r)-2-aminobutan-1-ol Chemical group CC[C@@H](N)CO JCBPETKZIGVZRE-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 8
- JCBPETKZIGVZRE-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-aminobutan-1-ol Chemical group CC[C@H](N)CO JCBPETKZIGVZRE-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- BKMMTJMQCTUHRP-GSVOUGTGSA-N (2r)-2-aminopropan-1-ol Chemical compound C[C@@H](N)CO BKMMTJMQCTUHRP-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 7
- KQIGMPWTAHJUMN-GSVOUGTGSA-N (2r)-3-aminopropane-1,2-diol Chemical group NC[C@@H](O)CO KQIGMPWTAHJUMN-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- NWYYWIJOWOLJNR-RXMQYKEDSA-N l-valinol Chemical compound CC(C)[C@H](N)CO NWYYWIJOWOLJNR-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical class ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical group CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 11
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 15
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 7
- 239000012983 Dulbecco’s minimal essential medium Substances 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 5
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KQIGMPWTAHJUMN-VKHMYHEASA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical group NC[C@H](O)CO KQIGMPWTAHJUMN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 3
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 238000007474 nonparametric Mann- Whitney U test Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-triazine Chemical compound C1=CN=NC=N1 FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFXBWNXDRSGNIM-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-5-methylsulfonyl-1-phenylpyrazolo[4,3-e][1,2,4]triazine Chemical compound C12=NN=C(S(C)(=O)=O)N=C2C(C)=NN1C1=CC=CC=C1 LFXBWNXDRSGNIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- NVACTJFOPRYGEK-UHFFFAOYSA-N n-(1-hydroxypropan-2-yl)benzenesulfonamide Chemical compound OCC(C)NS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 NVACTJFOPRYGEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 1
- HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N sulfonyldimethane Chemical group CS(C)(=O)=O HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku są chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny przedstawione ogólnym wzorem 1. Związki które wykazują aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną. Przedmiotem wynalazku jest także sposób wytwarzania chiralnych sulfonamidowych pochodnych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4] triazyny o ogólnym wzorze 1, a także zastosowania takich związków i kompozycja farmaceutyczna je zawierająca.
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe, chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1, sposób ich wytwarzania oraz ich zastosowania związane z aktywnością przeciwnowotworową, cytotoksyczną i/lub cytostatyczną, w szczególności względem komórek nowotworowych, zwłaszcza komórek raka sutka, jak również kompozycje farmaceutyczne je zawierające.
Ze stanu techniki znana jest pochodna 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, która wykazuje działanie przeciwnowotworowe, jak również znane są sposoby jej syntezy (Mojzych M, Chem. Soc. Pak., 2011,33, 123-128; Mojzych M, Rykowski A, Heterocycles, 2004, 63, 18291838).
Z patentu nr PL-198966 oraz z piśmiennictwa (Mojzych M, Rykowski A, Heterocycles, 2004, 63, 1829-1838) znana jest 5-fenylo-7-metylo-1/7-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyna oraz synteza 1 -fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1 /7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny.
Celem niniejszego wynalazku było dostarczenie nowych związków nadających się do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka, w szczególności zaś związków o działaniu cytotoksycznym, cytostatycznym i antyproliferacyjnym. Celem niniejszego wynalazku było także dostarczenie sposobu wytwarzania takich związków oraz kompozycji farmaceutycznych do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka.
Cele te zrealizowano przy pomocy rozwiązań przedstawionych w załączonych zastrzeżeniach patentowych. Nieoczekiwanie stwierdzono bowiem, że cele te można zrealizować z zastosowaniem chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny.
Przedmiotem wynalazku jest chiralna pochodna 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1:
H.C 4 wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy (S)-(+)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (S)-(+)-1-amino-2-propanolowej, grupy (R)-(-)-1-amino-2-propanolowej, grupy (S)-(+)-leucynolowej, grupy (R)-(-)-leucynolowej, grupy (S)-(+)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (R)-(-)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-1-propanolowej i grupy (R)-(-)-2-amino-1 -propanolowej.
Korzystnie w związku o wzorze 1 według wynalazku R oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową.
Korzystnie w związku o wzorze 1 R oznacza grupę (S)-(+)-leucynolową.
Korzystnie w związku o wzorze 1 według wynalazku R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-1-propanolową.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób wytwarzania chiralnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1.
