PT85033B

PT85033B - Processo para a preparacao de novos peptidos

Info

Publication number: PT85033B
Application number: PT85033A
Authority: PT
Inventors: Waleed Danho
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1986-06-06
Filing date: 1987-06-05
Publication date: 1990-03-08
Also published as: NO872386L; HUT44581A; FI872527L; DK290187A; FI872527A7; EP0248440A2; DK290187D0; ZA873796B; NO872386D0; MC1830A1; KR880000469A; AU7388087A; IL82780A0; FI872527A0; HU201338B; PT85033A; EP0248440A3; JPS62292799A; AU596665B2; NZ220561A

Description

A presente invenção diz respeito a novos pêptidos, a um processo para a sua preparação e a medicamentos que os contêm.

Os péptidos da presente invenção são compostos de fórmula geral

X-(R)_n-Tyr(SO₃H)-R₁-R₂-R₃-Met-R₄-(NCH₃-Phe)-Y I na qual

X representa um grupo de fórmula geral COR^, ^CO^^CH2^m”^COOR6 ^{ou G0C00R}7’

Y representa um grupo de fórmula geral ORq ou n(r^, R^q)’ n representa o número 1 ou zero;

m representa um número 1, 2 ou 3;

R representa um radical Asp, NHgCgH^-Gly ou ácido palmitico;

R^ representa um radical Met, Leu ou Ile;

R₂ representa um radical Gly, Ala, ^Ala ou (D) Ala; R^ representa um radical Trp ou Trp(CHO);

R^ representa um radical Thr(SO^H), Ser(SO^H) ou Hyp(SO^H);

R^, Rg θ Rq a Rj0 representam cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ^Cl~3’

Ry representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ^ou halogefto-alQuil·⁰ e os seus sais aceitáveis em farmácia.

Os aminoácidos são designados, como usualmente por três letras e, a menos que expresso de outro modo, referem o isómero L,

São exemplos de sais dos péptidos de fórmula geral I, os sais de metais alcalinos ou sais de metais alcalino terrosos, por exemplo, sais de sódio, sais de potássio, sais de amónio, sais de cálcio, sais de alquilaminas, por exemplo, sais de di ou trietilamina ou sais de adição de ácido, de pre ferencia, cloridratos.

Os compostos preferidos da presente invenção são aqueles em que X representa um grupo propionilo ou, especialmente, acetilo (Ac) e Y representa um grupo metil-amino ou, especialmente, amino e, ainda, aqueles em que R^ represen ta um radical Met, Rg representa um grupo Gly e representa um grupo Thr(SO^H) e aqueles em que n representa zero.

São especialmente preferidos os péptidos do grupo constituído por:

Ac-Tyr(SO^H)-Met-Gly-Trp(GHO) -Met-ThríSO^H)-(NCH^-Phe)-NHg, Ac-Tyr( SO^H)-Nle-(D) Ala-Trp-Met-Thr( SO^H)-(NCH^-Phe)-NHg Ac-(NH₂G₂H₄-Gly)-Tyr(SO₃H)-Met-Gly-Trp(CHO) -Met-Thr(SO^H)(NCH^-Pheí-NHg e especialmente

Ac-Tyr(SO^H)-Met-Gly-Trp-Met-Thr(SO^H)-(NGH^-Phe)-NHg.

Os péptidos da presente invenção podem preparar

-se por meio de síntese de .fase sólida, por exemplo, como se descreve era J.A.C.S. 85, 2149, (1963).

A síntese em fase sólida inicia-se a partir da extremidade do C-terminal do péptido por meio de ligação de um ot-aminoácido protegido com uma amida a uma resina apropriada, por exemplo, benzilidrilamina (BHA) ou metilbenzilidrilamina. Como uma resina (BHA) pode utilizar-se um copolímero de estireno-1% de divinilbenzeno sob a forma de pérolas, 200-400 malhas.

Na síntese de fase sólida os grupos reactivos da cadeia lateral dos diversos radicais aminoâcido, são protegidos por meio de grupos protectores apropriados que impedem a ocorrência de uma reacção química nesse sítio, até à eliminação final desses grupos protectores.

São exemplo de grupos protectores de grupos carboxílicos os ésteres, tal como ésteres arílicos, por exemplo, ésteres fenílicos tendo, eventualmente, como substituinte(s) um átomo de halogénio ou um grupo alquilo inferior, nitro, tio ou alquil(C₁_y)-tio.

