PT100558A - Derivados de peptidilo, composicoes farmaceuticas que os contem e processo para a preparacao desses derivados - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de OELLTECH LIMITED, britânica, industrial e comercial, com sede em 216 Bath Road, Slough, Berkshire SL 1 4M, Rei no Unido (inventores: John Ro-bert Porter, Thomas Andrew Mil-lican, John Richard Morphy e Higel Robert Amold Beeley, residentes no Reino Unido) para "DERIVADOS BE PEPTIDILO: COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS con-tM e processo PARA PREPARAÇÃO DESSES DERIVADOS".

DESCRIQAO

Campo da invenção A presente invenção refere-se a uma classe particular de derivados de peptidilo, aos processos para a sua pre paraçao e à sua utilização em medicina.

Antecedentes da invenção

Em tecidos normais a síntese do tecido conjuntivo celular e contrabalançada pela degradação da matriz extracelu lar, existindo os dois efeitos opostos num equilíbrio dinâmico. Â degradação da matriz é ocasionada pela acção de protei- M.A. · - 1 -

nases libertadas de células de tecido conjuntivo residentes e por células inflamatórias invasoras, e é devida em parte à aç tividade de pelo menos três grupos de metaloproteinases. Estes são as colagenases, as gelatinases (ou colagenases tipo IV) e as estromelisinas. Normalmente estes enzimas catabólicos são estreitamente regulados ao nível da sua síntese e secreção e também ao nível da sua actividade extracelular, esta úl tima através da acção de inibidores específicos, tais como O^-macroglobulinas e IIMP (tecido inibidor de metaloproteina se), que formam complexos inactivos com as metaloproteinases. A rutura acelerada, descontrolada, de tecidos con juntivos pela ressorção, catalitisada pelas metaloproteinases, da matriz celular é uma característica de muitos estados pato lógicos, tais como artrite reumatoide, ulceração da córnea, da epiderme ou gástrica} metástases ou invasão de tumores; doenças periodontais e doenças ósseas. Ê de esperar que a pa-togénese destas doenças seja susceptível de ser modificada de forma benéfica pela administração de inibidores de metalopro-teinase e foram já sugeridos numerosos compostos para esta fi nalidade /“para uma revisão geral veja-se Wahl, R. C. et al., Ann. Rep. Med. Chem. 25, 175-184, Academic Press Inc., San Bi ego (1990 )J,

Foram descritos como inibidores de colagenase e/ /ou de estromelisina certos derivados de peptidilo de ácido hidroxâmico /“ver por exemplo Especificações de Patentes Euro peias n2s 214 639, 231 081, 236 872 e 274 453, e Especificações de Patente Internacional nes ¥090/05716 e WG9Q/G5719__7·

Sumário da invenção

Descobrimos agora uma classe particular de deriva dos de peptidilo, cujos membros possuem vantajosamente uma ac ção inibitória potente e seleetiva contra gelatinase. - 2 -

Ha agora uma forte evidencia de que as metalopro-teinases são importantes na invasão de tumores e nas metásta-ses. A gelatinase da célula de tumores, em particular, tem si do associada ao potencial das células de tumores para invadir e formar metástases. A invasão de tumores e a formação de metástases são a principal causa da falha dos tratamentos de pa cientes com cancro, e a utilização de um inibidor selectivo de gelatinase, tal como um composto da presente invenção, que é capaz de inibir a invasão por células de tumor, pode vir a revelar-se como melhorando o tratamento desta doença.

Assim, de acordo com um aspecto ção revelamos um composto de fórmula (I) da presente inven R R" 0

A.

(D na qual R representa um grupo -CGNHGH, carboxilo (-CG^H) ou carboxilo esterifiçado; 1 , , R representa um atomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, al- cenilo, arilo, aralquilo, heteroaralquilo ou heteroariltioalquilo , eventualmente substituídos; 2 R representa um grupo feniletilo, fenilpropilo ou fenilbuti-lo eventualmente substituídos; R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo; 4 * R representa um atomo de hidrogénio ou um grupo alquilo; 5 R representa um grupo alquilo ou alcenilo eventualmente subs tituidos, eventualmente interrompidos por um ou mais átomos de -G- ou -S- ou grupos -H(R') /“em que R repreaenta um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de car-

bono_7 J X representa um grupo amino ou amino substituído, hi- - 3 -

droxilo ou hidroxilo substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos.

Note-se que os compostos de acordo com a invenção podem conter um ou mais átomos de carbono substituídos assime tricamente, por exemplo os que são marcados com um asterisco na formula (I). A presença de um ou mais destes centros assimétricos num composto de fórmula (I) pode dar origem a este-reoisómeros, e em cada caso a invenção deve ser tomada como estendendo-se a todos estes estereoisómeros, incluindo enan-tiómeros e diastereoisómeros, e as suas misturas, incluindo as misturas racémicas.

Nas fórmulas aqui indicadas a linha I usada num centro potencialmente assimétrico para representar a possi bilidade das configurações R e S, e as linhas -w· e-----re presentam uma única configuração num centro assimétrico.

Nos compostos de acordo cora a invenção, quando o grupo R representa um grupo carboxilo esterifiçado, este pode j 8 8 ser por exemplo um grupo de formula -Gí^R na qual R represen ta um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 8 átomos de carbono, eventualmente substituído, tal como um gru po metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo ou t-butilo; um grupo aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo eventualmente substituído escolhido de benzilo, feniletilo, fenilpropilo, ounaftilmetilo ou φ-naftilmetilo; um grupo arilo com 6 a 12 átomos de carbono tal como um grupo fenilo, oí-naftilo ou $ -naftilo eventualmente substituídos; um grupo ariloxi-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alquilo, tal como um grupo eventualmente substituído es colhido de feniloximetilo, feniloxietilo, (X-naftiloximetilo ou ^-naftiloximetilo; um grupo alcanoiloxi-alquilo com 1 a 8 - 4 -

átomos de carbono em cada uma das partes alguilo, eventualmen te substituído, tal como um grupo pivaloiloximetilo, propioni loxietilo ou propioniloxipropilo; ou um grupo aroiloxi-algui-lo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 8 átomos de carbono na parte alguilo, tal como um grupo eventualmente substituído escolhido de benzoiloxietilo ou benzoiloxipropilo. 8

Os eventuais substituintes presentes nos grupos R incluem por exemplo um ou mais átomos de halogéneo, tais como átomos de fluor, de cloro, de bromo ou de iodo, ou grupos alguilo com 1 a 4 átomos de carbono, por exemplo grupos metilo ou eti lo, ou grupos alcoxi com 1 a 4 átomos de carbono, por exemplo grupos metoxi ou etoxi.