PL 237 895 Β1
H.C 4 wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy (S)-(+)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (S)-(+)-1-amino-2-propanolowej, grupy (R)-(-)-1-amino-2-propanolowej, grupy (S)-(+)-leucynolowej, grupy (R)-(-)-leucynolowej, grupy (S)-(+)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (R)-(-)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-1-propanolowej i grupy (R)(-)-2-amino-1-propanolowej, znamienny tym, że 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę w reakcji z kwasem chlorosulfonowym, a następnie tak otrzymaną pochodną chlorosulfonową poddaje reakcji z enancjomerem chiralnego aminoalkoholu wybranym z grupy składającej się z (R-(-)-1-amino-2-propanolu, S-(+)-1-amino-2-propanolu, R-(-)-2-amino-1 -propanolu, S-(+)-2-amino-1 -propanolu, R-(-)-2-amino-3-methyl-1-butanolu, S-(+)-2-amino-3-methyl-1 -butanolu, R-3-amino-1,2-propanediolu, S-3-amino-1,2-propanediolu, R-(-)-leucynolu, S-(+)-leucynolu, (R)-(+)-2-amino-1 -butanolu i (S)-(+)-2-amino-1-butanolu, po czym prowadzi się reakcję substytucji nukleofilowej z azydkiem sodu w bezwodnym etanolu.
Korzystnie otrzymaną tak chiralną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny oczyszcza się ponadto chromatograficznie, korzystniej z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto chiralna pochodna jak określono powyżej do zastosowania jako lek.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto chiralna pochodna jak określono powyżej do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto chiralna pochodna jak określono powyżej do zastosowania jako lek do leczenia raka sutka.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto chiralna pochodna jak określono powyżej do zastosowania jako środek cytostatyczny.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto chiralna pochodna jak określono powyżej do zastosowania jako środek cytotoksyczny.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że zawiera chiralną pochodną jak określono powyżej oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę.
Korzystnie kompozycja według wynalazku zawiera jako składnik aktywny chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową.
Korzystnie kompozycja według wynalazku zawiera jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę (S)-(+)-leucynolową.
Korzystnie kompozycja według wynalazku zawiera jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-1-propanolową.
Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 będące przedmiotem niniejszego zgłoszenia patentowego mają w pełni odmienną strukturę od związków opisanych w piśmiennictwie i charakteryzują się tym, że podstawnik R w ogólnym wzorze 1 oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową, (R)-(-)-1-amino-2-propanolową, (S)-(+)-2-amino-1 -propanolową, (R)-(-)-2-amino-1 -propanolową, (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1 -butanolową, (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolową, (S)-(+)-3-amino-1,2-propanodiolową, (R)-(-)-2-amino4
PL 237 895 Β1
-1,2-propanodiolową, (S)-(+)-leucynolową, (R)-(-)-leucynolową, (S)-(+)-2-amino-1 -butanolową lub (R)-(-)-2-amino-1 -butanolową.
W wyniku przeprowadzonych prób i badań okazało się, że związki według wynalazku, o ogólnym wzorze 1, wykazują działania przeciwnowotworowe, cytotoksyczne, cytostatyczne i antyproliferacyjne względem komórek nowotworowych, w szczególności komórek raka sutka, i mogą być zatem stosowane jako leki, w szczególności leki do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka. Dzięki swoim właściwościom związki według wynalazku mogą być także stosowane jako środki cytostatyczne i/lub cytotoksyczne.
Wyniki badań biologicznych dla związków według wynalazku przedstawiono w przykładach, w szczególności w Tabeli 2 (związki numer 1 do 12).
Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny będące przedmiotem niniejszego zgłoszenia patentowego otrzymywane są nowym sposobem wytwarzania, innym niż sposoby wytwarzania znane w stanie techniki.
