PT100029B

PT100029B - Processo para a preparacao de uma composicao detergente granular ou liquida com celulase de elevada e argila amaciadora

Info

Publication number: PT100029B
Application number: PT10002992A
Authority: PT
Inventors: Andre Christian Convents; Andre Cesar Baeck; Alfred Busch
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 1991-01-16
Filing date: 1992-01-16
Publication date: 1999-06-30
Also published as: CA2100554C; JPH06509122A; BR9205428A; PT100029A; MX9200198A; CA2100554A1; PH30937A; MA22388A1; IE920117A1; IN185872B

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DETERGENTES GRANULAR OU LÍQUIDA COMCELULASE DE ELEVADA ACTIVIDADE E ARGILA AMACIADORA

CAMPO TÉCNICO

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

A presente invenção refere-se a composições detergentes compreendendo uma celulase de elevada actividade em combinação com argila amaciadora. Nas presentes composiçoes detergentes,a celulase compreende uma celulase de elevada actividade defenida pelo método C14CMC. Preferivelmente a composição detergente compreende uma argila amaciadora em conjunto com um agente de floculação de argila e, no caso de uma composição líquida, um agente anti-sedimentação para a argila.

A presente invenção refere-se a composições detergen tes compreendendo uma celulase de elevada actividade em com binação com argila amaciadora.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A necessidade de cojposições detergentes que exibem, não apenas boas propriedades de limpeza, mas também bom desempenho de amaciamento de tecido e outros benefícios de tratamento de tecido,está bem estabelecida na arte.

A eficiência de enzimas celulolíticas, i.e. celulase3 em termos de agente de redução da aspereza e de. limpeza de produtos têxteis para tecidcsfoi reconhecida desde há algum tempo: as GB=A-2 075 028, GB-A-2 095 275 e GB-A-2 094 826, descrevem composiçoes detergentes com celulase para desempenho de limpeza melhorado; a GB-a-1 368 599 descreve o uso de celulase para a redução da aspereza de tecidos contendo algodão; a U.S. 4.435.307 ensina o uso de uma enzima celulolíti, co derivado de Humicola insolens, bem como de uma fracçao,

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designada ACXI, como um aditivo detergente/jredútor da aspereza.

A EP-A-0 269 168 descreve composições detergentes optimizadas contendo celulase, que são formuladas a uma gairu de pH alcalino moderado e proporcionam desempenhos de limpeza de tecido, de amaciamento de tecido e de tratamento de tecido, combinados

Na WO 89109259 foram descritas preparações de eelUiaseúteis para a^T redução da aspereza de tecidos contendo algodão, compreendendo um componente endoglucanase com uma elevada afinidade e actividade de endoase em relação à celulose.

A exploração prática de celulases tem, contudo, sido atrasada pelo facto de as preparações de celulase como as descritas nos documentos da arte anterior, acima referidos, serèmi.misturas. complexas , das quais apenas uma certa fracçao é eficaz ao contexto a_o tratamento dos tecidos; foi, assim difícil implementar a produção industrial eficaz do ponto de vista dos custos de celulase para a indústria dos detergentes; e grandes quantidades destas preparações de celulase necessitariam de ser aplicadas, de modo a obterem o efeito desejado nos tecidos.

Os melhoramentos na produção de celulase não têm, tam bém, provado, frequentemente, ser suficientemente indentificáveis em termos da aplicablidade em detergentes. A definição de um critério de selecçao de celulase relevante para a aplicação de celulase em detergentes foi tornada possível pfeílo método C14CMC descrito na EP-A-350 098. Verificou-se agora que um mínimo de 10% de remoção de carboximetilcelulose imobilizada, marcada radioactivamente, proporciona celulase de elevada actividade. Um grupo preferido de celulases que fica dentro da definição de elevada actividade de acordo com a presente invenção foi descrito no Pedido, Co-pendente, da Patente Dinamarquesa N2: 1159/90 depositado em 5 de Maio de 1990. Encontra-se, entre outras, descrita uma preparação de celulase consistindo essencialmente num componente endoglucanase homogéneo que imunorreage com um

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anticorpo monoclonal contra uma celulase, parcialmente purificada, de cerca de 43 KD, derivada de Humicola insolens DM 1800.

A verificação de que este componente endoglucanase particular de celulase é vantajoso para o tratamento de mate * . riais contendo celulose, permite agora produzir a celulase em termos eficazes do ponto de vista do custo, e.g. empregancq.técnicas de ADN recombinante, e permite aplicar apenas uma pequena quantidade de preparação de celulase e obter o efei to desejado nos tecidos.

A EP-A-381 397 descreve o efeito da baixa força iónica no desempenho do enzima, em particular para a lipase. Contudo, verificou-se, surpreendentemente que o efeito de uma 'matriz compacta nos enzimas seleccionados da presente invenção é muito maior do que seria de esperar para as celulases do presente estado da arte, tal como descrito na EP-A-381 397.

Na EP-A-177 165 foi descrita a utilização, nas composições detergentes de uma argila amaciadora em conjunto com celulase. A invenção desta descrição está baseada na falha da arte anterior em descrever a combinação de dois compostos detergentes principais, de amaciamento ou de redução da aspereza. A EP-A-177 165 reconhece que não há razão para se excluir a argila ou a celulase das composições detergentes compreendèndcuo outro, composto respectivo. Contudo a EP-A-177 165 não reconhece que , para o grupo seleccionado da celulase actividade de acordo com a presente invenção, a combinação com argi la tem vantagem para além do desempenho como aditivo que, de outra forma seria esperado dos dois ingredientes amacia30 dores.

Consequentemente, é um objectivo da presente invenção proporcionar composições detergentes compreendendo uma celulase de elevada actividade e uma argila amaciadora, composições detergentes essas que exibem um desempenho óptimo de amaciamento. UM objectivo adicional é proporcionar essas com

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posições detergentes na forma líquida ou granular.

É um outro objectivo da presente invenção proporcionar composições detergentes ©ointendo celulase de elevada actividade em conjunto com uma argila amaciadora que proporciona rejuvenescimento de cor e manutenção de brancura, excelentes para tecidos , especialmente para aqueles que compreendem fibras de celulose. Um objectivo adicional da presente invenção é proporcionar Gomposições detergentes que exibem adicionálmeríte bom desempenho. de^rèmoção de nódoas e de limpeza, particularmente a temperaturas de cerca de 60^0, ouabaixo delas.

É um objectivo adicional da presente invenção proporcionar essas composições detergentes em forma Ce compacta, com uma densidade relativamente elevada e contendo uma baix;. quantidade de sal carga inorgânico, que exibem um desempenho de amaciamento óptimo.

É ainda um outro objectivo da presente invenção proporcionar composições detergentes líquidas compreendendo, p<i ra além dos compostos essenciais da presente invenção, um agente anti-sedimentação para proporcionar uma matriz de sus pensão de argila estável em armazenamento. Um objectivo adicional da presente invenção é proporcionar composições deter gentes, sejam elas líquidas ou granulares, compreendendo para além dos compostos essenciais um agente de floculação de argila para auxiliar adicionalmente a deposição da argila sobre as fibras.

SUMÁRIO DO INWENTO

A presente invenção refere-se a composições detergentes contendo um agente tensio-activo, um sistema adjuvante e uma celulase em que a referida celulase é caracterizada por proporcionar pelo menos 10% de remoção de carboximetilcelulose imobilizada, marcada radioactivamente, de acordo com o método C14CMC, que é descrito em detalhe,abaixo, eca5

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racterizada ainda por a referida composição detergente também compreender uma argila amaciadora.

Ainda preferidas são as composições detergentes nas quais a celulase consiste essencialmente num componente endoglucanase homogéneo que imonorreage com um anticorpo contra uma endoglucanase altamente purificada', sendo uma celulase de - cerca e de 43 KD, derivada de Humicola insolens,DSM 1800 ou um homólogo à celulase de cerca de 43 KD. Adicionalmente, verificou-se que as composições detergentes compreendendo^ ã va-rgila amaciadora e sendo a celulase um enzima endoglucanase com a sequência de aminoácidos mostrada nas listagens ID N^g2 e ID N⁹4 ou seus homólogos, proporcionam os benefícios de tratamento sinergético de tecido desejados, particularmente o amaciamento, de acordo com a presente invenção.

DEFINIÇÕES

A menos que seja indicado de outro modo, utilizar-se -ão as definições seguintes a partir daqui:

-as percentagens são percentagens ponderais

-amaciamento refere-se a uma gama de tratamento de tecidos, quenão.a limpeza: em particular inclui o amaciamento, o tratamento de rejuvenescimento de cor e de manutenção de brancura, antiengelhamento, antiestátíco e de facilidade de engomagem.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

As presentes composições detergentes podem estar na forma granular ou líquida. A forma depende da aplicaçao desejada, por exemplo, comer amaciadof .através'’ da lavagem a. - temperatura s baixas ou altas, numa máquina de lavar automática ou num procedimento semi-automático com lavagem à mão.

A forma desejada de detergente influenciará fortemen6

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te a selecção e quantidades dos compostos de surfactante, adjuvante, celulase, argilas amaciadoras e , especialmente , ingredientes opcionais para a coirposição em particular. Para composições líquidas é desejável um agente anti-sedimentaçãc para a argila amaciadora e não está em contradição com os agentes de floculação usados para auxuliarem a deposição da argila sobre as fibras, para composiçoes líquidas ou granulares. Contudo, a descrição detalhada de todos os compostos individuais e dos exemplos permitirá ao perito na arte a foi mulação de composições detergentes de acordo com a presente invenção.

SURFACTANTE

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Pode ser usada uma larga gama de surfactantes nas com posições detergentes. Uma listagem típica das classes e espé cies aniónica, não iónica, anfolítica e zwiteriónica destes surfactantes, é dada na Patente U.S. 3.664’.961, concedida a Nõrris em 23 de Maio de 1972.

As misturas de surfactantes aniónicos são particular-; mente adequados na presente invenção, especialmente misturas Sáa surfactantes suifonàfo. w sulfato numaãna^onponderaf he5 :1 a 1:2, preferivelmente de 3:1 a 2:3, mais preferivelemnte de 3:1 a

1:1. Sulfonatos preferidos incluem benzonossulfonatos de al quilo tendo de 9 a 15/ especialmente de 11 a 13 átomos de carbono, no radical alquilo e ésteres de ácidos gordos meti licos,sulfonadós®m posição alfa, nos quais o ácido gordo é derivado de uma fonte gorda C_in-C_1o, preferivelmente uma fonte gorda C_lg-C₁₈ .Effl:..cadãi caso o catião é um metal alcalino, preferivelmente sódio. Os surfactantes sulfato preferidos são sulfatos de alquilo tendo de 12 a 18 átomos de carbono no radical alquilo, opcionalmente em mistura com etox:. -sulfatos tendo de 10 a 20, preferivelmente de 10 a 16 átomos de carbono no radical alquilo e um grau médio de etoxilação dê 1 a 6 . Exemplos de sulfatos de alquilo preferidos

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na presente invenção são o sulfato de alquilo de sebo, o sul fato de alquilo de coco e sulfatos de alquilo 0^4-0^^. ^{0 ca}‘ tião, em cada caso, é de novo/Uimicat ião de um metal alcalino, preferivelmente sódio.

Uma classe de surfactantes nqo iónicos, úteis na presente invenção são condensados de óxido de etileno com uma porção hidrofóbica para proporcionarem um suKfactante tendo um equilíbrio hidrofílico-lipofílico médio (HLB) na gama de 8 a 17, preferivelmente de 9,5 a 13,5, mais preferivelmente delO a 12,5. A porção hidrofóbica (lipofílica) pode ser de natureza alifática ou aromática e o comprimento do grupo políoxietileno que está condensado com qualquer grupo hidrofó bico particular pode ser prontamente aju stada para originar um composto solúvel em água com o grau de equilíbrio desejado entre os elementos hidrofílico;e hidrofóbico.

Surfactantes não iónicos deste tipo, especialmente preferidos,são os etoxilatos de álcool primário C -C_1t-, contendo 3-8 moles de óxido de etileno por mole de álcool, particularmente os álcoois primários ^C ₁₄C^₅ contendo 6-8 moleíi de óxido feetileno por mole de álcool e os álcoois primários ^12-^14 contendo 3-5 moles de óxido de etileno por mole de álcool.

Uma outra classe de surfactantes não iónicos compreende compostos alquil-poliglucósido de fórmula geral

em que Z é uma porção derivada de glucose; R é um grupo alquilo hidrofóbico saturado que contêm de 12 a 18 átomos de carbono; t está entre 0 a 10 e n é de 2 ou 3; x está entre 1,3 e 4, incluindo os compostos menos do que 10% de álcool gordo que não reagiu e menos do que 50% de qlquil-poliglucósidos de cadeia curta. Descrevem-se compostos deste tipo e o seu uso em detergentes são descritos em EP-¹® o 070 077,

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075 996 e 0 094 118.

Sao também adequados como surfactantes não iónicos os surfactantes de amida de poli-hidroxiácidos gordos de for- mula

R² - C - N - Z

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em que E¹ é H ou R¹ é hidrocarbilo 2-hidroxietilea2-hidroxipropilo ou uma sua mistura, R² é hidrocarbilo C₅e Z é um poli-hidroxi-hidrocarbilo com uma cadeia hidrocarbilo linear com, pelo menos 3 hidroxilos directamente ligados à cadeia, ou um seu derivado álcoxilado. Preferivelmente, R é metilo, R é um alquilo ou alcenilo de cadeia linear como alquilo de coco ou suas misturas e Z é derivado de um açúcar redutor como a glucose,frutose, maltose. lactose, numa reacção de aminação redutiva.

Uma classe adicional de surfactantes são os surfactar. tes semi-polares como os óxidos de amina. Os óxidos de amina adequados são seleccionados de entre óxidos de mono-N-(alquil ou alcenil ΟθΟ₂θ, de preferencia amina e óxidos de propileno-1,3- diaminas, em que as restantes posições N estão substituídas com grupos metil©,hidroxietilo ou hidro xipropilo.

Uma outra classe de surfactantes são os surfactantes anfotéricos, como as espécies com base em poliamina.

Também podem ser usados os surfactantes catiónicos nas presentes composições detergentes e os surfactantes de amónio quaternário adequados são seleccionados de entre surfactantes de mono-N-(alquíl ou alcenil C_o-C_1c, preferívelο 1Ό mente ^c^q^_c^₄ )- amónio em que as restantes posições N estão substituídas com grupos metilo, hidroxietilo ou hidroxipropilo .

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Preferem-se as misturas de tipos de surfactantes, mais especialmente misturas aniónico-não iónico e, também, misturas aniónico-não iónico-catiónico. Descrevem-se misturas particularmente preferidas na Patente Britânica N^e 204 0987 e no Pedido Europeu, publicado, N^s 0 087 914. As composições detergentes podem compreender l%-70% em peso de surfactante, mas usualmente o surfactante está presente nas pre sentes composições numa quantidade de 1% a 30%, mais prefe rivelmente 10-25% em peso.

ADJUVANTE

Os materiais adjuvantes estarão, tipicamente, presentes em 10% a 60% das presentes composições detergentes. As presentes composições estão isentas ou substancialmente isentas djteadjuvantes contendo fosfato (sendo substancialmente isento aqui definido para significar menos do que 1% do sistema adjuvante total do detergente), e o sistema adjuvante da invenção consiste em adjuvantes solúveis em água, adjuvantes insolúveis em agua ou suas misturas.

Os adjuvantes insolúveis em água podem ser um material inorgânico de permuta iónica, normalmente um material aluminossilicato inorgânico hidratado, mais particularmente um zeólito sintético hidratado, como Zeólitos A, X, B ou HS, hidratados.

Os materiais aluminossilicatos de permuta iónica preferidos têm aifórmula de célula unitária

M_z[(A10₂)_z(Si0₂J_y]x^H2⁰ em que M é um catião de permuta com cálcio, z e y são, pelo menos, 6; a razão molar z para Y é de 1,0 a 0,5 e x é, pelo menos, 5, de preferência, de 7,5 a 276, mais preferivelmente de 10 a 264. Os materiais aluminossilicato estão em forma hidratada e sao, preferivelmente, cristalinos, conten

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do de 10% a 28%, mais preferivelmente de 18% a 22% de água.