Em geral guando o grupo R representa um grupo car boxilo esterificado, pode tratar-se de um éster metabolicamen te dissociável de um ácido carboxílico.

Quando o grupo nos compostos de formula (I) re presenta um grupo alguilo ou um grupo alcenilo eventualmente substituídos, pode tratar-se por exemplo de um grupo alguilo com 1 a 6 átomos de carbono ou de um grupo alcenilo com 2 a 6 átomos de carbono, de cadeias lineares ou ramificadas, tais como um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, isopentilo, n-hexilo, etenilo, 1-propenilo, 1-butenilo ou 2-butenilo, eventualmente substituídos por um ou mais grupos alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo grupos metoxi, etoxi, propoxi, alguiltio com 1 a 6 átomos de carbono, como por exemplo metiltio, etil- tio, propiltio, grupos aril-alcoxi com 6 a 12 átomos de carbo no na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alcoxi, por exemplo fenil-alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono na parte alcoxi, tais como benziloxi, aralguiltio, por exemplo fenil- -alquiltio com 1 a 6 átomos de carbono na parte alguilo, tais como benziltio, grupos amino (-M0), amino substituído /“tais 9 9 d como -RHR , em gue R representa um grupo alguilo com 1 a 6 - 5 -

átomos de carbono, por exemplo metilo ou etilo, aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo fenil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tal como benzilo, arilo com 6 a 12 átomos de carbono como por exemplo fenilo, cicloal quilo com 3 a 8 átomos de carbono como por exemplo ciclohexi-lo, ou cicloalquil-alquilo com 3 a 8 átomos de carbono na par te cicloalquilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, como por exemplo o grupo ciclohexilmetilo 7» carboxilo (-00 H) o O f ~ 2 ou -GOgii em que R° e definido como anteriormente_7·

Os grupos arilo representados por R^ nos compostos de formula (l) incluem grupos arilo com 6 a 12 átomos de carbono, tais como os grupos fenilo ou 01- ou $-naftilo.

Os grupos aralquilo representados por R"*" incluem grupos aril-alquilo com 6 a 12 átomos de carbono na parte ari lo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como fenil -alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, ou gru pos a- ou $>-naftil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo benzilo, feniletilo, fenilpropilo, fenilbutilo, fenilpentilo, <X- ou f^-naf til-metilo, naftileti lo, naftilpropilo, naftilbutilo ou naftilpentilo.

Quando o grupo R1 nos compostos de formula (I) e um grupo heteroaralquilo, pode ser por exemplo um grupo hete-roaril-alquilo com 3 a 6 átomos de earbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como um grupo e-ventualmente substituído escolhido de pirrolilmetilo, furanil metilo, tienilmetilo, imidazolilmetilo, oxazolilmetilo, tiazjq lilmetilo, pirazolilmetilo, pirrolidinilmetilo, piridinilmeti lo, pirimidinilmetilo, morfolinilmetilo, ou piperazinilmetilo.

Os grupos heteroariltioalquilo representados por R1 incluem grupos heteroariltio-alquilo com 3 a 6 átomos de 6

carbono na parte heteroarilo e 1 a 6 átomos de carbono na par te alquilo, tais como grupos eventualmente substituídos escolhidos de pirroliltiometilo, furaniltiometilo, oxazoliltiometi lo, tiazoliltiometilo, pirazoliltiometilo, pirrolidiniltiome-tilo, piridiniltiometilo, pirimidiniltiometilo, morfoliniltic) metilo, ou piperaziniltiometilo.

Os grupos arilo, aralquilo, heteroaralquilo ou he 1 ” teroariltioalquilo representados por S , e os grupos represen 2 * " tados por & nos compostos de formula (l) podem estar even- tualmente substituídos, cada um, na parte cíclica do grupo f*m 10 w* / por 1, 2 ou mais substituintes £ R jí escolhidos de átomos de halogéneo, por exemplo átomos de fluor, de cloro, de bromo ou de iodo, ou grupos alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metilo ou etilo, grupos alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono por exemplo metoxi ou etoxi, grupos alquilenodioxi com 2 a 6 átomos de carbono, por exemplo etilenodioxi, haloge noalquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo trifluorme tilo, alquilamino com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, metilamino ou etilamino, dialquilamino com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, por exemplo dimetila-mino ou dietilamino, amino (-NEL), nitro, ciano, hidroxilo (-OH), carboxilo (-COgH), -00 gR , em que R^ e definido como a-cima, alquilearbonilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte al quilo, por exemplo acetilo, sulfonilo (-SQgH), alquilsulfoni-lo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo metilsulfonilo, aminosulfonilo^G2M2), alquilaminossulfonilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo metilamino s sulfonilo ou etilaminossulfonilo, dialquilaminossulfonilo com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, por exemplo dimetilaminossulfonilo ou dietilaminossulfonilo, carboxamido (-OOM2), alquilaminocarbonilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, por exemplo metilaminocar bonilo ou etilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das partes alquilo, por exem- - 7 -

pio dimetilaminoearbonilo ou dietilaminocarbonilo, sulfonila- mino (-NHSO^H), alquilsulfonilamino com 1 a 6 átomos de carbo no na parte alquilo, por exemplo metilsulfonilamino ou etil- sulfonilamino, dialquilsulfonilamino com 1 a 6 átomos de carbo no em cada uma das partes alquilo, por exemplo dimetilsulfo- nilamino ou dietilsulfonilamino. Note-se que sempre que este- 10 ~ * jam presenteb dois ou mais substituintes R , estes nao tem que ser necessariamente átomos e/ou grupos iguais. Os substituintes R·*"0 podem estar presentes em qualquer átomo de carbono do anel, diferente daquele que está ligado ao resto da molécula de formula (I). Assim, por exemplo, em grupos fenilo quajquer substituintes podem estar presentes nas posições 2, 3, 4, 5, ou 6, relativamente ao átomo de carbono do anel liga do à restante molécula. 3 4 *

Quando os grupos R e R nos compostos de formula (I) são grupos alquilo, estes podem ser por exemplo grupos al quilo com 1 a 6 átomos de carbono, tais como grupos metilo ou etilo. 0 grupo B? nos compostos de formula (i) pode ser um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, eventualmente substituido, por exemplo um grupo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, n-pentilo ou n-bexilo, ou um grupo alcenilo com 2 a 6 átomos de carbono, por exemplo etenilo ou 1-propenilo, eventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S-, ou grupos -N(R^) em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alqui lo com 1 a 6 átomos de carbono, tal como um grupo metilo.