Os grupos ©(. -amino podem ser bloqueados com grupos t-butiloxicarbonilo.

Os grupos laterais da cadeia, Asp, Ser, Thr podem ser bloqueados com um grupo benzilo, os grupos Trp com grupos formilo, os grupos Tyr com grupos 2,6-diclorobenzilo, os grupos etil-amina-glicina (IJHgC^com grupos benziloxi-carbonilo.

Um grupo Boc-(NCHo-Phe) pode ser ligado è resina BHA na presença de diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) à temp£ /

- 4 Λ· ratura de 0°C, tendo-se determinado, por meio de análise de aminoácidos, a relação de 0,20 mmole/g de resina.

No protocolo seguinte, de um ciclo sintético típico, EDTA representa 1,2-etanoditiol; TFA, ácido trifluoro acético; DIPEA diisopropiletilamina; DMF, dimetilformamida.

Fase	Reagente	Tempo
1	1% edt/ch₂ci₂	30 s
2	50% tfa/ch₂ci₂ w/1% edt	1 m
3	Repetir a fase 1
4	50% t?a/ch₂ci₉w/i% EDT	15 m
5	^CH2^G12	30 s
6	2-Propanol	30 s
7-8	Repetir as fases 5 θ 6
9	ch₂ci₂	2x30 s
10	8% DIPEA	2x 2 m
11-15	Repetir as fases 5-9
16	5 equiv. de Boc-aminoácido anidrido	30 m
17	1% DIPEA	5 m
18-19	Repetir as fases 6 e 9
20-21	Repetir as fases 16 e 17 se associadas
	fica completo após a fase 19
22	2-Propanol	30 s
23-24	Repetir as fases 5 θ 6
25	^CH2^G12	30 s
26	DíViF	2x30 s
27	CH₂C1₂	3x30 s
	Utilizaram-se 10 a 20 ml/g de resina	para o vo-
lume dos	solventes de todas as lavagens e reacções	de ligação

/

7 .**

As ligações realizaram-se com a presença de ani dridos simétricos de Boc-aminoácidos, no seio de cloreto de metileno (CHgClg) à temperatura de 0°G, durante 15 minutos, utilizando-se 10 equivalentes de Boc-aminoácidos e 5 equivalentes de DGG.

Os tempos totais de ciclo estão compreendidos entre 54 θ 160 minutos, por radical.

desbloqueamento e cisão do conjunto completo de resinas peptídicas pode realizar-se com HF, dimetil-sulfito e p-cresol, à temperatura de 0°C.

Os pêptidos não sulfatados obtidos deste modo, podem purificar-se por meio de cromatografia de alta resolução preparativa (HPLC).

Os pêptidos da presente invenção, podem preparar-se por meio de processos que consistem em fazer-se reagir os pêptiios não sulfatados, correspondentes, com um reagente de sulfatação ou fazer-se reagir um péptido formilado, de fórmula geral I, com um agente de desformilação e, eventualmente, isolar-se o péptido de fórmula geral I, assim obtido, sob a forma de um sal.

Pode utilizar-se o acetil-sulfato de piridina (PAS) como agente de sulfatação. A reacção pode realizar-se à temperatura de 60 °C. Os pêptidos sulfatados de fórmula geral I, assim obtidos, podem purificar-se por meio de cromatografia de alta resolução preparativa de fase inversa, grupo formilo presente num péptido da presente invenção, pode cindir-se por meio da utilização de NH^OH O,1N, à temperatura ambiente e, em seguida, liofilizar-se.

Diferentemente de CGK-8 /Life Sciences 30, /

p, 479:485-488, 1982/ cuja ligação se dá ao nível dos recepto res do pâncreas e cérebro, os pêptidos da presente invenção, ligam-se, essencialmente, aos receptores do pâncreas.

Além disso, os pêptidos da presente invenção são mais resistentes à degradação pelas várias enzimas gastro intestinais, as péptidases, do que CGK-8, do que resulta uma acção mais prolongada, dos pêptidos da presente invenção, do que a acção de GGK-8.

Os ensaios seguintes, demonstram a ligação específica aos receptores, dos pêptidos da presente invenção, por meio da utilização de preparações homogeneizadas de células de pâncreas de rato e bovinas estriadas, comparadas com a ligação de CCK-8 natural, mediante utilização de H3-GCK-8 (SO^H) como um agente rádio-marcado.