Sposób wytwarzania chiralnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku polega na wprowadzeniu do 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny chiralnego podstawnika sulfonamidowego. W pierwszym etapie syntezy znaną 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo [4,3-e][1,2,4]-triazynę poprzez reakcję z kwasem chlorosulfonowym. W kolejnym etapie tak otrzymaną pochodną chlorosulfonową poddaje się reakcji z odpowiednim enancjomerem chiralnego aminoalkoholu. Odpowiedni enancjomer chiralnego aminoalkoholu wybierany jest z grupy składającej się z: (R-(-)-1-amino-2-propanolu, S-(+)-1-amino-2-propanolu, R-(-)-2-amino-1 -propanolu, S-(+)-2-amino-1-propanolu, R-(-)-2-amino-3-methyl-1 -butanolu, S-(+)-2-amino-3-methyl-1-butanolu, R-3-amino-1,2-propanediolu, S-3-amino-1,2-propanediolu, R-(-)-leucynolu, S-(+)-leucynolu, (R)-(+)-2-amino-1 -butanolu i (S)-(+)-2-amino-1 -butanolu, w zależności od żądanego produktu końcowego sposobu wytwarzania według wynalazku. W tej wyniku reakcji otrzymuje się odpowiednią chiralną pochodną sulfonamidową o ogólnym wzorze 2:
H,C wzór 2 w którym R oznacza grupę jak zdefiniowano we wzorze 1, którą następnie poddaje się reakcji z azydkiem sodu w bezwodnym etanolu z otrzymaniem odpowiedniej chiralnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1.
Otrzymaną tak nową chiralną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku można korzystnie oczyszczać chromatograficznie, na przykład z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
Przykładowy sposób wytwarzania reprezentatywnej chiralnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiono w przykładzie 1. Wzory stosowanych grup aminowych (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) obecnych w nowych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiono w załączonej Tabeli 1. W Tabeli 1 podano także odpowiednie temperatury topnienia i wydajności otrzymywania związków według wynalazku (związki numer 1 do 12).
Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku można stosować w zastosowaniach według wynalazku w postaci kompozycji farmaceutycznych. Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku zawiera,
PL 237 895 B1 oprócz związku według wynalazku jako składnika aktywnego, farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę. Farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki i zaróbki są znane specjalistom w dziedzinie niniejszego wynalazku i obejmują ciekłą lub nieciekłą bazę kompozycji. Określenie „akceptowalny” oznacza tu, że składniki stosowanej tu kompozycji farmaceutycznej mogą być zmieszane z farmaceutycznie aktywnym składnikiem jak tu zdefiniowano, czyli jednym i/lub więcej niże jednym związkiem według wynalazku, i innym składnikiem w taki sposób, że nie wystąpi żadna interakcja, która mogłaby, w zwykłych warunkach stosowania, istotnie zmniejszyć farmaceutyczną skuteczność kompozycji. Stosowane farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki i zaróbki muszą posiadać wystarczająco wysoką czystość i wystarczająco niską toksyczność, żeby czynić je odpowiednimi do podawania osobnikowi, który ma być leczony, jak wiadomo w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycję farmaceutyczną według wynalazku można wytwarzać w standardowy sposób. Sposoby wytwarzania kompozycji farmaceutycznych zawierających co najmniej jeden składnik aktywny i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę są znane w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierające jako składnik aktywny co najmniej jeden związek według wynalazku można stosować do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka.
Oznaczanie aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przeprowadzono w warunkach in vitro. Badania aktywności przeciwnowotworowej przeprowadzono zarówno z wykorzystaniem komórek estrogenozależnego raka sutka MCF-7 jak i komórek estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231. W skrócie, na hodowlach komórek estrogenozależnego raka sutka MCF-7 oraz estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231 przeprowadzono pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku, a także oceniono wpływ takich chiralnych pochodnych według wynalazku na biosyntezę DNA badanych linii komórek nowotworowych. Pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykonano metodą Carmichael'a, określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w badaniu MTT. Jest to badanie kolorymetryczne, wykorzystujące aktywność oksydoredukcyjną mitochondriów komórek. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnej dehydrogenazy, zastosowany barwnik ulega przekształceniu z żółtej soli tetrazolowej do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiano jako procent wartości kontrolnych. Badanie wpływu chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku na proces biosyntezy DNA przeprowadzono na liniach komórkowych raka sutka, poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Dokładny, przykładowy opis oznaczania aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metyIo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku w warunkach in vitro przedstawiono w przykładzie 2. W Tabeli 2 zestawiono wyniki badania aktywności cytotoksycznej, cytostatycznej i antyproliferacyjnej chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku.