Os eventuais substituintes que podem estar presen π ~ tes em grupos alquilo ou alcenilo R incluem grupos aril-alqui lo com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, tais como grupos fenil-alquilo com 1 a 6 átomos de carbono na parte alquilo, eventualmente - 8 -

substituído, por exemplo grupos benzilo, grupos aril-alcoxi com 6 a 12 átomos de carbono na parte arilo e 1 a 6 átomos de carbono na parte alcoxi, tais como grupos fenil-aleoxi com 1 a 6 átomos de carbono na parte alcoxi, eventualmente substituídos, por exemplo grupos benziloxi, grupos arilo com 6 a 12 átomos de carbono, por exemplo grupos fenilo eventualmente substituídos, grupos heteroarilo com 3 a 8 átomos de carbono, por exemplo grupos eventualmente substituídos escolhidos de indol, imidazol ou quinolino, grupos aril-alcoxi-arilo com 6 a 12 átomos de carbono em cada uma da partes arilo e 1 a 6 át£ mos de carbono na parte alcoxi, por exemplo grupos benziloxi-fenilo, -OH, -SH, alquiltio com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo metiltio ou etiltio, carboxi (-CO^H), amino carboxamido (-00IH2) ou grupos guanido -MC(NH2 )=HH. Os eventuais substituintes presentes nestes grupos podem ser substi-10 tuintes R tal como foram referidos acima.

Quando X nos compostos de formula (I) representa um grupo amino substituído, este pode ser por exemplo um gru-po de formula -HRXXRX em que Rx e Rx , que podem ser iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio (com a condição de que quando um dos substituintes R ou R I um átomo de hidrogénio, o outro não é) ou um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada eventualmente substituído, e-ventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -H(R') ou grupos aminocarboniloxi /”-NHC(0)0- 7» ou R x e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados podem formar um grupo amino cíclico com 3 a 6 átomos de carbono, eventualmente substituído, possuindo eventualmente um ou mais de outros heteroátomos escolhidos de grupos -0- ou n —S—, ou grupos -U(R ). 11 12

Quando R e/ou R representam um grupo alquilo, este pode ser por exemplo um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tal como um grupo metilo, etilo, n-propilo, iso- - 9 -

propilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo ou t-butilo, eventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S-, ou gru-pos -R(R' )- ou aminocarboniloxi e pode ser por exemplo um gru po metoximetilo, etoximetilo, etoxietilo ou etilaminoearboni-loximetilo. Os substituintes eventuais que podem estar presen tes nestes grupos incluem hidroxilo (-0H), carboxilo (-ΟΟ,,Η), carboxilo esterificado (-C0oR ), carboxamido (-00NHo), carbo- ^ 11 12^ xamido substituído, por exemplo um grupo -COHR R em que 1¾1¾12 é definido como acima, amino (-HEL), amino substitui-do, por exemplo um grupo de formula -NR1! , ou arilo, por exemplo arilo com 6 a 12 átomos de carbono, tal como fenilo, eventualmente substituído por 1, 2 ou mais substituintes H10 escolhidos dos que já foram enumerados acima em relação com o grupo R .

Os exemplos particulares de grupos amino cíclicos. 11 12 representados por -M R incluem os grupos morfolinilo, imi dazolilo, piperazinilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, pira zolilo, pirrolidinilo, piridinilo e pirimidinilo.

Quando o grupo Σ é um grupo hidroxilo substituido pode ser por exemplo um grupo -0RXJ· em que RXJ" e definido como anteriormente, mas diferentes de um átomo de hidrogénio.

Os sais dos compostos de formula (I) incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo sais de adiçao de ácido derivados de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como os cloridratos, bromidratos, iodidratos, p-tóluenossulfonatos, fosfatos, sulfatos, percloratos, acetatos, trifluoracetatos, propionatos, citratos, malonatos, succinatos, lactatos, oxala tos, tartaratos e benzoatos.

Também se podem formar sais com bases. Estes sais incluem sais derivados de bases orgânicas ou inorgânicas, por exemplo sais de metais alcalinos como sais de sodio ou de po- - 10 -

tássio, sais de metais alcalinoterrosos, tais como sais de magnésio ou cálcio, e sais de aminas orgânicas, tais como sais de morfolina, piperidina, dimetilamina ou dietilamina.

Quando o grupo R nos compostos da presente invenção é um grupo carboxilo esterifieado, pode tratar-se de um éster 0Φ 8 8 metabolicamente dissociável de formula -CG^ír em que R pode ser um grupo etilo, benzilo, feniletilo, fenilpropilo, 0(- ou β-naftilo, 2,4-dimetilfenilo, 4-t-butilfenilo, 2,2,2-trifluo retilo, l-(benziloxi)-benzilo, l-(benziloxi)-etilo, 2-metil--1-propioniloxipropilo, 2,4»6-trimetilbenzoiloximetilo ou pi-valoiloximetilo.

Nos compostos de formula (I) o grupo R^ pode ser em particular um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tal como um grupo metilo, um grupo aralquilo tal como o grupo benzilo, um grupo aril-tioalquilo tal como um grupo feniltio-metilo, ou um grupo heteroariltioalquilo tal como um grupo tieniltiometilo, piridinil-tiometilo ou pirimidiniltio-metilo, ou é em particular um átomo de hidrogénio.

Os grupos R^ e R^ nos compostos de formula (I) po dem ser, cada um, em particular um grupo metilo, ou especialmente um átomo de hidrogénio. 0 grupo 1 nos compostos de formula (I) pode ser em particular um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, um grupo isopropilo ou um grupo isobutilo, ou um grupo benzilo, benziloxibenzilo ou indolilmetilo eventualmente substituidos. O grupo X nos compostos de formula (I) pode ser em particular um grupo amino (-NH^) ou um grupo . Os grupos -1¾1½12 particulares são grupos -MK12. Gs grupos des 12 “ te tipo incluem aqueles nos quais R representa um grupo al- 11 -

quilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo um grupo meti-lo, etilo ou n-propilo, eventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N(R ) /”por exemplo -NH- ou -H(0H3)-J ou aminocarboniloxi e eventualmente substituido por um grupo hidroxilo, carboxilo, carboxialquilo, por exemplo carboximetilo, carboxamido, amino, -^1½12 /“por exemplo dialquilamino com 1 a 6 átomos de carbono em cada uma das par tes alquilo, tal como dimetilamino, alquilamino com 1 a 6 ato mos de carbono, tal como metilamino, ou amino cíclico com 5 a 6 átomos de carbono, tal como morfolinilo, pirrolidinilo ou piridinilo ~J ou fenilo eventualmente substituido por 1, 2 ou

"" 1Q mais substituintes R .

Um grupo particularmente útil de compostos de a- cordo com a invenção I o de compostos de formula (I) na qual 2 R representa um grupo fenilpropilo eventualmente substituido.