Homogeneizaram-se cerca de 5 g de estriado de bovino congelado e cerca de 5 g de pâncreas fresco de rato em tampão de pH 7,4* Isolou-se o tecido por meio de centrifugação a 48 000 x g durante 10 minutos à temperatura de 0°C e em seguida tornou-se a fazer a suspensão: uma parte do tecido estriado para 80 partes de tampão e 1 parte de tecido de pâncreas para 70 partes de tampão.

Iniciou-se a incubação combinando-se concentrações diversas de GGK-8 ou pêptidos de formula geral I, com H3-GCK-8(S0^H) (concentração final = 0,15 nl£) e homogeneizado de tecido (estriado^ 0,26 mg de proteína em 2 ml de volume final; pâncreas 0,165 mg de proteína em 1 ml de volume final) .

Incubaram-se as amostras durante 30 minutos à temperatura de 25°C e, terminada a incubação filtrou-se a mis

- 7 tura. Secou-se o filtro ao ar e colocou-se seguidamente num frasco de cintilação contendo 12 ml da mistura de cintilação. Agitaram-se os frascos durante 2 horas e contaram-se, em seguida, utilizando-se um espectrofotómetro de cintilação.

As ligações não específicas determinaram-se na presença de 1 juM de GGK-8 e fracções de todas a,s amostras para se determinarem as ligações específicas.

Determinou-se a concentração necessária de péptido para inibir 50% da ligação específica a H3-CCK-8-(S0^H) (valor de CI_cn). Resumem-se os resultados no Quadro 1.

Iniciou-se um período de 4 dias de treino de refeição, num ensaio de alimentação de duas refeições com ratos machos com pesos compreendidos entre 180 a 200 g, que se tinham mantido em jejum durante dois dias e que se colocaram em gaiolas individuais. Durante aquele tempo, alimentaram-se os ratos colocando-se tigelas com comida das 9 às 10 horas azn retirando-se as tigelas das 10.00 a.m. até às 12 p.m. e colocaram-se, novamente, das 12.00 até à 1,00 p.m.

No quarto dia pesaram-se os ratos de novo; uma perda superior a cinco gramas de peso de qualquer animal ex cluio do ensaio.

Em seguida, distribuiram-se os animais em grupos de experiência e de controlo.

Fez-se a suspensão dos pêptidos da presente in venção, solúveis, em solução salina e os pêptidos insolúveis em goma arábica a 1%, a concentrações compreendidas entre zero e 32^ig/ml/kg de massa corporal, que se administraram, por via intraperitoneal, 15 minutos antes da primeira refeição do

5⁹ dia de treino alimentar.

~ ⁸

Forneceram-se, então, as refeições aos ratos tal como se tinham fornecido nos primeiros quatro dias e pesaram-se as tigelas com comida, antes e após cada refeição, afim de se determinar o consumo de alimentos.

A ingestão de alimentos pelos grupos tratados comparou-se com a dos grupos de controlo. Os resultados resumem-se no Quadro 1.

Pêptido do Exemplo M2	Quadro 1	% de alimentos ingeridos
Estriado de Bovino (nM)	Pâncreas de Rato (nM)
ia Bfeição	2& Refeição
1	1000	9,4	23+13	55+10
2	100,500	2,2	8+1	26+4
3	100	100	34+6	164+16
4	100	44	5+5	79+13
5	4100	4200	70+2	133+9
6	1750	100	14+6	114+9
7	1000	14.5	17	95
CCK- 8	1-4,6	1-32	27+17	149+6
	0 ensaio seguinte	demonstra o e	feito de	sacieda-
de induzida	pelo pêptido descrit	c no exemplo	2:

Treinaram-se rato: machos, para as refeições, como se descreveu antes.

Dissolveu-se o pêptido obtido de acordo com a técnica descrita no exemplo 2 em solução salina que se admi-

nistrou, aos ratos, por via intranasal

Como controlo, utilizou-se CCK-8 em solução salina, Os resultados resumem-se no quadro 2.