Przeprowadzone badania wykazały, że chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazoIo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykazują zarówno działanie cytostatyczne, jak i działanie cytostatyczne. Przeprowadzone badania wykazały też, że chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykazują aktywność przeciwnowotworową, zarówno w przypadku komórek nowotworowych estrogenozależnego raka sutka (MCF-7), jak i w przypadku komórek nowotworowych estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Przeprowadzone badania pokazują zatem, że chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku można stosować jako leki, zwłaszcza leki przeciwnowotworowe, do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka, zarówno estrogenozależnego jak i estrogenoniezależnego. Przeprowadzone badania pokazują również, że chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku mogą być stosowane jak środki cytostatyczne, a także jako środki cytotoksyczne.
PL 237 895 Β1
Niniejszy wynalazek zostanie poniżej zilustrowany za pomocą przykładów wykonania, które nie mają jednak w jakikolwiek sposób ograniczać zakresu ochrony wynalazku jak zdefiniowano w zastrzeżeniach patentowych. O ile nie wskazano inaczej, stosowano znane i/lub komercyjnie dostępne urządzenia, metody, parametry, warunki reakcji, odczynnik i zestawy, takie jakie powszechnie stosuje się w dziedzinie, do której należy niniejszy wynalazek i jakie są zalecane przez wytwórców odpowiednich odczynników i zestawów.
Przykład 1
Sposób wytwarzania 1 -[4-(chlorosulfonylo)fenylo]-3-metylo-5-metylosulfonylo-1 H-pirazolo[4,3-c][1,2,4]triazyny
Do kolby zawierającej 2 ml kwasu chlorosulfonowego ochłodzonego w mieszaninie wody z lodem do temperatury 0-5°C dodano 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę (1156 mg, 4 mmole). Początkowo reakcję prowadzono w temperaturze 0-5°C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 2 godziny kontrolując przebieg reakcji na płytkach TLC. Po zakończeniu reakcji, mieszaninę reakcyjną wylano na wodę z lodem i ekstrahowano z chlorkiem metylenu (4 x 50 ml). Połączone ekstrakty wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po odparowaniu chlorku metylenu na wyparce otrzymany surowy produkt oczyszczono na kolumnie chromatograficznej stosując mieszaninę chlorek metylenu : metanol (50:1) jako eluent. Końcowy produkt otrzymano w postaci żółtego osadu.
Wydajność 65%;
lH NMR (CDCh) δ: 2,91 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 8,29 (d, 2H, J
- 9,2 Hz),
8,81 (d, 2H, 7 = 9,2 Hz).
Sposób wytwarzania (5)-4-(3-metylo-5-metylosulfonylo-1 H-pirazolo(4,3-e][1,2,4]triazyn-1 -ylo)-/V-(1-hydroksy-propan-2-ylo)benzenosulfonamid
Otrzymaną w powyższy sposób pochodną chlorosulfonową (0,64 mmol) rozpuszczono w bezwodnym acetonitrylu (5 ml) i dodano 3,5-krotny nadmiar (S)-(+)-2-amino-1 -propanolu. Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej do całkowitego zaniku substratu (kontrola TLC). Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik odparowano na wyparce, a otrzymany surowy produkt oczyszczono następnie na kolumnie chromatograficznej stosując jako eluent mieszaninę CH2Cl2:MeOH (25:1).
Wydajność 75%. Temperatura topnienia: 215-219 °C;
’H NMR (metanol) δ: 1,04 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 2.85 ($. 3H), 3,35-3,38 (m, 2H), 3,49 (q, 1H, 7 = 5,8 Hz) 3,58 (s, 3H), 8,13 (d, 2H, J = 9,1 Hz), 8,65 (d, 2H, J = 8,7 Hz);
13C NMR (metanol) δ: 11,13, 17,99, 41,05, 52,55, 66,90, 121,37, 129,63, 139,31, 141,45, 142,31, 147,46, 149,91,
162,89;
Sposób wytwarzania 1 -(S)-4-(7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyn-5-ylo)-N-(1 -hydroksy-propan-2-ylo)benzenosulfonamidu
Otrzymaną w powyższy sposób chiralną pochodną sulfonamidową z grupą metylosulfonową (0,33 mmol) rozpuszczono w bezwodnym etanolu (3-5 ml) i dodano azydek sodu (21 mg, 0,33 mmol). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika do zaniku substratu. Po odparowaniu rozpuszczalnika otrzymany tak surowy produkt reakcji oczyszczono. Otrzymaną w powyższy
PL 237 895 Β1 sposób chiralną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku oczyszczono następnie na kolumnie chromatograficznej stosując jako eluent układ CH2Cl2:MeOH (50:1).
