PL246287B1

PL246287B1 - Liposomowy preparat cynku i miedzi oraz sposób jego wytwarzania

Info

Publication number: PL246287B1
Application number: PL439306A
Authority: PL
Inventors: Grzegorz Ślifirski; Grzegorz Lifirski
Original assignee: Formeds Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością
Filing date: 2021-10-25
Publication date: 2024-12-30

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest liposomowy preparat zawierający cynk i miedź preparat w postaci proszku liposomów, zawierająca go kapsułka twarda oraz sposób jego wytwarzania.

Mikroelementy, w tym cynk i miedź, stanowią pierwiastki występujące w organizmie ludzkim w ilościach śladowych, które są jednakże niezbędne do jego prawidłowego funkcjonowania. Niedobór mikroelementów może doprowadzić do wielu zaburzeń i schorzeń. Niedobór miedzi w organizmie obniża wchłanianie żelaza, co z kolei prowadzi do niedokrwistości, a niedobór cynku powoduje zaburzenia układu immunologicznego, rozrodczego i nerwowego [M. Kraus i in., Farmakoterapia, vol. 25, nr 05’15 (288)]. Zatem czasami niezbędne jest suplementowanie mikroelementów, albo w postaci preparatu pojedynczego mikroelementu albo w postaci preparatów zawierających wiele mikroelementów lub kombinacje mikroelementów i witamin. Znane są różne postaci preparatów mikroelementów. W publikacji P.426183 opisano suplement diety w postaci proszku, tabletek lub kapsułek zawierający magnez, chrom, cynk, żelazo i miedź. W publikacji P.403126 ujawniono natomiast sposób otrzymywania suplementu cynku lub miedzi w płynie przez rozpuszczenie ich soli w roztworze alkoholu lub mieszaniny alkoholu z wodą. W publikacji P.425971 ujawniono sposób wytwarzania suplementu mikroelementów zawierających cynk w postaci nanocząsteczek umieszczanych w kapsułkach lub zawieszonych w wodzie, soli fizjologicznej lub etanolu.

Liposomy to syntetyczne pęcherzyki składające się z jednej lub więcej dwuwarstw fosfolipidowych, wykorzystywane jako system dostarczania leków, genów oraz szczepionek. W zależności od składu warstwy fosfolipidowej oraz sposobu ich wytwarzania, możliwe jest kontrolowanie wielkości i ładunku liposomów oraz ich trwałości, co przekłada się w sposób bezpośredni na uwalnianie zawartych w nich substancji aktywnych [G. Gregoriadis, Y. Perrie, Liposomes. Encycl Life Sci, 2010, 1-8]. Dodatkowo, stanowią one idealny nośnik zarówno dla substancji rozpuszczalnych, jak i nierozpuszczalnych w wodzie. Dlatego stanowią one szczególnie pożądaną postać dostarczania leków. Pierwsze doniesienia o wykorzystaniu zawierającego liposomy preparatu farmaceutycznego do wstrzyknięć można znaleźć w publikacji patentowej GB417715 zgłoszenia dokonanego 29 grudnia 1932. W publikacji tej wskazano, że preparaty farmaceutyczne, zawierające lecytynę, cholesterol i wodę, mogą być wykorzystane do podawania dowolnej dawki leku przy kontrolowanym jej uwalnianiu (preparat typu „depot”).

Jednakże, technologie wykorzystujące liposomy są obecnie dużo bardziej zaawansowane. Na przykład, liposomy mogą być wykorzystywane do aktywnego kierowania substancji aktywnych do odpowiedniego miejsca działania, poprawiając w ten sposób swoistość i zmniejszając toksyczność, przez przyłączanie do ich powierzchni odpowiednich ligandów lub przez modyfikację składu dwuwarstwy fosfolipidowej. Znane są również preparaty liposomowe w postaci proszków, które są stosowane do podawania substancji czynnych drogą wziewną [A. Misra, Expert Opin Drug Deliv. 2009 6(1):71-89].

Wadą preparatów ciekłych oraz emulsji zawierających liposomy jest ich niestabilność w kwaśnym środowisku żołądka, gdzie ulegają one agregacji a nawet wytrąceniu. Tym samym biodostępność substancji czynnych zawartych w zagregowanych konglomeratach liposomów ulega znacznemu pogorszeniu. Postać ciekła preparatów liposomowych stanowi również dodatkowy problem technologiczny, ponieważ wymaga on stosowania specjalnych saszetek lub butelek wypełnionych azotem, które po otwarciu należy przechowywać w lodówce, a ich zawartość spożyć w przeciągu 3 miesięcy.