Quadro 2

Consumo de alimentos em gramas (e em %)

Tratamento	Dose mg/kg	lã refeição	2â refeição
Solução salina		7.4 + 0.5 (100)	5.6 + 0.3 (100)
do pêptido do	3	7.5 ± 0.8 (102)	6.1 + 0.3 (109)
Exemplo 2	10	5.5 + 0.6 (74)	6.3 + 0.4 (112)
	30	5.8 + 0.7 (78)	4.3 ± 0.6 (76)
	100	3.4 _± 0.4 (46)	4.6 + 0.5 (82)
CCK-8	1000	4.9 + 0.7 (66)	6.3 + 0.5 (112)
	400	inactivo
Como se	demonstra em seguida	os péptidos da pre

sente invenção são mais resistentes à degradação enzimática do que CCK-8;

Incubaram-se 0,01 jig de metal-endopeptidase de rim de rato e 5 nmol de pêptido em 2 yjimole de tampão HCl-tris de pH 7,6 à temperatura de 37°C durante períodos variados.

A degradação dos pêptidos controlou-se por meio de análise cromatográfica de alta resolução (HPLC), que se resume no que ό 3·

Para os péptidos preparados de acordo com as técnicas descritas nos exemplos 2 e 3 as taxas basearam-se na produção presumida de Ac-Tyr(S0^H)-Met-Gly e para CCK-8 na produção f suposta de Asp-Tyr(SO^H)-Met-Gly.

Quadro 3
Péptido do	Tempo de	%Degradação	N9 de
Exemplo N2	incubação (m)	em peso	picos

	60 120 240	19.4 30.3
56.4	2*
3	0	0
	60	0
	120	0
	240	0	0
CCK-8	0	0
	15	6.2
	30	33.2
	60	69.7	4
1 pico co-eluldo nas proporções	JP 0 asterlstico com substrato e molares obtidas	indica um pico detectado e que se identificou com base por análise de aminoácidos.

Os pêptidos de fórmula geral I e os seus sais aceitáveis em farmácia, são utilizáveis para suprimir ou reduzir a ingestão de alimentos em seres humanos ou animais e, por isso, pode utilizar-se para controlar ou reduzir o peso

do corpo.

Estes, podem administrar-se por via endovenosa, sublingual, via rectal, via nasal, via perorai ou transdermicamente.

As composições farmacêuticas ou veterinárias que contêm um péptido da presente invenção e/ou um seu sal, podem preparar-se por meio de métodos convencionais e podem conter veículos ou diluentes convencionais. Quando os péptidos da presente invenção ou os seus sais se destinam a compoI sições injectáveis, apresentam-se, de preferência, sob a forma de pó estéril pera se reconstituir com água para injectáveis ou com outro veículo estéril apropriado, imediatamente antes da administração.

Por exemplo, podem utilizar-se soluções aquosas estéreis isotónicas para injecção endovenosa, de preferência, uma solução aquosa isotónica de cloreto de sódio.

Obtém-se um pó estéril, de um modo conveniente, por meio de liofilização; neste caso, o ingrediente activo é misturado com um veículo inerte como, por exemplo, lactose.

►

Exemplo 1

Dissolveram-se 5 g (17,8 mmole) de Boc-(NCH^-Phe) numa mistura constituída por 50 ml de cloreto de metileno, 50 ml de dimetilformamida arrefecida à temperatura de zero graus centígrados e 1,8 g (9 mmoles) de DCC e agitou-se a mistura durante 60 minutos à temperatura de 0°C.

Lavaram-se 5g de resina BHA (copolímero de estireno-divinil-benzeno a 1%) possuindo um conteúdo total de azoto de 0,56 mmole/g, com uma solução de 10% de DIPBA em cio reto de metileno, durante 30 minutos, filtrou-se e lavou-se

com CH₂C1₂, DM? e CH₂C1₂.

Adicionou-se à resina a mistura arrefecida, referida antes, e agitou-se durante 24 horas à temperatura ambiente. Filtrou-se a resina e lavou-se com CHgClg, DMF e isopropanol e secou-se sob vácuo.

A análise de aminoácidos revelou que a resina continha 0,20 mmole/g de Boc-(NCH^-Phe). Os grupos amino não reactivos foram cobertos mediante agitação da resina com 5 ml de anidrido acético e 5 ml de DIPEA em CHgClg durante 60 minu tos. Filtrou-se a resina e lavou-se com CE^Clg, isopropanol e dimetilformamida.

Submeteram-se 4,8 g (0,96 mmole) de Boc-CNOH^-Phe), que continha a resina, a uma síntese sequencial de fase sólida utilizado-se o método descrito antes, realizando-se todas as ligações mediante aplicação de anidridos simétricos de Boc-aminoácidos..