Związek numer 11
Wydajność 91%. Temperatura topnienia: 197-202 °C;
Ή NMR (metanol) δ: 1,01 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 2,85 {s, 3H), 3,47 (q, 1H, J = 5,4 Hz), 4,57 (s, 1H), 8,10 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 8,45 (d, 2H, J = 8,8 Hz);
13C NMR (metanol) δ: 11,18, 17,96, 52,51, 66,88, 120,21, 129,67, 140,66, 141,94, 143,33, 148,30, 148,86, 149,33.
W analogiczny sposób jak opisano powyżej zsyntetyzowano pozostałe chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku (związki 1 do 10 i 12 w Tabeli 1 poniżej), stosując odpowiednie enancjomery chiralnych aminoalkoholi podane w poniższej Tabeli 1 zamiast (S)-(+)-2-amino-1 -propanolu. W poniższej Tabeli 1 podano stosowane enancjomery chiralnych aminoalkoholi oraz odpowiednie temperatury topnienia nowozsyntetyzowanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych według wynalazku oraz wydajności ich otrzymywania z zastosowaniem sposobu wytwarzania według wynalazku.
PL 237 895 Β1
Tabela 1. Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-d]-[1,2,4]triazyny według wynalazku.
| Numer związku | Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | Temp, topnienia °C | Wydąjność (%) |
| 1 | H oh H | 174-176 | 86 |
| 2 | H —N η3ο^>^οη | 175-177 | 58 |
| 3 | -Rh °h HjC^CH^ | 170-174 | 80 |
| 4 | H -ν-Ζ^οη [ H h3cxch3 | 168-172 | 81 |
| 5 | H 1... H7 OH | 173-176 | 69 |
| 6 | _H H3cA0H 3 H | 167-172 | 66 |
| 7 | -n^/h oh Tw HjO^J ch3 | 157-160 | 76 |
| 8 | —N ^r-OH h3cyJ'h ch3 | 159-161 | 88 |
| 9 | H -N H | 167-171 | 73 |
PL 237 895 Β1
| Numer związku | Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | Temp, topnienia °C | Wydajność (%) |
| 10 | H -N H OH | 169-172 | 73 |
| 11 | H CH “N-Z 3 PH HO^ | 197-202 | 91 |
| 12 | Η H -Ny pCH, HO | 198-202 | 87 |
Przykład 2
Aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku badano w warunkach in vitro w następujący sposób.
Komórki estrogenozależnego raka sutka MCF-7 (ATCC, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x 106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma, USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami i stosowano do dalszych doświadczeń.
Komórki estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231 (ATCC, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x 106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma, USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami i użyto do dalszych doświadczeń.
Pomiar cytotoksyczności badanych związków wykonano metodą Carmichael’a (Carmichael J et al, CancerRes., 1987, 47: 943-946), określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w teście MTT. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnych dehydrogenaz, zastosowany barwnik ulega przemianie do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków. Po 24-godzinnej inkubacji komórki płukano trzy razy (3x1 ml) PBS. Następnie dodano 1 ml PBS oraz 50 μΙ MTT o stężeniu 5 mg/cm3 PBS i kontynuowano inkubację przez 4 godziny. Po upływie wymaganego czasu podłoże usunięto, a do komórek dodano 1 ml 0,1 M kwasu solnego w absolutnym izopropanolu i komórki odstawiono na 10 minut. W tak przygotowanym lizacie komórek mierzono absorbancję przy długości fali 630 nm. Wynik absorbancji uzyskany w hodowlach komórek
PL 237 895 B1 kontrolnych przyjęto za 100%. Natomiast żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych związków przedstawiono jako procent wartości kontrolnych. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p<0,05 uznano za istotne statystycznie. Wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie powodujące 50-procentową redukcję przeżywalności komórek) dla linii MCF-7 i MDA-MB-231 wyznaczono na podstawie analizy zależności zastosowanych stężeń badanych związków i stopnia przeżywalności komórek za pomocą programu Statistica 10 PL.