Um outro grupo particularmente útil de compostos de fórmula (I) são aqueles nos quais X representa um grupo a-mino ou amino substituido.

Em geral nos compostos de fórmula (I) os grupos R^ e R^ são de preferencia, cada um, um átomo de hidrogénio.

Ruma outra preferência o grupo R nos compostos de acordo com a invenção e um grupo -GOUHOH ou um grupo -OG^H ou um seu ester metabolicamente dissociável. Numa preferência particular, no entanto, R representa um grupo -OQNHQH ou um grupo -COgH. Um grupo especialmente útil de compostos de acor do com a invenção tem a formula (Ia) 12 -

2 c M na qual R, R , ír e X são definidos como para a fórmula (I); e os sais, solvatos e hidratos do mesmo.

Um grupo particularmente útil de compostos de fór mula (la) são aqueles em que R representa um grupo -CQNHGH ou 2 -002H; R representa um grupo fenilpropilo eventualmente subst tuido; X representa um grupo amino (-NH2) ou amino substi tuido; e os sais, solvatos e hidratos do mesmo.

Nos compostos de fórmula (la) X pode ser um grupo -NH„ ou um grupo -ΝΕ12Ή12 tal como foi definido para os com- á * t \ 5 postos de formula (I). 0 grupo R pode ser em particular um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, tal como um grupo isopropilo ou isobutilo, ou um grupo eventualraente substituído escolhido de benzilo, benziloxibenzilo ou indolilmetilo.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser preparados pelos seguintes processos. Na descrição e fórmulas 12 3 4 5 « adiante os grupos R, R , R , R , R , R e X sao definidos como anteriormente, excepto quando for expressamente indicado o contrário. Note-se que os grupos funcionais tais como amino, hidroxilo ou earboxilo, presentes nos vários compostos descri tos adiante e que se pretende que se mantenham na molécula, podem necessitar de ser protegidos antes de qualquer reacção ser iniciada. Nestas circunstâncias a remoção dos grupos de boqueio pode ser o passo final numa reacção particular. Os - 13 -

grupos de bloqueio de amino ou hidroxilo apropriados incluem os grupos benzilo, benziloxicarbonilo ou t-butiloxicarbonilo. Estes podem ser removidos de um derivado bloqueado por hidro-genação catalítica, utilizando por exemplo hidrogénio na presença de um catalisador metálico, por exemplo paládio sobre um suporte, tal como carvão, num dissolvente tal como um álcool, por exemplo metanol, ou por tratamento com iodeto de trimetilsililo ou ácido trifluoracético num dissolvente aquoso . Os grupos de bloqueio de carboxilo apropriados incluem grupos benzilo, que podem ser removidos de um derivado bloque ado pelos métodos abordados acima, ou grupos alquilo, tais c£ mo o grupo t-butilo, que podem ser removidos de um derivado bloqueado por tratamento com ácido trifluoracético num dissol vente aquoso* Podem revelar-se evidentes outros grupos de blo queio apropriados, bem como os métodos para a sua utilização. A formação de um grupo amino, hidroxilo ou carboxilo bloqueados pode ser obtida utilizando processos de alquilação ou esteri-ficação convencionais, por exemplo os que são descritos adian te.

Assim, de acordo com um outro aspecto da presente invenção, um composto de formula (I) pode ser preparado por a coplamento de um ácido de formula (II).

OH (II) ou de um seu derivado activo, com uma amina de fórmula (III) - 14 -

R R (III) seguida pela remoção de qualquer grupo de bloqueio presente.

Os derivados activos de ãcidos de fórmula (II) in cluem por exemplo anidridos de ácido ou halogenetos de ácido, tais como cloretos de acilo. A reacção de acoplamento pode ser realizada utili zando condições correntes para uma reacção de aminação deste tipo. Assim, por exemplo, a reacção pode ser realizada num dissolvente, por exemplo um dissolvente orgânico inerte tal co mo um éter, por exemplo um éter cíclico tal como tetrahidrofu rano, uma amida por exemplo uma amida substituída, tal como dimetilformamida, ou um bidrocarboneto halogenado tal como di clorometano, a uma temperatura baixa, por exemplo desde -30°C até à temperatura ambiente, tal como de -20°C até 0°C, eventualmente na presença de uma base, por exemplo uma base orgânica tal como uma amina, por exemplo trietilamina ou uma ami-na cíclica, tal como N-metilmorfolina. Quando se utiliza um ácido de fórmula (II) a reacção pode ser adicionalmente reali zada na presença de um agente de condensação, por exemplo uma diamida tal como IJ.N,-dieicloh.exil-carbodiimida, preferivelmente na presença de um triazol tal como 1-hidroxibenzotriazol. Como alternativa o ácido pode ser levado a reagir com um cloro formiato, por exemplo cloroformiato de etilo, antes da reac ção com a amina de fórmula (III).

Os grupos hidroxilo ou carboxilo livres nos compostos de partida de fórmulas (II) /"na qual R representa -COR HQH ou C02Hj7 e (III) podem necessitar de ser protegidos du- - 15 -

rante a reacção de acoplamento. Os grupos de bloqueio apropria dos, bem como os métodos para a sua remoção, podem ser os que ja foram descritos acima.

Note-se que sempre que se pretenda um estereoisó mero particular de fórmula (I), este pode ser obtido por reso lução de uma mistura de isómeros, depois da reacção de acopla mento de um acido de fórmula (II) e de uma amina de fórmula (III). Podem ser usadas as técnicas de resolução convencionais por exemplo a separação dos isómeros por crornatografia, por exemplo por utilização de cromatografia liquida de alta resolução. Sempre que desejado, no entanto, podem ser utilizados na reacção de acoplamento produtos de partida homoquirálicos apropriados para conduzir a um estereoisómero particular de fórmula (l). Assim, num processo particular pode ser preparado um composto de fórmula (Ia) por reacção de um composto de fórmula (Ha)

com uma amina de fórmula (llla)

como foi descrito acima.

Os ácidos intermediários de fórmula (II) na qual - 16 -

R representa um grupo carboxilo ou um grupo carboxilo esteri-ficado, podem ser preparados hidrolisando um correspondente éster de formula (IY)

(IV) 13 na qual R representa um grupo alquilo, por exemplo um grupo metilo ou t-butilo, utilizando por exemplo ácido trifluoracl- 13 tico, ou quando E ^ representa um grupo metilo utilizando a hidrólise enzimátiea, tal como por exemplo com Ot-quimotripsi na, num dissolvente aquoso, Nesta reacção a hidrólise enzimá-tica (por exemplo como será descrita mais particularizadamen-te nos exemplos adiante) proporciona de forma particularmente útil um método de selecção dos isómeros. 0 ester de formula (IY) pode ser preparado por esterificação do correspondente ácido de formula (Y)

utilizando um halogeneto de acilo apropriado, por exemplo um cloreto de acilo num dissolvente tal como um álcool, por exem pio metanol, a uma temperatura baixa, por exemplo da ordem de 0°0.