Os materiais aluminossilicato de permuta iónica acime descritos são ainda caracterizados por diâmetro de particult de 0,1 a 10 micron, preferivelmente de 0,2 a 4 micron. 0 ter mo diâmetro de partícula representa aqui o diâmetro médic de partícula de um dado material de permuta iónica, tal comc determinado por técnicas analíticas convencionais como, por exemplo, determinação microscópica utilizando um microscópio electrónico de varrimento. Os materiais aluminossilicato de permuta iónica são ainda caracterizados pela sua capacidade de permuta de ião cálcio, que éde pelo menos 200 mg equivalentes de dureza CaCO^ de água/g de aluminossilicato, calculada numa base anidra, e que está geralmente na gama de 30( mg eq./g a 352 mg eq./g. Os materiais aluminossilicatos de permuta iónica são ainda caracterizados pela sua velocidade de permuta dos ioes cálcio que é descrita em detalhe na GB-1.429.143.

Os materiais aluminossilicatos de permuta iónica úteis na prática desta invenção estão disponíveis comercialmente e podem ser materiais de ocorrência natural, mas são preferivelmente derivados sintaticamente. Um processo para a produção de materiais aluminossilicato de permuta iónica é discutido na Patente U.S. N^Q 3.985.669. Materiais alumino^ silicato de permuta iónica, cristalinos, sintéticos preferidos, úteis na presente invenção estão disponíveis sob a designação Zeólito A, Zeólito B, Zeólito X, Zeólito HS e suas misturas. Numa concretização especialmente preferida, o material aluminossilicato de permuta iónica cristalino é o Zeólito A e tem a fórmula

Na₁₂[(A10₂)₁₂(Si0₂)₁₂]xH₂0 em que x está entre 20 e 30, especialmente de fórmula ΝαθθΕ (Λ10₂)₈₆(SiOj) _1Q6

Zeólito X também ade27.

]-10,276H₂O é

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quado, bem como o Zeólitico HS de fórmula Na_r [(A10_)_r (SiO„) o Z o Z ₆J.7,5 HgO.

Um outro material adjuvante, inorgânico, insolúvel en água adequado é o silicato em camadas, e.g. SKS-6 (Hoechst).; 0 SKS-6 é um silicato em camadas cristalino consistindo em silicato de sódio (NagSigO^).; A elevada capacidade de ligaçao C /Mg é, principalmente, um mecanismo de permuta catj ónica. Em água quente, o material torna-se mais solúvel.

adjuvante solúvel em água pode ser um agente quelar te de carboxilato monomérico ou oligomérico.

Carboxilatos adequados contendo um grupo carboxilo incluem ácido lático, ácido glicólico e seus derivados de éter como é descrito nas Patentes Belgas N² 831.368, 821.37( Os policarboxilatos contendo dois grupos carboxilo incluem os sais solúveis em água do ácido succínico, ácido malónico, ácido (etileneodioxi)acético, ácido maleico, ácido diglicólico, ácido tartárico, ácido tartarónico e ácido fumárico, bem como os éter-carboxilatos descritos em German Offenleger. schrift 2.446.686 e 2.446.687 e Patente U.S. N² 3.935.257 e os sulfinilcarboxilatos descritos na Patente Belga N²840.625 Os policarboxilatos contendo três grupos carboxilo incluem, em particular, aconitratos citraconitratos e citratos solúveis em água, bem como os seus derivados succinato tal como os carboximetilloxisuccinatos descritos na Patente Britânica N⁹ 1.379.241, lactoxisuccinatos descritos no Pedido Holandês 7205873 e os materiais oxipolicarboxilato tal como 2-oxa-l,1,3-propanoltricarboxilatos descritos na Patente Britânica N² 1.387.447.

Os policarboxilatos contendo quatro grupos carboxilo incluem os oxidissuccinatos descritos na Patente Britânica N² 1.261.892, 1,1,2,2-etanotetracarboxilatos, 1,1,3,3-propanotetracarboxilatos e 1,1,2,3-propanotetracarboxilato. Os policarboxilatos contendo substituintes sulo incluem os derivados de succinato descritos nas Patentes Britânicas N²

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1.398.421 e 1.398.422 e na Patente U.S. N® 3.936.448 e os citratos pirolisados sulfonados descritos na Patente Britânica N^s 1.082.179, ao passo que policarboxilatos contendo substituintes fosfona são descritos na Patente Britânica ns 1.439.000. Os policarboxilatos alicíclicos e heterocíclico5 incluem ciclopentano-cis,cis,cistetracarboxilatos, ciclopentadienito-pentacarboxilatos, 2,3,4,5-tetra-hidrofuran-cis, cis, cis-tetracarboxilatos, 2,5-tetrahidrofuran-cis-dicarboxilatos, 2,2,5,5-tetra-hidrofurantetracarboxilatos ,1/2,3,4,5)6 , -HexànO-hexacarboxilatos.e' derivados carboximetilo de álcoois

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poli-hidricos como sorbitol,manitol e xilitol. 0s policarboxilatos aromáticos incluem ácidd melítico, ácido piromelítico e os derivados do ácido ftálico descritos na Patente Britânica N^Q 1.425.343.

Dos anteriores, os policarboxilatos preferidos são os hidrocarboxilatos contendo até três grupos carboxilo,por molécula mais particularmente citratos.

Os sistemas adjuvantes preferidos para .a utilização nas presentes composições incluem uma mistura de adjuvante aluminossilicato insolúvel em água como o Zeólito A e um agente quelante de carboxilato, solúvel em água, tal como o ácido cítrico.Adiccionalmente, verificou?-se queos sistemas adjuvantes compreendendo ainda polímeros de policarboxilato eram úteis paraco sistema adjuvante, mas também para auxiliaà'rem o desempenho de amaciamento das composições detergentes de acordo com a presente invenção. Os polímeros de policarboxilato foram descritos em detalhe na arte anterior, por exemplo na ΕΡ-Ά-137 669.

Outros matérias adjuvantes que podem formar parte do sistema adjuvante para os fins da invenção incluem materiais inorgânicos como carbonatos,bicarbonatos, silicatos de metai alcalinos e materiais orgânicos como os fosfonatos orgânicos ãSí-aminopolialquilenof osf onatos e os aminopolicarboxilatos .

CEI.ULAS E

A actividade dos enzimas e, particularmente a activi35

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dade do enzima celulase tem sido definida para várias aplicações por diferentes métodos analíticos. Todos estes métodos tentam proporcionar uma avaliação realista do desempenho .. esperado em utilização ou pelo menos uma medição que se correlacione com o desempenho em utilização. Como foi detalhado no Pedido de Patente Europeia EP-A-350098, muitos dos métodos, particularmente aqueles que são usados frequentemente pelos fabricantes dajcelulase, não estão suficientemente correlacionados com o desempenho em utilização da celulase em composições detergentes para lavagem de roupa. Isto é devido às várias outras condições para as quais estes métodos de medida de actividade foram desenvolvidos.

método descrito na EP-A-350098, foi desenvolvido para ser e ter uma correlação previsível para classificar a actividade da celulase em composições detergentes para lavagem de roupa.

A presente invenção usa, consequentemente, o método descrito na EP-A-350098 para seleccionar celulases de modo a ddífet-inguir as celulases que são úteis na presente invenção e aquelas que não proporcionam os objectivos da presente invenção. 0 método de selecção, a partir daqui referido como, método C14CMC, que foi adoptado a partir do método de^ crito na EP-A-350098, pode ser descrito como se segue:

Princípio:

princípio do método C14CMC para a selecção é a medição a uma concentração de celulase definida numa soluçaõc de lavagem a remoção de carboximetilcelulose imobilizada (CMC), de um substrato em pano.A remoção da CMC é medida por marcação radioactiva de alguma da CMC usando carbono radioactivo C14. A contagem simples da quantidade do C14 radioactivo no substrato de pano antes e após o tratamento com celulase permite uma avaliação da actividade da celulase.

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Preparação da amostra:

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Preparaçao de CMC: A solução de base de CMC radioactiva é preparada de acordo com a Tabela I. A CMC radioactiva pode ser obtida por processos referidos na EP-A-350098. Substratos de tecido: Os substratos de tecido são amostras de musselina de algodão com um tamanho de 5 cm x 5 cm. Elas sao inoculadas com 0,35 ml da solução base de CMC marcada radioactivamente no seu centro. As amostras de musselina de algodão são, então, secas ao ar.

Imobilização da CMC: Para imobilizar a CMC marcada radioacti vamente nas amostras de musselina de algodão usa-se equipamento laundero-meter Li^itest Original Haunau feito por Original Haunau, Alemanha.. Enche-se o recipdente de metal do laundero-meter com 400 ml de água dura (4 mmol/litro de iões Ca⁺⁺). Pode ser usado um máximo de 13 amostras por recipiente. 0 recipiente é então incubado em ciclos de aquecimento de 202 c a 602 c durante 40 minutos no equipamento laundero-meter. Após incubação as amostras são lavadas em água corrente da rede durante 1 minuto. Elas são espremidas e deixadas secar ao ar durante, pelo menos, 30 minutos.De acordo com a EP-A-350098 as s amostras de pano com a CMC radioactiva imobilizada também podem ser medidas como amostras em branco sem lavagem.

Tratamento da amostra:

Solução de teste para lavagem de roupa: A solução de teste para a lavagem de roupa é preparada de acordo com a composição da Tabelai ii.É equilibrada a pH 7,5. A solução de teste de lavagem de roupa é a base à qual a amostra dalcêlulase em teste é adicionada. Deve ser tomado cuidado para não se diluir a solução de teste de lavagem de roupa por adição do água para se perfazer a 100% antes de se ter determinado a

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Case CM 393 quantidade de celulase a ser adicionada. A quantidade de celulase que é usada neste teste de selecção deve ser adiciona da para proporcionar 25x10° por cento, em peso, de proteína celulase na solução de teste de lavagem de roupa (equivalente a 0,25 miligramas/litro a 14,5ec).Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

Procedimento de lavagem: as amostras assim inoculadas com a CMC marcada radioactivamente foram,seguidamente tratadas nun processo de simulação de lavagem de roupa. 0 processo de lavagem é simulado no equipamento do tipo laundero-meter, Liniteste,Original Haunau, dè original Haunau, Haunàu,Alemanha.

Coloca-se uma amostra individual num frasco de vidro de 20 3 z .

cm . 0 frasco e cheio com 10 ml solução de teste de lavagem de roupa.βzdepois, é selado estanque aos líquidos. Colocam-se até 5 frascos em cada recipiente do laundero-meter.Enche -se o recipiente com água como meio de transferência de calor para a simulação da lavagem de roupa. A simulação de lavagem de roupa é conduzida como um ciclo de aquecimento de 20^QC até 609C, durante 40 minutos.

Após o processamento das amostras submergem-se os frí s cos em água fria e retira-se_t subsequentemente, cada amostre do seu frasco, lava-se uma proveta em água corrente macia, espreme-se e deixa-se secar ao ar durante, pelo menos, 30 minutos.

Medição

De modo a medir a remoção da CMC marcada radioactivamente, utiliza-se um contador de cintilação, por exemplo um contador cintilação LKB 1210 Ultrabeta. De modo a obter os resultados mais precisos, deve-se seguir o manual de instruções para a operação óptima do contador de cintilação particular. Por exemplo, para o contador de cintilação LKB 1210 Ultrabeta, deve ser seguido o seguinte procedimento. Coloca-se a amostra a ser medida num frasco de plástico com 12 ml

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do líquido de cintilação (e.g.líquido de cintilação 299 de Packard).; Deixa-se a amostra estabilizar durante pelo menos 30 minutos. 0 frasco é, depois, colocado no contaâbrr de cíe tilação LKB 1210 Ultrabeta e obtêm-se as respectivas contagens de radioactividade para a amostra.

De modo a medir a quantidade de remoção de CMC devidê apenas à celulase, é necessária uma medida de amostra que foi inoculada ao mesmo tempo, mas que foi tratada na soluçe de teste de lavagem de roupa sem celulase. A actividade da celulase é, então, expressa como'a percentagem de remoção da CMC marcada radioactivamente. Esta percentagem é calculada pela fórmula seguinte :

XO-XC % de remoção de CMC marcada radioactivamente =XO-XC x 100

XO em que XO é a montagem de cintilação de radioactividada. de uma amostra tratada com a solução de teste de lavagem de roupa sem celulase.

XC é a contagem decintilaçao de radioactividade para uma amostra tratada com a solução de teste de lavagem de roupa contendo a celulase aser aVàítiada.

Considerações estatísticas,confirmação do procedimento:

De modo a proporcionar resultados estatisticamente válidos, devem ser empregues análises estatísticas padrão. Para o exemplo dado, usando o contador de cintilação LKB Ultrabeta, verificou-se que pode ser usada uma amostra de tamanho de 3 amostras para cada contagem de radioactividade de cintilação.

De modo a confirmar o procedimento por verificação interna, recomenda-se a medida e o cálculo da amostra em branco de acordo com a EP-A-350098. Isto permitirá a detecção e eliminação de erros.

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Case CM 393 ¹ Interpretação de resultados:

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teste de selecção descrito proporciona um método rá

P.jdo único qjíii^elrpa·^ identificação de celulases que satisfazem os critérios de actividade da presente invenção em relação a celulases que nao fazem parte da presente invenção.

Verificou-se que uma remoção de 10% ou mais da CMC marcada radioactivamente de acordo com o método C14CMC, indi ca que a celulase respectiva satisfaz os reqitósitos da presente invenção.

Será óbvio para os peritos na arte que a remoção de percentagens superiores a 10% indicam uma actividade mais elevada para a celulase respectiva.Coirtqitípçlai-se, consequentementè que celulases proporcionando mais do que 25% ou, pre; ferivelmente, mais do que 50%, de remoção da CMC marcada radioactivamente, à concentração de proteína na solução de tes: te de lavagem de acordo com método C14CMC, proporcionará uma indicação de um desempenho ainda melhor da celulase pare, utilização nos detergentes para lavagem de roupa.

Também, foi contemplado que a utilização de concentre, ções mais elevadas de celulase para o método C14CMC, proporcionaria percentagens de remoção mais elevadas. Contudo, não existe qualquer correlação linear provada entre a concentração de celulase e a percentagem de remoção por ela obtida.

Também foi contemplado que a utilização de concentrações mais elevadas de celulase para o método C14CMC, proporcionaria percentagens de remoção mais elevadas.

TABELA IiSolução de base de CMC marcada radioactivamente con í C14 (todas as percentagens são ponderais em relação à solução total)

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Case CM 393

1 \| CMC Total 1 (a CMC deve ser de grau \| detergente com um grau de \| substituição de cerca de f 0,47 a cerca de 0,7) 1	! 1 1 ¹ 1 1 \| 99,2x10^_3% i 1 1 1 1 1 1
\| Etanol 1	I 14985,12xl0^-3^ \| ¹ 1
\|Água Desionizada 1	\| 84915,68x10 ^3% ₍
\| Total:	1 1 I 100% \| 1 \|-

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* CMC total contém a CMC não radioactiva e radioactivê. para proporcionar uma radioactividade suficiente que permite leituras suficientemente claras iro contador de cintilação usado. Por exemplo, a CMC radioactiva pode ter uma actividade de 0,7 microcurie/g e pode ser mistiarda com CMC não radioactiva a uma razão de 1:6,7.

TABELA II: Solução de Teste de lavagem de roupa (todas as percentagens são em peso da solução total)

Acido alquilbenzenossulfónico	0,110%
linear C^
Alc/uilsulfato de coco (sal TEA)	0,040%
Etoxilato de álcool _1C(EO7)	0,100%
Acido gordo de coco	0,100%
Ácido oleico	0,050%
Ácido cítrico	0,010%
19

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Case CM 393

Trietanolamina	0,040%
Etanol	0,060%
Propanodiol	0,015%
Hidróxido de sódio	0,030%
Formato de sódio	0,010%
Protease	0,006%

+ +

Água (2,5 mmol/litro de Ca ), agente de ajuste do pH (soluções restante para de HC1 ou de NaOH) e celulase 100%

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De acordo com a presente invenção, as celulases preferidas são aquelas descritas no Pedido de Patente Dinamarquesa 1159/90.Por exemplo,uma preparação de celulase útil nas composições da invenção pode consistir essencialmente num componente endoglucanase homogéneo, que imunorreage com um anticorpo contra uma celulase, altamente purificada, de 43 kD, derivada de Humicola insolens, DSM 1800 ou que é homologa à referida endoglucanase de 43 kD.