Ponadto oceniono wpływ związków według wynalazku na proces biosyntezy DNA poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków. Badane związki dodano do pożywki hodowlanej i inkubowano przez 24 godziny. Po tym czasie pożywkę wymieniono na świeżą i do każdego oczka dodano 0,5 μCi [3H]-tymidyny (aktywność właściwa 6,7 Ci/mmol) i komórki dalej inkubowano przez 4 godziny w inkubatorze w atmosferze zawierającej 5% CO2, w temperaturze 37°C. Po tym czasie pożywkę usunięto, a powierzchnię komórek przemyto trzy razy (3x1 ml) 0,05 M Tris-HCl o pH 7,4, zawierającym 0,11 molowy NaCl. Następnie komórki przemyto dwa razy (2x1 ml) 5% roztworem kwasu trichlorooctowego (TCA) i rozpuszczono w 1 ml 0,1 molowego NaOH zawierającym 1% SDS. Po 5 minutach uzyskany lizat komórkowy przenoszono do fiolek scyntylacyjnych zawierających 2 ml płynu scyntylacyjnego i mierzono radioaktywność. Intensywność biosyntezy DNA w komórkach kontrolnych, wyrażona w dpm radioaktywnej tymidyny wbudowanej do DNA badanych komórek, w przeliczeniu na 1 x 106 komórek przyjęto za 100%. Wartości z prób badanych wyrażono jako procent wartości kontrolnej. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p<0,05 uznano za istotne statystycznie. Na podstawie otrzymanych wyników wyznaczono wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie hamujące o 50% wbudowywanie [3H]-tymidyny).
W poniższej Tabeli 2 podano wyniki badania działania przeciwnowotworowego, cytostatycznego, cytotoksycznego i antyproliferacyjnego wobec komórek nowotworowych nowosyntetyzowanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e ]tetrazolo[4,5-b ][1,2,4]triazyny według wynalazku.
PL 237 895 Β1
| [3H]-tymidyna, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,09 ±0,01 | 1,99 + 0,02 | 1,80 ±0,01 |
| MCF-7 | 0,30 + 0,03 | 0,31 ±0,02 | 0,19 ± 0,02 | |
| MTT, ICso (μΜ) ____________________________________________________________________I | MDA-MB-231 | 1,99 ±0,02 | 1,89 ±0,02 | 1 1,85 ±0,02 1 .. . |
| MCF-7 | 0,32 ± 0,01 | 0,21 ±0,01 | 0,23 ± 0,02 | |
| Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | H N— H | H, NH | X °\ i” X / o iz o 1 i” | |
| Numer związku |
PL 237 895 Β1
| [3H]-tyinidyna, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,16 ±0,01 | 1,97 ±0,03 | 2,36 + 0,03 | 1,78 ±0,02 |
| MCF-7 | 0,37 ±0,01 | 0,29 ± 0,01 | 0,32 ± 0,03 | 0,29 ± 0,02 | |
| MTT, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | o © +1 no σχ | 1,71 ±0,01 | 2,06 ± 0,03 | 1,70 ±0,02 |
| MCF-7 | 0,26 ±0,01 | 0,23 ± 0,02 | 0,29 ± 0,03 | 0,19+0,03 | |
| Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | X O IZ o 1 i” | HO< oeh Η<·.νυ H kN- H | X o iz o 1 τ | -Ν^^ΟΗ ch3 | |
| Numer związku | r*· |
PL 237 895 Β1
| [3H]-tymidyna, ICso (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,99 ± 0,03 | 1 1,89+0,02 | 1 2,41 ±0,01 | 1,80 ±0,01 | o o +1 05 05, |
| MCF-7 | 0,31 ±0,02 | 2,35 ±0,01 | 2,43 ± 0,02 1 | m O O +1 50 o | 0,65 ± 0,02 | |
| MTT, IC50 (μΜ) | MDA-MB-231 | 2,80 ±0,01 | 1,75 ±0,02 | 1,98 ±0,02 | 1,62 ±0,01 I______________________ __________________ _ | 1 1,71 ±0,02 |
| MCF-7 | 0,20 ± 0,01 | o o +1 Ό Os | 2,21 ±0,01 | 0,53 ± 0,01 | 0,43 ± 0,02 | |
| Stosowane grupy aminowe1 (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) | X o AJ . Λ / \ X rz )-o i o σι X | 1 H I -N ηο^ΧΌη H | X X l o X | IZ O | CJ X x P IZ o 1 I | |
| Numer związku | 90 | CS | o | ej |
PL 237 895 Β1
Przeprowadzane badania wykazały, że badane chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują silne działania przeciwnowotworowe, cytostatyczne, cytotoksyczne i antyproliferacyjne. Dla komórek estrogenozależnych raka piersi MCF-7 wartość IC50 dla związku o najsilniejszych właściwościach hamujących wzrost komórek zmierzona metodą Carmichaela wynosiła 0,19 μΜ (związek numer 7 w Tabeli 2). Ponadto przeprowadzone badania wskazały, że badane chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku w znacznym stopniu obniżały przeżywalność komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). W tym przypadku wartość IC50 dla najsilniejszego związku wynosiła 1,62 μΜ (związek numer 11 w Tabeli 2).