Os ácidos de formula (Y) podem ser preparados por alquilação de um composto de formula (YI) - 17 -

com um halogeneto apropriado, por exemplo um composto de fór-mula R Hal, na qual Hal representa um átomo de halogéneo tal como um átomo de cloro ou "bromo, na presença de uma base, por exemplo um alcóxido, tal como etóxido de sódio, num dissolven te tal como um álcool, por exemplo etanol, a temperatura ambiente, seguida pela descarboxilação utilizando por exemplo a eido clorídrico concentrado, a uma temperatura elevada, por exemplo a temperatura de refluxo.

Os compostos intermediários de formula (VI) ou são compostos conhecidos, ou podem ser preparados por métodos análogos aos que são utilizados para a preparação dos compostos conhecidos.

Os ácidos intermediários de fórmula (IV) na qual R representa um grupo -CGNHOH ou um seu derivado bloqueado, podem ser preparados por reacção de um anidrido de fórmula (VII)

com uma hidroxilamina tal como G-benzil-hidroxilamina, num dissolvente tal como tetrahidrofurano, a uma temperatura bai- - 18 -

xa, por exemplo da ordem de -20°C, seguida, sempre que preten dido, pela remoção do grupo de bloqueio, como já foi descrito acima.

Os anidridos intermediários de fórmula (7ΊΙ) podem ser preparados por exemplo aquecendo, por exemplo à tempe ratura de refluxo, um diácido de fórmula (V) na qual R representa -GQ2H, com um cloreto de acilo tal como cloreto de aceti lo.

Os ácidos homoquirálicos de fórmula (lia) podem ser preparados, de acordo com outra earacterística da invenção, por oxidação de uma oxazolidinona de fórmula (7111)

(na qual Ph representa um grupo fenilo) utilizando um agente oxidante tal como um peróxido, por exemplo peróxido de hidrogénio, num dissolvente tal como um éter, por exemplo um éter cíclico, tal como tetrahidrof urano, a uma temperatura baixa, por exemplo da ordem de G°0, seguida pelo tratamento com uma base, tal como hidróxido de lítio, a uma temperatura elevada.

Os compostos de fórmula (7III) são novos, são compostos intermediários particularmente úteis para a prepara ção de estereoisómeros de fórmula (Ia) e formam um outro aspeç) to da invenção.

Os compostos de fórmula (7III) podem ser prepara dos por reacção de um halogeneto de acilo de fórmula RGELCH- - 19 -

2 * (R )GQHal (na qual Hal representa um átomo de halogeneo, tal como um átomo de cloro, bromo ou iodo) com uma solução de (s)-4-(fenilmetil)-2-oxazolidinona na presença de uma. base, tal como n-butil-lítio, num dissolvente tal como tetrahidrofu rano, a uma temperatura baixa, por exemplo de cerca de -78°0.

Os halogenetos de acilo de formula RCH2CH(R2)CO-Hal podem ser preparados por tratamento dos correspondentes a eidos conhecidos de fórmula RCH20H(R2)0Q2H com agentes de ha-logenação convencionais, por exemplo halogenetos de tionilo, em condições de reacção correntes.

Num outro processo de acordo com a invenção pode ser preparado um composto de fórmula (I) na qual R representa um grupo carboxilo, pela descarboxilação de um correspondente composto de fórmula (IX). 2 v.

R O

Esta reacção pode ser realizada utilizando condições correntes, por exemplo por aquecimento de um composto de fórmula (IS) num dissolvente inerte, tal como um hidrocarboneto aromá tico, por exemplo xileno, à temperatura de refluxo.

Os ácidos intermediários de fórmula (IX) podem ser preparados por reacção de um ácido bloqueado de fórmula (I) 20 -

na qual S representa um grupo carboxilo bloqueado, tal como um grupo benziloxicarbonilo, e Z1 representa um grupo de bloqueio tal como um grupo benzilo, com uma amina de fórmula (III) utilizando reagentes e condições como foram descritas a cima para o acoplamento dos compostos de fórmulas (II) e (III), seguida pela remoção dos grupos de bloqueio.

Os compostos intermediários de fórmula (X) podem ser preparados pelo tratamento de um Ister malónico apropriado de fórmula RCE^CO^Z1 com um halogeneto de fórmula (XI)

(na qual Hal representa um átomo de halogáneo, por exemplo um átomo de cloro ou de bromo) na presença de uma base, tal como t-butóxido de potássio, num dissolvente tal como dimetilforma mida, à temperatura ambiente.

Os halogenetos de fórmula (H) podem ser prepara dos por halogenação e subsequente desearboxilaçao de um diáci do de fórmula (XII) 21 -

utilizando por exemplo um agente de halogenação, tal como bro mo, num dissolvente, tal como o éter dietílico, à temperatura ambiente, seguido pelo aquecimento do composto intermediário halogenado resultante num dissolvente, tal como um hidrocarbo neto aromático, por exemplo xileno, à temperatura de refluxo.

Os compostos intermediários de formula (XII) podem ser preparados por hidrólise do correspondente éster dfe.1-quílico (por exemplo o éster dimetílico ou dietílico) utilizando uma base, tal como hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio, num dissolvente tal como um álcool, por exemplo metanol, á temperatura de refluxo. Os compostos de partida, esteres dialquílicos, ou são compostos já conhecidos su podem ser preparados por métodos análogos aos que são utilizados pa ra a preparação dos compostos conhecidos, por exemplo como são aqui descritos nos exemplos.

Os compostos de fórmula (I) também podem ser pres parados por interconversão de outros compostos de fórmula (I). Assim, por exemplo, um composto de fórmula (I) na qual R representa um grupo -OOMOH pode ser preparado por reacção de um correspondente ácido de fórmula (I) na qual R representa um grupo -COgH, ou um seu derivado activo (por exemplo um cloreto de ácido ou um anidrido de ácido) com hidroxilamina ou um derivado O-bloqueado de um seu sal. A reacção pode ser realiza da utilizando os reagentes e condições descritos anteriormen-te na preparação dos compostos de fórmula (I) a partir dos compostos de partida de fórmulas (II) e (III). 22 -

Hum outro processo de interconversão os compostos de formula.(I) na qual R representa -COgH e/ou X contem um grupo -OOgH, podem ser preparados por hidrólise do correspondente composto esterificado (por exemplo, quando R representa um grupo -CGgR^ e/ou X contem um grupo análogo) utilizando processos convencionais, por exemplo por tratamento com uma "base, por exemplo com um hidróxido de metal alcalino, tal como hidróxido de lítio, num dissolvente tal como um álcool aquoso, por exemplo metanol aquoso, ou por tratamento com um ácido tal como um ácido mineral, por exemplo ácido clorídrico, na presença de um dissolvente, por exemplo dioxano.