Deve ser dada enfase ao facto de todas as enzimas celulase de acordo com a presente invenção terem de satisfazer o critério do teste de selecção acima referido. Contudo, no Pedido de Patente Dinamarquesa 1156/90 estabeleceram-se critérios adicionais que permitem a identificação de enzimas celulases preferidos em combinação com o presente teste de selecção.

As preparações de celulase particularmente úteis nas composições da invenção são aquelas nas quais, para além do teste de selecção, o componente endoglucanase exibe actividade de CMC-endoase de pelo menos cerca de 50, preferivelmef te pelo menos cerca de 60, em particular pelo menos cerca de 90 unidades CMC—endoase por mg de proteína total. Em particular, um componente endoglucanase preferido exibe uma actividade CMC-endoase de pelo menos 100 unidades CMC-endoase po:‘

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mg de proteína total.

No contexto presente, o termo actividade CMC-endoase refere-se à actividade de endoglucanase do componente endoglucanase em termos da sua capacidade para degradar celu lose em glucose, celobiose e triose, como determinado pela diminuição da viscosidade de uma solução de celulose carboximetilo (CMC) após incubação com a preparação de celulase da invenção, como é descrito em detalhe, a seguir.

A actividade CMC-endoase (endoglucanase) pode ser determinada a partir da diminuição da viscosidade da CMC, como se segue: prepara-se uma solução substrato contendo 35 g/1 de CMC (Hercules 7 LFD) em tampão Tris 0,1 M a pH 9,0. Dissolve-se a amostra de enzima a ser analisada no mesmo tampão Misturam-se 10 ml de solução substrato em 0,5 ml de solução de enzima e transferem-se para um viscosímetro (e.g. Haake VT 181, sensor NV, 181 rpm), termostatizado a 40^0. As leituras de viscosidade sao feitas tão depressa quanto possível após a mistura e, de novo, 30 minutos mais tarde. A quantida de de enzima que reduz a viscosidade a metade sob estas condições é definida como 1 unidade de actividade CMC-endoase, ou CEVU/litro.

Utilizaram-se a electoforese em SDS-gel de poliacrila mida (SDS-PAGE) e a focagem isoelécfctrica. com proteínas marcadoras de forma conhecida pelos peritos na arte para a determinação da massa molecular e do ponto isoeléétricô(pi), respectivamente, do componente endoglucanase na preparação de celulase útil no presente contexto. Deste modo, determinou-se que a massa molecular de um componente endoglucanase específico era 43 kD. Determinou-se o ponto isoelédtrico desta endoglucanase como cerca de 5,1.

A actividade de celo-bio-hidrolase pode ser definida como a actividade em relação á p-nitrofenil-celobiose. A actividade é determinada como a libertação de 10^_θ mole de nitrofenilo por minuto, a 37SC e a pH 7,0. Verificou-se que o presente componente endoglucanase não tinha essencialmente

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Case CM 393

qualquer actividade de celo-bio.-hidrolase.

O componente endoglucanase na presente preparação de celulase foi, inicialmente, isolado por procedimento de purificação extensiva, i.a. envolvendo a purificação por HPLC

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de fase inversa de uma mistura em bruto de celulase de H.

solens de acordo com U.S. 4.435.307. Este procedimento resu? tou, surpreendentemente no isolamento de uma endoglucanase de 43 kD como um componente único com propriedades inesperadamente favoráveis devido a uma actividade de endoglucanase surpreendentemente elevada.

Para além do teste de selecção, as enzimas celulase úteis nsa presentes composições podem, também, ser definidas adicionalmente como enzimas que exibem actividade de endoglucanase (no que se segue, referidas como enzima endoglucanase), enzimas essas que têm uma sequência de aminoácidos apresentada na Listagem de Sequência ID^2, em apêndice, ou um seu homólogo exibindo actividade de endoglucanase.

No presente contexto, pretende-se que o termo homólogo indique um polipéptido codificado por ADN que híbrida com a mesma sonda que o ADN que codifica a enzima endogluca-nase com esta sequência de aminoácidos sob uma condição especificada (como pré-humedecimento em 5xSSC e pré-hibridação durante 1 hora a 40^sC numa solução de formaldeido a 20% 5x solução de Denhardt, fosfato de sódio 50 mM, pH 6,8 e 50 jug de ADN de timo de vitelo, sonicado, desnaturado, seguindo-se a hibridação na mesma solução suplementada com ATP 100 uM durante 18 horas a 40^eC. Pretende-se que o termo inclua derivados da sequência anteriormente mencionada, obtj_Ldos por adição de um ou mais resíduos de aminoácido no terminal C e no terminal N da sequência nativa, substituição de um ou mais resíduos de aminoácido em um ou mais locais da sequência nativa, delecção de um ou mais resíduos de aminoácido numa ou em ambas as extremidades da sequência de amj_Lnoácidos nativa ou num ou mais locais dentro da sequência nativa ou inserção de um ou mais resíduos de aminoácido em

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um ou mais locais na sequência nativa.

A enzima^ 'endoglucanase''daqui'pode, sér.produzida por uma όϊχ mais' espécies de fíumicolá tálscoftio Humicola insolens, e.g. a estirpe

DSM,1800, depositada em 1'de Outubro de 1981 na Deutsche Sammlung

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vom Mikroorganismen, Mascheroder Weg lB,D-3300 FRG, de acordo com as condições do Tratado de

Braunschweig,

Sobre

Budapeste o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microorganis mos para os Fins de Procedimento de Patente(o Tratado de Budapeste)

Ainda num outro aspecto, as presentees enzimas célula ses úteis podem ser definidas, para além do teste de seleç çao, como enzimas endoglucanase que têm a sequência de aminoácidos apresentada na Listagem de Sequência de^ID 4, em apên dice, ou um seu homólogo :ítal como definido anteriormente), que exiba actividade de endoglucanase. A referida enzima endoglucanase pode ser uma que possa ser produzida por um espé cie de ffusarium, tal como Fusarim oxysporus, e.g. estirpe DSM 2672, depositada em 6 de Junho de 1983 na Deutsche Sammlung vom Mikroorganismen, Mascheroder Weg 1B, D-3300 Braunschweig, FRG, de acordo com as condições do Tratado de Budapeste

Além disso,contempla-se qua a endoglucanase homóloga possa ser derivada de outros microorganismos que produzem en zimas celulolíticas e.g. espécies de Trichoderma. Myceliophthora,SchUzophyllum, Penicillium, Asperqillus e Geotricium.

Contudo para a produção industrial da presente preparação de celulase, prefere-se empregar técnicas de ADN recoir binante ou outras técnicas que envolvem ajustamentos de fermentações ou mutação dos microorganismos envolvidos para assegurar a sobreprodução das actividades desejadas. Estes métodos e técnicas sao conhecidas na arte e podem ser prontamente realizadas por peritos na arte .

componente endoglucanase pode, assim ser um que seja produzido por um processo compreendendo a cultura de uma célula hospedeira transformada com um vector de ADN recombi

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nante que transporta uma sequência de ADN codificando o refe rido componente endoglucanase ou um precursor do referido componente endoglucanase bem como sequências de ADN codificando funções que permitem a expressão da sequência de ADN que codifica o componente de endoglucanase ou um seu precursor, num melo de cultura sob condições que permitem a expres são do componente endoglucanase ou de um seu precursor e recaperaçao do componente endoglucanase da cultura.

As construções de ADN que compreendemxumasequência de ADN que codifica uma enzima endoglucanase tal como descrita anteriormente, ou uma forma precursora da enzima, incluem as construções de ADN com uma sequência de ADN como é apresentada nas Listagens de Sequência ID$:1 ou ID#3, ou uma sue modificação. Exemplos de modificações adequadas das sequências de ADN são substituições de nucleótidos que não dão orj gem a outra sequência de aminoácidos, mas que correspondem à utilização de codões do organismo hospedeiro no qual a construção de ADN é introduzida ou substituições de nucleótidos que dão origem a uma sequência de aminoácidos diferente e, possivelmente por isso, a uma estrutura proteica diferente que pode originar um mutante endoglucanase com propriedades diferentes das da enzima nativa. Outros exemplos de modificações possíveis são a inserção de um ou mais nucleótidos em qualquer um dos extremos da sequência, ou delecção de um ou mais nucleótidos em qualquer um dos extremos da sequência.

As construções de ADN que codificam enzimas endoglucanase úteis aqui podem ser preparadas sinteticamente por processos comuns estabelecidos, e.g. o método do fosforoami-dito descrito por S.L. Beaucage e M.H. Caruthers, Tetrehedron Letterg, 1981, pag. 1859-1869, ou o processo descrito por Matthes et al., EMBO Journal 3, 1984, pag.801- 805. De acordo com o método do fosforsamidito os oligonucleótidos são sintetizados, e.g. num sintetizador automático de ADN, purificados , desnaturados/renaturados (annealed), ligados

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e clonados em vectores adequados.

Uma construção de ADN que codifica a enzima endoglucç : nase ou um seu precursor pode, por exemplo, ser isolada ao estabelecer um ADNc ou uma biblioteca genómica, de um microorganismo produtor de celulase, tal como Humicola insolens, DSM 1800 e selecção em termos de clones positivos por procedimentos convencionais como por hibridação usando sondas de oligonucleótidos sintetizados na base da sequência de aminoácidos total ou parcial da endoglucanase, de acordo com téecnicas padrao (cf. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2^a Ed. Cold Spring Harbor, 1989) ou por selecção de clones que expressam a actividade de enzima adequada, (i.e. actividade de CMC-endoase, tal como definido anteriormente), ou por selecção de clones que produzem uma proteína que reage com um anticorpo contra uma celulase nativa (endoglucanase).

Finalmente a construção de ADN pode ser de origem mista sintética e genómica, mista sintética e de ADNc ou mi^ ta genómica e de ADNc, preparado por ligação de fragmentos de origem sintética, genómica ou de ADNc (conforme adequado), correspondendo os fragmentos a várias partes de toda a construção de ADN, de acordo com técnicas padrão. A construção de ADN pode também ser preparada por reacção em cadeia de polimerase usando iniciadores específicos, por exemplo, como os descritos em U.S. 4.683.202 ou em R.K. Saiki et al., Science 239, 1988, pag. 487-491.

Os vectores recombinantes de expressão nos quais as anteriores construções de ADN podem ser inseridas incluem qualquer vector que possa ser convenientemente submetido a procedimento de ADN recombinante e a escolha do vector dependerá, frequentemente, da célula hospedeira na qual ele deve ser introduzido. Assim, o vector pode ser um vector de replicação autónoma, i.e. um vector que existe como uma entidade extracromossómica, cuja replicação é independente da replicação cromossómica, e.g.um plasmídeo. Alternativa25

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mente, o vector pode ser um que, quando introduzido numa cé lula hospedeira, seja integrado no genoma de célula hospedei ra e replicado em conjunto com o (s) cromossoma(s) nos quais foi integrado.

No vector, canase deve estar motora e de terminação adequada. 0 promotor pode ser qualqus sequência de ADN que mostre actividade transcricional na céa sequência de ADN que codifica a endogluligada operativamente a uma sequência pro«V _ _ _

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lula hospedeira de escolha e pode ser derivado de genes que codificam proteínas homólogas ou heterólogas em·relaçao à célula hospedeira, ©s procedimentos usados para a ligação de sequências de ADN que codificam a endoglucanase, o promotor e o terminador, respectivamente, e para os inserir em vectores adequados sãõcberncònhecidos dosperi tos na arte (cf.,por exemplo, Sambrook et al., op. cit.)

As células hospedeiras que são transformadas com as construções de ADN anteriores ou com os vectore® de expressão anteriores podem ser, por exemplo, uma espécie deAspergillus, muito preferivelmente Asperqillus oryzae ou Aspergillus niger. Podem transformar-se células fúngicas por um processo que envolve a formação de protoplasto e transformação dos protoplastos, seguida por regeneração da parede celular de uma forma conhecida per se. 0 uso de Asperqillus como um microorganismo hospedeiro é descrito na EP 238 023 (de Novo Industri A/S), cujo conteúdo está aqui incorporado para referência. A célula hospedeira pode também ser uma célula de levedura, e.g. uma estirpe de Saccharomyces cerevisiae.

Alternativamente,o organismo hospedeiro pode ser uma bactéria, em particular estirpes de Streptomyces e Bacillus e E. coli. A transformação de células bacterianas pode ser realizada de acordo com métodos convencionais, e.g. como descrito em Sambrook et al., Molecular Cloninq; A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 1989.

A selecção de sequências de ADN e a construção de v* ;35

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vectores, adequados, também pode ser realizada por procedimentos padrão, cf. Sambrook et al., op. cit..

meio usado para cultivar as células hospedeiras transformadas pode ser qualquer meio convencional adequado para o desenvolvimento das células hospedeiras em questão. A endoglucanase expressa pode convenientemente, ser segregada para o meio de cultura e pode ser daí recuperada por procedimentos bem conhecidos incluindo separação de células do meio por centrifugação ou filtração, precipitação de componentes proteicos do meio através de um sal como o sulfato de amónio, seguida de procedimentos cromatográficos como cromatografia de permuta iónica, cromatografia de afinidade ou semelhantes.

Empregando técnicas de ADN recombinantes como indicado anteriormente, técnicas de purificação de proteínas, técnicas de fermentação e de mutação ou outras técnicas que são bem conhecidas na arte, é possível proporcionar endoglucanase de elevada pureza.

nível na presente composição de celulase descrito acima, deve ser tal que a quantidade de proteínas de enzima a ser distribuída à solução de lavagem seja de 0,005 a 40 mg/litro de solução de lavagem, preferivelmente 0,01 a 10 mg/litro de solução de lavagem.

A argila amaciadora

Um componente essencial das presentes composições detergentes é uma argila amaciadora.

Pode ser utilizada na presente invenção qualquer argila usada na arte ou suas misturas. Foram descritos exemplos preferidos em GB 1.400.898 ou U*S. 5.019.292.

Incluídos entre estas argilas estão caulinos tratados por calor e várias smectites muil-camada. Tal como é conhecido na arte as argilas smectíticas preferidas exibem uma capacidade de permuta catiónica de pelo menos 50 mq por 100

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tf®»!

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gramas de argila, o que corresponde a uma carga de camada de 0,2 a 0,6.

Ainda preferidas são as argilas que têm um tamanho de partícula na gama de 5-50 micron.

Argilas smectítiaas adicionalmente preferidas são as argilas hecforíticas de fómula geral r_T. „ ΪΪΪ 0_in(0H„ Fz)] ^^x+y) [(^Mg3_x^L1x)^S14__y ^{Me y 10 2_z} (x+y)Mⁿ⁺ onde y=0; ou se y^O, Me'é Al,Fe ou B; mⁿ⁺ é um ião metálico monovalente (n=i) ou divalente (n=2), por exemplo selec cionado de entre Na, K, Mg, Ca, Sr. 0 valor de (x+y) é a cai ga de camada da argila hectorítica. As argilas hectoríticas adequadas para as composições detergentes da presente invenção tem uma distribuição de carga de camada tal que, pelo me nos, 50% está na gama de 0,23 a 0,31.

Sao preferidas as argilas hectoríticas de origem natural com uma distribuição de carga superficial tal que, pelo menos 65% está na gama de 0,23 a 0,31^

Exemplos específicos não limitantes de minerais de argilas smectíticas são:

Montmorilonite de sódio

Borck^)

Volclay BC^ Gelwhite GP^^R^

Thixo-Jel

Ben-A-Gel^

Sectorite de sódio

XT -n (R)

Veegum F ' ' (R)

Laponite SP28

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Saponite de sódio

Barasym NAS 10(/^R)

Montomorilonite de Cálcio

Soft Clark ^(R^

Gelwhite L

Imvite K

CSM- Clay ^^R^ de Kimoulos

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Hectorite de lítio

Barasym LIH 200^^R^

A quantidade de argila amaciadora útil na presente invenção depende da forma da. composição detergente .Em geral^ ela pode variar de limites inferiores de 0,5% , 1% ou 8% até limites superiores de 50%, 20% ou 15%.