Nas fases 16 e 20 adicionaram-se os aminoácidos activados com os tempos de reacção correspondentes, seguintes: seis ciclos individuais realizaram-se com Boc-O-benzil-Thr (1,5 g, 5 mmoles, 60 minutos duas vezes), Boc-Met (l,25g 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-N -Trp(CHO) (1,7 g, 5 mmoles, 30 minutos duas vezes), Boc-Gly (900 mg, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-Met (1,25, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes) e Boc-2,6-diclorobenzil-Tyr (2,2 g 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes).

A desprotecção dos grupos Boc- protectores e a acetilação da resina com 20 ml de anidrido acético, 20 ml de piridina em cloreto de metileno durante 60 minutos, forneceu

5,3 g do heptapéptido acetilado que continha resina. Esta,

- 13 / cindiu-se mediante tratamento com 12 ml de HF, 31 ml de dimetilsulfito e 4,6 ml de p-cresol, durante 1 hora à temperatura de 0°C.

Após evaporação, destilaram-se 42 ml de HF anidro, para o recipiente de reacção, para um segundo tratamento durante 2 horas à temperatura de 0°C.

Após evaporação cuidadosa, lavou-se a resina com dois volumes de acetato de etilo; triturada em seguida com 4 vezes 15 ml de ácido acético a 30%, filtrada e liofilizada forneceu 400 mg de pêptido bruto.

Purificaram-se 140 mg de pêptido bruto por meio de cromatografia preparativa de alta resolução (HPLC) numa coluna (2,5 x 50)cm de gel de sílica micronizado, que se eluiu com TFA/CH^CN (5a 65% / 0,022%) com um débito de 8ml/ /minuto. Detecção a 280 nm. 0 pico principal foi separado e liofilizado para fornecer 55 mg (rendimento 16,1%) de pêptido não sulfatado.

Adicionaram-se 10 ml de piridina anidra destila da a 60 mg de PAS e aqueceu-se a mistura resultante à tempera tura de 60°C durante 10 minutos, sob agitação.

Deixou-se arrefecer a solução e adicionaram-se 10 mg de Ac-Tyr-Met-Gly-Trp(CH0)-Met-Thr-(NGH₃-Phe)-NH₂ dissolvidos em 10 ml de piridina. Agitou-se durante 1 hora a mistura reaccional à temperatura de 60°G e neutralizou-se, em seguida, com 2 volumes de carbonato ácido de amónio 0,05 M e liofilizou-se.

Realizou-se a purificação por meio de cromatografia preparativa de fase inversa de alta resolução, sobre octadecilo-sílica com partículas de 10 u de diâmetro, utili- 14 - zando-se como eluente NH^HCO^ 0,05 M/CH^CN, para se obterem 5 mg (rendimento 43%) de Ac-Tyr(SO^H)-Met-Gly-Trp(CHO)-Met-Thr( SO₃H) -(NCH^-Phe) -NHg.

Exemplo 2

Dissolveram-se 2 mg do composto preparado de acordo com o processo descrito no exemplo 1, em 2 ml de NH^OH 0,1 N de pH 10,5 que se deixou em repouso durante 1 hora à temperatura ambiente. Em seguida liofilizou-se a solução para se obterem 1,7 mg (90% de rendimento) de Ac-TyríSO^H)-Met-Gly-Trp-Met-Thr(SO^H)-(NCH^-Phe)-NHg.

Exemplo 3

Prepararam-se e submeteram-se a síntese de fase sólida sequencial, de acordo com o processo descrito no exemplo 1, 4,6 g (0,9 mmole) de Boc-ÍNCH^-Phe) que continha resina. Nas fases 16 e 20 da síntese adicionaram-se os aminoâcidos activados com os correspondentes tempos reaccionais, como segue: seis ciclos individuais realizaram-se com Boc-0-benzil-Thr (1,5 g, 5 mmoles, 60 minutos, duas vezes), Boc-Met (1,25 g, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-N -Trp (CHO) (1,7 g, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-(D)-Ala (950 mg, 5 mmoles, 30 minutos), Boc-Nle (1,15 g, 5 mmoles, 60 minutos) e Boc-2,6-diclorobenzil-Tyr (2,2 g, 5 moles, 30 minutos, 2 vezes).