Analogamente, os ésteres de fórmula (I), por é-xemplo quando R representa um grupo -CG„R e/ou X contem um grupo -COgR , podem ser preparados por reacção dos correspondentes ácidos nos quais R representa um grupo -CG^H e/ou X contém um grupo -GGJI ou um seu derivado activo, com um álcool , 8 á de formula R OH, utilizando condiçoes convencionais.

Os compostos de acordo com a invenção são potentes e selectivos inibidores de gelatinase. A actividade e a se lectividade dos compostos pode ser determinada pela utilização de testes de inibição enzimáticos apropriados, por exemplo tal como são descritos no exemplo A adiante. Hos nossos ensaios utilizando esta marcha de trabalho os compostos de a-cordo com a invenção provaram inibir a gelatinase com valores IL na gama picomolar-nanomolar, e ter uma selectividade para gelatinase em relação à estromelisina de cerca de 40 vezes su perior, ou ainda maior, e terem uma selectividade para gelati nase em relação à colagenase de cerca de 20 vezes ou maior. A capacidade dos compostos da invenção para impe direm a invasão de células de tumores pode ser demonstrada no modelo de ensaio no rato, convencional.

Assim, resumidamente, ratos nus podem ser inocula - 23 -

dos oom uma linha de células de tumor apresentando invasão d_e pendente de gelatinase e pode avaliar-se a capacidade dos com postos de acordo com a invenção para reduzir a subsequente cole nisação de tumor pulmonar, de acordo com um processo convencional. Nos nossos ensaios os compostos de acordo com a invenção, quando administrados por via intravenosa à razão de 1 mg/ /kg a ratos no modelo de ensaio descrito acima, reduziram a colonisação de tumor pulmonar a níveis desprezíveis.

Os compostos de acordo com a invenção podem, por isso, demonstrar serem úteis para a prevenção de metastases de células de tumores e a invasão. Os compostos podem, por conseguinte, ter utilização no tratamento do cancro, particularmente em combinação com a radioterapia, a quimioterapia ou a cirurgia, ou em pacientes que se apresentam com tumores pri mários, para controlar o desenvolvimento das metastases do tu mor, Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção, revela mos um composto de formula (I) para utilização no tratamento do cancro, para controlar o desenvolvimento das metastases do tumor. Os cancros podem incluir, em particular, o cancro do peito, melanoma, cancro pulmonar, da caheça, do pescoço ou da bexiga.

Para uso de acordo com este aspecto da invenção os compostos de formula (l) podem ser formulados de forma con vencional, eventualmente com uma ou mais substâncias veiculares, diluentes ou excipientes fisiologicamente aceitáveis.

Assim, de acordo com um outro aspecto da invenção revelamos uma composição farmacêutica compreendendo um composto de formula (I) e um diluente, substância veicular ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Ainda num outro aspecto da invenção revelamos um processo para a preparação de uma composição farmacêutica com • preendo pôr-se em contacto um composto de fórmula (I) com uma - 24 -

substância veicular, diluente ou excipiente farmaceuticamente aeeitável.

Os compostos para utilização de acordo com a pre sente invenção podem ser formulados para administração oral, bocal, parenterica ou rectal, ou numa forma apropriada para administração nasal, ou administração por inalação ou insufla ção.

Para administração oral as composições farmaceu ticas podem tomar a forma, por exemplo, de comprimidos ou cág sulas preparados por meios convencionais, com substâncias ex-cipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como aglutinantes (por exempLo amido de milho pré-gelatinisado, polivinilpirroli dona ou hidroxipropil-metilcelulose); eargas (por exemplo lactose, celulose micro-cristalina ou hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo estearato de magnésio, talco ou sí lica); desintegrantes (por exemplo amido de batata ou glicola to de sodio); ou agentes humectantes (por exemplo laurilsulfa to de sodio). Os comprimidos podem ser revestidos por processos conhecidos na técnica. As composições líquidas para administração oral podem tomar a forma por exemplo de soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ser apresentadas na forma de um produto seco para constituição com agua ou outros veículos apropriados antes da utilização. Estas composições líquidas po:„ dem ser preparadas por meios convencionais com aditivos farma ceuticamente aceitáveis, tais como agentes auxiliares de suspensão, emulsionantes, substâncias veiculares não aquosas; e conservantes. As composições também podem conter sais tampões, aromatisantes, corantes e edulcorantes, conforme for apropria do.

As composições para administração oral podem ser convenientemente formuladas de modo a proporcionar uma libertação controlada do composto activo. - 25 -

As composiçoes para administraçao bucal podem tomar a forma de comprimidos ou pastilhas formuladas de modo conven cional.

Os compostos de fórmula (I) podem ser formulados pa ra administração parentérica por ingecção, por exemplo por in jjecção global ou infusão contínua. As formulações para injec-ção podem apresentar-se numa forma de dosagem unitária. As composições para injecção podem tomar formas tais como suspen sões, soluções ou emulsões, em substâncias veiculares tanto oleosas como aquosas, e podem conter agentes de formulação tais como agentes auxiliares de suspensão, estabilisadores e/ /ou agentes dispersantes. Qomo alternativa o ingrediente actiw pode tomar a forma de pó para constituição com um veículo a-propriado, por exemplo água esterilisada isenta de pirogenios, antes da utilização.

Os compostos de fórmula (l) também podem ser formu lados em composições rectais, tais como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo contendo bases de supositórios convencionais, tais como manteiga de cacau ou outras glicéri-dos.

Adicionalmente às formulações descritas acima, os compostos de fórmula (I) támblm podem ser formulados em compo sições de depósito. Estas formulações de acção prolongada podem ser administradas por implantação ou por injecção intramuscular.

Para administraçao nasal ou administraçao por inalação os compostos para utilização de acordo com a presente invenção são convenientemente fornecidos na forma de uma composição de aerosol para embalagens pressurisadas ou por nebu-lisador, com utilização de um agente propulsante apropriado, por exemplo diclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclo- 26 -

rotetrafluoretano, diáxido de carbono ou outros gases apropriados .