W stanie techniki istniało zapotrzebowanie na preparat farmaceutyczny w postaci proszku zawierającego zamknięte w liposomach cynk i miedź, który to preparat mógłby być podawany doustnie. Twórcy niniejszego wynalazku opracowali preparat liposomowy kombinacji cynku i miedzi w postaci proszku, który dzięki liposomowej strukturze znacząco poprawia dostępność tych mikroelementów z przewodu pokarmowego. Ponadto preparat liposomowy według wynalazku jest stabilny w warunkach kwasu żołądkowego. Co więcej, istotne jest również to, że zgodnie z wynalazkiem otrzymywane są liposomowe preparaty cynku i miedzi w postaci proszku, w których zawartość mikroelementów jest odpowiednio duża, tj. liposomy są naładowane mikroelementami w sposób efektywny, co znajduje odzwierciedlenie w proporcji wagowej obecnych w liposomach mikroelementów do otoczki lipidowej.

Przedmiotem wynalazku jest liposomowy preparat kombinacji cynku i miedzi w postaci proszku, w którym dwuwarstwa lipidowa liposomów zawiera lecytynę, który to preparat zawiera inulinę jako stabilizator, przy czym stosunek wagowy kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynosi 1:100, a korzystnie 1:1, natomiast stosunek wagowy lecytyny do inuliny mieści się w zakresie od 1:0,1 do 1:5, a korzystnie wynosi 1:0,89. Zaletą rozwiązania według wynalazku jest to, że obecność inuliny stabilizuje preparat liposomowy i zapobiega tworzeniu agregatów liposomów, szczególnie w warunkach odpowiadających o warunkom kwasu żołądkowego.

W korzystnej postaci wykonania cynk w preparacie według wynalazku jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z octanu cynku, L-askorbinianu cynku, L-asparaginianu cynku, diglicynianu cynku, chlorku cynku, cytrynianu cynku, glukonianu cynku, mleczanu cynku, L-lizynianu cynku, jabłczanu cynku, siarczanu mono-L-metioniny cynku, tlenku cynku, węglanu cynku, L-pidolanu cynku, pikolinianu cynku, siarczanu cynku, lub ich mieszaniny, a najkorzystniej solą jest glukonian cynku. Ponadto w korzystnej postaci wykonania miedź w preparacie według wynalazku jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z węglanu miedzi (II), cytrynianu miedzi (II), glukonianu miedzi (II), siarczanu miedzi (II), L-asparaginianu miedzi, diglicynianu miedzi, kompleksu miedź-lizyna, tlenku miedzi (II) lub ich mieszaniny, a najkorzystniejszą solą jest glukonian miedzi (II). Również korzystnie lecytyna w preparacie według wynalazku jest wybrana z grupy składającej się z lecytyny słonecznikowej, lecytyny, sojowej, lecytyny rzepakowej oraz lecytyny z żółtek jaj, a najkorzystniej lecytynę stanowi lecytyna słonecznikowa.

W korzystnej postaci wykonania liposomowy preparat cynku i miedzi według wynalazku jest dostarczany w kwasoodpornej kapsułce twardej (twardej kapsułce dojelitowej), dzięki czemu liposomy są uwalniane dopiero w jelicie, gdzie następuje wchłanianie mikroelementów. Zatem, przedmiotem wynalazku jest twarda dojelitowa kapsułka żelowa zawierająca liposomowy preparat cynku i miedzi według wynalazku. Kiedy cynk i miedź w postaci liposomowej znajdują się w kwasoodpornej kapsułce ich dostarczanie do organizmu osoby następuje w sposób najbardziej skuteczny, ponieważ mikroelementy te są uwalniane w przewodzie pokarmowym dopiero w pobliżu miejsca, w którym następuje ich wchłanianie. Dzięki temu liposomy nie są poddawane niekorzystnemu działaniu kwaśnego środowiska żołądka, co dodatkowo zapobiega ich agregacji w większe konglomeraty. W korzystnej postaci wykonania twarda kapsułka stanowi kapsułkę żelatynową, celulozową, pullulanową lub gellanową, a najkorzystniej jest kapsułką dojelitową wykonaną z kombinacji hydroksypropylometylocelulozy oraz gumy gellan.

Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania liposomowego preparatu cynku i miedzi według wynalazku. Zgodnie z wynalazkiem, sposób otrzymywania liposomowego preparatu cynku i miedzi w postaci proszku, obejmuje etap w którym lecytynę i sole miedzi i cynku rozpuszcza się w wodzie w temperaturze w zakresie 5°C +/- 5°C do 90°C +/- 5°C z wytworzeniem wodnych roztworów kombinacji soli cynku i miedzi oraz lecytyny, a otrzymane w ten sposób wodne roztwory miesza się razem w temperaturze w zakresie 15°C +/- 5°C do 80°C+/- 5°C do wytworzenia zawiesiny zawierającej liposomy z cynkiem i miedzią, w której następnie rozpuszcza się inulinę w temperaturze w zakresie 5°C +/- 5°C do 80°C+/- 5°C, intensywnie mieszając, przy czym w powstałej mieszaninie stosunek wagowy lecytyny do inuliny mieści się w zakresie 1:0,1 do 1:5, stosunek wagowy kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynosi 1:100, a następnie powstałą zawiesinę poddaje się suszeniu.

Korzystnie, etap rozpuszczania soli cynku i soli miedzi w wodzie prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C, etap rozpuszczania lecytyny w wodzie prowadzi się w temperaturze 70°C +/- 5°C, etap mieszania wodnych roztworów soli cynku i miedzi oraz roztworu lecytyny prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C, etap rozpuszczania inuliny w zawiesinie powstałej przez połączenie wodnych roztworów lecytyny, soli cynku i soli miedzi, prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C.

Również korzystnie etap suszenia prowadzi się metodą suszenia rozpyłowego w temperaturze w zakresie 100°C +/- 50°C do 200°C+/- 5°C, a korzystniej w temperaturze 175°C+/-5°C. Alternatywnie, w korzystnej postaci wykonania, etap suszenia prowadzi się przez liofilizację w temperaturze w zakresie -200,8°C +/- 5°C do 20°C+/- 5°C, a korzystniej w temperaturze - 50°C+/-5°C.

W korzystnej postaci wykonania cynk stosowany w sposobie według wynalazku jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z octanu cynku, L-askorbinianu cynku, L-asparaginianu cynku, diglicynianu cynku, chlorku cynku, cytrynianu cynku, glukonianu cynku, mleczanu cynku, L-lizynianu cynku, jabłczanu cynku, siarczanu mono-L-metioniny cynku, tlenku cynku, węglanu cynku, L-pidolanu cynku, pikolinianu cynku, siarczanu cynku, lub ich mieszaniny, a najkorzystniej solą jest glukonian cynku. Ponadto w korzystnej postaci wykonania miedź stosowana w sposobie według wynalazku jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z węglanu miedzi (II), cytrynianu miedzi (II), glukonianu miedzi (II), siarczanu miedzi (II), L-asparaginianu miedzi, diglicynianu miedzi, kompleksu miedź-lizyna, tlenku miedzi (II) lub ich mieszaniny, a najkorzystniejszą solą jest glukonian miedzi (II). Również korzystnie lecytyna stosowana w sposobie według wynalazku jest wybrana z grupy składającej się z lecytyny słonecznikowej, lecytyny, sojowej, lecytyny rzepakowej oraz lecytyny z żółtek jaj, a najkorzystniej lecytynę stanowi lecytyna słonecznikowa.

PL 246287 Β1

Korzystnie w sposobie według wynalazku mieszanina powstała po rozpuszczeniu inuliny w zawiesinie liposomowej soli cynku i miedzi zawiera 5,10% wag. soli cynku, 0,44% wag. soli miedzi, 5,60% wag. lecytyny, 4,96% wag. inuliny oraz 83,90% wag. wody w przeliczeniu na całkowitą masę mieszaniny.

Należy również nadmienić, że dzięki wykorzystaniu sposobu według wynalazku możliwe jest bardzo efektywne ładowanie liposomów, tj. stosunek wagowy substancji czynnej, którą stanowi kombinacja cynku i miedzi, do tworzącej otoczkę lipidową lecytyny odpowiada stosunkowi wagowemu mieszaniny, w której formowane są zawierające te mikroelementy liposomy. Co więcej, sposób według wynalazku umożliwia zamknięcie stosunkowo dużej ilości mikroelementów w liposomowym preparacie, nawet w stosunku kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynoszącym 1:1.