A desprotecção dos grupos protectores e acetila ção da resina processou-se de acordo com a técnica descrita no exemplo 1, para se obterem 5,2 g de resina heptapeptídica acetilada, que se cindiu mediante tratamento com HF que continha dimetilsulfito e p-cresol de acordo com o processo des-

crito no exemplo 1

Lavou-se a resina com éter dietílico e acetato de etilo, em seguida triturou-se com 4 x 15 ml de ácido acético a 30%; filtrada e liofilizada forneceu 80 mg de pêptido bruto, que se purificou por meio de cromatografia preparativa de alta resolução, de um modo semelhante ao descrito no exemplo 1, para se obterem 50 mg (5,36% de rendimento) do pêptido não sulfatado.

Fizeram-se reagir 10 mg de Ac-Tyr-Nle-(D)AlaI -Trp(CHO)-Met-Thr-(lTCfí^-Phe)-NH₂ ^{com e}» ^em seguida purificou-se mediante cromatografia líquida de alta resolução, como se descreveu no exemplo 1 para se obterem 8 mg (rendimento 70%) de Ac-Tyr(SO₃H)-Kle-(D)-Ala-Trp(CHO)-Met-Thr(SO₃H)-(NCH₃-Phe)-NH₂.

Exemplo 4

Trataram-se 2 mg do composto obtido de acordo com a técnica descrita no exemplo 3 de forma análoga à descri ta no exemplo 2, para se obterem 1,8 mg (93% de rendimento) ) de Ac-Tyr(SO₃H)-Nle-(D)Ala-Trp-Met-Thr(SO₃H)-(Nr^-PheJ-NIíg·

Exemplo 5

Submeteram-se a síntese de fase sólida sequencial, de acordo com a técnica descrita no exemplo 1, 2,4 g (0,384 mmole) de Boc-(NCIi₃-Phe)-resina, obtida de acordo com a técnica descrita no exemplo 1.

Nas fases 16 e 20 adicionaram-se os aminoâcidos activados de acordo ccm as correspondentes reacções seguintes: realizaram-se seis ciclos individuais em Boc-O-ben- 16 zil-Thr (1,5 g, 5 mmoles, 60 minutos: 1,5 g, 5 mmoles, 30 minutos), Boc-Met (1,25 g, 5 mmoles, 30 minutos duas vezes), Boc-N^dn-Trp(CHO) (1,7 g, 5 mmoles, 30 minutos, 2 vezes), Boc-Ala (0,95 mg, 5 mmoles, 30 minutos), Boc-Met (1,25 g, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes) e Boc-2,6-dicloro-benzil-Tyr (2,2 g, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes).

A desprotecção dos grupos Boc-protectores e a acetilação da resina, realizada de acordo com o método descrito no exemplo 1, forneceu 3,0 g de resina heptapeptídica acetilada que se cindiu e se lavou, em seguida, se triturou com ácido acético, se filtrou e liofilizou para render 100 g de pêptido bruto. Purificou-se este por meio de cromatografia líquida de alta resolução, para fornecer 25 mg (rendimento 6,6%) de pêptido não sulfatado, de acordo com a técnica descrita no exemplo 1.

Trataram-se com PAS e, em seguida, purificaram-se 12 mg de Ac-Tyr-Met-Ala-TrpíCfíOj-Met-Thr-ÍIíCH^-Phe)-!^, de acordo com a técnica descrita no exemplo 1 para se obterem

9,8 mg (rendimento 70%) de Ac-Tyr(SO^H)-Met-Ala-Trp(CHO)-Met) -Thr(SO₃H)-(NCH₃-Phe)-NH₂.

Exemplo 6

Trataram-se 2 mg, do produto obtido de acordo com a técnica descrita no exemplo 5, de acordo com o processo descrito no exemplo 2, para se obterem 1,9 mg (rendimento 95%) de Ac-Tyr(SO.H)-Met-Ala-Trp-Met-Thr(SO.H)-(NCH^-Phe)j y j

-NH₂.

f *

Exemplo 7

Submeteram-se 4,4 g (0,9 mmole) de resina Boc-(NGH^-Phe) obtiios de acordo com a técnica descrita no exemplo 1, a uma síntese sequencial de fase sólida.