INGREDIENTES OPCIONAIS PREFERIDOS

Os agentes de floculação de argila não são vulgarmente usados em composiçoes para o tratamento de tecidos. Pelo contrário, há Uma inclinação para usar dispersantes de argila, que auxiliam a remoção de manchas de argila dos tecidos Os agentes de floculação de argilas sao, contudo, bem conhecidos em outras indústrias como perfuração de poços de petróleo e para a flotação de minério em metalurgia. A maior parte destes materiais são polímeros de cadeia relativamente longa e copolímeros derivados de itionómeros como óxido de et/ leno, acrilamida, ácido acrílico, dimetilamino-metacrilato de etilo, álcool vinílico,vinilpirrolidona, etileno-imina. Sao também adequadas as gomas, como goma de guar.

São preferidos polímeros de óxido de etileno, acrila29

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Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

mida ou ácido acrílico. Verificou-se que estes polímeros melhoram dramáticamente a deposição de uma ragila se as suas massas moleculares (massa média) estão na^gama de 100 000 até 10 milhões. Sao preferidos os polímeros como massa molecular (massa média) de 150 000 até 5 milhões, mais preferivelmente de150 000 até 800 000.

polímero mais preferido é o poli(óxido de etileno). As distribuições de massa molecular podem ser prontamente determinadas usando cromatografia de permeabilidade em gel, em relação a padrões de poli(óxido de etileno) com distribuj_ ções estreitas de massa molecular.

A quantidade de agente de floculação de argila, expressa como percentagem da argila, varia de 0% a 20%. Para agentes de floculação de argila com uma massa molecular (ma^ sa média) inferior a 800 000, a quantidade preferida é de 2% a 20% da argila. Para - massa molecularesímassa média) superiores a 800 000 a quantidade/ preferida é de 0.005% a 2% da argila.

Outro ingrediente opcional preferido é poli-siloxano substituído, variando a quantidade de siloxano de 0% até 50% em peso da argila, preferivelmente de 0,1% a 20%, muito preferivelmente de 1,0% a 10%.

Os siloxanos úteis na presente invenção podem ser de:[ critos como poli-dialquil C^ ^-siloxano, organo funcional, lineares ou ramificados amaciadores, com a fórmula geral:


	R		R
-- 0 —	--Si		. n. -cí

	R		Rn
		ql	/
		y

R

I

Si--R!'

I r

R — q2

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Case CM 393

em que R é alquilo

R' é R ou um poliéter de(óxidos C₂_₃)₁ 50' ^{com um} 9^ruP° protector de H ou R;

R é alquilo C^-^linear ou ramificado;

^l^e ^2p^sã° inteiros* m e (q^+q₂) são inteiros de 4 a 1700;

n é um inteiro de 0 a 6;

Y é um poliéter de (óxidos C„ _) , onde k tem um valor méZ ” ú K dio de 7 a 100, com um qrupo protector de H ou alquilo 0_{χ 4}: ou Y é:

IS.

em que X e V são seleccionados de entre H:

- alquilo “ C-arilo;

cicloalquilo C₅_₆: ^ci_6^-NH2^:

-COR; com a condição de o azoto poder ser quaternizado de modo a representar:

onde W pode ser seleccionado de entre X e V ou Y é

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Case CM 393

h —-—-T

Mod. 71 -20.000 ex.-90/08

em que T e P são selaccionados de entre - H*

- C00H, -C0-0-alquilo ^ou epoxi-ciloalquilo C^_g.

Os siloxanos preferidos da referida fórmula geral sãc caracterizados por (qi-q?) ser um inteiro de 50 a 1500 e m ser inteiro de 4 a 100.

Os siloxanos mais preferidos da referida fórmula ge-. ral são caracterizados por qualquer um dos seguintes:

-R, R' são metilo e R é propilo e ® 329 emé21enéle y é um poliéter que consiste em 12 óxidos de etilo e um grupo protector ácido acético ou

- R, R' são metilo e R é propilo e (qi+qz). é 485 emél5enéle y é um poliéter que consiste em 12 óxidos de etilo e um grupo protector ácido acético ou

- R, R' são metilo e R é metilo-2-propilo e θ Í470 emé30enéle y é uma -(aminoetil)amina.

As ‘ composiçoes detergentes da presente invenção podem ser proporcionadas na forma líquida como dispersão aquosa. Se está na fotma líquida a composição detergente compreende ainda, preferivelmente, um agente antideposição em conjunto com uma argila amaciadora, siloxano e agente de floculação de argila.

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Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

Um agente antideposição adequado deve proporcionar uma matriz de suporte totalmante activada para as partículas; suspensas na composição detergente líquida.

Neste sentido partículas sao grânulos ou goticulas, de tamanho adequado para suspensão, para as propriedades desejadas; oa composição detergente líquida. Usualmente o tamanho das partículas será inferior a menos de 200 micron. As partículas individuais podem compreender um ou mais dos compostos essenciais ou opcionais da composição detergente.

Finalmente um agente antideposição aceitável não deve afectar de modo adverso a viscosidade, elasticidade e estética do produto.

Estes agentes antideposição, ou suas misturas, são usados nas composiçoes da presente invenção a níveis de 0,25 % a 5%.

Os compostos de amónio quaternizado-argila, organofílicos, por exemplo da família Bentone das argilas e também de sílicas fumadas (fumed sílicas), são exemplos de agenè_;:tes antideposição adequados para utilização na presente invençao. Os aditivos reológicos Bentone; sao descritos como produtos de uma argila que /contém iuma’ ostruturá//fe/camada'negativa e um composto orgânico que contém um catião e pelo menos um grupo alquilo contendo pelo menos 10 átomos de carbono. As Bentone têm a propriedade de incharem em certos líquidos orgânicos. Os compostos de amónio quaternizado-argila, organofílicos, sao agentes antideposição preferidos como descrito na Patente U.S. 4.287.086.

As sílicas fumadas também proporcionam excelentes características antideposição âs composições da presente inven ção. As sílicas fumadas são definidas geralmente como uma forma coloidal de sílica produzida pela combustão do tetracloreto de silíco numa fornalha de hidrogénio-oxigénio. As sílicas fumadas são, normalmente, usadas como agentes espessantes,tixotrópicos e reforçadores em tintas, resinas, borrachas, tintas para pintura e cosméticos. As sílicas fumadas:

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(R) ~ ~

CAB-O-SIL sao agentes antideposição adequados para utile zaçao na presente invenção.As misturas de argilas Bentone' , sílicas fumadâs ou agentes de suspensão celulósicos são tam bem agentes antideposiçao adequados.

As características reológicas das composições líquidas resultantes são muito importantes para um produto comercialmente aceitável: Um líquido descrito como fibroso (i.e. elástico), espesso ou com grumos é indesejável. Os agentes antideposiçao descritos anteriormente evitam estas propriedades reológicas indesejáveis mantendo um produto,; escoável, homogéneo, com boa aparência para o consumidor. É desejável uma viscosidade na gama de cerca de 100 a cerca de 1000 kg/(ms).

É,também, desejável que a composição líquida exiba uma reologia plástica. Os materiais que exibem características de escoamento plásticas fluirão apenas quando uma tensão de corte aplicada excede um valor crítico mínimo.

INGREDIENTES OPCIONAIS

As presentes composições incluirão, tipicamente, ingredientes opcionais que normalmente tomam parte em composições detergentes. Agentes antideposição e de suspensão de sujidade, branqueadores ópticos, branqueadores, activadores de branqueadores, supressores de espuma, agentes antiaglomeração, corantes e pigmentos são exemplos destes ingredientes opcionias e podem ser adicionados em quantidade variáveis, na medida do desejado.

Os agentes antideposição e de suspensão da sujidade adequados para a presente invenção incluem derivados de celulose como metilcelulose, carboximetilcelulosse e hidroxietilcelulose.

Estes materiais são usados normalmente em nívei de 0,5% a 10% em peso, mais preferivelmente de 0,75% a 8%, muito preferivelmente de 1% a 6% em peso da composição. Eles podem ser usados em composições detergentes granulares mas também para suplementarem os agentes de suspensão, acima mei

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Case CM 393 para composições detergentes líquidas .

sendo exemplos destes,4,4^-bis-(2-dietanolamino-4-1

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cionados,

Os branqueadores ópticos preferidos são de carácter aniónico,

-anilino-s-triazin-6-ilamino)-estilbeno-2:2 -dissulfonato de

- .

dissódio, 4,4 - bis-(2-morfolino-4-anilino-s-triazin-6-ila¹ 1 mino)-estilbeno-2:2 -dissulfonato de dissódio, 4,4 -bis-(2,^ 1 -dianilino-s-triazin-6-ilamino) -estilberlo-2 : 2 -bis^ulf onatc 111 de dissódio, 4 ,4 - bis-(2,4-dianilino-s-triazin-6-ilamino)

-estilbeno-2-sulfonato de monossódio, 4,4 -bis-(2-anilino-4

-(N-metil-N-2-hidroxietilamino)-s-triazin-6-ilamino)-estilbe i í ' ' no-2 :2-díssulfòiíatce de dissódio, 4,4 -bis-(4-fenil-2,1,3-tric

1 zol-2-il)-estilbeno-2;2 -dissulfonato de dissódio, 4,4 -bis-(2-anilino-4-(1-metil-2-hidroxietilamino)-s-triazin-6-ila1 mino)-estilbeno-2:2 -dissulfonato de dissódio e 2-(estilbil11 11 11

-4 -(nafto-1 ,2 :4,5)-1,2,3-triazolo-2 -sulfonato de sódic.

Pode ser utilizado qualquer branqueador de per-hidrato, inorgânico, em partículas, numa quantidade de 3% a 40% em peso, mais preferivelmente de 8% a 25% em peso e muito preferivelmente de 12% a 20% em peso das; composições. Exem pios preferidos destes branqueadores são o perborato de só dio mono-hidratado e tetra-hidratado, percabonato e suas mis turas.

Um outro ingrediente preferido misturado separadamente é um precursor de um branqueadora de ácido peroxicarboxílico, vulgarmente referido como activador de branqueador, que é adicionado preferivelmente numa forma de partículas esi feriças (prills) ou aglomerada em detergentes granulares. Exemplos de compostos adequados deste tipo são descritos nasi Patentes Britânicas Ν^θ 1586769 e 2143231 e um método para a sua formação em forma de partículas esféricas é descrito no Pedido de Patente Europeia, publicado, N^O 062 523. Exemplos preferidos destes compostos são tetraacetiletilenodiamina e

3,5,5-trimetilhexanoilbenzenossulfonato de sódio.

Os activadores de branqueadores são, normalmente empregues em níveis de 0,5% a 10% em peso, mais frequentemente

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de 1% a 8% e, preferivelmente de 2% a 6% em peso da composição .

Um outro ingrediente opcional é um supressor de espuma,exemplificado pelos silicones e mistuars ssílica-silicone. Os silicones são, geralmente representados por materiais pc lisiloxano alquilados nos quais a sílica é usada, normalmente, em formas finamente divididas, exemplificadas por aerogeis e xerogeis, de sílica e sílicas hidrofóbicas de vários tipos. Estes materiais podem ser incorporados como materiais em partículas nos quais o supressor de espuma é vantajosamer te incorporado de rmodoo libertável portador detergente, impermeável, substancialmente não tensioactivo , solúvel em água ou dispersável em água. Alternativamente o supressor de espuma pode ser dissolvido ou dispersado num portador líquido e aplicado por pulverização a um ou mais dássoutros compc nentes.

Tal como mencionado anteriormente, os agentes de controlo de espuma de silicone,úteis, podem compreender uma mis tura de umsiloxano alquilado, do tipo referido aqui anterior mente e sílica sólida. Estas misturas são preparadas afixando o silicone à superfície da sílica sólida. Um agente de controlo de espuma, de silicone, preferido é representado por um silica silanada hidrofóbica (mais preferivelmente trimetil-silanada) com um tamanho de partícula na gama de 10 milimicron a 20 milimicron e uma área de surperfície específica superior a 50 m /g misturada infimamente com fluido de dimetilsilicone com uma massa molacular na gama de cerca de 500 a cerca de 200 000 com uma razão ponderai silicone pí^ ra sílica silanada de cerca de 1:1 a cerca de 1:2.

UKL..agente' de controlo de espuma, de silicone, preferi·· dõcé descrito em Bartollota et al.. Patente U.S. 3.933.672.

Outros supressores de espuma particularmente úteis sao os supressores de espuma de silicone auto-emulsionantes, descr._Ltos no Pedido de Patente Alemã DTOS 2.646.126 publicado em 28 de Abril de 1977. Um exemplo de um desses compostos é o

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DC-544, disponível comereialmente em Dow Corning, que é um copolímero de siloxano/glicol.

Os supressores de espuma descritos anteriormente são, normalmente, empregues em níveis de 0,001% a 2% em peso da composição, preferivelmente de 0,01% a 1% em peso. A incorpo ração dos modificadores de espuma é feita, preferivelmente, como partículas separadas e isto permite a inclusão neles de outros materiais controladores de espuma como ácidos gordos ^C20-24' ^ceras microcristalinas e copolímeros de elevada MW de óxido de etileno e óxido de propileno, que de outro modo iriam afectar de modo adverso a dispersibilidade da matriz. Descrevem-se técnicas para a formação de modificadores de es puma em partículas na Patente U.S. N23.933.672 de Bartolotta et al., já mencionada.

Outros materiais poliméricos úteis são os polietileno glicóis, em particular os de massa molecular de 1000-10000, mais particularmente de 2000 a 8000 e muito preferivelmente de cerca de 4000. Estes são usados em níveis de 0,20% a 5% mais preferivelmente de 0,25% a 2,5% em peso. Estes polímeros, bem como os polímeros de policarboxilato homo ou copoli méricos, já mencionados, são valiosos para o melhoramento da manutenção da brancura, deposição d^ revestimento de tecido (fabric ash) e desempenho de limpeza sobre sujidade de argila, proteíicas e oxidáveis na presença de impúrezas de materiais de transiçao.

Os agentes para libertação da sujidade, úteis nas con posições da presente invenção são, convencionalmente, copolímeros ou tripolímeros do ácido tereftálico com unidades etilenoglicQl e/ou propilenoglicol em várias disposições. Exemplos destes polímeros são descritos nas Patentes Nè4.. 116 885 e 4.711.730, transferidas de modo comum, e no Pedido de Patente Europeia N2 0 272 033. Um poliímero particularmente preferido de acordo com a EP-A-272 o33 tem a fórmula:

(CH^ (PEG) ₄3 ) ₀ , _?5 (ΡΟΗ) θ , ₂g [ (T-PO ) £ , gíCBPBG) θ, 4 ]T (PO-H) ₀,₂pj

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Case CM 393 ((PEG)₄₃CH₃)0,75 em que PEG é- (0C„H„)O-, PO é (0C_oH_c0) e T é (pcOC^H^CO).

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Certos materiais poliméricos tais comocus polivinilpir rolidonas, tipicamente de MM 5000-20000, preferivelmente 10000-15000, também formam agentes úteis na prevenção dai trãnferência de corantes lábeis entre tecidos durante o pro cesso de lavagem.

Podem, também ser incorporados nas composições deter gentes de acordo com a presente invenção outros agentes ama ciadores de tecido.

Estes agentes podem ser do tipo orgânico ou inorgâni co. Outros agentes amaciadores de tecido incluem as aminas terciárias insolúveis em água descritas na GB-A-1514276 e EP-B-0 011 340 e a sua combinação com sais de amónio quater náriosC^₂“C^₄ é descrita em EP-B- 0 026 527 e EP-B-0 026 52í! e diamidas de cadeia longa são descritas na EP-B 0 242 919 Outros ingredientes orgânicos úteis de sistemas amaciadores de tecidos incluem materiais óxido de polietileno de elevada massa molecular descritos em EP-A-0 299 575 e 0313 146.