As coraposiçoes, se desejado, podem ser apresentadas numa embalagem ou dispositivo de libertação que pode conter uma ou mais formas de dosagem unitária contendo o ingrediente activo. A embalagem ou dispositivo de fornecimento pode ser acompanhada por instruções para administração.

As doses dos compostos de formula (l) usadas para controlar o desenvolvimento de metástases de tumores variam consoante o estado do paciente a tratar, mas em geral podem situar-se num intervalo de cerca de O a 5 mg ate 50 mg/kg de peso corporal, em particular de cerca de 1 mg a 40 mg/kg de peso corporal. As unidades de dosagem podem variar consoante a via de administração do composto, de acordo com a prática convencional.

Descrição de formas de realização específicas A invenção I posteriormente ilustrada nos seguintes exemplos não limitativos. ras: Nos exemplos são utilizadas as seguintes abreviatu TA- temperatura ambiente BGGI- ΪΤ,ΪΙ' -diciclohexil-carbodiimida DMF- dimetilformamida TH1- t e trahidr o fur ano TM- ácido trifluoracático RPHPIíO- cromatografia líquida de alta resolução, inversa de fase HOBT- N-hidroxihenzotriazo1. - 27 -

Exemplo de referência C 4-N- (hidroxiamino )-2R-isobutil-succinil_7-l-valina-L-alani-na-amida ácido R,S-isobutil-succínico £

Preparou-se etóxido de sódio adicionando sódio metálico (2,5 g, 108 mmol) a etanol anidro (150 ml) sob atmosfe ra de azoto. Adicionou-se 1,1,2-etanotricarboxilato de trieti lo (26,6 g, 25 ml, 108 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente (!A) durante 20 minutos. Adicionou-se gota a gota brometo de isobutilo (19,12 g, 15 ml, 108 mmol) durante 1 hora e a solução foi fervida ao refluxo durante a noite. 0 brometo de sodio que precipitou foi removido por fil raçao e o filtrado foi concentrado em vácuo. 0 resíduo foi tratado com água fria (200 ml) e foi extraído com eter dietílico (3x 100 ml). A fase orgânica foi seca com sulfato de sodio e concentrada, obtendo-se um óleo límpido (32,2 g) que foi aquecido ao refluxo com ácido clorídrico concentrado durante 96 horas. Depois do arrefecimento precipitou um sólido cristalino branco que foi isolado por filtração, foi lavado com água gela da e seco em vácuo, obtendo-se o composto de título K (11,0 g). 1HMR (CDC13) 6 0.85 (3H, d, J=6Hz), 0.90 (3H, d, J=6Hz), 1.3 -1.45 (1H, m), 1.55-1.75 (2H, m), 2,50 (1H, dd, J=6 e 18 Hz), 2,70 (1H, dd, J=9 e 18 Hz), 2.85-2.95 (1H, m).

28 -

tànidrido 3-(RtS)-isobutil-succínico L

0 diácido K (10,21 g, 59 mmol) foi tratado com cio reto de acetilo (27 ml, 376 mmol) ao refluxo, durante 2,5 hoias Os voláteis foram removidos a pressão reduzida, obtendo-se o anidrido L (9»37 g» 100%) na forma de um oleo acastanhado. hmm (CDC13) G.95 (3H, d, J=6Hz), 1.05 (3H, d, J=s6Hz), 1.48--1.90 (3H, m), 2.65 (1H, dd, J=7 e 18 Hz), 3.10 (1H, dd, J=9 e 18 Hz), 3.15-3.25 (1H, m). ácido

£4-(H-benziloxiamino)-2-R,S-isobutil_7-succínico M

Ádicionou-se gota a gota (durante 1 hora) 0-benzil -hidroxilamina (7,8 g, 63,4 mmol) em tetrahidrof urano anidro (50 ml) a uma solução do anidrido I (9,37 g, 60,0 mmol) em te trahidrofurano anidro (100 ml) a -20°C. Depois de agitação du rante mais uma hora os voláteis foram removidos em vácuo e o resíduo foi tomado em acetato de etilo. Depois da lavagem com - 29

ácido clorídrico 1,0 M (3 vezes) a fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio e evaporada, obtendo-se um solido branco. 0 solido bruto foi dissolvido em éter dietílico quente e filtrado. Depositaram-se cristais incolores do ácido M por repou so (6,7 g, 41%). (CDC13) § 0.8-1.0 (6H, m), 1.2-1.4(3H, m), 2,1-2,4 (2H, m), 2.8-3.0 (1H, m), 4.85 (2H, s), 7.3 (5H, bs), 8.6 (1H, bs). 4-N- (bidroxiamino )-2R-isobutilsuccinil_>7-Ii-valina-Ii-alanina -amida 0 acido M (502 mg, 1,8 mmol) foi dissolvido em te-trahidrof urano anidro (20 ml) e arrefecido a -20°C. Adicionou -se cloroformiato de etilo (245 mg, 233 jil, 1,8 mmol) e N-me-tilmorfolina e a suspensão foi deixada uma hora a -20°0. Adicionou-se gota a gota uma solução em dimetilformamida (10 ml) de 1-valina-l-alanina-amida (500 mg). Depois de estar completada esta adição retirou-se o banho de arrefecimento e deixou -se a mistura reactiva aquecer até à temperatura ambiente durante uma noite. A solução orgânica foi vertida em ácido clorídrico a 10% e foi extraida com acetato de etilo (3 vezes). A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio e concentrada em vácuo, obtendo-se um solido.

Este solido foi dissolvido em metanol desgaseifica do (20 ml) e foi submetido a hidrogenálise utilizando paládio -carvão a 5% e hidrogénio gasoso. Depois de uma hora à temperatura ambiente o catalisador foi isolado por filtração e o produto foi purificado por RPHPLO utilizando 0,1% —> 0,1% IFA/OHjOI (43s57) em condições isocríticas, obtendo-se o composto de título. 1»IR (CDjOD) $0.95 (12H, m), 1.35 (3H, d, J=6 Hz), 1.95 (3H, m), 2.20 (UlI, m), 2.35 (IH, m), 2.85 (2H, m), 4.35 (2H, m). - 30 -

Os seguintes compostos dos exemplos 1 a 4 foram preparados de modo análogo ao do composto de referencia, utilizando os compostos de partida apropriados.