Nas fases 16 e 20 adicionaram-se os aminoácidos activados, com os tempos de reacção correspondentes, como se segue: realizaram-se sete ciclos individuais com O-benzil-Thr (1,5 g, 5 mmoles, 60 minutos, duas vexes), Boc-Met (1,25 g, mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-Nⁱⁿ-Trp(CHO) (1,7 g, mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-Gly (900 mg, 5 mmoles, minutos, duas vezes), Boc-Met (1,25 g, 5 mmoles, 30 minutos, duas vezes), Boc-2,6-diclorobenzil-Tyr (2,2 g, 5 mmoles, minutos, duas vezes), Boc(NH₂ ^g ₂ H^-Gly)-OH (3,5 g, mmoles, 60 minutos, 3,5 g, 5 mmoles, 30 minutos).

A desprotecção dos grupos protectores Boc e acetilação da resina realizada de acordo com a técnica descrita no exemplo 1, forneceu 5,6 g de resina octapeptidica acetilada, que se clivou, se lavou, em seguida, com acetato de etilo, se triturou com ácido acético, filtrou e liofilizou, de acordo com o processo descrito no exemplo 1, para se obterem 582 mg de péptido bruto.

Purificaram-se 75 mg de péptido bruto por meio de cromatografia lí mida de alta resolução como se descreveu no exemplo 1 para se obterem 8 mg (rendimento 6,2%) do péptido não sulfatado,

Ac-(NH₂C₂H₄-Gly)-Tyr-Iáet-Gly-Trp(GHO)-rãet-Thr-(NCH₃-Phe)^Tfí₉.

Este tratou-se de acordo com o processo descrito no exemplo 1, para se obterem 45 mg (rendimento 45%) de Ac(NH₂C₂H₄-Gly) -Tyr.( SO^H) -MeU3y-Sp( CHO) -Ifet-Thr-( SOyi) -(NGHy -Phe)-NH₂.

Claims

Reivindicações

3;

ou ácido palmítico;

Ile;

ou (D)Ala;

1.- Processo para a preparação de pêptidos de formula geral

X-(R) -Tyr(SO₃H)-R,-R„-R_Q-Met-R.-(NCH,-Phe)-Y I n 3 123 4 3 na qual

X representa um grupo de formula geral -CO-R₅,-CO(CH₂)_m-COOR₆ OU -COCOOR₇;

Y representa um grupo de fórmula geral -ORg ou —N (Rg r Rjq) ’ n representa zero ou 1;

m representa um número 1,2 ou

R representa Asp, NH₂C₂Hy-Gly R^ representa Met, Nle, Leu ou R₂ representa Gly, Ala, p-Ala Rg representa Trp ou Trp(CHO); r₄ representa THr(SOgH), Ser(SOgH) ou | Hyp (SOgH);

Rg, Rg e Rg a R^_o representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ^Cl-3^; representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo-C^_g ou halogeno-alquilo ^cj_-3' e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se fazer reagir os pêptidos não sulfatados correspondentes com um agente de sulfatação ou de se fazer reagir um pêptido formilado, de fórmula geral I, com um agente de desformilação e,

-19· e, eventualmente, de se isolar o péptido de fórmula geral I sob a forma de um sal.
2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o símbolo X representar um grupo propionilo, ou especialmente acetilo, e o símbolo Y representar um grupo metilamino, ou especialmente amino.
3. - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo facto de R^ representar Met, R₂ representar Gly e R^ representar Thr(SO₃H).
4. - Processo de acordo com as reivindicações 1, 2 ou

3, caracterizado pelo facto de n representar zero.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de um péptido do grupo constituído por:

Ac-Tyr (SO₃H) -Met-Gly-Trp (CHO) -Met-Thr (SO-jH) - (NCH₃-Ph₂) -NH₂,

Ac-Tyr(SO₃H)-Nle-(D)Ala-Irp-Met-Thr(SO₃H)-(NCH₃-Phe)-NH₂

Ac(NH₂C₂H₄-Gly)-Tyr(SO₃H)-Met-Gly-Trp(CHO)-Met-Thr(SO₃H)(NCH₃~Phe)-NH₂ e, especialmente,

Ac-Tyr(SO₃H)-Met-Gly-Irp-Met-Thr(SO₃H)-(NCH₃-Phe)-NH₂, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo para a preparação de composições farmacêu ticas apropriadas em particular para suprimir ou reduzir a ingestão de alimentos ou controlar o apetite, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula geral I, obtido pelo processo de acordo com a reivindicação 1, ou um seu sal aceitável em farmácia, como ingrediente activo, com os agentes auxiliares de formulação adequados, para se obter uma forma galênica.
7.- Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de se utilizar uma quantidade eficaz de um péptido de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 5 como ingrediente activo.