Os agentes amaciadores de tecidos, orgânicos, tais como materiais·;'diamtida de cadeia longa ou aminas terciárias insolúveis em água são incorporadas em níveis ^der’0,5% a''5%:ée'.pe. so, normalmente de 1% a 3% em peso, ao passo que os materi·ais poli(óxido de etileno) e os materiais catiónicos solúveis em água são adicionados em níveis de 0,1% a 2%, normalmente de 0,15% a 1,5% em peso. Para detergentes granulares estes materiais são adicionados, normalmente, à porção seca por pulverização da composição, embora em alguns casos possa ser mais conveniente adicioná-los como materiais em partículas...misturados em seco ou' pulverizá-los como um líquido fun dido sobre os outros componentes sólidos da composição.

Podem estar presentes na presente composição enzimas diferentes da presente preparação de celulase específica, como proteases,lipases e amilases.

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¹ MÉTODO DE PRODUÇÃO

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As composições de acordo com a presente invenção, dependendo do facto de serem líquidas ou granulares, podem ser produzidas·?através de uma variedade de métodos incluindo mistura de líquidos de acordo comum perfil de temperatura e pH-tempo, fusão, dissolução, mistura em seco, secagem por pulverização, aglomeração e granulação e combinações de quaisquer «festasctécnicas.

Um método preferido de produção de composições detergentes granulares, particularmente aquelas com alta massa volúmica (compactas) envolve uma combinação de secagem por pulverização/aglomeração num misturador de alta velocidade e mistura em seco.

Seca-se por pulverização um primeiro componente granular contendo um surfactante aniónico relativamente insolúvel e parte do produto seco por pulverização é separado para ser submetido a pulverização com um surfactante não iónico de nível baixo antes de ser remisturado com o restante. Faz-se um segundo componente granular por neutralização enr.seco,: dd-urá ácido surfactante aniónico usando carbonato de sódio comc o agente de neutralização, num misturador contínuo de velocidade elevada como um misturador Lodige KM. Os primeiro e segundo componentes , em conjunto com outros ingredientes de mistura seca como o agente quelante carboxilato, o branqueador inorgânico de peroxigénio, o activador de branqueamento, o agente de suspensão de sujidade, sílicato e o polímero de policarboxilato e o enzima, são alimentados a um tapete trans portador do qual são transferidos para.um tambor em rotação horizontal onde o produto é pulverizado com perfume e o supressor de espuma, de silicone. Em composições altamente pro feridas, emprega-se um passo adicional de mistura em tambor no qual se introduz um baixo nível (aprox.2%) de aluminossilicato finamente dividido para diminuir a densidade e melhorar, as características de escoamento granular.

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Para um método preferido de produção de composições detergentes líquidas de acordo com a presente invenção, verificor -se que as composições detergentes líquidas são preparadas vantajosamente quando o pH e a temperatura são sempre manti-o dos constantes e são reduzidos durante a produção do detergente líquido.

EXEMPLOS

Os exemplos seguintes ilustram a invenção e facilitan o seu entendimento.

As abreviaturas para os ingredientes individuais tên os seguintes significados:

LAS: sal de sódio de dodecilbenzenossulfonato linear TAS: sal de sódio de sulfato de á<lcool de sebo AS: sal de sódio de sulfato de alquil (C -C_1c-)

A0 : óxido de alquil c₁₂-C₁₄~dimetilamina

FA25E7:álcool gordo etoxilado com cerca de moles de óxido de etileno.

CAT: cloreto de trimetil (ou dimetilfhidroxietil)) amónio C^₂« C^₄

Argila: argila montmorilonítica . Zeolito 4A:sáT deósódio dezeolito 4A com um tamanho médio de partícula entre 1-10 micron

SKS-6: silicato em camadas, cristalino (Hoechst) AA/MA: polímero de policarboxilato copolimérico de ácido acrílico e ácido maleico

PAP: polímero poliacrílico, MM 1000^^ 10000

CMC: carboximetilcelulose

Fosfonato: sal de sódio de ácido etilenodiamina-tetrí. metilenofosfónico

ADS: A-sulfonato de olefina (^C^2^-C18^^{z sal de s}°bio

NMN: N-metil-N-l-desogliciltil-alquil (C_o-C_do)-amida z lo

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Case CM 393

EDTA: sal de sódio de tetracetato de etilenodiamina

PB1: NaBO₂.H₂O₂₌ . T

PB4: NaBO₂ .H2 .0 ₂ ³ⁿ'··⁰

TAED: nonanioloxiebnzenossulfonato de sódio

P.A.: ftalocianina de zinco sulfonada

Silicato (R=n): /

Amilase: Termamyl 60T

Lipase: Lipolase 100T

Protease: Savinase 4T

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Sio₉/Na₂0=n (Novo-Nordisk) (NOvo-Noridsk) (Novo- Nordisk)

SP300: Celluzyme SP300-(celulase da arte anterior de Novo Nordisk) kD: celulase de cerca de 43 kD de acordo com a celulase definida na presente invenção

SSS: Sistema Supressor de Espuma (mistura sílica/silicone)

NTA: sal de sódio de nitrilotriacetato

TAE-11: álcool de sebo etoxilado com cerca de 11 moles de óxido de etileno

DTMA: metilamina de di-sebo CFA. álcool gordo de coco

HFA: ácido gordo ^c^q~^C22 hidrogenado

Para facilitar a comparação da maciez, utilizou-se o seguinte procedimento de teste:

lavam-se cargas de tecido limpo numa máquina de lavar de tam p bor, automática, Miele 423 a 60SC durante 1,5 horas. A dure za da água era 2,5 mmol de Ca /mg por litro e a concentra ção da composição era de 0,7% no líquido de lavagem. Para a avaliação da maciez adicionaram amostras de marcadores alha turca. Os maracadores de maciez foram secos numa antes da avaliaçao da suavidade.

A avaliação dos resultados dos testes foi feita dois métodos:

A avaliação comparativa da maciez peritos usando uma escala de 0 a 4 zes foi feita por de unidade de de to corda por juipaine

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Case CM 393

de graduação (PSU). Nesta escala atribui-se( 0-â inexistêcia diferençar e 4 diferença, máxima^’ Aynacièz?'foi- ^vãliãháapasi Oito: ciclos de lavagem em amostras turcas envelhecidas, como se define abaixo.

Uma outra avaliação de suavidade é feita usando um dispositivo de laboratório de medida de maciez, a máquina Kawabata KES-FBI, Káto Tech Corporation Ltd. Japáo. Nesta máquina os marcadores de maciez são colocados entre duas pir ças que se podem mover uma relativamente à outra . A maciez comparativa foi medida após oito ciclos de lavagem por histerese de corte a um ângulo de 5 graus (2HG 5). Uma diminuição na histerese de corte reflecte um aumento do desempenho de amaciamento. As medidas são médias de três amostras ture;. cas envelhecidas por utilizador. O envelhecimento por utilizador é defênido por um mínimo de 10 lavagens normais.

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Exemplos I a IV: Avalia-se uma composição detergente básica para se indicar o efeito inesperado de desempenho de amaciamento superior ao aditivo das composições seleccionadas vs. arte anterior mais próxima que se ^considera ser EP-A-177 165.

Os exemplos I e II apoiam a teoria da arte anterior da não criação de um efeito adverso por combinação da argilc. amaciadora òom celulase. Contudo, o resultado também indica que isto não proporciona qualquer benefício.De facto , uma vez que a combinação da argila e celulase desta descrição da arte anterior não proporciona benefício pode ser especulado que a carga ecológica e económica que ele cria é a razao para a sua falta de sucesso comercial.

Os exemplos III e IV,sendo; IV de acordo com a invenção, indicam claramente que o desempenho da argila amaciadora e celulase proporciona benefícios mais <d’õ-què'aditivos.

Do Exemplo II pode verificar-se um benefício da argila, num ambiente de celulase da arte anterior, de 0,3 PSU. Voltando ao Exemplo IV, que é testado num ambiente de celu42

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lase de 43 kD,o resultado sobe para mais do que 6 vezes esse número, atingindo 2 PSU.

Os resultados totais dos testes dos Exemplos I a IV podem ser encontrados na Tabela IIE. A composição detergente é baseada na composição I da Tabela V. Nas duas últimas colu nas da Tabela III pode ser vista a dependência da superioridade global da presente; invençãocnacelulaselsdleccicjnadasem combinaçaD com a argila amaciadora. Contudo isto é ainda mais claramente exemplificado nos Exemplos seguintes.

Exemplos V a VIII: Avalia-se uma com£.Qst.ção detergente bási ca, composição II da Tabela V, no procedimento de teste descrito anteriormente e mede-se com uma máquina Kawabata.

A ..ràdução, que expressa o amaciamento, da medida pas ra a argila sozinha é de 5%, para celulase de elevada actividade sozinha é 15%. Os valores esperados para a combinaçãc deve consequentemente, ser 20% que é,surpreeridentemente, ultrapassado por esta combinação e atinge 39%, i. e. cerca de duas vezes o vslor esperado.

As composições III a XII da TabelaV proporcionam exen pios que incluem argila amaciadorat bem como celulase de ele- ~ vadá actividade e verificou-se que têm desempenhos de acorde com os objectivos da presente invenção, proporcionando desempenho de tratamento de tecido especialmente bom.

A argila nestas composições era argila montmorilonití ca ou hectorítica em níveis de 10% para as composições IIIs_c VI e XI, 12% para as composições VII,VIII e X e 8,6% para as composições XI e XII. A composição IX também continha um agente antideposição da família Bentone^^R^ de modo que se impede e deposição da argila. A celulase é adicionada geralmente de 0,01 a 10,0, preferivelmente de 0,1 a 0,5, mg/litre da solução de lavagem.

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Case CM 393

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Φ

0

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Φ

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c

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0

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0

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Φ

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Φ

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0

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ra

Λ

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ra

N

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Φ

φ

P

Ch

Φ

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Φ

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3

0

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di

ra

0

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g

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•x{

0

Φ

0

(d

m

β

Φ

ro

rd

s

Φ

M

Ui

o

Ό

(d

«

-P

S

*

64.266

Case CM 393

i-4 flj 44 O ?fd

O> •rl

Φ o 8 o s

<Z1

Φ

C

Φ

Cn

Φ

Φ Ό

CQ

Φ iO o>

H

CQ &

E

CD

II >

CQ

E O

O è

CQ Φ &

E CD ? rt

CQ m

CD Cn (ΰ tí Φ O

Φ

CQ

Π5

CQ Φ TS

O 44

H	Cn	1	1	V	1	LO X t~4	0,5	in X o	LD	1	25	1
>	Cn		1	fi)	1	ΙΓ) X tH	1	1	LD	1	1	in
!> H	Cn	in	<N	1	1	1	1	1	in	1	1	LO
III	tn		1	1	cn o	1	1	1	LO	LO o	CM	1
H H	cn	7,6	1,86	1	0,98	1,46	1,37	1	1	1	1	co in
H	cn	UD K I>	1,86	1	0,98	1,46	1,37	1	1	1	1	CO X LD
0 2ίΰ o •H CQ 0 & E o CD	(D TS Π3 TS -—· •H ' CJ w ni -Jl tí ! Cn ro (D CQ : \|\| TS Ti 0 s-ι fC TS (ΰ 44 ' ·Η Η 0 rt! P P Π5 g &\| tí α Μ ή (β g O f—t S-ι Ο fc o &l O	LAS	U) <1	CZJ rf C'	TAE-11	rf CD	FA25E7	ω o rf	s S 'Z	rf ta ta	Na-tri -poli -f osf ato	Na citrato/ácido cítrico

64.266

Case CM 393

1	VI	1	cn	1	1	1	1	1
o	>	20	l	1	1	1	1	1
• _ o ção total)	IV	20	1	1	1	1	1	1
iO.OOO ex. - 90/08 Cn detergentes ) da composi	III	.1	CN	1	1	1	1	1
1 rara Φ CD -ó ?O * 20 o* ,_B ra φ o a o S !(C	II	18,5	3,4	0,38	0,4	1	1	1
O CQ O ra ·· tí A > 0) flb ^1 25 /J -p Μ β S Φ < U		LD «b co r—1	3,4	0,38	1 0,4	1	✓ 1	1
1 O (cont-i nuação) T (todas as per	o Í05 o> •H •0 «a o ϋ	tf! V Q +5 -H rH '0 Φ N	% <! <	Fosfonato	V o ω Cn S	Ãcido gordo oleico	co 1—1 Φ 1 Ό V i—1 O <J -P (tí 0 β -1 •r-l ·Η O P ο σ P H ω iô	1,2-propanodiol
ao				—⁵ 1

64.266

Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 20/08

VI	1	15	00	1	1	1	1	uo	15
>	1	00 t—1	1	1	O i-l	0,2	0,5	1 15	1
IV	l	LO τ—1	00	1	1	0,2	LO s O	10
H H l-l	l	15	00	1	o rH	1	1	12,0	LO
H l-l	1	11,4	sT co	oo o i—l X CN	sr K r—1	1	1	1	O o r-H
l-l	1	11,4	xr *» 00	00 o 0··Η X CM	sr 1—1	1	1	1	10,6
Composição	. Etanol	PB1	TAED	• Λ	Protease	Lipase	Amilase	Sulfato de Na	(0 Iz o Ό O •P (0 d 0 rQ (0 O

64.366

Case CM 393'

f-1		1	1	0,3 i	to o o	1	res t. para 100%
i>	sT	1	1	co o	1	1	• P (ti ra ρ o Φ (ti o P CU rH
AI		1	0,3	0,3	0,3 i i	1	rest. para 100%
II		1	m K r-i	co G>	0,05	1	rest. para 100%
II	σι «. co	1,88	1	-Φ- 00 Φ	1	1	rest. para 100%
H	σ> s co	1,88	1	5ÍIcn c*». GD	1	0,62	rest. para 100%
Composição	(ti Z Φ Ό 0 P (ti 0 H rH •rH ω —	sss	PAP	CJ S o	•- H CU - (D Ό O Ό . “H -I.IX • vO	Glicerol	Diversos (Perfume,t ampãp, humidade) e/ou áqua

64.266

Case CM 393

H ra +> o

to fO Ό O -P

IIX	0	1	σι K. (Ό	l	1	tn X CN	O o UD
H N	υ	O tn K to	3,25	1	1	1	O CN s CX1
X	u	8,20	2,65	1	1	1	1
IX	T“H	o	1	r-4	1	1	1
II IA	o	1	Ol	to	1	tn	1
ΙΙΛ	0	co		1	1	10) r—1	1
Composição	0) Ό (ti -H - O ω <-i ii β II til ιβ Φ ω li το Ό o M ra Ό (ti -P *· -Η Η O (ti d s (ti E & tí & Μ Ή (ti s 0 Η P 0 fa CH O	LAS	TAS	AS	TAE-11	CAT	FA25E7

5Q

64.266

Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

	IIX	12,00	1	1	12,90	15,00	15,65	3,45	1	0,32
2 o 1(0 nS 2 •H 40 Pi 0 o	H X	1	1	1	1	12,00	16,00	ΙΌ CO	1	0,32
x	... \|	3,0	3,55	1	23,50	1	O tn s. cn	0,3	I
XI	1	l>	1	1	co	1	1	1	I
VIII	1	m	1	1	IO	σι τΗ	Sf	1	I
II > 5 M g -	ΙΙΛ 1	1	ΙΓ)	1	1	1	23	LO	1	1
	Composição	Percabonato	2 5 6	PB—4	SKS-6	c c •r \ Ι- Ο 4 40 '•r 03 C +> c •rt X Ο τ ζ 03 '0 2 ^x	<1 sr 0 P •H r4 '0 Φ N	C <	o 40 fO α 0 Μη Μ 0	EDTA

64.266

Case CM 393

Mod. 71 20.000 ex. - 90/08

2Π3 u> (tf b sí ri 4J S

O

U


H H X	1	1	1	1	1	1	0,003	1,40	0,30
H X	1	1	1	1	11,50	3,20	0,003	O xF *» T“H	0,30
X	1	1	1	1	K t-H 9-1	CM	1	1,05	1
XI	rH	10	co		1	1	1	o T“H	0,3
ΙΙΙΛ	1	1	1	1	12	(Ό	1	1	CM •s O
l-l H	¹	1	1	1	T~1 ϊ—4		1	o τ—1	0,2
0 ? rcS O •rl to 0 1¾ S 0 O	Ácido gordo oleico	Succinato de alquilo C₁₄_₁₆	1,2-propanodiol	Etanol	PB1	P M <! E-	<< fí	Protease	Lipase