Przykład 1. Sposób wytwarzania preparatu cynku i miedzi w postaci proszku liposomów (suszenie rozpyłowe)

Liposomy zawierające kombinację cynku i miedzi otrzymuje się w następujący sposób. 51,25 kg lecytyny słonecznikowej SF100 rozpuszcza się w 136,8 kg wody oczyszczonej w temperaturze 70°C +/- 5°C, a kombinację glukonianu cynku i glukonianu miedzi w sumarycznej ilości 50,53 kg rozpuszcza się w 476,0 kg wody oczyszczonej w temperaturze 45°C+/-5°C. Następnie, przy intensywnym mieszaniu łączy się ze sobą wyżej opisane wodne roztwory lecytyny słonecznikowej i kombinacji glukonianu cynku i glukonianu miedzi, przy czym temperatura jest utrzymywana w trakcie mieszania na poziomie 45°C +/- 5°C, a powstałą w ten sposób zawiesinę homogenizuje się w porcjach po 20 I przez 5 minut. Niezależnie w temperaturze 45°C +/- 5°C rozpuszcza się 45,3 kg inuliny w 152,93 kg wody oczyszczonej, a powstały w ten sposób roztwór wodny dodaje się przy intensywnym mieszaniu do zawiesiny, powstałej z połączenia się ze sobą roztworów wodnych lecytyny słonecznikowej i kombinacji glukonianu cynku i glukonianu miedzi, Po zakończeniu mieszania, zawiesinę liposomową poddaje się suszeniu rozpyłowemu w temperaturze 175°C +/- 5°C z wytworzeniem proszku liposomów.

Przykład 2. Sposób wytwarzania preparatu cynku i miedzi w postaci proszku liposomów (liofilizacja)

Preparat cynku i miedzi w postaci proszku liposomów otrzymuje się tak jak opisano w Przykładzie 1, z tą różnicą, że po zakończeniu mieszania, zawiesinę liposomową poddaje się suszeniu przez liofilizację w liofilizatorze półkowym, w temperaturze -50°C+/-5°C.

Przykład 3. Sposób wytwarzania preparatu cynku i miedzi w postaci liposomów - ocena efektywności enkapsulacji

Różne partie preparatu cynku i miedzi (glukonian cynku plus glukonian miedzi) w postaci proszku liposomów otrzymuje się tak jak opisano w Przykładzie 1, z tą różnicą, że stosowano ilości reagentów i temperatury prowadzenia procesu przedstawiono w tabeli 1 poniżej. Po utworzeniu liposomalnego preparatu pobrano próbki z każdej partii. Z każdej próbki partii oddzielono liposomy na filtrze poliwęglanowym o średnicy porów 80 nm. W ten sposób otrzymano przesącz bez liposomów, w którym określano ilość kombinacji glukonianu cynku i miedzi. Pozostałości gulkonianiu cynku i glukonianu miedzi w przesączu były śladowe, co oznacza dużą efektywność enkapsulacji tych mikroelementów w liposomach.

Tabela 1

	Roztwór lecytyny	Roztwór glukonianu Zn i glukonianu Cu	Roztwór innuliny
preparat	Ilość wody (kg)	Ilość lecytyny (kg)	Temp. roztworu	Ilość wody (kg)	Ilość glukonia nu Cu i Zn (kg)	Temp, roztworu	Ilość wody (kg)	Ilość inuliny (kg)	Temp, roztworu
1	136.8	51,25	70°C +/5°C	476.0	50.53	45 °C +/5^CC	152,93	45.3	45 °C +/- 5°C
2	136,8	51,25	5°C +/- 5°C	9.66	1,03	5°C +/- 5°C	865,0	256,25	5°C +/- 5°C
3	136.8	51,25	90^DC +/- 5°C	4,80	0,51	90°C +/- 5C	1,72	0,51	8O°C +/5^L’C

Proporcje wagowe składników w preparacie według wynalazku odzwierciedlają skład ilościowy mieszaniny, w których są formowane liposomy. Składy procentowy (% wagowe) dla poszczególnych preparatów oraz mieszanin, w których były wytwarzane liposomy, jak również proporcje wagowe kombinacji glukonianu cynku i glukonianu miedzi, oraz inuliny względem lecytyny przedstawiono w tabeli 2.