Przeprowadzone badania wykazały także, że wszystkie badane chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku hamują biosyntezę DNA w komórkach nowotworowych, w szczególności estrogenozależnego raka sutka (MCF-7) jak i estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Zaobserwowano, że wraz ze wzrostem stężenia testowanych związków maleje stopień wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Największą aktywność antyproliferacyjną na komórki MCF-7 wykazał związek, którego wartość IC50 wynosiła 0,19 μΜ (związek numer 3 w Tabeli 2). Z kolei wartość IC50 dla związku, który w największym stopniu hamował wbudowywanie [3H]-tymidyny do DNA komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231) wynosiła 1,78 μΜ (związek numer 7 w Tabeli 2).
Przeprowadzone badania wykazały, że chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują wysoką aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną w stosunku do komórek nowotworowych, w szczególności komórek raka sutka, a zatem mogą być stosowane w leczeniu nowotworów, w szczególności raka sutka.
Claims (15)
1. Chiralna pochodna 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1:
H.C 4 wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy (S)-(+)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (S)-(+)-1-amino-2-propanolowej, grupy (R)-(-)-1-amino-2-propanolowej, grupy (S)-(+)-leucynolowej, grupy (R)-(-)-leucynolowej, grupy (S)-(+)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (R)-(-)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-1-propanolowej i grupy (R)-(-)-2-amino-1-propanolowej.
2. Chiralna pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową.
3. Chiralna pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-leucynolową.
4. Chiralna pochodna według zastrzeżenia 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-1 -propanolową.
PL 237 895 Β1
5. Sposób wytwarzania chiralnej pochodnej sulfonamidowej 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1
H.C 4 wzór 1 w którym R oznacza grupę wybraną z grupy składającej się z grupy (S)-(+)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-1 -butanolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolowej, grupy (S)-(+)-1-amino-2-propanolowej, grupy (R)-(-)-1-amino-2-propanolowej, grupy (S)-(+)-leucynolowej, grupy (R)-(-)-leucynolowej, grupy (S)-(+)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (R)-(-)-3-amino-1,2-propanodiolowej, grupy (S)-(+)-2-amino-1-propanolowej i grupy (R)-(-)-2-amino-1-propanolowej, znamienny tym, że 1-fenylo-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 1-(para-chlorosulfonylofenylo)-3-metylo-5-metylosulfonylo-1/7-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazynę w reakcji z kwasem chlorosulfonowym, a następnie tak otrzymaną pochodną chlorosulfonową poddaje reakcji z enancjomerem chiralnego aminoalkoholu wybranym z grupy składającej się z (R-(-)-1-amino-2-propanolu, S-(+)-1-amino-2-propanolu, R-(-)-2-amino-1 -propanolu, S-(+)-2-amino-1 -propanolu, R-(-)-2-amino-3-methyl-1-butanolu, S-(+)-2-amino-3-methyl-1-butanolu, R-3-amino-1,2-propanediolu, S-3-amino-1,2-propanediolu, R-(-)-leucynolu, S-(+)-leucynolu, (R)-(+)-2-amino-1 -butanolu i (S)-(+)-2-amino-1 -butanolu), po czym prowadzi się reakcję substytucji nukleofilowej z azydkiem sodu w bezwodnym etanolu.
6. Sposób wytwarzania według zastrz. 5, znamienny tym, że ponadto otrzymaną chiralną pochodną sulfonamidową 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]-triazyny oczyszcza się chromatograficznie, korzystnie z zastosowaniem chromatografii cieczowej.
7. Chiralna pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 4 do zastosowania jako lek.
8. Chiralna pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 4 do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu.
9. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 4 do zastosowania jako lek do leczenia raka sutka.
10. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 4 do zastosowania jako środek cytostatyczny.