64.266

Case CM 393

Ν. •Ό

Ο

S

	ΙΙΧ	1	3,45	ο cn κ σ>	2,50	0,50	I	1	I	I
			ιό	ο	ο	ο
			χτ	σ>	ΙΌ	ΙΌ
			κ	κ		κ	I	1	I	(
	Η		(Ώ	σ>	CM	ο
	X	1
				ο	Ο	ο	ο	ΙΓ)		ο
			(Ώ	ΙΌ	σ)	ΙΌ	ΙΌ			ο
		1	ΟΙ	κ	κ			κ	1	κ
	X			OJ	CN	ο	τ—1	ο		04
			CN
		CQ
	X	κ				1	1	1	1	1
	1—1	ο	1	1	1

ο

υ> '
Γΰ
3
β	Η									1
-Η	Η		1			1	1	(Ό	C0
-Ρ	Η	1		τ—ί	0Ί			κ	·>»
β	>			τ-4				ο	ο
ο
ο

• 1									m
>								ΟΊ	κ
		σι		ί—1		1	1	S.	ο
	Η		1	τ—1				ο		1
lj	Η	ο
W	>
m

C-ι

				ίΰ
				S	Φ
			φ		fí
				φ
				Ό	Φ				κ
	ο		φ		Φ5				Λ
	ι φ		Ό	Ο
	Ο>			+3	0				Φ
	•Η	φ	Ο	ίΟ	-Ρ				Ό
	Μ	ra	4>	φ	ίΰ
	0	φ	Φ	0	0				0
	Λ	Η	Μη	33	•Η				Τ5	ω
	Ε	•Η	Η	Μ	Η	ω	CL	ο	Η	m
	0	Ε	Φ	Φ	•Η	U)	<<	S	Μ	ο
	Ο		ω	Ο	ω	ω	Ρη	ο	ο	δ

64.266

Case CM 393

H H X	res t. para 100% 1
XI	« P KJ tf tO MO (U rú o P & !-i
	r est. para 100%
IX	rest. para 100%
ΙΙΙΛ	• p rt CQ Μ O Φ (tS O P
ΙΙΛ	• P KJ to μ o (!) rt O P Ph
Composição	Diversos (PerfBiEfâo, tampão, humi dade) e/ou água

64.266

Case CM 393

INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N- 1:

Mod. 71 -20.000 ex. - 90/08

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA (A) Comprimento:1060 pares de bases (B) Tipo: ácido nucleico (C) Tipo de cadeia: simples (D) Topologia: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA:ADNc (iii) HIPOTÉTICA:NÃÕ (iv) FONTE ORIGINAL (A) Organismo: Humicola insloens (B) Estirpe:DSM 1800 (ix) CARACTERÍSTICA (A) Nome/Principal: mat-péptido (B) Localização. 73..927 (ix) CARACTERÍSTICA (A) Nome Principal:ság^péptido (B) Localização: 10..72 (ix) CARACTERÍSTICA (A) Nome/Principal: CDS (B) Localização: 10..927

INFORMAÇÃO PARA SEQ ID P 2:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA (A) Comprimento: 305 aminoácidos (B) Tipo: aminoácidos (D) Topologia :linear (ii) TIPO MOLÉCULA: proteína

INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N'á 3 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA (A) Comprimento: 1473 pares de bases (B) Tipo ácido nucleico (C) Tipo de cadeia: simples (D) Topologia :linear

64.266

Case CM 393

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (iii) HIPOTÉTICA:NÃO (iv) ANTI-SENTIDO:NÃO (vi) FONTE ORIGINAL (A) Organismo: FKusaryum oxysporum (B) Estirpe: DSM 2672 (ix) CARACTERÍSTICA (A) Nome/Principal: CDS (B) Localização: 97..1224

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^4:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA (A) Comprimento: 376 aminoácidos (B) Tipo: aminoácidos (D) Topologia:linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA:proteína

.266

Case CM 393

DESCRIÇÃO DE SEQUÊNCIA: SEQ ID NS1:

GGATCCAAG ATG CGT TCC CCC CTC CTC CCG TCC GCC GTT	GTG GCC	48
Met Arg Ser Pro Leu Leu Pro Ser Ala Vai	Vai Ala
-21 -20 -15	-10

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

GCC CTG CCG GTC TTG GCC

CTT GCC GCT Leu Ala Ala 1

GAT Asp

GGC AGG TCC ACC CGC TAC

96

Ala

Leu

Pro

Vai Leu Ala -5

Gly Arg Ser 5

Thr Arg Tyr

TGG

GAC

TGC

AAG

CCT

TGG

TGC

GGC

TGG

GCC

AAG

GCT

CCC

GTG

144

Trp Asp

Cys

Lys

Pro

Ser

Cys

Gly Trp

Ala

Lys

Ala

Pro

Vai.

10

15

20

AAC

CAG

CCT

GTC

TTT

TCC

TGC

AAC

GCC

AAC

TTC

CAG

CGT

ATC

ACG

GAC

192

Asn

Gin

Pro

Vai

Phe

Ser

Cys

Asn

Ala

Asn

Phe

Gin

Arg

Ile

Thr

Asp

25

30

35

40

TTC

GAC

GCC

AAG

TCC

GGC

TGC

GAG

CCG

GGC

GGT

GTC

GCC

TAC

TCG

GTC

240

Phe

Asp

Ala

Lys

Ser

Gly Cys

G1U

Pro

Gly Gly

Vai

Ala

Try

Ser

Cys

45

50

55

GCC

GAC

CAG

ACC

CCA

TGG

GCT

GTG

AAC

GAC

TTC

GCG

CTC

GGT

TTT

288

Ala

Asp

Gin

Thr

Pro

Trp

Ala

Vai

Asn

Asp Asp

Phe

Ala

Leu

Gly

Phe

60

65

70

GCT

GCC

ACC

TCT

ATT

GCC

GGC

AGC

AAT

GAG

GCG

GGC

TGG

TGC

GCC

366

Ala

Thr

Ser

Ile

Ala

Gly

Ser

Asn

Glu

Ala

Gly

Trp

Cys

Ala

75

80

85

TGC

TAC

GAG

CTC

ACC

TTC

ACA

TCC

GGT

CCT

GTT

GCT

GGC

AAG

ATG

384

Cys

Tyr

Glu

Leu

Thr

Phe

Thr

Ser

Gly

Pro

Vai

Ala

Gly Lys Lys

Met

90

95

100

GTC

CAG

TCC

ACC

AGC

ACT

GGC

GGT

GAT

CTT

GGC

AGC

AAC

CAC

TTC

432

Vai

Gin

Ser

Thr

Ser

Thr

Gly Gly Asp

Leu

Gly

Ser

Asn

His

Phe

105

110

115

120

GAT

CTC

ACC

ATC

CCC

GGC

GTC

GGC

ATC

TTC

GAG

GGA

TGC

ACT

480

Asp

Leu

Asn

Ile

Pro

Gly Gly Gly

Vai

Gly

Ile

Phe

Asp

Gly

Cys

Thr

125

130

135

CCC

CAG

TTC

GGC

GGT

CTG

CCC

GGC

CAG

CGC

TAC

GGC

ATC

TCG

TCC

528

Pro

Gin

Phe

Gly Gly

Leu

Pro

Gly

Gin

Arg Try Gly Gly

íle

Ser

140

145

150

CGC

AAC

GAG

TGC

GAT

CGG

TTC

CCC

GAC

GCC

CTC

AAG

CCC

GGC

TGC

TAC

576

Arg

Asn

Glu

Cys Asp

Arg. Arg

Phe

Pro

Asp Ala Leu Lys

Pro

Gly

Tyr

155

160

165

64.266

Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

TGG CGC

TTC GAC TGG TTC AAG AAC GCC GAC AAT CCG AGC TTC AGC TTC

624

Trp

Arg 170

Phe Asp

Trp

Phe

Lys Asn 175

Ala Asp

Asn

Pro 180

Ser Phe Ser Pne

CGT

CAG

GTC

CAG

TGC

CCA

GCC

GAG

CTC

GTC

GCT

CGC

ACC

GGA

TGC

CGC

672

Arg

Gin

val

Gin

CYS

Pro

Ala

Glu

Leu

Val

Ala

Arg

Thr

Gly

Cys

Arg

185

190

195

200

CGC

AAC

GAC

GGC

AAC

TTC

CCT

GCC

GTC

CAG

ATC

CCC

TCC

AGC

720

Arg

Asn

Asp Asp Gly

Asn

Phe

Pro

Ala

Val

Gin

Ile

Pro

Sêr

Ser

205

210

215

ACC

AGC

TCT

CCG

GTC

AAC

CAG

CCT

ACC

AGC

ACC

AGC

ACC

ACG

TCC

ACC

768

Thr

Ser

Pro

Val

Asn

Gin

Pro

Thr

Ser

Thr

Ser

Thr

Ser

Thr

220

225

230

TCC

ACC

TCG

AGC

CCG

CCA

GTC

CAG

CCT

ACG

ACT

CCC

AGC

GGC

TGC

816

Ser

Thr

Ser

Pro

Val

Gin

Pro

Thr

Pro

Ser

Gly Gys

235

240

245

ACT

GCT

GAG

AGG

TGG

GCT

CAG

TGC

GGC

.GGC

AAT

GGG

TGG

AGC

GGC

TGC

864

thr

Ala

Glu

Arg

Trp

Ala

Gin

Cys

Gly Gly

Asn

Gly Trp

Ser

Gly Cys

250 255 260

912

ACC ACC TGC GTC GCTGGC AGC ACT TGC ACG AAG ATT ATT GAC TGG TAC

Thr Thr Cys Vai Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys Ile Asn Asp Trp Tyr

265 270 275 280

CAT CAG TGC CTG TAGACGGAGGLGCAGCTTGAG GGCCTTACTG GTGGCCGCAA

His Gin Cys Leu

285

964

CGAAATGACA CTCCCAATCA CTGTATTAGT TCTTGTACAT AATTTCGTCA TCCCTCCAGG 1024

GATTGTCACA TAAATGCAAT GAGGAACAAT GAGTAC

1060

64.266

Case CM 393

DESCRIÇÃO DE SEQOÊNCIA : SEQ TD N®2 :

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

Met Arg Ser Pro	Leu Leu Pro Ser Ala Val Val	Ala Ala Leu Pro
-21 -20		-15 -1(
Val Leu -5	Ala	Leu	Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr 1 5	Arg	Tyr Trp Asp Cys 10
Cys Lys	Pro	Ser 15	Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala 20	Pro	Val Asn Gin 25	Pro
Val Phe	Ser 30	Cys	Asn Ala Asn Phe Gin Arg Ile 35	Thr	Asp Phe Asp 40	Ala
Lis Ser 45	Gli	Cys	Glu Pro Gly Gly Val Ala Tyr 50	Ser 55	Cys Ala Asp	Gin
Thr Pro 60	Trp	Ala	Val Asn Asp Asp Phe Ala Leu 65 70	Gly	Phe Ala Ala	Thr 75
Ser Ile	Ala	Gly	Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys 80 85	Cys	Ala Cys Tyr 90	Glu
Leu Thr	Phe	Thr 95	Ser Gly Pro Val Ma Gly Lys 100	Lys	Met Val Val 105	Gin
Ser Thr	Ser 110	Thr	Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn 115	Hys	Phe Asp Leu 120	Asn
Ile Pro 125	Gly Gly Gly Val Gly Ile Phe Asp Gly 130	Cys 135	Thr Pro Gin	Phe
Gly Gly 140	Leu	Pro	Gly Gin Arg Tyr Gly Gly Ile 145 150	Ser	Ser Arg Asn	GLU 155
Cys Asp Arg	Phe	Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys 160 165	Tyr Trp Arg 170	Phe
Asp Trp	Phe	Lys 175	Asn Ma Asp Asn Pro Ser Phe 180	Ser	Phe Arg Gin 185	Val
Gin Cys	Pro 190	Ala	Glu Leu Val Ala Arg Thr Gly 195	Cys	Arg Arg Asn 200	Asp
Asp Gly 205	Asn	Phe	Pro Ala Val Gin Ile Pro Ser 210	Ser 215	Ser Thr Ser	Ser
Pro Val 220	Asn	Gin	Pro Thr Ser Thr Ser Thr Thr 225 230	Ser	Thr Ser Thr	Thr 235

64.266

Case CM 393

Ser

Pro

Vai

Gin

Pro

Thr

Pro

Ser

Gly

Cys

Thr

Ala

Glu

240

245

250

Arg

Trp

Ala

Gin

Cys

Gly

Asn

Gly

Trp

Ser

Gly

Cys

Thr

Cys

255

260

265

Vai

Ala

Gly

Ser

Thr

Cys

Thr

Lys

Ile

Asn

Asp

Trp

Tyr

His

Gin

Cys

270

275

280

Leu

Mod. 71 -20.000 ex.-90/08

64.266

Case CM 393

DESCRIÇÃO DE SEQURNCIA: SEQ TD N9: 3:

GAATTCGCGG CCGCTCATTC ACTTCATTCA TTCTTTAGAA TTACATACAC TCTCTTTCAA

Mod. 71 -20.000 ex.-90/08

AACAGTCACT CTTTAAACAA AACAACTTTT GCAACA ATG CGA TCT TAC ACT CTT

Met 1

Arg

Ser Tyr Thr Leu 5

CTC

GCC

CTG

GCC

GGC

CCT

CTC

GCC

GTG

AGT

GCT

TCT

GGA

AGC

GGT

Leu

Ala

Leu

Ala 10

Gly

Pro

Leu

Ala

Vai 15

Ser

Ala

Ser

Gly 20

Ser

Gly

CAC

TCT

ACT

CGA

TAC

TGG

GAT

TGC

AAG

CTT

TCT

TGC

TCT

TGG

AGC

His

Ser

Thr 25

Arg

Tyr

Trp

Asp

Cys 30

Cys

Lys

Pro

Ser

Cys 35

Ser

Trp

Ser

GGA

AAG

GCT

GTC

AAC

GCC

CCT

GCT

TTA

ACT

TGT

GAT

AAG

AAC

GAC

Gly

Lys 40

Ala

Vai

Asn

Ala 45

Pro

Ala

Leu

Thr

Cys Asp 50

lys

Asn

Asp

AAC

CCC

ATT

TCC

AAC

ACC

AAT

GCT

GTC

AAC

GGT

TGT

GAG

GGT

Asn 55

Pro

Ile

Ser

Asn

Thr 60

Asn

Ala

Vai

Asn

Gly 65

Cys

Glu

Gly

Gly 70

TCT

GCT

TAT

GCT

TGC

ACC

AAC

TAC

TCT

CCC

TGG

GCT

GTC

AAC

GAT

GAG

Ser

Ala

Tyr

Ala

Cys 75

Thr

Asn

Tyr

Ser

Pro 80

Trp

Ala

Vai

Asn

Asp 85

G1U

CTT

GCC

TAC

GGT

TTC

GCT

ACC

AAG

ATC

TCC

GGT

GGC

TCC

GAG

GCC

Leu

Ala

Tyr

Gly 90

Phe

Ala

Thr

Lys 95

Ile

Ser

Gly Gly

Ser 100

Glu

Ala

AGC

TGG

TGC

TGT

GCT

TGC

TAT

GCT

TTG

ACC

TTC

ACC

ACT

GGC

CCC

GTC

Ser

Trp

Cys 105

Cys

Ala

Cys

Tyr

Ala 110

Leu

Thr

Phe

Thr

Thr 115

Gly

Pro

Vai

AAG

GGC

AAG

ATG

ATC

GTC

CAG

TCC

ACC

AAC

ACT

GGA

GGT

GAT

CTC

Lys

Gly Lys 120

Lys

Met

Ile

Vai 125

Gin

Ser

Thr

Asn

Thr 130

Gly

Gly Asp

Leu

GGC

GAC

AAC

CAC

TTC

GAT

CTC

ATG

CCC

GGC

GGT

GTC

GGT

ATC

Gly Asp 135

Asn

His

Phe

Asp 140

Leu

Met

Pro

Gly Gly 145

Gly

Vai

Gly

Ile 150

TTC

GAC

GGC

TGC

ACC

TCT

GAG

TTC

GGC

AAG

GCT

CTC

GGC

GGT

GCC

CAG

Phe

Asp Gly Cys

Thr 155

Ser

Glu

Phe

Gly

Lys 160

Ala

Leu

Gly Gly

Ala 165

Gin

TAC

GGC

GGT ATC

TCC

CGA

AGC

GAA

TGT

GAT

AGC

TAC

CCC

GAT

CTT

Tyr

Gly Gly Ile

Ser

Arg

Ser

Glu

Cys

Asp

Ser

Tyr Pro

Glu

Leu

170 175 180

162

210

258

306

354

402

450

498

546

594

114

642

64.266

Case CM 393

690

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

CTC AAG GAC GGT TGC

CAC TGG His Trp

CGA TTC GAC TTG

TTC GAG AAC GCC GAC

Leu

Lys

Asp Gly Cys 185

Arg 190

Phe Asp Trp

Phe

Glu Asn 195

Ala Asp

AAC

CCT

GAC

TTC

ACC

TTT

GAG

CAG

GTT

CAG

TGC

CCC

AAG

GCT

CTC

Asn

Pro 200

Asp

Phe

Thr

Phe

Glu 205

Gin

Vai

Gin

Cys

Pro 210

Lys

Ala

Leu

GAC

ATC

AGT

GGA

TGC

AAG

CGT

GAT

GAC

TCC

AGC

TTC

CCT

GCC

TTC

Asp 215

Ile

Ser

Gly

Cys

Lys 220

Arg Asp Asp Asp

Ser 225

Ser

Ppe

Pro

-Ala

Ehe 230

AAG

GTT

GAT

ACC

TCG

GCC

AGC

AAG

CCC

CAG

CCC

TCC

AGC

TCC

GCT

AAG

Lys

Vai

Asp

Thr

Ser 235

Ala

Ser

Lys

Pro

Gin 240

Pro

Ser.