PL 246287 Β1

Tabela 2

preparat	1	2	3
	mieszanina	preparat	mieszanina	preparat	mieszanina	preparat
Zawartość (% wag.) glukonianu Zn + glukonianu Cu	5,54%	34,0%	0,08%	0,33%	0,26%	0,98%
Zawartość (% wag.) lecytyny	5,6%	35,0%	3.9%	16,61%	26,2%	98,04%
Zawartość (% wag.) inuliny	4,96%	31,0%	19,4%	83,06%	0,26%	0,98%
Zawartość (% wag.) wody	83.9%	-	76,62%	-	73,28%	-
Stosunek wag. glukonianu Zn + glukonianu Cudecytyna	1:1	1:1	1:50	1:50	1:100	1:100
Stosunek wag. lecytynańnulina	1:0,89	1:0,89	1:5	1:5	1:0,1	1:0,1

Przykład 4. Analiza wielkości liposomów w preparatach według wynalazku

Pomiar wielkości liposomów otrzymanych w Przykładzie 1 i 2 wykonano z wykorzystaniem urządzenia NanoSizerZS (Malvern Instruments, Wielka Brytania) w funkcji „volume”. 10 μΙ próbki liposomów (po dokładnym wymieszaniu preparatów z Przykładu 1 i 2) rozcieńczano wodą dejonizowaną do objętości 1000 μΙ i umieszczano w kuwecie przyrządu. Następnie rejestrowano co najmniej trzy niezależne pomiary rozkładu wielkości. Otrzymano mieszaninę liposomów 140,1 nm dla objętości wynoszącej 62% oraz 742,3 nm dla objętości wynoszącej 38%.

W celu określenia stabilności liposomów w preparacie według wynalazku, w szczególności ich odporności na agregację w warunkach silnego kwasu, wykonano pomiar wielkości liposomów otrzymanych w Przykładzie 1 i 2 w sposób analogiczny do tego opisanego powyżej, jednakże po uprzedniej inkubacji liposomów przez dwie godziny w kwasie 0,1 M HCI. W wyniku pomiaru otrzymano wielkości, takie jak dla liposomów niepoddanych inkubacji w 0,1 HCI, co potwierdza stabilność liposomów.

Przykład 5. Badanie stabilności liposomowego preparatu cynku i miedzi w postaci proszku według wynalazku

Badanie stabilności liposomowego preparatu cynku i miedzi otrzymanego w Przykładzie 1 prowadzono przez 3 miesiące, kontrolując stan zachowanych próbek preparatu co miesiąc. Próbki przechowywano w temperaturze 25°C, a ich stabilność oceniano na podstawie wyglądu, zapachu i pomiaru pH.