11. Pochodna jak określono w dowolnym z zastrzeżeń 1 do 4 do zastosowania jako środek cytotoksyczny.
12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera chiralną pochodną jak określono w jednym z zastrzeżeń 1 do 4 oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę.
13. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 12, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową.
14. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 12, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza grupę (S)-(+)-leucynolową.
15. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 12, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera chiralną pochodną o ogólnym wzorze 1, w który R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-1-propanolową.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL427994A PL237895B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL427994A PL237895B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL427994A1 PL427994A1 (pl) | 2020-06-01 |
| PL237895B1 true PL237895B1 (pl) | 2021-06-14 |
Family
ID=70855722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL427994A PL237895B1 (pl) | 2018-11-30 | 2018-11-30 | Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237895B1 (pl) |
-
2018
- 2018-11-30 PL PL427994A patent/PL237895B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL427994A1 (pl) | 2020-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2726717T3 (es) | Imidazopiridinas sustituidas con isoxazolilo | |
| CN108314677B (zh) | 一种ezh2抑制剂及其用途 | |
| EP3530656B1 (en) | 2-substituted aromatic ring-pyrimidine derivative, and preparation and application thereof | |
| EP2966079B1 (en) | Pyridopyrimidine or pyrimidopyrimidine compound, preparation method, pharmaceutical composition and use thereof | |
| EP3613737A1 (en) | Novel inhibitor of cyclin-dependent kinase cdk9 | |
| CA2757485A1 (en) | Pyrimidine substituted purine compounds as kinase (s) inhibitors | |
| EP3246327A1 (en) | 3-acetylenyl-pyrazole-pyrimidine derivative, and preparation method therefor and uses thereof | |
| CZ309380B6 (cs) | Sloučeniny pro inhibici fibroblastového aktivačního proteinu | |
| KR20190128673A (ko) | Wee-1 키나아제 억제제로서 유용한 피리미도피리미디논 | |
| CN116947764B (zh) | 一种嘧啶胺类nuak抑制剂及其制备方法和用途 | |
| Zhang et al. | Design, synthesis and bioevaluation of inhibitors targeting HSP90-CDC37 protein-protein interaction based on a hydrophobic core | |
| CN101121698A (zh) | 二芳基嘧啶类衍生物及其制备方法和用途 | |
| WO2023078451A1 (zh) | 用作cdk7激酶抑制剂的化合物及其应用 | |
| CN114195814B (zh) | 羟基萘酮-苯硼酸类化合物、制备方法和用途 | |
| AU2023226510A1 (en) | Use of hpk1 inhibitor in treatment of interferon-related diseases | |
| PL237895B1 (pl) | Chiralne pochodne sulfonamidowe 5-fenylo-7-metylo-pirazolo[ 4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny, sposób ich wytwarzania, ich zastosowania oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca chiralną sulfonamidową pochodną 5-fenyIo-7-metylo-pirazolo[4,3- -e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazyny | |
| EP3730484A1 (en) | Indoleamine-2,3-dioxygenase inhibitor, preparation method therefor, and application thereof | |
| CN108191774A (zh) | 一类杂环化合物、其制备方法和用途 | |
| CN115894500B (zh) | 一种作为btk激酶抑制剂的化合物及其制备方法与用途 | |
| CA2434085A1 (en) | Cyclin dependent kinase inhibiting purine derivatives | |
| CN118027066A (zh) | 一种噻吩并嘧啶酮化合物、及其制备方法和用途 | |
| EP2382974A1 (en) | Use of cyclosquaramide compounds as anti-tumour agents | |
| PL240932B1 (pl) | Nowe disulfonamidowe pochodne 5-anilino-1-fenylo-3-metylo- 1H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny, o właściwościach przeciwnowotworowych, sposób ich syntezy, kompozycje farmaceutyczne zawierające te pochodne oraz ich pierwsze zastosowanie medyczne | |
| Simonov et al. | Synthesis of 4-substituted 3-[3-(dialkylaminomethyl) indol-1-yl] maleimides and study of their ability to inhibit protein kinase C-α, prevent development of multiple drug resistance of tumor cells and cytotoxicity | |
| CZ308158B6 (cs) | Derivát 2-morfolino-3,4-dihydrochinazolin-4-onu s aromatickými substituenty v poloze 8-, způsob jeho přípravy a jeho použití |