Ser

Ala 245

Lys

AAG

ACC

TCC

GCT

GCC

GCT

CAG

CCC

CAG

AAG

ACC

AAG

GAT

Lys

Thr

Ser 250

Ala:

Ala

Ala 255

Gin

Pro

Gin

Lys

Thr 260

Lys

Asp

TCC

GCT

CCT

GTT

GTC

CAG

AAG

TCC

ACC

AAG

CCT

GCT

CAG

CCC

Ser

Ala

Pro 265

Vai

Gin

Lys

Ser 270

Ser

Thr

Lys

Pro

Ala 275

Ala

Gin

Pro

GAG

CCT

ACT

AAG

CCC

GCC

GAC

AAG

CCC

CAG

ACC

GAC

AAG

CCT

GTC

GCC

Glu

Pro 280

Thr

Lys

Pro

Ala

Asp Lys 285

Pro

Gin

Thr

Asp 290

Lys

Pro

Vai

Ala

ACC

AAG

CCT

GCT

gct:

ACC

AAG

CCC

GTC

CAA

CTT

GTC

AAC

AAG

CCC

AAG

Thr 295

Lys

Pro

Ala

Thr 300

Lys

Pro

Vai

Gin

Pro 305

Vai

Asn

Lys

Pro

Lys 310

ACA

ACC

CAG

AAG

GTC

CGT

GGA

ACC

AAA

ACC

CGA

GGA

AGC

TGC

CCG

GCC

Thr

Gin

Lys Vai 315

Arg Gly

Thr 320

Lys

Thr

Arg

Gly

Ser

Cys

Pro 325

Ala

AAG

ACT

GAC

GCT

ACC

GCC

AAG

GCC

TCC

GTT

GTC

CCT

GCT

TAT

TAC

CAG

lys

Thr

Asp

Ala

Thr 330

Ala

Lys

Ala

Ser 335

Vai

Pro

Ala

Tyr 340

Tyr

Gin

TGT

GGT

TCC

AAG

TCC

GCT

TAT

CCC

AAC

GGC

AAC

CTC

GCT

TGC

GCT

Cys

Gly

Gly 345

Ser

Lys

Ser

Ala

Tyr 350

Pro

Asn

Gly

Asn

Leu 355

Ala

Cys

Ala

ACT

GGA

AGC

AAG

TGT

GTC

AAG

CAG

AAC

GAG

TAC

TCC

CAG

TGT

GTC

Thr

Gly 360

Ser

LyS

Cys

Vai

Lys 365

Gin

Asn

Glu

Tyr

Tyr 370

Ser

Gin

Cys

Vai

738

1786

834

882

930

978

1026

1074

1122

1170

1218

CCC ACC TAAATGGTAG ATCCATCGGT TGTGGAAGAG ACTATGCGTC TCAGAAGGGA 1274

Pro Asn

375

64.266

Case CM 393

¹ TCCTCTCATG AGCAGGCTTG TCATTGTATA GCTGGCATC CTGGACCAAG TGGTTCGACCC 1334

TTGTTGTACA TAGTATATCT TCATTGTATA TATTTAGACA CATAGATAGC CTCTTGTCAG 1394

CGACAACTGG CTACAAAC-A CTTGGÇAGGÇ TTGTTCAATA-TTCACACAGT TTCCTCCATA

ΑΆΑΑΑΑΑΑΑΑ ΆΑΑΑΑΑΆΑΑ

1454

1473

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

64.266

Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

			DESCRIÇÃO DE SEQUÊNCIA :	SEQ	ID N®:4:
Met	Arg	Ser	Tyr	Thr Leu Leu Ala	Leu Ala Gly	Pro	Leu Ala	Vai Ser
1				5	. 10					15
Ala	Ala	Ser	Gly	Ser Gly His Ser	Thr Arg Tyr	Trp Asp Cys	Cys Lys
			20		25				30
Pro	Ser	Cys	Ser	Trp Ser Gly Lys	Ala Ala	Vai	Asn	Ala	Pro	Ala Leu
		35		40				45
Thr	Cys	Asp Lys	Asn Asp Asn Pro	Ile Ser	Asn	Thr	Asn	Ala	Vai Asn
	50			55			60
Gly Cys	Glu	Gly	Gly Gly Ser Ala	Tyr Ala	Cys	Thr	Asn	Tyr	Ser Pro
65				70		75				80
Trp	Ala	Vai	Asn	Asp Glu Leu Ala	Tyr Gly	Phe	Ala	Ala	Thr	Lys Ile
				85	90					95
Ser	Gly Gly	Ser	Glu Ala Ser Trp	Cys Cys	Ala	Cys	Tyr	Ala	Leu Thr
			100		105				110
Phe	Thr	Thr	Gly	Pro Vai Lys Gly	Lys Lyd	Met	Ile	Vai	Gin	Ser Thr
		115		120				125
Asn	Thr	Gly Gly Asp Leu Gly Asp	Asn His	Phe	Asp	Leu	Met	Met Pro
	130			135			140
Gly GLy Gly Vai	Gly Ile Phe Asp	Gly Cys	Thr	Ser	Glu	Phe	Gly Lys
145				150		155				160
Ala	Leu	Gly Gly	Ala Gin Tyr Gly	Gly Ile	Ser	Ser	Arg	Ser	Glu Cys
				165	170					175
Asp	Ser	Tyr	Pro	Glu Leu Leu Lys Asp Gly Cys	Hit	Trp Arg	Phe Asp
			180		185				190
Trp	Phe	Glu	Asn	Ala Asp Asn Pro	Asp Phe	Thr	Phe Glu Gin Vai Gin
		195		200				205
Cys	Pro	Lys	Ala	Leu Leu Asp Ile	Ser Gly Cys Lys	Arg Asp Asp Asp
	210			215			220
Ser	Ser	Phe	Pro	Ala Phe Lys Vai	Asp Thr	Ser	Ala	Ser	Lys	Pro Gin
225				230		235				240
Pro	Ser	Ser	Ser	Ala Lys Lys Thr	Thr Ser	Ala	Ala	Ala	Ala	Ala Gin
				245	250					255
Pro	Gin Lys Thr Lys Asp Ser Ala Pro Vai Vai gin Lys Ser Ser Tnr

260 265 270

64.266

Case CM 393

Lys Pro Ma Ala Gin Pro Glu Pro Thr lys Pro Ala Asp Lys Pro Gin

275 280285

Thr Asp Lys Pro Vai Ala Thr Lys Pro Ala Ala Thr Lys Pro Vai Gin 290 295300

Pro Vai Asn Lys Pro Lys Thr Thr Gin Lys Vai Arg Gly Thr LysThr

305 310 315320

Arg Gly Ser Cys Pro Ma Lys Thr Asp Ma Thr Ma lys Ma SerVai

325 330335

Vai Pro Ma Tyr Tyr Gin Cys

340

Gly Gly Ser Lys Ser Ala Tyr Pro Asn

345350

Gly Asn Leu Ala Cys

355

Ma

Thr Gly Ser Lys Cys Vai Lys Gin Asn Glu

360365

Try Try Ser Gin Cys Vai Pro Asn

370375

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

Lisboa,

-8.APR.1992

propriedade Industrial ewMrie-Ars· se Conceiçêa, 3, i.MW

64.266

Case CM 393

Claims

Mod. 71 20.000 ex. - 90/08 lãlfòrocesso para apreparação de uma composição detergente granularõuilíquida, compreendendo um agente tensio-activo, um sistema adjuvante, uma argila amaciadora e uma celulase, caracterizado por a referida celulase proporcionar pelo menos 10% de remoção de carboximetilcelulase radioactiva marcada, imobilizada, de acordo com o método C14CMC, a 25x —6% *

10 em peso de proteína celulase na solução de teste de le· vagem de roupa.
2^â Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto celulase consistir essencialmente num componente endoglucanase homogénio que é imuno-reactivo em relação a un anticorpo contra uma celulase, muito purificada, de cerca de 43 KD, derivada de Humicola insolens, DSM 1800, ou que é homólogo à referida endoglucanase de cerca de 43KD.

Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por o componente endoglucanase da referida celulase ter um ponto isoelétricó.c de cerca de 5,1.
4½ Processo paraapreparação de uma composição detergente de acordo com as reivindicações 2ou 3, caracterizado por o referido componente endoglucanase poder ser produzido por um processo que compreende a cultura de uma célula hospedeira transformada com um vector de ADN recombinante, transportando uma sequênciade ADN que codifica o referido componente endoglucanase, ou percursor do referido componente endoglucanase, bem como sequências;de ADN codificando funções que permitem a expressão da sequência de ADN que codifica o componente endoglucanase, ou um seu percursor, num meio de cultura sob condições que permitem a expressão do componente endoglucanase, ou de um seu percursor^ recuperação do componente endoglucanase da cultura.

5^ Processo para a preparação de uma composição

64.266

Case CM 393

Mod. 71 -20.000 ex. - 90/08 detergente de acordo com . a reivindacação 1, caracterizado por o composto celulase ser um enzima endoglucanase com a sequência de aminòácidos mostrada na listagem ID^2 seguinte

Met Arg Ser Ser Pro Leu Leu Prc Ser Ala Vai Vai Ala Ala Leu Pro -21 -20 -15 -10 Vai Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr Trp Asp Cys -5 -1 5 10 Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Vai Asn Gin Pro 15 20 25 Vai Phe Ser Cys Asn Ala Asn Phe Gin Arg Ile THR Asp Phe Asp Ala 30 35 40 Lys Ser Gly Cyis Glu Pro -Gly Gly Vai Ala Tyr Spr Cys Ala A'Sp Gin 45 T 50 55 Thr Pro Trp Ala Vai Asn Asp Asp Phe Ala Leu Gly Phe Alia Ala Thr 60 65 70 75 Ser Ile Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala Cys Try Glu 80 85 90 Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Vai Ala Gly Lys Lys Met Vai Vai Gin 95 100 105 Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn Hiiis Phe Asp Leu Asn 110 115 120 Ile Pro Gly Gly Gly Vai Gly ile Phe asp Gly Cys Thr Pro Gin Phe 125 130 135 Gly Gly Leu Pro Gly Gin Arg Tyr Gly Gly_Ile S§r Ser Arg Asn Glu 140 145 150 155 Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg Phe 160 165 - 170 ASp Trp Phe lys Asn Ala Asp Asn Pro Ser Phe Ser Phe Arg Gin Vai 175 180 185 Gin Cys Pro Ala Glu Leu Vai Ala Arg Thr Gly Cys Arg Arg Asn Asp 190 195 200 Asp Gly Asn Phe Pro Ala Vai Gin Ile Pro Ser Ser Ser The Ser ser

205 210 215

64.266

Case CM 393

Pro Vai Asn Gin Pro Thr Ser Thr Sàr Thr Thr Ser Thr Ser Thr Thr 220 225 230 235 Ser Ser Pro Pro Vai Gin Pro Thr Thr Pro Ser Gly Cys Thr Ala Glu 240 245 250 Arg Trp Ala Gin Cys Gly @ly Asn Gly Trp Ser Gly Cys Thr Thr Cys 255 260 265 Vai Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys Ile Asn Asp Trp Tyr His Gin Cys 270 275 280

Leu ou um seu homólogo que exibe actividade de endoglucanase.

63 Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação 5, caracterizado po

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08 o referido enzima endoglucanase poder ser produzido por uma espécie de Humicola insolens .

7^a Processo para apreparação de uma composição detergente de acordo coma reivindicação 1, caracterizado por o composto celulase ser um enzima endoglucanase com a sequência de aminoácidos mostrada na listagem de sequência ID -^2 4 seguinte:

Met Arg Ser Tyr Thr Leu Leu Ala Leu Ala Gly Pro Leu Ala Vai Ser 1 5 10 15 Ala Ala Ser Gly Ser Gly His Ser Thr Arg Tyr Trp Asp Cys Cys Lys 20 25 30 Pro Ser Cys Ser Trp Ser Gly Lys Ala Ala Vai.Asn Ala-Pro Ala Leu 35 40 45 Thr Cys Asp Lys Asn Asp Asn Pro Ile Ser Asn Thr Asn Ala Vai Asn 50 55 60 Gly Cys Glu Gly Gly Gly Ser Ala Tyr Ala Cys Thr Asn Tyr Ser Pro 65 70 75 80 Try Ala Vai Asn Asp Glu Leu Ala Try Gly Phe Ala Ala Thr Lys Ile 85 90 95 Ser Gly Gly Ser Glu Ala Ser Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Ala Leu Thr 100 105 110

266

V

393

Case

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

Phe Thr Thr Gly Pro 115 Vai Lys Gly Lys Lys Met Ile Vai Gin Ser Thr 120 125 Asn Thr Gly Gly Asp. Leu Gly Asp Asn His Phe Asp Leu Met Met Pro 130 135 140 Gly Gly Gly Vai Gly Ile Phe Asp Gly Cys Thr Ser Glu Phe Gly Lys 145 150 155 160 Ala Leu Gly Gly Ala Gin Tyr Gly Gly Ile Ser Ser Arg Ser G1U Cys 165 170 175 Asp Ser Tyr Pro Glu Leu Leu Lys Asp Gly Cys His Trp Arg Phe Asp 180 185 190 Trp Phe Glu Asn Ala Asp Asn Pro Asp Phe Thr Phe Glu Gin Vai Gin 195 200 205 Cys Pro Lys Ala Leu Leu Asp Ile Ser Gly Cys Lys Arg Asp Asp Asp 210 215 220 Ser Ser Phe Pro Ala Phe Lys Vai Asp Thr Ser Ala Ser Lys Pro Gin 225 230 235 240 Pro Ser Ser Ser Ala Lys Lys Thr Thr Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gin 245 250 255 Pro Gin Lys Thr Lys Asp Ser Ala Pro Vai Vai Gin Lys Ser Ser Thr 260 265 270 Lys Pro Ala Ala Gin Pro Glu Pro Thr Lys Pro Ala Asp Lys Pro Gin 275 280 285 Thr Asp Lys Pro Vai Ala Thr Lys Pro Ala Ala Thr Lys Pro Vai Gin 290 295 300 Pro Vai Asn Lys Pro Lys Thr Thr Gin Lys Vai Arg Gly Thr Lys Thr 305 310 315 320 Arg Gly Ser Cys Pro Ala Lys Thr Asp Ala Thr Ala Lys Ala Ser Vai 325 330 335 Vai Pro Ala Tyr Tyr Gin Cys Gly Gly Ser Lys Ser Ala Tyr Pro Asn 340 345 350 Gly Asn Leu Ala Cys Ala Thr Gly Ser Lys Cys Vai Lys Gin Asn Glu 355 360 365 Tyr Tyr Ser Gin Cys Vai Pro Asn 370 375 ou ser um seu homólogo que exibe actividade de endoglucanase

64.266

Case CM 393

83 Processo para a preparação de uma composição de tergente de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por o referido enzima endoglucanase poder ser produzido por uma espécie de Fusarium, e.g. Fusarium oxysporum.