Exemplo 1 4-N-(hidroxiamino )-2R-feniletil-succinil_7-I»-leucina-l\r-(2--f eniletil )-amida 1HMR (Q3>3OD) 7.15-7.30 (10H, mult, ir); 4-40 (IR, mult, ECHCO); 3.35-3,55 (2H, mult, OiyO; 2.20-2.85 (7H, mult, CHCO + CH2ir); 1.50-1.95 (5H, mult, CSC) 0.95 (6H, dd, GH3)

Exemplo 2 n- (N-hidroxiamino)-2R-fenilpr0pilsuc cinil_7-L-leucina-E-(2--feniletil)-amida 4naMR (Ciy>I>) 7.1-7.3 (10H, mult, ir); 4.30 (1H, dd, EGHOG), 3.35 (2H, mult, 0H2D; 2.15-2.80 (7H, mult, GHCQ+CH2ir); 1,5--1.75 (7H, mult, CHC); 0.95 (6H, dd, CH3)

Exemplo 3 £~ 4-(l-hidroxiamino )-2(R)-isobutil-succinil_7~I|"'triP^0:fan0“ -amida 1HMR (GD3OD) $ 7.65 (1H, d), 7.35 (1H, d), 6.95-7.15 (3H, m), 4.65 (1H, dd), 3.05-3.2 (1H, m), 2,7-2.85 (2H, m), 2.0-2.2 (2H, m), 1.3-1.5 )2H, m), 1.05-1.15 (1H, m), 0.7 (3H, d), 0.65 (3H,d)

Exemplo 4 r*- (E-hidroxiaraino )-2(R)-isobutil-succinil_7-f^valina-amida (CD3OD) <§ 4.15 (3R, d), 2.8-2.9 (1H, m) 2.2-2.35 (1H, m), 1.95-2.15 (2H, m), 1.45-1.55 (2H, m), 1.1-1.2 (1H, m), 0.8-1.05 (12H, m) - 31 -

Exemplo A A actividade e selectividade dos compostos da presente invenção podem ser determinadas do modo que se descreve a seguir.

Todos os ensaios com enzimas para determinar valo- res IL foram realizados utilizando o substrato peptídico Bnp-- Pr o - Leu- G-ly- leu- Tr p- Ala- B- Ar g-NE^. Γ-!. Sharon Stock e Ro- bert D. Gray JBC 264, 4277-81, 1989). Os enzimas realizam a c3i vagem do peptídeo na ligação G-ly-leu, o que pode ser seguido fluorimetricamente medindo o aumento da emissão de fluorescen cia de Trp associada à remoção do grupo de ‘bloqueio dinitrofe nol (Dnp).

Essencialmente o enzima (por exemplo gelatinase, estromelisina ou colagenase) a 0,08 - 2 nM; uma gama de concentrações de inibidor (0,1 - 50 x li) e o substrato (aproxi-madamente 20 pm) são incubados uma noite em tampão 0,1 M Tris/ /HGl, pH 7,5, contendo 0,1 M NaOl, 10 mM Ga012 e 0,05% Brij 55 ou à temperatura ambiente, ou a 57°C, consoante o enzima. A reacção é parada ajustando o pH ao valor 4 utilizando um tampão de acetato de sódio 0,1 M e a fluorescência S lida a um comprimento de onda de excitação de 280 nm e a um comprimen to de onda de emissão de 346 nm.

Os valores podem ser estabelecidos utilizando a equação para a inibição final:

Vi = Vo 2ZX7

1 (app (¾ (app )Γ^+Γ1--íKi(app)+^I-7-Z"B_7 - 32 - 1 na qual ?Q é a velocidade inicial da reacção na ausência de

inibidor, T. é a velocidade inicial na presença de inibidor, C&J ® a concentração total do enzima e flj é a concentração total do inibidor na mistura reactiva.

Para a estromelisina e a colagenase considerou-se que se aproximava do valor real JL à medida que se ti nha £ S_/<<Km para o substrato de hidrólise. Para a gelatina se o valor foi determinado realizando a análise a várias ecn centrações de substrato. Um gráfico de E^(app) em relação a jTS_7 permitiu então obter o valor IC real como o valor da in tersecção do eixo dos I.

Os resultados do quadro seguinte foram obtidos com os compostos de acordo com a invenção.

Ki (nM)

Colagenase Estromelisina-1 G-e latinas e-7 2ZB Composto de referência 303 129 33

Composto do exemplo 2 79 16 0.17

- 33 -

Claims (5)

1. REIVINDICAÇÕES - lã - Composto de formula (I): R2 R5 O

   X (I) na qual R representa um grupo -CONHOH, carboxilo (-C0oH) ou 1 * ά * carboxilo esterificado; R representa um atomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo, arilo, aralquilo, heteroaral- quilo ou heteroariltioalquilo, eventualmente substituídos;
2. 2 R' R^ R' R representa um grupo feniletilo, fenilpropilo ou fenilbu-tilo, eventualmente substituídos; representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo; representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo; representa um grupo alquilo ou alcenilo eventualmente subs tituido, eventualmente interrompidos por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N(R') JTem que R' representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono^J; X representa um grupo amino (-NH^) ou amino substituído, hi-droxilo ou hidroxilo substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos. - 2ã - Composto de acordo com a reivindicação 1 caracte-rizado por R representar um grupo -CONHOH ou carboxilo (-cq2h). - 34 - ...........
3. - 3* - Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2 «Ί w caracterizado por R , R*5 e R^ representarem, cada um, um áto mo de hidrogénio.
4. Composto de acordo com qualquer das reivindica-~ 2 çoes 1 a 3 caracterizado por R representar um grupo fenilpro pilo eventualmente substituido. - 5» - Composto de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por X representar um grupo ami-no ou amino substituido. - 6ã - Composto de fórmula (la); R2 Η O

   na qual R representa um grupo -COiJHOH, carboxilo (-CO^H) ou carboxilo esterificado; 2 R representa um grupo fenilpropilo eventualmente substituido, 5 R representa um grupo alquilo ou alcenilo eventualmente subs tituido, eventualmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N(R^) ^”em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de - 35 -

   carbono_7; X representa um grupo amino (-NH^) ou amino substituído, M-droxilo ou hidroxilo substituído; e os seus sais, solvatos e hidratos. - 7* - Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, em combinação com um diluente, substância veicular ou ex cipiente farmaceuticamente aceitável. - 8* - Processo para a preparação de um composto de fórmula (I), tal como foi definida na reivindicação 1, processo que I caracterizado por compreender: a) o acoplamento de um ácido de fórmula (II)

   ou um seu derivado activo e/ou um seu derivado bloqueado, com uma amina de fórmula (III) 3 0 HN R

   R (III) ou um derivado bloqueado do mesmo, seguido por remoção de qualquer grupo de bloqueio; ou - 36 I (b) a descarboxilação de um composto de fórmula (IX) 2 3 R R^ 0
5. 5 (IX) de modo a obter-se um composto de fórmula (l) na qual R re presenta um grupo -00^H; e/ou (c) a interconversão de um composto de fórmula (1) Lisboa, 29 de Maio de 199^

   - 37