Po upływie trzech miesięcy wygląd, zapach i pH próbek nie uległ zmianie. Zatem wyniki badania wskazują na pełną stabilność próbek w badanym zakresie.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Liposomowy preparat cynku i miedzi, w którym dwuwarstwa lipidowa liposomów zawiera lecytynę, znamienny tym, że jest preparatem w postaci proszku, zawiera inulinę jako stabilizator preparatu, przy czym stosunek wagowy kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynosi 1:100, natomiast stosunek wagowy lecytyny do inuliny mieści się w zakresie od 1:0,1 do 1:5.
2. Liposomowy preparat cynku i miedzi według zastrz. 1, znamienny tym, że stosunek wagowy kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynosi 1:1, natomiast stosunek lecytyny do inuliny wynosi 1:0,89.
3. Liposomowy preparat cynku i miedzi według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że cynk jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z octanu cynku, L-askorbinianu cynku, L-aspa raginianu cynku, diglicynianu cynku, chlorku cynku, cytrynianu cynku, glukonianu cynku, mleczanu cynku, L-lizynianu cynku, jabłczanu cynku, siarczanu mono-L-metioniny cynku, tlenku cynku, węglanu cynku, L-pidolanu cynku, pikolinianu cynku, siarczanu cynku, lub ich mieszaniny.
4. Liposomowy preparat cynku i miedzi według zastrz. 3, znamienny tym, że sól cynku stanowi glukonian cynku.
5. Liposomowy preparat cynku i miedzi według dowolnego z zastrz. 1-4, znamienny tym, że miedź jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z węglanu miedzi (II), cytrynianu miedzi (II), glukonianu miedzi (II), siarczanu miedzi (II), L-asparaginianu miedzi, diglicynianu miedzi, kompleksu miedź-lizyna, tlenku miedzi (II) lub ich mieszaniny.
6. Liposomowy preparat cynku i miedzi według zastrz. 3, znamienny tym, że sól cynku stanowi glukonian miedzi.
7. Liposomowy preparat cynku i miedzi według dowolnego z zastrz. 1-6, znamienny tym, że lecytyna jest wybrana z grupy składającej się z lecytyny słonecznikowej, lecytyny, sojowej, lecytyny rzepakowej oraz lecytyny z żółtek jaj.
8. Liposomowy preparat cynku i miedzi według zastrz. 7, znamienny tym, że lecytynę stanowi lecytyna słonecznikowa.
9. Twarda dojelitowa kapsułka żelowa zawierająca liposomowy preparat cynku i miedzi określony w zastrz. 1-8.
10. Sposób otrzymywania liposomowego preparatu cynku i miedzi w postaci proszku, znamienny tym, że obejmuje etap w którym lecytynę i sole miedzi i cynku rozpuszcza się w wodzie w temperaturze w zakresie 5°C +/- 5°C do 90°C +/- 5°C z wytworzeniem wodnych roztworów kombinacji soli cynku i miedzi oraz lecytyny, a otrzymane w ten sposób wodne roztwory miesza się razem w temperaturze w zakresie 15°C +/- 5°C do 80°C+/- 5°C do wytworzenia zawiesiny zawierającej liposomy z cynkiem i miedzią, w której następnie rozpuszcza się inulinę w temperaturze w zakresie 5°C +/- 5°C do 80°C+/- 5°C, intensywnie mieszając, przy czym w powstałej mieszaninie stosunek wagowy lecytyny do inuliny mieści się w zakresie 1:0,1 do 1:5, stosunek wagowy kombinacji soli cynku i soli miedzi do lecytyny wynosi 1:100, a następnie powstałą zawiesinę poddaje się suszeniu.
11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że etap rozpuszczania soli cynku i soli miedzi w wodzie prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C, etap rozpuszczania lecytyny w wodzie prowadzi się w temperaturze 70°C +/- 5°C, etap mieszania wodnych roztworów soli cynku i miedzi oraz roztworu lecytyny prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C, etap rozpuszczania inuliny w zawiesinie powstałej przez połączenie wodnych roztworów lecytyny, soli cynku i soli miedzi, prowadzi się w temperaturze 45°C +/- 5°C.
12. Sposób według zastrz. 10 albo 11, znamienny tym, że etap suszenia prowadzi się metodą suszenia rozpyłowego w temperaturze w zakresie 100°C +/- 5°C do 200°C+/- 5°C.
13. Sposób według zastrz. 12, znamienny tym, że suszenie rozpyłowe prowadzi się w temperaturze 175°C+/-5°C.
14. Sposób według zastrz. 10 albo 11, znamienny tym, że etap suszenia prowadzi się przez liofilizację w temperaturze w zakresie - 200,8°C +/- 50°C do 20°C+/- 5°C.
15. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że liofilizację prowadzi się w temperaturze -50°C+/-5°C.
16. Sposób według dowolnego z zastrz. 10-15, znamienny tym, że cynk jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z octanu cynku, L-askorbinianu cynku, L-asparaginianu cynku, diglicynianu cynku, chlorku cynku, cytrynianu cynku, glukonianu cynku, mleczanu cynku, L-lizynianu cynku, jabłczanu cynku, siarczanu mono-L-metioniny cynku, tlenku cynku, węglanu cynku, L-pidolanu cynku, pikolinianu cynku, siarczanu cynku, lub ich mieszaniny.
17. Sposób według zastrz. 16, znamienny tym, że sól cynku stanowi glukonian cynku.
18. Sposób według dowolnego z zastrz. 10-17, znamienny tym, że miedź jest w postaci soli wybranej z grupy składającej się z węglanu miedzi (II), cytrynianu miedzi (II), glukonianu miedzi (II), siarczanu miedzi (II), L-asparaginianu miedzi, diglicynianu miedzi, kompleksu miedźlizyna, tlenku miedzi (II) lub ich mieszaniny.
19. Sposób według zastrz. 18, znamienny tym, że sól miedzi stanowi glukonian miedzi.
20. Sposób według dowolnego z zastrz. 10-19, znamienny tym, że lecytyna jest wybrana z grupy składającej się z lecytyny słonecznikowej, lecytyny, sojowej, lecytyny rzepakowej oraz lecytyny z żółtek jaj.
21. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że lecytynę stanowi lecytyna słonecznikowa.
22. Sposób według dowolnego z zastrz. 10-21, znamienny tym, że mieszanina powstała po rozpuszczeniu inuliny w zawiesinie liposomowej soli cynku i miedzi zawiera 5,10% wag. soli cynku, 0,44% wag. soli miedzi, 5,60% wag. lecytyny, 4,96% wag. inuliny oraz 83,90% wag. wody w przeliczeniu na całkowitą masę mieszaniny.