93 Procêsso para a preparação de uma composição de tergente de acordo com qualquer reivindicações 5 a

8, caracterizado pôr o referido enzima ser produzido por uma construção de ADN que compreende uma sequência de ADN que codifi ca o enzima.

103 Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação
9, caracterizado por a sequência de ADN ser como é mostrado;

GGATCCAAG ATG CGT TCC TCC CCC CTC CTC CCG TCC GCC GTT GTG GCC 48

Mod. 71 - 20.()00 ex. · 90/08

Met Arg Ser Ser Pro Leu Leu Pro Ser Ala Val Val Ala

-21 -20 -15 -

10

GCC CTG CCG GTG TTG GCC CTT GCC GCT GAT GGC AGG TCC ACC CGC TAC 96 Ala Leu Pro Val Leu Ala Leu Ala Ma Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr -5 1 5 TGG GAC TGC TGC AAG CCT TCG TGC GGC TGG GCC AAG AAG GCT CCC GTG 144 Trp Asp Cys Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Val 10 15 20 AAC CAG CCT GTC TTT TCC TGC AAC GCC AAC TTC CAG CGT ATC ACG GAC 192 Asn Gin Pro Val Phe Ser Cys Asn Ma Asn Phe Gin Arg Ile Thr Asp 25 30 35 40 TTC GAC GCC AAG TCC GGC TGC GAG CCG GGC GGT GTC GCC TAC TCG TGC 240 Phe Asp Ala Lys Ser Gly Cys G1U Pro Gly Gly Val Ala Tyr Ser Cys 45 50 55 GCC GAC CAG ACC CCA TGG GCT GTG AAC GAC GAC TTC GCG CTC GGT TTT 288 Ala Asp Gin Thr Pro Trp Ala Val Asn Asp Asp Phe Ma Leu Gly Phe 60 65 70 OCT GCC ACC TCT ATT GCC GGC AGC AAT GAG GCG GGC TGG TGC TGC GCC 336 Ala Ala Thr Ser Ile Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala 75 80 85 TGC TAC GAG CTC ACC TTC ACA TCC GGT CCT GTT GCT GGC AAG AAG ATG 384 Cys Tyr Gli Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Lys Met

90 95 100

64.266

Case CM 393

Mod. 71 -20.000 ex. - 50/08

GTC GTC CAG TCC ACC AGC ACT GGC GGT GAT CTT GGC AGC AAC CAC TTC 432 Vai 105 Vai Gin Ser Thr Ser 110 Thr Gly Gly Asp Leu 115 Gly Ser Asn His Phe 120 GAT CTC AAC ATC CCC GGC GGC GGC GTC GGC ATC TTC GAC GGA TGC ACT 480 Asp Leu Asn Ile Pro 125 Gly Gly Gly Vai Gly 130 Ile Phe Asp Gly Cys Thr 135 CCC CAG TTC GGC GGT CTG CCC GGC CAG CGC TAC GGC GGC ATC TCG TCC 528 Pro Gin Phe Gly Gly 140 Leu Pro Gly Gin 145 Arg Tyr Gly Gly Ile 150 Ser Ser CGC AAC GAG TGC GAT CGG TTC CCC GAC GCC CTC AAG CCC GGC TGC TAC 576 Arg Asn Glu 155 Cys Asp Arg Phe Pro 160 Asp Ala leu Lys Pro 165 Gly Cys Tyr TGG CGC TTC GAC TGG TTC AAG AAC GCC GAC AAT CCG AGC TTC AGC TTC 624 Trp Arg 170 Phe Asp Trp Phe Lys 174 Asn Ala Asp Asn Pro 180 Ser Phe Ser Phe CGT CAG GTC CAG TGC CCA GCC GAG CTC GTC GCT CGC ACC GGA TGC CGC 672 Arg 185 Gin Vai Gin Cys Pro 190 Ala Glu Leu Vai Ala 195 Arg Thr Gly Cys Arg 200 CGC AAC GAC GAC GGC AAC TTC CCT GCC GTC CAG ATC CCC TCC AGC AGC 720 Arg Asn Asp Asp Gly Asn Phe Pro Ala Vai 21Q Gin Ile Pro Ser Ser Ser 215 ACC AGC TCT CCG GTC AAC CAG CCT ACC AGC ACC AGC ACC ACG TCC ACC 768 Thr Ser Ser Pro 220 Vai Asn Gin Pro Thr 225 Ser Thr Ser Thr Thr 230 Ser Thr TCC ACC ACC TCG AGC CCG CCA GTC CAG CCT ACG ACT CCC AGC GGC TGC 816 Ser Thr Thr 235 Ser Ser Pro Pro Vai 240 Gin Pro Thr Thr Pro 245 Ser Gly Cys ACT GCT GAG AGG TGG GCT CAG TGC GGC GGC AAT GGC TGG AGC GGC TGC 864 Thr Ala 250 Glu Arg Trp Ala Gin 255 Cys Gly Gly Asn Gly Trp 260 Ser Gly Cys AAC AAC TGC GTC GCT GGC AGC ACT TGC ACG AAG ATT AAT GAC TGG TAC 912 Thr 265 Thr Cys Vai Ala Gly 270 Ser Thr Cys Thr Lys 275 Ile Asn Asp Trp Tyr 280

CAT CAG TGC CTG TAGACGCAGG GCAGCTTGAG GTGGCCGCAA 964

His Gin Cys Leu

2285

CGAAATGACA CTCCCAATCA CTGTATTAGT TCTTGTACAT AATTTCGTCA TCCCTCCAGG 1024

GATTGTCACA TAAATGCAAT GAGGAACAAT GAGTAC 1060

64.266

Case CM 393 na listagem de sequência IDJj^l atrás mencionada, ou na listagem de sequência ID^.3 seguinte:

GAATTCGCGG CCGCTCATTC ACTTCATTCA TTCTTTAGAA TTACATACAC TCTCTTTCAA 60

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90J08

AACAGTCACT CTTTAAACAA AACAACTTTT GCAACA ATG CGA TCT TAC Met Arg Ser Tyr 1 ACT CTT Thr Leu 5 AGC GGT 114 162 CTC GCC CTG GCC GGC CCT CTC GCC GTG AGT GCT GCT TCT GGA Leu Ala Leu Ala 10 Gly Pro Leu Ala Vai 15 Ser Ala Ala Ser Gly 20 Ser Gly CAC TCT ACT CGA TAC TGG GAT TGC TGC AAG CCT TCT TGC TCT TGG AGC 210 His Ser Thr 25 Arg Tyr Trp Asp Cys 30 Cys Lys Pro Ser Cys 35 Ser Trp Ser GGA AAG GCT GCT GTC AAC GCC CCT GCT TTA ACT TGT GAT AAG AAC GAC 258 Gly Lys Ala 40 Ala Vai Asn Ala 45 Pro Ala Leu Thr Cys 50 Asp Lys Asn Asp AAC CCC ATT TCC AAC ACC AAT GCT GTC AAC GGT TGT GAG GGT GGT GGT 306 Asn 55 Pro Ile Ser Asn Thr 60 Asn Ala Vai Asn Gly 65 Cys Glu Gly Gly Gly 70 TCT GCT ΤΆΤ GCT TGC ACC AAC TAC TCT CCC TGG GCT GTC AAC GAT GAG 354 Ser Ala Tyr Ala Cys 75 Thr Asn Tyr Ser Pro 80 Trp Ala Vai Asn Asp 85 Glu CTT GCC TAC GGT TTC GCT GCT ACC AAG ATC TCC GGT GGC TCC GAG GCC 402 Leu Ala Tyr Gly 90 Phe Ala Ala Thr Lys 95 Ile Ser Gly Gly Ser 100 G1U Ala AGC TGG TGC TGT GCT TGC TAT GCT TTG ACC TTC ACC ACT GGC CCC GTC 450 Ser Trp Cys 105 Cys Ala Cys Tyr Ala 110 Leu Thr Phe Thr Thr 115 Gly Pro Vai AAG GGC AAG AAG ATG ATC GTC CAG TCC ACC AAC ACT GGA GGT GAT CTC 498 Lys Gly Lys 120 Lys Met Ile Vai 125 Gin Ser Thr Asn Thr 130 Gly Gly Asp Leu GGC GAC AAC CAC TTC GAT CTC ATG ATG CCC GGC GGT GGT GTC GGT ATC 546 Gly 135 Asp Asn His Phe Asp 140 Leu Met Met Pro Gly Gly 145 Gly Vai Gly Ile 150 TTC GAC GGC TGC ACC TCT GAG TTC GGC AAG GCT CTC GGC GGT GCC CAG 594 Phe Asp Gly Cys Thr 155 Ser G1U Phe Gly Lys 160 Ala Leu Gly Gly Ala 165 Gin TAC GGC GGT ATC TCC TCC CGA AGC GAA TGT GAT AGC TAC CCC GAG CTT 642 iyr Gly Gly Ile 170 Ser Ser Arg Ser G1U Cys 175 Asp Ser Tyr Pro 180 Glu Leu

64.266

Case CM 393

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

CTC AAG GAC GGT TCC CAC TCG CGA TTC GAC TGG TTC GAG AAC GCC GAC Leu Lys Asp Gly Cys 185 His Trp Arg 190 Phe Asp Trp Phe Glu 195 Asn Ala Asp AAC CCT GAC TTC AAC TTT GAG CAG GTT CAG TCC CCC AAG GCT CTC CTC Asn Pro 200 Asp Phe Thr Phe G1U Gin 205 Vai Gin Cys Pro 210 Lys Ala Leu Leu GAC ATC AGT GGA TGC AAG CGT GAT GAC GAC TCC AGC TTC CCT GCC TTC Asp 215 Ile Ser Gly Cys Lys Arg Asp 220 Asp Asp Ser 225 Ser Phe Pro Ala Phe 230 AAG GTT GAT ACC TCG GCC AGC AAG CCC CAG CCC TCC AGC TCC GCT AAG Lys Vai Asp Thr Ser 235 Ala Ser Lys Pro Gin Pro Ser Ser Ser Ala Lys 240 245 AAG ACC ACC TCC GCT GCT GCT GCC GCT CAG CCC CAG AAG ACC AAG GAT Lys Thr Thr Ser 250 Ala Ala Ala Ala Ala Gin Pro 255 Gin Lys Thr 260 Lys Asp TCC GCT CCT GTT GTC CAG AAG TCC TCC ACC AAG CCT GCC GCT CAG CCC Ser Ala Pro 265 Vai Vãl Gin Lys Ser 270 Ser Thr Lys Pro Ala Alá 275 Gin Pro GAG CCT ACT AAG CCC GCC GAC AAG CCC CAG ACC GAC AAG CCT GTC GCC Glu Pro 280 Thr Eys Pro Ala Asp Lys 285 Pro Gin Thr Asp Lys 290 Pro Vai Ala ACC AAG CCT GCT GCT ACC AAG CCC GTC ACC CCT CTC AAG AAG CCC AAG Thr 295 Lys Pro Ala Ala Thr 300 Lys Pro Vai Gin Pro 305 Vai Asn Lys Pro Lys 310 ACA ACC CAG AAG GTC CGT GGA ACC AAA ACC GGA GGA AGC TGC CCG GCC Thr Thr; Gin Lys Vãl ArgGly Thr 315 Lys'Thr Arg Gly 320 Ser Cys Pro 325 Ala AAG ACT GAC GCT ACC GCC AAG GCC TCC GTT GTC CCT GCT TAT TAC CAG Lys Thr Asp Ala 330 Thr Ala Lys Ala Ser Vai Vai 335 Pro Ala Tyr 340 Tyr Gin TCT GGT GGT TCC AAG TCC GCT TAT CCC AAC GGC AAC CTC GCT TCC GCT Cys Gly Gly 345 Ser Lys Ser Ala Tyr 350 Pro Asn Gly Asn Leu 355 Ala Cys Ala ACT GGA AGC AAG TCT GTC AAG CAG AAC GAG TAC TAC TCC CAG TCT GTC Thr Gly 360 Ser Lys Cys Vai Lys Gin 365 Asn Glu Tyr Tyr 370 Ser Gin Cys Vai CCC Pro 375 AAC Asn TAAATGGTAG ATCCATCGGT TGTGGAAGAG ACTATGCGTC TCAGAAGGGA

690

738

786

834

882

930

978

1026

1074

1122

1170

1218

1274

64.266

Case CM 393

TCCTCTCATG AGCAGGCTTG TCATTGTATA GCATGGCATC CTGGACCAAG TGTTCGACCC 1334

TTGTTGTACA TAGTATATCT TCATTGTATA TATTTAGACA CATAGATAGC CTCTTGTCAG 1394

CGACAACTGG CTACAAAAGA CTTGGCAGGC TTGTTCAATA TTGACACAGT TTCCTCCATA

AAAAAAAAAA AAAAAAAAA

1454

1473

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08

11- Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com qualqiyer das reivindicações 5 a 10 caracterizado por a referida célula hospedeira ser umafestii. pfeL.de um fungo como Tricloderuca ou Asperqillus, preferivelmente Aspergillus oryzae ou Asperqillus niqer ou uma célula de levedura que pertence a uma estirpe de Hansenula ou Saccharomyces, e.g. uma estirpe de Saccharomyces cerevisae.
12^a Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 10, caracterizado por a referida célula hospedeira ser uma estii pfe de uma bactéria, e.g. Bacillus, Streptomyces ou E.coli.
13^ Processo para a preparaçao de uma composição detergente de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado porra:.referida celulase estar presente numa quantidade tal que a quantidade de proteína enzima distribuída à solução da lavagem é de 0,005 a 40 mg/litro de solução de lavagem, preferivelmente de 0,01 a 10 mg/litro de solução de lavagem.
14§ Processo para a preparaçao de uma composição detergente de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por a quantidade de argila amaciadorc estar entre 0,5% e 50%, preferivelmente entre 5% e 20%, muito preferivelmente entre 8% e 15%, em peso da composição detergente.
15^a Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por ã.-referida argila amaciadora ser uma argila smectite, preferivelmente uma montmorilonite ou hectirite, com uma capacidade de permuta catiónica de pelo menos 50 meq/lOOg.

64.266

Case CM 393

Mod. 71 -20.000 ex.-90/08

162 Processo para a preparação de uma composiçãc detergente de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por a composição compreender ainda até 20%, em peso da referida argila da referida composição detei gente, de um agente de floculação de argila, polimérico.
17^§ Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por a composição compreender ainda até 50%, preferivelmente de 0,1% a 20% em peso da referida argila da referida composi ção detergente, de um poli-siloxano substítuido.

182 Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a. reivindicação 1, caracterizado por a referida composição conter não mais do que 15% em pese de sal carga, inorgânicoe tendo uma massa volúmica de 550 a 950 g/litro de composição.
19- Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação. 18, caracterizado por o referido sal carga, inorgânico, ser seleccionado de entre sais sulfato ou cloreto de metal alcalino ou alcalino terroso.
20% Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com as reivindicações 18 ou 19, caracte rizado por a composição nao conter mais de 10% em peso de < sal carga inorgânico.

212 processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com a reivindicação 20,caracterizado por a composição não conter mais do que 5% em peso de sal, inorgânico.

222 processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com qualquer das reivindicações 18 a 21, caracterizado por a composição ter uma massa volúmica de 650 a 850 g/litro.
23^ã Processo para a preparação de uma composição detergente de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por a referida composição estar substan75

64.266

Case CM 393 cialmente isenta de compostos fosfato e em que ccreferido adjuvante, para além dos polímeros de policarboxilato, compreende ainda compostos seleccionados de entre permutadores iónicos de aluminossilicato, citratos, carbonatos e suas mis turas.